Từ những năm 60 của thế kỷ 20 nấm men thực sự trở thành đối tượng quan trọng thu hút sự chú ý của nhiều nhà khoa học bởi những đặc tính hết sức quý báu hơn hẳn các sinh vật khác đó là: c
MỘT SỐ ĐẶC TÍNH SINH HỌC CUA NAM MEN
Đặc điểm hình thái, kích thước của nấm men
Nấm men là loại vi sinh vật có cấu tạo đơn bào, không di động và sinh sản chủ yếu bằng phương thức nảy chổi.
Nấm men có dạng hình tròn, hình trứng như Saccharomyces cerevisiae, hình clip như Saccharomyces ellipsoideus, hình quả chanh như
SVTH: Ngô Mỹ Yến Trang 3
CBHD: TS.Trần Thanh Thủy Luận văn tốt nghiệp
Saccharomyces apiculatus có thể có hình dạng giống chai như Saccharomyces ludwigii hoặc hình ống đài như Pichia Hình dạng tế bào của cùng một loài này có thể thay đổi tùy thuộc vào điều kiện môi trường, điều kiện nuôi cấy và độ tuổi của tế bào.
Nấm men có kích thước từ 3-5um thậm chí 25um Trong đó chiều rộng tế bào thường là 3 -5um và chiểu dài là 5 -10um hoặc hơn nữa.
Kích thước này cũng thay đổi tùy loài, giống và điểu kiện hoặc môi trường sống.
Trên môi trường thạch Hansen, khuẩn lạc nấm men thường xuất hiện với màu sắc đa dạng như trắng, nâu, đỏ hồng, cam và kem Kích thước của khuẩn lạc dao động khoảng vài mm, bề mặt có thể trơn nhẵn, bóng ướt hoặc xù xì, khô Hình dạng khuẩn lạc có thể nhô lên đều, phẳng hoặc lõm xuống.
1.2.2 Cấu tạo của tế bào nấm men :
Nấm men là một dạng sinh vật đơn bào với đầy đủ đặc điểm của một cơ thể sống, bao gồm thành tế bào, nguyên sinh chất, nhân tế bào và các bào quan khác.
1.2.2.1 Thành tế bào: Đây là lớp ngoài cùng của tế bào nấm men, chiếm khoảng 90% khối lượng khô của thành tế bào là hai hợp chất glucan và mannan, 10% còn lại chủ yếu là protein và lipit Protein của thành tế bào nấm men (6
Khoảng 7% cấu trúc của tế bào nấm men liên kết chặt chẽ với glucid, hình thành các phức chất giàu lưu huỳnh Trên bề mặt tế bào nấm men có nhiều lỗ nhỏ, cho phép chất dinh dưỡng từ môi trường thấm vào bên trong, trong khi các sản phẩm trao đổi chất được thải ra ngoài qua những lỗ nhỏ này một cách có chọn lọc.
SVTH: Ngô Mỹ Yến Trang 4
CBHD: TS,Trần Thanh Thủy Luận văn tốt nghiệp
Thành tế bào đóng vai trò quan trọng trong việc bảo vệ hình dạng của tế bào nấm men, giúp duy trì áp suất thẩm thấu bên trong và góp phần điều hòa quá trình trao đổi chất.
Màng nguyên sinh chất bên trong lớp thành tế bào có cấu trúc tương tự như màng của vi sinh vật, động vật và thực vật Cấu tạo của màng nguyên sinh chất bao gồm phospholipit và protein, trong đó phospholipit chiếm 30-40% trọng lượng của màng tế bào, còn protein nằm xen kẽ trong lớp phospholipit kép Đặc biệt, màng nguyên sinh chất ở nhiều loại nấm men có chiều dày khoảng 75-80nm.
Màng nguyên sinh chất đóng vai trò quan trọng trong việc kiểm soát quá trình hấp thu dinh dưỡng vào tế bào Bên cạnh đó, màng còn chứa các enzyme có chức năng tổng hợp các cấu trúc cần thiết cho thành tế bào.
Nguyên sinh chất của tế bào nấm men là một hệ thống ống keo bao gồm protein, lipit, polysaccarit, muối khoáng và nước, với độ nhớt cao gấp 800 lần so với nước Độ nhớt của nguyên sinh chất thay đổi theo độ tuổi của tế bào; tế bào non có độ nhớt thấp hơn và cấu trúc đồng nhất hơn so với tế bào trưởng thành Khi tế bào già đi, cấu trúc hạt và các bào quan như không bào và thể vùi ngày càng xuất hiện nhiều hơn.
Ribôxôm là nấm men có hai loại chính: ribôxôm 80s nằm trong tế bào chất và ribôxôm 70s, bao gồm hai tiểu thể 40s và 30s, có mặt trong ty thể Ribôxôm chứa khoảng 40-60% ARN, phần còn lại là protein Trong tế bào chất, ribôxôm 80s tồn tại dưới dạng tự do hoặc gắn với cấu trúc màng.
SVTH: Ngô Mỹ Yến Trang 5
CBHD: TS.Tran Thanh Thủy Luận văn tốt nghiệp
Chức năng của ribôxôm là nơi tổng hợp protein cho tế bào.
Ty thể có cấu trúc đa hình với nhiều hình dạng và kích thước khác nhau, tồn tại trong tế bào với số lượng và vị trí biến đổi tùy thuộc vào điều kiện sinh trưởng Chúng được bao bọc bởi hai lớp màng gồm protein và lipid, trên bề mặt có các hạt cơ bản (oxixom) Đặc biệt, ty thể chứa ADN, ribôxôm 70s, các ARN và một số enzyme.
Ty thể có chức năng thực hiện các phản ứng oxi hóa và chuyển điện tử, giúp tổng hợp ATP và giải phóng năng lượng cho tế bào Ngoài ra, ty thể còn tham gia vào quá trình tổng hợp protein, phospholipit, acid béo và một số enzim cần thiết cho hoạt động của tế bào.
Trong tế bào nấm men, có một không bào lớn hoặc nhiều không bào nhỏ chứa dịch tế bào Dịch này bao gồm các chất hữu cơ ở trạng thái keo như protein, lipid, glucid, enzym, cùng với các chất điện phân hòa tan như Na, K, Ca, Mg, Cl, SO4 và PO4.
Không bào đóng vai trò quan trọng trong việc điều hòa áp suất thẩm thấu của tế bào, đồng thời là nơi diễn ra các quá trình oxi hóa khử Ngoài ra, không bào còn là kho dự trữ cho nhiều chất dinh dưỡng khác nhau.
#Chất dự trữ: glycogen là hạt hydratcacbon dự trữ khi môi trường thừa đường, volutin là hạt protein dự trữ, hat lipit dự trữ,
Tế bào nấm men có cấu trúc nhân hình tròn hoặc bầu dục, được bao bọc bởi màng nhân Bên trong màng nhân chứa chất dịch nhân, và hình dạng cũng như kích thước của nhân có thể thay đổi tùy thuộc vào tuổi và trạng thái sinh lý của tế bào Đặc biệt, trong các tế bào hoạt động mạnh, nhân thường có kích thước lớn hơn.
SVTH: Ngô Mỹ Yến Trang 6
CBHD: TS.Trần Thanh Thủy Luận văn tốt nghiệp khá lớn Nhân của nấm men cấu tạo bởi protein, ADN, ARN và nhiều enzym khác nhau.
Nhân quyết định tinh di truyền và tham gia diéu khiển tất cả mọi hoạt động sống của tế bào nấm men.
1.2.3.Thành phần hóa học của nấm men:
Cấu tạo của tế bào MAM I€ùt 5 sọ Hincsssiissxee 4 1.2.3 Thanh phần hóa học của nấm men .- sec og
nhân gây ra các phản ứng sinh hóa Các nguyên tố khoáng chủ yếu là: S,
P, Mg, Fe, Ca, Zn, Na, K, Cl, SO,” giúp ổn định sự sinh trưởng và phát triển của nấm men Vitamin có tác dụng kích thích sự sinh trưởng và phát triển của nấm men, đặc biệt là các vitamin nhóm B (BI, B2, B6),
13 VAI TRÒ CUA NAM MEN TRONG ĐỜI SONG VA
1.3.1 Vai trò của nấm men trong công nghiệp thực phẩm:
1.3.1.1 Sinh khối protein đơn bào:
Nấm men là nguồn protein vi sinh vật được nghiên cứu sớm nhất và hiện nay đã được áp dụng rộng rãi trên toàn thế giới Con người đã sử dụng nấm men cùng với các sản phẩm từ hoạt động sống của chúng trong hàng ngàn năm Tế bào nấm men chứa hầu hết các chất cần thiết cho sự sống, và về mặt dinh dưỡng, nấm men rất giàu protein và vitamin, đặc biệt là các vitamin nhóm B.
Sinh khối nấm men chứa khoảng 75 -80% nước, 20 -25% vật chất khô trong đó Carbon 45 ~50%, Nitơ 7 ~10% (tương ứng 40 -60% protein), Hydro 5-7%, Oxi 25 ~30%, các nguyên tố vô cơ: 5 -10%
Phospho va K chiếm 95 —97% tổng lượng tro, số còn lại là Ca, Mg, AI, S,
Cl, Fe ngoài ra còn một lượng nhỏ Mn, Zn, Mo, Bo, Co.
Nấm men được sử dụng để sản xuất protein đơn bào quan trọng nhất là nấm men Candida utilis, Candida tropical và Saccharomyces cerevisiae [3].
1.3.1.2 Nấm men lam nở bột mi :Nấm men làm nở bột mì thường được gọi là men bánh mì Nấm men dùng trong các xí nghiệp sản xuất bánh mì là loài SaccharomycesSVTH: Ngô Mỹ Yến Trang 13
CBHD: TS.Trần Thanh Thủy đã nghiên cứu về nấm men cerevisiae trong công nghiệp, nhấn mạnh việc chọn lọc các chủng nấm men với những đặc tính quan trọng như khả năng nở bột tốt, dễ hòa tan trong nước, và tính ổn định sinh hóa cao Các chủng nấm men này cũng cần có khả năng sinh sản nhanh và cho năng suất cao trong quá trình lên men Tại Việt Nam, đã có một số nấm men bánh mì được tuyển chọn đáp ứng các tiêu chí này, cho năng suất sinh khối cao và phù hợp để sản xuất trên môi trường rỉ đường mía Men bánh mì phát triển tốt trong môi trường chứa glucose, maltose, và saccharose, tuy nhiên, trong công nghiệp thường sử dụng rỉ đường mía hoặc rỉ đường củ cải để sản xuất sinh khối nấm men.
1.3.1.3 Nấm men trong sdn xuất rượu, bia:
Theo phương pháp cổ điển, rượu được sản xuất bằng cách lên men các dịch đường nhờ nấm men trong điều kiện khí Nguyên liệu chính bao gồm ngũ cốc như sắn, khoai tây, ri đường, nước quả và gỗ Trong quá trình lên men, ngoài etylic, còn tạo ra khí CO₂, glycerin, một số cồn bậc cao, aldehyt, các acid hữu cơ và sinh khối nấm men.
Trong sản xuất rượu, người ta thường dùng các loài nấm men thuộc giống Saccharomyces cerevisiae.
Bia là một loại đồ uống có nồng độ cồn nhẹ và khả năng giải khát cao, được ưa chuộng trên toàn thế giới Nhiều quốc gia sản xuất và tiêu thụ bia với mức khoảng 140-160 lít/người/năm, trong khi ở Việt Nam, mức tiêu thụ này dao động từ 5-8 lít/người/năm.
SVTH: Ngô Mỹ Yến Trang 14
CBHD: TS.Trần Thanh Thủy Luận văn tốt nghiệp
Thành phẩn của bia gồm có 80 -90% nước, 1,5 -7% cồn, 3-10% chất hòa tan, 0,3-0,4% CO¿ Chất hòa tan chủ yếu là hydratcacbon
Dextrin, maltose, glucose và pentose là những carbohydrate quan trọng, cùng với protein và các sản phẩm thủy phân của chúng như albumoza, pepton và các acid amin Ngoài ra, các chất khoáng, vitamin và các hợp chất đắng, thơm từ hoa houblon cũng đóng vai trò quan trọng trong thành phần dinh dưỡng.
Trong sản xuất bia thường dùng các loài men chìm thuộc giống
Saccharomyces carlbergensis là loại men thường được sử dụng trong sản xuất bia, đặc biệt cho các loại bia sáng màu Ngoài ra, men nổi thuộc giống Saccharomyces cerevisiae cũng được sử dụng, nhưng chủ yếu cho các loại bia thắm màu Men chìm và men nổi có vai trò quan trọng trong quá trình lên men, tạo ra hương vị đặc trưng cho từng loại bia.
1.3.1.4 Nấm men trong sản xuất rượu vang:
Khác với rượu trắng và các loại rượu pha chế, rượu vang được sản xuất từ quá trình lên men trực tiếp của nước quả mà không cần chưng cất Sau khi quá trình lên men kết thúc, rượu vang được lắng tự nhiên và gạn lọc để hoàn thiện sản phẩm Với nguồn gốc từ quả nho, rượu vang mang tên gọi đặc trưng này.
Rượu vang, hay còn gọi là "vin" hoặc "wine", hiện nay được hiểu rộng rãi là loại rượu không chưng cất được sản xuất từ các loại nước quả Quá trình sản xuất rượu vang dựa vào các phản ứng hóa sinh xảy ra trong quá trình lên men nước quả, dưới tác động của enzym nấm men.
Nấm men đóng vai trò quan trọng trong quá trình lên men rượu vang, với sự hiện diện chủ yếu của các men dại hình thoi hoặc hình chùy (Kloeckera) trong những ngày đầu, chiếm khoảng 70-80% tổng số nấm men Sau đó, sự phát triển của các nấm men hình elip hoặc ovan bắt đầu chiếm ưu thế, tạo nên sự chuyển biến trong quá trình lên men.
Nấm men Saccharomyces ellipsoideus phát triển nhanh chóng, gây ra quá trình lên men mạnh mẽ, tiêu hao lượng đường nhanh và tích tụ cồn etylic Khi nồng độ cồn đạt mức tương đối cao từ 8-12%, nấm men hình elip S ellipsoideus hay S vini sẽ ngừng hoạt động.
SVTH: Ngô Mỹ Yến Trang 15
CBHD: TS Trần Thanh Thủy đã nghiên cứu về sự phát triển và hoạt động của nấm men Saccharomyces oviformis, cho thấy quá trình lên men của loại nấm men này sẽ tiếp tục diễn ra cho đến khi hoàn tất.
1.3.2 Vai trò của nấm men trong chăn nuôi:
1.3.2.1 Bổ sung vào thành phần thưé ăn cho gia súc:
Nấm men gia súc được sản xuất lần đầu tiên ở Đức vào những năm 1980 Năm 1968, Liên Xô trở thành quốc gia đầu tiên xây dựng nhà máy sản xuất nấm men từ parafin dầu mỏ Sau đó, các quốc gia như Anh, Pháp và Nhật Bản đã nhanh chóng phát triển việc sử dụng nguồn nguyên liệu này để thu nhận protein từ nấm men, dẫn đến sự gia tăng sản lượng nấm men toàn cầu, đặc biệt là ở bốn quốc gia: Anh, Pháp, Nhật Bản và Liên Xô.
Pháp, Nhật, Italia trung bình hàng năm trên thế giới từ 1976-1980 lượng nấm men đã sản xuất là 750.000 tấn.
Các giống nấm men phổ biến trong thực phẩm cho người và thức ăn gia súc bao gồm Endomyces vernalis, Hansenula jadimi, Saccharomyces cerevisiae, Candida arbores, Candida tropicalis, Mycotorula lipolitica, Mycotorula japonica, Torulopsin pulcherima, Torulopsis utilis var thermophilis, Monilia candida và Oidium lactis Trong số đó, các giống nấm men như Candida, Saccharomyces và Torulopsis được ưa chuộng hơn cả nhờ khả năng chuyển hóa cao, tạo ra nhiều sinh khối và cung cấp các chất dinh dưỡng giá trị.
1.3.2.2 Nấm men được sử dụng làm men gia súc:
VAT LIEU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Quan sát hình thái khuẩn lạc
Nuôi cấy nấm men trên môi trường 2 (ở thạch đĩa) ở nhiệt độ 28-
30°C trong 3 ngày Sau đó lấy ra quan sát và mô tả đặc điểm.
Quan sát hình thái tế bào NAM rmen
Việc xác định hình thái và kích thước của tế bào nấm men được thực hiện khi tế bào còn ở giai đoạn trẻ, vì đây là thời điểm mà hình thái của chúng tương đối ổn định nhất.
Các chủng nghiên cứu được chuyển từ thạch nghiêng sang ống nghiệm chứa 10ml môi trường Hansen dịch thể Sau khi ủ trong tủ ấm ở nhiệt độ 28-30°C trong 2-3 ngày, mẫu sẽ được lấy ra để làm tiêu bản và quan sát hình thái tế bào.
Các đặc điểm cần xác định là :
* Hinh dạng tế bào. ® Số lượng tế bào nảy chi.
* S6 lượng tế bào chết (đùng phòng đếm Thoma —Goriaêv).
SVTH: Ngô Mỹ Yến Trang 28
CBHD: TS.Trần Thanh Thủy Luận văn tốt nghiệp
Để phân biệt tế bào sống và tế bào chết, chúng ta thực hiện tiêu bản giọt ép với thuốc nhuộm xanh métylen 0,01% Tế bào sống sẽ không bị màu hoặc có màu xanh nhạt, trong khi tế bào chết sẽ nhuộm màu xanh đậm hơn.
Để quan sát tế bào nấm men một cách chi tiết, có thể sử dụng thuốc nhuộm Đầu tiên, lấy một giọt dung dịch nuôi cấy nấm men và đặt lên phiến kính sạch, sau đó dàn mỏng và làm khô bằng ngọn lửa đèn cồn Tiếp theo, nhuộm mau bằng Fuchsin hoặc xanh mêtylen trong 1 phút, rồi rửa sạch tiêu bản bằng nước cất Cuối cùng, để tiêu bản khô tự nhiên hoặc dùng giấy lọc thấm, và quan sát dưới kính hiển vi quang học ở vật kính x100 với dầu soi kính.
2.2.2.3 Đo kích thước tế bào [9]:
Thước do vật kính là một phiến kính tốt ở giữa có 1 vạch khắc đài | mm, chia thành 100 khoảng mỗi khoảng dài 10um.
Thước đo thị kính là một bản thủy tỉnh hình tròn, ở trung tâm có một vạch dài 5mm chia ra làm 50 khoảng cách đều nhau.
Nuôi nấm men trong môi trường Hansen dịch thể và sau 48 giờ, tiến hành làm tiêu bản giọt ép để đo Đặt thước đo vật kính lên bàn kính và điều chỉnh cho vạch chia nằm giữa quang trường Lắp thước đo thị kính vào và quay sao cho các vạch chia song song với thước đo vật kính Tiến hành làm trùng một vạch chia của thước đo vật kính với một vạch của thước đo thị kính, sau đó xác định vạch trùng tiếp theo để đếm số khoảng chia tương ứng.
SVTH: Ngô Mỹ Yến Trang 29
CBHD: TS.Trần Thanh Thủy Luận văn tốt nghiệp với một vạch của thước đo thị kính và tính giá trị mỗi khoảng chia bằng ụm.
Trong 4 vạch của thước đo vật kính (40um) có 13 vạch của thước đo thị kính, tương ứng với độ phóng đại là 40/13=3,08 pm cho mỗi vạch của thước đo thị kính.
Để đo kích thước tế bào, hãy thay thế thước đo vật kính bằng tiêu bản vi sinh vật và điều chỉnh thước đo thị kính cho phù hợp với tiêu bản cần đo Kích thước tế bào sẽ được tính bằng cách nhân số khoảng chia của thước đo thị kính với hệ số đo.
Mỗi tế bào được đo chiều dài và chiều rộng, với mỗi mẫu chứa ít nhất 20 tế bào Sau đó, giá trị trung bình được tính toán chỉ dựa trên các tế bào đã trưởng thành.
2.2.3 Các phương pháp nghiên cứu đặc điểm sinh lý, sinh hóa của nấm men [1].
2.2.3.1 Quan sát hình thức nảy chéi ở tế bào nấm men:
Nay chổi là một yếu tố quan trọng trong phân loại nấm men, với hầu hết nấm men sinh sản vô tính qua hình thức nảy chổi Quá trình nảy chổi có thể được quan sát khi nuôi cấy nấm men trong môi trường Hansen dịch thể (MT 2) ở nhiệt độ 25-30°C trong 1-2 ngày Khi quan sát dưới kính hiển vi, cần phân biệt giữa chổi hình thành là chổi một cực hay đa cực, số lượng chổi con trên mỗi tế bào mẹ, và việc chổi con có tách rời khỏi tế bào mẹ hay không.
2.2.3.2 Quan sát khuẩn ty của nấm men:
Một số loại nấm men có khả năng phát triển trong môi trường giàu hoặc thiếu oxy, tạo ra các tế bào dai xếp nối nhau, được gọi là giả khuẩn ty Ngoài ra, một số nấm men khác cũng có thể hình thành khuẩn ty ngay cả trong điều kiện bình thường Tuy nhiên, khuẩn ty giả vẫn chưa hoàn toàn hình thành.
SVTH: Ngô Mỹ Yến Trang 30
CBHD: TS Trần Thanh Thủy cho biết rằng sợi nấm men chỉ là nhiều tế bào liên kết thành chuỗi dài, và sự hình thành khuẩn ty là yếu tố quan trọng trong việc phân loại nấm men Để kiểm tra sự hình thành khuẩn ty, cần nuôi cấy nấm men trên môi trường 9, với yêu cầu đổ môi trường vào hộp pêti sao cho càng mỏng càng tốt.
Sử dụng que cấy để cấy nấm men thành ba đường song song, sau đó dùng panh lấy lá kính mỏng đã được khử trùng bằng cồn, đốt nhẹ để loại bỏ cồn và đặt lên vết cấy Đảm bảo rằng ba đường cấy nằm gọn trong lá kính, với hai đầu dài hơn một chút Sau khi đậy lá kính cẩn thận, đậy hộp pêtri lại và nuôi trong tủ ấm ở nhiệt độ 25-30°C trong 3-5 ngày Cuối cùng, lấy mẫu ra và quan sát dưới kính hiển vi để dễ dàng nhận diện sự tạo thành khuẩn ty ở một số loài nấm men.
2.2.3.3 Quan sát nang bào từ của nấm men:
Nấm men sinh sản hữu tính thông qua bào tử túi, hay còn gọi là bào tử nang, với các tế bào chứa bào tử nang được gọi là nang Nang bào tử của nấm men thường được quan sát trong các môi trường già.
Phương pháp nuôi nấm men bao gồm việc nuôi trong môi trường 2 trong 2 ngày Sau đó, cấy ria với mật độ cao vào các ống thạch nghiêng chứa môi trường 10 và ủ ấm ở nhiệt độ 28°C trong khoảng 10-15 ngày Cuối cùng, thực hiện việc làm tiêu bản soi tươi mà không cần nhuộm để quan sát nang bào tử.
Nang tiếp hợp có hai dạng chính: một là do sự dung hợp của nhân tế bào mẹ và chổi, hai là do sự dung hợp của hai tế bào riêng biệt Những nang này nằm tách biệt bên ngoài tế bào.
- Xác định số lượng bào tử trong mỗi nang.
- Đặc điểm của vách bào tử nang.
SVTH: Ngô Mỹ Yến Trang 31
CBHD: TS.Trần Thanh Thủy Luận văn tốt nghiệp
- Mô tả hình dạng bào tử: hình cầu, hình thận, hình nón, hình sao thổ, hình kim xoắn, hình sao, hình thoi.
2.2.3.4 Xác định khả năng sử dụng nitrat làm nguồn nite của nấm men:
*Nguyén tắc: Một số nấm men có khả năng sử dung nitrat làm nguồn nitơ và khử nitrat thành nitrit hoặc NH, có khi thành N;
Khả năng khử NO; thành NO; là một trong các chỉ tiêu phân loại nấm men Để xác định sự tạo thành NO; dùng thuốc thử Griss I và Griss
_ Lô đối chứng 1: Các ống nghiệm chứa môi trường cơ sở (MT6).
_Lô đối chứng 2: Các ống nghiệm chứa môi trường cơ sở có bổ sung thêm pepton 1%.
_Lô thí nghiệm: Các ống nghiệm chứa môi trường cơ sở có bổ sung thêm nguồn nits dưới dạng KNO;
Môi trường được thanh trùng ở 1 atm trong 30 phút Mỗi chủng nấm men cấy vào 3 loại môi trường trên Nuôi cấy nấm men trong tủ ấm từ 5-
7 ngày Cứ sau một thời gian nhất định lấy một ít dịch nuôi cấy thử xem có hoạt tính hay không.
Quan sát khuẩn ty của nấm men
Một số loại nấm men có khả năng phát triển trong môi trường giàu hoặc thiếu oxy, hình thành nên các tế bào dai được gọi là giả khuẩn ty Ngoài ra, một số nấm men khác cũng có thể tạo ra khuẩn ty khi phát triển trong điều kiện bình thường Tuy nhiên, khuẩn ty giả vẫn chưa được hình thành.
SVTH: Ngô Mỹ Yến Trang 30
CBHD: TS Trần Thanh Thủy cho biết rằng sợi nấm men là chuỗi dài của nhiều tế bào liên kết với nhau Sự hình thành khuẩn ty là một yếu tố quan trọng trong việc phân loại nấm men Để kiểm tra sự hình thành khuẩn ty, nấm men cần được nuôi cấy trên môi trường 9, với lớp môi trường được đổ vào hộp pêti càng mỏng càng tốt.
Dùng que cấy để cấy nấm men thành ba đường song song, sau đó sử dụng panh để lấy lá kính mỏng đã được khử trùng, đặt nhẹ nhàng lên vết cấy Đảm bảo rằng ba đường cấy nằm gọn trong lá kính, với hai đầu dài hơn một chút Sau khi đậy lá kính cẩn thận, đậy hộp pêtri lại và nuôi trong tủ ấm ở nhiệt độ 25-30°C trong 3-5 ngày Cuối cùng, lấy ra và quan sát các vết cấy dưới kính hiển vi để dễ dàng nhận thấy sự hình thành khuẩn ty ở một số loài nấm men.
Quan sát nang bào từ của nấm men ee 2.2.3.4 Xác định khả năng sit dung nitrat làm nguồn nitơ giấu NÊN N64 200002x6356460606a6ả5 w= 32 2.2.3.5 Xác định khả năng phân giải uré của nấm men
Nấm men sinh sản hữu tính thông qua bào tử túi, hay còn gọi là bào tử nang Các tế bào chứa bào tử nang được gọi là nang Nang bào tử của nấm men thường được quan sát trong các môi trường giàu dinh dưỡng.
Phương pháp nuôi nấm men bao gồm việc nuôi trong môi trường 2 trong 2 ngày, sau đó cấy ria với mật độ cao lên các ống thạch nghiêng chứa môi trường 10 Tiến hành ủ ấm ở nhiệt độ 28°C trong khoảng 10-15 ngày, sau đó thực hiện làm tiêu bản soi tươi mà không cần nhuộm để quan sát nang bào tử.
Nang tiếp hợp có thể được phân biệt thành hai loại: một loại là do sự dung hợp của nhân tế bào mẹ với chổi, và loại còn lại là do sự dung hợp của hai tế bào riêng biệt Những nang này thường nằm riêng biệt bên ngoài tế bào.
- Xác định số lượng bào tử trong mỗi nang.
- Đặc điểm của vách bào tử nang.
SVTH: Ngô Mỹ Yến Trang 31
CBHD: TS.Trần Thanh Thủy Luận văn tốt nghiệp
- Mô tả hình dạng bào tử: hình cầu, hình thận, hình nón, hình sao thổ, hình kim xoắn, hình sao, hình thoi.
2.2.3.4 Xác định khả năng sử dụng nitrat làm nguồn nite của nấm men:
*Nguyén tắc: Một số nấm men có khả năng sử dung nitrat làm nguồn nitơ và khử nitrat thành nitrit hoặc NH, có khi thành N;
Khả năng khử NO; thành NO; là một trong các chỉ tiêu phân loại nấm men Để xác định sự tạo thành NO; dùng thuốc thử Griss I và Griss
_ Lô đối chứng 1: Các ống nghiệm chứa môi trường cơ sở (MT6).
_Lô đối chứng 2: Các ống nghiệm chứa môi trường cơ sở có bổ sung thêm pepton 1%.
_Lô thí nghiệm: Các ống nghiệm chứa môi trường cơ sở có bổ sung thêm nguồn nits dưới dạng KNO;
Môi trường được thanh trùng ở 1 atm trong 30 phút Mỗi chủng nấm men cấy vào 3 loại môi trường trên Nuôi cấy nấm men trong tủ ấm từ 5-
7 ngày Cứ sau một thời gian nhất định lấy một ít dịch nuôi cấy thử xem có hoạt tính hay không.
Lấy 1-2 giọt dịch nuôi cấy cho vào bản sứ lõm Nhỏ một giọt thuốc thử Griss I và một giọt thuốc thử Griss II Nếu có mặt nitrit dịch nuôi cấy có mau đỏ.
Cách pha thuốc thừ Criss I va Criss I:
SVTH: Ngô Mỹ Yến Trang 32
CBHD: TS.Trần Thanh Thủy Luận văn tốt nghiệp
Hòa Naphtylamin vào nước rồi mới bổ sung acid Acetic.
2.2.3.5 Xác định khả năng phân giải urê của nấm men:
Phân giải urê là một chỉ tiêu quan trọng trong việc phân loại nấm men Một số loại nấm men có khả năng sản xuất enzym ureaza, cho phép chúng phân giải urê thành NH, từ đó ảnh hưởng đến môi trường sống của chúng.
Để xác định khả năng tạo enzyme ureaza, phương pháp sử dụng môi trường có 7 chất chỉ thị màu, trong đó có phenol đỏ Sau khi nuôi cấy nấm men trong tủ ấm từ 3-5 ngày, nếu thấy vết cấy chuyển sang màu đỏ hồng, điều này chứng tỏ nấm men có khả năng phân giải urê.
Phản ứng xảy ra như sau:
O=z=C-(NH;; + 2H,0 > (NH,),CO; > 2NH; + H;CO;
NH; phản ứng với chất chỉ thị phenol đỏ làm vết cấy chuyển màu đỏ.
Xác định khả năng lên men các loại đường, 3-3 2.2.4 Chon môi trường tối ưu cho sự sinh trưởng và phát triển của nấm men bằng phương pháp đếm số lượng tế bào bằng
Khả năng lên men các loại đường là một chỉ ti€u quan trọng trong phân loại nấm men.
* Nguyên tắc: Dựa vào sự thay đổi màu sắc, độ đục của môi trường và lượng CO; tạo thành trong dịch lên men.
-Dùng MT 8 với các loại đường: glucose, d- galactose, lactose, saccarose, maltose, fructose và dextin.
SVTH: Ngô Mỹ Yến Trang 33
CBHD: TS.Trần Thanh Thủy Luận văn tốt nghiệp
Chuẩn bị các bình lên men Einhorn - Smith đã được vô trùng Sau khi khử trùng, cho 9ml môi trường vào mỗi bình và bổ sung 1ml giống đã hoạt hóa, đảm bảo không tạo bọt khí Tiến hành khảo sát khả năng lên men của nấm men sau 8 giờ ở nhiệt độ 28-30°C.
Nếu nấm men có khả nang lên men đường chứa trong môi trường sẽ sinh ra khí CO; đẩy môi trường xuống:
- Môi trường chuyển màu rõ, lượng CO; nhiều: lên men mạnh.
- Môi trường chuyển màu không rõ,lượng CO; ít: lên men yếu.
- Môi trường không chuyển màu, không tạo CO;: không lên men.
2.2.4 Chọn môi trường tối wu cho sự sinh trưởng và phát triển của nấm men bằng phương pháp đếm số lượng tế bào bằng khung đếm
Chuẩn bị các ống nghiệm chứa 9ml các môi trường 2, 3, 4, 5 vô trùng.
Giống được kích hoạt trong vòng 24 giờ trên máy lắc với tốc độ 130 vòng/phút Sau đó, điều chỉnh lượng giống vào các môi trường sao cho bằng nhau, khoảng 0,3 triệu tế bào/ml, và nuôi cấy ở nhiệt độ 28-30°C trong 24 giờ Số lượng tế bào được kiểm tra bằng khung đếm Thoma-Goriaév tại các thời điểm khác nhau, bắt đầu từ thời điểm 0.
* Nguyên tắc: dựa vào thể tích của khung đếm để tính số tế bào có trong 1ml dịch nuôi cấy.
Khung đếm là một phiến kính phẳng với lưới gồm 400 hình vuông, tổng diện tích là 1mm² Diện tích của mỗi ô nhỏ là 1/400 mm², trong khi diện tích của một ô vuông lớn là 1/25 mm².
SVTH: Ngô Mỹ Yến Trang 34
CBHD: TS.Trần Thanh Thủy Luận văn tốt nghiệp
* Pha loãng dịch huyển phù nấm men đến néng độ thích hợp.
* Nhé dịch huyền phù nấm men vào cạnh lamelle (đã đặt trên phòng đếm), chú ý không để bọt khí.
* Đếm số lượng tế bào ở 5 6 lớn với 5 vị trí khác nhau.
Sau khi nhỏ giọt mẫu vào khung đếm, cần chờ khoảng 3-5 phút để các tế bào lắng xuống và đồng nhất trên một mặt phẳng, từ đó tiến hành xác định số lượng tế bào.
N: Số tế bào/ml. a: Số tế bào trung bình trong 1 ô nhỏ. n: Độ pha loãng huyền phù. h: chiểu sâu của khung đếm. s: diện tích ô nhỏ.
2.2.5 Khảo sát sự ảnh hưởng của các yếu tế môi trường đến khả năng tạo sinh khối của tế bào bằng phương pháp cân sinh khối tươi.
Chuẩn bị các ống nghiệm chứa 9ml mồi trường 3 vô trùng.
Dùng NaOH 0,1 N hoặc acid citric, diéu chỉnh pH môi trường đạt các giá trị 5,5; 6,0; 6,5; 7,0; 7,5.
Giống được kích hoạt sau 24 giờ trên máy lắc với tốc độ 130 vòng/phút Sau đó, điều chỉnh lượng giống vào các môi trường có pH bằng nhau, đạt khoảng 0,3 triệu tế bào/ml, và nuôi cấy ở nhiệt độ 28-30°C trong 24 giờ.
SVTH: Ngô Mỹ Yến Trang 35
CBHD: TS.Trần Thanh Thủy Luận văn tốt nghiệp Cân lượng sinh khối tạo thành tại các thời điểm: 0, 3, 6, 9, 12, 15, 18
Ảnh hưởng của nhiệt độ sec sa,36 2.2.5.3 Ảnh hưởng của cường độ thông khí
Cách bố trí thí nghiệm như trên chỉ khác yếu tố cẩn thay đổi là nhiệt độ.
Cân lượng sinh khối tạo thành tại các thời điểm tương tự như thí nghiệm trên ở các nhiệt độ: 25°C; 30°C; 35°C; 40°C.
2.2.5.3 Ảnh hưởng của cường độ thông khí:
Giống được kích hoạt trên máy lắc với tốc độ 130 vòng/phút trong 24 giờ ở nhiệt độ phòng 30°C Sau khi quá trình kích hoạt hoàn tất, giống được chuyển vào môi trường nhân giống với nồng độ khoảng 0,3 triệu tế bào/ml.
Lắc ở những tốc độ khác nhau: không lắc (0 vòng/phút), 100 vòng/phút, 130 vòng/phút, 150 vòng/phút va 170 vòng/phút.
Cân lượng sinh khối tạo thành ở các thời điểm: 0, 3, 6, 9, 12, 15, 18,
21, 24 giờ với mỗi chế độ lắc trên.
2.2.6 Khảo sát khả năng kháng các kháng sinh của chủng nấm men bằng phương pháp dùng đĩa kháng sinh chuẩn [8]:
Sau 24 giờ nuôi cấy nấm men đã hoạt hóa trên máy lắc với tốc độ 130 vòng/phút, tiến hành cấy trải lên các đĩa pêtri chứa môi trường 2 agar Tiếp theo, đặt các đĩa giấy tẩm chất kháng sinh lên bề mặt thạch và để trong 24 giờ Cuối cùng, kiểm tra vòng vô khuẩn.
Bảo quản nấm men bằng phương pháp đông khô
Phương pháp đông khô là kỹ thuật làm thăng hoa phần nước trong môi trường nhũ hóa vi sinh vật dưới áp suất thấp Ưu điểm nổi bật của phương pháp này là tỷ lệ sống sót của vi sinh vật rất cao, đồng thời bảo tồn các đặc tính di truyền của chúng.
SVTH: Ngô Mỹ Yến Trang 36
CBHD: TS Trần Thanh Thủy cho biết rằng luận văn tốt nghiệp của vi sinh vật không bị biến đổi cho thấy thời gian giữ giống có thể kéo dài đáng kể Điều này giúp giảm bớt công sức cần thiết cho việc cấy truyền nhiều dòng vi sinh vật.
Nuôi vi sinh vật trong môi trường từ giai đoạn logarit, thu sinh khối tế bào qua li tâm lạnh và trộn với chất bảo vệ Sau đó, cho các ống giống vi sinh vật đã chuẩn bị vào làm lạnh ở -20°C trong 1-5 phút Tiếp theo, đưa vi sinh vật vào thiết bị đông khô ở áp suất 10 Hg trong 24 giờ Cuối cùng, các ống giống đã khô được hàn kín và bảo quản ở nhiệt độ phòng hoặc trong tủ lạnh.
Người ta thường sử dụng môi trường 11 để trộn với giống vi sinh vật, nhằm bảo vệ chúng trong quá trình đông khô, ngăn ngừa sự hình thành tinh thể nước (H2O) và các quá trình oxi hóa có thể gây hại.
Xác định khả năng sống sót sau đông khô cụ Phần III: KET QUA VÀ BIEN LUẬN S ~ -72.EEE crrrcrrrrcree 39 3.1 Nghiên cứu các đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa của chủng nấm men SqcChPOIVC€S.SD2 .ccoocensoocasonsenson ngan 00 00g22nnsgeesrne 39 3.1.1 Các đặc điểm hình thái .5255<S211x1eSH121010 2110<x.ee 39 3.1.2 Quan sát khuẩn by nấm meetin cccssseessssssseeeeessonnnnennseessnusiseesnessneeseenees 4 3.1.3 Quan sát nang bào tử NAM m€il cào sesosssseeeee 41 3.1.4 Khả năng sử dung nitrat làm nguồn nitd duy nhất 4I 3.1.5 Khả năng phân giải HFÊ - sec chrreeretrrrre 42 3.1.6 Khả năng lên men các loại đường,
Khả năng sống sót sau mùa đông khô được đánh giá thông qua phương pháp xác định gián tiếp số lượng tế bào, bằng cách đếm số lượng khuẩn lạc phát triển trên môi trường thạch.
Cấy một thể tích huyền phù tế bào lên môi trường đặc trưng trong đĩa pêtri để nghiên cứu Số lượng tế bào được xác định bằng cách đếm số khuẩn lạc phát triển sau thời gian nuôi cấy, với mỗi khuẩn lạc đại diện cho sự phát triển của một tế bào.
Pha loãng dịch huyền phù ở các nổng độ khác nhau: 10° ,10', 10° để cấy mẫu.
SVTH: Ngô Mỹ Yến Trang 37
CBHD: TS.Trần Thanh Thủy Luận văn tốt nghiệp
Dùng ống pipet vô trùng lấy 0,1 ml dich huyén phù cho vào mỗi đĩa thạch chứa môi trường 2.
Sử dụng que gạt để trải đều trên bề mặt thạch, nhằm tách biệt từng tế bào Mỗi mẫu cần lấy 3 nồng độ liên tiếp, với mỗi nồng độ cấy vào 3 đĩa pétri và tính kết quả trung bình Sau khi cấy, đặt các đĩa thạch vào tủ ấm ở nhiệt độ 28-30°C và sau 2-3 ngày, tiến hành đếm số lượng khuẩn lạc.
Số lượng ví sinh vật trong một gam mẫu được tính theo công thức:
M: Số khuẩn lạc tế bào trong một đĩa pétri. a: Số giọt đếm được trong lmÌ mẫu. n: độ pha loãng dịch huyền phù.
N: Hệ số tính theo khối lượng khô tuyệt đối của mẫu.
SVTH: Ngô Mỹ Yến Trang 38
CBHD: TS.Trần Thanh Thủy Luận văn tốt nghiệp
KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN.
3.1 Nghiên cứu các đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa của chủng nấm men Saccharomyces sp2 :
3.1.1 Các đặc điểm hình thái:
Nuôi cấy chủng nấm men Saccharomyces sp2 trên môi trường
Hansen agar ở nhiệt độ 28-30°C Sau 3 ngày quan sát đặc điểm hình thái khuẩn lạc của chủng nấm men trên.
Hoạt hóa chủng nấm men Saccharomyces sp2 được thực hiện trên máy lắc với tốc độ 130 vòng/phút trong 24 giờ Sau đó, 1 ml dịch hoạt hóa được đưa vào 9 ml môi trường Hansen dịch thể Sau 2-3 ngày, tiến hành làm tiêu bản giọt ép bằng dung dịch xanh metyken 0,01% để quan sát hình dạng và đo kích thước tế bào của chủng Saccharomyces sp2 Kết quả nghiên cứu từ 30 mẫu được tính giá trị trung bình và được trình bày trong hình 3.1 và bảng 3.1.
Hình 3.1: Hình thái khuẩn lạc và hình thái tế bào của chủng nấm men Saccharomyces sp2.
SVTH: Ngô Mỹ Yến Trang 39
CBHD: TS.Trần Thanh Thủy Luận văn tốt nghiệ
Bóng, nhô ở Trơn, không 1,9-3 mm. giữa rang cưa.
Cách sắp Kích Dạng nảy | Ty lệ tế bào | Tỷ lệ tế bào xếp tế bào thước chồi nảy chối chết (%)
3.1.2 Quan sát khuẩn ty nấm men:
Cay nấm men trên môi trường pepton glucoza(MT9) nuôi ở 25-
Sau 3-5 ngày ủ ở nhiệt độ 30°C, quan sát vết cấy dưới kính hiển vi cho thấy khuẩn ty của chủng nấm men Saccharomyces sp2 có dạng khuẩn ty giả, với các tế bào đài xếp nối tiếp nhau, như được minh họa trong hình 3.2.
Hình 3.2: Khuẩn ty của chủng nấm men Saccharomyces sp2.
SVTH: Ngô Mỹ Yến Trang 40
CBHD: TS.Trần Thanh Thủ y Luận văn tốt nghiệp
3.1.3 Quan sát nang bao tử nấm men:
Cấy nấm men Saccharomyces sp2 trên thạch nghiêng với môi trường 10 ở nhiệt độ 28-30°C trong khoảng 10-15 ngày cho phép quan sát sự phát triển của nang bào tử Kết quả cho thấy trong mỗi nang bào tử có từ 1 đến 4 bào tử, điều này cho thấy khả năng sinh sản của nấm men.
Hình 3.3: Nang bào tử của chủng nấm men Saccharomyces sp2.
3.1.4 Khả năng sử dụng nitrat làm nguôn nite duy nhất:
Cấy chủng nấm men Saccharomyces sp2 trên môi trường 6, bao gồm môi trường thử khả năng sử dụng nguồn nitơ, và môi trường cơ sở có bổ sung 1g KNO3, được ký hiệu là MT- Việc nghiên cứu này nhằm đánh giá khả năng sử dụng nguồn nitơ của nấm men trong điều kiện khác nhau.
Môi trường cơ sở có bổ sung 1g pepton hay (NH,)zSO, : kí hiệu MT +
Sau 3 ngày nuôi ở nhiệt độ 28-30°C, chủng Saccharomyces sp2 phát triển trên môi trường có bổ sung pepton, cho thấy rằng chủng này không thể sử dụng nguồn dinh dưỡng nitơ dưới dạng nitrat để sinh trưởng, do thiếu khả năng tiết ra enzyme nitrat reductaza để phân giải nitrat Kết quả này phù hợp với các nghiên cứu trước đây.
Kết quả này được minh hoa trong hình 3.4.
SVTH: Ngô Mỹ Yến Trang 41
CBHD: TS.Tran Thanh Thủy Luận văn tốt nghiệp
+ : Có bổ sung pepton. ĐC: Ống đối chứng.
Hình 3.4: Khả năng giải nitrat của chủng nấm men
3.1.5 Khd năng phân giải uré:
Chủng nấm men Saccharomyces sp2 được nuôi trong môi trường 7, chuyên thử khả năng phân giải urê, trong thời gian từ 3 đến 5 ngày Sau khi quan sát, vết cấy không xuất hiện màu đỏ bồng, điều này cho thấy khả năng phân giải urê của chủng nấm này không hiệu quả.
Saccharomyces sp2 không có khả năng phân giải urê vì chúng không tiết ra enzim ureaza Kết quả này được minh họa trong hình 3.5.
Hình 3.5: khả năng phân giải urê của chủng nấm men
SVTH: Ngô Mỹ Yến Trang 42
CBHD: TS.Trần Thanh Thủy Luận văn tốt nghiệp
3.1.6 Khả năng lên men các loại đường:
Cho 9ml mỗi loại môi trường 8 với các loại đường: maltose, lactose, d- galactose, saccarose, glucose, fructose và dextin vào các bình
Einhorn- Smith Cho I ml giống (chủng nấm men Saccharomyces sp2) đã hoạt hóa vào các bình trên Sau 8 giờ lên men kết quả được ghi nhận ở bảng 3.2.
Bảng 3.2: Khả năng lên men các loại đường của chủng nấm men
Chủng nấm men Saccharomyces sp2 thể hiện khả năng lên men mạnh mẽ đối với các loại đường như glucose, maltose, saccarose và fructose, trong khi lên men ở mức trung bình đối với d-galactose và không lên men đối với lactose Những kết quả này cho thấy đặc điểm nổi bật của chủng nấm men này trong quá trình lên men.
SVTH: Ngô Mỹ Yến Trang 43
CBHD: TS.Trần Thanh Thủy Luận văn tốt nghiệp điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa của chủng nấm men Saccharomyces sp2
Khuẩn lạc dang bột nhão, hơi bóng.
Tròn, clip. Đa cực hay đơn cực.
Giả Có hoặc không có khuấn ty giả.
Trong nang bào tử có 1-4 | Trong nang bào tử có 1-4 bào tử, bào tử hình cầu bào tử, bào tử hình cẩu, hình cầu đài- clip,
Liên men được 6 trong 7 loại | Có khả năng lên men các đường khảo sát: glucose, loại đường khác nhau.
| maltose, fructose, saccarose, d- galactose, dexun; không
| lên men đường lactose(sau 8 gid lên men)
So sánh các đặc điểm chủng nấm men Saccharomyces sp2 với đặc điểm chung của chi Saccharomyces theo khoá phân loại của Lodder
(1971) chúng đều có các đặc điểm tương đồng Do vậy chúng tôi có thể kết luận chủng nấm men Saccharomyces sp2 thuộc chi Saccharomyces.
SVTH: Ngô Mỹ Yến Trang 44
CBHD: TS.Trần Thanh Thủy Luận văn tốt nghiệp
3.2 Chọn môi trường tối wu thu sinh khốt:
Cay chủng nấm men Saccharomyces sp2 vào các ống nghiệm chứa 4 môi trường: cao nấm men (MT3), SBH (MT4), YPD (MTS),
SVTH: Ngô Mỹ Yến Trang 45
CBHD: TS.Trần Thanh Thủy Luận văn tốt nghiệp ® Vhận xét:
Nhìn chung, 46 thị sinh trưởng của chủng nấm men Saccharomyces. sp2 trên các môi trường: cao nấm men, SBH, YPD, Hansen déu trải qua
Bài viết đề cập đến bốn pha phát triển của vi sinh vật trong hệ kín, bao gồm pha tiềm phát (pha lag), pha lũy thừa (pha log), pha cân bằng và pha suy vong Đồ thị sinh trưởng của vi sinh vật thể hiện sự khác biệt về thời gian và mật độ tế bào trong từng pha, tùy thuộc vào môi trường nuôi cấy Thời gian cho mỗi pha sinh trưởng có thể được xác định cho từng loại môi trường cụ thể, như được trình bày trong bảng 3.5.
Bảng 3.5: Thời gian các pha sinh trưởng của chủng nấm men
Saccharomyces sp2 trên các loại môi trường.
SVTH: Ngô Mỹ Yến Trang 46
CBHD: TS.Trần Thanh Thủy Luận văn tốt nghiệp
Mật độ tế bào (triệu tế bào/m]) „E5 8B§ BESS
Dé thị 3.1: Đồ thị tăng trưởng của chủng nấm men Saccharomyces sp2 trên môi trường cao nấm men.
Mặt độ tế bào (triệu tế bào/mÌ) 8 s 2 ® S 12 15 18 21 24 Đồ thị 3.2: Đồ thị tăng trưởng của chủng nấm men Saccharomyces sp2 trên môi trường YPD.
SVTH: Ngô Mỹ Yến Trang 47
CBHD:TS.TranThanh Thiy cQc Luận văn tốt nghiệp Luận văn tốt nghiệ
Thời gian (h) Đồ thị 3.3: Đồ thị tăng trưởng của chủng nấm men Saccharomyces sp2 trên môi trường SBH.
Mật độ tế bào (triệu tế bào/ml) 12 15 18 21 24 27 30 33 Đồ thị 3.4: Đồ thị tăng trường của chủng nấm men Saccharomyces sp2 trên môi trường Hansen.
SVTH: Ngô Mỹ Yến Trang 48
CBHD: TS Tran Thanh Thủy Luận văn tốt nghiệp
So sánh khả năng sinh trưởng của chủng nấm men Saccharomyces sp2 trên bốn loại môi trường, chúng tôi nhận thấy rằng chủng nấm này phát triển tốt nhất trong môi trường cao nấm men, tiếp theo là môi trường YPD, Hansen và SBH Sự khác biệt này có thể được giải thích dựa trên thành phần dinh dưỡng và điều kiện môi trường phù hợp cho sự phát triển của nấm men.
* Thời gian pha tiểm phát trên 4 môi trường đều như nhau nhưng trên môi trường cao nấm men mật độ tế bào tại thời điểm 3 giờ cao hơn
Thời gian pha log trong môi trường cao nấm men kéo dài từ 3 đến 18 giờ Mật độ tế bào cao nhất trong pha log đạt 685 x 10^6 Stb/ml, gấp 2,8 lần so với môi trường YPD, 10,6 lần so với môi trường SBH và 5,8 lần so với môi trường Hansen.
Mật độ tế bào thấp nhất được ghi nhận trong môi trường cao nấm men là 24 gid, đạt 265,4 x 10° tế bào/mL, vẫn cao hơn so với thời điểm có mật độ cao nhất trong môi trường YPD, là 23,63 x 10° tế bào/mL, với giá trị là 241,77.
10 tb/ml, của môi trường Hansen là 146,68 x 10 tb/mi và của môi trường SBH là 200,7 x I0 tb/ml.
Môi trường cao nấm men là điều kiện lý tưởng cho sự phát triển của chủng nấm men Saccharomyces sp2 nhờ vào hàm lượng dinh dưỡng phong phú, bao gồm protein, khoáng chất và vitamin, đặc biệt là vitamin nhóm B Những yếu tố này không chỉ kích thích sự sinh trưởng mà còn giúp nấm men thích nghi nhanh chóng với môi trường, từ đó tăng cường khả năng đồng hóa các chất dinh dưỡng Kết quả này được thể hiện rõ ràng trong đồ thị 3.5.
Kết quả khảo sát này cho thấy môi trường cao nấm men là môi trường tối ưu nhất cho sự sinh trưởng và phát triển của chủng nấm men
SVTH: Ngô Mỹ Yến Trang 49
CBHD: TS.Trần Thanh Thủy Luận văn tốt nghiệp