nghiên cứu bào chế thuốc tiêm gentamicin

Trong những năm gần đây, ngoài các công trình nghiên cứu về dạng thuốc mới, còn có một số nghiên cứu về dược động học của các thành phần gentamicin trong chế phẩm và phương pháp phân tíc

BỘ Y TÊ TRƯỜNG ĐẠI HỌC D ư ợ c HÀ NỘI

HOÀNG THỊ HƯƠNG GIANG

TIÊM GENTAMICIN

(KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược s ĩ KHOÁ 1999 - 2004)

- Người hướng dẫn

- Noi thực hiện

- Thời gian thực hiện

PGS TS Nguyễn Văn Long

DS Đinh Thuỳ Dương

Bộ Môn Bào Chế 8/2003 - 4/2004

HÀ NỘI: 05/2004

♦íĩUựAiẸN *

Em xin chân thành cảm ơn các thầy cô giáo, kĩ thuật viên bộ môn Bào chế, đã tạo điều kiện cho em hoàn thành khoá luận.

Hà Nội: tháng 5 - 2004 Sinh viên: Hoàng Thị Hương Giang

mạc Lạc

Trang

ĐẶT VẤN Đ Ể 1

PHẦN1- TỔNG QUAN 2

1.1 Đại cương về độ ổn định của thuốc tiêm 2

1.1.1 Các phản ứng phân huỷ dược chất 2

1.1.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến độ ổn định của thuốc tiêm 5

1.2 Đại cương về gentamicin 7

1.2.1 Nguồn gốc và cấu trúc hoá học 7

1.2.2 Đặc điểm vật lý và hoá học 7

1.2.3 Độ ổn định của gentamicin 8

1.2.4 Đặc điểm dược động học 9

1.2.5 Đặc điểm dược động học của từng thành phần trong hỗn 10 hợp gentamicin

1.2.6 Tác dụng dược lý và cơ chế tác dụng 10

1.2.7 Chỉ định, liều dùng, cách dùng 11

1.2.8 Tác dụng không mong muốn 11

1.2.9 Tương tác, tương kỵ 12

1.2.10 Các dạng bào chế của gentamicin 12

PHẦN n-THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 17

2.1 Nguyên vật liệu và phương pháp thực nghiệm 17

2.1.1 Nguyên vật liệu 17

2.1.2 Phương tiện thực nghiệm 17

2.1.3 Nội dung nghiên cứu 18

2.1.4 Phương pháp thực nghiệm 18

2.2 Kết quả thực nghiệm và nhận xét 23

2.2.1 Kết quả nghiên cứu phương pháp phân tích gentamicin trong 23 chế phẩm thuốc tiêm

2.2.2 Kết quả nghiên cứu độ ổn định của thuốc tiêm gentamicin 31

PHẦN 3- KẾT LUẬN VÀ ĐỂ XUẤT 44

3.1 Kết luận 44

3.1.1 Về phương pháp phân tích thuốc tiêm gentamicin sul/at 44

3.1.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến độ ổn định của thuốc tiềm 44 gentamicin 40mg/ml

3.1.3 Vềxây dựng công thức thuốc tiêm 45

3.2 Đề xuất 45

TÀI LIỆU THAM KHẢO.

CHÚ GIẢI CHỮ VIẾT TẮT

BP British PharmacopoeiaDĐVN Dược điển Việt Nam

HPLC Sắc kí lỏng hiệu năng caoUSP United State Pharmacopoeia

ĐẶT VÂN ĐỂ

Gentamicin là một kháng sinh phổ rộng thuộc nhóm aminoglycosid có tác dụng điều trị các bệnh nhiễm trùng gây ra bởi trực khuẩn hiếu khí gram âm và các cầu khuẩn gram dương

Trên thế giới đã có nhiều công trình nghiên cứu về các dạng bào chế của gentamicin nhưng thuốc tiêm vẫn là dạng thuốc kinh điển của gentamicin được

sử dụng nhiều trong điều trị Trong những năm gần đây, ngoài các công trình nghiên cứu về dạng thuốc mới, còn có một số nghiên cứu về dược động học của các thành phần gentamicin trong chế phẩm và phương pháp phân tích các thành phần đó

Ở Việt Nam, trước đây có khá nhiều cơ sở sản xuất thuốc tiêm gentamicin nhưng độ ổn định tương đối thất thường Đặc biệt là từ khi DĐVN III ra đời, thay đổi chuyên luận gentamicin, tương tự như Dược điển Anh 2001, có một số chế phẩm thuốc tiêm gentamicin không đạt các chỉ tiêu trong Dược điển, đặc biệt là chỉ tiêu về các thành phần gentamicin Hiện nay, trong nước chỉ còn rất ít cơ sở sản xuất thuốc tiêm gentamicin đạt tiêu chuẩn chất lượng Dược điển Việt Nam

Vì vậy, để góp phần nâng cao chất lượng của thuốc tiêm gentamicin, chúng tôi thực hiện đề tài này với mục tiêu:

> Nghiên cứu ảnh hưởng của một số yếu tố công thức tới độ ổn định của thuốc tiêm gentamicin.

> Nghiên cứu ảnh hưởng của kĩ thuật bào chế tới độ ổn định của thuốc tiêm gentamicin.

PHẦN l:TổNG QUAN

1.1 ĐẠI CƯƠNG ĐỘ VỂ ỔN ĐỊNH CỦA THUỐC TIÊM

1.1.1.Các phản ứng phân huỷ dược chất

ỉ 1.1.1 Phản ứng thuỷ phân[3]

Phản ứng thuỷ phân thường xảy ra với những hợp chất có các liên kết este, amid, lactam, imid Để hạn chế phản ứng thuỷ phân người ta tìm cách giảm tỷ lệ nước trong dung dịch bằng cách sử dụng các dung môi đồng tan với nước hoặc pha trong dầu (với các dược chất tan trong dầu) Đồng thời hạn chế sự có mặt của các ion kim loại, yếu tố acid, kiềm và sự tác động của nhiệt độ trong quá trình sản xuất cũng như bảo quản thuốc

1.1.1.2 Phản ứng oxy hoá

Trong thực tế có rất nhiều thuốc bị giảm hiệu lực điều trị sau một thời gian bảo quản do phản ứng oxy hoá như: gentamicin, adrenalin, morphin, vitamin c,

a, Cơ chế phản ứng

Quá trình oxy hoá dược chất xảy ra theo phản ứng chuỗi với 3 giai đoạn [25]

♦ Giai đoạn khơi mào: dưới tác động của oxy nguyên tử, gốc tự do và sự xúc

tác của các ion kim loại, bức xạ uv, nhiệt độ, một chuỗi phản ứng oxy hoá sẽ xảy ra do tạo các gốc tự do (In°) từ các phân tử nhạy cảm với các tác nhân này

+ Phát triển phản ứng: các gốc tự do (In°) được tạo ra ở trên liên tiếp tác động

vào các phân tử dược chất để tạo các gốc tự do mới

In° +RHR° + 0 2 ROO° + R,H

► ROO°

► ROOH + R

+Kểt thúc phản ứng: các gốc tự do được tạo ra ở trên kết hợp lại thành các

phân tử mới với tốc độ ~109 M/giây

R° + R° -► R-R

+ R Î -► Rj-Rj ROO° + R ° _ * ROOR ROO0 + R / - ► ROORj

b, Các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình oxy hoá

• Sự có mặt của oxy nguyên tử hoặc các gốc tự do

• Các yếu tố xúc tác cho phản ứng oxy hoá dược chất bao gồm:

-pH không thích hợp: nói chung môi trường kiểm thường làm cho thuốc nhạy cảm hơn với các tác nhân oxy hoá, trong mồi trường acid thuốc ổn định hơn

-Bức xạ tử ngoại: bức xạ tử ngoại có năng lượng cao, có thể chuyển phân tử dược chất lên trạng thái năng lượng cao, dễ tham gia phản ứng oxy hoá hoặc có thể tác động vào các chất phụ tạo gốc tự do làm phân huỷ nhanh dược chất[6].-Vết kim loại nặng: các ion kim loại có ảnh hưởng lớn tới tốc độ phân huỷ dược chất Kim loại chỉ cần ở dạng vết cũng có thể xúc tác cho chuỗi phản ứng oxy hoá phân huỷ dược chất Có thể sắp xếp khả năng xúc tác phản ứng oxy hoá cuả một số ion kim loại như sau[3]:

Cu2+> Fe3+> Pb2+> Co2+> Mn2+> Mg2+> Ca2+

-Nhiệt độ cao: nhiệt độ có thể ảnh hưởng tới hầu hết các phản ứng phân huỷ dược chất Thông thường, khi tăng nhiệt độ lên 10°c tốc độ phản ứng tăng 2-5 lần[6,8]

❖ Ảnh hưởng của quá trình tiệt khuẩn đối với sự oxy hoá.

+Phương pháp tiệt khuẩn bằng nhiệt độ đối với dạng thuốc lỏng thường làm tăng tỷ lộ oxy hoá thuốc Lượng oxy hoà tan tỷ lệ nghịch với nhiệt độ nên ở nhiệt độ cao thì có ít oxy hoà tan, nhưng tỷ lệ tham gia phản ứng oxy hoá dược

chất nhiều hơn và tốc độ phản ứng lại nhanh hơn ban đầu.

+Phương pháp tiệt khuẩn bằng bức xạ (bức xạ điện từ hoặc tia gamma) [39]: hiện nay một số chế phẩm thuốc trên thị trường được tiệt khuẩn bằng bức

xạ, bao gồm thuốc mỡ tra mắt, thuốc mỡ sử dụng tại chỗ, thuốc nhỏ mắt, thuốc tiêm và sản phẩm thuốc thú y Bức xạ gamma có ưu điểm là sử dụng được cho sản phẩm đã bao gói và những thuốc nhạy cảm với nhiệt độ (do nhiệt độ của bức

xạ dưới 5°C)

c, Một số biện pháp hạn chế phản ứng oxy hoá phân huỷ dược chất[3]

♦ Thêm chất chống oxi hoá như: natri bisulfit, acid ascorbic, cystein, natri metabisulfit, dithionit, natri Sulfit, Rongalit với nồng độ thích hợp

♦ Sử dụng các chất hiệp đồng chống oxy hoá (có tác dụng khoá các ion kim loại nặng): natri edetat, acid tatric, acid citric, acid fumaric, acid malic,

♦ Điều chỉnh pH thích hợp để hạn chế quá trình oxy hoá

♦ Loại oxy hoà tan trong nước cất pha tiêm trước khi pha chế, đóng ống và hàn ống trong bầu khí trơ

♦ Hạn chế sự tác động của nhiệt độ trong quá trình pha chế và bảo quản

1.1.1.3 Phản ứng quang hoá

Khi có bức xạ u v có mức năng lượng cao, các dược chất dễ tham gia phản ứng quang hoá làm giảm hoặc mất tác dụng của thuốc

1.1.1.4 Phản ứng racemỉc hoá

Dưới tác động của các tác nhân như ánh sáng, nhiệt độ, một số dược chất

có thể bị racemic hoá chuyển sang dạng đồng phân mới có tác dụng yếu hoặc mất tác dụng, thậm chí tạo các sản phẩm có hại

1.1.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến độ ổn định của thuốc tiêm

Các yếu tố tác động đến độ ổn định của thuốc tiêm có thể khái quát như sau

1.1.2.1 Yếu tố thuộc về công thức thuốc

a, Bản chất của dược chất

Các dược chất khác nhau có tính chất vật lý, hoá học khác nhau và độ bền vững cũng khác nhau Do đó tuỳ thuộc vào từng dược chất mà ta phải nghiên cứu xây dựng các công thức và kỹ thuật bào chế đảm bảo độ ổn định, an toàn và hiệu lực điều trị

b, Ảnh hưởng của dung môi

Dung môi là nước sẽ gây phản ứng phân huỷ các dược chất dễ bị thuỷ phân Dung môi không tinh khiết làm cho các phản ứng phân huỷ xảy ra nhanh hơn

c, pH dung dịch

pH là một trong những tác nhân xúc tác cho các phản ứng phân huỷ dược chất, ảnh hưởng đến độ tan, độ ổn định của dược chất và sinh khả dụng của thuốc Vì vậy phải nghiên cứu lựa chọn pH thích hợp cho từng dược chất

dy Ảnh hưởng của các chát phụ

Tuỳ thuộc vào từng loại dược chất, người ta nghiên cứu sử dụng thêm các

chất phụ thích hợp {chất chống oxy hoá, chất hiệp đồng chống oxy hoá, các chất

bảo quản, ) để đảm bảo độ ổn định của chế phẩm

e, Ảnh hưởng của đồ bao gói

Bao bì đựng thuốc tiêm luôn tiếp xúc trực tiếp với dược chất, trong quá trình bảo quản nó có thể "nhả" một số chất vào thuốc tiêm làm ảnh hưởng đến độ

ổn định của thuốc

1.1.2.2 Yếu tố thuộc kỹ thuật bào chế

Các yếu tố thuộc kỹ thuật bào chế ảnh hưởng đến độ ổn định của thuốc tiêm bao gồm: điều kiện pha chế kín hay hở; nhiệt độ và thời gian pha; trình tự pha; sự

có mặt của khí trơ; nhiệt độ, thời gian và phương pháp tiệt khuẩn

Do đó phải tiến hành pha chế nhanh, hạn chế tiếp xúc với không khí (để hạn chế oxy hoà tan trong dung dịch, tránh nhiễm khuẩn và tránh tiếp xúc với ánh sáng), bào chế kín, hoà tan chất phụ trước rồi đến dược chất, đóng và hàn ống trong bầu khí trơ

1.1.2.3 Các yếu tố thuộc về điều kiện bảo quản

Điều kiện bảo quản cũng có ảnh hưởng nhiều đến độ ổn định của chế phẩm Các yếu tố nhiệt độ, ánh sáng và độ ẩm trong quá trình bảo quản có thể xúc tác cho phản ứng phân huỷ dược chất Vì vậy đối với mỗi chế phẩm cần phải nghiên cứu điều kiện bảo quản thích hợp để đảm bảo tuổi thọ của thuốc

1.2 ĐẠI CƯƠNG VỂ GENTAMICIN

1.2.1 Nguồn gốc và cấu trúc hoá học

Ngoài cấu trúc trên, theo một số tài liệu khác [4,37] hỗn hợp gentamicin

bao gồm cả các thành phần gentamicin A,B,X

b, Nguồn gốc

Gentamicin Sulfat là hỗn hợp các muối Sulfat của các chất kháng khuẩn được điều chế từ Micromonospora purpurea Hoạt lực không được dưới 590 IU/lmg (tính theo chế phẩm khan)[l,14,38]

1.2.2 Đặc điểm vật lý và hoá học [1,14,19,34]

-Tính chất: gentamicin Sulfat là bột kết tinh màu trắng hoặc gần như trắng -Nhiệt độ nóng chảy của gentamicin =102"ỉ_108oc và nhiệt độ nóng chảy của gentamicin Sulfat =218-ỉ-237°c [39]

-Dung dịch 4% (w/v) gentamicin Sulfat có pH =

-Góc quay cực riêng (dung dịch 10%): +107° ■=■ +121°

-Độ tan: gentamicin Sulfat tan tốt trong nước, tan trong ethylen glycol, formamid Thực tế không tan trong ethanol, cloroform, ether, aceton, benzen

1.2.3 Độ ổn định của gentamicin

1.2.3.1 Nguyên liệu, dung dịch và các dạng bào chế khác của gentamỉcin

Gentamicin Sulfat ở dạng nguyên liệu tinh khiết khá ổn định, ít bị phânhuỷ trong dung dịch đệm pH từ 2 đến 14 Chế phẩm thuốc tiêm và thuốc dùng tại chỗ bị phân huỷ dưới 10% ở điều kiện 37°c trong 2,5-3 năm[39].

1.2.3.2 Dung dịch pha lại và đóng gói ỉại của gentamicin

♦ Theo Zbrozek và cộng sự: gentamicin Sulfat (Elkins-Sinn) 120mg pha loãng với lml NaCl 0,9% thành 4ml giảm 10% hàm lượng khi bảo quản trong ống tiêm

bằng polypropylen trong 48 giờ ở 25°c, dưới ánh sáng huỳnh quang[39].

♦ Theo Marble và cộng sự: gentamicin Sulfat (Elkins-Sinn) nồng độ 120mg/50ml pha trong dung dịch dextrose 5% bị mất 6% hoạt tính và trong NaCl 0,9% mất

2% hoạt tính khi bảo quản ỏ -20°c trong 28 ngày[27].

+Gentamicin Sulfat (Schering) 50mg pha trong 50ml dung dịch dextrose 5% cũng như trong dung dịch NaCl 0,9% và đựng trong túi nhựa không mất hoạt tính khi bảo quản ở -20°c trong 30 ngày[27]

+Trong một nghiên cứu khác: gentamicin Sulfat 50mg pha trong 100ml dung

dịch dextrose 5% đựng trong túi nhựa, bảo quản ở -20°c trong 30 ngày, sau đó để tan chảy ở nhiệt độ thường hoặc bởi bức xạ lò vi sóng, thì không thấy giảm hoặc

biến màu và không mất hoạt lực trong thí nghiêm vi sinh Bảo quản tiếp hỗn hợp

ở nhiệt độ phòng trong 24 giờ thì hầu như không mất hoặc mất rất ít hoạt lực[27]

♦ Khi bảo quản dung dịch gentamicin Sulfat trong ống tiêm nhựa, hoạt lực trung bình giảm 16% trong 30 ngày và tạo kết tủa màu nâu Còn đối với ống tiêm thuỷ

tinh, hoạt lực trung bình giảm 7% trong 30 ngày, kết tủa màu nâu không xuất

hiện trong 30 ngày nhưng lại xuất hiện sau 60 ngày[39]

1.2.3.3 Dung dịch thẩm phân phúc mạc

Dooley DP và cộng sự đã nghiên cứu độ ổn định hoá học và sinh học của

gentamicin, vancomycin và hỗn hợp gentamicin+vancomycin, độ ổn định sinh

học của ceftazidim, trộn với dung dịch thẩm phân phúc mạc và để ở nhiệt độ

phòng hoặc dưới điều kiện lạnh trong 14 ngày Kết quả cho thấy nồng độ kháng

sinh không giảm trong 14 ngày đối với vancomycin hoặc gentamicin, hỗn hợp

kháng sinh với dung dịch thẩm phân phúc mạc duy trì độ ổn định hoá học trong

điều kiện trên trong ít nhất 14 ngày[16]

1.2.4 Đặc điểm dược động học

1.2.4.1 Hấp thu

Gentamicin khống hấp thu qua đường tiêu hoá, nên chủ yếu được dùng qua

đường tiêm bắp và tiêm tĩnh mạch

Đối với người bệnh có chức năng thận bình thường, sau khi tiêm bắp

khoảng 30-60 phút với liều lmg/kg thể trọng, nồng độ đỉnh trong huyết tương đạt

được 4ụg/ml, giống nồng độ sau khi tiêm truyền tĩnh mạch và duy trì tác dụng

khoảng 6-12 giờ[2,5,10]

1.2.4.2 Phân bố

Gentamicin ít gắn với protein huyết tương, khuếch tán chủ yếu vào dịch

ngoại bào, qua được nhau thai và sữa mẹ, ít qua dịch não tuỷ kể cả khi màng não

bị viêm Khuếch tán kém vào mỡ, xương[2,5,10]

1.2.4.3 Chuyển hoá và thải trừ

Gentamicin không bị chuyển hoá trong cơ thể nên được thải trừ (gần như

không đổi) ra nước tiểu qua lọc ở cầu thận: có 65% lượng thuốc tiêm được thải

qua nước tiểu trong 6 giờ đầu và 80% liều dùng được bài xuất ra nước tiểu trong

24 giờ Tuy vậy, gentamicin tích luỹ ở mô, đặc biệt là mô thận nên ở những bệnh

nhân suy giảm chức năng thận thải trừ thuốc chậm (phải điều chỉnh liều)[2,5,10].

1.2.5 Đặc điểm dược động học của từng thành phần trong hỗn hợp gentamicin

Gentamicin là hỗn hợp của nhiều thành phần trong đó thành phần chính là gentamicin Cl5 Cla, C2, C2a và một số thành phần phụ khác như gentamicin A,B,X Mỗi thành phần có đặc điểm dược động học và độc tính khác nhau

♦ A.Steinman và cộng sự đã nghiên cứu dược động học của gentamicin Cj, Cla, c 2 ở ngựa với liều 6,6mg/kg tiêm tĩnh mạch Kết quả cho thấy thành phần Cla có độ thanh thải (Cl) và thể tích phân bố lớn hơn Cj và C2, nhưng thời gian lưu

và thời gian bán thải (t1/2) lại nhỏ hơn Cx và C2[13]

♦ N.Isoheranen và cộng sự nghiên cứu dược động học của các thành phần

Cj, Cla, C2 ở chó becgie với liều tĩnh mạch 4mg/kg trọng lượng cơ thể bằng

phương pháp HPLC Kết quả cho thấy thành phần Cla có độ thanh thải (Cl) và thể tích phân bố nhỏ hơn Cj và C2, nhưng thời gian lưu và thời gian bán thải (t1/2) lại lớn hơn Cj và C2[32]

Các kết quả trên cho thấy sự khác nhau về dược động học cũng như độc tính của các thành phần gentamicin trên từng loại động vật thí nghiệm khác nhau

1.2.6 Tác dụng dược lý và cơ chế tác dụng

1.2.6.1 Phổ tác dụng

-Gentamicin sulfat là một kháng sinh thuộc nhóm aminoglycosid có phổ tác dụng bao gồm vi khuẩn hiếu khí gram âm và các tụ cầu khuẩn kể cả các chủng tạo penicillinase và kháng methicilin Gentamicin ít có tác dụng đối với lậu cầu,liên cầu, phế cầu, não mô cầu Ở Việt Nam hiện nay, 1 số chủng: E.aerogens, Klebsiella pneumoniae, trực khuẩn mủ xanh đều đã kháng gentamicin

Gentamicin vẫn còn tác dụng với H.influenzae, Shigella flexneri, tụ cầu vàng, đặc biệt Staphylococcus saprophyticus, Salmonella typhi và E coli [2,6,7]

-Thời gian điều trị kéo dài không quá 7-10 ngày.

1.2.8 Tác dụng không mong muốn (ADR) [2,5,21]

-Thường gặp: nhiễm độc tai không hồi phục, ảnh hưởng cả đến ốc tai và tiền đình (hoa mắt, chóng mặt)

-ít gặp: nhiễm độc thận có hồi phục (tác dụng độc trên thận của gentamicin chủ yếu do thành phần gentamicin C2 [16]), ức chế dẫn truyền thần kinh cơ; tiêm dưới kết mạc gây đau, xung huyết và phù kết mạc

-Hiếm gặp: phản ứng phản vệ, rối loạn chức năng gan

-Aminosid nói chung và gentamicin nói riêng bị bất hoạt invitro bởi các penicillin và cephalosporin do phản ứng với vòng beta-lactam; tương kỵ với íurosemid (tạo kết tủa trắng)[2,21,39].

1.2.10 Các dạng bào chế của gentamicin

1.2.10.1 Các dạng bào chế thường gặp của gentamicin

+ Dung dịch thuốc tiêm: 40mg /lml, 80mg/2ml

+ Dung dịch thuốc nhỏ mắt và mỡ tra mắt 0,3%

+ Dạng thuốc dùng ngoài: thuốc mỡ, kem

1.2.10.2 Một số dạng bào chế mới của gentamicin

Gần đây có nhiều cồng trình nghiên cứu về các dạng bào chế mới của gentamicin nhằm khắc phục nhược điểm kém hấp thu ở đường tiêu hoá của

gentamicin (thuốc uống, thuốc đặt, dạng cấy dưới da, cấy trong mắt, cấy trong xương )

❖ Vi cầu

-Vi cầu gồm gentamicin phân bố trong cốt polyme poly(lactid) (PLA) và poly(D, L-lactid-co-glycolid) (PLGA), được bào chế bằng phương pháp phun sấy,kích thước 3ụm[36]

-Vi cầu gồm cefazolin và gentamicin được phân bố trong cốt polyme PLA/PLGA (là các polyme bị phân giải bởi các vi khuẩn đường ruột) Phương pháp bào chế: sử dụng đồng polyme polylactid-poliglycolid trộn lẫn với kháng

sinh, cô đặc hỗn hợp và kết tinh ở 55 °c tạo ra các tiểu phân chứa kháng sinh giải phóng kéo dài, có hiệu quả trong điều trị viêm tuỷ xương và nhiều loại nhiễm trùng như nhiễm khuẩn vùng ngực, bụng , xương chậu [23].

-Vi cầu gồm gentamicin được phân bố trong cốt Eudragit RS và RL phối hợp với các polyvinyl alcol chỉ định dùng trong giác mạc, kích thước nhỏ hơn 5fim,

sử dụng kỹ thuật bốc hơi dung môi[35]

-Vi cầu gồm gentamicin trong cốt polyme PLGA được phân bố vào chất mang xốp (collagen), được bào chế bằng phương pháp đông khô[31]

* x * Hệ giải phóng dùng để cấy dưới da và trong giác mạc, trong xương -Dạng giải phóng kéo dài gồm gentamicin phân bố trong cốt thân nước (gel carbopol)[28]

-Dạng giải phóng gồm gentamicin trong cốt xi măng bó xương acrylic dùng

để ngăn chặn nhiễm trùng trong phẫu thuật tạo hình khớp Dưới tác động của tần

số siêu âm khả năng giải phóng gentamicin tăng lên đáng kể làm tăng tác dụng tại chỗ của dạng thuốc này[19]

-Dạng viên cấy vào xương gồm gentamicin, canci phosphat và polyme PLA, được bào chế bằng phương pháp tạo hạt, dập thẳng[30]

(8,4% Tween 80 và 3,4% Transcutol P); đồng thời labrasol cũng ức chế sự tăng tiết dịch tiêu hoá[42].

-Dạng vi nhũ tương chứa các phân đoạn của labrasol làm tăng hiệu quả hấp thu

ở đường tiêu hoá của gentamicin so với chỉ sử dụng labrasol đơn thuần Tác giả

đã đánh giá khả năng làm tăng hiệu quả hấp thu ở đường tiêu hoá trên ruột kết của chuột của 4 phân đoạn labrasol Kết quả thứ tự làm tăng hiệu quả hấp thu của gentamicin là: phân đoạn labrasol trong dietylether > phân đoạn labrasol trong ethylacetat = phân đoạn labrasol trong hexan > phân đoạn labrasol trong nước [41]

-Dạng thuốc uống của gentamicin chứa labrasol: gentamicin chứa labrasol và HPMC (hydroxy propyl methyl cellulose), bao màng mỏng bằng Eudragit LI00

và Eudragit S100[40]

1.1.11 Các phương pháp phân tích gentamicin

1.1.11.1 Phương pháp sắc kí lớp mỏng [1,14]

-Pha tĩnh: bản mỏng silicagel tráng sẵn

-Pha động: amonihydroxyd 13,5M : cloroform : methanol (1:1:1)

-Thuốc thử phun hiện màu: dung dịch ninhydrin

> Phương pháp này dùng để định tính và xác định tạp chất phân huỷ

1.1.11.2 Phương pháp đo màu

- Phương pháp đo màu được tiến hành dựa trên phản ứng của ninhydrin với amin bậc 1 và bậc 2 có trong gentamicin, phản ứng này tạo ra một chất màu tím,

đo màu ở bước sóng 400nm.

- P.Frutos và cộng sự đã nghiên cứu sự ảnh hưởng của một vài yếu tố như

pH, nồng độ ninhydrin và thời gian đun cách thuỷ để tối ưu hoá phương pháp Phương pháp này có giá trị thực nghiệm lớn bởi nó có độ nhạy cao, thực hiện đơn giản và đặc biệt là đỡ tốn kém, dùng để định lượng bán thành phẩm[33]

1.1.11.3 Phương pháp sắc ký lỏng với detector xung điện hoá

Phương pháp này sử dụng cột có hạt bao bằng poly(styren-divinyl benzen), điện cực bằng vàng và detector xung điện hoá Pha động chứa dung dịch muối natri Sulfat, tetrahydrofuran, natri l-octansulfonat và đệm phosphat pH 3,0

> Phương pháp này không chỉ cho phép tách tốt các thành phần Cla, Cj, C2, C2a và C2b mà còn tách được một số thành phần phụ [18]

1.1.11.4 Phương pháp phân tích điện di mao quản với detector u v

Phương pháp này sử dụng 1,2-phthalic dicarboxaldehyd và acid mercaptoacetic để tạo dẫn chất của các thành phần gentamicin Các dẫn chất này được phát hiện bằng detector u v ở bước sóng 330 nm

Phương pháp này có thể dùng để định tính và định lượng gentamicin thay cho phương pháp đã được mô tả trong dược điển Mỹ và dược điển Châu Âu[17]

-Cột sắc ký kích thước 2 xl20mm, hạt nhồi cột C16T (lOụm)

-Thể tích tiêm mẫu là 10jLil

-Pha động: methanol, nước, acid acetic, natril-heptansulfonat chạy theo gradient nồng độ.

-Detector uv, bước sóng 330nm

*Tạo dẫn chất của các thành phần bằng thuốc thử phthalaldehyd

Kết quả xác định được các thành phần chính C1 ,Cla, C2 và các thành phần phụ A, B, X của gentamicin[12]

1.1.11.6 Phương pháp sinh học

Thử theo phương pháp khuếch tán trên thạch với chủng chỉ thị là tspumilus hoặc Staphylococcus epidermidis, môi trường thạch pepton-casein số 5,

ủ ở nhiệt độ 37-39° c , xác định hoạt lực bằng cách đo vòng vô khuẩn[l,14]

> Phương pháp này được dùng để định lượng gentamicin trong chế phẩm thuốc tiêm

PHẦN II: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ

2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP THỰC NGHIỆM

2.1.1 Nguyên vật liệu

Bảng 2.1-Các nguyên vật liệu sử dụng trong quá trình thực nghiệm

Thứ tự Tên hoá chất Nguồn gốc Tiêu chuẩn

1 Gentamicin Sulfat Trung Quốc BP

2 Gentamicin Sulfat chuẩn Viện kiểm nghiệm DĐVN III

3 Natri EDTA Merck Tinh khiết hoá học

4 Natri metabisulfit Merck Tinh khiết hoá học

7 Bản mỏng Silicagel 60F245 Merck

9 Nước cất pha tiêm XNDPTWII DĐVN III

10 Ông tiêm thuỷ tinh Hà Lan Trung tính

11 Natri hydroxit Trung Quốc Tinh khiết hoá học

12 Ethanol XNHoá dược DĐVN III

13 Acid acetic Prolabo Dùng cho HPLC

14 Methanol Prolabo Dùng cho HPLC

2.1.2 Phương tiện thực nghiệm

-Máy đóng và hàn thuốc tiêm ROTA

-Máy sắc kí lỏng hiệu năng cao THERMO- FINNIGAN

-Máy quang phổ UV-VIS HEẰiOS

-Máy đo pH MP220, Mettler Toledo

-Máy lọc nén SARTORIUS

-Cân phân tích, cân kỹ thuật.

-Các máy móc và thiết bị khác

2.1.3 Nội dung nghiên cứu

♦ Nghiên cứu phương pháp phân tích gentamicin trong chế phẩm thuốc tiêm

♦ Nghiên cứu ảnh hưởng của pH tới độ ổn định của thuốc

♦ Nghiên cứu ảnh hưởng của các yếu tố thuộc về kĩ thuật bào chế tới độ ổn định của thuốc

+Sục khí nitơ và không sục khí nitơ

+Các phương pháp tiệt khuẩn: lọc vô khuẩn, luộc sôi và hấp tiệt khuẩn

2.1.4 Phương pháp thực nghiệm

2.1.4.1 Phương pháp pha chế thuốc tiêm gentamỉcin

Qua tham khảo tài liệu và kết quả nghiên cứu thăm dò chúng tôi pha thuốc tiêm gentamicin Sulfat 40mg/ml theo công thức như sau:

Gentamicin Sulfat 66,7mg (tương ứng với 40mg gentamicin)

Nipasol 0,2mg

Nipagin l,8mg

Natri metabisulfit 3,2mg

Natri EDTA 0,lmg

Nước cất pha tiêm lml

♦ Sơ đồ các giai đoạn pha chế thuốc tiêm gentamicin

Thuốc tiêm gentamicin được pha chế theo các bước như hình 2.1 và áp dụng cho tất cả các công thức nghiên cứu

Nguvên liêu Các giai đoan Kiểm soát, kiểm nghiêm

Hình 2.1- Sơ đồ các giai đoạn pha chế thuốc tiêm gentamicin sulfat 40mg/ml.

2.1.4.2 Phương pháp phân tích gentamicin Sulfat trong chê phẩm thuốc tiêm

Để phân tích các mẫu thuốc tiêm gentamicin Sulfat, chúng tôi sử dụng các phương pháp

a, Phương pháp sắc kí lớp mỏng [1,14]

Để khảo sát điều kiện tách các vết của gentamicin trong phương pháp này, chúng tôi tiến hành thay đổi tỷ lệ dung môi trong pha động và thay đổi loại thuốc thử hiện màu

* Điều kiện tiến hành:

-Pha tĩnh: bản mỏng silicagel tráng sẩn

-Pha động: amonihydroxyd 13,5M - cloroform - methanol, lắc đều rồi để tách lớp, sau đó lấy lớp dưới

-Lượng chấm: 20|il dung dịch thử và dung dịch chuẩn

-Thuốc thử phun hiện màu: dung dịch ninhydrin, iod

-Quan sát sắc đồ dưới ánh sáng thường

b, Phương pháp quang phổ UV-VIS [33]

+ Pha loãng dung dịch gentamicin 40mg/ml với đệm phosphat pH 7,4 thành dung dịch nồng độ 100|Jg/ml Lấy 5ml dung dịch gentamicin Sulfat 100ụg/ml và lml dung dịch ninhydrin 1,25% (w/v) cho vào ống nghiệm có nắp, đun cách thuỷ ở 95° c trong 15 phút, làm lạnh ngay

+Đo độ hấp thụ của dung dịch ỏ bước sóng 400nm với cuvet lcm

Song song tiến hành mẫu chuẩn Tính hàm lượng gentamicin bằng cách so sánh với mẫu chuẩn

c, Phương pháp sắc kí lỏng hiệu năng cao

> Theo Dược điển Anh 2001 [14] và Dược điển Việt Nam III[1]

• Dung dịch mẫu chuẩn và mẫu thử được tiến hành pha loãng với methanol,

có thuốc thử phthalaldehyđ

*Thuốc thử phthalaldehyd gồm: 2g phthalaldehyd, lOml methanol, 4ml acid thioglycolic và 190ml dung dịch acid boric nồng độ khoảng 2,5% w/v (đã được điều chỉnh pH đến 10,4 bằng dung dịch KOH 45% (w/v)), hoà tan rồi điều chỉnh pH đến 10,4 bằng dung dịch KOH 45% Thuốc thử này nếu chưa dùng ngay thì bảo quản trong điều kiện tránh ánh sáng và sử dụng trong vòng 3 ngày.

*Dung dịch mẫu thử: pha loãng lml chế phẩm với nước thành 25ml (dung dịch A) Lấy lOml dung dịch A, thêm 5ml methanol và 4ml thuốc thử phthalaldehyd, trộn đều, rồi thêm methanol đến vừa đủ 25 ml, đun cách thuỷ ở 60°c trong 15 phút, sau đó làm lạnh nhanh

*Dung dịch mẫu chuẩn: tiến hành pha như dung dịch mẫu thử nhưng sử dụng gentamicin chuẩn thay cho chế phẩm

- Detector uv, bước sóng 330 nm

Tính hàm lượng gentamicin bằng cách so sánh diện tích peak của mẫu thử với mẫu chuẩn

> Phương pháp sắc kí lỏng chạy theo gradient nồng độ / 12]

-Tiến hành pha dung dịch mẫu chuẩn và dung dịch mẫu thử với điều kiện sắc

kí như trên

-Chạy sắc kí theo gradient nồng độ như sau:

Bảng 2.2- Điều kiện pha động chạy theo gradient nồng độ phương pháp HPLCPha động

Thờigian(phútỹ\

Methanol(%)

Nước+acid acetic (5V:1V) + 0,005M natri heptansulfonat

(%)

Tốc độ dòng (ml/phút)