Nghiên cứu đáp ứng miễn dịch chống bệnh newcastle của gà hậu bị (1-19 tuần tuổi) với hai loại vacxin vô hoạt nhũ dầu và newcastle hệ 1

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI ------ NGUYỄN THỊ DUNG NGHIÊN CỨU ðÁP ỨNG MIỄN DỊCH CHỐNG BỆNH NEWCASTLE CỦA GÀ HẬU BỊ 1-19 TUẦN TUỔI VỚI HAI LOẠI VACXIN VÔ HO

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI

-
-

NGUYỄN THỊ DUNG

NGHIÊN CỨU ðÁP ỨNG MIỄN DỊCH CHỐNG BỆNH NEWCASTLE CỦA GÀ HẬU BỊ (1-19 TUẦN TUỔI) VỚI HAI LOẠI VACXIN VÔ HOẠT NHŨ DẦU VÀ NEWCASTLE HỆ I

LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP

Chuyên ngành : Thú y

Mã số : 60.62.50

Người hướng dẫn khoa học : PGS.TS NGUYỄN HỮU NAM

HÀ NỘI – 2012

LỜI CAM ðOAN

Tôi xin cam ñoan các kết quả nghiên cứu, số liệu ñược trình bày trong luận văn là trung thực và chưa từng ñược ai công bố trong bất cứ công trình nào khác cũng như chưa từng ñược sử dụng ñể bảo vệ một học

LỜI CẢM ƠN

ðầu tiên cho tôi ñược bày tỏ lòng biết ơn chân thành Ban giám hiệu trường ðHNN Hà Nội, khoa sau ñại học và các Thầy cô giáo trong nhà trường ñã tận tình giảng dạy, tạo ñiều kiện cho tôi tiếp cận với những kiến thức khoa học về nông nghiệp trong 2 năm học ở trường

Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn và sự kính trọng sâu sắc tới PGS.TS Nguyễn Hữu Nam , người thầy ñã giành nhiều thời gian quý báu tận tình hướng dẫn, giúp ñỡ tôi trong quá trình nghiên cứu thực hiện ñề tài và hoàn thành luận văn tốt nghiệp

Cho tôi ñược gửi lời cảm ơn chân thành tới Ban giám ñốc Trung tâm nghiên cứu và Huấn luyện chăn nuôi và tập thể các bộ nhân viên trong Trung tâm ñã ñộng viên, tạo mọi ñiều kiện thuận lợi cho tôi trong suốt quá trình học tập và hoàn thành ñề tài tốt nghiệp

Qua ñây tôi xin cảm ơn các bạn bè ñồng nghiệp người thân và gia ñình

ñã tạo ñiều kiện vật chất và tinh thần cho tôi trong suốt quá trình nghiên cứu

và hoàn thành luận văn này

Tác giả

Nguyễn Thị Dung

3.4.3 Một số phản ứng dùng xác ñịnh hiệu giá kháng thể Newcastle 33

3.4.5 Phương pháp xử lý số liệu 36

4.1 Vài nét về ñặc ñiểm sản xuất trại thực nghiệm gia cầm Liên Ninh 37

4.1.2 Chức năng, nhiệm vụ và trại thực nghiệm gia cầm Liên Ninh 37

4.1.3 Tình hình dịch tễ khu vực chăn nuôi của trại 38

4.2 Cơ cấu ñàn gà và một số bệnh thường gặp trong 3 năm 2009-2011 38

4.2.1 Cơ cấu của các ñàn gà trong 3 năm 2009-2011 38

4.2.2 Một số bệnh thường gặp của các ñàn gà ở 1-19 tuần tuổi 40

4.3 Biến ñộng hiệu giá kháng thể sau khi tiêm vacxin 41

4.3.1 Kết quả xác ñịnh hiệu giá kháng thể thụ ñộng 41

4.3.2 Hiệu giá kháng thể của ñàn gà sau khi dùng vacxin Lasota 44

4.3.3 Hiệu giá kháng thể sau khi dùng vacxin vô hoạt nhũ dầu và Newcastle hệ I 48

4.3.4 So sánh hiệu lực của 2 loại vacxin vô hoạt nhũ dầu và Newcastle hệ I 67

4.3.5 Ảnh hưởng của vacxin Newcatle vô hoạt nhũ dầu ñến sức khỏe và năng suất

NN&PTNT : Nông nghiệp và phát triển nông thôn

GMT : Geometric Mean Titer

4.9 Hiệu giá kháng thể Newcastle và tỷ lệ có kháng thể của các ñàn

4.10 Một số chỉ tiêu kinh tế kỹ thuật của ñàn gà thí nghiệm 1 69

DANH MỤC HÌNH

4.1 Hiệu giá kháng thể trung bình của gà Ri sau khi tiêm vacxin 1, 2,

1 MỞ ðẦU

1.1 ðặt vấn ñề

Bệnh Newcastle ñược phát hiện vào những năm 20 của thế kỷ 20, là bệnh truyền nhiễm cấp tính, có tính lây lan mạnh, gây chết với tỷ lệ cao ðến nay bệnh vẫn chưa có thuốc ñặc trị, nó vẫn còn là mối ñe dọa nguy hiểm cho ngành chăn nuôi gia cầm trên thế giới nói chung và Việt Nam nói riêng

Nguyên nhân gây bệnh là do một loại virus ñược Doyle phân lập trong

ổ dịch của gà tại Newcastle(Anh) (Doyle,1927) Mặc dù ñã có rất nhiều biện pháp ñược ñề ra nhằm ngăn chặn, khống chế bệnh nhưng bệnh vẫn xảy ra, ñặc biệt bệnh thường xuyên xảy ra ở giai ñoạn nuôi gà con và gà hậu bị gây thiệt hại lớn về kinh tế

Biện pháp hữu hiệu nhất là sử dụng vacxin ñể tạo miễn dịch chủ ñộng

ñể phòng bệnh Newcastle cho ñàn gà Những vacxin nhược ñộc, vacxin vô hoạt khi sử dụng ñã tạo ñược miễn dịch cho ñàn gà chống bệnh Newcastle.Vì vậy ở nhiều nước bệnh hầu như ñã ñược thanh toán Ở Việt Nam, một trong những khó khăn trong phòng bệnh cho ñàn gà là do chăn nuôi riêng lẻ, mặt khác do ñiều kiện khí hậu liên tục biến ñổi, cũng như việc bảo quản và sử dụng vacxin chưa ñúng cách Ngoài ra, ñiều kiện sản xuất vacxin trong nước còn có nhiều mặt hạn chế làm cho chất lượng vacxin bị ảnh hưởng Các nguyên nhân ñều dẫn ñến hệ quả là khả năng bảo hộ cho ñàn gà giảm, hiệu giá kháng thể sau khi tiêm vacxin biến ñộng nhiều

Trung tâm nghiên cứu và huấn luyện chăn nuôi là một trung tâm chuyên nghiên cứu và cung cấp giống gà ông bà, bố mẹ có năng suất, chất lượng cao cho nhiều tỉnh thành trong phạm vi cả nước Chính vì thế ñể nâng cao số lượng , chất lượng giống gà góp phần bảo vệ nguồn gen quý, ngoài việc ưu tiên ñầu

tư cho công tác chọn giống, thì việc tăng cường các biện pháp kỹ thuật thú y, phòng bệnh cho ñàn gà là một khâu hết sức quan trọng

Một vấn ñề ñặt ra là khi tiêm vacxin vô hoạt nhũ dầu cho ñàn gà con và hậu bị, cần phải biết ñược sự biến ñộng hiệu giá kháng thể, từ ñó xác ñịnh ñược khả năng miễn dịch chống bệnh của ñàn gà ñến mức ñộ nào? Xuất phát từ yêu cầu thực tiễn, ñể giúp người chăn nuôi sử dụng vacxin có hiệu quả thì việc tiến

hành nghiên cứu ñề tài: “Nghiên cứu ñáp ứng miễn dịch chống bệnh

Newcastle của gà hậu bị (1-19 tuần tuổi) với hai loại vacxin vô hoạt nhũ dầu và Newcastle hệ I” là cần thiết

2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU

2.1 Giới thiệu chung về bệnh newcastle

2.1.1 Lịch sử bệnh Newcastle

Hanson (1972) nêu rõ rằng bệnh Newcastle ựược phát hiện vào giữa năm hai mươi của thế kỷ này và trở thành mối ựe dọa cho ngành chăn nuôi gà thế giới Năm 1926 Kraneveld ựã thông báo một bệnh truyễn nhiễm lây lan và

tỷ lệ chết cao ở Indonesia Một bệnh tương tự ựược Doly thông báo năm 1926

ở Newcastle on Tyne, nước Anh

Dịch bệnh ở Anh xảy ra theo tài liệu ghi chép có liên quan ựến một con tàu vận chuyển thịt ựông lạnh mang theo gà nuôi, di chuyển từ Châu Á ựến cảng của Newcastle (Alexander, 1988) Doly bằng phản ứng miễn dịch chéo

ựã phân biệt với bệnh dịch tả gà và nguyên nhân gây bệnh là do virus Newcatle Sau một khoảng thời gian ngắn, bệnh không chỉ xảy ra ở Anh mà còn xuất hiện ở các nước khác như Indonesia, Hàn Quốc, Ấn độ, Nhật Bản với virus có ựộc lực cao

Năm 1951, bệnh lan tới Hawaii, Canada và tiếp tục lan rộng sang Châu

Âu và nhiều vùng khác nhau của Châu Phi

Năm 1971, bệnh xảy ra ở California gây thiệt hại lớn về kinh tế Tắnh chất bệnh nghiêm trọng hơn ở Châu Âu và Trung đông Các chuyên gia thú y

ở Mỹ ựặt tên bệnh: ỘVelogen Viscerotropic Newcastle DiseaseỢ

Năm 1977, hội nghị gia cầm thế giới tổ chức tại Atlanta (Mỹ) ựã làm rõ bệnh với kết luận: Tất cả các chủng virus phân lập ựược ở California, Trung đông và Châu Âu có cùng serotype

Năm 1980, tại hội thảo về bệnh Newcastle có sự tham gia của nhiều nhà nghiên cứu, virus Newcastle vẫn tồn tại với bản chất của nó nhưng dưới dạng một số chủng khác nhau, vì vậy ựã gây ra những biểu hiện lâm sàng khác nhau

2.1.2 Tình hình nghiên cứu bệnh Newcastle trên thế giới

*Bệnh Newcastle ở chim hoang dã

Chim hoang dã có khả năng mẫn cảm với bệnh Newcastle và là một trong những nguồn lây lan dịch bệnh Chính vì vậy trong thời gian dài chim hoang dã là ñối tượng ñược nghiên cứu rộng rãi ở khắp các nước trên thế giới nhằm ngăn chặn nguồn bệnh này

Qua nhiều năm nghiên cứu, (Luthgen, 1981), ñã lập một danh sách gồm

117 loài chim, trong ñó có 17 loài bị nhiễm vius Newcastle và thấy phần lớn

là do chim tiếp xúc với gia cầm ñã nhiễm bệnh

Ở Baghda, (Jumaily, 1989), dùng phản ứng HI kiểm tra 341 mẫu huyết thanh của 5 loài chim hoang dã, ông phát hiện có kháng thể kháng vius Newcastle ở một số mẫu với hiệu giá từ 1/2 - 1/128, trong ñó nhóm chim Columbalivia chiếm 8.0%, nhóm Strepiopelia Decasoto chiếm 2.5%

Vindevolge (1997) , nghiên cứu bệnh Newcastle ở chim hoang dã thấy virus nhiễm ở chim bồ câu hầu hết có tính hướng hệ hô hấp, chim có thể biểu hiện hoặc không Tác giả cho rằng những chim di cư bị nhiễm tự nhiên trong quá trình sinh sản cũng truyền kháng thể cho ñời sau qua lòng ñỏ

Estudillo (1972), ñã mô tả ổ dịch ở Mehico cho thấy gà lôi Nhật, Vẹt, Công, chim Yến có khả năng mẫn cảm với bệnh và có triệu chứng thần kinh

do lây nhiễm virus Newcastle

Qua nghiên cứu bệnh Newcastle ở chim hoang dã, các tác giả cho thấy những dấu hiêu của bệnh rất khác nhau, bất kỳ thể bệnh nào ở gà cũng có thể thấy ở các loài chim

* Bệnh Newcastle ở chim bồ câu (Pigeon)

Năm 1987, Pearson J.E, và cộng sự , báo cáo kết quả nghiên cứu chủng vius PMV – 1 phân lập từ chim bồ câu có triệu chứng liệt, vẹo cổ, run rẩy, mất thăng bằng, và chết Tác giả ñã dùng kháng thể ñơn dòng ñể xác ñịnh

vius gây bệnh Chủng phân lập ñược dùng gây bệnh cho bồ câu bằng ñường tiêm tĩnh mạch, thấy chim có biểu hiện bệnh như ngoài tự nhiên Nhưng gây bệnh bằng ñường mũi chỉ có một bồ câu có biểu hiện bệnh; thời gian chết lhoảng từ 4 – 25 ngày, virus bài xuất ñến 20 ngày, có bệnh tích viêm ruột dạ dày và hoại tử tuyến tụy Nếu gây bệnh cho gà qua lỗ huyệt, mũi hoặc tiêm vào túi khí ở ñốt ngực thì gà vẫn khoẻ mạnh; tiêm vào não gà con chúng chỉ

có ICPI giống nhóm Velogen và 4 trong 6 chủng vius phân lập có khả năng gây bệnh theo hướng tác ñộng thần kinh cho gà 6 tuần tuổi

Nghiên cứu bệnh Newcastle ở chim bồ câu thấy tỷ lệ mắc chiếm từ 70%, tỷ lệ chết có thể thấp, hiếm khi vượt quá 100% nhưng cũng có trường hợp tới 40% Thời gian ủ bệnh từ vài ngày ñến vài tuần Triệu chứng chủ yếu

30-là thần kinh và ỉa chảy, ngoài ra còn triệu chứng ở ñưòng hô hấp, viêm mũi, viêm màng kết mạc mắt, run rảy, ngẹo cổ và thiếu sự kết hợp (Alexander, 1986; Estudillo, 1972)

Ở Nhật Bản, Maeda M và cộng sự (1978) ñã nghiên cứu biến ñổi về tổ chức bồ câu bị mắc bệnh Newcastle Các tác giả thấy có hoại tử hoặc thoái hoá tổ chức lympho ở lách cũng như ở túi fabricius, tuyến ức, ruột, thận Ngoài ra còn thấy tăng sinh tế bào lympho ở lách, hình thành những ñám tế bào lympho ở thận và viêm não không chứa mủ Dựa vào các thay ñổi về tổ chức có thể thấy ñược chủng virus có hướng thần kinh hay nội tạng

*Bệnh Newcastle ở chim cút (Quail)

Theo Sharaway (1994), chim cút ít mẫn cảm với vius Newcastle hơn

gà, thời gian ủ bệnh từ 2-15 ngày, trung bình 5-6 ngày triệu chứng bệnh thay ñổi tuỳ theo ñộc lực của chủng gây bệnh Nếu nhiễm virus có ñộc lực cao, chim cút có biểu hiện ủ rũ, khó thở, bệnh kéo dài vài ngày rồi chết Quan sát thấy chim cút có thể bị sưng mắt và cổ, ỉa phân xanh ñôi khi có máu, chim cút

run rẩy, liệt chân, ñôi khi liệt cánh Tỷ lệ chết có thể tới 90% ở chim cút hậu

bị và 50% ở chim cút trưởng thành

* Bệnh Newcastle ở gà tây (Turkey)

Biểu hiện bệnh bình thường, ít nghiêm trọng, với triệu chứng chủ yếu là

hô hấp và thần kinh Bệnh có thể ảnh hưởng ñến sản xuất trứng, trứng có vỏ mềm, mất hình dáng và chất lượng trứng giảm, gà có thể liệt 1-2 chân, trong ổ dịch quá cấp có tỷ lệ chết cao

*Bệnh Newcastle ở loài thuỷ cầm

Vịt, ngan, ngỗng ñều có khả năng nhiễm bệnh Newcastle (Asplin, 1947; Estudillo, 1972; Higgins,1971) Ở ngỗng và vịt mắc bệnh có biểu hiện liệt chân, cánh và không có triệu chứng hô hấp Tỷ lệ nhiễm của ngỗng ngan và vịt khoảng 10% hoặc ít hơn Tỷ lệ chết chỉ có ở vịt và ngỗng khoảng 10%

*Bệnh Newcastle ở người

Suarez – Hernandez M, (1987) khảo sát huyết thanh học của virus Newcastle ở những công nhân chăn nuôi gà Kháng thể HI với virus bệnh Newcastle ñã ñược tìm ra ở 73/277 26,3%) người làm việc trực tiếp ở trại gà

và ở 110/23047,8%) người gián tiếp Sự khác nhau về số mẫu dương ở 2 nhóm người là không có ý nghĩa, vì bệnh ít xảy ra ở người, nhưng bệnh có thể gây viêm kết mạc mắt, các hạch lâm ba ngoại biên, trong trường hợp bệnh nặng có thể gây khó thở, viêm phổi Trẻ em có thể bị viêm não, màng não Papacella V và cộng sự (1987) theo dõi ảnh hưởng của bệnh ñường hô hấp gia cầm ñối với sức khoẻ của con người thấy rằng: không chỉ bệnh cúm

gà ảnh hưởng ñến người mà bệnh Newcastle cũng có thể gây bệnh cho người, ñầu tiên ở mắt, sau ñó có thể lan sang các tổ chức khác

* Bệnh Newcastle ở gà

Tại Newxealand, (Tisdal D.J., 1988) phát hiện ñược kháng thể ngăn cản

sự ngưng kết ñối với virus Newcastle ở gà, gà lôi và công Các loài này không

có biểu hiện triệu chứng lâm sàng nhưng vẫn phân lập ựược virus Newcastle thuộc nhóm Lentogen

đài Loan, LuY S (1986) nhận ựịnh các yếu tố nghi ngờ gây ra ổ dịch từ tháng 2 Ờ tháng 5 /1984 là sự ức chế miễn dịch do lây nhiễm virus IBD, dùng vacxin không thắch hợp ựã làm tăng tắnh gây bệnh của chúng

Bell J.G.(1988), ựã nghiên cứu sự lưu hành virus Newcastle ở 3 vùng có trại gà chăn nuôi theo kiểu công nghiệp và 3 vùng không có trại gà công nghiệp của Moroco vào mùa ựông năm 1986-1987, bằng cách thu thập mẫu huyết thanh và dịch khắ quản từ 100 gà ở mỗi vùng ựể kiểm tra Thấy lưu hành virus

ở các vùng phụ thuộc vào phương thức chăn nuôi tập trung hoặc chăn thả Năm 1989, ở Nigeria (Okoye JOA,1989) xảy ra 2 ổ dịch Newcastle không ựiển hình, gà không có triệu chứng thần kinh, không xuất huyết dạ dày tuyến, chỉ có các dấu hiệu ủ rũ, ỉa phân xanh, tỷ lệ chết từ 50-83,6%; mổ khám thấy dịch thẩm xuất ở ống khắ quản, lách teo, manh tràng xuất huyết

có dấu hiệu ngoại tử, các tế bào limpho giảm; ựã phân lập ựược virus Newcastle từ bệnh phẩm

Theo Zakay ỜRone (1966) ựể phòng bệnh Newcastle, con ựường duy nhất là dùng vacxin tạo miễn dịch chủ ựộng cho ựàn gà Quan ựiểm này ở các quốc gia khác nhau cũng khác nhau Higiins, D.A.(1988) ựã nhấn mạnh chương trình phòng bệnh Newcastle ở các nước không giống nhau mà phụ thuộc vào ựiều kiện kinh tế - xã hội, ựiều kiện khắ hậu

Theo Bene Jean, G.(1988) việc khống chế toàn cầu với bệnh Newcastle chỉ ựược thực hiện với tất cả các nước ựều chú trọng công tác phòng bệnh

* Bệnh Newcastle trên các loài chim và thủy cầm khác

Chim hoang dã là một trong những nguồn lây lan dịch bệnh Qua nhiều năm nghiên cứu Luthgen (1981), trong 117 loài chim trong ựó có 17 loài nhiễm virus Newcastle và thấy phần lớn do chim tiếp xúc với gia cầm ựã nhiễm bệnh

Năm 1985, ở Canada (Ide P.R,1987), lần ựầu tiên phân lập ựược virus Newcastle trong 6 ựàn bồ câu vùng Otario, Alberta và British Columbia

Năm 1987, Pearson J.E và cộng sự , báo cáo kết quả nghiên cứu chủng virus PMV Ờ 1 phân lập từ chim bồ câu có triệu chứng liệt, vẹo cổ, run rẩy, mất thăng bằng và chết Vịt, ngan, ngỗng ựều có khả năng nhiễm bệnh Newcastle (Estudillo, 1972)

2.1.3 Tình hình nghiên cứu bệnh Newcastle trong nước

Năm 1933 bệnh Newcastle ựã ựược Phan Văn Huyến phát hiện, gọi là bệnh dịch tả gà đông Dương Một vụ xảy ra trên gà ở Nam Bộ ựược Vitor mô

tả có triệu chứng giống bệnh Newcastle ựược ựề cập vào năm 1938

Năm 1949 tại Nha Trang, Jacottot và Lelouet ựã phân lập ựược virus Newcastle, ựã dùng chủng này ựể gây bệnh cho gà và tiêm truyền trên phôi trứng, bằng phản ứng ngưng kết hồng cầu và ức chế ngưng kết hồng cầu tác giả ựã xác ựịnh sự có mặt của virus Newcastle tại ổ dịch

Năm 1956, ở Sài Gòn, Nottre và cộng sự ựã phân lập ựược chủng virus Newcastle Từ 1955-1957 qua ựiều tra tình hình dịch bệnh ở 20 tình thành, kiểm tra 189 bệnh phẩm các tác giả thấy có 58 mẫu có virus Newcastle

Trần đình Từ và cộng sự (1979-1984), ựã xác ựịnh ựộc lực của các chủng virus vacxin Newcastle ựang sử dụng ở Việt Nam bằng phương pháp ựã chuẩn hóa của FAO độc lực ựược xác ựịnh dựa trên 3 chỉ số MDT, ICPI và IVPI, kết quả thấy 3 chủng virus Newcastle ựang sử dụng hiện nay có ựộc lực ổn ựịnh Chủng hệ I thuộc nhóm Mesogen, cùng loại với chủng H nhưng có ựộc lực cao hơn và ựặc tắnh gây bệnh khác bệnh khác với chủng H, do ựó Hệ 1 có thể có nguồn gốc từ chủng Mukteswar

Phan Văn Lục và cộng sự (1996), ựã theo dõi 6 cơ sở nuôi gà ở các tỉnh phắa Bắc, từ năm 1980-1991 Tác giả ựã ựề xuất lịch sử dụng vacxin thắch hợp là: 7 ngày, 21- 28 ngày, 50- 58 ngày và 133 -140 ngày; vacxin sử dụng là Lasota và hệ I, bằng phương pháp nhỏ mũi và tiêm dưới da tùy từng loại

vacxin ðồng thời tác giả cùng cộng sự, ñã nghiên cứu mối tương quan giữa hiệu giá kháng thể lưu hành và khả năng bảo hộ chống lại virus cường ñộc Newcastle Kết quả thấy: hiệu giá kháng thể lưu hành nhỏ hơn 2log2 thì gà không có khả năng bảo hộ, do ñó cần tiêm chủng lại Hiệu giá kháng thể lớn hơn 2log2 và nhỏ hơn 3 log2 thì 1 tháng sau khi kiểm tra lại kháng thể và dùng lại vacxin Hiệu giá kháng thể lớn hơn 3log2, tỷ lệ chuyển dương 90% thì gà có khả năng chống virus cường ñộc

Trần Thị Lan Hương (2000), nghiên cứu một số yếu tố ảnh hưởng ñến ñáp ứng miễn dịch chống bệnh Newcastle của ñàn gà công nghiệp Tác giả nhận thấy, liều lượng vacxin có ảnh hưởng ñến ñáp ứng miễn dịch chống bệnh Newcastle Lượng virus trong vacxin càng thấp thì hiệu giá kháng thể sinh ra thấp và thời gian bảo hộ ngắn

2.2 Virus học bệnh newcastle

2.2.1 Hình thái và cấu trúc

Virus Newcastle là virus ARN ña hình thái: Hình tròn, hình trụ, hình sợi Virus có vỏ bọc lipit, kích thước phân tử khoảng 500kb, bộ gen chứa 15,186

nucleotid Virus thường ña hình thái (ñặc trưng cho giống Rubulavirus), thường

có hình tròn với ñường kính khoảng 100 – 500nm, có sợi nhỏ rộng khoảng 100

nm và chiều dài thay ñổi Là virus có vỏ, bao bọc capsid hình xoắn ốc ñối xứng nhau như dạng hình sin (herring bone – shaped) dài 600 – 800 nm

- Haemagglutinin – Neuraminidase (HN): Có chức năng ngưng kết hồng cầu và có hoạt tính men Neuraminidase, tạo thành 2 chỗ nhô ra lớn ở bề mặt hạt virus

- Fusion protein (F): có vai trò liên hợp các tế bào bị nhiễm virus Newcastle lại với nhau, hình thành tế bào khổng lồ ña nhân

- Nuleocapsid protein (NP): Giống như Histin là một protein bảo vệ ARN

- Gốc phosphoryl hóa (P): Liên kết các nucleocapsid

- Matric protein (M): Có tác dụng gắn ARN virus với vỏ bọc

- Large polymerazase protein (L): Là một ARN polymerase liên kết với nucleocapsid

Hình 2.1 Hình thái của virus Newcastle

hồng cầu.Virus tách khỏi bề mặt tế bào do men Neuramidaza phá hủy thể thụ cảm trên bề mặt hồng cầu

* Hoạt tính men Neuraminidaza

Men Neuminidaza là một phần trong kháng nguyên HN, có mặt

trong tất cả các virus thuộc giống Rubulavirus Men Neuminidaza cắt ñứt

thụ các thụ thể trên bề mặt hồng cầu, khiến cho hiện tượng ngưng kết hồng cầu dần dần bị mất

* Khả năng liên hợp tế bào và dung giải hồng cầu

Virus Newcastle có khả năng dung giải hồng cầu hoặc liên hợp các tế bào theo cùng một cơ chế Sau khi virus bám vào các ñiểm thụ thể sẽ liên hợp vơi màng tế bào khiến cho các tế bào bị liên hợp lại với nhau (tương tự như hiện tượng hình thành thể hợp bào khi hạt virus này nảy mầm từ các tế bào) Màng tế bào hồng cầu sẽ bị dung giải cũng là kết quả của hiện tượng liên hợp

tế bào

2.2.3 Sức ñề kháng của virus Newcastle

Virus Newcastle và các Avian Paramyxovirus khác có thể bị phá hủy

bởi các tác nhân vật lý hóa học như nhiệt ñộ, ánh sáng (ánh sáng mặt trời và tia cực tím), sự oxy hóa, ñộ pH và các hóa chất Mức ñộ ảnh hưởng tùy thuộc vào chủng virus

Do virus có cấu tạo vỏ bọc ngoài là lipit nên rất mẫn cảm với các chất hóa học như ether, chloroform, formol và phenol, làm mất khả năng gây nhiễm nhưng không ảnh hưởng tới khả năng sinh miễn dịch của virus Virus

bị tiêu diệt ở 600C trong 30 phút, 1000C trong 1 phút, ở 4-200C virus có thể làm tồn tại hàng tháng, ở nhiệt ñộ âm virus tồn tại hàng năm pH < 2 hoặc pH

> 10 làm virus mất khả năng gây nhiễm Virus dễ bị tiêu diệt bởi tia tử ngoại Dung dịch glyxerin 50% có thể giữ virus trong 7 ngày ở 370C

Khả năng chịu nhiệt của virus mang ñặc tính di truyền, cá biệt có chủng chịu ñược nhiệt ñộ 560C trong 6 giờ mà vẫn còn khả năng gây

nhiễm Có thể ứng dụng ñặc tính này của virus ñể chế vacxin chịu nhiệt (chủng V4 phân lập từ Úc)

- Nhóm Velogen: Gồm các chủng có ñộc lực cao, cường ñộc tự nhiên

Thời gian gây chết phôi < 60 giờ (chủng GB Texas, Italian, Milano)

- Nhóm Mesogen: Gồm các nhóm có chủng ñộc lực vừa, có khả năng

gây bệnh nặng cho gà con nhưng chỉ gây bệnh nhẹ ở những gà > 6 tuần tuổi Thời gian gây chết phôi từ 60-90 giờ (chủng Hefoshire, chủng Mukteswar)

- Nhóm Lentogen: Gồm các chủng có ñộc lực thấp, không gây bệnh

hoặc ít gây bệnh nhẹ cho gà con dưới 1 tuần tuổi Thời gian gây chết phôi >

90 giờ (chủng Hitchner B1, chủng Lasota, chủng F, chủng Queensland V4) Tuy nhiên, hiện nay người ta thường dùng thuật ngữ ‘‘high –virulence’’, ‘‘moderate-virulence’’ và ‘‘low-virulence’’ Mức ñộ ñộc lực và khả năng gây bệnh của mỗi nhóm ñược ñánh giá bằng các chi số sinh học:

- MDT (Mean death time): Thời gian trung bình gây chết phôi (ñơn vị tính bằng giờ) với liều tối thiểu gây chết 100% phôi

- ICPI (Intracerbral Pathogenicity Index): Chỉ số gây bệnh khi tiêm não

gà con 1 ngày tuổi

- IVPI (Intravenous pathogenicity Index): Chỉ số gây bệnh khi tiêm tĩnh mạch gà 6 tuần tuổi

- EID50 (Embryo infective Dose): Liều gây nhiễm cho 50% phôi

Các chủng virus Newcastle có ICPI ≥ 1,6 và gây IVPI có giá trị gần bằng 3 thì ñược xếp vào nhóm Velogen

2.2.5 Nuôi cấy và lưu giữ virus Newcastle

- Trên tế bào phôi gà: Khi nuôi cấy virus Newcastle trên phôi 9-11

ngày tuổi bằng cách tiêm vào xoang niệu mô, khả năng và thời gian gây chết phôi của các chủng khác nhau là khác nhau Bệnh tích ñặc trưng là phôi còi cọc, xuất huyết tổ chức liên kết dưới da vùng ñầu, cổ, toàn thân, màng phôi thủy thũng sưng dầy lên Các chủng có ñộc lực cao thì thời gian gây chết phôi càng nhanh Khi cấy chuyển nhiều lần qua phôi gà, người ta thu ñược giống virus Newcastle nhược ñộc dùng ñể chế tạo vacxin phòng bệnh

-Trên môi trường tế bào: Virus Newcastle có khả năng nhân lên trên

nhiều loại môi trường tế bào khác nhau như tế bào thận lợn, thận khỉ, tế bào

xơ phôi gà một lớp Sau 24-72 giờ gây nhiễm virus gây bệnh tích tế bào làm biến ñổi hình thái, tế bào bị co tròn lại hoặc vỡ ra tạo thành các tế bào không

lồ ña nhân Căn cứ vào sự hình thành, kích thước và hình thái ñám bệnh tích

tế bào có thể xác ñịnh ñộc lực virus Newcastle Những chủng virus có ñộc lực thấp không hình thành bệnh tích tế bào nếu trong môi trường nuôi cấy không

bổ sung thêm diethlaminoethyl và ion Mg2+ hoặc trypsin

- Trên ñộng vật: Trong phòng thí nghiệm 1, virus Newcastle có thể

gây bệnh cho nhiều loài vật nhưng thường sử dụng gà ñể gây bệnh vì gà mắc bệnh tự nhiên

2.3 Dịch tễ học của bệnh

2.3.1.Loài vật mắc bệnh

Trong thiên nhiên, gà cảm thụ nhất với bệnh

- Gà mọi nòi giống, mọi lứa tuổi ñều mắc bệnh

- Gà con nở ra từ những trứng của gà mẹ khỏi bệnh hoặc ñược tiêm phòng vacxin thì có sức ñề kháng với bệnh trong vài tuần lễ ñầu Tuy nhiên những trứng gà này chỉ có thể có kháng thể từ ngày ấp thứ 15 do kháng thể ñi vào máu, còn từ ngày thứ 15 trở về trước những trứng này cũng cảm thụ với bệnh như những trứng bình thường khác

- Trong thiên nhiên bồ câu, chim sẻ, chim cút và một số loài chim khác cũng cảm thụ với bệnh

- Vịt và ngỗng có thể bị nhiễm bệnh nhưng không hoặc ít biểu hiện triệu chứng lâm sàng, mặc dù có thể mắc với chủng gây chết cho gà

- Ngoài ra người và một số ñộng vật có vú như chó, chuột… cũng có thể mắc bệnh

2.3.2 ðường truyền lây

Virus xâm nhập vào cơ thể chủ yếu qua ñường tiêu hóa, ngoài ra có thể lây qua ñường hô hấp Gà bệnh thường thải ra một lượng lớn virus qua phân làm lây lan bệnh cho các gà khác trong ñàn qua ñường tiêu hóa

Gây bệnh thực nghiệm qua tiêm bắp, tĩnh mạch hoặc não có thể gây các triệu chứng thần kinh

ðường truyền dọc (mẹ truyền cho con qua phôi trứng) hiện vẫn còn gây tranh luận và bằng chứng thực sự cho ñường truyền lây này chưa rõ ràng Thí nghiệm 1 với các chủng cường ñộc bị cản trở bởi hiện tượng ngừng ñẻ ở gà bị bệnh Với những trứng nhiễm bệnh ở ngoài tự nhiên khi ñem ấp ñều bị chết phôi Những quả trứng bị vỡ hoặc nứt có thể là nguồn lây nhiễm cho gà con vì bị nhiễm phân chứa virus ở ngoài vỏ trứng, virus xâm nhập vào vỏ làm lây bệnh

Bệnh xảy ra quanh năm nhưng tập trung vào vụ ñông xuân Bệnh lây lan nhanh, mạnh, tỷ lệ ốm và tỷ lệ chết cao

2.4 Triệu chứng

2.4.1 Triệu chứng lâm sàng

Thời gian nung bệnh dao ñộng từ 2-15 ngày (trung bình 5-6 ngày) sau khi nhiễm bệnh tự nhiên Thời gian nung bệnh dài hay ngắn phụ thuộc vào chủng virus, lứa tuổi và sức ñề kháng của cơ thể Ngoài ra, còn phụ thuộc vào hiện tượng nhiễm trùng kế phát, ñiều kiện môi trường, ñường xâm nhập, số lượng virus

* Bệnh thường tiến triển theo ba thể chính

- Thể quá cấp tính: do chủng virus có ñộc lực rất cao gây ra Thường

chỉ xuất hiện ở ñầu ổ dịch, bệnh tiến triển rất nhanh, con vật ủ rũ cao ñộ, sau vài giờ thì chết mà chưa có biểu hiện triệu chứng lâm sàng

- Thể cấp tính: ñây là thể bệnh phổ biến Trong ñàn gà xuất hiện một số

con ủ rũ, kém hoạt ñộng, bỏ ăn, lông xù lên, cánh xã như khoác áo tơi Gà con chậm chạp, thường ñứng tụ lại thành ñám; gà lớn tách ñàn thích ñứng một mình, con trống thôi gáy, con mái ngừng ñẻ Trên nền chuồng thấy xuất hiện nhiều bãi phân trắng như phân cò Gà bệnh thường sốt cao 42,5 - 43oC

Sau khi xuất hiện các triệu chứng ñầu tiên, gà lờ ñờ rồi trở nên khó thở trầm trọng Từ mũi chảy ra một chất nhớt màu ñỏ nhạt hoặc trắng xám hơi nhớt Gà bệnh hắt hơi, vảy mỏ liên tục thường kêu thành tiếng “toác toác“, bệnh nặng gà không thở ñược bằng mũi, do có nhiều fibrin màu xám xẫm ở niêm mạc miệng, hầu, họng, xoang mũi cho nên gà phải vươn cổ, há mỏ ñể thở Xung quanh mắt và ñầu thường bị phù thũng

Gà bệnh bị rối loạn tiêu hóa trầm trọng: gà bỏ ăn, uống nhiều nước Thức ăn ở diều không tiêu, nhão do thức ăn lên men, sờ tay vào diều như sờ vào túi bột Khi cầm chân gà dốc ngược lên từ mồm sẽ chảy ra một chất nước nhớt, mùi chua khắm Bệnh kéo dài vài ngày thì sinh ỉa chảy: phân lúc ñầu còn ñặc, có thể lẫn máu, màu nâu sẫm; sau loãng dần có màu trắng xám do chứa nhiều muỗi urat Lông ñuôi gà bẩn, dính bết phân Niêm mạc hậu môn xuất huyết có những tia máu ñỏ

Mào yếm của gà bị ứ máu màu tím bầm trong thời gian khó thở, sau chuyển màu tái dần do mất máu Gà bị run, cổ ngoẹo, liệt chân và cánh, biều hiện tư thế opisthotonus Thể bệnh này gà thường chết sau vài ba ngày do bại huyết Với những ñàn gà mẫn cảm, tỷ lệ chết có thể lên ñến 100%

- Thể mạn tính: thường xuất hiện ở cuối ổ dịch với các bệnh biểu

hiện do rối loạn hệ thần kinh trung ương Do tổn thương tiểu não, gà bệnh

có những chuyển ñộng bất bình thường: vặn ñầu ra sau, ñang ñi bỗng dừng lại, ñi giật lùi, ñi vòng tròn Có khi gà mổ nhiều lần vẫn không trúng thức

ăn Khi bị kích thích bởi tiếng ñộng hay sự va chạm thì ñột nhiên gà ngã lăn ra ñất, lên cơn ñộng kinh co giật, các cơn ñộng kinh này thường mãnh liệt vào lúc sáng sớm khi mới mở cửa chuồng

Gà ñẻ tỷ lệ ñẻ giảm, kéo dài trong vài tuần Bệnh mãn tính thường kéo dài vài ngày, vài tuần Gà chết do ñói và kiệt sức Nếu ñược chăm sóc gà có thể qua khỏi nhưng vẫn ñể lại di chứng thần kinh trong một thời gian dài Gà lành bệnh ñược miễn dịch suốt ñời

* Dựa vào ñặc tính sinh học và ñặc ñiểm gây bệnh của mỗi chủng, bệnh ñược chia thành 5 thể khác nhau (Beard and Hanson, 1984)

- Thể Doyle (Viscertropic Velogen): là thể ñược Doyle nhận ra ñầu

tiên vào năm 1927, gây ra bởi chủng Velogen Bệnh ở thể cấp tính, có tỷ

lệ chết cao 90-100%, xảy ra ở mọi lứa tuổi, bệnh tích ñặc trưng là xuất huyết tiêu hóa

- Thể Beach (Neurotropic Velogenic): là thể bệnh ñược Beach diễn tả

vào năm 1942, gây ra bởi chủng Velogen Bệnh ở thể cấp tính, gây chết nhanh

ở gà mọi lứa tuổi, gây bệnh tích ở hô hấp và thần kinh mà không gây bệnh tích ở hệ tiêu hóa Thể bệnh này ñược gọi là bệnh hô hấp thần kinh hoặc Pneumoencephatitis

- Thể Beudette (Mesogenic): Là thể bệnh ñược Bneaudette mô tả vào

năm 1948, bệnh biểu hiện hô hấp cấp tính, gây triệu chứng thần kinh ñối với gia cầm non và gây chết, nhưng ít gây chết ñối với gia cầm trưởng thành Virus gây ra thể bệnh này thuộc chủng Mesogen, do ñó có thể dùng chế vacxin

- Thể Hitchner (Respiratory): Bệnh gây ra bởi virus nhóm Lentogen như

chủng B1, F, La Sota Thể bệnh ñược Hitchner diễn tả năm 1984, không biểu hiện rõ triệu chứng hô hấp

- Thể nội tạng (Asymptomatic enteric): Không biểu hiện triệu chứng

bên ngoài và bệnh tích bên trong Virus có thể phân lập từ phân, dạ dày gà bệnh (French và cộng sự, 1967) ðây là chủng có ñộc lực thấp như Lister 2C, V4 nên có thể dùng chế vacxin

2.5 Bệnh tích

* Bệnh tích ñại thể:

- Thể quá cấp tính: Thường bệnh tích không rõ ràng

- Thể cấp tính: Xác chết gầy, mào yếm tím bầm Xoang mũi và miệng chứa nhiều dịch nhớt màu ñục Có thể thấy niêm mạc hầu, họng, khí quản xuất huyết, viêm và phủ màng giả fibrin Túi khí sưng dày, nếu bị nhiễm trùng kế phát sẽ thấy túi khi bị viêm cata hoặc có dịch thủy thũng Một số trường hợp quan sát thấy rõ tổ chức liên kết vùng ñầu, cổ, hầu bị phù thũng, thâm nhiễm dịch thẩm xuất màu vàng dễ ñông ñặc như gelatin Một số khác lại thấy xuất hiện dịch thẩm xuất màu vàng dễ ñông ñặc ngoài không khí tích

tụ ở xoang bao tim hoặc xoang ngực

Bệnh tích ñiển hình thường tập trung ở ñường tiêu hóa: Niêm mạc dạ dày tuyến xuất huyết thành những chấm màu ñỏ, tròn to bằng ñâu ñinh ghim, mỗi ñiểm tương ứng với một lỗ ñổ ra của của tuyến tiêu hóa Nhiều trường hợp hiện tượng xuất huyết không thành ñiểm mà tập trung thành dải, thành vệt ở ñầu và cuối cuống mề (chặn trước và chặn sau của dạ dày tuyến) Dạ dày cơ, dưới lớp sừng kelatin cũng bị xuất huyết thâm nhiễm dịch thẩm xuất kiểu gelatin Niêm mạc ruột non xuất huyết, viêm cata trong giai ñoạn ñầu Giai ñoạn sau các nang lâm ba bị viêm loét, rõ nhất ở các mảng Payer Vết loét có thể thấy ở mặt ngoài có hình tròn, hình trứng hay hình hạt ñậu, có màu mận chín Mổ ra thấy vết loét dày cộm lên trên bề mặt màu nâu dễ bóc Trên niêm mạc bên cạnh vết loét là những ñám xuất huyết (trường hợp bệnh nặng

có thể lan xuống tận ruột già gần hậu môn)

Lách khơng sưng, bị hoại tử Gan hoại tử, xuất huyết, một số đám thối hĩa mỡ màu vàng nhạt Thận hơi sưng, trên cĩ sọc trắng do tích nhiều muối urat Dịch hồn, buồng trứng bị xuất huyết thành từng đám, từng vệt Xuất huyết ở các màng thanh dịch như xoang bao tim, xoang ngực, bề mặt xương

ức Não viêm, xuất huyết

* Bệnh tích vi thể:

- Hệ thần kinh: Bệnh tích đặc biệt ở tiểu não; viêm não và cột sống khơng cĩ mủ, cĩ nốt hoại tử ở dây thần kinh đệm, xâm nhiễm tế bào lympho

ở xung quanh mạch quản, tế bào biểu mơ trương to

- Mạch quản: Xung huyết, phù thũng, chứng huyết khối ở các mao mạch và hoại tử nội mơ huyết quản

- Hệ lympho: ðặc trưng là sự biến mất của các mơ lympho Tăng sinh

tế bào đơn nhân ở nhiều cơ quan, đặc biệt là tế bào gan Tế bào lympho bị phá hủy hoặc hình thành khơng bào ở miền vỏ và miền tủy của lách và tuyến ức Các tế bào túi fabricius cũng bị phá hủy

- Hệ tiêu hĩa: Xuất huyết và hoại tử tế bào niêm mạc ruột

- Hệ hơ hấp: Niêm mạc đường hơ hấp trên bị xung huyết, phù thũng, cĩ

sự xâm nhiễm của tế bào lympho và đại thực bào, đặc biệt rõ nêu bệnh lây qua đường hơ hấp Túi khí phù thũng, tăng sinh dày lên, xâm nhiễm tế bào

- Hệ sinh dục: Buồng trứng bị ảnh hưởng, khơng hình thành vỏ trứng trong ống dẫn trứng, hình thành các nang lympho

- Các cơ quan khác: Hoại tử ở gan, lách, xuất huyết túi mật, tim Tụy bị xâm nhiễm tế bào lympho

2.6 Chẩn đốn

* Dựa vào đặc điểm dịch tễ học, triệu chứng lâm sàng và bệnh tích mổ khám để chẩn đốn bệnh

* Chẩn đốn virus học

- Gây bệnh thí nghiệm 1: Lấy bệnh phẩm là não, gan, lách, phổi của gà bệnh mới chết, nghiền hồ với nước sinh lý thành huyễn dịch 20% Lọc, ly tâm, bố sung kháng sinh để diệt tạp khuẩn Tiêm cho gà con hoặc gà dị chưa được tiêm vacxin Liều lượng 1ml vào dưới da hay bắp thịt Sau 3 - 5 ngày xuất hiện các triệu chứng bệnh Sau 7 - 10 ngày mổ khám thấy bệnh tích giống như gà mắc bệnh tự nhiên

- Gây bệnh cho phơi: Dùng huyễn dịch bệnh phẩm trên tiêm cho 5 phơi gà

từ 9 - 11 ngày tuổi vào xoang niệu mơ, mỗi phơi 0,2ml, tốt nhất là lấy phơi gà của đàn gà SPF (specific – pathogen – free) hoặc gà khơng cĩ kháng thể Newcastle Sau đĩ ấp tiếp trong tủ ấm 370C Virus Newcastle cường độc thường gây chết phơi sau 4 - 7 ngày, thu hoạch lấy nước trứng, kiểm tra bằng phản ứng

HA, nếu bệnh phẩm cĩ virus Newcastle thì phản ứng HA là dương tính

- Gây nhiễm cho mơi trường tế bào: Thường sử dụng mơi trường tế bào

xơ phơi gà 1 lớp Nếu bệnh phẩm cĩ virus sau 72h gây nhiễm thì virus gây bệnh tích tế bào

* Chẩn đốn huyết thanh học: Cĩ thể sử dụng nhiều phản ứng khác nhau như: Phản ứng AGP, Elisa, phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu (HI), phản ứng trung hồ, kỹ thuật RT – PCR… để phát hiệnh bệnh Newcastle

* Phân lập virus

Bệnh phẩm để phân lập virus là phân, các chất chứa trong ống tiêu hĩa,

hơ hấp, ổ nhớp, các cơ quan phủ tạng và não của gia cầm sống hoặc chết Xử

lý bệnh phẩm, huyễn dịch thu được tiêm cho phơi trứng từ 9-11 ngày tuổi Trứng được ấp tiếp ở nhiệt độ 370C, theo dõi trứng từ 5-7 ngày, thu hoạch nước trứng và kiểm tra bằng phản ứng HA, HI để xác định virus phân lập là virus Newcaslte hoặc khơng

* Xác định độc lực của virus Newcastle: Theo OIE (1996), FAO (1978), (Alexander D.J, 1984), để đánh giá tính độc lực của chủng virus phân lập, phải xác định các chỉ số sinh học MDT, ICPI, IVPI như sau:

- Xác ñịnh thời gian trung bình gây chết phôi MDT ( Mean death time): Virus phân lập ñược tiêm cho trứng có phôi từ 9-10 ngày tuổi Thời gian trung bình gây chết phôi của các chủng virus Newcastle ñược phân vào 3 nhóm:

Velogen: MDT < 60 giờ

Mesogen: MDT = 61-90 giờ

Lentogen: MDT > 90 giờ

Chỉ số ñộc lực của một số chủng virus Newcastle

- Xác ñịnh chỉ số gây bệnh khi tiêm tĩnh mạch gà 6 tuần tuổi IVPI (Intravenous Pathogencity Index) Chỉ số IVPI ñược tính bằng ñiểm quy ñịnh cho mỗi biểu hiện của bệnh Theo tiêu chuẩn phân loại của FAO, OIE, nhóm Velogen là những virus ñộc lực cao, giá trị IVPI >1,6 gần ñến 3 Trong khi ñó chủng Mesogen và Lentogen có giá trị 0.00

2.7 Miễn dịch chống bệnh Newcastle

2.7.1 Miễn dịch thụ ñộng

Ở gia cầm non, hệ thống miễn dịch chưa phát triển hoàn thiện Vì vậy ngay từ khi mới nở, cơ thể của chúng hoàn toàn không có khả năng chống lại các tác nhân gây bệnh một cách chủ ñộng và ñặc hiệu Theo Heller và Nathan

(1977) trạng thái miễn dịch ựặc hiệu ở gà con chỉ có thể có ựược khi cơ thể

mẹ có miễn dịch chống bệnh Newcastle và truyền kháng thể ựặc hiệu cho con qua lòng ựỏ trứng đây là kháng thể thụ ựộng, là cơ sở tạo nên miễn dịch thụ ựộng ở gà con

Hiệu giá kháng thể thụ ựộng ở gà con có liên quan ựến hiệu giá kháng thể có trong lòng ựỏ trứng và trong huyết thanh của gà mẹ Hiệu giá kháng thể thụ ựộng cao hay thấp khác nhau ở gà con 1 ngày tuổi có ý nghĩa quan trọng ựối với gà con trong tuần lễ ựầu Lượng kháng thể này chỉ tồn tại trong một thời gian ngắn nên không có khả năng bảo hộ lâu dài cho gà con Vì vậy, việc kiểm tra kháng thể thụ ựộng của gà con là cần thiết ựể xác ựịnh thời ựiểm sử dụng vacxin lần ựầu Tuy nhiên khi dùng vacxin tạo miễn dịch chủ ựộng cho gà thì kháng thể thụ ựộng sẽ trung hòa một số virus của vacxin khi sử dụng vacxin lần ựầu (Alexander, D.J 1991)

2.7.2 Miễn dịch chủ ựộng

Khi một kháng nguyên xâm nhập vào cơ thể, cơ thể sẽ ựáp ứng lại trước hết bằng ựáp ứng miễn dịch không ựặc hiệu, sau ựó bằng ựáp ứng miễn dịch ựặc hiệu

đáp ứng miễn dịch ựặc hiệu có thể là ựáp ứng miễn dịch dịch thể, tạo

ra kháng thể dịch thể, là các lớp globulin miễn dịch (Ig) hoặc ựáp ứng miễn dịch trung gian tế bào tạo ra các lympho T mẫn cảm hoặc là cả hai đây là các kháng thể chủ ựộng, là cơ sở tạo ra miễn dịch chủ ựộng cho cơ thể

Theo Tims và cs (1997), ựối với virus Newcastle, khi vào cơ thể gà sẽ kắch thắch cơ thể gà sinh ra ựáp ứng miễn dịch dịch thể là chủ yếu Virus Newcastle nhược ựộc vào cơ thể, chỉ sau 2 - 3 ngày ựáp ứng miễn dịch qua trung gian tế bào ựã xuất hiện Chắnh nhờ có quá trình ựáp ứng miễn dịch này, ta có thể giải thắch ựược khả năng bảo hộ của gà có ựược trước khi kháng thể dịch thể xuất hiện

Ở quá trình ñáp ứng miễn dịch dịch thể với virus Newcastle, sự hình thành kháng thể cũng tuân theo quy luật chung Khi virus Newcastle vào cơ thể, kháng thể dịch thể không sinh ra ngay lập tức mà phải có thời gian tiềm tàng từ 4 - 5 ngày, kháng thể dịch thể mới xuất hiện, lượng kháng thể tăng dần, ñạt mức cao nhất khoảng 3 - 4 tuần Nếu không nhận ñược kích thích lại của kháng nguyên thì kháng thể trong máu giảm dần và biến mất sau một thời gian Thời gian tồn tại của kháng thể dài hay ngắn, lượng kháng thể ñược sản xuất ra nhiều hay ít còn phụ thuộc vào chủng virus Kháng thể ngăn trở ngưng kết hồng cầu tồn tại một năm sau khi gà khỏi bệnh, do chủng virus Newcastle thuộc nhóm Mesogen, còn nếu sử dụng vacxin phải sau nhiều lần tiêm nhắc lại Kháng thể Newcastle chỉ tồn tại trong cơ thể một thời gian rồi bị ñào thải, nên khi lượng kháng thể giảm phải tiêm nhắc lại tạo trạng thái miễn dịch cao cho

cơ thể ðường nhiễm có ảnh hưởng trực tiếp ñến ñáp ứng miễn dịch, vacxin cho uống không thu ñược kháng thể ñồng ñều và cao (Allan, 1978)

Trong quá trình ñáp ứng miễn dịch dịch thể ở gia cầm, thành phần của kháng thể dịch thể gồm có 4 lớp globulin miễn dịch: IgG, IgM, IgA và IgD

Ở bệnh Newcastle, virus vào cơ thể lần ñầu sẽ gây ra ñáp ứng miễn dịch sơ cấp Trong quá trình ñáp ứng miễn dịch này, lớp kháng thể tạo ra ban ñầu chủ yếu là IgM, sau ñó là lớp IgG tạo ra yếu hay trung bình Khi virus vào lần sau sẽ gây ra ñáp ứng miễn dịch thứ cấp Trong quá trình ñáp ứng miễn dịch này, lớp kháng thể ñược tạo ra chủ yếu là IgG, còn IgM chỉ có số lượng rất ít

Cùng với các lớp globulin miễn dịch có trong huyết thanh, do tương bào của tổ chức hạch, lách sản xuất ra, còn có vai trò quan trọng của các lớp globulin miễn dịch cục bộ, do các tương bào của tổ chức lympho dưới niêm mạc tiết ra, ñổ vào màng nhầy ñệm ở ñường hô hấp trên, ñường tiêu hóa của gà, tạo miễn dịch cục bộ cho cơ thể Thành phần của lớp globulin miễn dịch này chủ yếu là lớp IgA, ngoài ra còn có một ít là lớp IgG Những

gà sống sót sau khi bị bệnh Newcastle, cơ thể của chúng ñược miễn dịch, miễn dịch này là miễn dịch chủ ñộng

Dựa trên cơ sở ñó người ta ñã tạo miễn dịch chủ ñộng cho gà chống bệnh Newcastle bằng việc tiêm vacxin

2.3.3 Quy luật hình thành kháng thể ñặc hiệu

Kháng thể không sản sinh ra ngay sau khi kháng nguyên xâm nhập vào

cơ thể mà chỉ xuất hiện sau 6 - 7 ngày, rồi tăng dần và ñạt mức cao nhất sau 2 -

3 tuần, hiệu giá kháng thể tồn tại một thời gian khoảng vài tháng hoặc dài hơn Sau khi kháng nguyên kích thích, các tế bào có thẩm quyền miễn dịch tiếp nhận kháng nguyên và phải mất một thời gian biệt hóa, phân chia trở thành tế bào sản sinh kháng thể, khi ñó mới có kháng thể xuất hiện và xuất hiện sớm nhất là IgM sau ñó IgG

Nếu ñưa kháng nguyên vào cơ thể lần thứ hai theo ñúng ñường, ñúng thời gian, có tính chất nhắc lại thì thời gian xuất hiện kháng thể sớm hơn và hiệu giá nhiều hơn, vì khi bị kháng nguyên lần ñầu tiên kích thích, một số tế bào có thẩm quyền miễn dịch ñã biệt hóa thành tế bào sản xuất kháng thể và tiếp nhận thông tin kháng nguyên cất giữ lại Khi kháng nguyên vào lần sau và tiếp xúc với các tế bào này thì chúng chỉ việc “nhớ” lại ñể sản sinh kháng thể ðây là cơ sở của hiện tượng “nhớ miễn dịch” Vận dụng cơ chế này trong việc tiêm phòng vacxin ñược gọi là phương pháp “tiêm nhắc lại”

Kháng thể chỉ tồn tại trong cơ thể một thời gian nhất ñịnh, tùy vào loại kháng nguyên, tùy từng cơ thể, tùy vào ñường ñưa kháng nguyên,… Kháng thể sản sinh ra có thể chỉ tồn tại vài tuần, có khi vài tháng hay lâu hơn nữa mới bị ñào thải Miễn dịch do virus kích thích nói chung có thời gian miễn dịch lâu hơn miễn dịch do vi khuẩn kích thích như: vacxin phòng bệnh Newcastle, vacxin dịch tả,… hay có khi có miễn dịch suốt ñời Khi biết kháng thể sắp hết hay giảm dưới mức bảo hộ ta nên tiến hành phương pháp tiêm phòng vacxin tái chủng

Quy luật hình thành kháng thể chịu tác ñộng của rất nhiều yếu tố chủ quan và khách quan Trong ñó ñặc biệt là ñặc tính, bản chất của kháng nguyên kích thích khả năng tạo miễn dịch của cơ thể

2.8 Vacxin và phòng bệnh bằng vacxin

2.8.1 Khái niệm vacxin

Khái niệm “Vacxin” ñược bắt nguồn từ chữ latin “Vacca” có nghĩa là

“bò cái” Nhờ có vacxin phòng bệnh ñã cứu hàng triệu người không chết vì bệnh ñậu mùa, bệnh dại, bệnh lao, Nhiều bệnh truyền nhiễm, nguy hiểm ñối với con người và ñộng vật ñược khống chế và từng bước ñược loại trừ khỏi từng phần Tuy nhiên, cuộc ñấu tranh với bệnh tật, ñặc biệt là bệnh truyền nhiễm ñể bảo vệ sức khoẻ của con người và ñộng vật vẫn còn khá gay go, phức tạp, cho nên việc nghiên cứu, chế tạo các loại vacxin mới và cải tiến nâng cao hiệu lực phòng bệnh các loại vacxin ñã có, vẫn còn ñòi hỏi các nhà khoa học phải quan tâm

Ngày nay, không chỉ có vacxin phòng bệnh truyền nhiễm mà còn có vacxin phòng bệnh ký sinh trùng, vì vậy thuật ngữ vacxin ñược hiểu rộng hơn, ñó là một chế phẩm sinh học chứa vật chất của mầm bệnh ñược gọi là

“kháng nguyên” khi ñưa vào cơ thể người và ñộng vật sẽ kích thích cơ thể tạo

ra trạng t.hái miễn dịch giúp cơ thể chống lại mầm bệnh (Outteridge, 1985)

2.8.2 Yêu cầu ñối với một vacxin

ðể ñáp ứng ñược yêu cầu phòng bệnh, một loại vacxin phải ñáp ứng ñược những yêu cầu tối thiểu sau ñây (Nguyễn Bá Hiên, 2009)

- Vacxin phải chứa các kháng nguyên và các kháng nguyên ñó phải ñược

hệ thống miễn dịch coi là mục tiêu cần tấn công

- Các kháng nguyên trong vacxin phải kích thích sinh ñáp ứng miễn dịch phòng hộ, nghĩa là kháng nguyên không kích thích sinh các ñáp ứng miễn dịch không phòng hộ Sự phòng hộ phải ñạt ñược khi cơ thể tiếp xúc với mầm bệnh

và lý tưởng nhất sự phòng hộ này phải kéo dài

- Vacxin phải kích thích ñáp ứng miễn dịch mạnh và tốt nhất không cần chất bổ trợ

- Vacxin kích thích sinh miễn dịch tốt mà không cần tiêm nhắc lại và tốt nhất là ñường sử dụng vacxin ñơn giản

- Vacxin phải an toàn, ñây là tiêu chuẩn ñánh giá khi sử dụng vacxin trên ñộng vật ñích, tức là vacxin không gây bệnh, không gây các phản ứng phụ hoặc gây chết ở ñộng vật sử dụng vacxin

- Vacxin phải thuần khiết tức là trong vacxin chỉ chứa duy nhất một hay một vài loại kháng nguyên ñược dùng làm vacxin mà không bị nhiễm các loại tạp khuẩn khác

- Về thực tế, giá 1 liều phải thấp, ổn ñịnh về mặt sinh học, dễ sử dụng, ít tác dụng phụ

2.8.3 Nghiên cứu sử dụng vacxin phòng bệnh Newcastle

Hiện nay trên thế giới có nhiều loại vacxin Newcastle, ñể phòng bệnh và tìm hiểu khả năng ñáp ứng miễn dịch của gia cầm với các loại vacxin ñó, Bastami M.A và cộng sự (1986) ñã thí nghiệm 1 so sánh ñáp ứng miễn dịch của gà ñược sử dụng các loại vacxin khác nhau: 180 gà nhỏ mắt vacxin B1 lúc

7 ngày tuổi và 21 ngày tuổi tiêm vacxin B1, Lasota, B1 hấp phụ allbuminium hydroxyde (AH), Komarov và vacxin vô hoạt có bổ trợ dầu Gà ñược công cường ñộc lúc 7 tuần tuổi Kết quả khả năng bảo hộ của vacxin B1 là 87%, vacxin vô hoạt bổ trợ dầu 83%, B1 hấp phụ AH 73%, La Sota 63% và Komarov 60%

Trong nước cũng có nhiều nghiên cứu về vacxin như: Nguyễn Thu Hồng (1993), nếu uống vacxin Lasota ñể phòng bệnh Newcastle với liều 10-3,

từ 3 – 4 ml/con lúc gà 1 tuần tuổi thì ñến 2 tháng rưỡi còn khả năng bảo hộ là 63%, nếu cho uống lúc 2 tuần tuổi thì ñến 2 tháng rưỡi vẫn còn bảo hộ ñược 100%

Nguyễn Thu Hồng và cộng sự (1993), thử nghiệm vacxin chịu nhiệt V4 phòng bệnh cho gà ở Việt Nam Kết quả cho thấy vacxin V4 có ưu ựiểm hơn Lasota về tắnh chịu nhiệt và thời gian bảo quản, ở nhiệt ựộ thường bảo quản ựược 1 tháng Mặt khác, vacxin có ựặc tắnh gây miễn dịch qua tiếp xúc Cùng thời gian ựó Nguyễn Tiến Dũng và cộng sự (1993), ựã nghiên cứu biến chủng của Lasota có tắnh chịu nhiệt cao, gây miễn dịch tốt, bảo quản ựược ở nhiệt ựộ thưởng 37oC

Trần đình Từ và cộng sự (1994-1995), ựã công bố kết quả nghiên cứu vacxin chịu nhiệt chủng V4 có tên HR-NDV, vacxin thắch hợp ở khu vực nuôi

gà chăn thả Vacxin có hiệu lực miễn dịch ắt nhất là ngang với vacxin Lasota

* Các dạng vacxin

Trên thế giới, một số nước (Thụy điển, Hà Lan) không cho phép sử dụng vacxin phòng bệnh cho ựàn gà Một số nước Châu Âu chỉ cho phép sử dụng một

số loại vacxin sống, giống sản xuất vacxin phải ựảm bảo tiêu chuẩn ựể ra như chỉ

số ICPI<0,4 (ựối với vacxin nhược ựộc) và ICPI <0,7 (ựối với vacxin vô hoạt)

- Vacxin chết (Vacxin vô hoạt): Tuy an toàn nhưng khả năng sản sinh miễn dịch kém Nuôi cấy virus bằng cách tiêm cho phôi qua xoang niệu mô, thu hoạch nước trứng, sau ựó giết chết virus bằng beta-propiolactone hoặc formol rồi trộn với chất bổ trợ Chất bổ trợ thường sử dụng là keo phèn hoặc nhũ dầu Các chủng virus thuộc nhóm Lentogen là Ulster 2C, B1, Lasota; nhóm Mesogen có Roakin và vài chủng có ựộc lực cao đường tiêm vacxin là tiêm bắp hoặc tiêm dưới da

+ Ưu ựiểm: Bảo quản dễ hơn so với vacxin sống Do không bị ảnh hưởng bởi kháng thể thụ ựộng nên có thể dùng ngay cho gà từ lúc 1 ngày tuổi Vacxin có rất ắt phản ứng phụ, hiệu giá kháng thể hình thành cao và ựộ dài miễn dịch dài

+ Nhược ựiểm: Chi phắ công sản xuất và sử dụng cao, dầu khoáng có thể gây ảnh hưởng không tốt cho người tiêm nếu vô tình tiêm vào Việc kiểm soát chất lượng vacxin rất khó khăn

- Vacxin nhược ựộc: Hai nhóm ựược sử dụng ựể sản xuất vacxin nhược ựộc là chủng Lentogen và Mesogen Vacxin nhược ựộc ựược dùng rộng rãi trên thế giới ở những nước có bệnh lưu hành, khả năng ựáp ứng miễn dịch có quan hệ chặt chẽ với ựộc lực của virus Vacxin chế từ chủng thuộc nhóm Mesogen cần ựảm bảo quy ựịnh ựộc lực và thường ựược dùng tiêm nhắc lại

do ựộc lực của virus vacxin đường ựưa vacxin cho uống, nhỏ mắt, nhỏ mũi, nhúng mỏ, phun sương (nhóm Lentogen) hoặc tiêm bắp, tiêm dưới da cánh (nhóm Mesogen)

+ Ưu ựiểm: Chủ yếu là vacxin ựông khô chế qua phôi gà nên giá thành không cao và dễ sử dụng Thời gian sản sinh ựáp ứng miễn dịch sớm Cách sử dụng phun sương dễ áp dụng với ựàn số lượng ựông

+ Nhược ựiểm: Vacxin có thể là nguyên nhân gây nên bệnh, tùy thuộc vào ựiều kiện môi trường và sự có mặt ựồng thời cùa các tác nhân gây bệnh

vì vậy cần sử dụng vacxin có ựộc lực thấp trong lần ựầu tiên Kháng thể thụ ựộng có thể ảnh hưởng ựến hiệu quả sử dụng vacxin Một nhược ựiểm nữa là virus vacxin dễ bị diệt bởi các loại hóa chất và nhiệt ựộ, nếu không chú ý sẽ

dễ nhiễm virus khác trong quá trình sản xuất

Xắ nghiệp thuốc thú y Trung ương ựã sản xuất vacxin Newcatle nhược ựộc ựông khô ựược sử dụng phòng bệnh Newcastle cho gà trên 2 tháng tuổi theo ựường tiêm bắp hoặc tiêm dưới da, vacxin La Sota nhược ựộc ựông khô phòng bệnh Newcastle cho gà dưới 2 tháng tuổi theo ựường nhỏ mắt, nhỏ mũi

và cho uống và vacxin Gumboro nhược ựộc ựông khô phòng bệnh Gumboro cho gà từ 5 Ờ 7 ngày tuổi theo ựường nhỏ mắt, nhỏ mũi và cho uống

Công ty TNHH một thành viên thuốc thú y trung ương (Navetco) có 5 sản phẩm ựược sử dụng phòng ba bệnh trên ở gà đó là, vacxin Newcastle phòng bệnh Newcastle cho gà từ 1 ngày tuổi theo ựường nhỏ mắt, nhỏ mũi và cho uống, Vacxin La Sota phòng bệnh Newcastle cho gà từ 2 tuần tuổi trở lên theo ựường nhỏ mắt, nhỏ mũi và cho uống, vacxin Newcastle hệ M phòng

bệnh Newcastle gà cho gà trên 2 tháng tuổi theo ñường tiêm dưới da hoặc bắp thịt Vacxin Newcastle chịu nhiệt là vacxin nhược ñộc ñông khô ñược sản xuất từ virus Newcastle chủng AVF/HR-NDV phòng bệnh Newcastle cho gà khoẻ mạnh ở mọi lứa tuổi theo các ñường khác nhau như nhỏ mắt, nhỏ mũi, cho uống, cho ăn Vacxin Gumboro phòng bệnh Gumboro cho gà từ 1 ngày tuổi theo ñường nhỏ mắt, nhỏ mũi, cho uống

Ngoài hai công ty sản xuất vacxin chính, tại Việt nam còn hai cơ sở sản xuất vacxin khác ñó là Phân viện thú y Miền trung và Xưởng sản xuất thực nghiệm thuốc thú y - Trực thuộc Viện thú y Quốc gia Hai cơ sở sản xuất vacxin này có các sản phẩm vacxin phòng ba bệnh trên cho gà

Vacxin Lasota phòng bệnh Newcastle cho gà từ 10 ngày tuổi theo ñường nhỏ mắt, nhỏ mũi và cho uống

Vacxin Lasota chịu nhiệt phòng bệnh Newcastle cho gà mọi lứa tuổi theo ñường nhỏ mắt, nhỏ mũi, cho uống hoặc cho ăn

Các vacxin nhập khẩu phòng bệnh Newcastle, Gumboro và Viêm phế quản truyền nhiễm cho gà hiện ñang lưu hành tại Việt Nam rất ña dạng và phong phú cả về số lượng và chủng loại Căn cứ theo danh mục vacxin, chế phẩm sinh học, vi sinh vật hoá chất dùng trong thú y ñược phép lưu hành tại Việt Nam năm 2010, có 16 công ty nước ngoài và 128 sản phẩm vacxin sử dụng ñể phòng ba bệnh trên cho gà

Các sản phẩm nhập khẩu ñược ñóng gói ở nhiều hình thức khác nhau

Có thể ở dạng ñơn giá, nhược ñộc như: Nobilis Gumboro 228E, Nobilis Gumboro D78, nobilis IB H120, Nobilis ND Hichner của công ty Intervet –

Hà Lan; Newcastle B1 type La Sota strain, Newcastle disease B1 type B1 strain của công ty Ford dodge animal health - Mỹ; Cevac Gumbo L, Cevac New L của công ty Ceva – Phylaxia veterinary biologicals Co Ltd – Hungary, Có thể ñược sản xuất ở dạng ñơn giá vô hoạt như: Cevac IBD K của công ty CEVASANTE ANIMALE - Pháp; Pestikal, Gumbokal của công

ty PFIZER – Croatia; Newcastle K (New- Vac K) của công ty Ford dodge

animal health - Mỹ,

Hình thức ñóng gói vacxin ña giá của các công ty nhập khẩu rất ña dạng, một lọ sản phẩm có thể là sự kết hợp của hai, ba, bốn hoặc năm thành phần kháng nguyên và có thể ở dạng nhược ñộc như Nobilis IB+ND của công

ty Intervet – Hà Lan, Newcastle La Sota + Bron Mass của công ty Ford dodge animal health - Mỹ, Newcastle Bronchitis vaccine, B1 Type của công ty Ford dodge animal health - Mỹ, Hoặc có thể ñược sản xuất ở dạng vô hoạt như Nobilis IB+G+ND, Nobilis IB multi + G+ND của công ty Intervet – Hà Lan, Medivac ND-IB-IBD Emulsion của công ty P.T MEDION – Indonexia, Cevac ND-IB-IBD K của công ty CEVASANTE ANIMALE - Pháp,

3 ðỐI TƯỢNG - NỘI DUNG - NGUYÊN LIỆU VÀ

PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

3.1 ðối tượng

- Huyết thanh của gà Ri thuần (gà nội) và gà Sasso (SS)

- ðịa ñiểm nghiên cứu trại Thực nghiệm Liên Ninh - Trung tâm

Nghiên cứu và Huấn luyện chăn nuôi - Viện Chăn nuôi

- Thời gian: từ tháng 01/2012 – tháng 08/2012

3.2 Nội dung nghiên cứu

- ðiều tra về ñặc ñiểm tình hình sản xuất của trại thực nghiệm Liên

Ninh- Trung tâm nghiên cứu và Huấn luyện chăn nuôi

-Biến ñộng hiệu giá kháng thể của gà Ri thuần, Sasso ñối với vacxin

Lasota

- Biến ñộng hiệu giá kháng thể của gà Ri thuần, gà Sasso ñối với 2 loại

vacxin vô hoạt nhũ dầu và Newcastle hệ I

3.3 Nguyên liệu

- Vacxin Newcastle: Các loại vacxin ñược dùng cho lô gà thí nghiệm 1 là

vacxin Lasota, vacxin Newcastle hệ I của công ty thuốc thú y TW sản xuất và

Vacxin vô hoạt nhũ dầu (Medivac ND-IB-IBD Emulsion) của Indonesia sản xuất

Hình 3.1 Vacxin phòng bệnh Newcastle

-Huyết thanh gà Ri thuần và Sasso 1 ngày tuổi và sau khi tiêm Vacxin ñược 1, 2, 3, 4, 5,6,7, 8, 12, 16 và 20 tuần

- Virus Newcastle: Sử dụng vacxin Lasota của công ty thuốc thú y TW làm kháng nguyên

- Hồng cầu gà: Hồng cầu gà ñược lấy từ những gà khỏe mạnh, có phản ứng HI âm tính Hồng cầu ñược pha theo tỷ lệ 0.5%

Thí nghiệm 1 ñược thực hiện trên 200 gà Ri 1 ngày tuổi có khối lượng

cơ thể từ 27,5g – 29,5g và 200 gà Sasso 1 ngày tuổi có khối lượng cơ thể từ 37,5g – 38,0g ñược chọn ra từ một lô ấp của những ñàn gà bố mẹ ñã ñược tiêm vacxin phòng bệnh Newcastle vào thời ñiểm trước khi gà lên ñẻ Các ñàn

gà ñều ñược chăm sóc, nuôi dưỡng, thức ăn, nước uống, các loại thuốc phòng bệnh sử dụng như nhau theo quy trình kỹ thuật của Trung tâm Nghiên cứu và Huấn luyện chăn nuôi

Sơ ñồ bố trí thí nghiệm 1 dùng vacxin phòng bệnh Newcastle

Lô thí nghiệm 1 1 Lô thí nghiệm 1 2

14 Vacxin Lasota phòng bệnh

Newcastle lần 2

Vacxin Lasota phòng bệnh Newcastle lần2

24 Vacxin vô hoạt nhũ dầu (1/2 liều) Vacxin Newcastle hệ I (1/2 liều)

+ ðối với vacxin Lasota:Vacxin ñược pha với dung môi có sẵn – Solvensocul (màu xanh) theo liều ñã ghi trên nhãn lọ vacxin Mỗi lọ vacxin chứa 1000 liều pha với dung môi thành 100 ml dung dịch

Biện pháp phòng: dùng ống nhỏ thuốc với tiết diện lỗ ñảm bảo 1 ml ñược 20 giọt, tiến hành nhỏ mắt, mũi cho gà Ri với liều 2 giọt

+ ðối với vacxin hệ I: Vacxin ñược pha với nước sinh lý 0,9% theo liều

ñã ghi trên lọ vacxin Biện pháp phòng là tiêm cho gà với liều 0,25ml/con ( gà

24 ngày tuổi), liều 0,5ml con (gà 54 ngày tuổi)

+ðối với vacxin vô hoạt nhũ dầu (ND +IB+IBD) : Tiêm với liều 0,25ml

(gà 24 ngày tuổi)

3.4.2 Phương pháp lấy mẫu huyết thanh

+ Với gà 1 ngày tuổi: cắt cổ lấy máu

+ Với gà ≥ 1 tuần tuổi: Lấy máu ở tĩnh mạch cánh với lượng 1ml/con + Lấy mẫu ở các thời ñiểm: Sau khi sử dụng vacxin 2, 3 ,4 ,8 ,16 ,20 tuần, số lượng mẫu:30 mẫu/ lần

+ Phương pháp lấy máu: Dùng syringe nhựa 3ml vô trùng lấy máu Lấy máu ở tĩnh mạch cánh của gà Sau khi lấy 0,5ml – 1ml máu thì rút kim