phân lập vi khuẩn nội sinh thân cây bắp trồng trên đất xám ở tỉnh đồng nai, bình phước và thành phố hồ chí minh

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH VI SINH VẬT HỌC PHÂN LẬP VI KHUẨN NỘI SINH THÂN CÂY BẮP TRỒNG TRÊN ĐẤT XÁM Ở TỈNH ĐỒNG NAI, BÌNH PHƯỚC VÀ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH CÁN BỘ HƯỚNG DẪN Gs. Ts. CAO NGỌC ĐIỆP Cần Thơ, Tháng 11/2013 SINH VIÊN THỰC HIỆN LÝ KIỂN MSSV: 3103959 LỚP: VI SINH VẬT K36 PHẦN KÝ DUYỆT CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN (ký tên) (ký tên) GS. Ts Cao Ngọc Điệp Lý Kiển DUYỆT CỦA HỘI ĐỒNG BẢO VỆ LUẬN VĂN ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………… Cần Thơ, ngày tháng năm 2013 CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG (ký tên) LỜI CẢM TẠ Trong suốt trình học tập trường hoàn thành luận văn nhận giúp đỡ từ thầy cô, bạn bè gia đình nhiều. Để có kết hôm nay, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến: Đầu tiên, xin chân thành cảm ơn Gs.Ts Cao Ngọc Điệp cố vấn học tập – cô Nguyễn Thị Pha tận tình hướng dẫn, góp ý giúp đỡ suốt thời gian thực đề tài. Tôi xin chân thành cảm ơn đến! - Ban Lãnh Đạo Viện nghiên cứu phát triển công nghệ sinh học quý thầy cô hướng dẫn dạy suốt trình học tập. - Chị Nguyễn Thị Xuân Mỵ, Chị Trần Thị Giang cán phòng thí nghiệm Vi sinh vật đất, Vi sinh vật môi trường nhiệt tình giúp đỡ hỗ trợ cho thực tốt đề tài. Cuối xin bày tỏ biết ơn sâu sắc đến Cha, Mẹ người thân luôn ủng hộ động viên tôi, tạo điều kiện tốt để học tập nguồn động lực lớn lao giúp vượt qua khó khăn sống. Một lần nữa, xin gởi lời cảm ơn chân thành đến tất người! Cân thơ. Ngày 25 tháng 11 năm 2013 Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường Đại học Cần Thơ TÓM LƯỢC Sáu mươi bốn dòng vi khuẩn phân lập môi trường NFb môi trường LGI từ thân bắp trồng đất Huyện Trảng Bom-Tỉnh Đồng Nai, Huyện Thống Nhất-Tỉnh Đồng Nai, Huyện Long Thành-Tỉnh Đồng Nai, Huyện Chơn Thành-Tỉnh Bình Phước Huyện Củ Chi-Thành Phố Hồ Chí Minh.Các dòng vi khuẩn có khả phát triển môi trường Burk’s không đạm môi trường NBRIP sau 72 nuôi môi trường đặc, ủ 300C. Kiểm tra khả tổng hợp đạm môi trường Burk’s lỏng khả hòa tan lân khó tan môi trường NBRIP lỏng, Kiểm tra khả tổng hợp indole-3-acetic acid (IAA). kết có 64/64 dòng vi khuẩn có khả tổng hợp đạm chiếm tỉ lệ 100% 64/64 dòng vi khuẩn có khả hòa tan lân khó tan chiếm tỉ lệ 100%. kế có 64/64 dòng vi khuẩn có khả tổng indole-3-acetic acid (IAA) chiếm tỉ lệ 100%. Trong 64 dòng vi khuẩn phân lập chọn dòng có khả cố định đam, hòa tan lân, tổng hợp indole-3-acetic acid (IAA ) tốt: ĐTN1b (lượng đạm cố định ngày 3,50 mgNH4+ /l, lượng lân hòa tan ngày 10 83,96 mgP2O5/l lượng indole-3-acetic acid (IAA)là 16,83 mg/l) , ĐTN11(lượng đạm cố định ngày 3,14 mgNH4+ /l, lượng lân hòa tan ngày 10 87,82 mgP2O5/l lượng indole-3-acetic acid (IAA)là 10,83 mg/l), HTN1c (lượng đạm cố định ngày 2,73 mgNH4+ /l, lượng lân hòa tan ngày 10 75,56 mgP2O5/l lượng indole-3-acetic acid (IAA)là 13,50 mg/l) Từ khóa: Cây bắp, cố định đạm, hòa tan lân, tổng hợp indole-3-acetic acid (IAA), vi khuẩn nội sinh. Chuyên ngành vi sinh vật học i Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường Đại học Cần Thơ MỤC LỤC Trang PHẦN KÝ DUYỆT .i LỜI CẢM TẠ i TÓM LƯỢC i MỤC LỤC . ii DANH SÁCH BẢNG…………………………………………………………………iv DANH SÁCH HÌNH .vi CÁC TỪ VIẾT TẮT . vii CHƯƠNG 1. GIỚI THIỆU . 1.1 Đặt vấn đề .1 1.2 Mục tiêu nghiên cứu đề tài .3 CHƯƠNG 2. LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 2.1 Sơ lược bắp 2.2 Vi khuẩn nội sinh 2.2.1 Vùng rễ vi khuẩn vùng rễ 2.2.2 Vi khuẩn Azospirillum .7 2.2.3 Vi khuẩn Azotobacter 2.2.4 Vi khuẩn Burkholderia 2.2.5 Vi khuẩn Enterobacter 2.2.6 Vi khuẩn Gluconacetobacter 2.2.7 Vi khuẩn Herbaspirillum .9 2.2.8 Vi khuẩn Klebsiella 2.3 Tình hình nghiên cứu vi khuẩn nội sinh giới Việt Nam 10 2.4 Một số đặc tính vi khuẩn nội sinh 11 2.4.1 Khả cố định đạm .11 2.4.2 Khả hòa tan lân khó tan 12 CHƯƠNG 3. PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 3.1 Địa điểm thời gian thực 14 Chuyên ngành vi sinh vật học ii Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường Đại học Cần Thơ 3.1.1 Địa điểm tiến hành thí nghiệm .14 3.1.2.Thời gian thực 14 3.2 Phương tiện nghiên cứu 14 3.2.1 Dụng cụ, thiết bị . 14 3.2.2 Vật liệu thí nghiệm 15 3.2.3 Hóa chất môi trường .15 3.3 Phương pháp nghiên cứu .19 3.3.1 Phương pháp thu thập, xử lý mẫu phân lập dòng vi khuẩn nội sinh .…………………………………………………………………….19 3.3.2 Quan sát hình thái đo kích thước khuẩn lạc 20 3.3.3 Quan sát hình dạng khả chuyển động vi khuẩn .20 3.3.4 Xác định đặc tính dòng vi khuẩn nội sinh 21 CHƯƠNG 4. KẾT QUẢ THẢO LUẬN 25 4.1 Phân lập đặc điểm dòng vi khuẩn nội sinh phân lập 25 4.1.1 Phân lập vi khuẩn .25 4.1.2 Đặc điểm dòng vi khuẩn phân lập 28 4.2 Khả phát triển dòng vi khuẩn từ môi trường NFb môi trường LGI sang môi trường Burk’s không đạm khả cố định đạm dòng vi khuẩn . 33 4.2.1 Khả phát triển dòng vi khuẩn phân lập . 33 4.2.2 Khả cố định đạm dòng vi khuẩn phân lập .35 4.3 Khả phát triển dòng vi khuẩn từ môi trường NFb môi trường LGI sang môi trường NBRIP khả hòa tan lân dòng vi khuẩn .39 4.4 khả tổng hợp indole-3-acetic acid (IAA) dòng vi khuẩn từ môi trường NFB LGI (không có bổ sung tryptophan). .44 CHƯƠNG 5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 49 5.1 Kết luận .49 5.2 Đề nghị 49 Chuyên ngành vi sinh vật học iii Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường Đại học Cần Thơ TÀI LIỆU THAM KHẢO 50 PHỤ LỤC Bảng 1: Khả cố định đạm (mgNH4+/l) 64 dòng vi khuẩn phân lập sau ngày nuôi môi trường Burk không đạm. Bảng 2: Khả cố định đạm (mgNH4+/l) 64 dòng vi khuẩn phân lập sau ngày nuôi môi trường Burk không đạm. Bảng 3: Khả cố định đạm (mgNH4+/l) 64 dòng vi khuẩn phân lập sau ngày nuôi môi trường Burk không đạm. Bảng 4: Khả cố định đạm (mgNH4+/l) 64 dòng vi khuẩn phân lập sau ngày nuôi môi trường Burk không đạm. Bảng 5: Khả hoa tan lân (mgP2O5/l) 64 dòng vi khuẩn phân lập sau ngày nuôi môi trường NBRIP Bảng 6: Khả hoa tan lân (mgP2O5/l) 64 dòng vi khuẩn phân lập sau 10 ngày nuôi môi trường NBRIP Bảng 7: Khả hoa tan lân (mgP2O5/l) 64 dòng vi khuẩn phân lập sau 15 ngày nuôi môi trường NBRIP Bảng 8: Khả hòa tan lân (mgP2O5/l) 64 dòng vi khuẩn phân lập sau 20 ngày nuôi môi trường NBRIP Bảng 9: Khả tổng hợp indole-3-acetic acid (IAA) 64 dòng vi khuẩn phân lập sau ngày nuôi môi trường NFb, LGI lỏng. Bảng 10:Khả tổng hợp indole-3-acetic acid (IAA) 64 dòng vi khuẩn phân lập sau ngày nuôi môi trường NFb, LGI lỏng. Bảng 11: Khả tổng hợp indole-3-acetic acid (IAA) 64 dòng vi khuẩn phân lập sau ngày nuôi môi trường NFb, LGI lỏng. Bảng 12: Khả hoa tổng hợp indole-3-acetic acid (IAA)của 64 dòng vi khuẩn phân lập sau ngày nuôi môi trường NFb, LGI lỏng. Chuyên ngành vi sinh vật học iv Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường Đại học Cần Thơ DANH SÁCH BẢNG Trang Bảng 1: Diện tích suất bắp qua năm Bảng 2: Hàm lượng dinh dưỡng loại hạt .5 Bảng 3: Công thức môi trường LGI (Cavalcante Döbereiner, 1988) . 16 Bảng 5: Công thức môi trường Burk’s N-free (Park et al., 2005) . 18 Bảng 6: Công thức môi trường NBRIP (Nautiyal., 1999) 18 Bảng 7: Nguồn gốc dòng vi khuẩn phân lập . 24 Bảng 9: Tỷ lệ (%) đặc điểm khuẩn lạc dòng vi khuẩn phân lập . 29 Bảng 10: Khả phát triển dòng vi khuẩn môi trường Burk's không đạm………… .………………………………………………………… …32 Bảng 11: Khả tổng hợp NH4+ (mg/l) dòng vi khuẩn sau 2, 4, ngày nuôi môi trường Burk's không đam………….…………………35 Bảng 12: Khả phát triển dòng vi khuẩn môi trường NBRIP đặc . 38 Bảng 13: Khả hòa tan P2O5 (mg/l) dòng vi khuẩn sau ngày 10 ngày nuôi môi trường NBRIP lỏng .41 Bảng 14: Khả tổng hợp indole-3-acetic acid (IAA) dòng vi khuẩn sau ngày, ngày, ngày ngày nuôi môi trường NFb LGI lỏng 43 Bảng 15: Lượng đạm cố định (mg NH4+/l), lượng lân hòa tan (mg P2O5/l) tổng hợp indole-3-acetic acid (IAA) cao dòng vi khuẩn 47 Chuyên ngành vi sinh vật học v Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường Đại học Cần Thơ DANH SÁCH HÌNH Trang Hình 1: Sơ đồ xử lý mẫu thân bắp 19 Hình 2: Vi khuẩn sau 24 nuôi môi trường bán đặc. 27 Hình 3: Đặc điểm số khuẩn lạc. 31 Hình 4: Đường chuẩn đạm 35 Chuyên ngành vi sinh vật học vi Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường Đại học Cần Thơ CÁC TỪ VIẾT TẮT VK: Vi khuẩn DC: Đối chứng CV: Coefficient of variation IAA: Indole-3-acetic acid NBRIP: National Botanical Research Institute’s Phosphate. SS: Sum of Square MS: Mean Square Chuyên ngành vi sinh vật học vii Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường Đại học Cần Thơ ĐTL3b 0,46g 4,74a 0,58tuvwxyz 0,35rst ĐTL3c 0,46g 2,97ef 0,61rstuv 0,40 pqrst ĐTL3d 0,47fg 2,99ef 0,58tuvwxyz 0,38qrst ĐTL3e 0,50efg 2,79fghi 0,71q 0,40pqrst ĐTL4a 0,91a 2,52hijklmn 1,19gh 0,43nopqrs ĐTL4b 0,49efg 2,49ijklmno 0,64r 0,42opqrst ĐTL5 0,50efg 2,54hijklm 0,60rstuvwx 1,50 a ĐTL6 0,51efg 2,62ghijkl 0,58stuvwxyz 0,32t ĐTL7 1,13a 1,27tuvwxy 1,15hi 0,60ghijk ĐTL8 0,50efg 2,84efgh 0,55yza’b’ 0,33st ĐTL9a 0,54efg 0,95yza’b’ 1,90e 0,48lmnopq ĐTL9b 0,52efg 1,98pq 0,59stuvwxy 0,32 t ĐTL10 0,46g 2,51hijklmn 0,62rstu 0,35rst ĐTL11 0,47fg 3,55c 0,56xyza’b’ 0,35rst PTL1a 0,51efg 1,52rstu 0,54za’b’ 0,63ghi PTL1b 0,93bc 2,00pq 0,57uvwxyz 1,20 b PTL2a 0,46g 2,20nop 0,62rst 0,35rst PTL2b 0,51efg 0,90za’b’ 0,91mn 0,50 klmnop PTL3a 0,58 ef 2,48ijklmno 0,60rstuvwx 0,37rst HTL1a 0,92 a 1,02 xyzaaab 1,15 hi 0,53ijklmn HTL1b 0,46g 1,22uvwxyz 0,56wxyza’b’ 0,60ghijk HTL2a 0,47fg 2,24mnop 0,56xyza’b’ 0,33st HTL2b 0,47fg 2,89efg 0,57vwxyzaa 0,38qrst DC 0,45g 0,72b’ 0,52b’ 0,32t CV% 12.99 7.32 2.41 8.85 LSD(0,01) 0.15 0.33 0.05 0.11  DC : đối chứng Chú thích: số theo sau chữ khác biệt thông kê mức ý nghĩa 1% tính theo ngày, tên dòng vi khuẩn có chữ Đ đầu tỉnh Đồng Nai, chữ H đầu Thành Phố Hồ Chí Minh, chữ P đầu tỉnh Bình Phước. Sau tính hàm hượng NH4+ trung bình qua đợt đo 64 dòng vi khuẩn, kết có 64/64 dòng vi khuẩn phân lập có khả cố định đạm chiếm 100% (so với kết mẫu đối chứng không chủng vi khuẩn mức ý nghĩa 1%). Chuyên ngành vi sinh vật học 38 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường Đại học Cần Thơ Theo bảng 11 khả tổng hợp đạm vi khuẩn có biến động theo thời gian, hầu hết dòng vi khuẩn phân lập tổng hợp đạm đạt mức cao ngày nuôi thứ giảm dần ngày nuôi tiếp theo. Vì vi khuẩn tổng hợp đạm lượng đạm mà vi khuẩn tổng hợp môi trường nhiều lượng đạm ức chế lại vi khuẩn phát triển, thời gian ngưng tổng hợp đạm vi khuẩn sử dụng lượng đạm tổng hợp đến lượng đạm môi trường không ức chế lại vi khuẩn vi khuẩn tiếp tục tổng hợp đạm. Đối với vi khuẩn nội sinh thực vật có khả cố định đạm vi khuẩn sử dụng lượng nhỏ phần đạm tổng hợp phần lại thực vật sử dụng. Đa số dòng vi khuẩn phân lập có khả cố định đạm hiệu không cao (dưới mg/l). Một vài dòng vi khuẩn lại có khả cố định đạm tốt, hàm lượng NH4+ tổng hợp cao (trên mg/l) sau chủng vi khuẩn cụ thể dòng ĐTN1b( 3,50mg/l) ), ĐTL1e (2,00mg/l) phân lập huyện Trảng Bom tỉnh Đồng Nai, ĐTL4a (2,52mg/l), ĐTN6 ( 3,98mg/l), ĐTN11 (3,14mg/l) phân lập huyện Long Thành tỉnh Đồng Nai, HTN1b (3,92mg/l), HTN2b (2,54mg/l), HTN2a (2,60mg/l) phân lập huyện Củ Chi TP. Hồ Chi Minh, có khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1%. 4.3 Khả phát triển dòng vi khuẩn từ môi trường NFb môi trường LGI sang môi trường NBRIP khả hòa tan lân dòng vi khuẩn Để tiến hành đo khả hòa tan lân khó tan dòng vi khuẩn phân lập cần cấy chuyển dòng vi khuẩn môi NBRIP đặc ủ 30 0C để đánh giá sơ khả phát triển khả hòa tan lân khó tan. Bảng 12. Khả phát triển dòng vi khuẩn môi trường NBRIP đặc. STT Khả phát triển Dòng vi khuẩn 24 48 72 ĐTN1a + ++ ++ ĐTN1b ++ +++ +++ ĐTN1c ++ ++ +++ ĐTN1d + ++ +++ ĐTN2a ++ ++ +++ Chuyên ngành vi sinh vật học 39 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường Đại học Cần Thơ ĐTN2b + ++ ++ ĐTN2c ++ +++ +++ ĐTN3a ++ +++ +++ ĐTN3b ++ ++ +++ 10 ĐTN3c + ++ ++ 11 ĐTN4a ++ ++ +++ 12 ĐTN4b ++ +++ +++ 13 ĐTN5 ++ +++ +++ 14 ĐTN6 ++ ++ +++ 15 ĐTN7 ++ +++ +++ 16 ĐTN8 ++ +++ +++ 17 ĐTN9 + ++ +++ 18 ĐTN10 + + ++ 19 ĐTN11 ++ ++ +++ 20 PTN1 ++ ++ +++ 21 PTN2a + ++ +++ 22 PTN2b + ++ +++ 23 PTN3 ++ ++ +++ 24 PTN4 + + ++ 25 HTN1a + ++ +++ 26 HTN1b ++ +++ +++ 27 HTN1c + ++ ++ 28 HTN2a ++ ++ +++ 29 HTN2b + ++ ++ 30 ĐTL1a ++ ++ +++ 31 ĐTL1b ++ ++ +++ 32 ĐTL1c ++ +++ +++ 33 ĐTL1d ++ ++ +++ 34 ĐTL1e ++ ++ +++ 35 ĐTL1f ++ ++ +++ 36 ĐTL1g ++ +++ +++ Chuyên ngành vi sinh vật học 40 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường Đại học Cần Thơ 37 ĐTL2a ++ ++ +++ 38 ĐTL2b + ++ +++ 39 ĐTL2c + ++ ++ 40 ĐTL2d ++ ++ +++ 41 ĐTL3a ++ +++ +++ 42 ĐTL3b ++ ++ +++ 43 ĐTL3c ++ ++ +++ 44 ĐTL3d ++ ++ +++ 45 ĐTL3e + ++ +++ 46 ĐTL4a ++ +++ +++ 47 ĐTL4b ++ ++ +++ 48 ĐTL5 + ++ +++ 49 ĐTL6 ++ ++ +++ 50 ĐTL7 + ++ +++ 51 ĐTL8 + ++ ++ 52 ĐTL9a ++ +++ +++ 53 ĐTL9b ++ ++ +++ 54 ĐTL10 ++ ++ +++ 55 ĐTL11 + ++ +++ 56 PTL1a ++ ++ +++ 57 PTL1b ++ ++ +++ 58 PTL2a ++ +++ +++ 59 PTL2b + ++ +++ 60 PTL3a + ++ +++ 61 HTL1a ++ +++ +++ 62 HTL1b ++ ++ +++ 63 HTL2a + ++ ++ 64 HTL2b ++ ++ +++ Chú thích :(+) khuẩn lạc phát triển yếu, (++) khuẩn lạc phát triện mạnh, (+++) khuẩn lạc phát triển mạnh. Chuyên ngành vi sinh vật học 41 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường Đại học Cần Thơ Qua kết kiểm tra khả phát triển khuẩn lạc vi khuẩn phân lập tất 64 dòng vi khuẩn có khả phát triển môi trường NBRIP đặc. Tiếp tục cấy vi khuẩn vào môi trường NBRIP lỏng để định lượng lượng P 2O5 dòng vi khuẩn hòa tan phương pháp Oniani. Khả hòa tan lân dòng vi khuẩn phân lập thể qua mức hấp thụ quang phổ mẫu đo. Những mẫu có màu xanh mức hấp thụ quang phổ lớn khả hòa tan lân cao. Sau lần lặp tính giá trị trung bình mẫu đo sau ngày 10 ngày, 15 ngày 20 ngày nuôi vi khuẩn môi trường NBRIP lỏng kết thu sau: Bảng 13: Khả hòa tan P2O5 (mg/l) dòng vi khuẩn sau ngày 10 ngày nuôi môi trường NBRIP lỏng. đơn vị tính: mg/l Nghiệm thức ĐTN1a Ngày 34,02 o Ngày 10 87,90a Ngày 15 44,417pqrst Ngày 20 38.804xy ĐTN1b 45,67f’g’ 83,96f 57,06 stuvwx 49.157mn ĐTN1c 13,81xyz 31,58f’ 36,125vwxyza’ 49.412qr ĐTN1d 17,31v 36,86ab 21,22agahai 21.706d’e’f’g’ ĐTN2a 17,24v 78,49e 18,896h’i’ 26.745b’ ĐTN2b 17,81v 49,01t 21,208g’h’i’ 20.000g’h’i’ ĐTN2c 9,81za’b’ 77,39b’c’ 39,792opqrst 55.824i ĐTN3a 13,81xyz 47,79uv 48,729klmnopqr 43.118tu ĐTN3b 13,33za’b’ 43,03x 25,271c’d’e’f’g’h’ 29.549a’ ĐTN3c 5,81j’ 41,13z 25,042d’e’f’g’h’ 22.980c’d’e’f’ ĐTN4a 39,09k 58,97d’ 48,979xyza’b’ 44.824z ĐTN4b 39,41gh 59,90b 37,065a 45.706op ĐTN5 11,44 fg 31,47v 36,417ijklmnopq 38.863r ĐTN6 54,31p 38,49a 81,188mnopqrs 45.412uv ĐTN7 11,70o 41,99s 44,354b’ 56.549a ĐTN8 41,19h 33,42c 33,104hi 35.353qr ĐTN9 46,13f 84,82j 108,854rstuvw 52.549wxy ĐTN10 46,89v 47,22w 49,938ijklmnopq 49.020op ĐTN11 29,59c 87,82a’ 46,50ef 42.529s PTN1 19,00u 35,78c’ 51,313hijklmnop 49.549qr PTN2a 26,72l 47,21m 54,000 klmnopqr 62.902st PTN2b 44,72l 53,97l 46,375uvwxyza’ 39.765s PTN3 43,59d’ 54,74f’ 46,708vwxyza’ 51.882xy PTN4 33,96c’d’ 49,92y 102,625pqrstu 91.902lm HTN1a 13,17hi 36,44g 44,854hijklmn 64.45 l Chuyên ngành vi sinh vật học 42 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường Đại học Cần Thơ HTN1b 47,54n 66,43p 42,375ijklmnop 39.88vw HTN1c 45,37j 75,56n 52,646lmnopqrs 58.353p HTN2a 17,19q 44,04v 49,917hijkl 52.863ij HTN2b 36,15i 53,01o 50,021nopqrs 41.020wxy ĐTL1a 11,44d’ 21,67n’ 24,229f’g’h’ 21.431e’f’g’h’ ĐTL1b 24,70r 32,61ae 35,083wxyzaa 23.059c’d’ef’ ĐTL1c 27,33q 33,72d’ 39,854stuvwx 39.569 w x y ĐTL1d 19,35u 61,43k 22,708g’h’ 21.098f’g’h’ ĐTL1e 11,67s 28,18f’ 51,958tuvwxyz 66.471wxy ĐTL1f 12,81b’c’ 22,38m’n’ 21,313g’h’i’ 38.157y ĐTL1g 13,56yza’ 31,43f’ 42,688qrstuv 39.039wxy ĐTL2a 13,83xyz 24,69ak’l 49,521jklmnopqr 27.451b’ ĐTL2b 24,57r 29,11g’h’ 32,375yza’b’c’ 29.627a’ ĐTL2c 11,15d’ 18,90o’ 18,938h’i’ 23.039c’d’e’f’ ĐTL2d 8,33 b 23,10d 14,208de 23.157vwx ĐTL3a 29,85p 76,07g 36,604vwxyza’ 30.000a’ ĐTL3b 56,39e 79,94u 85,458g 40.706e ĐTL3c 49,20a 48,10h 67,146cd 75.431d ĐTL3d 58,39d 73,94m 89,479bc 77.608c ĐTL3e 50,56v 58,13s 96,292f 80.137b ĐTL4a 37,85c’d’ 25,33i’ 58,438hijklmno 45.118h ĐTL4b 14,33c’d’ 24,51v 20,563hij 23.784qr ĐTL5 9,22v 40,61g’ 22,479a’b’c’d’e’f’ 72.882c’d’e’f’ ĐTL6 13,15i’ 47,99g’ 53,792tuvwxyza’ 52.510pq ĐTL7 14,59wxy 18,17l’ 58,438g’h’i’ 48.235c’ ĐTL8 10,91w 27,17b 47,646stuvwxy 70.059e’f’g’ ĐTL9a 11,70 ab 4,19ak 56,479za’b’c’d’ 49.392r ĐTL9b 17,33 a’b’ 29,75h’i’ 31,479a’b’c’d’e’ 22.020no ĐTL10 14,81m 84,83k’ 39,583h 21.686s ĐTL11 12,70u 25,42j’ 32,125hijk 48.373acad PTL1a 10,28aeaf 67,75i 48,229klmnopqr 58.353 l PTL1b 20,41t 67,46i 24,604e’f’g’h’ 19.627h’i’ PTL2a 22,78za’b’ 31,67u 38,958hijklm 39.941op PTL2b 12,94 wx 28,72p’ 31,563h 54.275r PTL3a 7,17adae 29,44j’ 37,604klmnopqr 51.137g HTL1a 18,94h’ 26,64m’ 54,604i’j’ 23.686 c’d’e’ HTL1b 17,31wxy 50,32r 75,229b’c’d’e’f’g’ 87.392jk HTL2a 14,02b’ 51,13q 26,875e’f’g’h’ 62.176k HTL2b 12,67g’ 52,17z 24,250g’h’ 60.843f DC 4,72 k’ 12,78q’ 9,563j’ 18.43i’ CV% 1,61 0,72 7,73 2,08 LSD(0,01) 0,81 0,71 7,22 1,96 Chuyên ngành vi sinh vật học 43 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường Đại học Cần Thơ  DC : đối chứng Chú thích: số theo sau chữ khác biệt thông kê mức ý nghĩa 1% tính theo ngày, tên dòng vi khuẩn có chữ Đ đầu tỉnh Đồng Nai, chữ H đầu Thành Phố Hồ Chí Minh, chữ P đầu tỉnh Bình Phước Kết có 64/64 dòng vi khuẩn phân lập có khả hòa tan lân chiếm 100% (so với kết mẫu đối chứng không chủng vi khuẩn mức ý nghĩa 1%). Có số dòng vi khuẩn hòa tan lân cao ngày 10. Cụ thể dòng ĐTN1a (87,9mg/l) ĐTN1b (83,96mg/l), phân lập huyện Trạng Bom tỉnh Đồng Nai, dòng ĐTN11 (87,82mg/l) ĐTL10 (84,83mg/l) phân lập huyện Long Thành tỉnh Đồng Nai, HTN1c (75,56mg/l) phân lập huyện Củ Chi TP Hồ Chi Minh, khao sát ngày 15 đa số dòng vi khuẩn có khả hòa tan lân hiệu cao. Cụ thể dòng ĐTN9 (108,854mg/l) phân lập huyện Long Thành tỉnh Đồng Nai, ĐTL3e (96,625 mg/l), ĐTL3b (85,458mg/l) ĐTL3d (89,47mg/l) phân lập huyện Thống Nhất tỉnh Đồng Nai, có khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1%. Và tiếp tục đo ngày thứ 20 khả hòa tan lân số dòng vi khuẩn phân lập giảm xuống không đáng kể. 4.4 khả tổng hợp indole-3-acetic acid (IAA) dòng vi khuẩn từ môi trường NFB LGI (không có bổ sung tryptophan). Tính giá trị trung bình sau lần lặp mẫu đo sau ngày, ngày, ngày ngày nuôi vi khuẩn môi trường NFB LGI kết thu sau: Bảng 14: Khả tổng hợp indole-3-acetic acid (IAA) dòng vi khuẩn sau ngày, ngày, ngày ngày nuôi môi trường NFB LGI lỏng . Đơn vị tính: mg/l Nghiệm Ngày Ngày Ngày Ngày ĐTN1a 11,17ijklmn 14,67pqrstuvwx 16,17xyz 9,50ijkl ĐTN1b 8,17abcdefghij 16,83mnopqrstuvw 13,17pqrst 8,73mnopqr ĐTN1c 6,83abcdef 12,67pqrstuvwx 14,17stuvw 8,67defgh ĐTN1d 6,17efghijklmn 14,17rstuvwx 9,50stuvw 10,13efgh ĐTN2a 7,50bcdefghijkl 12,48jklmnopqrstuv 11,50nopq 11,10mnopqr thức Chuyên ngành vi sinh vật học 44 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường Đại học Cần Thơ ĐTN2b 6,83abc 12,33opqrstuvw 15,17 hijk 9,63jklmn ĐTN2c 9,17abcdefghij 16,67 jklmnopqrstuv 14,67rstuv 8,33lmn ĐTN3a 6,17hijklmn 14,83rstuvwx 11,17mno 12,10nopqr ĐTN3b 7,33jklmn 11,83nopqrstuvw 13,17uvw 9,60bcd ĐTN3c 10,33ijklmn 14,00fghijklmnop 11,50qrstu 11,17ab ĐTN4a 6,50ijklmn 15,83mnopqrstuvw 9,00 xyz 11,43am ĐTN4b 7,17lmn 13,17wx 11,17z 12,70vwxyzaa ĐTN5 9,00n 15,67vwx 12,67vwxy 9,00a’b’c’d’ ĐTN6 8,83ijklmn 17,00ghijklmnopqrst 11,67stuvw 9,33rstu ĐTN7 9,17g hijklmn 15,67qrstuvwx 17,33z 8,37lmno ĐTN8 10,83ijklmn 16,00 pqrstuvwx 16,50uvw 7,50tuvwxy ĐTN9 10,67bcdefghijk 12,33vwx 10,33opqrs 11,77stuvw ĐTN10 8,00fghijklmn 12,67uvwx 12,17nopq 9,40 jklmn ĐTN11 11,83hijklmn 10,83stuvwx 11,17jklm 7,70 jklm PTN1 8,33ghijklmn 11,33cdefghijklm 12,83nopq 7,57cde PTN2a 9,00a 18,00 vwx 10,27uvw 8,67stuv PTN2b 6,67ab 15,67abcdef 9,33wxy 13,67nopqr PTN3 6,17fghijklmn 9,83rstuvwx 8,50uvw 7,10bc PTN4 10,33ijklmn 27,00mnopqrstuvw 9,43yz 10,30def HTN1a 11,33abcdefghi 25,67mnopqrstuvw 11,30 efghi 6,60opqrs HTN1b 6,17abcd 14,17mnopqrstuvw 11,17 ghij 7,33stuvwx HTN1c 7,00abcde 13,50stuvwx 8,33vwxy 9,27cde HTN2a 6,33abcdef 18,50abcde 11,50 xyz 8,10hijk HTN2b 6,17cdefghijklm 11,50 r stuvwx 10,33qrstu 6,17klmn ĐTL1a 6,67defghijklm 21,50ghijklmnopqrs 11,50xyz 7,50tuvwxy ĐTL1b 7,17fghijklmn 12,17ab 11,17cd 9,50stuvwx ĐTL1c 7,50klmn 20,83bcdefghijk 10,50ghij 5,67yzaaabacad ĐTL1d 7,17ghijklmn 13,50 acdefg 13,00ef 7,33opqrs ĐTL1e 6,67klmn 20,33 a 12,00fghi 13,03b’c’d’e’ ĐTL1f 7,83abcdefg 22,83bcdefghij 23,50nopq 8,27mnop ĐTL1g 7,33abcdefgh 17,00bcdefghi 16,00uvw 4,43ghij ĐTL2a 7,00efghijklmn 21,83bcdefghi 13,17mnop 12,03de ĐTL2b 7,83abcd 18,67pqrstuvwx 9,33efg 7,33defg ĐTL2c 7,00bcdefghijkl 19,8hijklmnopqrst 17,17mn 6,00 klmn ĐTL2d 6,83defghijklm 22,50ghijklmnopqr 15,17d 9,17cde Chuyên ngành vi sinh vật học 45 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường Đại học Cần Thơ ĐTL3a 7,50abcdefg 16,17pqrstuvwx 13,00ef 6,00pqrst ĐTL3b 6,17fghijklmn 30,83tuvwx 17,00uvw 6,10jklmn ĐTL3c 6,17efghijklmn 24,67efghijklmno 22,33vwx 9,10d’e’f’ ĐTL3d 7,33fghijklmn 28,17qrstuvwx 15,17opqr 7,00tuvwxy ĐTL3e 6,17efghijklmn 18,50lmnopqrstuvw 25,50opqr 5,10c’d’e’f’ ĐTL4a 9,00klmn 25,67ghijklmnopqrst 27,33b 7,33f’g’ ĐTL4b 6,33ijklmn 21,33jklmnopqrstuv 12,17e 5,17za’b’c’d’ ĐTL5 10,17fghijklmn 23,17jklmnopqrstuv 13,17ijkl 9,17g’ ĐTL6 6,17cdefghijklm 27,33 abcdef 8,17fghi 8,20stuv ĐTL7 10,00ijklmn 24,33defghijklm 11,17qrstu 10,40e’f’g’ ĐTL8 6,17fghijklmn 25,33abc 21,67jklm 7,17vwxyza’b’ ĐTL9a 7,50defghijklm 24,00bcdefghijk 14,00c 11,67pqrst ĐTL9b 7,33mn 29,17defg 22,33pqrs 7,50 vwxyza’ ĐTL10 8,17mn 18,33abcd 14,50z 9,40qrst ĐTL11 6,17klmn 23,00 abcdef 16,50d 6,50uvwxyz PTL1a 7,33abcdefghi 25,50 klmnopqrstuv 17,50lm 6,67opqrs PTL1b 8,00abcdefghij 26,17ijklmnopqrstu 17,17tuvw 7,8xyza’b’c’d’ PTL2a 7,83hijklmn 18,83cdefghijkl 21,33jklm 12,00mnop PTL2b 7,00 ijklmn 24,83abcdefgh 18,17cd 8,33mnopq PTL3a 10,17fghijklmn 14,00abcdef 18,17efgh 8,23wxyza’a’b’c’ HTL1a 6,17abcdefghij 18,83abcdef 14,83a 7,67tuvwxy HTL1b 6,17ijklmn 21,17defghijklm 12,7stuvw 7,10stuvwx HTL2a 6,33ijklmn 17,00ghijklmnopqr 18,67klm 6,33stuv HTL2b 11,00ghijklmn 14,17fghijklmnopq 17,67fghi 11,33c’d’e’f’ 6,17ijklmn 8,00x 12,67pqrst 10,67fghi CV% 12,2 10,03 4,58 5,12 LSD(0,01) 1,96 3,88 1,36 0,93 DC ijklmn  DC : đối chứng Chú thích: số theo sau chữ khác biệt thông kê mức ý nghĩa 1% tính theo ngày, tên dòng vi khuẩn có chữ Đ đầu tỉnh Đồng Nai, chữ H đầu Thành Phố Hồ Chí Minh, chữ P đầu tỉnh Bình Phước. Chuyên ngành vi sinh vật học 46 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường Đại học Cần Thơ Kết có 64/64 dòng vi khuẩn phân lập có khả tổng hợp indole-3-acetic acid (IAA) chiếm 100% (so với kết mẫu đối chứng không chủng vi khuẩn mức ý nghĩa 1%). Đa số dòng vi khuẩn phân lập có khả tổng hợp indole-3acetic acid (IAA) cao ngày thứ ngày Cụ thể dòng ĐTL1f (23,50mg/l), phân lập huyện Trảng Bom tỉnh đồng nai, ĐTL3b (30,83 mg/l) phân lập huyện Thống Nhất tỉnh Đồng Nai dòng ĐTL4a (27,33mg/l), ĐTL6 (27,33 mg/l), ĐTL8 (25,33mg/l), ĐTL9b (29,17 mg/l) phân lập huyện Long Thành tỉnh Đồng Nai,. Tuy nhiên, tiến hành đo ngày thứ số dòng không tổng hợp indole-3-acetic acid (IAA) giảm xuống. Từ dòng vi khuẩn có khả hoa tan lân cao 70 mgP2O5/l, ngày 5, ngày 10 ngày 15 có khả cố định đạm cao mg NH4+ /l, tổng hợp indole-3-acetic acid (IAA) cao 10mg/l ngày 2, chình bảng 15. Chuyên ngành vi sinh vật học 47 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường Đại học Cần Thơ Bảng 15: Lượng đạm cố định (mg NH4+/l), lượng lân hòa tan (mg P2O5/l) tổng hợp indole-3-acetic acid (IAA) cao dòng vi khuân. Đơn vị: mg/l Lượng lân hòa tan (mg Lượng đạm cố định (mg Lượng IAA tổng hợp P2O5/l) NH4+/l) mg/l Dòng vi khuẩn Ngày Ngày Ngày Ngày Ngày Ngày Ngày Ngày Ngày 10 15 ĐTN1a 34,02 87,90 44,42 0,50 2,30 0,62 11,17 14,67 16,17 ĐTN1b 45,67 83,96 57,06 0,50 3,50 1,10 8,17 16,83 13,17 HTN2b 36,15 53,01 50,021 0,50 2,54 1,09 6,17 11,50 10,33 HTN2a 17,19 44,04 49,91 0,48 2,60 1,15 6,33 18,50 11,50 ĐTL8 10,91 27,17 47,64 0,50 2,84 0,55 6,17 25,33 21,67 ĐTL1f 12,81 22,38 21,31 0,45 1,68 0,64 7,83 22,83 23,50 ĐTL1e 11,67 28,18 51,95 0,93 2,00 1,26 6,17 18,50 25,50 ĐTN6 54,32 38,49 81,19 0,48 1,16 1,22 8,83 17,00 11,67 ĐTN9 46,13 84,82 108,85 0,54 4,52 0,84 10,67 12,33 10,33 ĐTN11 29,59 87,82 46,5 0,58 3,14 1,00 11,83 10,83 11,17 ĐTL3b 56,39 79,94 85,46 0,46 4,74 0,58 6,17 30,83 17,00 ĐTL3d 58,39 73,9 89,48 0,47 2,99 0,58 7,33 28,17 15,17 ĐTL3e 50,56 58,13 96,29 0,50 2,54 0,71 6,17 18,50 25,50 HTN1c 45,37 75,56 52,64 0,49 2,73 2,21 7,00 13,50 8,33 ĐTL9b 17,33 29,75 31,48 0,52 1,98 0,59 7,33 29,17 22,33 ĐTL4a 37,85 25,33 58,43 0,91 2,52 1,19 9,00 25,67 27,33 ĐTL6 13,15 47,99 53,79 0,51 2,62 0,58 6,17 27,33 8,17 ĐTL10 14,81 84,83 39,58 0,46 2,51 0,62 8,17 18,33 14,50 HTN1b 47,54 66,43 42,37 0,50g 2,58 3,92 6,17 14,17 11,17 Từ bảng 15 cho thấy dòng vi khuẩn ĐTN1b, ĐTN11, HTN1c có khả ứng dụng vào sản xuất phân sinh học, dòng vi khuẩn cho lượng lân hòa tan cao 70 mg P2O5/l ngày 10) lượng NH4+ tổng hợp cao (trên mg NH4+/l ngày 4) tổng hợp indole-3-acetic acid (IAA) cao (trên 15 mg/l ngày 4). Chuyên ngành vi sinh vật học 48 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường Đại học Cần Thơ Còn dòng vi khuẩn ĐTL3b, ĐTL3e, ĐTL3d, ĐTN9 cho lượng lân hòa tan cao (trên 70 mg P2O5/l) ngày 10 tổng hợp indole-3-acetic acid (IAA) cao (trên 15mg/l) ngày 10 lượng NH4+ tổng hợp cao (trên mg NH4+/l) ngày không ổn định đến ngày 1mg NH4+/l nên không chọn để đưa vào ứng dụng sản xuất. Chuyên ngành vi sinh vật học 49 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường Đại học Cần Thơ CHƯƠNG 5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Từ 27 mẫu thân bắp trồng đất tỉnh Đồng Nai, mẫu thân bắp trồng đất tỉnh Bình phước mẫu thân bắp trồng đất tỉnh Thành Phố Hồ Chí Minh phân lập 64 dòng vi khuẩn. Trong 29 dòng vi khuẩn môi trường NFb, 35 dòng vi khuẩn môi trường LGI. Trong 64 dòng vi khuẩn phân lập chọn dòng ĐTN1b, ĐTN11, HTN1c có khả cố định đạm, hòa tan lân ,và tổng hợp indole-3-acetic acid (IAA) tốt 5.2 Đề nghị Giải trình tự để định danh dòng vi khuẩn nội sinh phân lập có khả cố định đạm cao, hòa tan lân khó tan tổng hợp indole-3-acetic acid (IAA) tốt. Tiếp tục phân lập khảo sát đặc tính vi khuẩn nội sinh thân bắp địa phương khác. Ứng dụng vi khuẩn nội sinh có khả cố định đạm cao hòa tan lân khó tan tổng hợp indole-3-acetic acid (IAA) tốt để làm phân bón phục vụ cho sản xuất nông nghiệp. Chuyên ngành vi sinh vật học 50 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường Đại học Cần Thơ TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Cao Ngọc Điệp Nguyễn Văn Được. 2004. Hiệu phân lân sinh học đậu nành bắp lai trồng đất phù sa huyện Tân Hiệp, tỉnh Kiên Giang. Tạp chí khoa học Trường Đại học Cần Thơ 1, 98-104. Cao Ngọc Điệp Bùi Thị Kiều Oanh. 2006. Hiệu vi khuẩn Pseudomonas ssp suất tổng trữ đường mía đường (Saccharum officinarum. L) trồng đất phèn huyện Bến Lức, tỉnh Long An. Tạp chí nghiên cứu khoa học Cần Thơ 6, 69-76, NXB Đại học Cần Thơ. Cao Ngọc Điệp, Phạm Khánh Vân Lăng Ngọc Dậu. 2007. Phát vi khuẩn Azospirillum lipoferum nội sinh lúa mùa đặc sản (Oryza sativa L.) trồng vùng Đồng Bằng Sông Cửu Long. Những vấn đề khoa học sống, tr.456-459. Cao Ngọc Điệp. 2008. Giáo trình vi sinh chuyên sâu, Trường Đại học Cần Thơ. Đặng Thị Huỳnh Mai. 2001. Phân lập vi sinh vật hòa tan lân khó tan. Tạp chí nghiên cứu khoa học Cần Thơ 4, tr.353-357. Nguyễn Hữu Hiệp. 2008. Phân lập dòng vi khuẩn nội sinh để sản xuất phân vi sinh qui mô thí nghiệm cho mía trồng Tỉnh Sóc Trăng. Tạp chí ngiên cứu khoa học Cần Thơ 8, tr.149-157. Nguyễn Thị Thu Hà, Hà Thanh Toàn Cao Ngọc Điệp. 2009. Phân lập khảo sát đặc tính dòng vi khuẩn nội sinh số cỏ chăn nuôi. Tạp chí Công nghệ Sinh học 7(2), tr.241-250. Chuyên ngành vi sinh vật học 51 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường Đại học Cần Thơ TIẾNG ANH Bandara, W. M. M. S., Gamini Seneviratne and S A Kulasooriya. 2006. Interactions among endophytic bacteria and fungi: effects and potentials. J. Biosci 31, pp. 645-650 Barbieri, Zanelli, Enrica Galli and Giuliana Zanetti. 1986. Wheat inoculation with Azospirillum brasilense sp. And some mutants altered in nitrogen fixation and indole-3-acetic acid production. FEMS Microbiology Letters 36, pp. 87-90. Beijerinck, M. W. 1923. Die bakterien der Papilionaceenkollchen. Botan. Ztg 46, pp. 726-804. Bremner J. M. 1996. Chemical methods (Part 3). Methods of soil Analysis, Published by Soil Science Society of Agronomy, Inc. Madison, Wisconsin, USA, pp. 85128. Carreño-López, R., N. Campos-Reales, C. Elmerich and B. E. Baca. 2000. Physiological evidence for differently regulated tryptophan-dependent pathways for indole-3-acetic acid synthesis in Azospirillum brasilense. Mol. Gen. Genet 264, pp. 521-530. Cavalcante, Vladimir A. and J. Döbereiner. 1988. A new acid-tolerant nitrogen-fixing bacterium associated with sugarcane. Plant and Soil 108, pp.23-31. Döbereiner, J. 1974. Nitrogen-fixing bacteria in the rhizosphere. In The biology of nitrogen fixation, ed. A. Quispel, Amsterdam, The Netherlands: North Holland Publishing Company, pp.86-120. Döbereiner, J. 1992. History and new perspectives of diazotrophs in association with non-leguminous plants. Symbiosis 13, pp.1-13. Elmerich, C. 2007. Historical perspective: From bacterization to endophytes. Goldstein, A. H. 1986. Bacteria solubilization of mineral phosphates: Historycal perspective and future prospects. American Journal of Alternative Agriculture. Volume 1, issure 2, pp. 51-57. Hamdia, H. M. H. M. El-Komy, M. Shaddad. and A. M. Hetta. 2005. Effect off molybdenum of nitrogenase activities of wheat inoculated with Azospirillrum brasillense growth under drought stress. Gen Appl Plant Physiology 31: 43-54. Chuyên ngành vi sinh vật học 52 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường Đại học Cần Thơ Hwangbo, H., R. D. Park, Y. W. Kim, Y. S. Rim, K. H. Park, T. H. Kim, J. S. Suh and K. Y. Kim. 2003. 2-ketogluconic acid production and phosphate solubilization by Enterobacter intermedium. Cur. Microbiol 47, pp.87-92. TRANG WEB http://ngo.vaas.org.vn/nguongoccayngoovietnam.php, (2/7/2013) http://en.wikipedia.org/wiki/Enterobacte, (5/7/2013) http://en.wikipedia.org/wiki/Klebsiella, (5/7/2013) http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12541509.htm,(4/7/2013) Chuyên ngành vi sinh vật học 53 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học [...]... 4.1 Phân lập và đặc điểm của các dòng vi khuẩn nội sinh đã phân lập 4.1.1 Phân lập vi khuẩn Từ 27 mẫu thân của cây bắp trồng ở Huyện Trảng Bom -Tỉnh Đồng Nai, Huyện Thống Nhất -Tỉnh Đồng Nai, Huyện Long Thành -Tỉnh Đồng Nai, 9 mẫu thân của cây bắp trồng ở Huyện Chơn Thành -Tỉnh Bình Phước và 6 mẫu thân của cây bắp ở huyện Củ Chi Thành Phố Hồ Chi Minh đã phân lập được 64 dòng vi khuẩn Trong số 64 dòng vi khuẩn. .. cây: Xã Trung HòaHuyện Trảng Bom -Tỉnh Đồng Nai, Xã Lộ 25-Huyện Thống Nhất -Tỉnh Đồng Nai, Xã Bào Hàm 2-Huyện Thống Nhất -Tỉnh Đồng Nai, Thị trấn Lòng thành- Huyện Long Thành -Tỉnh Đồng Nai, Xã Suối Trầu-Huyện Long Thành -Tỉnh Đồng Nai, Xã Bình Sơn-Huyện Long Thành -Tỉnh Đồng Nai, Xã Cẩm Đường-Huyện Long Thành -Tỉnh Đồng Nai, Xã Cẩm Mỹ-Huyện Long Thành- Tinh Đồng Nai Xã Nha Bích-Huyện Chơn Thành -Tỉnh Bình Phước, ... trái và giảm số trái lép trên cây Gần đây, Nguyễn Hữu Hiệp et al (2008) đã phân lập được một số dòng vi khuẩn Gluconacetobacter diazotrophicus nội sinh ở rễ, thân và lá của các giống mía trồng ở huyện Cù Lao Dung và huyện Mỹ Tú, tỉnh Sóc Trăng Tuy nhiên, cho đến nay chưa có một nghiên cứu về vi khuẩn nội sinh ở thân cây bắp 2.4 Một số đặc tính của vi khuẩn nội sinh Vi khuẩn nội sinh là nhóm vi khuẩn. .. xử lý mẫu và phân lập các dòng vi khuẩn nội sinh 3.3.1.1 Thu thập và xử lý mẫu Thân cây bắp được thu bằng cách nhổ ngẫu nhiên ở các địa điểm Mỗi địa điểm từ 2 – 3 thân cây bắp Thân được thu ở những cây từ 40 – 60 ngày tuổi vì ở giai đoạn này hệ thống thân của cây bắp sinh trưởng và phát triển tốt đồng thời mật số của những vi khuẩn nội sinh cũng phụ thuộc vào giai đoạn phát triển của cây và các điều... phân lập, số dòng được phân lập từ mẫu thân ở tỉnh Đồng Nai là 45 dòng (trong đó 19 dòng trên môi trường NFb và 26 dòng trên môi trường LGI) và ở Bình Phước phân lập được 10 dòng (trong đó có 5 dòng trên môi trường NFb và 5 dòng trên môi trường LGI) và ở Thành Phố Hồ Chí Minh phân lập được 9 dòng (trong đó có 5 dòng trên môi trường NFB và 4 dòng trên môi trường LGI) Bảng 7: Nguồn gốc của các dòng vi. .. Minh Thành- Huyện Chơn Thành -Tỉnh Bình Phước, Xã Minh Hưng-Huyện Chơn Thành -Tỉnh Bình Phước Xã Tân Thông Hội-Huyện Củ Chi -Thành Phố Hồ Chí Minh, Xã Tân Phú Trung-Huyện Củ Chi -Thành Phố Hồ Chí Minh và được bảo quản trong ngăn mát ở 40C 3.2.3 Hóa chất và môi trường a) Hóa chất dùng để khử trùng mẫu - Nước cất vô trùng - Ethanol (cồn) 96% - Hydrogen peroxide (H2O2) 10% Chuyên ngành vi sinh vật học 15 Vi n... được những dòng vi khuẩn nội sinh có khả năng cố định đạm, hòa tan lân khó tan và khả năng tổng hợp indole-3-acetic acid (IAA) từ thân cây bắp trồng ở các tỉnh Đồng Nai, Binh Phước và Thành Phố Hồ Chí Minh Chuyên ngành vi sinh vật học 3 Vi n NC & PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường Đại học Cần Thơ CHƯƠNG 2 LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 2.1 Sơ lược về cây bắp Bắp hay còn gọi... sát hình dạng và khả năng chuyển động của vi khuẩn Tiến hành quan sát mẫu vật dưới kính hiển vi quang học với độ phóng đại 400 lần để thấy được các hình dạng và khả năng chuyển động của vi khuẩn 3.3.4 Xác định đặc tính của những dòng vi khuẩn nội sinh Cấy kiểm tra tất cả những dòng vi khuẩn nội sinh phân lập được trên 3 môi trường đặc (Burk’s không N, NBRIP và môi trường phân lập vi khuẩn có bổ sung... cho cây Sự phát triển của vi khuẩn nội sinh có ích này ở những trung tâm nghiên cứu trên thế giới đã mở ra một vi n cảnh tốt đẹp của sự vận dụng những vi khuẩn nội sinh vào vi c tăng cường các sản phẩm nông nghiệp nhằm hạn chế vi c sử dụng thuốc trừ sâu, phân bón hóa học cung cấp cho cây trồng giúp cho vi c xây dựng nền nông nghiệp bền vững xanh và sạch 1.2 Mục tiêu nghiên cứu của đề tài Phân lập được... của các vi khuẩn cố định đạm trong vùng rễ (Döbereiner, 1974) Ngược lại, vi sinh vật vùng rễ có thể ảnh hưởng đến quá trình sinh trưởng của cây do sự tác động của chúng đến giá trị của các chất dinh dưỡng, sự phát triển và hình thái của rễ (Rovira et al., 1983; Harari et al., 1988) Vi khuẩn nốt rễ không những nội sinh ở cây họ đậu mà còn xâm nhiễm vào cả cây bắp và cố định đạm sinh học cho cây bắp sử . PHÂN LẬP VI KHUẨN NỘI SINH THÂN CÂY BẮP TRỒNG TRÊN ĐẤT XÁM Ở TỈNH ĐỒNG NAI, BÌNH PHƯỚC VÀ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VI N THỰC HIỆN Gs. Ts. CAO NGỌC. Huyện Trảng Bom -Tỉnh Đồng Nai, Huyện Thống Nhất -Tỉnh Đồng Nai, Huyện Long Thành -Tỉnh Đồng Nai, Huyện Chơn Thành -Tỉnh Bình Phước và Huyện Củ Chi -Thành Phố Hồ Chí Minh. Các dòng vi khuẩn đều có. (IAA) từ thân cây bắp trồng ở các tỉnh Đồng Nai, Binh Phước và Thành Phố Hồ Chí Minh. Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường Đại học Cần Thơ Chuyên ngành vi sinh vật học Vi n NC