BỘ Y TẾ BỆNH VIỆN NHI TRUNG ƯƠNG BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI ĐỘC LẬP CẤP NHÀ NƯỚC NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM LÂM SÀNG, DỊCH TỄ HỌC, PHƯƠNG PHÁP CHẨN ĐOÁN SỚM, PHÁC ĐỒ ĐIỀU TRỊ HIỆU QUẢ VÀ DỰ PHỊNG BỆNH VIÊM ĐƯỜNG HƠ HẤP CẤP DO VI RÚT CÚM A/H5N1, VI RÚT CÚM A VÀ VI RÚT HỢP BÀO HÔ HẤP Ở VIỆT NAM Chủ nhiệm đề tài: PGS.TS NGUYỄN THANH LIÊM 7474 12/8/2009 HÀ NỘI – 2009 Bé Khoa häc vμ C«ng nghƯ –bé y tÕ Báo cáo tổng kết khoa học kỹ thuật Đề tài cấp nhà nớc nghiên cứu đặc điểm lâm sng, dịch tễ học,phơng pháp chẩn đoán sớm, phác đồ điều trị hiệu v dự phòng bệnh viêm đờng hô hÊp cÊp vi rót cóm h5n1, vi rót cóm a v vi rút hợp bo hô hấp việt nam Chủ nhiệm đề tài:PGS.TS.Nguyễn Thanh Liêm Cơ quan chủ trì: Bệnh Viện Nhi Trung Ương Hà Nội, 10-2006 BKHCN BVNTƯ BKHCN BVNTƯ BKHCN BVNTƯ Bộ Khoa học Công nghệ Bệnh viện Nhi trung ơng Số 18/879 La Thành- Đống Đa- Hà Nội Báo cáo tổng kết khoa học kỹ thuật Đề tài cấp nhà nớc: nghiên cứu đặc điểm lâm sng, dịch tễ học,phơng pháp chẩn đoán sớm, phác đồ điều trị hiệu v dự phòng bệnh viêm đờng hô hấp cấp vi rút cúm h5n1, vi rót cóm a vμ vi rót hỵp bμo hô hấp việt nam Chủ nhiệm đề tài:PGS.TS.Nguyễn Thanh Liêm Hà Nội, 10-2006 Bộ Khoa học Công nghệ Bệnh viện Nhi trung ơng Số 18/879 La Thành- Đống Đa- Hà Nội Báo cáo tổng kết khoa học kỹ thuật Đề tài cấp nhà nớc: nghiên cứu đặc điểm lâm sng, dịch tễ học,phơng pháp chẩn đoán sớm, phác đồ điều trị hiệu v dự phòng bệnh viêm đờng hô hấp cấp vi rút cúm h5n1, vi rút cúm a v vi rút hợp bo hô hấp việt nam Chủ nhiệm đề tài:PGS.TS.Nguyễn Thanh Liêm Hµ Néi, 10-2006 ADN ARN Amp bp DEPC dNTP EDTA EtBr HA Ka kb LB mARN NA OD PCR RNase RFLP RT-PCR SDS Sol I, Sol II, Sol III TAE Taq polymerase TE v/p X-gal NP WHO NTHHC VĐHHC Những tõ viÕt t¾t Axit deoxyribonucleic Axit ribonucleic Ampicillin Base pairs Diethylpyrocarbonat Deoxiribonucleotide 5’-triphosphates Ethylen diamin tetraacetic acid Ethidium bromide Hemagglutinin Kanamycin Kilo base Lauria-Bertani ARN th«ng tin Neuraminidase Optical Density Polymerase Chain Reaction Ribonuclease Random Fragment Length Polymorphysism Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction Sodium dodecyl sulphate Solution I, Solution II, Solution III Tris-acetate-EDTA Polymerase Thermus aquaticus Tris-EDTA Vßng/ 5-Bomo-chlorua-3-indolyl-β-D-galactoside Nucleoprotein World Health Organization Nhiễm trùng hô hấp cấp Viêm đờng hô hấp cấp i Mục lục Đặt vấn đề Phần A: Viêm đờng hô hÊp cÊp vi rót cóm a vμ vi rót cóm a/h5n1 Ch−¬ng Tỉng quan .3 1.1 Khái niệm cúm loài lông vũ (Avian influenza) 1.2 Tác nhân g©y bƯnh 1.2.1 Phân loại 1.2.2 Ngn l©y nhiƠm vi rót cóm A 1.2.3 CÊu tróc chung cđa vi rót cóm 1.2.4 Cơ chế tái tổ hợp di truyền để hình thành biến chủng .8 1.2.5 Chu tr×nh sèng cđa virut 10 1.3 T×nh hình dịch bệnh giới: 11 1.4 Tình hình dịch bƯnh t¹i ViƯt Nam: 13 1.5 Triệu chứng lâm sàng bÞ bƯnh cóm A: 15 1.5.1 Đối với gia cầm: 15 1.5.2 §èi víi ng−êi: 15 1.6 Các phơng pháp dùng chẩn đoán giám sát cúm .18 1.6.1 Ph©n lËp virut 18 1.6.2 Ph−¬ng pháp sinh học phân tử 18 1.6.3 Các phơng pháp chẩn đoán huyÕt häc 19 1.7 §iỊu trÞ 20 Chơng 2: Đối tợng v phơng pháp nghiên cứu 21 2.1 Đối tợng nghiên cứu: 21 2.2 Phơng pháp nghiên cứu: 21 Chơng 3: Kết 35 3.1 Nghiên cứu dịch tễ học 35 3.1.1 Kết nghiên cứu số đặc điểm DTH cđa bƯnh cóm A(H5N1) ë ng−êi: 35 3.1.2 Kết nghiên cứu Bệnh-chứng xác định số yếu tố nguy bệnh nhân cúm A/H5N1 ngời năm 2004 Việt Nam : .46 3.1.3 Kết nghiên cứu số đặc điểm DTH bệnh VĐHHC nặng vi rót cóm ng−êi týp A: 53 3.2 Nghiªn cøu Chẩn đoán vi rút cúm A/H5N1 phơng pháp Real- Time PCR 71 3.2.1 Kết tách dòng, xác định trình tự gen NP virut cúm A H5n1 .71 3.2.2 Tách dòng xác định trình tự gen mà hoá HA NA 87 3.2.3 Kết chẩn đoán virut cúm A H5N1 phơng pháp Real-time PCR 97 3.3 Nghiên cứu chẩn đoán vi rút cúm A vi rút cúm A/H5N1 phơng ph¸p RT - PCR 101 3.3.1 ChÈn ®o¸n vi rót cóm A/H5N1 101 3.3.2 Chẩn đoán vi rút cúm A 106 3.4 Nghiên cứu lâm sàng cận lâm sàng cóm A/H5N1 108 3.4.1 T×nh h×nh chung: 108 3.4.2 Ỹu tè ph¬i nhiƠm: 109 3.4.3 Đặc điểm lâm sàng 109 3.4.4 Đặc ®iĨm xÐt nghiƯm: 110 3.4.5 Điều trị Oseltamivir 111 3.4.6 KÕt qu¶ 111 3.4.7 So s¸nh số đặc điểm nhóm sống tử vong 112 3.4.8 Phân tích đa biến mét sè yÕu tè liªn quan: .113 3.4.9 Tổn thơng giải phẫu bệnh: 113 3.5 Nghiên cứu lâm sàng cận lâm sàng cúm A 116 3.5.1 T×nh h×nh chung: 116 3.5.2 Biểu lâm sàng 116 3.5.3 XÐt nghiÖm: 117 3.5.4 Điều trị: 117 Ch−¬ng 4: Bμn luËn 126 4.1 Nghiên cứu dịch tễ học: 126 4.1.1 Bµn luËn số đặc điểm DTH bệnh cúm A(H5N1) ngời: .126 4.1.2 Bàn luận kết nghiên cứu bệnh chứng xác định số yếu tố nguy chủ yếu cúm A(H5N1) ngời năm 2004 Việt Nam: 128 4.1.3 Bàn luận số đặc điểm dịch tễ học bệnh VĐHHC nỈng vi rót cóm ng−êi týp A: .132 4.2 Nghiên cứu Chẩn đoán vi rút cúm A/H5N1 phơng pháp Real- Time PCR .133 4.3 Nghiên cứu Chẩn đoán vi rút cúm A/H5N1 phơng pháp RT- PCR 134 4.4 Nghiên cứu Chẩn đoán vi rút cúm A phơng pháp RT- PCR 136 4.5 Nghiên cứu lâm sàng cận lâm sàng cúmA/H5N1 138 4.5.1 T×nh h×nh chung: 138 4.5.2 Lâm sàng: 140 4.5 XÐt nghiÖm: 141 4.5.4 XQ tim phæi: 142 4.5 Điều trị: .142 4.5.6 KÕt qu¶: 144 4.6 Nghiªn cøu lâm sàng cận lâm sàng cúm A .145 KÕt luËn .146 Tμi liƯu tham kh¶o 147 PhÇn b: Viêm đờng hô hấp cấp vi rút hợp bo hô hấp 151 Chơng tổng quan .151 1.1 Đặc điểm hình thái cấu tróc .151 1.2 Genome cđa vi rót 151 1.3 Chu trình nhân lên RSV 153 1.4 Con ®−êng l©y trun .154 1.5 Triệu chứng lâm sàng .154 1.7 Các kỹ thuật chẩn đoán viêm đờng hô hấp virut hợp bào hô hấp 156 1.7.1 Phân lập virut tế bào cảm nhiễm: 156 1.7.2 Kü thuËt miÔn dÞch huúnh quang trùc tiÕp: 156 1.7.3 Test nhanh dựa kỹ thuật sắc ký miễn dịch: .157 1.7.4.Kỹ thuật phát hiÖn Axit Nucleic (RT-PCR): 157 Chơng đối tợng v phơng pháp nghiên cứu .158 2.1 Đối tợng nghiên cứu: 158 2.2 Phơng pháp nghiên cứu: 158 2.2.1 Nghiên cứu xác định nguyên: 158 2.2.2 Nghiên cứu lâm sàng cận lâm sàng bệnh viêm đờng hô hấp cấp vi rút hợp bào hô hấp: 170 Ch−¬ng kÕt qu¶ 172 3.1 Nghiên cứu phơng pháp chẩn đoán vi rút hợp bào hô hấp phơng pháp chẩn đoán Real Time PCR 172 3.1.1 KÕt qu¶ t¸ch chiÕt ARN tỉng sè 172 3.1.2 Kết tách dòng xác định trình tự gen mà hoá Protein dung hợp virut RSV 172 3.2 Nghiªn cøu phơng pháp chẩn đoán vi rút hợp bào hô hấp phơng pháp chẩn đoán RT- PCR 181 3.2.1 Thiết kế thí nghiệm thờng quy chẩn đoán RSV 181 3.2.2 KÕt qu¶ xÐt nghiƯm RSV từ bệnh phẩm lâm sàng Bệnh viện Nhi trung −¬ng 183 3.2.3 KÕt qu¶ phát vi khuẩn đồng nhiễm với RSV 184 3.3 Nghiªn cøu mét sè yÕu tố dịch tễ học vi rút hợp bào hô hấp: 185 3.3.1 Phân bố theo địa d−: 185 3.3.2 Tần suất bệnh nhân năm 2005: 185 3.3.3 Tuæi vµ giíi: 186 3.3.4 Tháng vào viện: .186 3.3.5 Tû lƯ bƯnh nh©n cã tiÕp xóc víi nguån l©y: 186 3.3.6 Bệnh nhân có cân nặng < 2500g : 187 3.4 Nghiªn cøu lâm sàng cận lâm sàng viêm đờng hô hấp vi rút hợp bào hô hấp .187 3.4.1 Một số đặc điểm dịch tễ đối tợng nghiên cứu .187 3.4.2 Một số đặc điểm lâm sàng 191 3.4.3 Đặc điểm cận lâm sàng 194 3.4.4 So sánh đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng hai nhóm bệnh nhân đợc chẩn đoán VPQP VTPQ 197 Ch−¬ng Bμn luËn 200 4.1 Nghiên cứu phơng pháp chẩn đoán vi rút hợp bào hô hấp phơng pháp chẩn đoán Real Time PCR 200 4.2 Nghiên cứu phơng pháp chẩn đoán vi rút hợp bào hô hấp phơng pháp chẩn đoán RT- PCR .202 4.3 Nghiªn cøu mét sè u tè dÞch tƠ häc cđa vi rót hợp bào hô hấp: 203 4.4 Nghiên cứu lâm sàng cận lâm sàng viêm đờng hô hấp vi rút hợp bào hô hấp 4.4.1 Một số đặc điểm dịch tễ .204 4.4.2 Lâm sàng nhập viện 207 4.4.3 XÐt nghiÖm cận lâm sàng .209 4.4.4 Chẩn đoán bệnh .210 4.4.5 So sánh triệu chứng lâm sàng, cận lâm sàng hai nhóm bệnh nhân đợc chẩn đoán VPQP VTPQ .211 4.4.6 Thời gian điều trị 212 KÕt luËn .213 Tμi liƯu tham kh¶o 214 Phô lôc Đặt vấn đề Nhiễm trùng hô hấp cấp bệnh thờng gặp trẻ em ngời lớn Các bệnh nhiễm trùng hô hấp thờng gặp bao gồm: viêm họng, viêm phế quản cấp, viêm phổi mắc phải cộng đồng Trong nguyên gây nhiễm khuẩn hô hấp cấp thờng gặp, vi rút nguyên nhân thờng gặp Vi rút cúm A, vi rút hợp bào hô hấp tác nhân gây bệnh chiếm vị trí hàng đầu số nhóm vi rút gây bệnh viêm đờng hô hấp cấp ngời Theo Dingle Feller vi rút thủ phạm 66% nhiễm trùng hô hấp (Evan 1960) Các vi rút gây bệnh viêm phổi cấp thờng gặp là: - Các vi rút họ Paramyxo: Vi rút hợp bào hô hấp Vi rót ¸ cóm ( Parainfluenza týp 1- 4) Vi rót sëi Vi rót viªm phỉi ë ng−êi (Metapneumonia) - C¸c vi rót hä Orthomyxo Vi rót cóm A Vi rút cúm B Theo báo cáo Mỹ, viêm đờng hô hấp dới chiếm 40% tổng số trẻ em bị nhiễm trùng lần đầu.ở trẻ từ sơ sinh đến tháng tuổi vi rút hợp bào hô hấp (RSV) tác nhân chủ yếu gây nhiễm trùng hô hấp (75% viêm tiểu phế quản 39% viêm phổi độ tuổi này) Tỷ lệ bị nhiễm RSV lứa tuổi 5- tuổi 20%; 10% trẻ từ 15- 19 3- 6% độ tuổi 20- 50 tuổi hàng năm có khoảng 3000- 4000 trờng hợp tử vong vi rút hợp bào hô hấp Sự lan truyền RSV nhanh, môi trờng tập thể, gia đình lây thành dịch Hiện nay, với bệnh hay gặp RSV gây đại dịch cúm đà xuất nhiều nớc giới, thủ phạm đà gây khoảng 20.000 ca tử vong hàng năm gây tổn thất lớn kinh tế Cúm gia cầm bệnh truyền nhiễm cấp tính gia cầm thủy cầm, đặc biệt gà Dịch bệnh phân týp khác thuộc nhóm virut cúm A, họ Orthomyxoviridae gây nên [7] Virut cúm gia cầm H5N1đà xuất giới từ lâu Ngay từ năm 1988, De BK cộng đà giải mà đợc gen mà hoá Hemagglutinin (gen H5) virut cúm H5N1 phân lập Scotland (De BK cs, 1988) Tuy nhiên, virut cúm gia cầm đợc đặc biệt quan tâm virut đợc phân lập từ trẻ em ba tuổi bị tử vong Hồng Kông năm 1997 (Subbarao K + Giai đoạn 1: Bệnh biểu không triệu chứng sốt triệu chứng nhẹ viêm đờng hô hấp + Giai đoạn 2: Bệnh biểu triệu chứng viêm phổi, rối loạn huyết học, chức gan thận + Giai đoạn 3: biểu hội chứng suy hô hấp cấp suy đa phủ tạng Cuối kết thúc tử vong Xét nghiệm tình trạng giảm số lợng bạch cầu (46,2%), giảm số lợng bạch cầu lympho (52,2%) tiểu cầu giảm (44,6%) Trẻ em có xu hớng giảm số lợng bạch cầu nhiều so với ngời lớn (82,4% 33,3% ; p = 0,002) Số lợng tiểu cầu giảm nhiều trẻ em so với ngời lớn (70,6% 35,4%; p = 0,04) Hiện tợng giảm số lợng bạch cầu, giảm bạch cầu lympho tiểu cầu hạ yếu tố có liên quan đến tử vong ( p < 0,05) 4) Đề tài đà nghiên cứu thấy miền Bắc bệnh VĐHHC vi rút cúm ng−êi týp A xt hiƯn ë c¶ khu vùc: đồng bằng, trung du miền núi, xảy quanh năm nhng số mắc tập trung cao tháng tháng 2.Bệnh gặp lứa tuổi tỉ lệ mắc bệnh trẻ em dới 15 ti chiÕm 44,2% tỉng sè m¾c.TØ lƯ chÕt/m¾c cđa bƯnh cóm vi rót cóm ng−êi týp A lµ 7,8% Có 42/77 (54,5%) trờng hợp VĐHHC vi rút cúm ngời týp A đợc xác định phân týp với kháng nguyên H:32 trờng hợp phân típ H3 10 trờng hợp H1 Đây phân týp vi rút cúm ngời týp A đà lu hành giới nh Việt Nam nhiều năm qua 5) Đề tài nghiên cứu cho thấy phơng pháp Real time PCR phơng pháp chẩn đoán vi rút cúm A/H5N1, vi rút cúm A vi rút hợp bào hô hấp nhanh có độ xác cao phơng pháp PCR thông thờng Nếu chẩn đoán vi rút cúm A/H5N1 phơng pháp RT-PCR cần thử nghiệm với cặp mồi khác (H5- CDC, H5- WHO, H5- Canada), chẩn đoán xác định nhiễm vi rút H5N1 cã Ýt nhÊt thư nghiƯm d−¬ng tÝnh 6) Đề tài đà nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật chẩn đoán sinh học phân tử đại chẩn đoán vi rút Kết cho thấy quy trình chẩn đoán phơng pháp Real time PCR va RT-PCR đà đợc ứng dụng thành công với tính xác cao Đề tài đà chuyển giao thành công ứng dụng quy trình chẩn đoán sinh học phân tử Bệnh viện Nhi trung ơng, giúp cho việc chẩn đoán điều trị đạt hiệu 7) Đà đăng ký đợc 05 trình tự gen virut cúm A/H5N1 RSV Ngân hàng Dữ liệu gen quốc tế 8) Qua nghiên cứu đề tài cho thấy phác đồ điều trị Bộ Y tế ban hành phù hợp cho dù tỷ lệ tử vong VĐHHC vi rút cúm A/H5N1 cao Tuy nhiên đề tài nghiên cứu thấy việc chẩn đoán sớm dùng thuốc kháng vi rút sớm kết hợp với biện pháp tuyên truyền, giám sát dịch cúm gia cầm chặt chẽ biện pháp hữu hiệu nhằm giảm tỷ lệ mắc bệnh tỷ lệ tử vong Đề tài số hớng nghiên cứu điều trị để đạt kết tốt hơn: dùng liều gấp đôi Oseltamivir liều cao globulin miễn dịch 9) Bệnh VĐHHC vi rút hợp bào hô hấp mà đề tài nghiên cứu bệnh chiếm khoảng 1/3 trờng hợp NTHHC trẻ nhỏ thờng bắt đầu ho, khò khè khó thở, biểu lâm sàng bật với triệu chứng bật: thở nhanh, rút lõm lồng ngực, thông khí phổi giảm ran rít phổi Các xét nghiệm số lợng bạch cầu, tỷ lệ đa nhân trung tính, CRP không tăng hình ảnh phổi ứ khí tổn thơng tổ chức kẽ hình lới XQ có giá trị định hớng chẩn đoán Chẩn đoán xác định phơng pháp RT- PCR từ dịch mũi họng 2.2 Về phơng pháp nghiên cứu Đề tài có nội dung nghiên cứu phong phú, dịch tễ học, lâm sàng đặc biệt xét nghiệm sinh học phân tử nên đà sử dụng kết hợp nhiều phơng pháp nghiên cứu - Phơng pháp nghiên cứu hồi cứu tiến cứu ca bệnh để nghiên cứu đặc điểm lâm sàng cận lâm sàng - Phơng pháp nghiên cứu dịch tễ học, mô tả để nghiên cứu tình hình dịch tễ VĐHHC vi rút cúm A, cúm A/H5N1 vi rút hợp bào hô hấp - Phơng pháp vấn qua câu hỏi đà thiết kế trớc - Phơng pháp nghiên cứu văn quy phạm, lựa chọn y văn để xây dựng quy trình chẩn đoán sớm thông qua xét nghiệm sinh học phân tử đặc điểm lâm sàng; phác đồ điều trị cho VĐHHC vi rút 2.3 Những đóng góp khác - Đề tài đà hỗ trợ số trang thiết bị xây dựng phòng xét nghiệm sinh học phân tử Bệnh viện Nhi trung ơng + Máy PCR Bio-Rad + Kính hiển vi miễn dịch huỳnh quang + Máy ảnh chụp điện di 10 - Đề tài đà tiến hành hợp tác quốc tế với Viện nghiên cứu KarolinskaThụy Điển Viện nghiên cứu Y học nhiệt đới- Hồng Kông đào tạo 02 cán xét nghiệm sinh học phân tử - Hiện nay, qua trình đào tạo chuyển giao quy trình chẩn đoán xét nghiệm sinh học phân tử Bệnh viện Nhi trung ơng đà chẩn đoán vi rút cúm A, vi rút H5N1 vi rút hợp bào hô hấp phơng pháp RT- PCR Real time PCR - Trong khuôn khổ đề tài đà đào tạo đợc 01 thạc sĩ Nhi khoa, 05 cử nhân kỹ s công nghệ sinh học 11 Kết luận Bệnh cúm A/H5N1 ngời liên quan đến dịch cúm gia cầm xảy nớc Hai yếu tố giết mổ, chạm vào gia cầm bệnh gia đình có gia cầm bệnh yếu tố nguy chế lây truyền từ gia cầm sang ngời Bệnh biểu với triệu chứng cổ điển: sốt, ho, khó thở, kèm theo giảm số lợng bạch cầu, giảm số lợng bạch cầu lymho m¸u, XQ phỉi tiÕn triĨn nhanh víi c¸c tỉn thơng dạng thâm nhiễm kẽ, thâm nhiễm dạng nốt tập trung lan toả bên phổi Bệnh hay gỈp løa ti d−íi 40 ti, cao nhÊt ë nhãm ti 10 ®Õn 19 ti Tû lƯ tư vong cao (38,8%) tập trung nhóm tuổi trẻ: trung bình 17,5 tuổi Điều trị cần tuân thủ chặt chẽ theo phác đồ điều trị Bộ Y tế Cần sử dụng thuốc kháng vi rút Oseltamivir giai đoạn sớm bệnh Việc điều trị thuốc kháng vi rút Oseltamivir liều gấp đôi liều thông thờng dùng liều cao globulin miễn dịch cần tiến hành thử nghiệm để đánh giá Phơng pháp Real time PCR chẩn đoán vi rút cúm A/H5N1có độ xác cao rút ngắn thời gian chẩn đoán tõ giê xuèng cßn giê, nhê vËy cã thể can thiệp điều trị sớm cho bệnh nhân Đối với phơng pháp RT- PCR chẩn đoán xác ®Þnh nhiƠm virut H5N1 khi: Cã Ýt nhÊt thư nghiệm có kết dơng tính: + Sử dụng cặp mồi khác (H5-CDC, H5-WHO, H5-Canada) + Sử dụng phơng pháp khác (RT-PCR; Real-time PCR sequencing) + Sử dụng mẫu bệnh phẩm thu thập thời điểm khác Bệnh viêm đờng hô hÊp cÊp vi rót cóm ng−êi týp A vÉn lu hành lẻ tẻ khu vực miền Bắc với phân týp H3 H1 Bệnh gặp lứa tuổi, xu hớng tăng cao mùa Đông- Xuân TriƯu chøng biĨu hiƯn nghÌo nµn, chđ u lµ sèt ho Phơng pháp RT-PCR với cặp primer M30F vµ M264R cã kÝch th−íc lµ 20 nucleotid vµ Tm 500C đợc lựa chọn phối hợp sinh phẩm once step RT-PCR ( Qiagen) có giá trị chẩn đoán sím vi rót cóm A 12 10 RSV lµ nguyên nhân 32,4% trờng hợp NTHHC trẻ em dới tuổi Trẻ trai trẻ dới tháng tuổi hay bị NTHHC RSV 11 Triệu chứng khởi phát thờng gặp bệnh ho, khò khè khó thở Biểu lâm sàng bật thở nhanh, rút lõm lồng ngực, thông khí phổi giảm ran rít phổi 12 Số lợng bạch cầu, tỷ lệ bạch cầu đa nhân trung tính CRP không tăng xét nghiệm có giá trị NTHHC RSV Hình ảnh phổi ứ khí tổn thơng tổ chức kẽ hình lới Xquang hay gặp giúp định hớng chẩn đoán 13 Xét nghiệm Real time PCR xét nghiệm RT - PCR từ dịch mũi họng phát đợc RSV có giá trị cao chẩn đoán xác định nguyên nhân NTHHC trỴ em Sư dơng kü tht Real time PCR cã thể rút ngắn thời gian từ xuống với độ xác cao so với phơng pháp RT-PCR Kỹ thuật nàycòn phân biệt đợc hai đoạn ADN có kích thớc nhng %GC khác Vì tránh đợc trờng hợp dơng tính giả gặp phải với kỹ thuật PCR thông thờng RT-PCR 13 Ti liệu tham khảo Phần a:viêm đờng hô hấp cấp vi rót cóm a vμ vi rót cóm a/h5n1 TiÕng ViƯt Lê Thanh Hòa, Đinh Duy Kháng, Phan Văn Chi, Nông Văn Hải, Trơng Nam Hải, Lê Trần Bình Virut cúm A gia cầm mối quan hệ lây nhiễm động vật sang ngời Tạp chí Công nghệ sinh học; 1(2):1-16 Tô Long Thành Trung Tâm Chẩn Đoán Thú y Trung Ương: Khuyến cáo tổ chøc y tÕ thÕ giíi t×nh h×nh míi T×nh hình cúm gia cầm Việt Nam biện pháp phòng trừ bệnh đà áp dụng Bệnh cúm gia cầm Hồ Huỳnh Thuỳ Dơng (2003), Sinh học phân tử, Nxb Giáo dục, Hà Nội Phạm Văn Ty (2004), Virut học, Nxb Giáo dục, Hà Nội Phạm Văn Ty (2001), Miễn dịch học, Nxb Đại học Quốc Gia, Hà Nội Võ Thị Thơng Lan (2005), Sinh học phân tử, Nxb Đại học Quốc Gia, Hà Nội TiÕng Anh Ito T and Y Kawaoka (1998): Avian influenza Textbook of influenza, Blackwell Sciences Ltd., Oxford, United Kingdom, 126-31 Allwinn R, Doerr HW (2005): How dangerous is avian flu for mankind? Med Klin (Munich), 100(11):710-3 Gorman O.T., W.J Bean.,R.G Webster (1992):Evolutionary processes in influenza virutes: divergence, rapid evolution and stasis Curr Top Microbiol; 172:75-97 10 Ito T., J N Vouvrito, S Kelm, L G Baum, S Krauss, M R Castrucci, I Donatelli, H Kida, J.C Paulson, R.G Webster, and Y Kawaoka (1998): Molecular basis for the generation in pigs of influenza A virutes with pandemic potential J Virol, 72, 7367-73 11 Webster R.G (1998): Influenza: an emerging disease Emerg Infect Dis., 4, 436-41 12 Webster R.G., W.J Bean, O.T Gorman, T.M Chambers and Kawaoka (1992): Evolution and ecology of influenza A virut Microbiol, Rev,56:152-79 14 13 Horimoto T and Kawaoka Y (2001): Pandemic threat posed by avian influenza A virutes Clin Microbiol Rev, 14(1):129-49 14 Mo IP, Brugh M, Fletcher OJ, Rowland GN, Swayne DE (1997):Comparative pathology of chickens experimentalli inoculated whith avian influenza virutes of low and high pathogenicity Avian Dis;41:125-36 15 Sims L.,Guan Y., Peiris J.S.M., Lipatov A S., Ellis T.M., Dyrting K.C., Krauss S., Zhang L.J., Webster R.G and Shortridge K.F (2002): Reassortants of H5N1 influenza virut recentli isolated from aquatic poultry in Hong Kong SARS Avian Dis; 47 (3 suppl): 911- 13 16 Starick Romer_Oberdorfer A, Werner O (2000):Type and subtype specific RT-PCR assays for avian influenza A virutes (AIV) J Vet Med B infect Dis Vet Public Health; 47(4): 295-301 17 Spackman E., Senne D.A., Bulaga L.L., Trock S., Suarez D.L (2003): Development of multiplex real-time RT-PCR as a diagnostic tool for avian influenza Avian Dis; 47 (3 suppl):1087- 90 18 Vey M., M Orlich, S Adler, H.D Klenk R Rott and W Garten (1992): Hemagglutinin activation of pathogenic avian influenza viruses of serotype H7 requires the protease recognition motif R-X-K/R-R Virology; 188:408- 13 19 Hien T.T, Jong M.D, Farrar J, Phil D (2004): Avian Influenza — A Challenge to Global Health Care Structures NEJM; 351: 2363-65 20 Iezzoni L (1999): Influenza 1918: The worst epidemic in American history NEJM, vol 341: 703 21 World health organisation (2005): Avian influenza (bird flu): an introduction Issue No http: www.who.int/en 22 Beigel J.H, Han A.M, Hayden F.G, Hyer R, Lochindarat S, Tien N.T.K, Hien N.T, Hien, T.T, Touch S, Yuen K.Y (2005): Avian influenza A (H5N1) infection in humans The NEJM 353, 1374-85 23 Schlender J, Bossert B, Buchholtz U, Conzelmam KK (1999): Bovine respiratory syncytial virut bearing a deletion of either the NS2 or SH gene is attenuated in Chimpanzees Nature, 73:3438- 42 24 Hien T.T, Liem N.T et al (2004): Avian Influenza A (H5N1) in 10 Patiens in Viet Nam The NEJM Vol.350 No.12: 1179-88 15 25 WHO (2004): Avian influenza A(H5N1) in human and poultry in Vietnam.URL: http://www who.int/csr/en 26 CDC (2002) Prevention and Control of Influenza Recomendation of the advisory Committee on immunization practices (ACIP) MMWR; 51 (No RR-3) 27 Pham Ngoc Dinh, Nguyen Thi Hong Hanh, et al (2004): Epidemiological Characteristics of the Epidemic of Human H5N1 avian Influenza in Northern Vietnam 2003-2004 J.of Preventive Medicine Vol.XIV, No 2-3 (66) p.5-10 28 Anthony W Mounts, Heston Kwong, et al (1999): Case- control Study of Risk Factors for Avian Influenza A (H5N1) Diseas, Hong Kong, 1997 The Journal of Infectious Diseases,180: 505-8 29 Carolyn B Bridges, J.M.Katz, et al (2000): Risk of Influenza A (H5N1) Infection among Health Care Worrkers Exposed to Patients with Influenza A (H5N1), Hong Kong The Journal of Infectious Diseases,181: 344-8 30 Kuiken T, RimmelzwaanG et al(2004): Avian H5N1 Influenza in cats Science;306: 241 31 J.M.Katz, Wilina Lim, et al (1999): Antibody Response in Individual Infected with Influenza A (H5N1) Viruses and Detection of Anti-H5 Antibody among Household and Social Contacts The Journal of Infectious Diseases;180: 1763-70 32 Michael B Gregg: Field Epidemiology, Oxford University Press, 121-66 33 Tam JS (2002) : Influenza A ( H5N1) in Hong Kong: an overview Vaccin; 577 – 81 34 Darin Areechokchai, C.Jiraphongsa et al(2006): Investigation of Avian Influenza (H5N1) Outbreak in Humans- Thailand, 2004 MMWR;55(suppl 01): 3-6 35 Kumnuan Ungchusak, Prasert Auewasakul et al (2005): Probable person to person transmission og Avian - influenza ( H5N1).NEJM ;333 – 40 36 Liem NT, W.Lim (2005): Lack of H5N1 Avian Influenza transmission to Hospital employees, Hanoi,2004 Emerg Infect Dis.,11(2): 210-15 37 Anucha Apisarnthanarak, Rungrueng Kitphati et al (2004): Atipical Avian Influenza (H5N1).Emerg Infect Dis, 10(7):1321-24 16 38 Eric CJ claas, Allert DME Osterhaus, Rud Van Beek et al (1998): Human influenza A ( H5N1) related to highly pathogenic avian influenza virus Lancet ,351,472 – 77 39 Menno D deJong , Bach van cam, Phan Tu Qui, Vo Minh Hien et at (2005):Fatal Avian Influenza A(H5N1) in a child presenting with diarrhea followed by coma.NEJM: 686 – 91 40 Morishima T, Togashi, Yokota S, et al (2002) : Encephalitis and encephalopathy associated with influenza A virus infection Clin Infect Dis; 35: 512-7 41 Maricich SM, Neul JL, Lotze TE, et al (2004): Neurologic complication associated with influenza A in children during the 2003-2004 influenza season in Houston, Texas Pediatrics; 626-32 42 Chan H, Deng G, Li Z et al (2004): The evolution of H5N1 influenza virus in ducks in southern China Proc Natl Acad Sci USA; 101: 10452-7 43 Guan Y, Poon LL, Cheung CY, et al (2004): H5N1 influenza : a protean pandemic threat Proc Natl Acad Sci USA; 101: 8156-61 44 Keawcharoen J, Oraveerakul K, Kuiken T, et al (2004): Avian Influenza H5N1 in tigers and leopards Emerg Infect Dis; 10: 2189-91 45 Kulkanya Chokephaibulkit (2004): Avian Influenza virus infection of Children in Vietnam and Thailand The Peadiatric Infectious Disease Journal; 23,8:793-4 46 Tawee Chotpitayasunondh, Kumnuan Ungchusak, et al (2005): Human Disease from Inflenza A (H5N1), Thailand, 2004 Emerg Infect Dis; 11,2: 201-9 47 Yuen K.Y, Chan P.K.S et al (1998): Clinical features and rapid viral diagnosis of human disease associated with avian influenza A H5N1 virus The Lancet; 351: 467-71 48 Waalberg E, Aoki F.Y et al (2003):Early administration of oral oseltamivir increases the benefits of influenza treatment J Antimicrob Chemother; 51(1):123-9 49 Terrence M.Tumpey, Adolfo Garcia Sastre et al (2005): Pathogenicity of Influenza viruses with genes from the 1918 pandemic virus: function roles of alveolar macrophages and neutrophils in limiting virus replication and mortality in mice Journal of Virology; 79: 14933-44 50 Peiris JS Yu WC, Leung CW, et al (2004): Re-emergence of fatal human influenza A subtype H5N1 disease Lancet; 363: 617-9 51 To KF, Chan PK, Chan KF, et al (2001): Pathology of fatal human infection associated with avian influenza A H5N1 virus J Med Virol; 63: 242-6 17 52 World Health Organization Cumulative number of confirmed human cases of avian influenza (H5N1) reported to WHO Availabble at http://www.who.int/csr/disease/avian_influenza/country/ Phần b: viêm đờng hô hấp cấp vi rút hợp bo hô hấp Tiếng Việt Đào Ngọc Diễn (2003), Suy dinh dỡng protein- lợng, Bài giảng nhi khoa tập I, tr 199-206 Nguyễn Thế Khánh, Phạm Tử Dơng (1998), Xét nghiệm sử dụng lâm sàng, NXB Y học, Hà nội, tr.896 - 908 Hồ Chí Thanh (2002), Đặc điểm viêm tiểu phế quản vi rút hợp bào hô hấp trẻ từ tháng tuổi đến dới tuổi khoa Hô hấp Bệnh viện Nhi đồng 1, Luận án Thạc Sỹ Y Học, Trờng Đại học Y Dợc TP Hồ Chí Minh Phạm Thị Minh Hồng (2004), Vai trò vi rút hợp bào hô hấp viêm tiểu phế quản trẻ em yếu tố tiên lợng, Luận án Tiến sỹ Y học, Trờng Đại học Y Dợc TP Hồ Chí Minh Nguyễn Công Khanh (2001), Thiếu máu trẻ em, Tiếp cận chẩn đoán nhi khoa, NXB Y học, Hà Nội, tr 192-9 Trần Quỵ, Nguyễn Tiến Dũng, Vũ Việt Bắc, Hoàng Lan (1998), Đặc điểm lâm sàng vai trò phối hợp vi rút, vi khuẩn gây bệnh viêm phổi cấp tính trẻ em, Y học thực hành 3/1988, tr 1-4 Trần Quỵ (1989), Viêm phổi trẻ tháng đến tuổi, Nhiễm khuẩn hô hấp cấp trẻ em, NXB Y học, Hà nội, tr 5-36 TiÕng Anh Ann R Falsey, Maria A Formica, Edward E Walsh (2002): Diagnosis of Respiratory Syncytial Virus Infection: Comparison of Reverse TranscriptionPCR to Viral culture and serology in adults with respiratory illness Journal of Clinical Microbiology, vol 40, No.3, p 817- 820 Joseph L Waner, Norma J Whitehurst, Sarah J Todd, Hamed Shalaby, Lester V Wall (1990): Comparison of Directigen RSV with viral isolation and direct 18 immunofluorescence for the identification of respiratory syncytial virus Journal of Clinical Microbiology, Vol 28, No 3, p 480-483 10 Richman, Whitley, Hayden (2002): Clinical Virology Second Edition ASM Press, Washington DC 11 D Gregson, T Lloyd, S Buchan, and D Church (2005): Comparison of the RSV Respi-Strip with direct fluorescent-antigen detection for diagnosis of respiratory syncytial virus infection in pediatric patients Journal of Clinical Microbiology, Vol 43, No 11, p 5782-5783 12 Yuki Kuroiwa, Kazushige Nagai, Lisa Okita, Susumu Ukae, Toshihiko Mori, Tomoyuki Hotsbo, Hiroyuki Tsutsumi (2004): Comparison of an immunochromatography test with multiplex reverse transcription - PCR for rapid diagnosis of respiratory syncytial virus infections Journal of Clinical Microbilogy, Vol 42, No 10, p 4812-4814 13 Arndt Rolfs, Irmela Schuller, Ulrich Finckh, Ines Weber-Rolfs (1992): PCR: Clinical Diagnostics and Research Springer-Verlag Berlin Heidelberg, Germany 14 Ann R Falsey, Maria A Formica, Edward E Walsh (2002): Diagnosis of Respiratory Syncytial Virus Infection: Comparison of Reverse TranscriptionPCR to Viral culture and serology in adults with respiratory illness Journal of Clinical Microbiology, vol 40, No.3, p 817- 820 15 Bustamante-Calvillo, Maria Elena, Velazquez F Raul, Carera-Munoz Lourdes, Torres Javier, Gomez-Delgado Alejandro, Moreno Jose Antonio Enciso, Munoz-Hernandez Onfore (2001): Molecular detection of respiratory syncytial virus in postmortem lung tissue samples from Mexican children deceased with pneumonia Pediatric Infectious Disease Journal, Vol.20, No.5, p.495-501 16 Carla Osiowy (1998): Direct detection of respiratory syncytial virus, parainfluenza virus, and adenovirus in clinical respiratory specimens by a multiplex reverse transcription-PCR assay Journal of Clinical Microbiology, Vol 36, No 11, p 3149-3154 19 17 World Health Organization - Department of Communicable Disease Surveillance and Response (2002): WHO manual on animal influenza diagnosis and surveillance 18 Matsumoto K., Nagatake T (1994): Clinical Microbilogy of Respiratory Infections 19 Korppi M, Leinonen M, Koskela M, Makela PH, Launiala K (1989): Bacterial coinfection in children hospitalized with respiratory syncytial virus infections Pediatric Infection Disease Journal, Vol 8, No 10, p 687-692 20 WHO-New and activities (1998): Acute respiratory infection: The forgotten pandemic Bullentin of the World Health Organization, Vol 76, No 1, p 101103 21 Ian C, Michelow, Kurt Olsen, Juanita Lozano, Nancy K Rollins, Lynn B Duffy, Thedi Ziegler, Jaana Kauppila, Maija Leinonen,, George H McCracken (2004): Epidemiology and clinical characteristics of community-acquired pneumonia in hospitalized children Pediatrics, Vol 113, No 4, p 701-707 22 Sedat Kaygusu, Iftihar Koksal, Kemalettin Aydin, Rahmet Caylan (2004): Investigation of atypical bacteria and virus antigen in respiratory tract infections by use of an immunofluorescence method Japanese Journal of Infectious Disease, Vol 57, p 33-36 23 Collins P.L, Mclntosh K, Chanock R.M (1996):Respiratory syncytial virus, in Fields BN, Knipe DM, Howley PM Field Virology 3rd ed, pp 1313-1351 24 Cordeirol CR, Freitas S, Rodrigue B, Catarino A et all (2006): Diagnosis of respiratory bronchiolitis associated intersticial lung disease.Monaldi Arch Ches Dis; 2: 96-101 25 Willwerth BM, Harper MB, Greenes DS(2006): Identifying hospitalized infants who have bronchiolitis and at high risk for apnea.Ann Emerg med.; 48(4): 441-7 26 Yousem SA (2006): Respiratory bronchiolitis- associated interstitial lung disease with fibrosis is a lesion distinct fibrotic nonspecific interstitial pneumonia: a proposal Mod Pathol 19(11): 1474-9 20 27 Tahan F, Ozcan A, Koc N(2006): Clarithromycin in the treatment of RSV bronchiolitis ; A double – lind, randomized, placebo – controlled trial Eur Respir J 28 Smyth RL, Openshaw P(2006): Bronchiolitis Lancet; 368 (9540) : 988 29 Sznaider M, Stheneur C, Albonico V et all (2005): Respiratory development of to year old children experiencing a first bronchiolitis episode before one age Allerg Immunol ; 37 (10); 392 – 30 Vieira R.A, Diniz E.M, Vaz F.A (2003): Clinical and laboratory study of newborns with lower respiratory tract infection due to respiratory viruses J Matern Fetal Neonatal Med, 13(5), pp 341-50 31 Church N.R, Anas N.G, Hall C.B, et al (1984): Respiratory syncytial virusrelated apnea in infants Am J Dis Child, pp 247-250 32 D’Elia C, Siqueira M.M, Portes S.A, Sant’Anna C.C (2005): Respiratory syncytial virus-associated lower respiratory infection in hospitalized infants Res Soc Bras Med Trop, Jan-Feb, 38(1), pp 7-10 33 Lanari M, Giovannini M, Giuffre L, Marini A, Rondini G, Rossi GA, el al (2002): Prevalance of respiratory syncytial virus infection in Italian infants hospitalized for acute lower respiratory tract infections, and association between respiratory syncytial virus infection risk factors and disease severity Pediatr Pulmonol, 33(6), pp 458-65 34 Djelantik I.G, Gessner B.D, et al (2003): Incidence and clinical feature of hospitalization beacause of respiratory syncytial virus illness among children les than two years age in a rural Asian setting Pediatr Infect Dis J Fed, 22(2), pp 150-7 35 Chan P, Goh A (1999): Respiratory syncytial virus infection in young Malaysian children Singapore Med J, May, 40(5), pp 336-40 36 Hussey G.D, Apolles P, et al (2000), "Respiratory syncytial virus infection in children hospitalised with acute lower respiratory tract infection", S Afr Med j, 90(5), pp 509-12 21 37 Calegari T, Yokosawa J, Silveira H.L, Costa L.F (2005): "Clinicalepidemiology evaluation of respiratory syncytial virus infection in children attended in a Public hospital in Midwestern Brazil”, The Brazilian Journal of infectious Disease, 9(2), pp 156- 161 38 Psarras S, Papadopoulos N.G, Johnston S.L (2004), "Pathogenesis of respiratory syncytial virus bronchiolitis - related wheezing", Peadiatric Respir Rev,5 Suppl A, pp 179-84 39 Nagayama Y, Tsubaki T, Nakayama S, Sawada K, Taguchi K, Tateno N, Toba T (2006), "Gender analysis in acute bronchiolitis due to respiratory syncytial virus", Pediatric allergy and immunology, 17,pp 29-36 40 Tsolia M.N, Kafetzits D, Danelatou K (2003), "Epidemiology of respiratory syncytial virus bronchiolitis in hospitalized infants in Greece", Eur J Epidemiol, 18(1), pp 55-61 41 Weigl J.A, Puppe W, Schimitt H.J (2001),"Incidence of respiratory syncytial virus-positive hospitalizations in children in Germany", Eur J Clin Microbiol Infect Dis, 20 (7), pp 452-9 42 Dudas R.A, Karron R.A (1998): "Respiratory syncytial virus vaccines", Clin Microbiol Rev Jul, 11(3), pp 430-9 43 Greenberg H.B, Piedra P.A (2004), "Immunization against viral respiratory disease", Pediatr Infect Dis J , 23, pp 254-261 44 Lanari M, Giovannini M, Giuffre L, Marini A, Rondini G, Rossi GA, el al (2002), "Prevalance of respiratory syncytial virus infection in Italian infants hospitalized for acute lower respiratory tract infections, and association between respiratory syncytial virus infection risk factors and disease severity”, Pediatr Pulmonol, 33(6), pp 458-65 45 Dudas R.A, Karron R.A (1998): "Respiratory syncytial virus vaccines", Clin Microbiol Rev Jul, 11(3), pp 430-9 46 Greenberg H.B, Piedra P.A (2004), "Immunization against viral respiratory disease", Pediatr Infect Dis J , 23, pp 254-261 22 47 WHO (1991), "Management of the young child with an respiratory infection", WHO, Bull, pp 504-15 48 Ogra P.L (2004),"Respiratory syncytial virus: The virus, the disease and immune response", Pediatrics Respiratory Review, pp 119-126 49 Mclntosh K (2000), Respiratory syncytial virus, Nelson textbook of Pediatrics, Sixteeth edition, pp 991-993 50 Kern S, Uhl M, Berner R, Schwoerer T, Langer M (2001) "Respiratory syncytial virus infection of the lower respiratory tract: Radiological finding in 108 children", Eur Radiol, 11(12), pp 2581- 51 Saijo M, Ishii T, Kokubo M, Murono K, Takimoto M, Fujita K (1996), "White bloob cell count, c-reactive protein and erythrocyte sedimentation rate in respiratory syncytial virus infection of the lower respiratory tract”, Acta Paediatr Jpn, Dec 38(6), pp 596-600 52 Rietveld E, Vergouwe Y, Steyerberg E.W, el al (2006), "Hospitalization for respiratory syncytial virus infection in young children: Development of a clinical prediction rule", Pediatr Infect Dis J, 25, pp.201-207 23 ... lập cấp Nhà Nớc Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng, dịch tễ học, phơng pháp chẩn đoán sớm, phác đồ điều trị hiệu dự phòng bệnh vi? ?m đờng hô hấp cấp vi rót H5N1, vi rót cóm A vµ vi rót hợp bào hô hấp Vi? ??t... rót hợp bào hô hấp Xác định đợc đặc điểm lâm sàng, xây dựng quy trình chẩn đoán nhanh, xác phác đồ điều trị hiệu bệnh vi? ?m đờng hô hấp cấp vi rút cúm H5N1, vi rút cúm A vi rút hợp bào hô hấp Đề... trờng hợp có đại dịch Vi? ??t Nam 2.2.2 Nghiên cứu xác định nguyên vi rút cúm H5N1, vi rút cúm A bệnh vi? ?m đờng hô hấp cấp vi rút: - Thiết lập phơng pháp chẩn đoán nhanh vi rút cúm A phơng pháp Real