HNTS 2012 19 xác ĐỊNH tác NHÂN gây BỆNH TRƯƠNG BÓNG hơi TRÊN cá TRA pangasianodon hypophthalmus NUÔI THÂM CANH

XÁC ĐỊNH TÁC NHÂN GÂY BỆNH TRƯƠNG BÓNG HƠI TRÊN CÁ TRA Pangasianodon hypophthalmus NUÔI THÂM CANH Phạm Minh Trúc, Đoàn Nhật Tân, Phạm Minh Đức và Từ Thanh Dung TÓM TẮT Mục tiêu đề tài nhằm xác định tác nhân gây bệnh trương bóng hơi trên cá tra nuôi thâm canh ở một số tỉnh Đồng Bằng Sông Cửu Long. Tổng thu là 56 cá bệnh (200-900g) với dấu hiệu bóng hơi trương to, chứa dịch và bóng khí. Cá bệnh được kiểm tra ký sinh trùng, vi khuẩn và nấm. Quan sát mẫu tươi dưới kính hiển vi, phân lập nấm trên môi trường GYA. Mẫu phân lập được ủ ở 28 o C từ 1- 4 ngày. Dựa trên đặc điểm hình thái khuẩn lạc, sợi nấm, cuống bào tử và bào tử. Kết quả phân lập được giống vi nấm Fusarium sp. trên cá bệnh. Hai chủng nấm F 1 P 2 và F 12 P 2 từ cá bệnh được chọn gây cảm nhiễm khẳng định tác nhân; gồm 5 nghiệm thức với 10 cá/nghiệm thức và 3 lần lập lại. Kết quả là tỉ lệ biểu hiện trương bóng hơi của cá tra giống khỏe tiêm F 1 P 2 mật độ 8x10 6 và 8x10 3 bào tử/ml lần lượt là 46,15 % và 3,33%; trong khi tiêm F 12 P 2 mật độ 6x10 6 và 6x10 3 bào tử/ml lần lượt là 13,33% và 0%. Nghiệm thức đối chứng tỉ lệ sống 100% và tỉ lệ nhiễm nấm 0%. Kết quả giải trình tự gen 28S rRNA cho thấy F 1 P 2 và F 1 P 2 -tái định danh là loài Fusarium oxysporum; F 12 P 2 và F 12 P 2 -tái định danh là loài Fusarium subglutinans. Kết quả cũng khẳng định 2 loài nấm này là tác nhân chính của bệnh. Từ khóa: Fusarium sp., bệnh trương bóng hơi, Pangasianodon hypophthalmus 1. GIỚI THIỆU  !! "#$%#&'()*+*!!!#,-.+(/"0! "123!-"!1' ()4(5*%6676767#!!#89:6 (;' ;+*:<"6,"()-=4#>6 <?+'+' ;(5@'+' ; A=BCDE6FGHHI#$'JK"'C6LMMMN6"'(;' ;A.>O P6LMMHN6!QRPhialophora spp-0+' ;S,PT(;AU#C6 LMMHN-P+6V(;' ;W+0!X-Y6( ?+'!Z((;[&-PQ,":  *&'(;' ;+6\ 0!" +%C"('[&!20]#&'2- 2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Mẫu cá =$'(;' ;(/Q%\FM"JSP6^: P;6_96.%PC-P`$0!aH'(;' ;!FFB' 'A30(/LMMbGMMN6(/<cLMFF-=$(/10,!([I .d3!.be"PdbS,3^:P;-=$(/ I"!- 2.2 Phân lập và định danh nấm 2.2.1 Kiểm tra bệnh cá P%!BBI>+;266f6' ;aH'- "!62+'(;'+"' ;' ""g'0CA*hMM"4 *FMMMNZ(/Q-P'B0fBi!- 2.2.2 Phân lập nấm 1$*/"4'!"j(/jL0:2(<0IAM6kal^0N >-d :$'i!"m()9n_ '`_0 !dC"A00(/B"aMMop0q0",N,%,BiAr#s6 FGtGN-Sm(/JLk M ^\Lgh!BQ-=$%u Lgh0: :-e :!10," &#6R- 2.2.3 Định danh nấm (/&#C"B 0",#Cr""et al.,ALMMMN#Q!"4Bi0, +()9n_v4?'!"j6/vBI('!"j!/-eI ((/"!IC"RP&OwALMMLN- x(;+0BI(/QC"#Cr""et al.ALMMMN2 4?'!"j!/-x(;!(/Q(540C 0+2C?1 0 '+#(!1i'y(-d 7B< ()9n_AF*F*FN(0+0C!!"h4'+B<-P(/ 4"mC>-Sm(/JLk " ^\agt!"'" 0C-e 00C!4+0CBI z3<""'0C-=$ (/<&'yBC"#"24?- 2.3 Thí nghiệm cảm nhiễm tái định danh Địa điểm và cá cảm nhiễm: <B{CAFagLaN(/:#(|Fa!!B a('<I-PI(/Q,.d3!.b P()S,3^:P;"}F!R- Chủng nấm: r*:<"\0f5~ F x L !~ FL x L < Fusarium sp. (/3RB•&'-d<0(/ '!"j(/*&'y'%:-=f'!"jI0:0(/0!k*FM H Af"N!k*FM }  '!"jp0AfN<~ F x L vH*FM H  Af"N!H*FM }  '!" jp0AfN<~ FL x L - Phương pháp cảm nhiễm5(;+(/j#uR'y+M6F0 ##&'!"j!"I';-Y0<(/+M6F0(< 0]AM6kal^0N>-PIa6q FM }0:0f0,-d<)RB(v"cc+L0:p!! B&Bw€+()h!p0:-d<%f0,!I$ 0))*&Q#:'- A C B 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Dấu hiệu bệnh lý 9:6()4 '(;' ;'>} %a. x:0(; ' ;c36;< %#"'{c)#!- 9",R•6",'? ()  B      \  '+  "!- R46';0))')"( 0(B{Q(BB‚C" 'R0J0"@\:% 0(-T4(0!' ; (;  6  !  '   ;  ( #:6'+"#&!'  BI  Ar?  F_N-  e    $  (; :'+"' ;A*FMMMN '!"jAr?F.!F^N!/ - 3.2 Kiểm tra bệnh cá P%!BaH'?L0",B]>+0!>4) ATrichodinaN!FH ADactylogyrusN()R'?FBI >p&()-e?B]>"' ;-e%2BBi 0f(/FPseudomonassp.%€0FMl-P"B62$(;+:%  #(;' ;*'!"j!/- 3.3 Phân lập và định danh nấm P\aHALMMgGMMN(;' ;ƒ0f(/hh%tk6atl-TQ !"4?v<Bi0,+()9n_v4/ !'!"j60f(/*&0!<Fusariumsp-, :* <!0!FMMl"`hh0f- e%2?QCLkdK_!+.U_dPds_K^rhAL 0f\'~ F x L !~ FL x L vL\R~ F x L g0f! ~ FL x L g0fN*&(/~ F x L !~ F x L g0f0!0"!Fusarium oxysporumv~ FL x L !~ FL x L g0f0!0"!Fusarium subglutinans. Đặc điểm Fusarium sp.:+()9n_6Bi0,JLk „ ^6()BI Bi0,,hMbaMt!- Hình 1: Mẫu cá tra bệnh: (A) Cá trương bóng hơi bên trong chứa dịch và bóng khí, (B) Bào tử nấm bên trong bóng hơi (x1000), (C) Bào tử nấm bên trong bóng hơi (cotton-blue, x1000). A B E F D C ei0, !,6/7B‚C"[[!,3 B{'4()Ar?L_!L.N-d/ c!Ar? L^N()BIL6agao-^<'!"jAr?L~N-.!"j L#,5 ,'!"j!'!"j6B*'!"j#!-^,'!"j ?; "!{:6 \FgacAr?LT!LsN- ^c!"B"0",#Cr""et al.ALMMMN*& 4 +<Fusarium sp P:<*<Fusarium sp.0!FMMl"`hh 0f(/- 9<!(/?+*-=<+'CJ CP. japonicusAs!…C#6FGtLve"!r6LMMaN6†!+>Homarus americanusAUC!~"6FGtaN*&0!#"Fusarium sp.9:6Fusariumsp. Hình2: Đặc điểm hình thái Fusarium oxysporum. (F 1 P 2 ): (A) Khuẩn lạc chủng F 1 P 2 trên môi trường GYA ở 28 o C sau 7 ngày nuôi cấy, (B) Khuẩn lạc mặt dưới, (C) Sợi nấm phân nhánh có vách ngăn (mũi tên đỏ) (cotton- blue, x1000), (D) Đại bào tử (cotton-blue, x1000, (E) Cuống bào tử (mũi tên xanh) (nhuộm cotton blue, x1000) và (F) Cuống bào tử (cotton- blue, x1000) Z(/?+'‡0}MlAP:3P6LMFMN6+ 0 Fh6}lAU(^IP!6LMFMN- ?6<!(/?'+"!;f-(f60! B%2:+0f(/Fusarium sp.+' ;A2N- 3.4 Thí nghiệm gây cảm nhiễm 3.4.1 Dấu hiệu bệnh lý e%22#'0]RL~ F x L AFusarium oxysporumN! ~ FL x L AFusarium subglutinansN"#'0]"!Q+?(;Q-dL !R6L+f"6 #*%"!6c'y6 ';B&(6';*"7<6j'u!%<-=q!B"Lg}" %p'-P!B@"#!agH!-O(/%()\H!G <- 1'+~ F x L Ak*FM H '!"jp0N\<:ˆJ6!"",' BB)-P+6B)*\<:ˆˆˆ"%0†B%†I -9",!<"!Q+;6()';J4'!%#:-P'? Lba!Ip'-^'0))B"Lg}!%•-P+6 <'B"Lh0!B-P"B6~ FL x L AH*FM H N:ˆ"% B%†IBB)- ^+fLB''+"!- 3.4.2 Mức độ gây bệnh e%20f\' ;(/+~ F x L " kMlRJf "vLMlRJf-S<6f!;ZR-!€0' (;' ;Jf"!0:0(/0!hH6Fal!}6}}l-P"B6<+ ~ FL x L  ?€0R0!kMlJf"!}6}}lJf-P+6€0 ''?;€ F}6}}lJf"!MlJf- e%2"6€0RJf"(;(;JL+-!B%2 ''+0"-S! #"f+~ F x L AF.oxysporumN ";~ FL x L AF.subglutinansN-?%6Jf"L :'*f!" ;-P+6L )R((~ FL x L f;? %B)''-S!ZI(/y+~ FL x L fB0f(/-T"f'!"j++#(/:'- Y'<€0R0!Ml!€0<,FMMl}F!R- 4. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 4.1 Kết luận TQ!"4?!BI('!"j6/64<'!"j!'!"j& #(/hh0f+'(;' ;<Fusarium sp. %‡0FMMl+`aH'- e%2?QCLkdK_!+.U_dPds_K^r&#(/~ F x L ! ~ F x L g0f0!0"!Fusarium oxysporumv~ FL x L !~ FL x L g0f0!0"!Fusarium subglutinans. e%2"L0"!F. oxysporum ! F. subglutinans 0!I '!- e%2R"€0''+~ F x L 0:0(/0!hH6FalAf"N !}6}}lAfN!+~ FL x L 0:0(/0!F}6}}lAf"N!MlAfN- 4.2 Đề xuất P(;' ;+((/+-?f6%u+<g  4&<!0!'%- LỜI CẢM ƠN P*'!{0['%;%Q†|!,"B'.d 3!.Pd6e"6S,3^:P;"<)Q+ ,e"Pd-‰!'%;Š TÀI LIỆU THAM KHẢO .>OP6LMMH-.Rf-.3:L- +F5kkgLFG- #Cr""69-d-6‹-9"6‹-9C@#=-‹-~C-LMMM-_0"Œ00Œ-L#C#"- ^C0'C""C00C-FFLH- s6d-#P-…C#6FGtL-_Fusarium-"C#D'0B00#CC"ŒCB DAPenaeus japonicus .CN-.00C"ŒC‹CC"C"ŒCŒŒCC }kAFFN5FLa}gFLHM- r6 e- #  d- s6 FGtG- d#C " C "C Œ   "Œ  " 0""gˆˆˆ-TCC0"C "Œ C C#Œ" =9gŒ- ~x"0"- F}A}N5FhtgFaL- e"6U--#e-r6LMMa-~C"ŒFusarium oxysporum ŒC"0C#B DAPenaeus japonicasN ‹-~x"0"hMAhN5FGagFGH- UC6 T- - # ^- P- ~"C- FGta- _ " "Œ C  _C  0"'C Homarus americanusC#'Fusarium-‹"0"ŒˆCC'CLa5L}GgLha- U(^IP!6LMFM-P?<:'()4+0 AChanna striataN"" -Ufc^"3-e"P6S,3^:P;- U#C6LMMH-9"C06dD'0##C6xC#xC"C-ˆ5~C"et al.,As#"N-dC"0""ŒŒ5_C*#0"Œ"0CC0C"# CC"C#CC5FkkgFG}- RP&Ow-LMML-U]3A:QfN-!*'e"3!e•f-FMt - K"'C-K-‹#r-T-K"#C6LMMM-x""0"#C"0"C0C"-ˆ5 K"'CAC#"N-~"0"5k}gkh- P:3P6LMFM-x0f!&#+AAnabas testudineusN -Ufc^"3-e"P6S,3^:P;- ABSTRACT The purpose of study was to determine the cause of swimming bladder inflammation (SBI) on striped catfish (Pangasianodon hypophthalmus) in the Mekong Deta. The study were colleted 56 diseased fish with the clinical signs such as: swollen swimming bladder with fuild and air-bubble inside. All diseased fish were examined with microscopy and cultured on GYA medium, then incubated at 28ºC for1- 4 days. Fungi Fusarium sp. was identified in most of diseased fish, that based on the morphological characteristics, colony pigmentation, hyphae, conidiopores and conidia. Two F 1 P 2 and F 12 P 2 isolates were chosen for infected experiments. The experiments were devided into 4 groups of the healthy fingerling catfish to determine the cause of this disease. Experimental fish were injected at the different concentrations of conidia solution, and 1 control group with distill-water. The experiments were done with triplicate. Results showed that fish with (SBI) injected at high dose (8x10 6 conidia ml -1 ) and a low dose (8x10 3 conidia ml -1 ) of the F 1 P 2 isolation reached 46,15 % and 3,33%, respectively. While, F 12 P 2 isolation with SBI rate at a high dose (6x10 6 conidia ml -1 ) and a low dose (6x10 3 conidia ml -1 ) reached 13,33% and 0%, respectively. These isolations were confirmed basing on molecular techniques with 28S rRNA genes showed that F 1 P 2 and injected F 1 P 2 were Fusarium oxysporum; F 12 P 2 và injected F 12 P 2 were Fusarium subglutinans. The results showed that Fusarium sp. was main agent to cause SBI disease on striped catfsh. . xác định tác nhân gây bệnh trương bóng hơi trên cá tra nuôi thâm canh ở một số tỉnh Đồng Bằng Sông Cửu Long. Tổng thu là 56 cá bệnh (200-900g) với dấu hiệu bóng hơi trương to, chứa dịch và bóng khí XÁC ĐỊNH TÁC NHÂN GÂY BỆNH TRƯƠNG BÓNG HƠI TRÊN CÁ TRA Pangasianodon hypophthalmus NUÔI THÂM CANH Phạm Minh Trúc, Đoàn Nhật Tân, Phạm Minh Đức và Từ Thanh Dung TÓM TẮT Mục tiêu đề tài nhằm xác. sp.:+()9n_6Bi0,JLk „ ^6()BI Bi0,,hMbaMt!- Hình 1: Mẫu cá tra bệnh: (A) Cá trương bóng hơi bên trong chứa dịch và bóng khí, (B) Bào tử nấm bên trong bóng hơi (x1000), (C) Bào tử nấm bên trong bóng hơi (cotton-blue, x1000). A