Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống
1
/ 52 trang
THÔNG TIN TÀI LIỆU
Thông tin cơ bản
Định dạng
Số trang
52
Dung lượng
1,55 MB
Nội dung
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM HÀ NỘI 2 NINH THỊ NHƢ QUỲNH PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN MỘT SỐ CHỦNG XẠ KHUẨN SINH KHÁNG SINH TỪ VÙNG RỄ CÂY NGẢI CỨU KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Vi sinh vật học HÀ NỘI, 2014 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM HÀ NỘI 2 NINH THỊ NHƢ QUỲNH PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN MỘT SỐ CHỦNG XẠ KHUẨN SINH KHÁNG SINH TỪ VÙNG RỄ CÂY NGẢI CỨU KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Vi sinh vật học Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS. DƢƠNG MINH LAM HÀ NỘI, 2014 LỜI CẢM ƠN Tôi xin bày t lòng bin TS. Dƣơng Minh Lam n tình ng d tôi trong quá trình thc hi tài. Tôi xin chân thành c phòng thí nghim Vi sinh, khoa Sinh - i hm Hà N. Tôi chân thành co Ti hm Hà Ni 2, Ban ch nhim khoa Sinh - o mu kin cho tôi hc tp và hoàn tài. Tôi xin cy cô và bng viên, to mu ki tôi trong sut th tài. Li cc nhi thân yêu ng tôi. Hà N Tác gi Ninh Th nh LỜI CAM ĐOAN u ca riêng tôi. Các kt qu nghiên cu, s lic trình bày trong khóa lun là trung thc và không trùng vi công trình ca các tác gi khác. Hà N Tác gi Ninh Th nh MỤC LỤC M U 1 1. Lí do chn tài 1 2. M tài 2 3. Ni dung nghiên cu 2 2 m mi c tài 2 . TNG QUAN TÀI LIU 3 1.1. V trí và phân loi x khun 3 1.1.1. V khun trong sinh gii 3 khun 3 c s phân loi x khun 3 1.1.2.2. Mt s i x khun 5 m sinh hc ca x khun 9 m hình thái ca x khun 9 1.2.2. Cu to x khun 10 1.2.m sinh lý, sinh hóa ca x khun 10 1.2.4. Sinh sn ca x khun 12 1.3. Cht kháng sinh t x khun 12 1.3.1. Khái nim cht kháng sinh 12 c s nghiên cu cht kháng sinh 12 1.3.3. S hình thành cht kháng sinh x khun 14 1.3.4. Các yu t n sinh tng hp cht kháng sinh 15 1.3.4.1. ng cu kin nuôi cy 15 1.3.4.2. ng ca thành phng lên men 16 1.4. Tình hình nghiên cu trên th gii và Vit Nam v kháng sinh 17 1.5. Cây ngi cu 18 . U 20 2.1. Nguyên liu và vi sinh vt 20 2.1.1. Vi sinh vt 20 2.1.2. Hóa cht và thit b 20 ng 21 ng phân lp, bo qun và gi ging x khun 21 ng th hot tính kháng sinh 21 u 21 y mu 21 2.3.2. Phân lp tuyn chn x khun 22 khun 23 nh hot tính kháng sinh 23 ng kê và x lý kt qu bng toán hc 25 . KT QU VÀ THO LUN 26 3.1. Phân lp x khun trên vùng r cây Ngi cu 26 3.2. nh kh a x khun 30 m hình thái và sc t tan ca các chng x khup 32 3.3.1. Nghiên cm khun lc các chng x khup 32 3.3.2. Nghiên cu hình dng cung sinh bào t ca các chng x khun NR34 p 35 3.3.3. Nghiên cu sc t tan ca chng x khup 36 KT LUN VÀ KIN NGH 41 TÀI LIU THAM KHO 42 CÁC TỪ VIẾT TẮT m-ADP : meso-Diaminopimelic Acid CFU : Colony Forming Unit CKS : Cht kháng sinh DNA : Deoxyribonucleic Acid HSCC : H st HSKS : H si khí sinh HTKS : Hot tính kháng sinh ISP : International Streptomyces Project VSV : Vi sinh vt : Vi sinh vt kinh VK : Vi khun RNA : Ribonucleic Acid rRAN : Riboxom Ribonucleic Acid PG : Peptido Glycan G + G - : Gram âm DANH MỤC BẢNG VÀ HÌNH Bng 3.1. Các chng x khun phân lc t vùng r cây Ngi cu 27 Bng 3.2. Kt qu kho sát kh a các chng x khun phân lc t vùng r cây Ngi cu 30 Kt qu thng kê hot tính kháng sinh các chng x khun phân lp t vùng r cây Ngi cu 31 Bng 3.4. m khun lc ca các chng x khun nghiên cu 33 Bng 3.5. Sóm màu 34 Bng 3.6. m sc t tan ca chng x khun nghiên cu 37 Hình 1.1.a. Ngi cu 19 Hình 1.1.b. Vùng r Ngi cu 19 Hình 3.1. Khun lc x khun 28 Hình 3.2. Mt s chng x khun phân lp 29 Hình 3.3. Hình nh th hot tính kháng sinh ca mt s chng x khun nghiên cu 31 Hình 3.4. Nuôi cy 2 chng NR34 và ND2 35 Hình 3.5. Cung sinh bào t và bào t ca chng ND2, NR34 36 Hình 3.6. Sc t tan ca mt s chng x khun phân lc 39 Trường Đại học Sư phạm Hà Nội 2 Khóa luận tốt nghiệp Ninh Thị Như Quỳnh 1 K36B - Sinh MỞ ĐẦU 1. Lí do chọn đề tài Tìm ra thu cha bi, t c ca nhân loi. n ra Penicillin - mt CKS có ngun gc t nm Penicillium. t nhóm các nhà khoa hc mi tách chic Penicillin. K t i chính th cha b ng vt và s dng trong nhiu ngành khác. Tuy nhiên, vic s dng các CKS không hn s xut hin ngày càng nhiu các VSV gây bnh có kh i các thuc kháng sinh hic bit là nhiu loài VSV có kh u CKS có c c tìm ra nhng CKS mi, nht là các CKS có cu trúc hóa hc t nhiên do chính VSV tit ra cc quan tâm nhi Cho ti nay khot kháng sinh hin bit trên th gii thì có ti 80% là do x khun sinh ra. Trong s n gc t các loi x khun hi Micromonospora, Actinomadura, Actinoplanes, Streptoverticillium, u x khun hip nhiu cht kháng sinh có giá tr gentamixin, tobramixin, vancomixin, rosamixin. Ngoài ra, x khun tham gia tích cc vào các quá trình chuyn hoá vt cht trong t nhiên sn xut nhiu enzyme t s axit amin và axit hu Mt s x khun có th gây bng vt. Xut phát t nhng yêu cu thc t trên, t ng nghiên cu trên th gii hi góp phn khai thác ngun VSV vô cùng phong phú ca vùng r cây Ngi cu ti c hi tài: p và tuyn chn mt s chng x khun sinh kháng sinh t vùng r cây Ngi c Trường Đại học Sư phạm Hà Nội 2 Khóa luận tốt nghiệp Ninh Thị Như Quỳnh 2 K36B - Sinh 2. Mục tiêu đề tài Phân lp và tuyn chn mt s chng x khun có hot tính kháng sinh có nhiu trin vng ng dng trong thc t. 3. Nội dung nghiên cứu 3.1. Phân lp và thun chng x khun t các mt, mu r cây Ngi cu khu vc Xuân Hòa, 3.2. Kim tra HTKS ca các chng x khun p, la chn ra các chng có HTKS cao. 3.3. Nghiên cm hình thái và sc t tan các chng x khun phân lp c. 4. Ý nghĩa 4.1. Ý n Góp phn i nhng hiu bit v i sng t nhiên ca vi sinh vt nói chung và x khu tài cho phép hi vai trò ca x khut, kh a x khun. 4.2. Ý ngha thc tin Tuyn chn mt s chng x khun có hot tính kháng sinh cao, ng dng các chng x khu i sng (trong y t các chng x khun có hot tính kháng sinh cao này có th to ra các ch phm thuc kháng sinh phc v cho cha bnh, y t 5. Điểm mới của đề tài Tuyn chc 2 chng ND2 và NR34 cho hot tính kháng sinh cao ng còn l tip tc nghiên cu. [...]... thu đƣợc từ đất và 12 chủng từ rễ cây Ngải cứu Điều đó cho thấy trong đất có số chủng xạ khuẩn nhiều hơn so với trên rễ cây Ngải cứu Ninh Thị Như Quỳnh 26 K36B - Sinh Trường Đại học Sư phạm Hà Nội 2 Khóa luận tốt nghiệp Kết quả phân lập đƣợc trình bày ở bảng 3.1 Bảng 3.1 Các chủng xạ khuẩn phân lập đƣợc từ vùng rễ cây Ngải cứu Địa điểm Độ sâu Vành đai 5 cm Độ pha loãng Chủng xạ khuẩn 10-2 ND1, ND2 10-3... có khuẩn lạc hoặc các khuẩn lạc phát triển dày khít nhau Xạ khuẩn mới phân lập thƣờng có hoạt tính kháng sinh chống VSVKĐ, nên có thể xung quanh khuẩn lạc s có vòng vô khuẩn Một số khuẩn lạc xạ khuẩn thƣờng có dạng tia phóng xạ Quan sát các mẫu phân lập sau 5 - 7 ngày nuôi cấy tôi thu đƣợc 36 chủng xạ khuẩn khác nhau từ vùng rễ Ngải cứu của khu vực nghiên cứu Trong đó có: 24 chủng thu đƣợc từ đất và. .. cầm máu, sát trùng Hình 1.1.a Ngải cứu Ninh Thị Như Quỳnh Hình 1.1.b Vùng rễ Ngải cứu 19 K36B - Sinh Trường Đại học Sư phạm Hà Nội 2 Khóa luận tốt nghiệp CHƢƠNG 2 VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên liệu và vi sinh vật 2.1.1 Vi sinh vật Các chủng xạ khuẩn bao gồm các chủng phân lập đƣợc từ vùng rễ cây Ngải cứu khu vực Xuân Hòa, húc Yên, Vĩnh húc 2.1.2 Hóa chất và thiết bị Hóa chất Cao thịt,... ND35 Rễ NR8, NR13, NR23, NR25, NR29, NR36 Đất Mỹ ND7, ND15 10-3 7 cm 10-2 ND3, ND4 10-4 Vƣờn Yên ND5, ND6, ND21, ND22 Rễ NR18, NR19, NR30 9 cm 10-2 10-3 Đất Yên Mỹ ND16, ND21 ND11, ND28 10-4 Ruộng ND27, ND32, ND33, Rễ NR14, NR17, NR34, (Ghi chú: kí hiệu chủng ND: xạ khuẩn phân lập từ đất xung quanh rễ Ngải cứu NR: xạ khuẩn phân lập từ rễ Ngải cứu) Trên môi trƣờng Gause I cả xạ khuẩn, nấm mốc và một số. .. Streptomycetaceae là họ xạ khuẩn có hệ sợi phát triển mạnh và đƣợc nghiên cứu khá kỹ ạ ạ khuẩn 1 1 2 1 Lược sử phân loại xạ khuẩn Trƣớc thế kỉ XIX, xạ khuẩn đƣợc xếp vào giới nấm (Fungi) Về sau các nghiên cứu cho thấy chủng có nhân nguyên thủy, kích thƣớc bề ngang nhỏ nhƣ vi khuẩn nên ngƣời ta xếp vào giới vi khuẩn (Eubacteria) Fosters là ngƣời đầu tiên phân lập một số xạ khuẩn có tuyến mắt của ngƣời và đƣợc Jonh... khuẩn bao quanh, khuẩn lạc to ( Hình 3.1 A,B ) B A Hình 3.1 Khuẩn lạc xạ khuẩn phân lập từ vùng rễ cây Ngải cứu A: khuẩn lạc xạ khuẩn 10 ngày B: khuẩn lạc xạ khuẩn 20 ngày Môi trƣờng Gause I có thành phần môi trƣờng thích hợp với sự phát triển của xạ khuẩn nên khuẩn lạc xạ khuẩn mọc trên môi trƣờng này khá tốt Ninh Thị Như Quỳnh 28 K36B - Sinh ... nghiệp 1.1.2.2 Một số phương pháp trong ph n oại xạ khuẩn Dựa vào sự phát triển của khoa học kĩ thuật, số lƣợng xạ khuẩn đƣợc mô tả ngày càng nhiều và chính xác trên cơ sở sự phát triển của sinh học phân tử, hóa sinh học, lý sinh học Để phân loại nhanh chóng và chính xác các xạ khuẩn đến loài, ngƣời ta đã sử dụng phƣơng pháp phân loại số (Numberical taxonomy), nghiên cứu chủng loại phát sinh ( hylogeny... thực vật: lá rụng, thân cành cây chết, xác các động vật nguyên sinh trong đất… cùng sản phẩm tiết của rễ cây sống làm cho hệ vi sinh vật đất phát triển phong phú trong đó có xạ khuẩn Tiến hành phân lập theo phƣơng pháp phân lập xạ khuẩn từ mẫu vùng rễ Ngải cứu (mục 2.3.2 chƣơng 2) Chọn các hộp petri mà ở đó các khuẩn lạc mọc riêng r , không thấy có nấm mốc, không xét các khuẩn lạc nhẵn, nhày, ƣớt, loại... TÀI LIỆU 1.1 Vị trí và phân loại xạ khuẩn 1.1.1 Vị tr ạ khuẩn trong sinh giới Xạ khuẩn (Actinomycetes) là một nhóm vi sinh vật Gram+ lớn trong giới Bacteria Theo Krassilnikov (1970) xạ khuẩn đƣợc tách thành một lớp riêng gồm có xạ khuẩn bậc cao có hệ sợi phát triển, có cơ quan sinh sản riêng và nhóm xạ khuẩn bậc thấp có hệ sợi kém phát triển, tế bào có dạng hình que hoặc hình cầu Xạ khuẩn có hệ sợi ngắn... bào tử, xạ khuẩn còn có hình thức sinh sản bằng khuẩn ty Các đoạn khuẩn ty gãy ra môi trƣờng phát triển thành hệ khuẩn ty [11] 1.3 Chất kháng sinh từ xạ khuẩn 1.3.1 Khái niệm chất kháng sinh Theo định nghĩa truyền thống thì chất kháng sinh (còn gọi là trụ sinh) là những chất có khả năng tiêu diệt vi khuẩn hay kìm hãm sự phát triển của vi khuẩn một cách đặc hiệu Nó tác dụng lên vi khuẩn ở cấp độ phân tử, . BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM HÀ NỘI 2 NINH THỊ NHƢ QUỲNH PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN MỘT SỐ CHỦNG XẠ KHUẨN SINH KHÁNG SINH TỪ VÙNG RỄ CÂY NGẢI CỨU KHÓA. Vi sinh vật học HÀ NỘI, 2014 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM HÀ NỘI 2 NINH THỊ NHƢ QUỲNH PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN MỘT SỐ CHỦNG XẠ KHUẨN SINH KHÁNG SINH TỪ. thành h khun ty [11]. 1.3. Chất kháng sinh từ xạ khuẩn 1.3.1. Khái nim cht kháng sinh n thng thì cht kháng sinh (còn gi là tr sinh) là nhng cht có kh t