Nghiên cứu một số đặc tính sinh dược của dịch chiết từ hạt đậu đen (vigna cylindrica) (LV 01304)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI PH N TH HƯ NG NGHI N CỨU ỘT S Đ C T NH SINH Ư C CỦ CH CHI T TỪ HẠT Đ U Đ N (Vigna cylindrica) Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 60 42 01 14 LU N VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Người hướng dẫn: TS Trần Thị Phương Liên HÀ NỘI 2014 i LỜI CẢ N Trong trình tìm hiểu, nghiên cứu hồn thành luận văn tốt ngiệp, nhận lời bảo, hướng dẫn tận tình giáo Ti n s Tr n Th Th hư ng iên Tôi xin ch n thành cảm n cô giáo Ti n s hư ng C Tr n Th – ph ng guy n a sinh, iện công nghệ sinh h c iệt am t o u iện cho hoàn thành m t số th nghiệm Bên c nh đ , Ban giám hiệu, h ng sau đ i h c, Trung t m chuyển giao công nghệ, h ng, Ban trường Đ S i t o u iện thuận lợi nh t cho tơi q trình làm việc C ng với đ s h trợ nh t đ nh t gia đìn b n b Tơi xin ch n thành cảm n s giúp đỡ quý báu đ ! i, tháng 05 năm 2014 Học viên Ph n Thị Hương ii LỜI C ặp ề ĐO N i, tháng 05 năm 2014 Học viên Ph n Thị Hương iii MỤC LỤC Ụ Ụ Ụ Ụ Ụ MỞ ẦU Ư ỔNG QUAN TÀI LI U 1.1 Vài nét chung Vigna cylindrica 1.1.1 Th c vật h c 1.1.2 Phân bố, sinh thái 1.1.3 Thành ph n hóa h c 1.1.4 M t số tác dụng Sinh - dược công dụng c y đậu đen 12 ợp 1.2.1 Các hợp ch t thứ sinh ch t có ho t tính sinh h c 1.2.2 Hợp ch t phenolic 1.2.3 Flavonoid th c vật 1.2.4 Tannin 12 1.2.5, Alkaloid th c vật 13 13 p 14 1.3.1 Khái niệm phân lo i béo phì 14 1.3.2 Th c tr ng béo phì th giới nước 14 1.3.3 Nguyên nhân gây béo phì 15 1.3.4 Các tác h i nguy c cụ thể béo phì 16 1.3.5, M t số số hoá sinh liên quan đ n rối lo n trao đổi lipid máu 16 1.3.6, Giải pháp ph ng u tr 17 iv 1.4 B ờng 18 1.4.1 Tỷ lệ mắc bệnh ĐTĐ 19 1.4.2 Phân lo i c ch sinh bệnh ĐTĐ 20 Đái tháo đường type 1(ĐTĐ phụ thu c insulin) 20 2 Đái tháo đường type (ĐTĐ hông phụ thu c insulin) 20 1.4.2.3 M t số d ng ĐTĐ hác 21 143 t số thuốc u tr bệnh ĐTĐ 22 1.5, M i quan h giữ Ư 21 Ố ợ ƯỢ p À Ư ờng 23 Ê ỨU 24 24 2.1.1 Nguyên liệu th c vật 24 2.1.2 Mẫu đ ng vật ch đ thức ăn 24 2.1.3 Hóa ch t, dụng cụ thí nghiệm 25 2.1.3.1 Hóa ch t 25 2.1.3.2 Dụng cụ thí nghiệm 25 22 p áp u 26 221 hư ng pháp tách chi t nghiên cứu 26 222 hư ng pháp hảo sát thành ph n hóa h c h t đậu đen 26 2 Đ nh tính m t số nhóm hợp ch t t nhiên 26 2 2 Đ nh lượng polyphenol tổng số theo phư ng pháp FolinCiocalteau 27 2.2.3 Nghiên cứu tác dụng ph n đo n d ch chi t t h t đậu đen (Vigna cylindrica) lên tr ng lượng m t số số hóa sinh máu chu t béo phì th c nghiệm 28 2.2.3.1 Thử đ c tính c p, xác đ nh LD50 28 2.2.3.2 Xây d ng mơ hình chu t béo phì th c nghiệm 29 v 2.2.4 Nghiên cứu tác dụng h đường huy t d ch chi t h t đậu đen chu t nhắt g y ĐTĐ STZ 29 2241 hư ng pháp g y ĐTĐ th c nghiệm mô type 31 2.2.4.2 Thử khả h glucose huy t ph n đo n d ch chi t h t đậu đen mơ hình chu t ĐTĐ type 32 2.2.5, Sử dụng phư ng pháp h a sinh - y dược 32 2.2.5,1 hư ng pháp đ nh lượng glucose huy t 32 2.2.5,2 Đ nh lượng m t số số lipid huy t 33 2.2.6, hư ng pháp xử lý số liệu 35 Ư 31 T QU NGHIÊN CỨU VÀ TH O LUẬN 37 ợ ợp (Vigna cylindrica) 37 3.1.1 K t tách chi t ph n đo n 37 3.1.2 K t đ nh tính m t số nhóm hợp ch t t nhiên phân đo n d ch chi t t h t đậu đen ( igna cylindrica) 39 3.1.3 Phân tích thành ph n hợp ch t t nhiên ph n đo n d ch chi t t h t đậu đen ( igna cylindrica) sắc kí lớp mỏng 40 Đ nh lượng hàm lượng polyphenol tổng số cao d ch chi t ph n đo n t h t đậu đen ( igna cylindrica) 42 3.1.4.1 K t xây d ng đường chuẩn acid gallic 42 Đ nh lượng polyphenol tổng số theo phư ng pháp FolinCiocalteau 43 3.2 K t 3.3 K t n d ch chi 331 nh liề c c p 44 t béo phì th c nghi ợ ụng c p t béo phì 45 t t o mơ hình chu t b o phì th c nghiệm 45 vi 3.3.2 Tác dụng ph n đo n d ch chi t t h t đậu đen đ n tr ng lượng chu t béo phì th c nghiệm 49 34 ả á ụ ụ ụ n chuy n hóa lipid c Vigna cylindrica) 52 3.4.1 K t t o mơ hình chu t đái tháo đường type th c nghiệm 52 3.4.2 Tác dụng ph n đo n d ch chi t t h t đậu đen ( igna cylindrica) đ n nồng đ glucose huy t lúc đ i chu t ĐTĐ 54 3.4.3 Tác dụng đ n chuyển hóa lipid h t đậu đen ( igna cylindrica) mơ hình chu t ĐTĐ type 57 K T LUẬN 60 KI N NGHỊ 61 À 62 vii NH ỤC C C ợ BMI CHCl3 HI U CH Chloroform ề ề á EtOH Ethanol EtOAc Ethylacetat HDL-c High density lipoprotein-cholesterol LDL-c Low density lipoprotein-cholesterol Met Metformin p TC TG WHO Triglycerid ổ VI T T T viii NH ỤC C C ẢNG ả 11 ả 12 ả 1: ả 22 ả 31 ả 32 ả p ả 33 ả ả 34 ẩ Â p ả W ỗ 18 25 p ả ặ 26 p ợ p 14 38 39 ẩ p 42 ổ p Vigna cylindrica) 43 ả ả ả p ợ ) ằ ả ỡ p p ả á 46 ữ 47 ợ ề ả 44 p 50 tiêm STZ 53 ả 10 ả 21 ả 11 ề p ằ p p ề 55 p E 58 ix NH 21 ỤC C C H NH ả Vigna cylindrica 24 22 Z p áp Hình 2.3: β 31 ụ ả 31 33 p ợp Vigna cylindrica) 37 32 ồở 33 p Hình 3.4, 41 ẩ 43 5, Hình 3.6, p p Hình 3.8, ề hau vòng 9, 45 ợ ỡ 7, ễ 41 .46 ữ 48 ợ p 51 STZ 53 10, ả 21 11 ề ằ ề p p ằ p 56 p E 58 51 K t th hi n bi hình 3.8, Hình 3.8 Biểu đờ so s nh trọng lượng lô chuột o ph trước s u điều trị ả 38 38 21 : ề p ề ĩ 6,83% p p ợ ả ề 15 68 h 78 p>0,05) Ở 85 ợ 65 21 97% ề ả Ở 29 2%) p chloroform p 14 43%) p ả n-hexa p E 22,41%, 17,85%, 20,05% ả hợp ữ chloroform ả ợ ụ p 52 ết tạo mô h nh chuột ĐTĐ thực nghiệm sử dụng chuột ĐTĐ để 3.4 đ nh gi t c dụng hạ đường hu ết t c dụng đến chu ển hó lipid củ hạt đ u đen (Vigna cylindrica) 3.4.1 K t t o ìn c u t t áo ờn type t ực n iệ ề p p ả β ả ỳ Z ỵ Z ụ p ỷ ặ p ò p p ề ề Z ề ặ ặ ề Z ợp p p Z ề p ặp STZ (Streptozotocin) có tên hóa h c là: 2-deoxy-2-(3-metyl-3ợc phân l p nitrosoureido)-D- glucopyranose p á tiêu u t tính ch Z ợp p p ỷ ỷ ả , p p β β 1960 u tiên v ) β ỵ ặ ả [19], [20] ả p 2: Z 2008) p 2ở ợ 200 – 250 ặp Z ề p 30 ằ ò ợp / ò w p 6–8 ) ề Z ò ũ [28] W ) [31] Ở theo Swain J ằ X v ò p Z 50 / ) [13] ữ 53 p 12 ụ 4.5, ề p 0,01M, pH ợ ả ợ ả 39 ợ 110 p Z) p / ò 72 h 3.9: ảng 3.9 Nờng độ glucose hu ết lúc đói củ c c lô chuột trước s u tiêm STZ ồn Các l c u t 7,32 ± 0,52 IIII - Z 110 / ) 7,45 ± 0,69 7,62 ± 0,47 8,79 ± 0,45 8,76± 0,59 II p 7,41 ± 0,36 8,43 ± 0,46 Z (110mg/ kg) p p ol/l) 72 ờ lucose uy t IV - 22,35 ± 0,39 p< 0,05 p Z Z H nh 3.9 Nồng độ glucose hu ết củ c c lô chuột trước s u tiêm STZ 54 ảở ả 39 39 ằ ổ ẩ ề ề tiêm STZ ề ợ ợ p 8,76 glucose Z 22,35 mmol/l) : p p ỡ ả 72 ỡ p ợ - p ợ ả - Z ả ỡ ợ p ợp p á ả ỗ 2006) ề ằ 18 Z ề 110 Z ề / [7], [8], [13] ợp / p p 3.4.2 Tác d n c cylindrica) ồ ỡ ả p ổ p ân o n d c n nồn c i t t lucose uy t lúc ói c t u en c u t ĐTĐ ) p 21 ề ụ ả i n ợ ả 10 p 10: á 55 ảng 3.10 ết nờng độ glucose hu ết lúc đói củ c c c c ph n đoạn dịch chiết từ hạt đ u đen chuột ĐTĐ s u 21 ngà điều trị Phân lô /) 14 21 7,28 16,21* 13,47* 10,29* ±3,52 ±2,16 ±2,29 ±1,22 ↓41 61 ↓55,4 19,17* 16,54* 13,91* ±3,21 ±1,43 ±1,56 ±1.29 ↓26 74 ↓38,4 18,98* 17,36* 15,62* ±4,13 ±1,63 ±1,39 ±1.18 ↓19 22 ↓27,32 18,54* 15,41* 12,79* ±3,02 ±2,05 ±1.62 ±1.39 ↓32 15 ↓43 68 19,06* 16,83* 15,38* ±3,15 ±1,52 ±1,24 ±1.53 ↓21,83 ↓28,56 22,04 19,63* 17,72* 16,58* ±2,37 ±1,21 ±0,94 ±0,82 ↓10,93 p