phân lập vi khuẩn nội sinh trên cây diệp hạ châu (phyllanthus urinaria l.) mọc hoang ở thành phố cần thơ

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC ∗∗∗∗∗∗∗∗ LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH VI SINH VẬT HỌC PHÂN LẬP VI KHUẨN NỘI SINH TRÊN CÂY DIỆP HẠ CHÂU (PHYLLANTHUS URINARIA L.) MỌC HOANG Ở THÀNH PHỐ CẦN THƠ CÁN BỘ HƯỚNG DẪN: SINH VIÊN THỰC HIỆN: PGS.TS NGUYỄN HỮU HIỆP HỒ PHƯƠNG PHẠM BẢO TRÂN MSSV: 3103996 LỚP: VSV K36 Cần Thơ, tháng 12 / 2013 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC ∗∗∗∗∗∗∗∗ LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH VI SINH VẬT HỌC PHÂN LẬP VI KHUẨN NỘI SINH TRÊN CÂY DIỆP HẠ CHÂU (PHYLLANTHUS URINARIA L.) MỌC HOANG Ở THÀNH PHỐ CẦN THƠ Cần Thơ, tháng 12 / 2013 PHẦN KÝ DUYỆT CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN (ký tên) (ký tên) PGS. TS. Nguyễn Hữu Hiệp Hồ Phương Phạm Bảo Trân XÉT DUYỆT CỦA BỘ MÔN ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………… Cần Thơ, ngày tháng năm 2013 TRƯỞNG BỘ MÔN (ký tên) Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2013 Trường ĐHCT LỜI CẢM TẠ Sau năm học tập nghiên cứu, đến hoàn thành Luận văn tốt nghiệp chuyên ngành Vi sinh vật học. Trong thời gian này, có hỗ trợ động viên gia đình, quý Thầy Cô bạn bè giúp vượt qua khó khăn, hoàn thành tốt luận văn tốt nghiệp. Với lòng biết ơn sâu sắc, xin chân thành gửi lời cảm ơn đến: Quý Thầy Cô Viện Nghiên cứu Phát triển Công nghệ Sinh học, Trường Đại học Cần Thơ truyền đạt kiến thức, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho thực luận văn. Phó Giáo sư - Tiến sĩ Nguyễn Hữu Hiệp, Phó Trưởng Bộ môn Công nghệ Sinh học Vi sinh vật, Viện Nghiên cứu Phát triển Công nghệ Sinh học, Trường Đại học Cần Thơ, thầy hướng dẫn đề tài, tận tình truyền đạt kiến thức, kinh nghiệm học tập nghiên cứu khoa học. Cán phòng thí nghiệm đặc biệt anh chị phòng thí nghiệm Vi sinh vật thuộc Viện Nghiên cứu Phát triển Công nghệ Sinh học giúp đỡ hoàn thành đề tài. Gia đình, người thân bạn lớp Vi Sinh Vật Học K36 giúp đỡ, động viên chia sẻ khó khăn giúp hoàn thành tốt luận văn này. Kính chúc quý vị nhiều sức khỏe, hạnh phúc thành đạt. Xin trân trọng cảm ơn! Cần Thơ, ngày 25 tháng 11 năm 2013 Hồ Phương Phạm Bảo Trân Chuyên ngành Vi Sinh Vật học i Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2013 Trường ĐHCT TÓM LƯỢC Mười bốn dòng vi khuẩn nội sinh phân lập từ rễ, thân, trái Diệp hạ châu. Tất dòng vi khuẩn có tế bào hình que, mười hai dòng có khả chuyển động hai dòng khả chuyển động. Có ba dòng vi khuẩn thuộc nhóm Gram dương, mười dòng vi khuẩn thuộc nhóm Gram âm. Các dòng vi khuẩn có khả tổng hợp NH4+ Indole-3-Acetic Acid (IAA) định sau hai ngày chủng. Lượng NH4+ tăng cao vào ngày giảm dần sau ngày chủng. Lượng IAA tăng cao vào ngày giảm dần sau ngày chủng, riêng dòng P3 có lượng IAA giảm ngày ngày 6. Trong đó, dòng P11 có khả tổng hợp lượng NH4+ cao (0.7µg/ml). Lượng IAA sinh nhiều 13.33µg/ml dòng P7 tổng hợp. Có hai dòng P10, P14 có khả hòa tan lân khó tan. Dòng P14 có hiệu suất hòa tan lân cao 250 sau ngày chủng. Bốn dòng có khả kháng lại với Escherichia coli ba dòng kháng lại với Aeromonas hydrophila. Dòng P2 kháng lại với Escherichia coli tốt với vòng vô khuẩn đạt 3.5mm sau ngày chủng dòng P7 kháng lại với Aeromonas hydrophila tốt với vòng vô khuẩn đạt 2.25mm sau ngày chủng. Ba dòng vi khuẩn P2, P7, P9 nhận diện phương pháp giải trình tự đoạn gen 16S rDNA. Dòng P2 tương đồng với Bacillus tequilensis với mức độ đồng hình 99%; dòng P7 tương đồng với dòng Bacillus amyloliquefaciens với mức độ đồng hình 99% dòng P9 tương đồng với Bacillus subtilis với mức độ đồng hình 99%. Từ khóa: Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus subtilis, Bacillus tequilensis, Diệp hạ châu, IAA, kháng sinh, PCR, vi khuẩn cố định đạm, vi khuẩn hòa tan lân Chuyên ngành Vi Sinh Vật học ii Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2013 Trường ĐHCT MỤC LỤC LỜI CẢM TẠ i TÓM LƯỢC .ii MỤC LỤC .iii DANH SÁCH BẢNG .vii DANH SÁCH HÌNH .viii TỪ VIẾT TẮT .ix CHƯƠNG 1: GIỚI THIỆU .1 Đặt vấn đề Mục tiêu đề tài .2 CHƯƠNG 2: LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU .3 Vị trí địa lý điều kiện tự nhiên thành phố Cần Thơ .3 Sơ lược Diệp hạ châu .5 Diệp hạ châu đắng (diệp hạ châu thân xanh) Diệp hạ châu (diệp hạ châu thân tím) .7 Tìm hiểu vi khuẩn nội sinh Vi khuẩn Azospirillum .9 Vi khuẩn Bacillus .11 Vi khuẩn Pseudomonas 17 Vi khuẩn Klebsiella 19 Vi khuẩn Burkholderia .20 Vi khuẩn Azotobacter .21 Vi khuẩn Enterobacter 21 Một số đặc tính vi khuẩn nội sinh .22 Chuyên ngành Vi Sinh Vật học iii Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2013 Trường ĐHCT Khả cố định đạm 22 Khả hòa tan lân khó tan .22 Khả tổng hợp Indole-3-Acetic Acid (IAA) 24 Đối kháng sinh học .25 Tìm hiều số vi khuẩn gây bệnh 26 Vi khuẩn Echerichia coli .26 Vi khuẩn Aeromonas hydrophyla .28 Tình hình nghiên cứu Diệp hạ châu nước 30 Tình hình nghiên cứu nước .30 Tình hình nghiên cứu nước .32 CHƯƠNG 3: PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 36 Phương tiện nghiên cứu 36 Thời gian – Địa điểm thực 36 Dụng cụ - thiết bị 36 Vật liệu 36 Hóa chất .37 Phương pháp nghiên cứu .41 Phương pháp phân lập vi khuẩn nội sinh 41 Quan sát hình dạng khả chuyển động vi khuẩn .42 Nhuộm Gram vi khuẩn nội sinh .44 Xác định khả tổng hợp NH4+ 45 Xác định khả hòa tan lân .47 Xác định khả tổng hợp IAA .47 Thử nghiệm khả kháng khuẩn dòng vi khuẩn .48 Tinh DNA dòng vi khuẩn tiêu biểu phân lập 49 Chuyên ngành Vi Sinh Vật học iv Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2013 Trường ĐHCT Nhận diện dòng vi khuẩn nội sinh kỹ thuật PCR .50 Phương pháp xử lý số liệu 51 CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 52 Kết phân lập vi khuẩn .52 Phân lập vi khuẩn .52 Đặc điểm khuẩn lạc dòng vi khuẩn 53 4.1Đặc tính vi khuẩn 56 Khả hòa tan lân dòng vi khuẩn .57 Kết khảo sát khả tổng hợp NH4+của dòng vi khuẩn 59 So sánh khả tổng hợp NH4+của dòng vi khuẩn phân lập từ rễ 60 So sánh khả tổng hợp NH4+của dòng vi khuẩn phân lập từ thân 61 So sánh khả tổng hợp NH4+của dòng vi khuẩn phân lập từ 61 So sánh khả tổng hợp NH4+của dòng vi khuẩn phân lập từ trái 62 Kết khảo sát khả tổng hợp IAA dòng vi khuẩn 63 So sánh khả tổng hợp IAA dòng vi khuẩn phân lập từ rễ 64 So sánh khả tổng hợp IAA dòng vi khuẩn phân lập từ thân 65 So sánh khả tổng hợp IAA dòng vi khuẩn phân lập từ 65 So sánh khả tổng hợp IAA dòng vi khuẩn phân lập từ trái 66 Kết khảo sát khả tạo vòng kháng khuẩn dòng vi khuẩn 67 Khả tạo vòng kháng khuẩn vi khuẩn E.coli .67 Khả tạo vòng kháng khuẩn vi khuẩn A.hydrophila 69 Kết nhận diện số dòng vi khuẩn 72 CHƯƠNG 5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ .77 Kết luận .77 Đề nghị .77 Chuyên ngành Vi Sinh Vật học v Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2013 Trường ĐHCT TÀI LIỆU THAM KHẢO .78 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Một số hình ảnh thí nghiệm Phụ lục 2: Phụ lục số liệu Phụ lục 3: Đường chuẩn đo đạm - IAA Phụ lục 4: Một số kết thống kê Chuyên ngành Vi Sinh Vật học vi Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2013 Trường ĐHCT DANH SÁCH BẢNG LỜI CẢM TẠ i TÓM LƯỢC .ii MỤC LỤC .iii DANH SÁCH BẢNG .vii DANH SÁCH HÌNH .viii TỪ VIẾT TẮT .ix CHƯƠNG 1: GIỚI THIỆU .1 CHƯƠNG 2: LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU .3 CHƯƠNG 3: PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 36 CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 52 CHƯƠNG 5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ .77 TÀI LIỆU THAM KHẢO .78 PHỤ LỤC Chuyên ngành Vi Sinh Vật học vii Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2013 Trường ĐHCT One-way ANOVA: IAA ngày nhóm rễ versus Dòng Source DF SS MS F P 233.4104 46.6821 1524.95 0.000 Error 12 0.3673 0.0306 Total 17 233.7778 Dòng S = 0.1750 R-Sq = 99.84% R-Sq(adj) = 99.78% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev P1 9.857 0.286 P2 10.333 0.218 P3 2.000 0.143 P7 13.333 0.082 P8 11.857 0.143 P9 10.238 0.082 ----+---------+---------+---------+----(*) *) (* *) (* (*) ----+---------+---------+---------+----3.0 6.0 9.0 12.0 Pooled StDev = 0.175 Grouping Information Using Fisher Method Dòng N Mean Grouping P7 13.333 P8 11.857 P2 10.333 C P9 10.238 C P1 9.857 P3 2.000 A B Chuyên ngành Vi Sinh Vật học D E Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2013 Trường ĐHCT One-way ANOVA: IAA ngày nhóm rễ versus Dòng Source DF SS MS F P 26.42988 5.28598 1096.10 0.000 Error 12 0.05787 0.00482 Total 17 26.48775 Dòng S = 0.06944 R-Sq = 99.78% R-Sq(adj) = 99.69% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev ---+---------+---------+---------+------ P1 5.0903 0.0601 P2 2.7292 0.1042 P3 1.7569 0.0601 P7 4.0486 0.0601 P8 2.0694 0.0601 (*) P9 2.0694 0.0601 (*) (*) (*) (* *) ---+---------+---------+---------+-----2.0 3.0 4.0 5.0 Pooled StDev = 0.0694 Grouping Information Using Fisher Method Dòng N Mean Grouping P1 5.0903 P7 4.0486 P2 2.7292 P9 2.0694 D P8 2.0694 D P3 1.7569 A B Chuyên ngành Vi Sinh Vật học C E Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2013 Trường ĐHCT Phụ lục 4.6. Phân tích ANOVA tổng hợp IAA dòng thuộc nhóm thân sau 2, 4, ngày chủng One-way ANOVA: IAA ngày versus Dòng Source DF SS MS F P Dòng 19.3580 9.6790 285.09 0.000 Error 0.2037 0.0340 Total 19.5617 S = 0.1843 R-Sq = 98.96% R-Sq(adj) = 98.61% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev P10 7.0000 0.2887 P4 4.7778 0.0962 P5 3.4444 0.0962 ---+---------+---------+---------+-----(-*--) (-*-) (-*-) ---+---------+---------+---------+-----3.6 4.8 6.0 7.2 Pooled StDev = 0.1843 Grouping Information Using Fisher Method Dòng N Mean P10 7.0000 P4 4.7778 P5 3.4444 Grouping A B Chuyên ngành Vi Sinh Vật học C Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2013 Trường ĐHCT One-way ANOVA: IAA ngày versus Dòng Source DF SS MS F P Dòng 8.4943 4.2472 156.08 0.000 Error 0.1633 0.0272 Total 8.6576 S = 0.1650 R-Sq = 98.11% R-Sq(adj) = 97.49% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev P10 9.6667 0.0825 P4 7.3333 0.2182 P5 8.9048 0.1650 ---------+---------+---------+---------+ (--*--) (---*--) (--*---) ---------+---------+---------+---------+ 7.70 8.40 9.10 9.80 Pooled StDev = 0.1650 Grouping Information Using Fisher Method Dòng N Mean P10 9.6667 P5 8.9048 P4 7.3333 Grouping A B Chuyên ngành Vi Sinh Vật học C Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2013 Trường ĐHCT One-way ANOVA: IAA ngày versus Dòng Source DF SS MS F P Dòng 0.00723 0.00362 0.60 0.579 Error 0.03617 0.00603 Total 0.04340 S = 0.07764 R-Sq = 16.67% R-Sq(adj) = 0.00% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev P10 2.6597 0.0601 P4 2.7292 0.1042 P5 2.6944 0.0601 -+---------+---------+---------+-------(------------*-------------) (-------------*-------------) (-------------*-------------) -+---------+---------+---------+-------2.560 2.640 2.720 2.800 Pooled StDev = 0.0776 Grouping Information Using Fisher Method Dòng N Mean Grouping P4 2.72917 A P5 2.69444 A P10 2.65972 A Chuyên ngành Vi Sinh Vật học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2013 Trường ĐHCT Phụ lục 4.7. Phân tích ANOVA tổng hợp IAA dòng thuộc nhóm sau 2, 4, ngày chủng One-way ANOVA: IAA ngày versus Dòng Source DF SS MS F P Dòng 5.5741 2.7870 180.60 0.000 Error 0.0926 0.0154 Total 5.6667 S = 0.1242 R-Sq = 98.37% R-Sq(adj) = 97.82% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev P11 5.0556 0.0962 P12 3.7778 0.0962 P6 5.6667 0.1667 +---------+---------+---------+--------(--*--) (--*--) (-*--) +---------+---------+---------+--------3.60 4.20 4.80 5.40 Pooled StDev = 0.1242 Grouping Information Using Fisher Method Dòng N Mean P6 5.6667 P11 5.0556 P12 3.7778 Grouping A B Chuyên ngành Vi Sinh Vật học C Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2013 Trường ĐHCT One-way ANOVA: IAA ngày versus Dòng Source DF SS MS F P Dòng 22.8617 11.4308 1008.20 0.000 Error 0.0680 0.0113 Total 22.9297 S = 0.1065 R-Sq = 99.70% R-Sq(adj) = 99.60% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev -------+---------+---------+---------+-- P11 5.4762 0.0825 (-*) P12 5.4762 0.0825 (-*) P6 8.8571 0.1429 (-*) -------+---------+---------+---------+-6.0 7.0 8.0 9.0 Pooled StDev = 0.1065 Grouping Information Using Fisher Method Dòng N Mean Grouping P6 8.8571 P12 5.4762 B P11 5.4762 B A Chuyên ngành Vi Sinh Vật học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2013 Trường ĐHCT One-way ANOVA: IAA ngày versus Dòng Source DF SS MS F P Dòng 11.0701 5.5351 241.63 0.000 Error 0.1374 0.0229 Total 11.2076 S = 0.1514 R-Sq = 98.77% R-Sq(adj) = 98.36% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev P11 2.8333 0.1042 P12 4.8819 0.1591 P6 2.3125 0.1804 ----+---------+---------+---------+----(-*--) (--*--) (--*--) ----+---------+---------+---------+----2.40 3.20 4.00 4.80 Pooled StDev = 0.1514 Grouping Information Using Fisher Method Dòng N Mean P12 4.8819 P11 2.8333 P6 2.3125 Grouping A B Chuyên ngành Vi Sinh Vật học C Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2013 Trường ĐHCT Phụ lục 4.8. Phân tích ANOVA tổng hợp IAA dòng thuộc nhóm hạt sau 2, 4, ngày chủng One-way ANOVA: IAA ngày versus Dòng Source DF SS MS F P Dòng 6.0000 6.0000 216.00 0.000 Error 0.1111 0.0278 Total 6.1111 S = 0.1667 R-Sq = 98.18% R-Sq(adj) = 97.73% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev P13 5.0000 0.1667 P14 7.0000 0.1667 --+---------+---------+---------+------(--*---) (---*---) --+---------+---------+---------+------4.90 5.60 6.30 7.00 Pooled StDev = 0.1667 Grouping Information Using Fisher Method Dòng N Mean P14 7.0000 P13 5.0000 Grouping A B Chuyên ngành Vi Sinh Vật học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2013 Trường ĐHCT One-way ANOVA: IAA ngày versus Dòng Source DF SS MS F P Dòng 20.1667 20.1667 544.50 0.000 Error 0.1481 0.0370 Total 20.3148 S = 0.1925 R-Sq = 99.27% R-Sq(adj) = 99.09% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev P13 5.2778 0.1925 P14 8.9444 0.1925 ---------+---------+---------+---------+ (--*--) (--*-) ---------+---------+---------+---------+ 6.0 7.2 8.4 9.6 Pooled StDev = 0.1925 Grouping Information Using Fisher Method Dòng N Mean P14 8.9444 P13 5.2778 Grouping A B One-way ANOVA: IAA ngày versus Dòng Source DF SS MS F P Dòng 1.0417 1.0417 72.00 0.001 Error 0.0579 0.0145 Total 1.0995 S = 0.1203 R-Sq = 94.74% R-Sq(adj) = 93.42% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev P13 3.3194 0.1591 P14 2.4861 0.0601 ----+---------+---------+---------+----(-----*----) (----*-----) ----+---------+---------+---------+----2.45 2.80 3.15 3.50 Pooled StDev = 0.1203 Grouping Information Using Fisher Method Dòng N Mean P13 3.3194 P14 2.4861 Grouping A B Chuyên ngành Vi Sinh Vật học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2013 Trường ĐHCT Phụ lục 4.9. Phân tích ANOVA đường kính vòng vô khuẩn dòng vi khuẩn E.coli One-way ANOVA: đường kính vòng vô khuẩn ngày versus Dòng Source DF SS MS F P Dòng 4.094 1.365 8.73 0.031 Error 0.625 0.156 Total 4.719 S = 0.3953 R-Sq = 86.75% Level N Mean StDev P11 3.0000 0.0000 P2 3.5000 0.7071 P6 2.0000 0.0000 P7 1.7500 0.3536 R-Sq(adj) = 76.82% +---------+---------+---------+--------(-------*-------) (-------*-------) (-------*-------) (-------*------) +---------+---------+---------+--------1.0 2.0 3.0 4.0 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Pooled StDev = 0.3953 Grouping Information Using Fisher Method Dòng N Mean Grouping P2 3.5000 A P11 3.0000 A B P6 2.0000 B C P7 1.7500 C Chuyên ngành Vi Sinh Vật học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2013 Trường ĐHCT One-way ANOVA: đường kính vòng vô khuẩn ngày versus Dòng Source DF SS MS F P Dòng 2.500 0.833 0.95 0.496 Error 3.500 0.875 Total 6.000 S = 0.9354 R-Sq = 41.67% Level N Mean StDev P11 2.5000 0.7071 P2 3.5000 0.7071 P6 3.0000 1.4142 P7 2.0000 0.7071 R-Sq(adj) = 0.00% ---------+---------+---------+---------+ (------------*-----------) (-----------*------------) (-----------*-----------) (-----------*------------) ---------+---------+---------+---------+ 1.5 3.0 4.5 6.0 Pooled StDev = 0.9354 Grouping Information Using Fisher Method Dòng N Mean Grouping P2 3.5000 A P6 3.0000 A P11 2.5000 A P7 2.0000 A Chuyên ngành Vi Sinh Vật học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2013 Trường ĐHCT One-way ANOVA: đường kính vòng vô khuẩn ngày versus Dòng Source DF SS MS F P Dòng 1.000 0.333 1.33 0.381 Error 1.000 0.250 Total 2.000 S = 0.5 R-Sq = 50.00% R-Sq(adj) = 12.50% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev P11 2.5000 0.7071 P2 2.0000 0.0000 P6 3.0000 0.0000 P7 2.5000 0.7071 -------+---------+---------+---------+-(-----------*------------) (-----------*-----------) (------------*-----------) (-----------*------------) -------+---------+---------+---------+-1.60 2.40 3.20 4.00 Pooled StDev = 0.5000 Grouping Information Using Fisher Method Dòng N Mean Grouping P6 3.0000 A P7 2.5000 A P11 2.5000 A P2 2.0000 A Chuyên ngành Vi Sinh Vật học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2013 Trường ĐHCT Phụ lục 4.10 Phân tích ANOVA đường kính vòng vô khuẩn dòng vi khuẩn A.hydrophila One-way ANOVA: đường kính vòng vô khuẩn ngày versus Dòng Source DF SS MS F P Dòng 3.000 1.500 12.00 0.037 Error 0.375 0.125 Total 3.375 S = 0.3536 R-Sq = 88.89% R-Sq(adj) = 81.48% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev P2 0.7500 0.3536 P7 2.2500 0.3536 P9 0.7500 0.3536 -+---------+---------+---------+-------(---------*---------) (---------*---------) (---------*---------) -+---------+---------+---------+-------0.00 0.80 1.60 2.40 Pooled StDev = 0.3536 Grouping Information Using Fisher Method Dòng N Mean Grouping P7 2.2500 P9 0.7500 B P2 0.7500 B A Chuyên ngành Vi Sinh Vật học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2013 Trường ĐHCT One-way ANOVA: đường kính vòng vô khuẩn ngày versus Dòng Source DF SS MS F P Dòng 1.083 0.542 0.93 0.485 Error 1.750 0.583 Total 2.833 S = 0.7638 R-Sq = 38.24% R-Sq(adj) = 0.00% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev P2 1.2500 0.3536 P7 2.2500 1.0607 P9 1.5000 0.7071 ----+---------+---------+---------+----(-------------*--------------) (--------------*-------------) (--------------*-------------) ----+---------+---------+---------+----0.0 1.2 2.4 3.6 Pooled StDev = 0.7638 Grouping Information Using Fisher Method Dòng N Mean Grouping P7 2.2500 A P9 1.5000 A P2 1.2500 A Chuyên ngành Vi Sinh Vật học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2013 Trường ĐHCT One-way ANOVA: đường kính vòng vô khuẩn ngày versus Dòng Source DF SS MS F P Dòng 1.750 0.875 2.33 0.245 Error 1.125 0.375 Total 2.875 S = 0.6124 R-Sq = 60.87% R-Sq(adj) = 34.78% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev P2 1.5000 0.7071 P7 2.5000 0.7071 P9 1.2500 0.3536 -+---------+---------+---------+-------(-----------*----------) (-----------*----------) (----------*-----------) -+---------+---------+---------+-------0.0 1.2 2.4 3.6 Pooled StDev = 0.6124 Grouping Information Using Fisher Method Dòng N Mean Grouping P7 2.5000 A P2 1.5000 A P9 1.2500 A Chuyên ngành Vi Sinh Vật học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học [...]... vi c phân lập và nhận diện các dòng vi khuẩn sống nội sinh trong cây Diệp hạ châu góp phần vào vi c sản xuất thuốc nhằm hỗ trợ cho nền y học hiện nay là rất cần thiết Mục tiêu đề tài Phân lập và tuyển chọn các dòng vi khuẩn nội sinh trong cây Diệp hạ châu ở thành phố Cần Thơ có khả năng tổng hợp amonium, IAA, hòa tan lân và có khả năng kháng khuẩn Chuyên ngành Vi Sinh Vật học 2 Vi n NC&PT Công nghệ Sinh. .. Cây Diệp hạ châu có tên khoa học là Phyllanthus urinaria L., họ thầu dầu Euphorbiaceae, cây này còn có tên là chó đẻ răng cưa, diệp hạ châu đắng, diệp hòe thái, lão nha châu, diệp hạ châu ngọt, cam kiềm, kiềm vườn, trân châu thảo Cây mọc hằng năm ở khu vực nhiệt đới, là loại cỏ mọc hoang có thể tìm thấy nhiều nơi khắp nước ta Cây có hạt tròn xếp thành hàng dưới lá nên gọi là diệp hạ châu (diệp: lá, hạ: ... kiện tự nhiên của thành phố Cần Thơ Thành phố Cần Thơ nằm ở vùng hạ lưu của Sông Mê Kông và ở vị trí trung tâm đồng bằng châu thổ Sông Cửu Long, nằm cách thành phố Hồ Chí Minh 169 km, cách thành phố Cà Mau 178 km, cách thành phố Rạch Giá 128 km, cách biển khoảng 100 km theo đường sông Hậu Hình 1 Thành phố Cần Thơ (Nguồn: http://www.vietnamculture.com.vn/show.aspx?cat=002005&nid=1342) Cần Thơ có tọa độ... hạ châu thân xanh) Diệp hạ châu đắng (Phyllanthus amarus Schum & Thonn tên đồng danh khác Phyllanthus niruri auct., non L) hay còn gọi diệp hạ châu thân xanh Gọi là diệp hạ châu, vì có các hạt tròn nằm dưới lá Diệp hạ châu trong dân gian thường gọi là cây chó đẻ, cây mang tên này vì người ta thấy những con chó sau khi đẻ thường đi ăn cây này Ngoài ra còn có nhiều tên khác: trân châu thảo, diệp hạ châu. .. nước, nhờ đó, tăng khả năng sinh trưởng và phát triển cũng như tăng năng suất của cây Vi khuẩn Bacillus Vi khuẩn Bacillus là những vi khuẩn Gram dương, có nội bào tử hình ovan có khuynh hướng phình ra ở một đầu Bacillus được phân biệt với các loài vi khuẩn sinh nội bào tử khác bằng hình dạng tế bào hình que, sinh trưởng dưới điều kiện hiếu khí hoặc kỵ khí không bắt buộc Hình 5 Vi khuẩn Bacillus (Nguồn:... http://thuocdieutri.vn/diep-ha-chau-va-tac-dung-cua-diep-ha-chau-dang/) Diệp hạ châu ngọt (diệp hạ châu thân tím) Diệp hạ châu thân tím, chó đẻ thân tím (Phyllanthus urinaria L) a Đặc điểm nhận dạng - Lá có màu xanh thẫm, thân cành có màu tím (nên gọi là diệp hạ châu thân tím) - Cây phân nhánh từ gốc, tán cây xòe dạng bò lan - Chiều cao trung bình 10-12 cm b Thành phần hóa học Trong loài P urinaria L có mặt các acid, triterpen, một... đã phân lập được những hợp chất trong cây Diệp hạ châu có khả năng chữa bệnh vi m gan, giải độc gan và chữa vi m gan siêu vi B như phyllanthine, hypophyllan-thine, alkaloids và flavonoids Nhiều thầy thuốc Đông y cho rằng cây Diệp hạ châu là một trong những thảo dược hàng đầu có thể đáp ứng được yêu cầu trong điều trị bệnh (Nguồn: http://www.ykhoa.net/yhoccotruyen/voha/vh088.htm) Diệp hạ châu đắng (diệp. .. là diệp hạ châu (diệp: lá, hạ: dưới, châu: ngọc tròn) Có hai loại: Diệp hạ châu ngọt (Phyllanthus urinaria L.) và Diệp hạ châu đắng (Phyllanthus amarus schum et thonn), cùng họ thầu dầu (Euphorbiaceae) Cả 2 loại đều giàu dược tính nên ngay từ xa xưa, 2 loại này đã được dùng làm thuốc Bộ phận dùng làm thuốc là toàn cây (được cắt phần trên mặt đất của cây) Diệp hạ châu vị đắng, hơi ngọt, tính mát, có... phenolic và một flavonoid, phyllanthin Có tài liệu ghi nhận thành phần phyllanthin trong diệp hạ châu đắng (thân xanh) cao gấp cao gấp 27 lần hàm lượng phyllanthin trong diệp hạ châu ngọt (thân tím) Chuyên ngành Vi Sinh Vật học 7 Vi n NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2013 Trường ĐHCT Hình 3 Diệp hạ châu thân tím (Phyllanthus urinaria L) (Nguồn: http://thuocdieutri.vn/diep-ha-chau-va-tac-dung-cua-diep-ha-chau-dang/)... ĐHCT Thành phần hóa học Diệp hạ châu đắng Trong Diệp hạ châu đắng có các thành phần flavonoid, alcaloid phyllanthin và các hợp chất hypophyllanthin, niranthin, phylteralin Thành phần hóa học chính phyllanthin c Tác dụng dược lý Cây Diệp hạ châu đắng có vị hơi đắng, tính mát, có tác dụng tiêu độc, sát trùng, tán ứ, thông huyết, điều kinh, lợi tiểu, thông sữa Hình 2 Diệp hạ châu đắng (Phyllanthus amarus . 36 - 20 13 Trường ĐHCT Khả năng cố định đạm 22 Khả năng hòa tan lân khó tan 22 Khả năng tổng hợp Indole-3-Acetic Acid (IAA) 24 Đối kháng sinh học 25 Tìm hiều về một số vi khuẩn gây bệnh 26 . tháng 12 tới tháng 4 năm sau. Nhiệt độ trung bình năm khoảng 28 °C, số giờ nắng trung bình cả năm khoảng 2. 249,2h, lượng mưa trung bình năm đạt 1600 mm. Độ ẩm trung bình năm dao động từ 82% -. 17 Vi khuẩn Klebsiella 19 Vi khuẩn Burkholderia 20 Vi khuẩn Azotobacter 21 Vi khuẩn Enterobacter 21 Một số đặc tính của vi khuẩn nội sinh 22 Chuyên ngành Vi Sinh Vật học iii Viện NC&PT