NGHIÊN CỨU BIỆN PHÁP KỸ THUẬT CHĂM SÓC MỘT SỐ DÒNG BẠCH ĐÀN NUÔI CẤY MÔ GIAI ĐOẠN RA NGÔI TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC HÙNG VƯƠNG

Trong thực tế tỷ lệ sống của cây bạch đàn ở giai đoạn ra ngôi vẫn cònthấp do đó để nâng cao kỹ thuật ra ngôi cây bạch đàn đồng thời hoàn thiện quy trình nuôi cấy mô nên tôi tiến hành đề

Tên đề tài:

NGHIÊN CỨU BIỆN PHÁP KỸ THUẬT CHĂM SÓC MỘT SỐ DÒNG BẠCH ĐÀN NUÔI CẤY MÔ GIAI ĐOẠN RA NGÔI

TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC HÙNG VƯƠNG

CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI: TH.S TRẦN THỊ NGỌC DIỆP

PHẦN I ĐẶT VẤN ĐỀ

1.1 Tính cấp thiết của đề tài

Bạch đàn (Euclyptus Sp) là cây lâm nghiệp chiếm vị trí quan trọng

trong cơ cấu rừng trồng ở nước ta Cây bạch đàn không phải là loài cây mọc

tự nhiên trong các lâm phận Việt Nam Loài cây này xuất xứ từ nước Úc đượcdẫn giống bằng hạt đem về trồng ở nước ta vào khoảng thập niên 1950 và chothấy một số loài rất thích hợp với thổ nghi và khí hậu của Việt Nam, nhất là

có thể trồng tập trung thành rừng thuần loài hay trồng phân tán trong đất thổ

cư của nhân dân từ vùng đồng bằng cho đến các vùng bình nguyên và caonguyên Loài bạch đàn nói chung rất mau lớn, tán lá hẹp thưa, trồng trongvòng 5- 6 năm thì có chiều cao trên 7m và đường kính thân khoảng 9-10 cm

Bạch đàn là cây có vai trò quan trọng trong ngành sản xuất giấy ở nước

ta Người ta không chỉ sử dụng bạch đàn làm nguyên liệu sản xuất giấy màcòn sử dụng để làm đồ gia dụng, cây chống công trình…

Bạch đàn nuôi cấy mô có độ đồng đều cao hơn so với bạch đàn trồng từhạt hay giâm hom Do đó rừng bạch đàn trồng từ cây nuôi cấy mô có độ đồngđều rất cao Cây nuôi cấy mô giữ được đầy đủ đặc tính di truyền cho nên câysinh trưởng nhanh, rút ngắn được thời gian sinh trưởng

Ở nước ta hiện nay có nhiều giống bạch đàn khác nhau có tiềm năngnăng suất cao như các dòng: U6, UC1, UE27, UC24, PN47, PN10, PN24,PN14, PN21, PN108, PN3d, W4, W6, PN108… đã được công nhận là dòngtiến bộ kỹ thuật, trong đó một số dòng như U6, PN14, PN24 đã được sử dụngnhiều trong nuôi cấy mô và mang lại năng suất cao Còn các dòng khác đangtrong giai đoạn thử nghiệm và chúng tôi chọn 3 dòng UE3, UE23, UE27 đangtrong giai đoạn thử nghiệm làm đối tượng nghiên cứu

Cũng như các loại cây trồng khác thì việc đảm bảo nguồn gốc giống làviệc rất quan trọng, quyết định đến sinh trưởng và chất lượng của lâm phần

Chính vì vậy công tác nhân giống bạch đàn để phục vụ cho việc sản xuất đạitrà là việc rất cần thiết Việc nhân giống bạch đàn có thể nhân giống bằng hạt,giâm hom và nuôi cấy mô Trong công tác sản xuất giống bạch đàn hiện naythì phương pháp nhân giống bằng nuôi cấy mô đang được quan tâm ngàycàng nhiều Việc nghiên cứu nhân giống bằng phương pháp nuôi cấy mô làviệc làm thiết thực nhằm góp phần đẩy nhanh sản xuất cây con bằng nuôi cấy

mô phục vụ cho việc trồng rừng

Quy trình nuôi cấy mô tế bào trải qua các giai đoạn: tạo vật liệu khởiđầu, thiết lập hệ thống cấy vô trùng, nhân chồi, tạo rễ và chuyển cây ra đấttrồng Sau khi kết thúc giai đoạn tạo cây hoàn chỉnh, cây nuôi cấy mô đượcđưa ra môi trường tự nhiên Đây là giai đoạn chuyển cây đang sinh trưởngtrong điều kiện tối ưu về nhiệt độ, độ ẩm, pH, dinh dưỡng,….sang môi trường

tự nhiên Lúc này môi trường sống bị thay đổi đột ngột, cây bị “sốc” mạnhcho nên ảnh hưởng lớn đến tỷ lệ sống và hiệu quả kinh tế của việc nuôi cấy

mô bạch đàn Do vậy giai đoạn này đóng vai quyết định đến khả năng ứngdụng của quy trình nhân giống

Trong thực tế tỷ lệ sống của cây bạch đàn ở giai đoạn ra ngôi vẫn cònthấp do đó để nâng cao kỹ thuật ra ngôi cây bạch đàn đồng thời hoàn thiện

quy trình nuôi cấy mô nên tôi tiến hành đề tài: “Nghiên cứu biện pháp kỹ thuật chăm sóc một số dòng bạch đàn nuôi cấy mô giai đoạn ra ngôi tại Trường Đại học Hùng Vương”.

1.2 Mục đích và yêu cầu của đề tài

1.2.1 Mục đích

- Lựa chọn được dòng bạch đàn sinh trưởng tốt, tỷ lệ sống cao ở giaiđoạn ra ngôi

- Xác định giá thể phù hợp với bạch đàn nuôi cấy mô giai đoạn ra ngôi.

- Xác định được liều lượng phân bón thúc phù hợp cho bạch đàn nuôi

cấy mô ở giai đoạn ra ngôi

- Xác định được mức che sáng thích hợp nhất cho bạch đàn nuôi cấy

mô ở giai đoạn ra ngôi

- Xác định lượng nước tưới phù hợp cho bạch đàn nuôi cấy mô ở

giai đoạn ra ngôi

1.2.2 Yêu cầu

- So sánh tỷ lệ sống của các dòng bạch đàn nuôi cấy mô ở giai đoạn ra ngôi.

- Đánh giá khả năng sinh trưởng của các dòng bạch đàn nuôi cấy mô ở

giai đoạn ra ngôi

- Đánh giá mức ảnh hưởng của giá thể trồng đến sự sinh trưởng của

một số dòng bạch đàn nuôi cấy mô

- Đánh giá mức ảnh hưởng của liều lượng phân bón thúc đến sự sinh

trưởng của một số dòng bạch đàn nuôi cấy mô

- Đánh giá mức ảnh hưởng của mức che sáng đến sự sinh trưởng của

một số dòng bạch đàn nuôi cấy mô

- Đánh giá mức ảnh hưởng của lượng nước tưới đến sự sinh trưởng của

một số dòng bạch đàn nuôi cấy mô

1.3 Ý nghĩa khoa học và ý nghĩa thực tiễn

1.3.1 Ý nghĩa khoa học

- Kết quả nghiên cứu của đề tài sẽ góp phần bổ sung cơ sở lý luận cho

việc phát triển các dòng bạch đàn nuôi cấy mô

- Kết quả nghiên cứu là tài liệu cho các sinh viên, các nhà nghiên

cứu tham khảo

1.3.2 Ý nghĩa thực tiễn

- Đánh giá, lựa chọn được các dòng bạch đàn có tỷ lệ cây ra ngôi cao

- Lựa chọn được dòng bạch đàn nuôi cấy mô sinh trưởng tốt

- Nâng cao kỹ thuật ra ngôi bạch đàn nuôi cấy mô

PHẦN II TỔNG QUAN VỀ VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU

2.1 Đặc điểm thực vật của cây bạch đàn

Cây bạch đàn thuộc loài đại mộc, cao khoảng 50m, đường kính có thểlên tới 200 -300 cm Thân thẳng, tán thưa, phân cành cao Vỏ nhẵn màu trosau bong thành mảng dày, lớp vỏ mới lộ ra màu xanh xám hoặc xanh hồng cóánh bạc Cành non màu tím hồng, mảnh và hơi rủ

Lá đơn mọc cánh, hình ngọn giáo dài, đầu nhọn dần, đuôi nêm rộng,dài 10 -12cm, rộng khoảng 2cm, mép lá nguyên, gân giữa nổi rõ màu xanhvàng nhạt, gân bên nhỏ, hơi chếch và liền nhau ở mép lá

Hoa tự hình tán ở nách lá, 4 -5 hoa Nụ hình cầu hoặc hình trứng tròn,mũi dài gần bằng ống đài, gần tròn hoặc có mũi ngắn Quả hình bán cầu, dài0,7 -0,8 cm, đường kính 0,5 -0,6cm, mép quả lồi, mở lỗ, hạt nhỏ, nhẵn, màunâu vàng

Bạch đàn là cây sinh trưởng tốt trên đất ferarit đỏ vàng phát triển trênphiến thạch sét có thành phần cơ giới nhẹ, dễ thoát nước, tầng canh tác dàytrên 40cm, ít thích hợp là đất cát, cát di động, đất phèn, mùn trên núi, xói mòntrơ đá, thích hợp ở những nơi có lượng mưa bình quân từ 1500 -2500mm/năm, nhiệt độ bình quân từ 15oC- 19oC

Bạch đàn là cây có khả năng thích ứng rộng, có biên độ sinh thái rộngvới điều kiện đất đai và khí hậu, nó thường phân bố ven bờ nước và nhữngvùng ngập lụt theo mùa kéo dài nửa tháng

Bạch đàn là cây có khả năng sinh trưởng nhanh, có biên độ sinh trưởngrộng, dễ trồng trên nhiều dạng lập địa, năng suất cao, chu kỳ kinh doanh ngắn,

có khả năng chịu được gió bão tốt Hiện nay bạch đàn đang được trồng vớidiện tích khá lớn ở nước ta, là cây quan trọng để sản xuất bột giấy[10]

2.2 Cơ sở của nuôi cấy mô

Thuật ngữ học (terminology) Nuôi cấy mô (tissue culture) là thuật ngữ dùng để chỉ quá trình nuôi cấy vô trùng in vitro các bộ phận tách rời khác

nhau của thực vật Kỹ thuật nuôi cấy mô dùng cho cả hai mục đích nhângiống và cải thiện di truyền (ví dụ: giống cây trồng), sản xuất sinh khối cácsản phẩm hóa sinh, bệnh học thực vật, duy trì và bảo quản các nguồn gen quý.Các hoạt động này được bao hàm trong thuật ngữ công nghệ sinh học Thuậtngữ nhân giống in vitro (invitro propagation) hay còn gọi là vi nhân giống(micropropagation) được sử dụng đặc biệt cho việc ứng dụng các kỹ thuậtnuôi cấy mô để nhân giống thực vật, bắt đầu bằng nhiều bộ phận khác nhaucủa thực vật có kích thước nhỏ, sinh trưởng ở điều kiện vô trùng trong cácống nghiệm hoặc trong các loại bình nuôi cấy khác Trong thực tế, các nhà vinhân giống (micropropagators) dùng thuật ngữ nhân giống invitro và nuôi cấy

mô thay đổi cho nhau để chỉ mọi phương thức nhân giống thực vật trong điều

kiện vô trùng Thuật ngữ đồng nghĩa là nuôi cấy invitro (invitro culture) Nhân giống invitro và nuôi cấy mô bắt đầu bằng các mảnh cắt nhỏ của thực

vật, sạch vi sinh vật, và được nuôi cấy vô trùng[5]

Cơ sở khoa học của phương pháp nuôi cấy mô

Đối với thực vật nói chung, cây bạch đàn nói riêng để duy trì nòi giống củamình chúng đều phải thông qua cơ quan sinh sản hoặc chúng có khả năng táisinh từ các bộ phận của các cơ quan sinh dưỡng như lá, chồi, rễ, thân Nếuđưa các bộ phận của chúng vào môi trường thích hợp nó sẽ phát triển thành

rễ, mầm và hình thành cây con

Khi mô tế bào thực vật bậc cao bị thương thì vách tế bào sẽ hóa bầnlàm cho tế bào sống tách rời nhau Các tế bào sống còn lại phân chia nhiều lầnsong song với mặt cắt để hàn kín vết thương, loại mô đó gọi là mô sẹo(callus)

* Tính toàn năng ( Totipotence)

Năm 1902 lần đầu tiên nhà thực vật học người Đức Haberlandt đã đưa

ra quan niệm: "Mỗi tế bào bất kì (đã biệt hóa) lấy từ một cơ thể thực vật đều

có khả năng tiềm tàng để có thể phát triển thành cơ thể hoàn chỉnh" Theoquan niệm của sinh học hiện đại thì mỗi tế bào riêng rẽ đã biệt hóa đều chứatoàn bộ thông tin di truyền (ADN) cần thiết của cơ thể đó, nếu gặp điều kiệnthích hợp thì mỗi tế bào đều có khả năng phát triển thành một cơ thể hoànchỉnh, đó là tính toàn năng của tế bào thực vật[5]

Tính toàn năng của tế bào chính là cơ sở lý luận của nuôi cấy mô tế bàothực vật Cho đến nay, con người đã hoàn toàn chứng minh được khả năng táisinh một cơ thể thực vật hoàn chỉnh từ một tế bào riêng rẽ

* Sự phân hóa và phản phân hóa của tế bào

Sự phân hóa là quá trình chuyển hóa các tế bào phụ sinh thành các tế bàochuyên hóa đảm nhận các chức năng chuyên biệt

Tuy nhiên không phải tế bào chuyên hóa nào cũng mất đi khả năng phân hóacủa mình mà khi gặp điều kiện thuận lợi, trong trường hợp cần thiết, các tếbào này lại quay trở về dạng tế bào phôi sinh và phân chia liên tiếp Đó gọi làquá trình phản phân hóa[5]

Về bản chất thì sự phân hóa và phản phân hóa là một quá trình hoạthóa, ức chế các gen Tại một thời điểm nào đó trong quá trình phát triển cơthể, cứ một số gen được hoạt hóa để cho ra tính trạng mới, còn một số genkhác lại bị đình chỉ hoạt động Điều này xảy ra theo một chương trình đãđược mã hóa trong cấu trúc phân tử AND của mỗi tế bào khiến quá trình sinhtrưởng phát triển của cơ thể thực vật được hài hòa[5]

Quá trình phát sinh hình thái trong nuôi cấy mô, tế bào thực vật thựcchất là kết quả của quá trình phân hóa và phản phân hóa tế bào Kỹ thuật nuôicấy mô, tế bào xét đến cùng là kỹ thuật điều khiển sự phát sinh hình thái của

tế bào thực vật một cách có định hướng dựa vào sự phân hóa và phản phânhóa của tế bào trên cơ sở tính toàn năng của tế bào thực vật[5]

2.3 Tình hình nghiên cứu trong và ngoài nước về nuôi cấy mô bạch đàn

2.3.1 Tình hình nghiên cứu về nuôi cấy mô bạch đàn ở nước ngoài

Nuôi cấy mô là phương pháp phổ biến để nhân nhanh các loài cây trồngchất lượng cao Trong lâm nghiệp phương pháp này đã được áp dụng tươngđối sớm ở một số nước tiên tiến như Pháp, Đức, Braxin, Trung Quốc đểnhân nhanh một số giống có năng suất cao[8]

Năm 1978 đã có trên 20 loài bạch đàn khác nhau được nuôi cấy môthành công Các nhà khoa học Ấn Độ thành công trong việc nuôi cấy mô cácchồi bạch đàn Eucalyptus camandulensis, E trereticornis, E glubolus, E.torelliana

Cây mô có nguồn gốc ưu việt sinh trưởng nhanh gấp 3 lần và đồng đều hơn làcác cây mọc từ hạt cùng cây mẹ Tại Australia, nhân giống nuôi cấy mô đãđược áp dụng để nhân nhanh cho các cây được chọn có tính chịu mặn trongđất và đang được sản xuất với quy mô lớn cho các loài E camandulensis[2]

Ở miền Nam Brazil, loài cây dùng để trồng lại rừng phổ biến nhất làbạch đàn Eucalyptus dunnii Maid bởi vì tốc độ sinh trưởng nhanh, thân câythẳng, chống chịu được sương Áp dụng kỹ thuật nuôi cấy mô trong nhângiống đã giải quyết được vấn đề thiếu giống cho trồng rừng Mẫu cấy đượclấy từ hom của cây Eucalyptus dunnii trồng trong nhà kính, cấy trên môitrường MS, có thêm BAP và IBA đã cho kết quả tốt: cây bạch đàn con pháttriển mạnh, hệ số nhân cao[6]

Hiện nay, trở ngại chính của nuôi cấy mô bạch đàn là sự nhiễm khuẩnmẫu cấy, đặc biệt là đối với những mẫu bánh tẻ Có thể hạn chế nhiễm bằngcách xử lý mẫu bằng acid ascorbic và nuôi giai đoạn đầu tiên trong tối từ 3-7ngày Tỷ lệ ra rễ của bạch đàn cũng thấp, nhất là những giống còn chưa rõràng Búp non sau khi khử trùng, cấy lên môi trường MS có thêm BAP, NAAcho giai đoạn nhân chồi và IBA cho giai đoạn ra rễ Sau khi cấy 2 tháng thìchồi phát triển, ra rễ sau 3 tuần cấy lên môi trường ra rễ[4]

Nhân giống nuôi cấy mô đối với cây rừng đã thu hút những thành côngđáng kể, đây là kết quả quan trọng góp phần nâng cao năng suất rừng trồngtrên thế giới những năm gần đây Trong đó phải kể đến công nghệ nuôi cấy

mô bạch đàn ở Trung Quốc, Thái Lan, Brazin, Công Gô, Australia[2]

2.3.2 Tình hình nghiên cứu về nuôi cấy mô bạch đàn ở Việt Nam

Những năm gần đây, việc ứng dụng tiến bộ kỹ thuật về công nghệ tếbào thực vật trong công tác chọn giống cây rừng đã được thực hiện tại nhiềunước trên thế giới Ở Việt Nam nuôi cấy mô đã được phát triển từ những năm

70 Tuy nhiên, các ứng dụng về nuôi cấy mô trong lâm nghiệp còn nhiều hạnchế về kỹ thuật, quy mô, vốn đầu tư, dẫn đến giá thành cây con từ nuôi cấy môcao hơn nhiều so với cây hom và cây hạt do đó diện tích rừng trồng từ cây môchưa nhiều Mặc dù vậy, cây mô với các ưu điểm vượt trội như: có thể sản xuấtquanh năm không phụ thuộc vào mùa vụ, cần ít diện tích sản xuất, cây giống sảnxuất ra hoàn toàn sạch bệnh, đồng nhất về mặt di truyền, có độ trẻ hóa cao và có

bộ rễ giống như cây con từ hạt nên có khả năng sinh trưởng và phát triển tốt hơntrên hiện trường Nên trong thời gian tới cây con sản xuất từ nuôi cấy mô sẽ có vịtrí xứng đáng trong sản xuất lâm nghiệp[3]

Theo kết quả thử nghiện về dòng bạch đàn lai UR35 và dòng Pn3d chothấy môi trường thích hợp cho quá trình nhân chồi là với môi trường MS* (môitrường MS đã thay đổi về thành phần và nồng độ các chất khoáng, vitamin), có bổsung BAP với nồng độ 0,5mg/l Khi được nuôi cấy trong môi trường này, cácdòng bạch đàn nuôi cấy cho hệ số nhân chồi từ 6,7- 7,5 với chiều cao chồi trungbình đạt 2,4- 2,5 cm[3]

Môi trường IBA có tác dụng mạnh mẽ đến quá trình ra rễ, tỉ lệ ra rễ củabạch đàn khi được kích thích tạo rề bằng môi trường 1/2 MS* + IBA 1,5 mg/l+ ABT 0,1 mg/l và các chất phụ gia khác Tỉ lệ sống của các dòng bạch đàngiao động từ 72% đến 80%[3]

Mùa vụ thích hợp nhất cho nuôi cấy mô bạch đàn là tháng 4 đến tháng 9[3]

Môi trường tạo chồi và nhân chồi thích hợp nhất : MS* + 2mg B2+ 0,5mg/l BA + 1mg/l NAA +30g/l đường sucrose+ 5g/l agar, pH= 5[3].

Môi trường tạo cây hoàn chỉnh thích hợp 1/2 MS* + 1,5 mg/l IAB+0,1mg/l ABT + 15 g/l sucrose+ 5 g/l agar, PH= 5,8[3]

Dòng bạch đàn Eucalyptus urophylla (EU6) được Công ty giống câytrồng rừng trung ương tuyển chọn và được Bộ Nông nghiệp và Phát triểnnông thôn cho phép đưa vào trồng rừng từ năm 1998 Năm 2000 tiến hành thửnghiện nhân giống bằng phương pháp nuôi cấy mô Sau khi vi nhân giốngthành công, Trung tâm trồng thử nghiệm 3 địa điểm mang tính đặc trưng của

3 vùng đất khác nhau: Lâm trường Sông Kôn 10ha (tại xã Bình Tân, huyệnTây Sơn); Lâm trường Quy Nhơn 10ha (tại xã Canh Vinh, huyện Vân Canh);Công ty Nguyên liệu giấy Bình Định 5ha (tại xã Đakman, huyện Hoài Ân).Cũng trồng theo dạng thí nghiệm với mật độ 2000 cây/ha và 1660 cây/ha Sau

11 tháng trồng trên đất đồi trọc, đất rừng nghèo kiệt, tỷ lệ cây sống từ 97 98%, chiều cao cây từ 2,75 -4m, đường kính gốc từ 3,4 -4,9cm Cây có độđồng đều cao, tốc độ tăng trưởng nhanh, ít sâu bệnh, có khả năng thích nghivới nhiều chân đất Nếu so với bạch đàn ươm trồng bằng hạt đối chứng, chiềucao chỉ 2,4m đường kính gốc 2,42cm tỷ lệ cây chết sau khi trồng trên 15%,cây không đồng đều và phân ly cao Kết quả quả cho thấy, Lâm trường Bắc

-An Khê (Gia Lai): Lâm trường trồng 550.000 cây bạch đàn cấy mô, dòng U6lấy từ Trung tâm, sau 4 năm đường kính gốc 15cm cao 7m, năng suất chừng100m3/ha, cây ít phân cành, chưa thấy sâu bệnh, tính thích nghi cao.Trungtâm Giống cây trồng, dịch vụ Gia Lai: Năm 2002 Trung tâm trồng 500 ngàncây của Bình Định, hiện nay (sau hơn 3 năm) đường kính gốc đạt 10 -15cm,cao trên 7m Sau 5 năm khả năng sinh khối từ 130-150m3/ha Lâm trườngSông Kôn: Hiện nay Lâm trường có trên 400 ha bạch đàn Riêng giống U6phát triển rất nhanh, loại trồng năm 2005 nay có đường kính gốc 2,6-4,4cm[7]

Năm 2002 Bình Định đã nuôi cấy thành công bạch đàn EucalyptusUrophylla trong môi trường MS có chứa đường 30g/l và agar 7g/l Sản xuất 1triệu cây giống/năm thì tiền lãi thu được là 88,6 triệu đồng Giống bạch đànthường năng suất 80-90m3/ha Giống bạch đàn U.rophylla năng suất: 120-150m3/ha, tăng thu nhập cho người sản xuất từ 5- 8 triệu đồng/ha[1].

Năm 2007, Công ty Giống nông nghiệp tỉnh Điện Biên đã trồng thành công 22 vạn cây bạch đàn theo phương pháp nuôi cấy mô, mật độ 1.700 cây/ha trên diện tích 130 ha rừng kinh tế tại 5 huyện: Điện Biên, Điện Biên Đông, Mường Ẳng, Tuần Giáo và Tủa Chùa, tỷ lệ cây sống đạt tới 85%[9].

Để nâng cao số dòng bạch đàn sản xuất cây giống bằng công nghệ nuôi cấy mô cho nên chúng tôi tiến hành thử nghiệm ra ngôi 3 dòng bạch đàn nuôi cấy mô đó là các dòng: UC24, UC1, UE27.

PHẦN III ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

3.1 Đối tượng nghiên cứu

Đối tượng nghiên cứu là ba dòng bạch đàn nuôi cấy mô: dòng UE3, UE23,UE27

STT Tên dòng Loại dòng Quyết định công nhận giống

Địa điểm: Trung tâm thực nghiệm Trường Đại học Hùng Vương

Thời gian tiến hành: từ 12/2011 – 11/2012

Phạm vi nghiên cứu: Nghiên cứu khả năng sinh trưởng của của một số dòngbạch đàn nuôi cấy mô ở giai đoạn ra ngôi

3.3 Nội dung nghiên cứu

1 Nghiên cứu xác định giá thể phù hợp cho bạch đàn nuôi cấy mô ở giai đoạn ra ngôi

2 Nghiên cứu ảnh hưởng của công thức bón phân tới sinh trưởng của câybạch đàn nuôi cấy mô ở giai đoạn ra ngôi

3 Nghiên cứu ảnh hưởng của độ ẩm và ánh sáng tới sinh trưởng của cây bạchđàn nuôi cấy mô ở giai đoạn ra ngôi

4 So sánh khả năng sinh trưởng của ba dòng bạch đàn nuôi cấy mô ở giai đoạn ra ngôi

3.4 Vật liệu và phương pháp nghiên cứu

3.4.1 Vật liệu nghiên cứu

- Phân bón

- Lưới đen

- Nilon trắng.

- Nước tưới

3.4.2 Phương pháp nghiên cứu

3.4.2.1 Ra ngôi và chăm sóc cây con

- Huấn luyện cây con trong ống nghiệm: Cây con trong ống nghiệm được

sản xuất dưới điều kiện lý tưởng về nhiệt độ, ánh sáng và môi trường dinhdưỡng Để cấy cây ra bầu đất với tỷ lệ sống cao cần phải huấn luyện cây chocứng cáp trước khi cho cây ra khỏi ống nghiệm trong điều kiện ánh sáng vànhiệt độ tự nhiên với cường độ ánh sáng từ 5000 -10.000 Lux, nếu > 10.000Lux cần phải che bớt ánh sáng

Thời gian huấn luyện khoảng 6- 8 ngày để cây quen dần với điều kiện

tự nhiên, lá xòe ra đầy đủ thì có thể chuyển cây ra bầu đất

cho thấm sâu 1.5- 2cm) Vào mùa có nguy cơ nấm bệnh cao nồng độ thuốctím phải cao hơn 0,2- 0,3%.

+ Thao tác ra ngôi:

Lấy cây mầm từ trong lọ ra bằng cách đổ ra lòng bàn tay, nhặt từng câymột ra khỏi nền nuôi cấy sau đó rửa sạch thạch bằng nước sạch, hồ rễ bằngđất đã khử trùng, thao tác này phải làm nhẹ nhàng, cẩn thận tránh làm tổnthương cho cây

Cấy cây đã hồ rễ vào bầu đất như cấy cây con từ hạt Khi cấy chú ý cho rễ thẳng

và xòe tự nhiên, không bị cuốn lại với nhau hoặc bị gập lên trên mặt bầu

- Chăm sóc cây sau khi cấy

+ Thời gian quan trọng nhất là tuần nuôi cấy đầu tiên, phải theo dõi ánh sáng vànhiệt độ Nhiệt độ thích hợp từ 25oC- 30oC, độ ẩm từ 85%- 90%, cần chú ý phải chegiâm để giảm bớt ánh sáng trực xạ, tốt nhất là che giâm từ 7-10 ngày sau khi cấy.+ Sau 3 tuần thì bón thúc bằng cách tưới thêm phân NPK(5:10:3) nồng độ 0,3% rồitiếp tục 5-7 ngày tưới 1 lần Sau khi tưới xong cần tưới rửa lại bằng nước sạch.+ Phun phòng nấm bệnh bằng dung dịch bellate nồng độ 5g/10l nước phuncho 100m2 Thời gian phun 1 tuần 1 lần, nếu phát hiện nấm bệnh cần phunnồng độ cao hơn và thời gian ngắn hơn có thể 3- 5 ngày 1 lần tùy theo tìnhtrạng bệnh

+ Phân loại cây con: Sau khi cấy được 45- 50 ngày cần tiến hành phân loạicây con để có chế độ chăm sóc phù hợp tạo ra các luống cây đồng đều, đặcbiệt đủ tiêu chuẩn xuất vườn

+ Hãm cây: Ngừng tưới phân trước khi trồng 2 tuần, trong trường hợp phải lưugiữ cây ở vườn ươm lâu hơn thì hạn chế tưới nước và tưới phân để hãm cây

3.4.2.2 Phương pháp thu thập số liệu

3.4.2.2.1 Bố trí thí nghiệm

a Xác định giá thể trồng cây nuôi cấy mô

- Để tìm được giá thể phù hợp với cây bạch đàn nuôi cấy mô, tôi nghiên cứugiá thể trồng cây bạch đàn nuôi cấy mô.

-Thí nghiệm được bố trí theo kiểu ngẫu nhiên hoàn toàn

- Số cây trên ô thí nghiệm: 30 cây

- Số lần lặp: 3

- Số ô thí nghiệm: 3 CT x 3 lần lặp lại x 3 =27 ô

- Tổng số cây thí nghiệm: 810 cây

- Các công thức thử nghiệm với các giá thể:

+ CT 1: đất tầng B (Đ/C)

+ CT 2: 2/4 đất tầng B + 1/4 trấu hun + 1/4 mùn cưa

+ CT 3: 3/4 đất tầng B + 1/4 xơ dừa nghiền nhỏ

Ta có sơ đồ bố trí ở thực nghiệm chung cho 3 dòng UE3, UE23, UE27 ở tất

cả các thí nghiệm lần lượt như sau:

CT1: Bón 10g N +10g P2O5+10g K2O/m2/2 lần bón

CT2: Bón 15g N +10g P2O5+10g K2O/m2/2 lần bón

CT3: Không bón phân (Đ/C)

Thời gian bón:

Lần 1: bón phân sau khi trồng 4 tuần

Lần 2: bón sau lần một 20 ngày

c Nghiên cứu ảnh hưởng mức che sáng và lượng nước tưới tới sinh trưởngcủa cây nuôi cấy mô

* Thí nghiệm ảnh hưởng mức che sáng

Tiến hành thí nghiệm này, sử dụng lưới che nắng với các mức che nắngkhác nhau để xác định mức che sáng thích hợp cho kỹ thuật ra ngôi bạch đàn.CT1: Che bằng lưới kép+ PE trắng

CT2: Che bằng lưới đơn+ PE trắng

CT3: Che bằng PE trắng

* Thí nghiệm ảnh hưởng của lượng nước tưới

Ẩm độ yếu tố quan trọng, quyết định tỷ lệ sống, sinh trưởng và xuấtvườn của vườn ươm bạch đàn nuôi cấy mô Xác định độ ẩm thông qua lượngnước tưới.Tưới 3 lần/ ngày Có 3 lượng nước tưới là:

CT1: tưới 0,3l/m2

CT 2: tưới 0,6l/m2

CT3: tưới 1,0l/m2

d So sánh khả năng sinh trưởng của 3 dòng bạch đàn ở giai đoạn ra ngôi

3.4.2.2.2 Các chỉ tiêu theo dõi

- Theo dõi các chỉ tiêu nghiên cứu: 10 ngày ta tiến hành đo đếm các chỉ tiêutheo dõi một lần

- Ghi chép đầy đủ các số liệu theo dõi

- Các chỉ tiêu theo dõi

+ Theo dõi chiều cao cây: Dùng thước đo chiều cao của cây từ gốc sát mặt đấtđến ngọn của cây( đơn vị đo cm)

Chiều cao cây trung bình Tæng chiÒu cao c©y

Tængsè c©y

+ Theo dõi số lá: Đếm tổng số lá trên cây từ khi có lá thật đến khi kết thúc thí nghiệm

PHẦN 4 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 4.1 Nghiên cứu xác định giá thể trồng cây nuôi cấy mô

Giá thể là môi trường cung cấp oxy, nước và dinh dưỡng, đồng thời là giá

đỡ cho cây sinh trưởng và phát triển Giá thể có nhiều loại như xơ dừa, sỏi vụn(cỡ hạt đậu), mùn cưa, trấu, đá bọt núi lửa…Có thể dùng đơn lẻ hoặc trộn lại đểtận dụng ưu điểm từng loại Một giá thể được xem là lý tưởng nếu giá thể đó đủxốp, thoáng khí, giữ và thoát nước tốt, sạch sâu bệnh và cỏ dại

4.1.1 Ảnh hưởng của giá thể đến tỷ lệ sống của các dòng bạch đàn thí

nghiệm

Giá thể có ảnh hưởng rất lớn đến tỷ lệ sống của cây mô sau khi đượcchuyển ra vườn ươm Lúc này cây rất dễ mất nước và mẫn cảm với môitrường mới Vì vậy giá thể cần phải có khả năng giữ ẩm tốt, cũng như phảithoáng khí, thấm nước dễ dàng và ổn định Theo dõi tỷ lệ sống của các dòngbạch đàn ở ngày thứ 30 chúng tôi thu được số liệu ở bảng 4.1:

Bảng 4.1 Ảnh hưởng của giá thể đến tỷ lệ sống của các dòng bạch đàn TN Dòng

CT

Số cây sống

Tỷ lệ sống (%)

Số cây sống

Tỷ lệ sống (%)

Số cây sống

Tỷ lệ sống (%) CT1(Đ/C) 19,33 64,44 23,33 77,78 21,0a0 70,00

Qua bảng 4.1 thấy rằng: Ở CT3 các dòng bạch đàn có tỷ lệ sống caonhất đạt trên 90% Cụ thể: Dòng UE3 đạt 91,11%, cao hơn là dòng UE27 đạt93,33% và cao nhất là dòng UE23 (94,44%) Thấp hơn CT3 là CT2 với83,33% (dòng UE3), 88,89% (dòng UE23) và 84,44% (dòng UE27) Thấpnhất là CT1 với 64,44% (dòng UE3), 77,78% (dòng UE23) và 70,00% (dòngUE27) Việc kết hợp giữa đất tầng B và xơ dừa nghiền nhỏ đã tạo thành mộtloại giá thể phù hợp cho yêu cầu của cây với tính ngấm nước dễ dàng, giữ ẩmlâu của xơ dừa và tính ổn định của đất tầng B Vì vậy, tỷ lệ sống của cây mô ởcông thức 3 là cao nhất Qua thí nghiệm trên chúng tôi kết luận CT3 là côngthức làm cho tỷ lệ sống của các dòng bạch đàn thí nghiệm là cao nhất và trong

ba dàng bạch đàn thí nghiệm thì dòng UE23 đạt được 94,44% là tốt nhất

4.1.2 Ảnh hưởng của giá thể đến chỉ tiêu sinh trưởng thân, lá của các dòng bạch đàn thí nghiệm

Cây mô sau khi cấy vào bầu sẽ chịu ảnh hưởng bởi giá thể vì đây là môitrường cung cấp dinh dưỡng, ẩm độ và oxy cho cây Giá thể không chỉ ảnh hưởngđến tỷ lệ sống của cây mà còn ảnh hưởng đên khả năng sinh trưởng thân, lá của cácdòng bạch đàn thí nghiệm được thể hiện trong bảng 4 2

Qua bảng 4.2 ta thấy các chỉ tiêu sinh trưởng của cây mô ở các côngthức có sự khác nhau

* Dòng UE3:

- Về chiều cao cây: Sau 90 ngày cấy cây các công thức giá thể khác nhau

có ảnh hưởng khác nhau về chiều cao cây và đều có sự chênh lệch so với đốichứng ở độ tin cậy 95% Các công thức có chiều cao cây lớn hơn đối chứng làcông thức 2 và công thức 3, đạt cao nhất là công thức 3 với 36,02 cm (cao hơnđối chứng 6,92 cm), kế tiếp là công thức 2 - 32,33cm (cao hơn đối chứng 3,23cm), công thức đối chứng có chiều cao 29,1 cm

- Về đường kính gốc: Sau 90 ngày cấy cây đường kính gốc của cáccông thức trên dao động từ 0,31cm - 0,33cm, trong đó đường kính gốc lớn

nhất là công thức 3 (cao hơn đối chứng 0,02 cm), kế tiếp là công thức 2 (caohơn đối chứng 0,01cm), công thức đối chứng có đường kính gốc là 0,31 cm

- Về số lá: Các loại giá thể khác nhau có ảnh hưởng khác nhau đến số lá/cây của bạch đàn Sau 90 ngày cấy cây các công thức có số lá/cây cao hơn đốichứng ở độ tin cậy 95% là công thức 2 và công thức 3, đạt cao nhất là côngthức 3 (cao hơn đối chứng 2,1 lá/cây), công thức 2 cao hơn đối chứng 1,33 lá/cây Công thức đối chứng đạt 10,97 lá/cây

Bảng 4.2 Ảnh hưởng của giá thể đến chỉ tiêu sinh trưởng của các dòng

kém hơn so với CT3 Như vậy, CT3 với giá thể là ¾ đất tầng B + ¼ xơ dừanghiền nhỏ là công thức tốt nhất cho sự sinh trưởng thân, lá của các dòng bạchđàn thí nghiệm Trong các giống thí nghiệm thì giống UE23 cho các chỉ tiêusinh trưởng tốt nhất.

4.1.3 Ảnh hưởng của giá thể đến sinh trưởng rễ của các dòng bạch đàn thí nghiệm

Rễ của các cây non nói chung và rễ của cây bạch đàn mô nói riêng rất dễ bịtổn thương, nhất là các tế bào ở đầu rễ vì không có mô che chở như phần đầu ngọn

vì vậy, giá thể trồng tơi xốp, thoáng khí sẽ giúp cho rễ phát triển thuận lợi Kết hợptheo dõi ảnh hưởng của giá thể đến sinh trưởng thân lá, chúng tôi theo dõi chiều dài

rễ ở giai đoạn 2,5 tháng sau khi cấy cây được số liệu ở bảng 4.3:

Bảng 4.3 Ảnh hưởng của giá thể đến sinh trưởng rễ của các dòng bạch đàn thí nghiệm (3 tháng sau khi cấy cây)