Định lượng azithromycin trong thuốc viên bằng phương pháp tạo cặp ion chiết đo quang Định lượng azithromycin trong thuốc viên bằng phương pháp tạo cặp ion chiết đo quang Định lượng azithromycin trong thuốc viên bằng phương pháp tạo cặp ion chiết đo quang Định lượng azithromycin trong thuốc viên bằng phương pháp tạo cặp ion chiết đo quang Định lượng azithromycin trong thuốc viên bằng phương pháp tạo cặp ion chiết đo quang Định lượng azithromycin trong thuốc viên bằng phương pháp tạo cặp ion chiết đo quang Định lượng azithromycin trong thuốc viên bằng phương pháp tạo cặp ion chiết đo quang Định lượng azithromycin trong thuốc viên bằng phương pháp tạo cặp ion chiết đo quang Định lượng azithromycin trong thuốc viên bằng phương pháp tạo cặp ion chiết đo quang Định lượng azithromycin trong thuốc viên bằng phương pháp tạo cặp ion chiết đo quang Định lượng azithromycin trong thuốc viên bằng phương pháp tạo cặp ion chiết đo quang Định lượng azithromycin trong thuốc viên bằng phương pháp tạo cặp ion chiết đo quang Định lượng azithromycin trong thuốc viên bằng phương pháp tạo cặp ion chiết đo quang Định lượng azithromycin trong thuốc viên bằng phương pháp tạo cặp ion chiết đo quang Định lượng azithromycin trong thuốc viên bằng phương pháp tạo cặp ion chiết đo quang Định lượng azithromycin trong thuốc viên bằng phương pháp tạo cặp ion chiết đo quang Định lượng azithromycin trong thuốc viên bằng phương pháp tạo cặp ion chiết đo quang Định lượng azithromycin trong thuốc viên bằng phương pháp tạo cặp ion chiết đo quang Định lượng azithromycin trong thuốc viên bằng phương pháp tạo cặp ion chiết đo quang Định lượng azithromycin trong thuốc viên bằng phương pháp tạo cặp ion chiết đo quang Định lượng azithromycin trong thuốc viên bằng phương pháp tạo cặp ion chiết đo quang Định lượng azithromycin trong thuốc viên bằng phương pháp tạo cặp ion chiết đo quang Định lượng azithromycin trong thuốc viên bằng phương pháp tạo cặp ion chiết đo quang Định lượng azithromycin trong thuốc viên bằng phương pháp tạo cặp ion chiết đo quang Định lượng azithromycin trong thuốc viên bằng phương pháp tạo cặp ion chiết đo quang
BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC D ư ợ c HÀ NỘI NGUYỄN THỊ THANH HƯƠNG ĐỊNH LƯỢNG AZITHROMYCIN TRONG THUỐC VIÊN BẰNG PHƯƠNG PHÁP TẠO CẶP • o ION CHIẾT-ĐO QUANG (KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Dược SỸ KHÓA 2002-2007) Người hướng dẫn : PGS.TS Thái Duy Thìn TS. Đoàn Cao Sơn Nơi thực hiện : Khoa kiểm nghiệm các dạng bào chế - Viện kiểm nghiệm thuốc Trung ương Bộ môn Hoá Dược - ĐH Dược Hà Nội Thời gian thực hiện : 02/2007 đến 05/2007. .' Hà Nội, 05/2007 LÒI cảm 0R Để hoàn thành được khóa luận tốt nghiệp này, trước hết tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới: PGS.TS. Thái Duy Thìn TS. Đoàn Cao Sơn Những người đã trực tiếp hướng dẫn tôi, dành nhiều công sức giúp đỡ và truyền đạt kinh nghiệm quý báu trong suốt quá trình thực hiện khóa luận tốt nghiệp này. Tôi xin chân thành cảm ơn các thầy cô giáo, kỹ thuật viên bộ môn Hóa Dược và các anh chị ở Khoa kiểm nghiệm các dạng bào chê - Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương đã tạo mọi điều kiện thuận lợi, giúp đỡ tôi hoàn thành tốt khóa luận. Tôi cũng xin gửi tới toàn thể giảng viên, cán bộ trường Đại Học Dược Hà Nội lời cảm ơn chân thành vì sự dìu dắt, dạy bảo trong suốt năm năm tôi học tập tại đây. Và cuối cùng, cho phép tôi được bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới cha mẹ, bạn bè - những người luôn giành cho tôi tình yêu thương, sự quan tâm, động viên giúp đỡ chân tình để tôi hoàn thành tốt nhất khóa luận tốt nghiệp này. Hà Nội, ngày 19 tháng 5 năm 2007 Nguyễn Thị Thanh Hương MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỂ 1 PHẨN 1: TỔNG QUAN 1.1. ĐẠI CƯƠNG VỀ AZITHROMYCIN 3 1.1.1. Azithromycin 3 1.1.2. Các phương pháp định lượng Azithromycin 5 1.1.2.1. Phương pháp vi sinh vật 5 1.1.2.2. Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao với detector điện hóa 5 1.1.2.3. Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao với detector ƯV 6 1.2. PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH QUANG PHổ ƯV-VIS 1.2.1. Cơ sở lý thuyết của phương pháp phân tích quang phổ ƯV-VIS. 7 1.2.1.1 Phổ hấp thụ và việc lựa chon bước sóng cho phân tích quang phổ UV-VIS 7 1.2.1.2. Định luật về sự hấp thụ ánh sáng 8 1.2.1.3. Điều kiện ứng dụng định luật Lambert-Beer 9 1.2.1.4. Chọn điều kiện xây dựng quy trình định lượng 9 1.2.2. Các phương pháp định lượng của phương pháp quang phổ UV-VIS 10 1.2.2.1. Đo phổ trực tiếp 10 1.2.2.2. Phương pháp so sánh 10 1.2.2.3. Phương pháp thêm 11 1.2.2.4. Phương pháp đường chuẩn . 11 1.2.2.5. Phương pháp thêm đường chuẩn . 12 1.2.2.6. Phương pháp chuẩn độ đo quang . 13 1.2.2.7. Phương pháp định lượng hỗn hợp 14 1.2.2.8. Phương pháp tạo cặp ion chiết-đo quan . 14 1.2.3. Ưu nhược điểm của phương pháp quang phổ UV-VIS 17 PHẦN 2: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 2.1. NỘI DUNG, ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ú u 19 2.1.1. Nội dung nghiên cứu 19 2.1.2. Đối tượng nghiên cứu 19 2.1.3. Phương pháp nghiên cứu 19 2.1.3.1. Chỉ tiêu nghiên cứu 19 2.1.3.2. Phương pháp xác định các chỉ tiêu nghiên cứu 20 2.1.3.3. Phương pháp xử lý số liệu 21 2.2. THỰC NGHIỆM VÀ KÊT QUẢ 22 2.2.1. Thuốc thử, hóa chất, dụng cụ 22 2.2.2. Xây dựng phương pháp định lượng Azithromycin 23 2.2.2.1. Lựa chọn điều kiện 23 2.2.2.2. Cách tiến hành 23 2.2.2.3. Khảo sát độ hấp thụ u v và lựa chọn bước sóng phân tích 24 2.2.2.4. Xác định khoảng tuyến tính của phương pháp định lượng 25 2.2.2.5. Phân tích chế phẩm Azicine 27 2.2.2.6. Đánh giá độ lặp của phương pháp 28 2.2.2.7. Đánh giá độ đúng của phương pháp 29 2.2.3. So sánh phương pháp mới xây dựng với phương pháp HPLC 30 2.2.3.1. Phương pháp định lượng azithromycin bằng phương pháp HPLC. 30 2.2.3.2. So sánh kết quả của hai phương pháp 30 2.2.3.3. Đánh giá ưu nhược điểm của hai phương pháp 32 2.2.4. Áp dụng phương pháp mói xây dựng để định lượng một sô chế phẩm thuốc viên chứa azithromycin đang lưu hành trên thị trường 32 2.3. BÀN LUẬN 34 PHẦN 3: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUÂT 3.1. KẾT LUẬN 36 3.2. ĐỀ XUẤT 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO MỘT SỐ CHỮ VIẾT TẮT BP : British Phamacopoeia - Dược điển Anh. CT : Công thức. DĐVN III : Dược điển Việt Nam xuất bản lần thứ 3. HPLC : High Perfomance Liquid Chromatography - sắc ký lỏng hiệu năng cao. PL : Phụ lục. SDK : Số đăng ký. TCCS : Tiêu chuan cơ sở. TT : Thuốc thử. ƯSP : United States Pharmacopoeia - Dược điển Mỹ. ƯV-VIS : Ultraviolet - Visible. ĐẶT VÂN ĐỂ Trong vài thập kỷ qua, cùng với sự phát triển của công nghệ, khoa học kỹ thuật, rất nhiều loại dược phẩm đã được sản xuất và lưu hành trên thị trường. Cùng với sự đa dạng của các loại thuốc chữa bệnh là yêu cầu đòi hỏi sử dụng thuốc phải hợp lý - an toàn. Kiểm nghiệm bán thành phẩm và thành phẩm thuốc trở thành một khâu quan trọng trong quy trình đảm bảo chất lượng thuốc và trong việc phục vụ, chăm sóc sức khỏe cộng đồng. Bên cạnh đó, trong công cuộc đấu tranh phòng chống bệnh tật, kháng sinh đã trở thành một trong những nhóm thuốc quan trọng nhất của Y học hiện đại. Kháng sinh azithromycin được phát hiện năm 1980 và đến nay azithromycin đã và đang được sử dụng rộng rãi trên thị trường và có vị trí tin cậy trong điều trị. Azithromycin hấp thu nhanh và phân bố rộng khắp cơ thể. Đặc biệt thuốc đạt nồng độ trong tế bào cao hơn trong huyết tương (từ 10-100 lần), vì vậy dùng điều trị nhiễm vi khuẩn nội bào tốt. Thuốc có tác dụng mạnh trên H. influenzae, M. catarhalis, Neisseria, vi khuẩn nội bào, vi khuẩn cơ hội ở bệnh nhân nhiễm HIV/AIDS.[2] Hiện nay trên thế giới cũng như ở Việt Nam, phương pháp định lượng azithromycin đã và đang tiếp tục được nghiên cứu và ứng dụng. Trên thị trường Việt Nam có rất nhiều chế phẩm chứa azithromycin nhưng chủ yếu định lượng bằng phương pháp vi sinh vật hoặc phương pháp HPLC. Các phương pháp này yêu cầu cơ sở vật chất nghiêm ngặt, đòi hỏi thiết bị đắt tiền, dung môi tốn kém. Hơn thế nữa, Dược điển Việt Nam cũng chưa có chuyên luận nào về hoạt chất này. Vì vậy, để làm phong phú thêm các phương pháp định lượng azithromycin trong thuốc viên - góp phần xây dựng tiêu chuẩn azithromycin trong dược điển Việt Nam, chúng tôi thực hiện đề tài: “Định lượng azithromycin trong thuốc viên bằng phương pháp tạo cặp ion chiết - đo quang” với những mục tiêu sau: 1 > Xây dựng và thẩm định phương pháp định lượng azithromycin trong thuốc viên bằng phương pháp tạo cặp ion chiết - đo quang. > So sánh độ lặp lại và độ đúng của kết quả định lượng azithromycin giữa phương pháp mới xây dựng với phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao. > Úng dụng phương pháp mới xây dựng để định lượng một số chế phẩm thuốc viên chứa azithromycin đang lưu hành trên thị trường. Với mục tiêu như vậy, chúng tôi mong muốn giới thiệu một phương pháp định lượng mới đơn giản, dễ thực hiện, có thể áp dụng được cho những cơ sở sản xuất, kiểm nghiệm không có đủ điều kiện cơ sở vật chất để định lượng azithromycin bằng phương pháp vi sinh vật hay phương pháp HPLC. 2 PHẦN I TỔNG QUAN 1.1. ĐẠI CƯƠNG VỂ AZITHROMYCIN 1.1.1. AZITHROMYCIN.[3] [8] [ 10] [ 11 ] [ 12] [21 ] [22] [25] > Nguồn gốc: Bán tổng hợp từ erythromycin A; mở rộng thành vòng 15 nguyên tử c, có 1 N. > Công thức phân tử: C38H72N20 12. 2H20 > Phân tử lượng: 785,02 > Công thức cấu tạo: h3c H?c OCH3 ch3 ọ ọ HO N- CH3 ch3 ch3 . 2 H20 > Tên chung: azithromycin dihydrat > Tên khoa học: Methyl-aza-l l-desoxo-10 homoerythromycin A. > Tên khoa học đầy đủ: (2R,3S,4R,5R,8R,10R,llR,12S,13S,14R)-13-[(2,6-dideoxy-3-C-methyl- 3-0-methyl-a-L-ribo-hexopyranosyl)oxy]-2-ethyl-3,4,10-trihydroxy- 3,5,6,8,10,12,14-heptamethyl-11 - [[3,4,6-trideoxy-3-(dimethylamino)- Ị3-D- xylo-hexopyranosyl]oxy]-1 -oxa-6-azacyclopentadecan-15-on dihydrat. 3 > Một số biệt dược: Zithromax, Opeazitro, Aziwok, Azolide, Zitromax, Azithral, Zitrocin, Azicine, Aziphar, > Tính chất vật lý: ■ Bột kết tinh màu trắng. ■ [c O d 20 từ "45° đến -49° (dung dịch 20mg/ml ethanol) ■ Khó tan trong nước, tan trong dung môi hữu cơ: methanol, ethanol > Tính chất hóa học: ■ Tính base: do các osamin (đường amin) va mang lại, pKa = 8,74 [27]. ■ Tạo muối dễ tan trong nước với các acid vô cơ và hữu cơ. ■ Phản ứng màu: với các acid HC1, H2S04 đậm đặc cho màu. ■ Hấp thụ UV: do có vòng lacton có nhiều dây nối A sẽ hấp thụ ánh sáng ở vùng tử ngoại xa. > Tác dụng: Azithromycin là một kháng sinh mới có hoạt phổ rộng thuộc nhóm azalid. Thuốc có tác dụng diệt khuẩn mạnh, có tác dụng tốt trên các vi khuẩn Gram dương như Streptococcus, Pneumococcus, Staphylococcus aureus Có tác dụng tốt trên các vi khuẩn Gram âm như: Haemophilus influenzae, Neisseria gonorrhoeae, có tác dụng vừa phải trên E.coli, Salmonella enteritis, Salmonella typhi, Enterobacter > Cơ chế tác dụng: Azithromycin gắn với ribosome 50s của vi khuẩn gây bệnh, ngăn cản quá trình tổng hợp protein của chúng. > Chỉ định: Dùng trong các trường hợp nhiễm khuẩn do các vi khuẩn nhạy cảm với thuốc như: nhiễm khuẩn đường hô hấp dưới (viêm phế quản, viêm phổi, nhiễm khuẩn da và mô mềm, viêm tai giữa), đường hô hấp trên (viêm xoang, viêm họng, viêm amidan), nhiễm khuẩn đường sinh dục chưa biến chứng do Chlamydia trachomatis hoặc Neisseria gonoưhoeae không đa kháng. 4 > Liều lượng và cách dùng: Azithromycin dùng 1 lần mỗi ngày, uống 1 giờ trước bữa ăn hoặc 2 giờ sau khi ăn vì thuốc có thể gắn với thức ăn và không được hấp thu. ■ Người lớn: bệnh đường sinh dục lg (liều duy nhất), các chỉ định khác ngày đầu tiên uống 1 liều 500mg, và dùng 4 ngày nữa với liều đơn 250mg/ngày. ■ Trẻ em: ngày đầu tiên 10mg/kg thể trọng và tiếp theo 5mg/kg mỗi ngày, uống một lần mỗi ngày. > Chống chỉ định: Không sử dụng cho người bệnh quá mẫn với azithromycin hoặc bất kỳ kháng sinh nào thuộc nhóm macrolid. > Dạng bào chế: ■ Viên nang azithromycin dihydrat tương đương azithromycin 250 mg và 500mg. ■ Bột pha hỗn dịch uống azithromycin dihydrat tương đương 200mg azithromycin / 5ml, lọ bột đông khô pha tiêm 500mg ■ Viên nén và viên nén bao phim tương đương azithromycin 125mg, 500mg; viên nén phân tán tương đương azithromycin lOOmg. 1.1.2. CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG AZITHROMYCIN 1.1.2.1. Phương pháp vi sinh vật. [16] [23] Khuyếch tán trên thạch, nuôi cấy và chế tạo nhũ dịch, đo đường kính vòng vô khuẩn. Có thể định lượng dùng chủng vi khuẩn: > Bacillus pumilus CMCC (B) 63202. > Bacillus pumilus NCTC 8241. > Micrococcus luteus ATCC 9341. 1.1.2.2. Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao vói detector điện hóa. [26] Định lượng theo chương trình sau: 5 [...]... rồi đo A như khi đo một chất 1.2.2.8 Phương pháp tạo cặp ion - chiết đo quang (hay phương pháp acid màu) [4][9][13][14] V Nguyên tắc của phương pháp chiết tạo cặp ỉon Các cation và anion hữu cơ có khả năng chiết được bằng dung môi hữu cơ sau khi được tạo thành cặp ion Khi cho một ion tác dụng với một ion trái dấu có thể hình thành một cặp ion giống như phân tử trung hoà về điện và có thể chiết bằng. .. cho sự kết hợp ion dễ dàng Vậy các chất gây muối kết làm tăng hiệu suất chiết cặp ion Ngoài ra, nồng độ thuốc thử , số lần chiết, thời gian chiết, sự bền vững của màu cặp ion, cũng rất cần lưu ý V ứng dụng của phương pháp chiết cặp ỉon trong phân tích: [4] > Chiết và đo quang: cho ion cần định lượng tạo cặp với một ion đối có màu rồi chiết vào dung môi hữu cơ và đo quang > Chiết và đo phổ hấp thụ tử... dạng cation dựa trên phản ứng tạo cặp ion với laurylsunfat (LS) hoặc dioctylsunfosuccinat (DOSS) VKỹ thuật chiết cặp ion - đo quang Cho ion cần định lượng tạo cặp ion với một ion đối thu được sản phẩm (có màu hoặc không màu có đặc tính quang học) Sau đó chiết bằng dung môi hữu cơ thích hợp rồi đem so màu hoặc đo quang xA"m yB(H+)" = Ax"m + By(H+)n (acid) (base) 16 (cặp ion) V Nguyên tắc định lượng azithromycin. .. azithromycin trong thuốc viên bằng phương pháp chiết tạo cặp ion - đo quang C21H |3Br 0 4S - o C2 1 C2 1 H 1 3Br O4 S - OH + H+ (I) (Anion) (Lục bromocresol) Cation(II) C 3381 173 -N 2 • 8 H 7 3 1^2 0 j2 + Cation (II) C21H1 Br O4 S - o 3 (Anion) C3gH73N2 012 C^H^Br O4S - o Cặp ion (III) Lục bromocresol là một acid hữu cơ (pKa=4,9)[28], trong môi trường nước phân ly tạo ra anion và proton H+ Azithromycin. .. số anion (alcaloid, phenothiazin) có hấp thụ tử ngoại nên có thể chiết vào dung môi hữu cơ dưới dạng cặp ion và đem đo mật độ quang > Chuẩn độ tạo cặp ion: có thể dùng phương pháp này để định lượng các anion là các chất diện hoạt dùng làm chất nhũ hóa trong dược phẩm và mỹ phẩm Nhưng phương pháp này được dùng phổ biến hơn nhiều trong các phòng kiểm nghiệm để định lượng các base hữu cơ quan trọng trong. .. có tay nghề ổn định ■ Trong một số trường hợp, có thể có ảnh hưởng của tá dược đến kết quả phân tích 18 PHẦN 2 THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 2.1 NỘI DƯNG, ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ứ u 2.1.1 NỘI DUNG NGHIÊN c ú u Tiến hành nghiên cứu, khảo sát các điều kiện để xây dựng phương pháp định lượng Azithromycin trong chế phẩm thuốc bằng phương pháp chiết tạo cặp ion - đo quang trên máy quang phổ thông... của azithromycin trên sắc đồ của dung dịch chuẩn và dung dịch thử, hàm lượng chất chuẩn, tính hàm lượng (%) của azithromycin khan so với hàm lượng ghi trên nhãn 2.2.3.2 So sánh kết quả của hai phương pháp So sánh độ lặp lại (test F) và so sánh giá trị trung bình (test T) đối với kết quả định lượng azithromycin trên mẫu viên nang Azicine giữa hai phương pháp tạo cặp ion chiết - đo quang và phương pháp. .. cặp ion chiết - đo quang và phương pháp HPLC Kết quả được trình bày ở bảng 2.7 30 Bảng 2.7 : Kết quả so sánh hai phương pháp định lượng azithromycin trên mẫu viên nang Azicine Hàm lượng % azithromycin theo phương pháp chiết cặp STT Hàm lượng % azithromycin theo phương pháp HPLC ion - đo quang 1 101,03 100,95 2 99,93 3 100,37 99,96 100,75 4 99,56 100,93 5 100,20 101,02 6 100,47 99,83 Xử lý thống kê... có thể chiết cặp ion: [ 14] ■ít nhất một trong hai ion tạo cặp phải có khối lượng lớn và kỵ nước ■pH của pha nước: Nếu acid HA có hằng số điện ly Ka, để ion hoá 1% tạo ra A thì: pH > pKa - 2 Base B có hằng số điện ly Kb, để ion hoá 1% tạo ra BH+ thì: pH < 16 - pKb Kết hợp hai điều kiện đó thì để tạo ra cặp ion [BH+A ], pH pha nước phải nằm trong giới hạn: pKa - 2 < p H < 1 6 - p K b Để chiết một ion, ... thẩm định phương pháp So sánh kết quả của phương pháp vừa xây dựng với phương pháp định lượng bằng HPLC 2.1.2 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN c ú u > Viên nang Azicine 250 mg của STADA-VN, SDK: VNB-0930-01 > Viên nang Azithromycin 250 mg của Traphaco - Việt Nam SDK: VNB-2357-04 > Viên nang Aziphar 250 mg của Mekophar, SDK: VNB-4140-05 > Viên nang Azithromycin 250 mg của XL Laboratories Pvt.Ltd SDK: VN-6204-02 > Viên