đánh giá hàm lượng lưu huỳnh tồn dư, hàm lượng saponin, đường tự do,và độc tính cấp của xông sinh ngưu

Đặt Vấn Đề Ngưu tất là một vị thuốc được dùng khá phổ biến trong Y học cổ truyền với nhu cầu ngày càng tăng, được nhập trồng vào nước ta tõ những năm 1960. Hiện nay đã thích hợp với điều kiện nước ta và phát triển tốt, được trồng ở nhiều nơi nhất là đồng bằng Bắc bộ như: xã Tân Quang huyện Văn Lâm tỉnh Hưng Yên, thôn Thiết Trụ, huyện Khoái Châu tỉnh Hưng Yên, xã Ninh Hiệp huyện Gia Lâm, trung tâm nghiên cứu cây trồng và chế biến thuốc Hà Nội và mét sè nơi khác. Khi thu hoạch người ta thường sơ chế bằng phương pháp xông sinh sau đó đem bán ra thị trường. Vậy vấn đề đặt ra là: tỉ lệ lưu huỳnh dùng để xông là bao nhiêu, xông sinh xong cần sấy ở nhiệt độ bao nhiêu , bảo quản bao lâu mới được sử dụng để đảm bảo không độc hại đến sức khoẻ con người, đảm bảo được chất lượng của thuốc đạt được tiêu chuẩn dược điển Viêt Nam và khu vực. Vì vậy chúng tôi đặt vấn đề nghiên cứu sự ảnh hưởng của quá trình xông sinh đến chất lượng dược liệu ngưu tất. Mục đích : đánh giá hàm lượng lưu huỳnh còn tồn dư, hàm lượng saponin toàn phần, hàm lượng đường và độc tính cấp của dược liệu được sơ chế với các phương pháp xông sinh khác nhau. Trên cơ sở đó có thể đề xuất phương pháp xông sinh thích hợp cho dược liệu chất lượng tốt và an toàn cho người sử dụng. Để đạt được mục đích trên, đề tài được tiến hành nghiên cứu với mét sè nội dung sau: - Xông sinh ngưu tất bằng các phương pháp khác nhau: Về liều lượng sinh, thời gian xông, nhiệt độ sấy. - Đánh giá hàm lượng lưu huỳnh tồn dư, hàm lượng saponin, đường tự do, và độc tính cấp của các mẫu dược liệu. 34 Phần I: Tổng quan 1 - Tổng quan về ngưu tất 1.1- Đặc điểm thực vật, phân bố và thu hái Vị thuốc Ngưu tất là rễ phơi hay sấy khô của cây Ngưu tất: Achyranthes bidentata Blume họ rau Dền Amaranthaceae. Cây thuộc thảo cao khoảng 1m. Thân mảnh, lá mọc đối, hình trứng, đầu nhọn, mép lá nguyên dài 5 - 12 cm. Côm hoa là bông ở đầu cành hay kẽ lá. Hoa mọc hướng lên nhưng khi biến thành quả sẽ mọc quặp xuống. Quả nang, lá bắc còn lại và nhọn thành gai cho nên vướng phải có thể mắc vào quần áo. Cây mọc ở Trung quốc, Việt Nam và các nước Đông NamÁ. Trồng bằng hạt, ở đồng bằng thì trồng vào tháng 9 - 10 thu hoạch vào tháng 2-3. Vùng miền núi trồng vào tháng 2 - 3 thu hoạch vào tháng 9-10. Muốn lấy giống thì cây sau khi thu hoạch, cắt bớt rễ, cắt bớt thân và trồng lại khoảng 4 tháng nữa mới lấy hạt [2]. Năng suất hiện nay vào khoảng 1, 2 tấn mét hecta. 1.2- Thành phần hoá học Rễ có chứa các saponin, khi thuỷ phân cho các sapogenin là acid oleanolic., ngoài ra còn có ecdysteron và inokosteron, glucose, galactose, rhamnoza. Muối kali [2,8], và mét số thành phần khác nh: Betain, polysaccharide, emodin, physcion[ 15] - acid oleanolic - Inokosteron 1.3- Tác dụng dược lý •Làm giảm sức co bóp của tim Õch [8 ] •Giãn mạch hạ huyết áp, ức chế nhẹ tim Õch cô lập [2] •Tăng co bóp tử cung [2,6] •Tác dụng phá huyết và làm vãn albumin [2,8] •Tác dụng hạ cholesterol trong máu và hạ huyết áp [2] •Ecdysteron và Inokosteron có tác dụng chống viêm, kháng khuẩn [8] • Lợi tiểu, hạ đường huyết, cải thiện chức năng gan [9]. • thúc đẩy quá trình tổng hợp protein[9] • Kích thích miễn dịch [16] 1.4- Sơ chế và bào chế • Sơ chế: Dược liệu sau khi thu hoạch về chặt bỏ phần thân, rũ sạch đất, phơi nắng 1 - 2 ngày, rửa sạch bằng nước, để ráo nước, xếp vào xông sinh với lượng sinh xông và thời gian xông theo kinh nghiệm từng địa phương.[8, 10] • Chế biến cổ truyền [10] Khi sử dụng làm thuốc người ta phải qua khâu chế biến bào chế, có nhiều phương pháp chế biến khác nhau, tuỳ theo các mục đích điều trị chứng bệnh khác nhau mà người thầy thuốc chọn phương pháp chế biến thích hợp. - Ngưu tất thái dùng sống Ngưu tất được rửa sạch, làm mềm, thái phiến vát dày 1 - 3mm (nếu rễ to); cắt đoạn 3 - 5mm (nếu rễ nhỏ), phơi hoặc sấy khô để dùng. [10] - Ngưu tất sao cám Ngưu tất rửa sạch, thái phiến, để ráo nước. Sao cám nóng già, bốc khói trắng, cho ngưu tất phiến vào sao đều đến khi có màu vàng. Lấy ra rây bỏ cám. - Ngưu tất trích rượu Ngưu tất 10 kg Ruợu 2 kg Ngưu tất phiến sao nóng, phun rượu vào sao đến khô. Hoặc tẩm rượu vào ngưu tất, ủ 30 phút- 1 giờ cho ngấm rượu; sau sao tới khô. - Ngưu tất thán Đem ngưu tất sao đến khi phía ngoài bị đen hoàn toàn, bên trong vàng đậm; có thể trích rượu sao đen nh trên. - Ngưu tất sao đen - Ngưu tất trích muối Ngưu tất phiến 10 kg Muối 0. 2 kg Muối hoà thành dung dịch đủ để tẩm vào ngưu tất đã thái phiến ; ủ 30 phút , sao khô. 1.5- Công năng chủ trị [4, 8, 9, 10] - Hoạt huyết thông kinh hoạt lạc: dùng trong các trường hợp kinh nguyệt bế, kinh nguyệt không đều. - Thư cân, mạnh gân cốt, bổ can thận dùng cho các bệnh đau xương khớp, đau xương sống, đặc biệt đối với khớp của chân; sinh lý yếu, tiểu không tự chủ được, làm giảm bạc tóc. - Chỉ huyết: thường dùng trong các trường hợp hoả độc bốc lên gây nôn ra máu, chảy máu cam. - Lợi niệu, trừ sỏi: dùng trong các trường hợp tiểu tiện đau buốt, tiểu tiện ra sái, đục. - Giáng áp, giải độc chống viêm: dùng phòng bệnh bạch hầu - Làm tá dược dẫn huyết, hoả đi xuống. 2- Diêm sinh 2.1- Nguồn gốc. Diêm sinh còn gọi là sinh, diêm vàng, hoàng nha, lưu hoàng, thạch lưu hoàng, oải lưu hoàng, tên khoa học là sulfur. Là một nguyên tố có sẵn trong thiên nhiên hay do chế từ những hợp chất có lưu huỳnh trong thiên nhiên. Lưu huỳnh có thể tồn tại dưới dạng tự do, hay sunphua như pyrit, sunphua kẽm, hoặc sunphua các kim loại khác, sunphua hydro…[6]. Tuỳ theo nguồn gốc và cách chế biến khác nhau, lưu hoàng có khi là bột màu vàng, có khi là những 5 cục to không đều màu vàng tươi, hơi có mùi đặc biệt, Ýt tan trong nước, trong rượu và ete, tan nhiều hơn trong dầu. Khi đốt lên cháy với ánh lửa xanh và toả ra mùi khét khó thở. [8] 2.2- Thành phần hoá học Thành phần chủ yếu của diêm sinh là chất sulfur nguyên chất, tuỳ theo nguồn gốc và cách chế tạo, có thể có những tạp chất như: đất, vôi, asen, sắt [8]. 3.3- Công dụng và liều dùng [8] Diêm sinh được dùng trong cả đông và tây y. Theo tài liệu cổ, diêm sinh có vị chua, tính ôn, có độc, vào hai kinh tâm và thận. Có tác dụng bổ hoả, tráng dương, bổ mệnh môn chân hoả, lưu lợi đại trường, sát trùng. Dùng trong những trường hợp liệt dương, lỵ lâu ngày, người già yếu, hư hàn mà bí đại tiện, phong thấp. Dùng trong còn có tác dụng sát trùng, chữa mẩn ngứa, mụn nhọt. Ngày dùng 2 - 3g dưới dạng thuốc bột hay thuốc viên. Phần II: Thực nghiệm và kết quả 1- Nguyên liệu, phương tiện và phương pháp nghiên cứu 1.1- Nguyên liệu, phương tiện. • Nguyên liệu - Rễ ngưu tất tươi thu hoạch ở trung tâm nghiên cứu cây trồng và chế biến cây thuốc Hà Nội. - Diêm sinh lấy mẫu tại mét sè nơi dùng để chế biến thuốc. 6 . Xã Ninh Hiệp, huyện Gia Lâm Hà Nội(Ký hiệu mẫu:S1) . Thôn Nghĩa Trai, xã Tân Quang huyện Văn Lâm(Ký hiệu mẫu:S2) . Thôn Thiết Trụ, huyện Khoái Châu tỉnh Hưng Yên(Ký hiệu mẫu:S3) . Trung tâm nghiên cứu cây trồng và chế biến thuốc Hà Nội (Ký hiệu mẫu:S4) • Hoá chất, thuốc thử Cồn tuyệt đối, acid sulphuric 72%, dd KOH/ cồn 0.5N, dd acid HCl 0.5N,ortho.Toluidin, Thioure, chỉ thị Methyl da cam, . đạt tiêu chuẩn do viện Dược liệu cung cấp. • Động vật thí nghiệm Chuột nhắt trắng khoẻ mạnh, có khối lượng 20 - 22g do đủ tiêu chuẩnthí nghiệm mua tại Hà Tây. • Máy móc và trang thiết bị - Máy đo độ Èm Precisa MA300 Thuỵ Sĩ. - Máy quang phổ UV - VIS Cary 1E cua hãng Varian(Mỹ) - Máy đo quang phổ tử ngoại (máy ASIMCO của Anh) - Máy quang phổ hấp thụ nguyên tử( máy AAS - Shimadza của Nhật) 1.2- Phương pháp thực nghiệm 1.2.1- Xông sinh ngưu tất 1.2.1.1- Xông sinh ngưu tất với lượng sinh khác nhau Các mẫu ngưu tất cùng khối lượng được xông sinh với những lượng sinh khác nhau, trong cùng một thời gian mét ngày một đêm. Với khối lượng sinh như sau: 0, 5kg S/ tạ dược liệu; 1kg S/ tạ dược liệu; 1. 5kg S/ tạ dược liệu; 3kg S/ tạ dược liệu. Sấy ở 60°C đạt độ thuỷ phần <15%. 1.2.1.2- Xông sinh ngưu tất với thời gian khác nhau Xông sinh các mẫu có khối lượng bằng nhau với cùng lượng sinh 1. 5kg S/ tạ dược liệu nhưng thời gian khác nhau, xông 4h, 12h, 24h. 7 Nhiệt độ sấy 60°C 60°C 60°C 60°C Khối lượng khô 5. 9 6. 1 5. 7 5. 8 Tỉ lệ % khô/ tươi 29. 50 30. 50 28. 50 29. 00 Màu sắc Vàng rơm Vàng rơm Vàng rơm Vàng rơm Độ nhuận dẻo Dẻo Dẻo Dẻo Dẻo 2. 1. 2 Xông sinh với thời gian khác nhau Ngưu tất sau khi thu hoạch làm tương tự như trên, chia thành 4 lô khối lượng mỗi lô 20kg, xông sinh với lượng sinh như nhau 1.5kg/tạ. L« 1: X«ng sinh 4 giê (M5) L« 2: X«ng sinh 12 giê (M6) Lô 3: Xông sinh 24 giờ (M7) Sau khi xông sinh đem sấy ở 60°C đến đạt độ thuỷ phần<15%, bảo quản các mẫu. Kết quả thu được trình bày ở bảng 3 Bảng 3: Tỷ lệ dược khô và mét sè chỉ tiêu ở các lô thực nghiệm Các chỉ tiêu Các mẫu M5 M6 M7 Khối lượng mẫu tươi (kg) 20 20 20 Độ Èm(%) 12. 33 12. 22 10. 69 Nhiệt độ sấy 60°C 60°C 60°C Khối lượng khô(kg) 5. 7 6. 3 5. 3 Tỉ lệ % khô/ tươi 28. 50 31. 50 26. 50 Màu sắc Vàng rơm Vàng rơm Vàng rơm Độ nhuận dẻo Dẻo Dẻo Dẻo - Nhận xét: Mặc dù xông sinh với thời gian khác nhau nhưng màu sắc của các lô là nhnhau. Sau khi sấy khô ta còng không ngửi thấy mùi lưu huỳnh trong dược liệu (xem ảnh ) 2.1.3. Sấy ở nhiệt độ khác nhau 12 Mẫu M1 M2 M3 M4 Độ Èm(%) 59. 74 58. 04 61. 89 62. 68 Hàm lượng 2. 88 3. 69 6. 66 8. 44 Nhận xét: - Hàm lượng lưu huỳnh trong dược liệu sau khi xông với lượng lưu huỳnh đem xông tõ 0. 5 kg/ tạ tới 3 kg/ tạ thì hàm lượng lưu huỳnh trong dược liệu sau khi xông tỉ lệ thuận với lượng diêm sinh đem xông (Hình 1 ) Hình 1: Hàm lượng lưu huỳnh sau khi xông ở các mẫu xông với lượng sinh khác nhau. b. Kết quả ở các mẫu M5, M6, M7 ghi ở bảng 6, hình 2. Bảng 6: Hàm lượng lưu huỳnh ở các mẫu xông sinh với thời gian khác nhau. Mẫu M5 M6 M7 Độ Èm 61. 55 62. 78 58. 67 14 Định lượng saponin trong các mẫu không xông sinh sấy ở các nhiệt độ khác nhau T1, T2, T4 ta có kết quả nh ở bảng 11. Bảng 11: Hàm lượng saponin ở các mẫu không xông sinh Sè lần Các mẫu T1 T2 T4 Lần 1 10. 34 10. 00 10. 08 Lần 2 9. 96 10. 20 9. 86 Lần 3 10. 08 9. 84 10. 26 Trung bình 10. 13 10. 01 10. 07 - Nhận xét: Ta thấy hàm lượng saponin trong các mẫu khác nhau không đáng kể. Nhvậy lượng lưu huỳnh dùng để sấy và thời gian sấy không ảnh hưởng đến hàm lượng saponin trong dược liệu. 2. 4-Thử độc tính cấp của lưu huỳnh và các mẫu xông sinh 2.4.1. Thử độc tính cấp của lưu huỳnh Thực hiện theo phương pháp Karber - Tiến hành: Pha hỗn dịch lưu huỳnh nồng độ 0.032gam/ml, dung môi là glycerin, chất gây thấm là tween 80. Những nhóm 12 chuột được cho uống hỗn dịch lưu huỳnh với liều tăng dần. Theo dõi và ghi sè chuột chết trong 3 ngày ta có kết quả nh ở bảng 12. Bảng 12: Liều độc LD50 của lưu huỳnh Sè thứ tự Liều uống (g/kg) Sè chuột thí nghiệm Sè chuột chết Sè chuột sống Tỉ lệ % chết / tổng số z d zd 1 0. 64 12 0 0 0 2 0. 96 12 2 10 16. 67 1 0, 32 0. 32 3 1. 28 12 6 6 50 4 0, 32 1, 28 21 4 1. 92 12 6 6 50 6 0, 64 3, 84 5 2. 56 12 10 2 83. 33 8 0, 64 5, 12 6 3. 2 12 12 12 100 11 0, 64 7, 04 Trạng thái của chuột chết: Tim, phổi, gan không có hiện tượng xung huyết. Co thắt cơ trơn, thành ruột căng, có biểu hiện hút nước vào lòng ruột Vì liều tối đa gây chết 100%, nên ta xác định LD50 theo công thức Benrens- Karber: LD50 = LD100 - Trong đó: [...]... dc liu ó xụng sinh - Nghiờn cu tip ch xụng sinh nh k trong quỏ trỡnh bo qun dc liu ngu tt - Th c tớnh bỏn món ca dc liu ngu tt cú xụng sinh Bngký hiu ch vit tt M1 : Mu dc liu xụng sinh vi t l 0 5 kg/t liệu xông sinh với tỷ lệ 0.5 kg/tạ Mẫu dợc M2 : Mu dc liu xụng sinh vi t l 1 kg/t Mẫu dợc liệu xông sinh với tỷ lệ 1 kg/tạ M3 : : Mu dc liu xụng sinh vi t l 1 5 kg/t Mẫu dợc liệu xông sinh với tỷ lệ... kg/tạ M4 : Mu dc liu xụng sinh vi t l 3 kg/t Mẫu dợc liệu xông sinh với tỷ lệ 3 kg/tạ M5 gi : Mu dc liu xụng sinh vi t l 1 5 kg/ t trong 4 Mẫu dợc liệu xông sinh với tỷ lệ 1.5 kg/tạ trong 4 giờ M6 gi : Mu dc liu xụng sinh vi t l 1 5 kg/ t trong 12 Mẫu dợc liệu xông sinh với tỷ lệ 1.5 kg/tạ trong 12 giờ M7 gi : Mu dc liu xụng sinh vi t l 1 5 kg/ t trong 24 Mẫu dợc liệu xông sinh với tỷ lệ 1.5 kg/tạ trong... hunh trong một số mu diờm sinh lu hnh trờn th trng chỳng tụi tin hnh xỏc nh hm lng lu hunh trong cỏc mu diờm sinh dựng xụng sinh dc liu một số ni: - Xó Ninh Hip huyn Gia Lõm H Ni (Ký hiu mu:S1) - Thụn Ngha Trai xó Tõn Quang huyn Vn Lõm (Ký hiu mu:S2) 26 - Từ kt qu trờn, ta thy khi xụng sinh thỡ lng sinh tng thỡ d lng lu hunh cng tng Nu ta khụng tng lng sinh m tng thi gian xụng sinh thỡ d lng lu hunh... phỏp xụng sinh thớch hp cho ngu tt cht lng tt v an ton khi s dng: 28 - Xụng vi lng diờm sinh 0, 5 - 1, 5 kg/ t - Thi gian xụng l 24 gi Phn III: Kt lun v ngh 1- Kt lun Từ nhng kt qu ó thu c t thc nghim trờn, chỳng tụi rỳt ra kt lun: nh hng ca lng diờm sinh v thi gian xụng sinh n d lng lu hunh trong ngu tt : - Hm lng lu hunh d trong ngu tt t l thun vi lng diờm sinh dựng xụng v thi gian xụng sinh ( 2,... xụng sinh lm cho dc liu cú mu sc vng rm - D lng sinh cũn tn trong nc sc ca ngu tt gim i hng chc ln ú l do, khi xụng thỡ cú c lu hunh t do bỏm vo dc liu Khi sc lu hunh t do rt ít tan trong nc Hn na khi sc, do nhit nờn H 2SO3 = H2O+ SO2 bay lờn Vỡ vy m d lng lu hunh gim - Do hot ng ca enzym, lm gii phúng ng t do cho nờn hm lng ng ca mu khụng xụnh sinh cao gp 2 ln mu xụng sinh Cũng vỡ vy m xụng sinh. .. d lng lu hunh cng tng ú l do trong quỏ trỡnh xụng sinh ta phi dựng bao t che kớn lũ khụng cho S02 bay ra, khi tng thi gian xụng sinh thỡ thi gian SO 2 tip xỳc vi dc liu lõu hn nờn lng sinh bỏm vo nhiu hn - Sau khi sy khụ d lng lu hunh gim i rt nhiu, do khi sy cht khớ (S0 2) c hp ph trờn b mt ca dc liu c gii phúng do ú m d lng lu hunh gim - Khi xụng sinh do SO2 l mt cht o xy hoỏ mnh, cho nờn ó phỏ... 2 Diờm sinh 5 5 32 Phn II: Thc nghim v kt qu 7 7 1 Phng tin v phng phỏp nghiờn cu 7 7 1.1 Nguyờn liu, phng tin 7 7 1.2 Phng phỏp thc nghim 7 7 1.2.1 Xụng sinh ngu tt; 7 7 1.2.2 nh lng một s thnh phn trong ngu tt sau khi xụng 8 8 1.2.3 Th c tớnh cp ca lu hunh v ngu tt sau khi xụng 9 9 1.2.4 Xỏc nh hm lng lu hunh trong cỏc mu diờm sinh 9 9 2 Thc nghim v kt qu 10 10 2.1 Xụng sinh ngu... tớnh cp ca lu hunh v ngu tt sau khi xụng 9 9 1.2.4 Xỏc nh hm lng lu hunh trong cỏc mu diờm sinh 9 9 2 Thc nghim v kt qu 10 10 2.1 Xụng sinh ngu tt 10 10 2.1.1 Xụng sinh vi lng sinh khỏc nhau 10 10 2.1.2 Xụng sinh vi thi gian khỏc nhau 12 12 2.1.3 Sy nhit khỏc nhau 13 13 2.2 nh lng lu hunh trong ngu tt sau khi xụng 13 13 2.2.1 nh lng lu hunh trong ngu tt sau khi xụng ... phn hoỏ hc trong ngu tt 17 17 2.3.1 nh lng ng t do 17 17 2.3.2 nh lng saponin 19 19 2.4 Th c tớnh cp ca lu hunh v cỏc mu xụng sinh 21 21 2.4.1 Th c tớnh cp ca lu hunh 21 21 2.4.2 Th c tớnh cp ca cỏc mu xụng sinh 22 22 33 2.5 nh lng hm lng một số mu diờm sinh lu hnh trờn th trng26 26 2.6 Bn lun kt qu 27 27 Phn III: Kt lun v ngh 29 29 34 ... sinh n d lng lu hunh trong ngu tt : - Hm lng lu hunh d trong ngu tt t l thun vi lng diờm sinh dựng xụng v thi gian xụng sinh ( 2, 90%n 4, 95 % ) nh hng ca phng phỏp xụng sinh n hm lng saponin v ng t do trong ngu tt: - Lng diờm sinh xụng khụng nh hng n hm lng saponin trong ngu tt (9, 8%n 10 %) v lm tng hm lng ng t do(1, 22 %n 2, 54 % ) nh hng ca d lng lu hunh n c tớnh cp ca ngu tt - D lng lu hunh . - Xông sinh ngưu tất bằng các phương pháp khác nhau: Về liều lượng sinh, thời gian xông, nhiệt độ sấy. - Đánh giá hàm lượng lưu huỳnh tồn dư, hàm lượng saponin, đường tự do, và độc tính cấp. chất lượng dược liệu ngưu tất. Mục đích : đánh giá hàm lượng lưu huỳnh còn tồn dư, hàm lượng saponin toàn phần, hàm lượng đường và độc tính cấp của dược liệu được sơ chế với các phương pháp xông. hàm lượng đường tự do(1, 22 %đến 2, 54 % ). ∗ Ảnh hưởng của dư lượng lưu huỳnh đến độc tính cấp của ngưu tất - Dư lượng lưu huỳnh ảnh hưởng rõ rệt đến độc tính của ngưu tất ∗ Ảnh hưởng của nhiệt