TUYỂN CHỌN CÁC GIỐNG LÚA THƠM ĐẠT TIÊU CHUẨN XUẤT KHẨU VỪA CÓ KHẢ NĂNG KHÁNG RẦY NÂU TỐT PHÙ HỢP VỚI TỈNH HẬU GIANG

TUYỂN CHỌN CÁC GIỐNG LÚA THƠM ĐẠT TIÊU CHUẨN XUẤT KHẨU VỪA CÓ KHẢ NĂNG KHÁNG RẦY NÂU TỐT PHÙ HỢP VỚI TỈNH HẬU GIANG TUYỂN CHỌN CÁC GIỐNG LÚA THƠM ĐẠT TIÊU CHUẨN XUẤT KHẨU VỪA CÓ KHẢ NĂNG KHÁNG RẦY NÂU TỐT PHÙ HỢP VỚI TỈNH HẬU GIANG

1 MỞ ĐẦU 1. Tính cấp thiết của đề tài Kỹ thuật điện di SDS-PAGE protein dễ làm, rẻ tiền, thích hợp với các nước nghèo, đang phát triển như Việt Nam. Kỹ thuật này cho phép thanh lọc chính xác, nhanh chóng các dòng bị thoái hóa giống nhờ cách lấy mẫu phân tích chỉ sử dụng ½ nội nhũ nên không ảnh hưởng tới mầm hạt lúa; đồng thời xác định được những dòng ưu tú có chất lượng gạo đáp ứng được các yêu cầu của xuất khẩu cũng như tiêu thụ nội địa theo ý muốn như: ngon cơm, hàm lượng amylose thấp, hàm lượng protein cao (Võ công Thành và Yutaka Hirata, 2002). Vì vậy, việc “: Lai chọn giống lúa ngắn ngày, năng suất cao, thơm, kháng rầy nâu và bệnh vàng lùn, lùn xoắn lá ” là một giải pháp có tính chiến lược trong công tác chọn tạo giống lúa theo hướng nâng cao chất lượng dinh dưỡng của hạt gạo. 2. Mục tiêu đề tài Tuyển chọn 2-3 giống lúa thơm cao sản ngắn ngày, năng suất cao, có chất lượng tốt cho tỉnh Hậu Giang. 3. Đối tượng và phạm vi của đề tài Đối tượng nghiên cứu của đề tài là một số giống/dòng lúa được chọn tạo, thanh lọc bằng kỹ thuật điện di protein SDS-PAGE của Bộ môn Di Truyền Giống NN, Đại học Cần Thơ. Phạm vi nghiên cứu là tính thơm; hàm lượng protein dự trữ đại diện cho nhóm chất lượng dinh dưỡng và hàm lượng amylose đại diện cho nhóm chất lượng cơm nấu, tính thơm, các chỉ tiêu nông học, thành phần năng suất và các chỉ tiêu sâu bệnh. 2 4. Ý nghĩa của đề tài Kết quả đạt được của đề tài sẽ mở ra một hướng mới cho công tác tuyển chọn giống lúa bằng công nghệ sinh học kết hợp với chọn lọc truyền thống. Theo phương thức này sẽ chọn tạo ra được nhiều nguồn giống tốt cung ứng cho các địa phương cũng như làm đa dạng nguồn giống lúa ở ĐBSCL. Đối với trung tâm giống Hậu Giang: có được nguồn giống tốt, phù hợp với điều kiện địa phương, thích hợp sữ dụng để sản xuất giống tác giả, đảm bảo đáp ứng tốt nhu cầu về giống lúa tại địa phương. Đối với nông dân của tỉnh Hậu Giang: góp phần nâng cao đời sống kinh tế của nông dân trong vùng. Có được những giống lúa đặc sản phục vụ sản xuất tại địa phương, đảm bảo thuần giống, ổn định, năng suất cao, chất lượng tốt. Góp phần giúp tỉnh Hậu Giang xây dựng được thương hiệu về các giống lúa gạo riêng cho mình. 3 Chương 1 TỔNG QUAN TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRONG VÀ NGOÀI NƯỚC 1.1 Cơ sở khoa học của đề tài 1.1.1 Vai trò của giống lúa chất lượng cao trong sản xuất hàng hóa Lúa gạo hiện nay là cây trồng quan trọng của nhiều quốc gia và là nguồn lương thực chính của trên ½ dân số thế giới, được gieo trồng tại 113 nước với 150 triệu ha, sản lượng hằng năm là 600 triệu tấn. Những năm gần đây nước ta đã trở thành một trong những nước xuất khẩu gạo hàng đầu thế giới nhưng giá gạo của ta luôn thấp hơn giá gạo xuất khẩu cùng loại của các nước như Thái Lan, Mỹ là do gạo của ta có phẩm chất thấp. Một trong những nguyên nhân chất lượng gạo thấp là giống lúa có phẩm chất gạo cao trong sản xuất còn rất ít. Đồng bằng sông Cửu Long (ĐBSCL) là nơi đóng góp 95% lượng gạo xuất khẩu của cả nước cùng với việc mở rộng diện tích, tăng vụ, sử dụng giống mới có năng suất thương phẩm cao thì nhu cầu sử dụng giống lúa có phẩm chất gạo tốt, thơm có giá trị thương phẩm cao ngày một gia tăng. 1.1.2 Chất lượng gạo và chỉ tiêu đánh giá phẩm chất hạt Chất lượng hạt gạo được đánh giá thông qua nhiều chỉ tiêu. Các chỉ tiêu đó có thể xếp thành ba nhóm thuộc ba lĩnh vực chất lượng: chất lượng dinh dưỡng bao gồm các chỉ tiêu hoá sinh của hạt gạo như hàm lượng tinh bột, hàm lượng amylose, hàm lượng protein, độ bền thể gel, nhiệt trở hồ chất lượng thương phẩm hay chất lượng kinh tế được đánh giá thông qua các chỉ tiêu vật lý và hình thái như tỷ lệ gạo xay xát, tỷ lệ hạt nguyên, gạo trắng trong, tỷ lệ tấm, bạc bụng, độ đồng đều hạt, chiều dài, chiều rộng hạt và tỷ lệ dài/rộng chất lượng ăn uống và chế biến gồm các chỉ tiêu như tỷ lệ cơm, sức hút nước, độ nở, độ xốp, độ dẻo, độ bóng cơm, mùi thơm, (Nguyễn Thị Trâm, 2001). Trong các tính trạng về phẩm chất cơm, hàm lượng amylose được xem là tính trạng có ý nghĩa quyết định đến mềm cơm hoặc ngược lại. 4 Mùi thơm từ thơm nhẹ đến thơm. Tuy nhiên, chất lượng ăn uống của nhóm gạo này không chỉ phụ thuộc mức độ thơm mà còn có sự hiện diện của một số chỉ tiêu quan trọng khác như là chiều dài, chiều rộng hạt gạo, độ nở dài của hạt sau khi nấu, hàm lượng amylose, nhiệt trở hồ, độ bền thể gel và vị nếm. Lúa thơm được phân ra thành ba nhóm như Basmati, Jasmine và trung gian giữa Basmati và jasmine. Bảng 1.1 cho thấy nhóm Basmati có nguồn gốc ở Ấn Độ và Pakistan có hàm lượng amylose trung bình, nhiệt trở hồ thấp đến trung bình, độ bền thể gel trung bình; ngược lại nhóm Jasmine (Thái Lan) có hàm lượng amylose, nhiệt trở hồ thấp và độ bền thể gel mềm (Singh và ctv., 1997). 1.1.3 Các thành phần và đặc tính của protein dự trữ trong hạt lúa Theo sự phân loại của Osborn (1924) protein hòa tan được trong nước, 0.5M Sodium chloride và ethyl alcohol 70% được gọi là: “albumin”, "globulin", và "prolamin" tương ứng. Protein không hòa tan được trong các chất trên nhưng hòa tan được trong 0.1M acid hoặc alkaline được gọi là "glutelin". Hình 1.1 cho thấy, giữa các băng có các protein dự trữ hay còn gọi là tiểu đơn vị (subunit) như: 10 kDa, 13 kDaA, 13 kDaB, 16 kDa (prolamin) 26 kDa - (globulin), 22-23 kDa (glutelin basic), còn được gọi là β-glutelin và 37 - 39 kDa (glutelin acidic), còn được gọi là -glutelin. Theo Ogawa và ctv. (1987), protein được dự trữ ở hai thể protein, thể protein loại I (PB-I) và thể protein loại II (PB-II), chiếm 20% và 60% protein tổng số theo thứ tự. Chúng khác nhau về kích thước phân tử (Krishnan và Okita 1986; Tanaka and ctv.1980; Wen và Luthe 1985), hình dạng, mật độ, thành phần protein (Tanaka và Ogawa, 1985) và cơ chế sinh tổng hợp (Tanaka và Ogawa 1985; Yamagata và ctv.1982; Yamagata và Tanaka 1986). Hai thể protein này định vị ở khoảng trống giữa các hạt tinh bột (Juliano 1972). Protein dự trữ trong PB-I là prolamin và bao gồm polypeptide 16 kDa, 13 kDa và 10 kDa. Trong đó, polypeptide 13 kDa được phân chia thành hai polypeptide với trọng lượng phân tử khác nhau, polypeptide 13A có trọng lượng phân tử lớn hơn polypeptide 13B. Về mặt dinh dưỡng prolamin được xem là loại protein khó tiêu hoá đối với người sử dụng (Ogawa và ctv. 1987). 5 Hình 1.1 Phổ điện di protein dự trữ trong nội nhũ hạt lúa (Tanaka origimal, 1988) Hình 1.2 Hình dạng các thể PB-I và PB-II (Yamagata và Tanaka 1986) Đối với PB-II, protein dự trữ chủ yếu là glutelin, đây là thành phần dự trữ quan trong nhất trọng nội nhũ hạt lúa, chiếm khoảng 80% protein tổng số và là thành phần dinh dưỡng chủ yếu của hạt lúa (Juliano, 1972). Trong suốt quá trình phát triển của hạt lúa, polypeptide pro-glutelin 57 kDa được tổng hợp trên mạng lưới nội chất thô và được chuyển vào mạng lưới nội chất lumen (Sacker và ctv. 1986; Takemoto và ctv. 2002; Wang 2000) và được cắt nối bởi enzyme protein disulfide isomerase tạo thành 2 tiểu đơn vị -glutelin có trọng lượng phân tử 22- 23 kDa và -glutelin có trọng lượng phân tử 37-39 kDa dự trữ trong thể protein (Yamagata và ctv. 1982; Subodh và ctv. 1986; Takaiwa và ctv. 1986; Krishnan và ctv. 1986; Masumura và ctv. 1989) -glutelin có tính acid và -glutelin có tính base (Robert và ctv. 1985; Wen và Luthe, 1985). Trên phổ điện di, 6 polypeptide -glutelin có 3 tiểu đơn vị với trọng lượng phân tử là 37, 38 và 39 kDa; polypeptide -glutelin có hai tiểu đơn vị với trọng lượng phân tử là 22 và 23 kDa (Yamagata, Sugimoto và ctv.1982; Tanaka và Ogawa, 1985; Ogawa và ctv. 1987). Một loại protein dự trữ khác trong thể PB-II là globulin, thành phần protein này chỉ chiếm khoảng 10% tổng số protein dự trữ trong nội nhũ hạt lúa (Juliano, 1972). Với phương pháp điện di SDS-PAGE, protein này chỉ xuất hiện với một tiểu đơn vị với trọng lượng phân tử 26 kDa (Tanaka và ctv. 1980). Trong công tác chọn và lai tạo giống protein prolamin và protein glutelin được quan tâm nhiều nhất. Hai thành phần protein này có mối tương quan nghịch, khi tăng hàm lượng prolamin lên thì hàm lượng glutelin sẽ giảm xuống và ngược lại. Để tăng hàm lượng lysine trong gạo là tăng thành phần glutelin và giảm thành phần prolamin (IRRI, 1988). Theo Ogawa và ctv. (1987), để cải thiện chất lượng protein lúa là tăng hàm lượng protein trong thể PB-II hoặc giảm hàm lượng protein trong thể PB-I. 1.1.4 Kỹ thuật điện di SDS-PAGE protein Kỹ thuật điện di SDS-PAGE protein (Sodium Dodecyl Sulfate PolyAcrylamide Gel Electrophoresis) được Laemmli (1970) phát triển từ sự hiệu chỉnh bằng cách thêm 0,1% SDS (chất tẩy mang điện tích âm) vào hệ PAGE của Ornstein- Davis,B.J. (1964) nhằm xác định trọng lượng phân tử các loại protein trong phổ điện di (Davis E. Garfin, 1985) bao gồm các bước: ly trích protein, tinh sạch protein, và điện di. Trong dịch ly trích protein thường người ta dùng chất đệm Tris-base (pH>10), chất tẩy SDS, 2-Mercaptoethanol. Khi đun nóng hỗn hợp protein trong dung dịch có dung dịch đệm SDS (2%) và nhờ vào chất hóa học có gốc thiol (2-mercapthoethanol) với nồng độ thường là 5%, protein sẽ bị phân cắt các cầu nối lưu huỳnh và biến tính thành các polypeptide mà vẫn giữ cấu trúc của nó nhờ sự áo của 1,4g SDS vào 1g polypeptide Ornstein-Davis,B.J. (1964). Hơn nữa, mật độ điện tích SDS-polypeptide sẽ độc lập với pH trong khoảng từ 7 đến 10. Phân đoạn protein trong gel bị lưới của acrylamide ngăn chặn nên tách rời các polypeptide. Dựa theo nguyên lý trên người ta cho thêm protein chuẩn có trọng lượng phân tử biết trước để xác định trọng lượng phân tử của các polypeptide trong phổ điện di để phát hiện protein, người ta thường dùng thuốc nhuộm Coomassie Brilliant Blue R250 (0,1-1 g) cho mỗi vạch protein trong 7 phổ điện di (Somith, 1974) hay nhuộm bạc 2-10 ng cho mỗi vạch protein (Ornstein-Davis, B.J. 1964). 1.1.5 Ứng dụng kỹ thuật DNA trong chọn giống Việc cải thiện những giống lúa thơm bằng cách áp dụng các biện pháp lai tạo cổ điển rất khó thực hiện được do một số tính trạng chất lượng có thể bị mất trong quá trình thụ phấn và tạo hợp tử. Để khắc phục hiện tượng đó kỹ thuật sinh học phân tử có thể được coi là một giải pháp có hiệu quả. Một số thành tựu đó như là sử dụng RFLP marker RG 28 để phát triển gen mã hoá tính thơm, hay marker RZ 323 liên quan đến sự giản nở của chiều dài hạt ở giống Basmati 370 (Ahn và ctv., 1993). Ngoài các RFLP marker còn có kỹ thuật RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) cũng được sử dụng để phát hiện gen thơm của lúa. Năm 1995, Jin và ctv., đã phát hiện ra một con mồi, Jas 1.5, có thể dùng để phân biệt giữa các giống lúa thơm và giống lúa thường. Tìm được marker cho gen qui định mùi thơm của lúa, band thơm có trọng lượng phân tử là 257bp, band không thơm có trọng lượng phân tử là 355bp (Louis và ctv., 2005).  Các loại DNA Marker: Về căn bản, bất cứ chuỗi mã DNA nào được dùng để phân biệt giữa hai cá thể, hai dòng hoặc giống khác nhau, đều có thể xem như là một DNA marker. Các DNA marker có thể được chia thành hai nhóm như sau:  PCR- based : ALP, AFLP, SSR, SSCP  DNA/ DNA hybridization-based : RFLP, minisatellite Các marker thuộc nhóm PCR-based có thể được chia nhỏ thành:  MAAP  Marker ngắn, có tính ngẫu nhiên: RAPD, AP-PCR, DAF, AFLP  Amplicon đơn: ALP, SSR, SSCP 8 Bảng 1.1 Các loại DNA marker Marker Tên đầy đủ RFLP Restriction frament length polymorphism ALP Amplicon length polymorphism AFLP Amplified fragment length polymorphism RAPD Random amplified polymorphicDNA DAF DNA amplification fingerprinting SSR Simple sequence repeat (microsatellite) AP-PCR Arbitrary priner-PCR SSCP Single strand conformation polymorphism MRDHV- DNA Moderately repeated, dispersed, and highly variable DNA (minisatelltie)  Nguyên tắc cơ bản của PCR Phản ứng chuỗi của polymerase thường được viết tắt là PCR (polymerase chain reaction). Đây là một kỹ thuật phân tử tạo dòng DNA rất đơn giản và hiệu quả. PCR là kỹ thuật xử lý in vitro các chuỗi mã hóa di truyền DNA bằng cách phát triển primer một cách đồng loạt trên các dây đơn DNA. Toàn bộ tiến trình được hoàn thiện do sự biến chất của DNA cần thiết, sự tác động của các primer tại đầu của các dây đơn DNA này, kế đến là sự phát triển của các primer do phản ứng DNA polymerase. Có hai vấn đề chính trong nguyên tắc PCR:  Polymerase được sử dụng là những enzyme sống, nhạy cảm về độ nhiệt, phải được thêm vào trong mỗi chu kỳ.  Phải có một quy trình hướng dẫn cụ thể trong khi thực hiện từng giai đoạn của chu kỳ PCR. Cả hai tiến trình nói trên đều nặng nhọc và bất lợi cho các nhà nghiên cứu, nếu họ có phương tiện quá hạn chế khi áp dụng PCR. Tuy nhiên, trong thiên nhiên vẫn có những sinh vật có thể sống ở nhiệt độ cao. Thí dụ polymerase được phân lập từ Thermus aquaticus có khả năng là vật thể ổn định về nhiệt lượng. Taq polymerase có hai thuận lợi chính: [i] hồi phục sau khi tác động nhiệt không cần kéo dài, [ii] enzyme này rất hoạt động ở nhiệt độ 9 cao, lúc đó việc tác động của các primer ở đầu dây đơn sẽ chuyên biệt hơn và sinh tổng hợp DNA sẽ nhanh hơn. DNA polymerase được dùng phổ biến là Taq polymerase, lấy từ Thermus aquaticus, có tính ổn dịnh nhiệt rất cao. Một nửa chu kỳ của Taq polymerase được giữ ở nhiệt độ 94 0 C trong vòng 40 phút Taq polymerase có một mức tối hảo về nhiệt độ cao trong sinh tổng hợp DNA [70-72 0 C]. Ở quảng nhiệt độ này, hoạt động đặc biệt của Taq polymerase có thể cao như 150 nucleotide/giây/enzyme. Do đó người ta phải cố gắng phát triển ở quãng nhiệt độ 70-72 0 C trong vòng một phút. Từ đó hàng kilo bp của các đoạn DNA có thể được tổng hợp. Taq polymerase nhạy cảm với ion magnesium. Nồng độ tối hảo của Mg 2+ là 1,5- 2,5mM. Vì deoxyribonucleotide triphosphate (dNTP) có thể gắn với Mg 2+ , cho nên nồng độ chính xác của magnesium tùy thuộc vào nồng độ của dNTP. Các thành phần khác ít mẫn cảm với Taq polymerase là KCL và Tris Chất đệm: Tris (pH 8.4) 10mM KCL 50mM MgCl2 1.5-2.0 mM Các thành phần khác như các chất tẩy không có tính ion, gelatin, NP40, và Tween 20 được thêm vào với số lượng nhỏ nhằm thúc đẩy hoạt động của Taq polymerase. Nồng độ diện được dùng là 0.01% và người ta còn tiếp tục thử nghiệm.  Primer và dNTP Trong PCR tiêu chuẩn, người ta cần có một cặp primer. Sự khuyếch đại chuyên biệt nào đối với một đoạn DNA cần nghiên cứu, đều phải tùy thuộc các primer tương xứng. Cả hai yếu tố: chiều dài primer và thành phần G+C đều có ảnh hưởng quan trọng đối với nhiệt độ trong quá trình tác động ở đầu dây đơn. Nhiệt độ này sẽ là 2x (# của A+T) + 4x(# của G+C) + 5 0 C. nếu có 50% G+C, thì chiều dài của primer phải có kích thước tương ứng là 18-20 nucleotide. Người ta thường mua các nucleotide ở các công ty hóa chất, có chất lượng tốt. Nếu nó được bảo quản ở dạng bột đông khô [freeze-dried powder]. Sau đó người ta phải điều chỉnh lại độ pH, trước khi sử dụng. 10  DNA mục tiêu (Target DNA) Người ta cần phải có các đoạn DNA mang mật mã đã biết trước, được gọi với thuật ngữ “target DNA” trong kỹ thuật PCR người ta sẽ nhận được những kết quả tốt nhất, nếu DNA thật sự thuần khiết, DNA từ mô lá. Số lượng DNA cần cho một phản ứng không nhiều lắm, chỉ cần 5-10 ngDNA thuần khiết, đủ để cho những kết quả theo mong muốn. Người ta cần có ethanol trong lần cuối của quy trình chuẩn bị DNA. Với 10% ethanol, nó vẫn chưa có thể gây ảnh hưởng đến hoạt động của Taq polymerase. Điều ghi nhận quan trọng là: phải có một mM EDTA trong chất đệm TE trong khi sử dụng để hòa tan DNA. EDTA sẽ gắn với Mg 2+ , sao cho thể tích của DNA mục tiêu không vượt quá 1/5 của thể tích PCR.  Phát hiện DNA có tính đa hình nhờ PCR Sản phẩm của PCR là những đoạn mã DNA. Khi DNA xuất phát từ hai dòng lai với nhau được khuếch đại lên nhờ các primer tại locus đặc biệt nào đó, thì trọng lượng phân tử của sản phẩm PCR này có thể rất khác nhau, vì có những thay đổi vật lý trên chuỗi mã DNA, nghĩa là, sự mất đoạn hay thêm đoạn DNA sẽ xảy ra trong vùng bị khuyếch đại nầy. Thể đa hình này được gọi là “amplicon length polymorphism” [ALP] phản ánh DNA có tính đa hình giữa các cá thể/ các dòng lai/ các giống lúa. Thuận lợi của ALP so với RFLP trong việc phát hiện này là:(1) nó rất nhanh, chỉ cần một ngày giúp ta tìm ra kết quả, (2) không có chất đồng vị, (3) rẻ tiền, (4) cần rất ít DNA. Bất lợi của ALP là người ta phải biết rõ chuỗi mã DNA đầu tiên khi tổng hợp primer. 1.2 Tình hình nghiên cứu trong và ngoài nước 1.2.1 Những nghiên cứu liên quan đến protein hạt  Protein được xem là chỉ thị di truyền trong công tác chọn giống Giống như DNA và enzyme, protein dự trữ cũng đã được dùng làm dấu phân tử trong công tác chọn tạo giống vì: Chúng có độ đa hình cao ngay cả bên trong và giữa các quần thể. Tập đoàn giống lúa cổ truyền trồng ven biển ở Đồng Bằng Sông Cửu Long, Việt Nam có độ đa dạng di truyền tương đối cao (Vương Hỗ, 2003). Đa dạng di truyền về [...]... đó có 10 giống/ dòng lúa được chọn thí nghiệm, giống chuẩn nhiễm Jasmine85, giống chuẩn kháng OM5930, 3 lần lặp lại Cách tiến hành: * Nuôi rầy Rầy nâu đựợc nuôi trên chậu lúa 30 ngày tuổi Giống lúa được dùng để nuôi rầy là Jasmine 85 Chậu dùng nuôi rầy có đường kính 30 cm, cao 15 cm Mỗi chậu trồng 2-3 buội lúa Những chậu lúa này được đặt trên khay nhựa kích thước 45 x 60 cm, bên trong khay nhựa có chứa... cách đếm mật số rầy trên cây lúa Sáu giờ sau khi thả rầy vào, tiến hành lấy chỉ tiêu lần thứ nhất nhằm đánh giá khả năng ưa thích ký chủ của rầy nâu đối với các giống lúa thí nghiệm, và cứ tiếp tục lấy chỉ tiêu mỗi ngày một lần Ngừng lấy chỉ tiêu khi trên 95 % giống lúa chuẩn nhiễm Jasmine85 chết (hoặc một trong những giống trắc nghiệm chết trên 95% không nhất thiết phải là giống chuẩn nhiễm) Khả năng. .. thu hoạch lúa Tập đoàn giống có số giống khác nhau rất nhiều về thời gian sinh trưởng Theo Nguyễn Đình Giao và ctv (1997), các giống có thời gian sinh trưởng quá ngắn có thể cho năng suất không cao vì sự sinh trưởng dinh dưỡng bị hạn chế, còn những giống có thời gian sinh trưởng quá dài cũng không cho năng suất cao vì sự dinh dưỡng dư có thể gây đổ ngã Đối với các giống lúa ngắn ngày do có thời gian... rầy Sau khi chuẩn bị chậu nuôi rầy, tiến hành bắt rầy cái có bụng to thả vào Số lượng rầy cái thả vào tùy thuộc vào lượng giống dùng trắc nghiệm và mật độ thả vào Thông thường một rầy cái cánh ngắn có thể đẻ 300-400 trứng, rầy cái cánh dài có thể đẻ 100 trứng Hai ngày sau khi thả rầy, khi thấy trên cơ thể rầy có mọc nấm trắng (rầy đã đẻ và chết), tiến hành bắt những rầy cái còn lại trên cây lúa sang mùng... của các enzyme và protein (Paul Gepts, 1990) Phương pháp phân tích nội nhũ từ ½ hạt lúa không chứa phôi bằng Kỹ thuật điện di SDS-PAGE protein giúp nhà chọn giống chọn được những cá thể ưu tú chất lượng cao từ những quần thể giống đã bị thoái hóa Dòng 007 giống lúa Tài Nguyên mùa; Dòng 124 giống lúa Klong Kluong; Dòng 03 giống lúa VD20 và dòng 1-2 giống lúa Nếp Bè được chọn lọc dòng thuần từ 4 giống lúa. .. dưỡng, năng lượng ánh sáng mặt trời để tạo năng suất nên phải chú ý tạo giống lúa thấp cây, lá đòng thẳng đứng (Bùi Chí Bửu, 1998) Võ Tòng Xuân (1979) cho rằng các giống lúa có thời gian sinh trưởng từ 110 đến 135 ngày luôn luôn cho năng suất cao hơn các giống chín sớm hơn và các giống muộn hơn ở phần lớn các điều kiện canh tác Tuy nhiên, Yosida (1972) (được trích dẫn bởi Trần Minh Thành, 1981), các giống. .. phẩm chất tốt chọn được khoảng 2-3 giống/ dòng đạt mục tiêu đề ra Bước 3: Khảo nghiệm sản xuất 2 vụ: Hè Thu 2010, Đông Xuân 2010-2011: phân tích các chỉ tiêu phẩm chất hạt 2.4 Phương pháp nghiên cứu cụ thể 2.4.1 Phương pháp thanh lọc tuyển chọn cá thể * Trong phòng thí nghiệm Ứng dụng qui trình điện di protein SDS-PAGE (Bộ Nông Nghiệp Nhật, 1986) để phân tích 40 hạt /giống/ dòng lúa từ nguồn giống gốc... phương và các dòng lai đã thực hiện tại Bộ môn Di Truyền Giống Nông Nghiệp, Trường Đại học Cần Thơ để chọn ra những cá thể ưu tú có hàm lượng amylose thấp và hàm lượng protein cao * Trong nhà lưới Từ kết quả phân tích điện di ½ hạt của những hạt lúa ưu tú được chọn đem trồng trong chậu điều kiện nhà lưới có cách ly an toàn để loại bỏ những cá thể có dạng hình xấu, đánh giá và tuyển chọn các cá thể có độ... hướng có tiềm năng năng suất cao, chống chịu tốt với một số sâu bệnh hại như: rầy nâu, đạo ôn, sâu cuốn lá,…đồng thời nhân dòng để có đủ hạt giống cho thí nghiệm ngoài đồng * Phương pháp đánh giá tính kháng rầy nâu Phương pháp thử rầy (theo phương pháp Bộ môn Bảo Vệ Thực Vật, Khoa Nông Nghiệp & SHƯD, Trường ĐHCT) 25 Bố trí thí nghiệm: thí nghiệm được bố trí theo thể thức hoàn toàn ngẫu nhiên với 12... kích thuớc hạt có liên quan chặt chẽ đến năng suất Trong giống lúa thông thường, kích thước hạt được điều khiển bởi đa gen, ở những giống lúa có hạt rất to, rất nhỏ hoặc có sự đột biến về dạng hạt, nó được điều khiển bởi một gen chủ lực Chiều dài và hình dạng hạt được di truyền độc lập với nhau và có thể kết hợp theo ý muốn mặc dù kiểu hạt này rất dày và mập Khối lượng hạt lúa có tương quan với thể tích