Đề tài thảo luận ứng dụng enzyme pectinase

# # Trường Đại học Nha Trang Viện công nghệ sinh học và môi trường  Đề tài thảo luận: Ứng dụng của enzyme pectinase • Đoàn Văn Tiến • Tạ Hữu Minh • Trịnh Minh Tuấn • Cao Lê Tú • Đặng Đức Trung • Dương Thiện Chí • Nguyễn Cẩm Thạch • Phạm Xuân Lộc (46tp1 ) MSSV: 46134367  Ts. Vũ Ngọc Bội Danh sách nhóm: #  ! "#$%&' (#)*+,*- #./ #0'* #1- # • Enzyme pectinase là enzyme xúc Enzyme pectinase là enzyme xúc tác tác thủy thủy phân phân liên liên kết ester hoặc liên kết glucoside có trong mạch kết ester hoặc liên kết glucoside có trong mạch polyme polyme của của pectin. pectin. • Enzyme Enzyme pectinase pectinase trong tự nhiên có ở thực vật, vi trong tự nhiên có ở thực vật, vi sinh vật. sinh vật. • Ở thực vật, s Ở thực vật, s ự ự thủy thủy phân pectin trong tự nhiên phân pectin trong tự nhiên thường xảy ra khi trái cây chín. thường xảy ra khi trái cây chín. V V ì vậy ì vậy những những enzyme này enzyme này có vai trò rất quan trọng trong quá có vai trò rất quan trọng trong quá trình trình chín tự nhiên của trái cây hay trong quá trình chín tự nhiên của trái cây hay trong quá trình bảo quản trái cây và rau quả. bảo quản trái cây và rau quả. $23#4 # • Nguồn gốc: Nguồn gốc: Pectin tồn tại phổ biến trong thực vật, là thành phần Pectin tồn tại phổ biến trong thực vật, là thành phần tham gia xây dựng cấu trúc tế bào thực vật. tham gia xây dựng cấu trúc tế bào thực vật. • Ở thực vật pectin tồn tại ở Ở thực vật pectin tồn tại ở các các dạng dạng : : pectin hòa tan, pectin hòa tan, pectinic acid pectinic acid , pectic acid , pectic acid và protopectin. và protopectin. protopecnase $25#67$ # # 78$ • Cấu tạo phân tử pectin Cấu tạo phân tử pectin là một dẫn là một dẫn x x uất của uất của acid pectic, acid pectic acid pectic, acid pectic là một polymer của acid là một polymer của acid D-galacturonic liên kết D-galacturonic liên kết với nhau bằng liên kết với nhau bằng liên kết α α 1,4-glucoside. 1,4-glucoside. • Trọng lượng phân tử từ Trọng lượng phân tử từ 20.000 - 200.000 đvC. 20.000 - 200.000 đvC. 97 :"$: 97 :"$: - Tan trong nước, không tan trong ethanol. - Có khả năng tạo gel bền. Khả năng tạo gel phụ thuộc chủ yếu vào 2 yếu tố: chiều dài của chuỗi polymer và mức độ ester hóa (methoxyl hóa). # # D-galacturonic acid Methyl esters of galacturonic acid # PECTIN ( is a polymer of D-Galacturonic acid with a variable number of methyl ester groups) [...]... cấy trang đều lên mặt thạch  tạo khuẩn lạc riêng rẽ  cấy ria vài lần để tìm ra các chủng thuần chủng  kiểm tra độ tinh khiết của giống giữ giống Asp.niger trong môi trường Czapek # C THU NHẬN ENZYME PECTINASE Hiện nay người ta thu nhận pectinase chủ yếu từ VSV Có 2 phương pháp sản xuất pectinase: • 1.Thu nhận chế phẩm enzyme pectinase theo phương pháp bề mặt • 2.Thu nhận chế phẩm enzyme pectinase. .. TÁC DỤNG Endo PMG # SẢN XUẤT PECTINASE TỪ VI SINH VẬT 1 Ảnh hưởng của chất cảm ứng và nguồn carbon - Chất cảm ứng pectin (bắt buộc) - Nguồn cacbon: polysaccharide, disaccharide, monosaccharide 2 Ảnh hưởng của nguồn nitơ: Ví dụ: - Đối với Asp.niger thì sử dụng muối photphat diamon để sinh tổng hợp enzyme pectinase tốt nhất - Đối với Asp.awamori thì nguồn nito thuận lợi nhất là amon sunphat - Khi sử dụng. .. suất thu hồi enzyme và hoạt độ tính tương ứng # TINH SẠCH ENZYME PECTINASE BẰNG PHƯƠNG PHÁP LỌC MÀNG (cross flow membrane) • Tiến hành tủa enzyme từ 500ml dịch chiết thu được bởi ethanol 96o, nhiệt độ tủa 4oC, thời gian tủa là 1 giờ • Sau đó, ly tâm 5000 vòng/phút trong 15 phút thu enzyme thô Hòa tan enzyme thô này trong 500ml dung dịch đệm Mc Ilvaine pH 4,5 • Tiến hành lọc 500ml dung dịch enzyme vừa... Khử trùng 121oC trong 30' nuôi cấy theo phương pháp bề mặt # XÁC ĐỊNH HOẠT ĐỘ ENZYME PECTINASE Enzyme pectinase thô được xác định hoạt độ bằng phương pháp đo độ nhớt với nhớt kế Borosil: hút 2ml dung dịch enzyme thô 5% (w/v) phản ứng với 18ml dung dịch pectin 1% ở pH 4,5 và nhiệt độ 40oC # HÀM LƯỢNG PROTEIN CỦA CHẾ PHẨM ENZYME ĐƯỢC XÁC ĐỊNH BẰNG PHƯƠNG PHÁP LOWRY • Dựa vào mức độ hấp thụ quang học...Phần 3: ENZYME PECTINASE # A PHÂN LOẠI PECTINASE Theo Koller và Neukoon (1966), nhóm enzyme này được phân chia: 1.Nhóm enzyme hydrolase Polygalacturonase (PG) EC 3.2.1.15 Polymethylgalacturonase (PMG) Endo – PMG Exo – PMG Polygalacturonase (PG) Pectinesterase (PE) EC 3.1.1.11 Endo – PG Exo – PG # 2.Nhóm enzyme transeliminase ( TE ) ( EC 4.2.99.8 ) Pectin–transeliminase... suất trên bề mặt màng không quá 5 Psi Thu dịch qua lọc và xác định hiệu suất thu hồi enzyme và hoạt độ tương ứng # KẾT QUẢ • Hoạt độ chung và hoạt độ riêng của chế phẩm pectinase thô (CP E) • Đồ thị tương quan giữa thời gian nuôi cấy v à hoạt độ của enzyme thô Quá trình sinh tổng hợp pectinase trên môi trường c ó chất cảm ứng là pectin của bột cà rốt bởi chủng Aspergillus niger có hoạt độ cao nhất sau... 8,97.10-2 UI/mg protein) • Do đó, thu nhận enzyme pectinase sau 48 giờ nuôi cấy và sau đó đem tiến hành tinh sạch # Phân tích chế phẩm enzyme pectinase bằng phương pháp lọc gel Bio Gel P 30 • Dung dịch enzyme xử lý theo phương pháp lọc gel Bio Gel P 30 như trên, kết quả sau khi lọc gel với tốc độ chảy qua cột 30ml/giờ thu được 2 peak chính • Trong đó , hoạt độ pectinase tập trung chủ yếu ở peak I, peak... SẠCH CHẾ PHẨM ENZYME PECTINASE BẰNG PHƯƠNG PHÁP LỌC MÀNG • Sử dụng bộ lọc membrane có kích thước phân đoạn rộng 50kDa cho kết quả như sau: • Sau khi lọc dung dịch enzyme, kết quả thu được khi lọc với tốc độ bơm 150rpm thu dịch qua lọc Kết quả thu được:  hiệu suất thu hồi enzyme 27,87%  hoạt độ đạt 87,98%  độ tinh sạch tăng 3,1 lần • Khi tăng tốc độ bơm lên 200rpm:  hiệu suất thu hồi enzyme 33,33%... dưới tác dụng của lực ly tâm trong dòng chảy sẽ đẩy một số phân tử trong màng mỏng theo dịch qua lọc ra phía ngoài Vì thế, chúng tôi nhận thấy với tốc độ bơm đầu vào 150rpm sẽ thực hiện quá trình tinh sạch tốt hơn # So sánh ho t riêng c a dung d ch enzyme tr c và sau khi l c màng # KẾT LUẬN • Chế phẩm enzyme pectinase được sản xuất từ chủng nấm mốc Asp.niger trên môi trường có chứa chất cảm ứng là pectin-bột... nhận chế phẩm enzyme pectinase theo phương pháp bề sâu # NGUYÊN LIỆU THU NHẬN ENZYME PECTINASE • Nấm mốc Asp.niger được giữ giống trên môi trường Czapek • Chuẩn bị bột cà rốt: cà rốt xay nhuyễn, sấy ở nhiệt độ 60oC cho đến khi độ ẩm cà rốt đạt 4% (nguồn pectin – chất cảm ứng) • Thành phần môi trường nuôi cấy thu nhận enzyme pectinase gồm: Cám gạo 65,5% Trấu 21,5% Bột cà rốt 11% (NH4)2SO4 2% Độ ẩm . enzyme phẩm enzyme pectinase theo pectinase theo phương pháp bề phương pháp bề mặt mặt • 1.Thu nhận chế 1.Thu nhận chế phẩm enzyme phẩm enzyme pectinase theo pectinase theo phương. D-Galacturonic acid with a variable number of methyl ester groups) # Phần 3: ENZYME PECTINASE # A. PHÂN LOẠI PECTINASE A. PHÂN LOẠI PECTINASE Theo Koller và Neukoon (1966), nhóm enzyme này được phân Theo. ! "#$%&' (#)*+,*- #./ #0'* #1- # • Enzyme pectinase là enzyme xúc Enzyme pectinase là enzyme xúc tác tác thủy thủy phân phân liên liên kết ester