BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRUONG ĐẠI HỌC SU PHAM THÀNH PHO HO CHÍ MINHKHOA HOA HOC 3 [1Ì te KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP RẺ CÂY HÀ THỦ Ô TRÁNG Streptocaulon juventas TRAN THI TU QUYEN Thành phố Hồ
Trang 1BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRUONG ĐẠI HỌC SU PHAM THÀNH PHO HO CHÍ MINH
KHOA HOA HOC
3 [1Ì te
KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP
RẺ CÂY HÀ THỦ Ô TRÁNG
Streptocaulon juventas
TRAN THI TU QUYEN
Thành phố Hồ Chi Minh, tháng 5 năm 2018
Trang 2BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG DAI HỌC SƯ PHAM THÀNH PHO HO CHÍ MINH
KHOA HÓA HỌC
c% LL x
KHOA LUAN TOT NGHIEP
RE CAY HA THU O TRANG
Streptocaulon juventas
Giảng viên hướng dẫn: TS Bùi Xuân Hào
Sinh viên thực hiện: Trần Thị Tú Quyên
Mã số sinh viên: K40.201.069
Thành phố Hỗ Chí Minh, tháng 5 năm 2018
Trang 3NHAN XÉT CUA GIANG VIÊN PHAN BIEN
"
¬
¬" ố
1¬
Thanh pho Hỗ Chi Minh, ngày thang nam 2018
Giang viên phan biện
Trang 4Khóa luận tốt nghiệp Tran Thi Tú Quyên
hướng dẫn và tạo mọi điều kiện thuận lợi cho em được hoàn thành tốt khóa luận tốt
nghiệp này Bên cạnh những bài học thực nghiệm, Thầy còn truyền cho em tinh thần
nghiên cứu khoa học giúp em có được động lực trong việc nghiên cứu và hoc tập.
Em xin cảm ơn quý Thay Cô trong phòng thí nghiệm Hợp chất thiên nhiên nóiriêng cũng như quý Thay Cô khoa Hóa học - trường Đại học Sư phạm thành phố Hỗ
Chí Minh đã tận tâm trong công tác giảng dạy, truyền thụ cho em nhiều kiến thức khoa
học hữu ích trong suốt thời gian em học tập tại trường
Em cũng xin đành một lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình là điểm tựa vững chắc và
là nguồn động viên cho em trong suốt quá trình học tập của mình Thành công của em
ngày hôm nay không thé có được nếu không có sự yêu thương và chăm sóc của ba mẹ
và người than trong gia đình.
Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến bạn Nguyễn Hữu Toàn, Phạm
Bảo Quý, Đào Thị Bích Ngọc, Trân Thanh Nhã, chị Trần Thị Thu Sương, các anh chị
học viên cao học trong phòng thí nghiệm Hợp chất thiên nhiên và các bạn sinh viên K40
khác trong phòng thí nghiệm Hóa Hữu Cơ Trường đại học Sư phạm thành pho Hồ Chí
Minh đã luôn giúp đỡ, động viên và hỗ trợ vẻ kiến thức cũng như những kinh nghiệm
thực nghiệm cho em trong quá trình thực hiện khóa luận tốt nghiệp Xin gửi những lời
chúc tốt đẹp nhất đến các bạn, các anh chị và mong mọi người mãi thành công trên con
đường tương lai sau nảy.
Xin chân thành cảm ơn tât cả mọi người!
Trang 5Khóa luận tốt nghiệp Tran Thi Tú Quyên
MỤC LỤC
MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIET TAT
DANH MỤC CAC BANG
DANH MỤC CÁC SƠ ĐỎ
DANH MỤC CÁC HÌNH
DANH MỤC CÁC PHỤ LỤC
10) Oy Q 3ưaí55 1
CHƯƠNG 1: TONG QUAN 00o ccccccccssssssssesssseeseversseessseesseesssvesssvnsnveensesnsetensneeseessversaes 2
1.1 DAC DIEM THỰC VẬT S5 1 1E 2112211 2511511112111 11 1121002111211 xe, 2
1,1,1,IMI(Ä:GBUNE siiciisinisiiisiiisitiistiistiiatitsiii1i41111113411851614114851345116515853385433858863586388 2
102 Wing pha B6 icsssssesscaeaancisanancmnnanamunanannmmananenaunen 2 1.2 CAC NGHIÊN CUU VE DƯỢC TÍNH -2- 222 xzZCrxzcrrzrrzzre 2
1.2.1 Dược tính theo y học cổ truyền 2 222©22222E+22EEE2EEEzEEEzrrrsrrrsrrrcree 2
1.2.2 Nghiên cứu về được tính -2- +22 +2222222E2EEE2EEEEEEEEEECEEeZEEecrkrcrkrcvee 2
1.3 CÁC NGHIÊN CỨU VE THÀNH PHAN HÓA HỌC -5-55-5525se2 2
CHƯƠNG 2: THỰC NGHIỆM 2.22 2220220221221 1221022102105 xe 10
2.1 HOA CHAT, THIET BỊ, PHƯƠNG PHÁP 22 22 2222222E2225522 252 2 10
A fc ẽ ố ốc ốc 10
DAD) THẾ DỊ ca cac n0 nan 02a 10
2.1.3 Phương pháp tiễn hành 2: 2©s2EE+EEEZEExEExeYxee xzcxezverrxerrsrred 102.2 9)004008i20 4ä 10
2.2.1 Thu hái nguyên liệu - Hình ngưng 10
2.2.2 Xử lý mẫu nguyên liệu - 2-2222 22S2222 1221172122221 2112211117322 xe ll
23 DIEU CHE CAC LORI GAO’ siccisoscsicasseusssoivasssscossccareonsosoasssanssaseansoangscnmesresss ll
2.4 CO LAP CÁC HOP CHAT HỮU CƠ TRONG CAO CHLOROFORM 12
2.4.1 Sắc kí cột silica gel trên cao chloroform 2 52 ©+z£+z z2 2vz£ 122.4.2 Sắc kí cột silica gel trên phân đoạn C của bảng 2.L -. - 12
CHƯƠNG 3: KET QUA VÀ THẢO LUAN 00.0.0 c0ccccccccessseesssessssssssvessvessseessveesseesseees 15
3.1 KHAO SÁT CẤU TRÚC HỢP CHAT Q2.0 ec ccscccssecssesssecssesseesseesseeeseeseeeeeeeees 15
3.2 KHAO SÁT HOP CHAT QU once cccccssesseeseessessssssesssesserseeseesseesseeseesesesereesreeseeseees 19
CHUONG 4: KET LUẬN VA DE XUÁT 5 c5 "¬ 20
CN AES DE SOI 001700 0ð ẻðẻẽẻổỐ ốc 20
ADEE XUẤT tá ntinoint122012401610820001301221212359240243818820948928893881360952315831883888163433892882802208838 20
TÀI LIEU THAM KHẢO 2S S145 E124 125115211 171121711115 112011111511 22111 2111 ce2 21
Trang 6Khóa luận tốt nghiệp Tran Thi Tú Quyên
MỤC CAC KÝ HIEU VÀ CHỮ VIET TAT
Ký hiệu, "
4 P T Anh T Việt
chữ viết tắt
: Pho cộng hướng từ hạt
Proton (1) Nuclear Magnetic Resonance ae
nhan cua proton (1)
13 Carbon (13) Nuclear Magnetic Phô cộng hưởng từ hạt
C-NMR ar
Resonance nhân của carbon (13)
Heteronuclear Single Quantum Phô tương tác di hạt nhân
HSQC 3aiiEá= cack
Correlation qua một liên ket
HMBC Heteronuclear Multiple Bond Coherence EROTDE HỆ EBIQNDEURDDD
qua nhiều liên kết
Mũi đơn
Mũi đôi
Mũi ba đôi Mũi đa
Độ chuyên dịch hoá học
Hang sô ghép spin
Một phan mội triệu
Trang 7Khóa luận tốt nghiệp Tran Thị Tú Quyên
DANH MỤC CÁC BÁNG
Bảng 2.1 Sắc kí cột silica gel trên cao chlorOfOrim 5252222222222 2212221222112212222 2e
Bang 2.2 Sắc kí cột silica gel trên phân đoạn C - ¿52 22 221222121112112 11211221 e2
Bảng 2.3 Sắc kí cột silica gel trên phân đoạn C.3 5-cccccsccssirrsirrreee
Bang 3.1 Dữ liệu phô của hợp chất Q2 2-52 222 22EE1221122111 111211 112 11 1 2c
Trang 8Khóa luận tốt nghiệp Tran Thi Tú Quyên
DANH MỤC CÁC SƠ DO
Sơ đô 2.1 Quy trình điều chế cao chloroform tir rễ cây hà thủ 6
trắng Sơ đồ 2.2 Quy trình cô lập hợp chất 2-7s22222222 2232222222222 1E xe rkrcryecv 13
Trang 9Khóa luận tốt nghiệp Tran Thi Tú Quyên
DANH MỤC CÁC HÌNH
Hình/1,1.€ñy vì cũ hà thủ LG noonnonoanggnagienggnhangg tha HE0061011111611064136080301088818
Hình 3.1 Một số tương quan trong phô HMBC của hợp chất
Trang 10Q2 .2-Khóa luận tốt nghiệp Tran Thị Tú Quyên
10
Trang 11Khóa luận tốt nghiệp Tran Thị Tú Quyên
LOI MO DAU
Cây ha thủ 6 trắng có tên khoa học Streptocaulon juventas (Lour) Merr., thuộc họ
thiên lý Asclepiađaceae Cây hà thủ ô trắng có công dụng làm cho người già trẻ lại, giúp
cho sự giao hợp được bên lâu tóc bạc hóa đen đau lưng nhức mỏi Trong kháng chiến
tại các vùng đân tộc, người ta dùng củ và thân lá cây này chữa cảm sốt, cảm nắng, sốt
rét Ngoài ra, có nơi người ta sắc cây này với nước cho phụ nữ đẻ mà không có sữa uéng
dé ra sữa [1] Bên cạnh việc được sử dụng trong các bài thuốc y học cô truyền, các hợp
chất được cô lập từ cây hà thủ ô đã được chứng minh có tác dụng ức chế mạnh với một
số tế bảo ung thư như A549, HT-1080, Hela,
Việc nghiên cứu về thành phần hóa học cũng như hoạt tính sinh học của các chất
có trong cây hà thủ 6 trắng đóng một vai trò quan trong trong sự phát triển y học Kếtquả thu được từ các nghiên cứu mở ra hướng phát triển mới trong việc tông hợp các hợpchat có những hoạt tính quý, có tác dụng chữa bệnh Hơn nữa, nghiên cứu vẻ thành phần
hóa học từ các loại thảo mộc còn góp phan củng cô bằng chứng khoa học cho nên y học
cô truyền.
Nhằm đóng góp một phần hiểu biết thêm về thành phần hóa học của cây thuốc dângian này, chúng tôi thực hiện dé tải “Góp phan tìm biểu thành phan hóa học cao
chloroform rễ cây hà thủ 6 trang” Hi vọng với dé tai này có thé đóng góp một phần nhỏ
những chứng cứ khoa học có giá trị vào kho dược liệu của Y học dân tộc Việt Nam.
Trang 12Khóa luận tốt nghiệp Tran Thị Tú Quyên
CHƯƠNG 1
TỎNG QUAN
1.1 DAC DIEM THỰC VAT
Cây ha tha ô trắng còn có tên là hà thủ 6 nam, bạch ha thú 6, củ vú bd, day sữa bò,
dây mốc, cây sừng bò cây đa lông, khâu cần cà (Thổ), khâu nước (Lạng Sơn), mã liên
an, mã lin ón, khua mak tang ning (Lào), khua khao (Luang Prabang), chừa ma sin
(Thai) [1]
“Tên khoa học: Streptocaulon juvenias (Lour) Merr.
Thuộc họ Thiên lý (Asclepiadaceae).
1.1.1 Mô tả chung
Hà thủ ô trắng là một loại day leo đài từ 2 đến Sm Thân va cảnh màu hơi đỏ hay
nâu đỏ có rất nhiều lông, khi già thì nhãn dần Lá mọc đối, hình mác dai, đầu nhọn, day
tròn hoặc hơi hình nón cụt, có lông mịn và nhiều ở mặt dưới, mặt trên cũng có lông ngắn
hơn Phién lá dài 4-14 cm, rộng 2-9 em cuống lá dài 5-8 cm cũng có nhiều lông Hoa
màu nâu nhạt hoặc vàng tía mọc thành xim, rất nhiều lông Quả đại tách đôi ngang ra
trông như sừng bò Quả hình thoi, màu xám nhiều lông, đài 7-11 cm, rộng 8 mm Hạt det, phòng ở lưng, dai 5-7 mm, rộng 2 mm, có chùm lông mịn dai 2 em.
Toàn cây bam thân, lá, quả non chỗ nào cũng ra thứ nhựa trắng như sữa.
Ré củ dai mam và trăng, giữa có lõi trông như củ sẵn nhưng có vị dang.[1]
Trang 13Khóa luận tốt nghiệp Tran Thị Tú Quyên
1.1.2 Vùng phân bố
Cây hà thủ ô trắng mọc hoang ở khắp những đổi núi trọc ở nước ta Thường ưanhững nơi đất đôi cứng vùng Vĩnh Phúc, Hà Tây, Ha Giang, Tuyên Quang, Cao Bang,
Lạng Sơn.[ l ]
Ngoài ra, cây còn mọc ở Trung Quốc, Campuchia, Án Độ, Indonesia, Lào
Myanmar, Thái Lan.
1.2 CÁC NGHIÊN CỨU VE DƯỢC TÍNH
1.2.1 Dược tính theo y học cổ truyền
Cây hà thủ 6 trắng làm cho người già trẻ lại, giúp cho sự giao hợp được bên lâu,
tóc bạc hóa đen Người ta ding củ và thân lá cây chữa cảm sốt, cảm nắng, sốt rét.[ 1]
Dịch trích nước rễ cây hà thú ô trắng dùng giải độc, chữa cảm sốt trị vết sưng dau,vết thương do rắn can, làm thuốc bé cho các bệnh khác như thấp khớp, suy nhược than
kinh và chứng khó tiêu.
1.2.2 Nghiên cứu về được tính
Năm 2002, có nghiên cứu dùng cao chiết cồn đậm đặc của rễ cú hà thủ 6 trắng tăngcholesterol ngoại sinh trên chuột [2|
Sau đó, nghiên cứu trong dịch chiết rễ cây hà thủ 6 trắng có ức chế mạnh đôi với các dòng tế bào ung thư là ung thư cô tử cung Hela ở người tế bảo ung thư phôi người
A549, tế bào ung thư đại tràng chuột 26-L5, tế bào ung thư phôi chuột LLC, các dòng
tế bào ung thư ác tính chuột B16-BL6 [6] tế bao ung thư phỏi lớn tế bào NCI-H460,
nguyên bào phôi của thai nhí tế bào MRC-5 [11], cùng các tế bào khối u khác như: PC3,
SMMC7721, CNE [13].
Ngoài ra, trong dịch chiết của cây hà thủ 6 trắng có thé ức chế sự phát triển của tế bao ung thư bạch cầu HL-60 ở người đáng ké.[14]
1.3 CÁC NGHIÊN CUU VE THÀNH PHAN HÓA HỌC
Năm 2003, Jun-ya Ueda và cộng sự đã phát hiện ra hai mươi mốt hợp chất:
acovenosigenin A digitoxoside (1), digitoxigenin gentiobioside (2), digitoxigenin
3-Ó-[O-/-D-glucopyranosyl-(1 — 6)-Ó-/-D-glucopyranosyl-(l —
Trang 144)-3-O-acetyl-/?-b-Khĩa luận tốt nghiệp Tran Thị Tú Quyên
digiloxopyranoside] (3), digitoxigenin 3-Ø-[Ò-/-D-glucopyranosyl-(1 —
6)—O D-glucopyranosyl-(1 — 4)-@-/-D-digitalopyranosyl-(I — 4)-/Ø-D-cymaropyranoside] (4),
periplogenin 3-Ø-(4-0-/-D-eglucopyranosyl-Ø-D-digitalopyranoside) (§),
(4R)-4-hydroxy-3- (1-metyletyl)pentyl rutinoside (6), (R)-2-etyl-3-metylbutyl rutinoside (7),
acovenosigenin A (8), periplogenin 3-O-f-digitoxoside (9), periplocymarm (10),
periplogenin (11), digitoxigenin (12), digitoxigenin 3-O-[O-f-D-glucopyranosyl-(1 —>
6)-O-f-D-glucopyranosyl-(1 => 4)-/-D-digitoxopyranoside}] (13), digitoxigenin
sophoroside (14), echujin (15), periplogenin glucoside (16), corchorusoside C (17),
subalpinoside (18), acid caffeic (19), 4,5-di-O-caffeoylquinic acid (20), 2-phenylethyl
rutinoside (75) [6]
Nam 2005, Ma Chunhui va cộng sự cơ lập được các hợp chất sau: periplogenin
-3/-acetate (21), a-amyrol acetate (22), @-amyrol tridecanoate (23), ursolic acid (24),
9,19-cyclolart-25-en-3f,24R-diol (25) 9.19-cyclolart-25-en-3/24S-diol (26),
cycloeucalenol (27), 9,23E-en-3 Ø, 25-diol (28), 25-methoxy-9,
19-cycloart-23E-en-3 /-ol (29) 11ø,12ø-epoxytaraxer-L4-en-3/-acetate (30), oleanolic acid (76).
uzarigenin (77) [8]
Năm 2007, Myint Myint Khine va cộng sự đã phân lập được hai hợp chat
cardenolide mới là: 17-H-Periplogenin 3-Ø-Ø-p-digitoxoside (31),
A*-Pregnene-30 16ø-diol
3-O-[2,4-O0-diacetyl-/-bD-digitalopyranosyl(1—4)-/-D-cymaropyranoside]-16-Ø-[Ø-p-glucopyranoside] (32) [9]
Năm 2008, Zhinhui Liu cùng cộng sự cơ lập được chín hợp chat: / -sitosterol (33)
syringaldehyde (34), acid syringic (35), isofraxidin (36), scopoletin (37), scoparone
(38), acid ferulic (39), salicylaldehyde (40), daucosterol (74) [14]
Năm 2009, Bùi Xuân Hào cùng các cộng sự đã phân lập được một dan xuất mới
cĩ khung cardenolide: acovenosigenin A 3-O-glucoside (41) [3]
Năm 2011, Luay J Rashan và cộng sự đã cơ lập thêm sáu hợp chất cũng cĩ khung
cardenolide: L7
ø-H-periplogenin-/#-D-glucopyranosyl-(I1—+4)-2-Ø-acetyl-Ø-D-digitalopyranoside (42), oleandrin (43), oleandrigenin-3-O-f-b-sarmentoside (44),
neritaloside (45), odoroside H (46) odoroside A (47) [7]
Năm 2013, Rui Xue va cộng sự đã cơ lap được mười lim hợp chất cĩ khung
cardenolide: | a-14f-dihudroxy-5f-card-20 (22)-enolide
3-0-[@-Ø-D-đigitalopyranoside] (48) acovenosigenin A
3-Ø-[Ø-/-D-glucopyranosyl-(1—>4)-Ø-D-3
Trang 15Khĩa luận tốt nghiệp Tran Thị Tú Quyên
digitalopyranoside] (49), 16-O-acetyl-hdroxyperiplogenin 3-Ĩ-/Ø-D-digitoxopyranoside
(50), 16-O-acetyl-hydroxyacovenosigenin (51), 3-Ĩ-(/-glucopyranosy])
acovenosigenin A (52), evonogenin (53), glucoevonogenin (54), digitoxigenin
3-O-[O-
/-D-glucopyranosyl-(I—>6)-Ĩ-/-D-glucopyranosyl-(I—>4)-2-@-acety]-Ø-D-digitalopyranoside] (55), digitoxigenin (56), digitoxigenin 3-0-/-D-glucoside (57)
echunbioside (58), 16, 36, 14f-trihydroxy-5f-card-16,20 (22)-dienolide (59),
griffithigenin (60), A(16) -digitoxigenin —/-D-glucoside (61), emicymarin (78) [10]
Năm 2015, Chun Ye vả cộng sự phân lập được chin hợp chất cĩ khung cardenolide:
periplogenin
3-0-[0-f-D-glucopyranosyl-(1—6)-O-f-D-glucopyranosyl-(|—4)-2-0-acetyl-/-D-digitalopyranoside] (62), periplogenin 3-O-[
O-f-D-glucopyranosyl-(1—>4)-O-f}-D-glucopyranosyl-(1—4)-f-D-digitoxopyranoside] (63), acovenosigenin A
3-Ĩ-[O-/-D-glucopyranosyl]-(1—+6)-O-/-D-glucopyranosyl-(1—4)-/-D-cymaropyranoside] (64), acovenosigenin A 3-Ø-[Ò-/-D-glucopyranosyl-(1—>6)-Ĩ-#-D-glucopyranosyl-
Nam 2017, Yi-Chao Ge và cộng sự cơ lập được sáu hợp chat: 28, 29-nor-3/,
4/-đihydroxyl-9, cycloartan-26-acid (71), 28, 29-nor-3f, 4/-dihydroxyl-9,
19-cycloartan-26-acid methylester (72), 30-nor-3-/-acetoxy-lupan-20-one (73), @-amyrin
(79), betulinic acid (80), lupeol palmitate (81) [13]
Trang 16Khóa luận tốt nghiệp Tran Thị Tú Quyên
Các công thức cấu tạo của một số hợp chất
trong cây Streptocaulon juventas (Lour) Merr.
Trang 18Khóa luận tốt nghiệp Tran Thị Tú Quyên
; (54) R, = Ø-OH, R; = Gle, R, = OH, Ry =H
Trang 19Khóa luận tốt nghiệp Tran Thị Tú Quyên
(62) Ry = H, R; = (2-O-Ac-Dtl)"-Gle®-Gle, Ry = OH, Ry = H (63) Ry = H, Ry = Dig*-Gle*-Gle, Ry = OH, Ry =H
(64) R, = OH, R, = Cym*-Gle®-Gle, R, = H, Ry =H
(65) R; = OH, R; = (2-O-Ac-Dtl)*-Gle®-Gle, Rạ = H, Ry = H (66) R, = OH, R; = (2-O-Ac-Dtl)*-Gle®-Gle, Ry = H, Ry = OAc (67) Ry = OH, R, = Cym*-Dul"-Gie®-Gle, Ry = H, Ry = H
(68) R; = H, Ry = Gle*-Gle, Ry = H, Ry = H (69) Ry = H, R, = (3-O-Ac-Dig)"-Gle, Rạ = H, Ry =H
(70) Ry = H, R; = H, R; * OH, Ry = OH
COOR
HO (71)R=H
OH (72) R= CH,
Trang 20Khóa luận tốt nghiệp Tran Thị Tú Quyên
9
Trang 21Khóa luận tốt nghiệp Tran Thị Tú Quyên
CHƯƠNG 2 THỰC NGHIỆM
2.1 HOA CHAT, THIẾT BỊ, PHƯƠNG PHÁP
2.1.1 Hoá chất
Silica gel 37 — 63 um, Himedia dùng cho sắc kí cột
Sắc kí lớp mỏng loại DC - Alufolein 20x20, Kiesel gel 60 F, , Merck
Dung môi dùng cho quá trình thi nghiệm gồm: hexane, chloroform , ethyl acetate.acetone, methanol, acetic acid và nước cất
Thuốc thử hiện hình các vết chất hữu cơ trên lớp mỏng: sử dụng H;SO¿ 20%
Dược hiện hình bang dén tử ngoại ở hai bước sóng 254 nm va 365 nm hoặc dùng
thuốc thử là dung dịch H2SOz 20%
Phương pháp xác định cấu trúc hoá học các hợp chất
Phô cộng hưởng từ hạt nhân 'H-NMR (500 MHz) '3C-NMR (125 MHz), 2D-NMR
trên may Bruker Avance được ghi tại phòng NMR, Viện Hóa học, Viện Hàn lam Khoa
học và Công nghệ Việt Nam, số 18, Hoàng Quốc Việt, Quận Câu Giấy Hà Nội.
2.2 NGUYEN LIEU
2.2.1 Thu hái nguyên liệu
Mau cây dùng trong nguyên cứu dé tài là rễ cây hà thủ 6 trắng (Streptocaulon
10
Trang 22Khóa luận tốt nghiệp Tran Thị Tú Quyên
juventas (Lour) Merr.) được thu hái ở Tịnh Biên tinh An Giang vào tháng 10 năm 2016.
Mẫu cây đã được Th.S Hoàng Việt, trường Đại học Khoa học Tự nhiên thành phố
Hồ Chí Minh nhận danh tên khoa học là “Streptocaulon juventas”, họ Thiên lý
(Asclepiadaceae).
2.2.2 Xứ lý mẫu nguyên liệu
Mẫu nguyên liệu được rửa sạch, loại bỏ sâu bệnh, phơi khô trong bóng ram, rồi
xay thành bột mịn.
2.3 DIEU CHE CÁC LOẠI CAO
Bột rễ cây ha thủ 6 được đun hoàn lưu với dung môi methanol ở nhiệt độ 64-65°C,
mỗi mẽ đun 3 lần mỗi lần đun trong 3 giờ Sau đó đem lọc, thu được dịch, rồi đem cô quay với áp suất thấp thu được cao methanol thô.
Cao methanol thô được chiết long — lỏng với dung môi chloroform, cô quay dich chiết thu được cao chloroform Quá trình thực hiện được tom tắt theo sơ đồ 2.1.
- Chiết lỏng — lỏng với dung môi chloroform.
Methanol thu hồi
- Cô quay thu hồi dung môi
Cao chloroform š
Sơ đồ 2.1 Quy trình điều chế cao chloroform từ rễ cây hà thủ ô trắng
1]
Trang 23Khóa luận tốt nghiệp Tran Thị Tú Quyên 2.4 CÔ LẬP CÁC HỢP CHÁT HỮU CƠ TRONG CAO CHLOROFORM
2.4.1 Sắc kí cột silica gel trên cao chloroform
Cao chloroform (400g) được sắc kí cột (SKC) silica gel, giải lý với hệ dung môi H:EA có độ phân cực tang dan từ 0% đến 100% EA, sau đó giải ly lần lượt với các hệ
dung môi EA:Me 9:1, EA:Me:H:O 8:1:1, EA:Me:H2O 4:1:1, EA:Me:H:O 2:1:1 và
100%Me Dịch giải ly qua cột được hứng vào các lọ theo đối quá trình giải ly bằng sắc
ký lớp mỏng (SKLM) Những lọ cho kết quả SKLM giống nhau được gộp chung thànhmột phân đoạn Kết quả thu được 12 phân đoạn (A-L)
Bảng 2.1 Sắc kí cột silica gel trên cao chloroform
Khối lw Sắc kil
STT | Phân đoạn | Dung môi giải ly = ớp Ghi chú
(g) mỏng
+
3.6 Nhiều vết | Chưa khảo sát
H: EA 99:1 5.0 Nhiéu vết | Chưa khảo sát
H:EA 95:5 5.6 | Nhiềuvết | Khảo sát
+
H:EA 9:1 6.0 Nhiều vết | Đã khảo sat
H:EA 85:15 | 8.4 Nhiều vết | Chưa khảo sát
H:EA §:2 | 13 Nhiéu vết | Chua khảo sát
H:EA 1:1 | 19.6 Nhiêu vêt | Chưa khảo sát
Nhiêu vết
EA:Mc:H:O 8:1:1 | 41.2 Nhiêu vết
EA:Me:H:O 4:1:1 | 53 Nhiéu vết EA:Me:H20 2:1:1 | 71.6 Chưa khảo sát
Ghi chú: H: hexan, EA: ethyl acetat, Me: methanol, H:O: nước.
2.4.2 Sắc kí cột silica gel trên phân đoạn C của bang 2.1
Phân đoạn € cho SKLM nhiều vết, tách rõ nên phân đoạn € được thực hiện SKC
silica gel, giải ly với hệ dung môi H:C:EA có độ kém phân cực giám dan từ 100% đến
0% H và tỉ lệ C:EA là 1:1 được giữ nguyên Tiến hành các bước tương tự như khi sắc
kí cột phân đoạn trước Kết qua thu được
12
Trang 24Khóa luận tốt nghiệp Tran Thị Tú Quyên
c2
c3 | C3 7 HCEASII- Nhiéu vết Khảo sát
| 4 | C4 | HCEA622 | 6009 | Nhiều vét Chưa khảo sát
Nhiều vết | Chưa khảo sát Ghi chú: H: hexan, C: Chloroform, EA: ethyl acetat.
2.4.3 Sắc kí cột silica gel trên phân đoạn C.3 của bảng 2.2
Phân đoạn C.3 cho SKLM hai vết tách rõ nên phân đoạn C.3 được SKC silica gel với hệ dung môi H:C:EA 40:1:1, sau đó giải ly tiếp tục với hệ 30:1:1 Tiến hành các
bước tương tự như khi sắc kí cột phân đoạn trước Kết quả thu được 5 phân đoạn
(C.3.1-C.3.5), được trình bày trong bang 2.3.
Bảng 2.3 Sắc kí cột silica gel trên phân đoạn C.3
| Khối lượng | Sắc kí lớp
STT | Phân đoạn Dung môi giải ly (mg) vững Ghi chú
LTỊ SH [ween | 24 [Tin | Cami a
2 C.3.2 H:C:EA 40:1:1 204.7 2 vét táchrõ | Chưa khảo sat
3 C33 | H:C:EA 30:1:1 394.6 Lvéttachré Khảo sát
4 C34 | HCEA 30-11 800.9 | 2véttachrd | Khao sat
5 C35 | H:C:EA 30:1:1 427.6 |lvếttáhrõ Khao sat
- +
Phân đoạn C.3.3 có SKLM cho vết rõ có màu cam, thu được hợp chất có dạng hình
vay, màu trắng Phân đoạn C.3.5 có SKLM cho vết rõ màu nâu, thu được hợp chất có
dạng hình kim màu trắng Phân đoạn C.3.4, qua một lần SKC tách ra hai vết trùng với
phân đoạn C.3.3 và C.3.5 Quá trình thực hiện được tóm tắt theo sơ đồ 2.2.
Trang 25Khóa luận tốt nghiệp Tran Thị Tú Quyên
Cao chloroform
400 g
- Sắc kí cột silica gel
- Giải ly H:EA, EA:Me:H2O
- Cô quay thu hôi dung môi
A]}B]} Cj] DI] El) Fj] Gj] H I J Kj] L 3.6 || 5.0 |} 5.6 || 6.0 || 8.4 |} 13.0) |19.6} 26.8 131.0) 41.2) |53.0|J71.6
§ g š § g b g £ || £ £ b ẽ
- Sắc kí cột silica gel
- Giải ly H:C:EA
C1 C.2 C3 C4 C.5 20.4 ||1840.4||1836.2|| 600.9 || 140.6
Trang 26Khóa luận tốt nghiệp Tran Thị Tú Quyên
CHƯƠNG 3
KÉT QUÁ VÀ THẢO LUẬN
3.1 KHAO SÁT CÁU TRÚC HỢP CHAT Q2
Hợp chất Q2 (427.6 mg) thu được từ phân đoạn C.3.5 có những đặc điểm như sau:
- Dạng tinh thé hình kim màu trắng, hòa tan được trong dung môi chloroform.
- Sắc kí lớp mỏng cho một vết duy nhất khi hiện hình bằng H;SO‹ 20%, ho nóng bang mỏng cho vết có màu nâu (dung môi giải ly hexan:chloroform:ethyl acetat 8:1:1,
“ BIEN LUẬN CÁU TRÚC
Phô 'H-NMR của hợp chất Q2 cho thay sự hiện diện của các proton tám nhóm
methyl tại ồu 0.88 (3H, s, H-23); dy 0.89 (3H, s, H-24); 54 1.19 (3H, s, H-25), du 1.17
(3H, s, H-26); dy 1.29 (3H, s, H-27); ồu 0.82 (3H, s, H-28); 54 0.812 (3H d, J 2, H-29);
dx 0.95 (3H, s, H-30), một nhóm acetoxy dy 2.05 (3H, s, H-32) và một proton của olefin
cho tín hiệu ồn 5.54 (1H, s, H-12).
Phô 3C-NMR của hợp chat Q2 cho thay sự hiện điện của ba mươi hai carbon trong
khoảng dc 17-200 ppm trong đó có carbon nhóm ceton dc 199.7; carbon của nhóm ester
dc 171.0; hai carbon của liên kết đôi ồc 130.4, 165.0.
Phỏ HSQC cho ta thấy tương quan của các proton và carbon ta thấy được có chín
nhóm methyl, tám nhóm methylene, sáu nhóm metin được thê hiện rõ ở Bảng 3.1