nghiên cứu bệnh héo vàng do nấm fusarium sp hại hành, tỏi và thử nghiệm phòng trừ bệnh bằng vi khuẩn đối kháng

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM --------------------------------------------------- TRẦN THỊ BÍCH PHƯƠNG NGHIÊN CỨU BỆNH HÉO VÀNG DO NẤM FUSARIUM SP. HẠI HÀNH, TỎI VÀ THỬ NGHIỆM PHÒNG TRỪ BỆNH BẰNG VI KHUẨN ĐỐI KHÁNG LUẬN VĂN THẠC SĨ HÀ NỘI, NĂM 2015 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM --------------------------------------------------- TRẦN THỊ BÍCH PHƯƠNG NGHIÊN CỨU BỆNH HÉO VÀNG DO NẤM FUSARIUM SP. HẠI HÀNH, TỎI VÀ THỬ NGHIỆM PHÒNG TRỪ BỆNH BẰNG VI KHUẨN ĐỐI KHÁNG CHUYÊN NGÀNH : BẢO VỆ THỰC VẬT MÃ SỐ: 60.62.01.12 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS. HÀ VIẾT CƯỜNG HÀ NỘI, NĂM 2015 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan rằng, luận văn công trình nghiên cứu riêng tôi, kết nghiên cứu luận văn trung thực, chưa sử dụng báo cáo khoa học nào. Tôi xin cam đoan rằng, giúp đỡ cho thực luận văn cảm ơn thông tin trích dẫn luận văn ghi rõ nguồn gốc. Tác giả luận văn Trần Thị Bích Phương Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page i LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn này, nỗ lực cố gắng thân, nhận nhiều động viên giúp đỡ cá nhân tập thể. Lời xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô khoa Nông học giảng dạy truyền đạt kiến thức cho suốt năm qua. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành sâu sắc tới TS Hà Viết Cường – giám đốc trung tâm bệnh nhiệt đới, trưởng khoa Nông học trực tiếp hướng dẫn, hết lòng quan tâm, bảo hướng dẫn tận tình để hoàn thành báo cáo luận văn này. Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới anh chị cán thuộc Trung tâm nghiên cứu bệnh nhiệt đới giúp đỡ tạo điều kiện cho học hỏi, trau dồi kiến thức, tích lũy nhiều kinh nghiệm quý báu cho công việc sau này. Cuối xin chân thành cảm ơn người thân, gia đình, bạn bè hết lòng giúp đỡ, ủng hộ động viên hoàn thành tốt luận văn này. Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 17 tháng năm 2015 Tác giả luận văn Trân Thị Bích Phương Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page ii MỤC LỤC Lời cam đoan . i Lời cảm ơn . ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt vi Danh mục bảng . vii Danh mục hình .viii MỞ ĐẦU Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tình hình sản xuất hành tỏi giới Việt Nam . 1.1.1 Tình hình sản xuất hành tỏi giới 1.1.2 Tình hình sản xuất hành tỏi Việt Nam 1.2. Những nghiên cứu nấm Fusarium hành tỏi 1.2.1 Nấm Fusarium oxysporum . 1.2.2 Nấm Fusarium proliferatum . 14 1.3. Những nghiên cứu phòng trừ Fusarium phương pháp sinh học 17 Chương NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU . 22 2.1 Đối tượng nghiên cứu .22 2.2 Phạm vi nghiên cứu 22 2.3 Nội dung nghiên cứu 22 2.4 Vật liệu nghiên cứu: 22 2.4.1. Vật liệu nghiên cứu phòng thí nghiệm . 22 2.4.2. Một số môi trường chuyên cho phân lập Fusarium sp. (John and Brett, 2006) . 23 2.4.3. Vật liệu nghiên cứu nhà lưới . 23 2.5. Địa điểm nghiên cứu thời gian nghiên cứu: .23 2.6. Phương pháp nghiên cứu 23 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page iii 2.6.1 Phương pháp phân lập nấm Fusarium gây bệnh héo vàng hành: . 23 2.6.2.Phương pháp lây bệnh nhân tạo 24 2.6.3.Phương pháp tách chiết DNA tổng số 25 2.6.4.Phương pháp nhân gen ITS phục vụ việc giải trình tự 26 2.6.5.Phương pháp phân tích trình tự . 28 2.6.6.Phương pháp nhuộm mô . 28 2.6.7.Phương pháp đánh giá khả đối kháng vi khuẩn với nấm Fusarium sp. 28 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN . 31 3.1. Điều tra bệnh héo vàng hành Hải Dương Hưng Yên 31 3.2. Phân lập nấm Fusarium sp. hành. 32 3.3. Đặc điểm hình thái nguồn nấm Fusarium sp. 33 3.4. Kết lây bệnh nhân tạo theo phương pháp trộn thạch nấm vào đất trồng hành 36 3.5. Kết lây bệnh nhân tạo theo phương pháp nhúng hành vào dịch bào tử nấm bệnh 38 3.6. Thí nghiệm đặt ẩm hành .40 3.7. Thí nghiệm đặt ẩm tỏi 42 3.8. Kết định danh nấm Fusarium sp. 44 3.8.1.PCR giải trình tự 44 3.8.2.Tìm kiếm Ngân hàng Gen . 45 3.9. Đánh giá hình thái mẫu nấm HC 1-2 HC 1-3 .46 3.10. Kết thí nghiệm thử khả nhiễm bệnh số giống hành tỏi trồng hàng năm Hải Dương, Hưng Yên Bắc Ninh 49 3.11. Kết thí nghiệm thử khả nhiễm bệnh số giống hành khảo nghiệm Hải Dương .50 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page iv 3.12. Kết thí nghiệm thử khả bị nhiễm bệnh với nồng độ bào tử nấm bệnh khác giống hành khảo nghiệm 52 3.13. Kết thí nghiệm đối kháng nấm Fusarium sp. với nguồn vi khuẩn theo phương pháp cấy vạch .54 3.14. Kết thí nghiệm đối kháng nguồn vi khuẩn với nguồn nấm Fusarium sp. theo phương pháp giếng 55 3.15. Kết thí nghiệm đối kháng nguồn vi khuẩn với nguồn nấm Fusarium sp. theo phương pháp chiết n-hexan .56 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ . 59 Kết luận .59 Đề nghị .60 TÀI LIỆU THAM KHẢO . 61 Tài liệu nước 61 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page v DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT F.oxysporum: Fusarium oxysporum F.proliferatum: Fusarium proliferatum T.harzianum: Trichoderma harzianum T.viride: Trichoderma viride T. koningii: Trichodema kiningii T. aureoviride: Trichoderma aureoviride T. pseudokoningii: Trichoderma pseudokiningii B.subtilis: Bacillus sutilis CLA: Môi trường thạch cẩm chướng PGA: Môi trường thạch khoai tây đường glucose PDB: Môi trường khoai tây lỏng VK: vi khuẩn WA: Môi trường thạch nước cất Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page vi DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Trang 1: Các loài Fusarium oxysporum gây héo trồng Việt Nam 10 3.1: Điều tra bệnh héo hành Hải Dương Hưng Yên . 31 3.2: Phân lập nấm Fusarium sp. hành 32 3.3: Đặc điểm hình thái 11 nguồn nấm Fusarium sp. . 34 3.4: Hình thái bào tử nấm Fusarium sp. . 35 3.5: Kết lây bệnh nhân tạo phương pháp trộn thạch nấm vào đất . 37 3.6: Kết lây bệnh nhân tạo phương pháp dịch bào tử . 39 3.7 Kết thí nghiệm đặt ẩm hành dịch bào tử nấm . 41 3.8 Kết thí nghiệm đặt ẩm tỏi . 42 3.9. Kết giải trình tự mẫu nấm Fusarium sp. . 45 3.10. Kết tìm kiếm loài gần gũi GenBank mẫu HC1-2 HC1-3 dựa trình tự vùng ITS. 46 3.11: Đặc điểm hình thái số nấm Fusarium sp. thuộc phức hợp loài G. fujikuroi . 47 3.12. Kết lây bệnh nhân tạo số giống hành, tỏi . 49 3.13 Kết lây bệnh nhân tạo số giống hành khảo nghiệm . 51 3.14 Kết lây bệnh nhân tạo với nồng độ bào tử nấm bệnh khác .52 3.15. Thí nghiệm đối kháng dòng vi khuẩn với nấm HC 1-2 theo phương pháp cấy vạch . 54 3.16. Thí nghiệm đối kháng dòng vi khuẩn với nấm HC 1-3 theo phương pháp cấy vạch . 54 3.17 Thí nghiệm đối kháng nguồn vi khuẩn với nguồn nấm Fusarium sp. theo phương pháp giếng sau ngày . 56 3.18 Thí nghiệm đối kháng nguồn vi khuẩn với nguồn nấm Fusarium sp. phương pháp chiết với n-hexan sau ngày 57 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page vii DANH MỤC HÌNH STT Tên hình Trang 1: Nấm Fusarium oxysporum (John and Brett, 2006) . 2: Nấm Fusarium proliferatum (John and Brett, 2006) . 15 3.1: Điều tra hành Hải Dương, Hưng Yên . 32 3.2: Các mẫu hành héo thu phân lập hành . 33 3.3: Bào tử tản nấm Fusarium sp. phân lập 36 3.4: Lây bệnh cho hành phương pháp trộn nấm Fusarium sp. vào đất . 38 3.5: Lây bệnh nhân tạo hành phương pháp dịch bào tử . 40 3.6: Kết lây bệnh phương pháp đặt hành thấm dịch nấm Fusarium sp. sau 10 ngày lây bệnh 41 3.7: Lây bênh phương pháp đặt ẩm tỏi 43 3.8: Phân lập lại tỏi lây bệnh phương pháp đặt ẩm 43 3.9: Kiểm tra nấm bệnh phát triển mô tỏi thí nghiệm 44 3.10 Kết điện di sản phẩm PCR . 45 3.11: Đặc điểm tế bào sinh bào tử nhỏ cách sinh bào tử nhỏ mẫu nấm HC1-2 HC1-3. 48 3.12: Kết lây bệnh nhân tạo số giống hành, tỏi . 50 3.13 Lây bệnh nhân tạo với số giống hành lựa chọn 51 3.14 Lây bệnh nhân tạo với nguồn nấm HC 1-2 53 3.15 Lây bệnh nhân tạo với nguồn nấm HC 1-3 53 3.16 Khả đối kháng số dòng vi khuẩn với nấm Fusarium sp. 55 3.17 Thí nghiệm đối kháng dòng vi khuẩn theo phương pháp giếng . 56 3.18 Thí nghiệm đối kháng vi khuẩn dịch chiết n-hexan với 58 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page viii 3.12. Kết thí nghiệm thử khả bị nhiễm bệnh với nồng độ bào tử nấm bệnh khác giống hành khảo nghiệm Các giống hành tiến hành thí nghiệm lây nhiễm phương pháp đặt ẩm ống tuýp thủy tinh, để dễ dàng nhìn thấy khác biệt nồng độ nấm bệnh thời gian tiến hành thí nghiệm nhanh hơn. Nguồn nấm bệnh đưa vào lây với nồng độ bào tử 106 103. Dịch bào tử nấm thấm vào khử trùng tuýp thủy tinh hấp khử trùng, sau đặt hành vào quan sát. Công thức đối chứng, hành đặt vào ẩm thấm nước cất khử trùng. Mỗi công thức làm lần nhắc lại. Quan sát theo dõi thí nghiệm sau 10 ngày bảng 3.14 hình 3.14; 3.15 Các giống hành lựa chọn để thí nghiệm giống hành HD1, HD2, HD3, giống hành thu Hải Dương. Bảng 3.14 Kết lây bệnh nhân tạo với nồng độ bào tử nấm bệnh khác Giống hành Tổng số HC 1-2 HC 1-3 ĐC tuýp 106 103 106 103 HD1 + - + - - HD2 + - - - - HD3 - - - - - Ghi chú: + : bị bệnh - : không bị bệnh Với nguồn nấm HC 1-2, nồng độ 106 bào tử giống hành HD1 HD2 bị chết hoàn toàn, giống hành HD3 không bị chết, nồng độ 103 tất hành giống không bị ảnh hưởng, không khác biệt so với đối chứng. Với nguồn nấm HC 1-3, nồng độ 106 bào tử giống hành HD1 bị chết hoàn toàn, giống hành HD2, HD3 không bị ảnh hưởng. Ở nồng độ 103 tất hành giống không bị ảnh hưởng không khác biệt với đối chứng. Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 52 Hình 3.14 Lây bệnh nhân tạo với nguồn nấm HC 1-2 Hình 3.15 Lây bệnh nhân tạo với nguồn nấm HC 1-3 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 53 3.13. Kết thí nghiệm đối kháng nấm Fusarium sp. với nguồn vi khuẩn theo phương pháp cấy vạch Hai nguồn nấm HC 1-2 HC 1-3 làm tiến hành thí nghiệm đối kháng với số nguồn vi khuẩn đối kháng. Kết theo dõi thí nghiệm trình bày bảng 3.15; 3.16 hình 3.16 Bảng 3.15. Thí nghiệm đối kháng dòng vi khuẩn với nấm HC 1-2 theo phương pháp cấy vạch Nguồn vi khuẩn Đường kính tản nấm (cm) Hiệu ức chế Sau ngày Sau ngày Sau ngày sau ngày (%) F29.1 2,6b 2,78b 2,8b 68,9 F90.1 2,4bc 2,4c 2,8b 68,9 F100.5 2,8b 3b 3,2b 64,4 ĐC 3,6a 6,8a 9a 5%LSD 0,28 0,34 0,43 Kết sau ngày thí nghiệm đối kháng dòng vi khuẩn đối kháng với nguồn nấm HC1-2 cho thấy dòng vi khuẩn có khả đối kháng khác biệt so với đối chứng. Cụ thể, sau ngày thí nghiệm đường kính tản nấm HC1-2 đối kháng với nguồn vi khuẩn F29.1, F90.1 2,8cm, đường kính tản nấm công thức đối kháng với nguồn vi khuẩn F100.5 3,2cm, công thức đối chứng đường kính tản nấm đạt 9cm. Chứng tỏ nguồn vi khuẩn đối kháng có khả tiết số chất có khả làm kiềm chế phát triển tản nấm bệnh. Bảng 3.16. Thí nghiệm đối kháng dòng vi khuẩn với nấm HC 1-3 theo phương pháp cấy vạch Đường kính tản nấm (cm) Nguồn vi Hiệu ức chế khuẩn Sau ngày Sau ngày Sau ngày sau ngày (%) F29.1 2,5b 2,6b 2,8b 68,9 F90.1 2,2c 2,4c 2,4c 73,3 F100.5 2,3b 2,6b 2,4c 73,3 ĐC 3,8a 7a 9a 5%LSD 0,22 0,13 0,16 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 54 Kết sau ngày thí nghiệm đối kháng dòng vi khuẩn đối kháng với nguồn nấm HC1-3 cho thấy công thức F29.1 có khả đối kháng có khác biệt khác biệt so với đôi chứng. Công thức đối kháng vi khuẩn F90.1 F100.5 khác biệt có khác biệt so với đối chứng. Cụ thể, sau ngày thí nghiệm đường kính tản nấm HC1-2 đối kháng với nguồn vi khuẩn F100.5, F90.1 2,4cm, đường kính tản nấm công thức đối kháng với nguồn vi khuẩn F29.1 2,8cm, công thức đối chứng đường kính tản nấm đạt 9cm. Hình 3.16 Khả đối kháng số dòng vi khuẩn với nấm Fusarium sp. 3.14. Kết thí nghiệm đối kháng nguồn vi khuẩn với nguồn nấm Fusarium sp. theo phương pháp giếng Nguồn vi khuẩn đối kháng nuôi lỏng môi trường PDB ngày. Sau tiến hành ly tâm dịch nuôi lỏng, loại bỏ phẩn cặn, thu phần dịch trong. Hai nguồn nấm Fusarium sp. HC1-2, HC1-3 hòa lọ môi trường PDA đổ đĩa. Sau đĩa PDA đông nguội, tiến hành đục lỗ thạch đầu côn nhỏ dịch vi khuẩn ly tâm vào. Kết ghi bảng 16. Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 55 Bảng 3.17 Thí nghiệm đối kháng nguồn vi khuẩn với nguồn nấm Fusarium sp. theo phương pháp giếng sau ngày Nguồn vi khuẩn Đường kính vòng vô khuẩn Hiệu ức chế HC 1-2 HC 1-3 HC 1-2 HC 1-3 F29.1 3,5 2,3 Mạnh Mạnh F90.1 2,5 2,5 Mạnh Mạnh F100.5 2,7 Mạnh Mạnh Sau ngày nghiệm cho thấy, tất nguồn vi khuẩn có hiệu ức chế mạnh nguồn nấm HC 1-2, HC 1-3, đường kính vòng vô khuẩn đạt từ cm đến 3,5 cm. Hình 3.17 Thí nghiệm đối kháng dòng vi khuẩn theo phương pháp giếng 3.15. Kết thí nghiệm đối kháng nguồn vi khuẩn với nguồn nấm Fusarium sp. theo phương pháp chiết n-hexan Nguồn vi khuẩn đối kháng chiết n-hexan để thử nghiệm xem chất vi khuẩn tiết môi trường nuôi cấy có khả đối kháng với nấm bệnh không. Các vi khuẩn đối kháng chiết n-hexan phơi khô, lượng chất khô thu cân hòa tan vào nước. Nguồn nấm Fusarium sp. HC1-2, HC1-3 hòa lọ môi trường PDA đổ đĩa. Sau đĩa PDA đông nguội, Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 56 tiến hành đục lỗ thạch đầu côn nhỏ dung dịch chất hòa tan vào nước thu từ dịch chiết. Kết thí nghiệm trình bày bảng 3.18 Bảng 3.18 Thí nghiệm đối kháng nguồn vi khuẩn với nguồn nấm Fusarium sp. phương pháp chiết với n-hexan sau ngày Đường kính vòng vô khuẩn Hiệu ức chế (cm) Nguồn vi khuẩn HC 1-2 HC 1-3 HC 1-2 HC 1-3 F29.1 (0,14g/ml) 1,9 Mạnh Trung bình F90.1 (0,24g/ml) 2,6 2,4 Mạnh Mạnh F100.5 (0,07g/ml) 0,6 2,1 Yếu Mạnh Kết thí nghiệm cho thấy lượng chất thu qua việc chiết nhexan dòng vi khuẩn đối kháng khác nhau. Thí nghiệm tiến hành so sánh hiệu ức chế dòng khuẩn với dòng nấm bệnh, không tiến hành so sánh hiệu ức chế dòng vi khuẩn với nhau. Với nguồn vi khuẩn đối kháng F29.1 có khả đối kháng mạnh với nguồn nấm HC 1-2, đường kính vòng vô khuẩn 2cm. Tuy nhiên F29.1 có hiệu ức chế trung bình với nguồn nấm HC 1-3, đường kính vòng vô khuẩn 1,9 cm. Với nguồn vi khuẩn đối kháng F90.1 có khả đối kháng mạnh với nguồn nấm HC 1-2 HC 1-3 với đường kính vòng vô khuẩn 2,6 cm 2,4 cm Với nguồn vi khuẩn đối kháng F100.5 có khả đối kháng mạnh với nguồn nấm HC 1-3, đường kính vòng vô khuẩn 2,1cm. Tuy nhiên F100.5 khả đối kháng với nguồn nấm HC 1-2. Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 57 Hình 3.18 Thí nghiệm đối kháng vi khuẩn dịch chiết n-hexan với Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 58 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận 1. Điều tra đồng ruộng Cẩm Giàng-Hải Dương, Yên Mỹ - Hưng Yên năm 2014 cho thấy có xuất bệnh héo vàng với tỷ lệ bệnh xấp xỉ 10%. 2. Đã phân lập làm 11 mẫu nấm Fusarium spp. từ 36 mẫu hành bị héo thu từ Hải Dương, Hà Nội, Sơn La. 3. Kết lây bệnh nhân tạo kết hợp kiểm tra mô lây nhiễm xác định đươc mẫu nấm nấm Fusarium HC1-2 HC1-3, có tính gây bệnh hành tỏi nguyên nhân gây bệnh héo vàng hành tỏi. 4. Phân tích trình tự vùng ITS đặc điểm hình thái xác định mẫu nấm Fusarium sp. HC1-2 HC1-3 gây bệnh thuộc loài Fusarium proliferatum. Đây lần nấm phát gây bệnh hành tỏi Việt Nam. 5. Thí nghiệm lây nhiễm nhân tạo cho thấy giống tỏi trồng năm Hải Dương, Hưng Yên Bắc Ninh có tỷ lệ nhiễm bệnh cao, lên đến 44,455,6% với nguồn nấm HC 1-2 HC 1-3; giống hành thi thu Hưng Yên có tỷ lệ nhiễm bệnh với nguồn nấm HC 1-2 HC 1-3 lên đến 22,2% 33,3%; giống hành lai thu Hải Dương có tỷ lệ nhiễm nguồn nấm HC 1-2 11,1% 6. Thí nghiệm lây nhiễm nhân tạo giống hành khảo nghiệm Hải Dương cho thấy giống hành HD1 có tỷ lệ nhiễm cao với loại nấm HC 1-2, HC 1-3 55,6% 66,7%; giá trị tương ứng giống hành HD3 11,1% 33,3%. Giống hành HD2 có khả kháng cao với mẫu nấm này. 7. Các thí nghiệm đánh giá khả ức chế sinh trưởng điều kiện invitro mẫu vi khuẩn Bacillus đối kháng (F29.1, F90.1, F100.5, nguồn Viện BVTV) nguồn nấm Fusarium proliferatum HC 1-2, HC 1-3 cho Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 59 thấy nguồn vi khuẩn đối kháng có khả ức chế sinh trưởng mẫu nấm trên. Đề nghị 1. Tiếp tục đánh giá thêm số giống hành, tỏi khảo nghiệm để tìm giống có khả kháng bệnh cao 2. Tìm kiếm thêm nguồn vi khuẩn có khả đối kháng cao với nấm gây bệnh héo vàng hành, tỏi nhằm tìm giải pháp tốt cho biện pháp phòng trừ sinh học. Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 60 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu nước 1. Đoàn Thị Thanh, 2012. Nghiên cứu đa dạng sinh học isolate nấm Fusarium spp Việt Nam số nước khác. Viện Khoa học Kỹ thuật Nông nghiệp Việt Nam. 2. Lester, W.B., Timothy, E.K., Len, T., Hiền, P.T., 2009. Cẩm nang chuẩn đoán bệnh Việt Nam. 3. Lê Thu Hiền, Hà Minh Thanh, Vũ Phương Bình, Trần Ngọc Khánh, 2013. Nghiên cứu vi khuẩn , xạ khuẩn đối kháng nấm Fusarium oxysporum gây bệnh héo vàng cà chua, dưa chuột. Hội thảo quốc tế khoa học trồng lần thứ I, 1009-1017. 4. Tạ Thu Cúc, Hồ Hữu An, Nghiêm Thị Bích Hà, 2000. Giáo trình rau. Tài liệu nước 5. Abbott, W.S., 1925. A method of computing the effectiveness of an insecticides. Economic Entomology, 265-267. 6. Ashish, S., Christopher, S.C., 2009. How reliable is field screening of Fusarium Basal Rot of Onions? plant Pathology 91, 199-202. 7. Assefa, S., Sakhujaa, P.K., Chemeda, F., Seid, A., 2010. Management of fusarium basal rot (Fusarium oxysporum f. sp. cepae) on shallot through fungicidal bulb treatment. Crop Protection 30, 560-565. 8. Awuah, R.T., Kwoseh, C., Koranteng, S.L., Okpala.R, O.C., Amoako-Attah, I., 2009. Appearance of Fusarium basal rot of onion in the Kwahu South district of Ghana. horticulture 7, 84-88. 9. Bayraktar, H., Dolar, F.S., 2011. Molecular identification and genetic diversity of Fusarium species associated with onion fields in Turkey. phytopathology 159, 28-34. 10. Burgess, L.W., 1994. Laboratory Manual for Fusarium Research. Fusarium Research Laboratory, Department of Crop Sciences, University of Sydney. 11. Cavaglieri, L., Orlandoa, J., Rodríguez, M.I., Chulzeb, S., Etcheverry, M., 2005. Biocontrol of Bacillus subtilis against Fusarium verticillioides in vitro and at the maize root level. Research in Microbiology 156 748-754. Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 61 12. Coşkuntuna, A., Özer, N., 2007. Biological control of onion basal rot disease using Trichoderma harzianum and induction of antifungal compounds in onion set following seed treatment. Crop Protection 27, 330–336. 13. Cramer, C.S., 2000. Breeding and genetics of Fusarium basal rot resistance in onion. Euphytica 115, 159-166. 14. Dissanayake, M., Laksha, M.C., Kashima, R., Tanaka, S., Ito, S.-i., 2009. Pathogenic variation and molecular characterization of Fusarium species isolated from wilted Welsh onion in Japan. Journal of general plant pathology 75, 37-45. 15. Donald, C.E., Olaf, K.R., 1996. Phytophthora Diseases Worldwide. Plant Pathology, 224-228. 16. García, M., Cara, M.d., Gálvez, L., Iglesias, C., Vares, L., Palmero, D., 2011. Host specificity of isolates of Fusarium proliferatum (Matsushima) Nirenberg on species within the Allium genus. Boletín de Sanidad Vegetal, Plagas. 17. Hoda, A., Moneem, E., Allam, Fahymy, 2000. Biological control of root-rots and wilt diseases of cotton. Agricultural Sciences 31, 269-285. 18. Ilhe, B.M., Musmade, N.A., Kawade, S.B., 2013. Management of basal bulb rot of onion (Allium cepa L.). PLANT PROTECTION 6, 349-352. 19. Illinois University, 1988. Fusarium wilt of watermelon and Muskmelon. Reports on plant Disease, RPD No 904. 20. Irfan, Y.S., Khalid, A.N., 2007. In vito biological control of Fusarium oxysporumr causing wilt in Capsicum annuum. Mycopath 5, 85-88. 21. John, F., Leslie, Brett, A., Summerell, 2006. The Fusarium laboratory manual. Library of Congress Cataloging-in-Publication Data. 22. Kanini, G.S., Katsifas, E.A., Savvides, A.L., Karagouni, A.D., 2013. Streptomyces rochei ACTA1551, an indigenous Greek isolate studied as a potential biocontrol agent against Fusarium oxysporum f.sp. lycopersici. BioMed research international 2013, 387230. 23. Malathi, S., Mohan, S., 2012. Evaluation of biocontrol agents and organic amendments against onion basal rot caused by Fusarium oxysporum f.sp.cepae. 24. Medine, D.L.C.J., García, H.S., 2007. Garlic: Post-harvest Operations. 25. Muharrem, T., 2013. Antifungal Effect of Various Salts Against Fusarium oxysporum f.sp. cepae, the Causal Agent of Fusarium Basal Rot of Onion. Agricultural Sciences, 178-187. Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 62 26. Nel, B., Steinberg, C., Labuschagne, N., Viljoen, A., 2006. The potential of nonpathogenic Fusarium oxysporum and other biological control organisms for suppressing fusarium wilt of banana. Plant Pathology 55, 217-223. 27. Olam, 2014. Onion & Garlic Crop Report. 28. Özer, N., Koç, M., Der, B., 2009. The sensitivity or Asspergilus niger and Fusarium oxysporum f.sp. cepae to fungistasis in onin - growing soils. Plant Pathology, 401-410. 29. Pal, K.K., McSpadden Gardener, B., 2006. Biological Control of Plant Pathogens. the Plant Health Instructor. 30. Salvalaggio, A.E., Ridao, A.d.C., 2013. First report of Fusarium proliferatum causing rot on garlic and onion in Argentina. Plant Disease. 31. Sankar, N.R., Babu, G.P., 2012. First report of Fusarium proliferatum causing rot of garlic bulbs (Allium sativum) in India. Plant Disease 96. 32. Sharifi, T.A., Ramezani, M., 2003. Biological control of Fusarium oxysporum, the causal agent of onion wilt by antagonistic bacteria. Communications in agricultural and applied biological sciences 68, 543-547. 33. Smith, Y.J., 2009. Investigation of Fusarium oxysporum f. sp. cepae and Phoma terrestris on onion (Allium cepa) in the Mid Murray region of South Australia. 34. Stankovic, S., Levic, J., Petrovic, T., Logrieco, A., Moretti, A., 2007. Pathogenicity and mycotoxin production by Fusarium proliferatum isolated from onion and garlic in Serbia. European journal of plant pathology 118, 165-172. 35. Stefano, T., Mauro, D.P., Paola, N., Antonio, P., Ilaria, A., 2012. First Report of Fusarium proliferatum Causing Rot of Stored Garlic Bulbs (Allium sativum L.) in Italy. Phytopathology. 36. Sudhasha, S., Usharani, S., Udhayakumar, R., 2009. Biological control of onion basal rot caused by Fusarium oxysporum f.sp. cepae. Advances in Plant Sciences 2009 Vol. 22 No. pp. 411-413. 37. Sun, J.B., Peng, M., Wang, Y.G., Zhao, P.J., Xia, Q.Y., 2011. Isolation and characterization of antagonistic bacteria against fusarium wilt and induction of defense related enzymes in banana. 38. USDA, E.R.S., 2006. Vegetables and Melons. 39. Visser, C.d., Broek, R.v.d., Brink, L.v.d., 2006. Fusarium basal rot in the Netherlands. Vegetable Crops Research Bulletin 2006 Vol. 65 pp. 5-16. Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 63 40. Yoshida, S., Hiradate, S., Tsukamoto, T., Hatakeda, K., Shirata, A., 2001. Antimicrobial activity of culture filtrate of Bacillus amyloliquefaciens RC-2 isolated from mulberry leaves. Phytopathology 91, 181-187. 41. Zhao, P., Quan, C., Wang, Y., Wang, J., Fan, S., 2014. Bacillus amyloliquefaciens Q-426 as a potential biocontrol agent against Fusarium oxysporum f. sp. spinaciae. Journal of basic microbiology 54, 448-456. 42. Một số trang web 1. http://www.quangngai.gov.vn/userfiles/file/dudiachiquangngai/PHANV/H uyenLySon.htm 2. http://www.cpv.org.vn/cpv/Modules/News/NewsDetail.aspx?co_id=0&cn_ id=169713. Ngày đăng 15/11/2007// 18:26 3. http://thongtindoanhnghiep.ninhthuan.org.vn/news.aspx?id=426&cid=1021 . Ngày đăng 25/06/2013 4. http://old.thaibinh.gov.vn/ct/news/Lists/EconomicNews/View_Detail.aspx ?ItemId=2752 5. http://www.haiduongdost.gov.vn/index.php?option=com_content&view=ar ticle&id=7534:cay-hanh-kinh-mon-cn-thnghiu&catid=103:lvnn&Itemid=165. Ngày đăng: thứ 7, 25/01/2014 22:51 6. http://www.nhandan.com.vn/kinhte/chuyen-lam-an/item/5932802-.html. Ngày đăng:Thứ sáu, 13/01/2006 - 12:00 PM 7. http://www.baosonla.org.vn/News/?ID=4108&CatID=75. Ngày đăng 12/06/2013/ 09:35:49 AM Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 64 PHỤ LỤC 1. HC1-3 (163DZAC061) TTGGCCGCGCCGCGTACCAGTTGCGAGGGTTTTACTACTACGCAATGG AAGCTGCAGCGAGACCGCCACTAGATTTCGGGGCCGGCTTGCCGCAA GGGCTCGCCGATCCCCAACACCAAACCCGGGGGCTTGAGGGTTGAAA TGACGCTCGAACAGGCATGCCCGCCAGAATACTGGCGGGCGCAATGT GCGTTCAAAGATTCGATGATTCACTGAATTCTGCAATTCACATTACTT ATCGCATTTTGCTGCGTTCTTCATCGATGCCAGAACCAAGAGATCCGT TGTTGAAAGTTTTGATTTATTTATGGTTTTACTCAGAAGTTACATATAG AAACAGAGTTTAGGGGTCCTCTGGCGGGCCGTCCCGTTTTACCGGGA GCGGGCTGATCCGCCGAGGCAACAATTGGTATGTTCACAGGGGTTTG GGAGTTGTAAACTCGGTAATGATCCCTCCGCTGGTTCACCAACGGAG ACCTTGTTAC Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 65 2. HC1-2 (163DZAC062) TTGGGGGTTTAACGGCTTGGCCGCGCCGCGTACCAGTTGCGAGGGTTT TACTACTACGCAATGGAAGCTGCAGCGAGACCGCCACTAGATTTCGG GGCCGGCTTGCCGCAAGGGCTCGCCGATCCCCAACACCAAACCCGGG GGCTTGAGGGTTGAAATGACGCTCGAACAGGCATGCCCGCCAGAATA CTGGCGGGCGCAATGTGCGTTCAAAGATTCGATGATTCACTGAATTCT GCAATTCACATTACTTATCGCATTTTGCTGCGTTCTTCATCGATGCCAG AACCAAGAGATCCGTTGTTGAAAGTTTTGATTTATTTATGGTTTTACT CAGAAGTTACATATAGAAACAGAGTTTAGGGGTCCTCTGGCGGGCCG TCCCGTTTTACCGGGAGCGGGCTGATCCGCCGAGGCAACAATTGGTA TGTTCACAGGGGTTTGGGAGTTGTAAACTCGGTAATGATCCCTCCGCT GGTTCACCAACGGAGACCTTGT Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 66 3. TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE HCDK 2/ 2/15 15:26 :PAGE kha nang doi khang cua vi khuan voi nam Fusarium sp. (HC1-2) MEANS FOR EFFECT CT ------------------------------------------------------------------------------CT NOS 3 3 SE(N= 3) 5%LSD 8DF 3NGAY 2.46667 2.16667 2.33333 3.76667 6NGAY 2.56667 2.43333 2.63333 7.00000 9NGAY 2.80000 2.40000 2.40000 9.00000 0.666668E-01 0.408245E-01 0.500013E-01 0.217394 0.133125 0.163049 4. TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE CHDK 2/ 2/15 15:22 ------------------------------------------------------------------ :PAGE kha nang doi khang cua vi khuan voi nam Fusarium sp. (HC 1-3) MEANS FOR EFFECT CT ------------------------------------------------------------------------------CT NOS 3 3 SE(N= 3) 5%LSD 8DF 3NGAY 2.60000 2.43333 2.76667 3.56667 6NGAY 2.76667 2.36667 2.96667 6.80000 0.866026E-01 0.104083 0.282402 0.339405 9NGAY 2.83333 2.83333 3.16667 9.00000 0.132289 0.431380 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 67 [...]... gây bệnh mà chủ yếu là do nấm Tuy nhiên ở Vi t Nam chưa có một nghiên cứu nào về bệnh héo vàng do Fusarium sp gây ra trên hành tỏi Xuất phát từ thực tiễn trên tôi tiến hành nghiên cứu đề tài Nghiên cứu bệnh héo vàng do nấm Fusarium sp hại hành, tỏi và thử nghiệm phòng trừ bệnh bằng vi khuẩn đối kháng. ” 2 Mục đích, yêu cầu đề tài 2.1 Mục đích Xác định nguyên nhân gây bệnh héo vàng hại hành, tỏi và thử. .. Nấm Fusarium sp gây héo vàng trên hành, tỏi - Thử nghiệm phòng trừ nấm Fusarium sp gây héo vàng hành tỏi bằng phương pháp sinh học trong điều kiện invitro 2.2 Phạm vi nghiên cứu - Không gian: nghiên cứu nấm Fusarium hại hành tỏi tại một số vùng trồng hành tỏi - Thời gian: vụ đông xuân 2014-2015 2.3 Nội dung nghiên cứu - Xác định bệnh do Fusarium trên và hành tỏi tại Hưng Yên và Hải Dương về mức độ nhiễm,... thử nghiệm ức chế nấm bằng vi khuẩn đối kháng trong điều kiện invitro 2.2 Yêu cầu của đề tài - Xác định bệnh do nấm Fusarium trên và hành tỏi tại Hưng Yên và Hải Dương về mức độ nhiễm và tỷ lệ nhiễm - Đánh giá tính gây bệnh của nấm Fusarium trên hành tỏi Học vi n Nông nghiệp Vi t Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 2 - Đánh giá khả năng kháng và nhiễm nấm Fusarium trên một số giống hành tỏi. .. định loài nấm Fusarium thông qua hình thái và giải trình tự - Đánh giá khả năng phòng chống nấm Fusarium của một số vi khuẩn đối kháng 3 Ý nghĩa khoa học và ý nghĩa thực tiễn 3.1 Ý nghĩa khoa học - Kết quả nghiên cứu đề tài là xác định được tác nhân gây bệnh héo vàng hành tỏi tại Hưng Yên, Hải Dương và đặc điểm phát triển của bệnh làm cơ sở cho biện pháp phòng trừ có hiệu quả - Thử nghiệm và xây dựng... định trong vi c mở rộng diện tích, thâm canh tăng vụ, tăng năng suất và hiệu quả sản xuất nông nghiệp Bệnh héo vàng trên hành tỏi do nấm Fusarium sp gây ra có nguồn gốc từ đất phổ biến và gây hại nghiêm trọng ở vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới Bệnh héo vàng cũng khó phòng trừ do nấm có khả năng tồn tại trong đất, trong cơ thể cây ký chủ, tàn dư thực vật, hạt giống, củ giống Nấm Fusarium sp có phổ ký... phần làm bệnh bị trầm trọng thêm Đất nghèo dinh dưỡng thiếu lân hoặc kali, muối và pH không cân bằng cũng làm giảm sức đề kháng của cây đối với các bệnh về rễ (Burgess, 1994) Học vi n Nông nghiệp Vi t Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 10 1.2.1.2 Những nghiên cứu về bệnh héo trên hành, tỏi do nấm Fusarium oxysporum f .sp. cepae gây ra Theo Đoàn Thị Thanh, Ở Vi t Nam, nấm Fusarium sp đã gây... giống hành, tỏi 2.5 Địa điểm nghiên cứu và thời gian nghiên cứu: Địa điểm: Trung tâm nghiên cứu bệnh cây nhiệt đới- Học vi n Nông Nghiệp Vi t Nam Thời gian: từ tháng 5/2014 – tháng 4/2015 2.6 Phương pháp nghiên cứu Điều tra, thu thập nguồn nấm Fusarium gây bệnh, nguồn vi sinh vật (VSV) đối kháng: Theo quy chuẩn QCVN 01-38 : 2010/BNNPTNT về điều tra dịch hại cây trồng 2.6.1 Phương pháp phân lập nấm Fusarium. .. mức độ nhiễm, tỷ lệ nhiễm - Đánh giá tính gây bệnh của Fusarium hành tỏi - Đánh giá khả năng kháng và nhiễm Fusarium trên một số giống hành tỏi - Xác định loài Fusarium (hình thái và giải trình tự) - Đánh giá khả năng phòng chống Fusarium của một số vi khuẩn đối kháng 2.4 Vật liệu nghiên cứu: 2.4.1 Vật liệu nghiên cứu trong phòng thí nghiệm - Hộp Petri, ống nghiệm, ống đong, cốc thủy tinh, bình tam giác... Thử nghiệm và xây dựng các biện pháp phòng trừ bệnh héo vàng hại hành, tỏi trong điều kiện invitro 3.2 Ý nghĩa thực tiễn Góp phần xây dựng quy trình quản lý dịch hại tổng hợp trên hành, tỏi làm giảm tỷ lệ bệnh héo vàng gây ra, nhằm nâng cao năng suất góp phần và thu nhập cho người dân vùng trồng hành, tỏi tại các địa phương chuyên trồng rau màu Học vi n Nông nghiệp Vi t Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học... giá Các dòng nấm Trichoderma viride, Trichoderma harzianum và vi khuẩn Pseudomonas sp được thu thập từ các vùng trồng hành tây khác nhau của Tamil Nadu và họ đã được thử nghiệm cho hoạt động đối kháng của họ chống lại Fusarium oxysporum.f .sp. cepae bằng kỹ thuật nuôi kép Trong số các chủng thử nghiệm của Trichoderma sp thì T harzianum ức chế đến 82,77% Trong số sáu mươi hai chủng Pseudomonas sp Pf 12 tác . từ thực tiễn trên tôi tiến hành nghiên cứu đề tài Nghiên cứu bệnh héo vàng do nấm Fusarium sp. hại hành, tỏi và thử nghiệm phòng trừ bệnh bằng vi khuẩn đối kháng. ” 2. Mục đích, yêu cầu đề. VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VI N NÔNG NGHIỆP VI T NAM TRẦN THỊ BÍCH PHƯƠNG NGHIÊN CỨU BỆNH HÉO VÀNG DO NẤM FUSARIUM SP. HẠI HÀNH, TỎI VÀ THỬ NGHIỆM PHÒNG TRỪ BỆNH BẰNG. NAM TRẦN THỊ BÍCH PHƯƠNG NGHIÊN CỨU BỆNH HÉO VÀNG DO NẤM FUSARIUM SP. HẠI HÀNH, TỎI VÀ THỬ NGHIỆM PHÒNG TRỪ BỆNH BẰNG VI KHUẨN ĐỐI KHÁNG CHUYÊN NGÀNH : BẢO VỆ THỰC VẬT MÃ