Luận văn thạc sĩ Thú y: Chẩn đoán bệnh do Feline calicivirus và hiệu quả điều trị ở mèo

Bệnh nhiễm trùng đường hô hấp ở mẻo rất phô biến, trong đó thường gặpnhất là do 2 loại virus Feline Calicivirus FCV và Feline Herpes virus FHV.Hai bệnh nay chủ yếu gây bệnh ở đường hô ha

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠOTRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HÒ CHÍ MINH

3k 3k 3k 3k 3k 3k 3k 3k 3k 3k 3k >k sk 24s 2s sắc sắc 3€ € 3€

LÊ NGUYÊN ANH THƯ

CHAN DOAN BỆNH DO FELINE C4LICIVIRUS

VA HIEU QUA DIEU TRI O MEO

LUẬN VAN THẠC SĨ KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP

Thành phố Hồ Chí Minh, Tháng 12/2023

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠOTRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HÒ CHÍ MINH

3k 3k 3k 3k 3k 3k 3k 3k 3k 3k 3k >k sk 24s 2s sắc sắc 3€ € 3€

LÊ NGUYÊN ANH THƯ

CHAN DOAN BỆNH DO FELINE C4LICIVIRUS

VÀ HIỆU QUÁ ĐIÊU TRỊ Ở MÈO

CHAN DOAN BỆNH DO FELINE CALICIVIRUS

VA HIEU QUA DIEU TRI O MEO

LE NGUYEN ANH THU

Hội đồng cham luận van:

1 Chủ tịch: PGS TS LÊ QUANG THÔNG

Trường Đại học Nông Lâm TP HCM

2 Thư ký: TS NGUYÊN NGỌC THANH XUAN

Trường Đại học Nông Lâm TP HCM

3 Phản biện 1: TS ĐINH XUAN PHÁT

Trường Đại học Nông Lâm TP HCM

4 Phản biện 2: TS PHAM TAT THANG

Viện KHKT NN Miền Nam

5 Ủy viên: PGS TS ĐỖ VÕ ANH KHOA

Phân hiệu Trường Đại học Lâm nghiệp tại tỉnh Đồng Nai

LÝ LỊCH CÁ NHÂN

Họ và tên: Lê Nguyên Anh Thu, sinh ngày 20 tháng 4 năm 1984 tại xã

Lương Hoà Lạc, huyện Chợ Gạo, tỉnh Tiền Giang

Tốt nghiệp THPT tại Trường cấp THPT Tân Hiệp tại Thị tran Tân Hiệp,huyện Châu Thành, tỉnh Tiền Giang năm 2002

Tốt nghiệp Kỹ Sư Chăn Nuôi tại trường Đại học Nông lâm Bắc Giang năm2017.

Tháng 10 năm 2020 theo học cao học ngành Thú y tại trường Đại học NôngLâm Thành phô Hồ Chí Minh

Nơi làm việc: Uỷ ban nhân dân xã Song Bình, huyện Chợ Gạo, tỉnh TiềnGiang.

Địa chỉ liên lạc: ấp Bình An, xã Song Bình, huyện Chợ Gạo, tỉnh Tiền GiangĐiện thoại: 0974319311.

Email: lethu.cgtg@gmail.com

ul

LỜI CAM ĐOAN

Tôi cam đoan đây là công trình nghiên cứu của tôi.

Các số liệu, kết quả nêu trong luận văn là trung thực và chưa từng được aicông bồ trong bất kỳ công trình nào khác

Lê Nguyên Anh Thư

1H

LỜI CẢM TẠ

Xin chân thành cam on Ban Giám hiệu trường Dai học Nông Lâm Thanh

phố Hồ Chí Minh, Ban chủ nhiệm Khoa Chăn nuôi Thú y và Phòng Đào tạo sauđại học đã tạo mọi điều kiện cho tôi hoàn thành khóa học này

Xin chân thành cảm ơn quí thầy cô Khoa chăn nuôi Thú y đã tận tìnhhướng dẫn và giảng dạy cho tôi nhiều kiến thức quý báu và bồ ích trong suốt thờigian tôi học tập tại trường.

Xin gửi lời biết ơn sâu sắc đến PGS TS Võ Tan Đại đã tận tình hướng dẫntôi trong suốt thời gian thực hiện nghiên cứu và hoàn thành luận văn

Chân thành cám ơn ông Nguyễn Văn Dương chủ Phòng khám Thú y

Duong Vet, các Phòng khám tại Thành phố Hồ Chi Minh và các anh/ chị của cácPhòng khám Misa Dog đã hỗ trợ và tạo điều kiện giúp đỡ tôi trong thời gian thựchiện đề tài

Cám ơn lãnh đạo, anh/chị đồng nghiệp tại uỷ ban nhân dân xã Song Bình

đã tạo điều kiện cho tôi trong thời gian thực hiện đề tài

Chân thành cám ơn gia đình và các bạn Cao học Thú y 2020 đã giúp đỡ,

động viên tôi hoàn thành luận văn cao học này.

Xin chân thành cảm ơn!

IV

TÓM TẮT

Đề tài ”Chân đoán bệnh do Feline Calicivirus (FCV) và hiệu quả điều trị ởmèo” được tiến hành tại Phòng khám Thú y Dương Vet” trên địa bàn xã Tân MỹChánh, Thành phố Mỹ Tho, tỉnh Tiền Giang trong thời gian từ tháng 4/2023 đếntháng 10/2023.

Thực hiện xét nghiệm nhanh trên 121 con mèo có các dấu hiệu nghi ngờbệnh ECV Kết quả phát hiện 44 mẫu dịch mắt, mũi và miệng dương tính với FCVchiếm ty lệ 36,36% Tuy nhiên, bằng kỹ thuật RT PCR chúng tôi chỉ ghi nhận 40/44

ca dương tính với FCV chiếm tỷ lệ 90,9% Kết quả phân tích thống kê cho thấy

không có sự khác biệt có ý nghĩa giữa 2 phương pháp xét nghiệm nhanh và RT

không sử dụng thuốc kháng virus (§5%) Tuy nhiên, sự khác biệt giữa 2 nhóm

không có ý nghĩa thống kê với P>0,05 Do đó, cần nghiên cứu sâu hơn việc sửdụng thuốc kháng virus famcilovir dé điều trị FCV trên mẻo

The resesch titled “Diagnosis of Feline Calicivirus (FCV) infection and

treatment effectiveness in cats” was conducted at Duong Vet Veterinary Clinic” in Tan My Chanh commune, My Tho City, Tien Giang province during the period from April 2023 to October 2023.

FCV rapid test were performed on 121 cats with suspected signs of FCV infection The results, that 44 cats were positive for FCV, accounting for 36,36 However, using RT PCR technique, we only recorded 40/44 positive cases for FCV, accounting for 90,9% Statistical analysis results show that there is no significant difference between the two rapid testing methods and RT PCR.

Common clinical signs in cats infected with FCV are ulcers of the nose, eyes and mouth (63,63%); runny nose and mouth ulcers (25%) Cats between the ages of

6 months and younger than 2 years old, free-range farming methods and purebred

foreign cats are at high risk of infection.

VI

TT LICH ĐÁ NHƯ ngeendeengrindortiiiriethtngtonngititttrtiGVSENGGNNGAGi0011020 n6300đ880100G0.0g06 iiLOL CAM DOAN 077 iii

EOL CAM TA cscmanusnnencensemncusnmmneeneneneneen iv

TỔ TA kauan ngu diitioGiaidnidibiapdilitbindoitBiorf08i60008580id03010LảA30fãgi08ãn0uu008g0 nai Vv

SE Eo EE viiDANH SÁCH CÁC CHU VIET TẮTT - 2 << s<s£s££se£seesezsezsezsecse xDANH SÁCH CÁC BANG ccscsssssssssssssssssscsscssssssssssssssssscsscsssscsscscssssesaseasensessesee xi

THANHSAG-HECGTHNHEeeeeeeaeeeeeaareoeneooarrdortoroogGcaotosttrgteste xii

08700075 1

Se TÔ ING LH ee 5

1.1 Bệnh do Feline Calicivirtis (FCCV) 2 2222112112121 1211511211151 1e rxee 2

1.1.1 Lich str phat hién bénh oo 2

1.2 Đặc tinh jsinhhoetelia BON tscaontoaioooiottiioiGfsgDGISEISIGIGEESQGAIESCEUGSRGVSSAMG8S6A0088853K 3

VV.2.1 0 na .ốố 3Pees ccm ii ek 3

Val B POG JIS (EU/EHHỂNi sosiunnitbdidiiltsiaagoiEittoii3GIGGIERRGRSRERRGIEERRISEEGSRIDNGENGIdRSGSiA8003ã38000038000gga0038 5

eee ÙNGG eccscsoigoebkdididgakuigidtoSgbtriohdxgiirdggrotduohirdo diiiaingtrZodbdfhoi300100ng6620 5

OO HHẾ ca tron rEnioiiiliriikiolibbesniobiaisioniibieostiteiftsaiisryisei 6 1.1.6 1 0 7

Lede, WSUS UTS enzasssestsbeotibtsoig00:368u9280056E0388046a8001G03ngin009309888510053808/0403830403g98g0a1603i03308005805 7

Lh ie eer eeeretreeree nereneerereemeniermeneraees 11

vil

1.2.1 Chân đoán lâm sàng - ¿2-52 ©2222S222222122212212211221221211211211211 112 11

14 Glen wien phí ÍfmL!lEÄTfteoassoeseesdsnbubieiib200006000gã8000300615600816380fG00583400083886 13

12 lad, XEEMIBIHTGHHÌHRHTDbissconnndeinhototioiitgöintStnllBuGNRBHIS4G8809001818803GIRGINNSBSRSRRBGI000883838301030 13 18/1, od Ce A ececeeeseeeesooecdrreosniEoyeoidtidotdsS6of0g02g40uPigi7060g0000.10070200-4G007 13 L213 Phần lẬB Sat 0S secscerccecnccaesseun nena wea see ck wasusancanessaremnepaueesmisauorearneeraremmarneeneneres 15

re 161.4 Phòng bệnh và kiém sOát - 2 2 2+SSE2EE2E2E9212E1212212212121221211212112122 2X 191.5 Tình hình nhiễm FCV trên thế giới - 2-22 2 2222+22E2E+2EEzEE2E+z£Ezzzzzrxz 20

1.6 Tình hình nhiễm FCV tại Việt NÑam - 2-2: 222222 2E2EE222E2222123222122221 22222 21

Chương 2 NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 222.1 Đối tượng, địa điểm và thời gian nghiên cứu 2-2 s2s+2s2+E+zz+zxzxzzez 22

"ANH nh 22

90828 ›ca ng 8N na 22

2.1.3 Địa điểm nghiên cứu 2 ¿©2+S22222E£212E2212212112122121121221211211121121 2120 232.1z4; Thồi:eTan nghiÊH CÍUs»sxsszsscss:Btt-gio1ig0ta ti4G003530L3801240108888:010800050038053.420EGR2EUBISRSSiA 23 22x MiaL,HỆUHHISH/E sosenesneeobingistietiddSSSBESSGSEESISRRSSS0EDSH1XGSEBWESAIESSSG0Đ4g88Si2138SinGtsagi.d 23 2.3 Nội dung nghiên cứu va cách thực hiện 5< 5-2 S+*S2++Eserererrrrrrrrs 232.3.1 Nội dung 1: Khảo sát tỷ lệ mèo nhiễm FCV bằng xét nghiệm nhanh và

kỹ thuật Reverse Transcriptase (RT) PCR -cc 5x s+ccsxceserexerss 23 2.3.1.1 Xét nghiệm nhanh phát hiện kháng nguyên FCV trên mẻo 242.3.1.2 Xác định mèo nhiễm FCV bằng kỹ thuật RT PCR 252.3.2 Nội dung 2: Đánh giá hiệu quả điều tị s- s5 s22 2212121121211 2x xxe 282.4 Công thức tính và xử lý số liệu 2-22 ©22+2122E222E22122112212211221212 22 cze 29Chương 3 KẾT QUÁ VÀ THẢO LUẬN suaiiaaaeneaiietiaiiodoioiostagidaoisissgsze 30

vill

3.1 Tỷ lệ nhiễm FCV trên mèo bằng xét nghiệm nhanh và bằng kỹ thuật RT

(a 303.1.1 Phát hiện FCV trên mèo bằng xét nghiệm nhanh 2 22552522552 303.1.2 Kết quả dương tính với FCV bằng kỹ thuật RT PCR -2- 225222552 313.1.3 Dau hiệu lâm sàng trên mèo nhiễm FC V 2: 22©52222222+2Exz22z2zzzze2 333.1.4 Đánh giá các yếu tố gây bệnh 2-22 2+2122E2EE22E22212712211221 21222 353.2 Đánh giá hiệu quả điều trị 2-2 525S2E22ESE22E22E2121221212212212121222 xe 373.2.1 Điều sg 225221 22212212112121121121112112111211211121121112012101211211121 2 re 373.2.2 Đánh giá hiệu quả điều trị 2 22222+2E2E22EE22E222122122212232221221 21222 39

KT TIỀN VÀ BE NGHĨaedeueirtrndeteintgdneiiiligttioig)00300100G81601880001008108001616080 411E We fo ƒŸẰẽằễẰằ=ằẽ-ằẽằeằeeẽnằmằăằ.Ặ.e.e 42

ee 52

1X

DANH SÁCH CAC CHỮ VIET TAT

VIET TAT TIENG ANH THUAT NGU TIENG VIET

FCV Feline Calicivirus Virus Calici 6 méo

FPV Feline Panleukopenia Virus Virus gây bệnh giảm bạch cầu ở mèoFHV Feline Herpesvirus Virus Herpes ở mèo

RT PCR Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction

Thuốc sử dụng điều trị mèo ở nhóm 2 2-2¿ 2252222222222: 29

Tần suất dau hiệu lâm sàng trên mèo đương tính FCV - 33Các yêu tố nguy cơ gây bệnh FOV 2: 2¿©2222z22222+2222zzezxee 35Thuốc sử dụng điều trị mèo ở phác đồ I -¿-55c+cccxsecxcee 37Thuốc sử dụng điều trị mèo ở phác đồ II 2-22522225z25z2c5+2 38

Ti lệ chữa khỏi bệnh FCV của 2 phác đồ điều trị - 38

Tỉ lệ tái nhiễm bệnh FCV của 2 phác đồ điều trị -5 39

XI

DANH SÁCH CÁC HÌNH

HÌNH TRANGHình 1.1 Caliciviruses có capsid icosahedral T=3 được hình thành từ protein

capsid chính VPI, hiện diện trong ba môi trường liên kết gần tương

đương: A (xanh lam), B (tim) và C (đỏ tuoi) (David Bhella và ctv,201 1) .4

Hình 1.2 Phù đầu và tứ chi ở mèo bị nhiễm VS-FC (Regina

Hofmann-Lehmann và ctv, 20222) ¿+ - 2222211332311 322111328111 9811125111 21111 81x ng re 8 Hình 1.3 Mèo bị lở loét vùng da mat (Regina Hofmann-Lehmann va ctv,

Hình 1.4 Miệng mèo bị lỡ loét bên trong niêm mạc miệng (Regina

Hofmann-chan VI Cty, 202 2) rc cocnecesecetenstowactec umes aawoheesemudectaumerndeneccuctemnsectmameeneeeates! 9Hình 1.5 Mèo chảy mũi, viêm miệng chảy nước day và vết trầy xước ở ban

chân (Regina Hofmann-Lehmann và ctv, 2022) -+++-+++s+ssssx2 10Hình 1.6 Các tốn thương đóng vay và loét ở mèo nhiễm FCV: mặt, da niêm

mạc (môi dưới và mép) và tai (Regina Hofmann-Lehmamn và ctv,

(2/2 cst itt I SE NC a So lãiHình 1.7 Quy trình RT PCR (Công ty CPTM thiết bị KHKT Việt Nam) 15

Hình 1.8 Quá trình nhân lên của V1rus 2222222232212 *+2E£+EE£zEEzreezerrersee 18

Hình 2.1 Đọc kết quả xét nghiệm nhanh 22- 2 5222S222E22E£2EE22E22EE222222zzze2 25Hình 3.1 Kết qua RT PCR dương tính với FCV 222225222222+22z+22zzszz2 32Hình 3.2 Hình mèo bị viêm mũi viêm mắt và viêm lưỡi loét HHHỆ He sezsesiasese 34

Xi

MỞ ĐẦU

Đặt van đề

Ngày nay, số lượng người Việt Nam yêu thích nuôi dưỡng và chăm sócmèo làm thú cưng tăng đáng kể, làm tăng số lượng và chủng loại mèo nội vàngoại nhập Tuy nhiên, đi kèm đó là các bệnh trên mèo cũng ngày càng đa dạng,trong đó có các bệnh truyền nhiễm

Bệnh nhiễm trùng đường hô hấp ở mẻo rất phô biến, trong đó thường gặpnhất là do 2 loại virus Feline Calicivirus (FCV) và Feline Herpes virus (FHV).Hai bệnh nay chủ yếu gây bệnh ở đường hô hap trên với các triệu chứng lâm sanggần giống nhau (Spiri, 2022) Bên cạnh đó, còn có những nguyên nhân khác gây

ra các bệnh có triệu chứng trên đường hô hấp Việc chân đoán phân biệt các mambệnh sẽ giúp cho việc điều trị và phòng ngừa đạt hiệu quả cao hon

Xuất phát từ nhu cầu thực tế trên, chúng tôi thực hiện đề tài nghiên cứu

"Chan đoán bệnh do Feline Calicivirus và hiệu qua điều trị ở mèo” tại Phòngkhám Thú y Duong Vet”.

Mục tiêu của nghiền cứu

Xác định tỷ lệ mèo nhiễm FCV và ghi nhận hiệu quả điều trị

Yêu cầu của nghiên cứu

Khảo sát tỷ lệ mèo nhiễm FCV bằng xét nghiệm nhanh và kỹ thuật RTPCR.

Ghi nhận tỷ lệ bệnh FCV theo lứa tuổi, giống, hình thức nuôi, tinh trạngvaccin.

Chương 1

TỎNG QUAN

1.1 Bệnh do Feline Calicivirus (FCV)

FCV là một loại virus thuộc ho Caliciviridae gây bệnh ở mẻo và là một

trong những bệnh truyền nhiễm phổ biến nhất trên mèo Đây là loại virus trần cókhả năng tồn tại lâu ở môi trường bên ngoài và khó tiêu diệt Bệnh FCV sé dé bịnhằm lẫn với bệnh FHV Mèo bị nhiễm FCV thường bi số mũi, lở miệng làm mèo

ăn uống khó khăn Mèo bị nhiễm FCV gây tổn thương vùng miệng và có thé làmmèo bỏ ăn (Burmeister và ctv, 2015).

1.1.1 Lịch sử phát hiện bệnh

Năm 1957, FCV lần đầu tiên được phân lập từ đường tiêu hóa của mèo ở

New Zealand Feline Calicivirrus là một trong những mầm bệnh virus phổ biến

nhất ở mèo nhà trên toàn thế giới và công nhận FCV là nguyên nhân gây bệnhđường hô hap 6 méo Bản chất gây đột biến cao của FCV và tính linh hoạt di

truyền cao của nó tồn tại trong quan thể mèo và đặt ra một thách thức đặc biệt liên

quan đến chan đoán, điều trị và phòng ngừa bệnh do FCV gây ra Bệnh đường hôhấp trên đã được coi là một dau hiệu lâm sang phô biến của nhiễm trùng FCV

Một nghiên cứu từ Thụy Sĩ đã chứng minh rằng loét miệng, tiết nước bọt

và viêm nướu-viêm miệng thường liên quan đến nhiễm FCV hơn là bệnh đường

hô hấp trên và chưa đến một nửa số mèo nghi ngờ nhiễm FCV được phát hiệndương tính với FCV Một nghiên cứu điều tra các chủng FCV phân lập từ Thụy Sĩ

đã tìm thấy một số bằng chứng cho thấy nền tảng di truyền của méo có thé anhhưởng đến khả năng nhiễm FCV của chúng Bài đánh giá này cung cấp một bảntóm tắt toàn diện về tài liệu FCV và tích hợp các kết quả nghiên cứu gần đây vềđặc điểm di truyền của FCV, miễn dịch tế bào và dich thé do tiêm vaccine vànhiễm FCV, chân đoán FCV, phòng ngừa hoặc tiêm vaccine FCV, các yếu tônguy cơ liên quan với FCV và các biện pháp vệ sinh cần thiết ở những khu vực bịnhiễm FCV (Spiri và ctv, 2022).

1.1.2 Dac tinh sinh học của FCV

1.1.2.1 Phần loại

Feline Calicivirus (FCV) thuộc ho virus lớn có tên Caliciviridae, các thanhviên của chúng lây nhiễm nhiều loại động vật có xương song, bao gồm thỏ, gia

súc, bò sát, chim và lưỡng cư.

1.1.2.2 Đặc điểm hình thái và cấu trúc

Feline Calicivirus là một loại virus RNA sợi dương được bao bọc bởi lớp

vỏ icosahedral T=3 được hình thành bởi protein VP1 của virus Hai loại hạt giống

virus (VLP) đã được hình thành, phần lớn được tạo thành từ 60 tiểu đơn vị (T=1)

và một số ít có thé được tạo thành từ 180 tiêu đơn vị ( T=3) (Matteo Bordicchia

va ctv, 2021).

Hình 1.1 Caliciviruses có capsid icosahedral T=3 được hình thành từ protein

capsid chính VP1, hiện diện trong ba môi trường liên kết gần tương đương: A

(xanh lam), B (tim) và C (đỏ tuoi) (David Bhella và ctv,201 1).

Cấu trúc của các hạt nhỏ được xác định bằng phương pháp tinh thé học tia

X ở độ phân giải 0,8 nm được hỗ trợ bởi kính hiển vi điện tử lạnh để tìm hiểu sựhình thành của chúng Tinh thé khối thuộc nhóm không gian P213 Chức năng tựquay của chúng cho thấy sự hiện điện của một đối xứng giả bát diện tương tự nhưđối xứng được mô tả trước đây bởi Agerbandje và đồng nghiệp đối với các VLPparvovirus ở người Cau trúc tinh thé có thé được giải quyết bắt đầu từ cau trúcVP1 đã công bố trong ngữ cảnh của capsid virus T=3 Trái ngược với các capsidcủa virus, trong đó các capsomer được lồng vào nhau bằng cách trao đổi miềncánh tay đầu cuối N (NTA), miễn này bị rối loạn trong capsid T=1 của các VLP

Hơn nữa, nó dễ bị phân giải prote (Matteo Bordicchia và ctv, 2021)

1.1.3 Độc lực của virus

FCV là một loại virus RNA có tính biến đổi cao và phản ứng nhanh môi

trường Điều này làm cho virus rat dé thích nghỉ và có ý nghĩa quan trọng đối với

bệnh lâm sàng và sự kiêm soát của nó Do đa dạng về mặt đi truyền, FCV có liên

quan đến một loạt các hội chứng lâm sàng từ nhiễm trùng không rõ ràng đến bệnhđường hô hấp trên và miệng tương đối nhẹ có hoặc không có tình trạng khậpkhiếng cấp tính Gần đây hơn, các dạng virus có độc lực cao đã xuất hiện liênquan đến nhiễm trùng toàn thân thường gây tử vong Mèo bị nhiễm FCV sau khikhỏi bệnh nhưng vẫn mang mầm bệnh (Radford và ctv, 2007)

1.1.4 Sinh bệnh học

FCV xâm nhập qua đường miệng và đường hô hap ở mèo (Srinaldo vàctv, 2008) Bệnh do virus xâm nhập trực tiếp vào biểu mô, nội mô và đáp ứngmiễn dịch thứ cấp của vật chủ (Burmeister và ctv, 2016)

FCV có thé gây ra bệnh truyền nhiễm nhanh với tỷ lệ tử vong lên đến

67% Dấu hiệu lâm sàng ban đầu bao gồm dịch chảy ra từ mắt và mũi, loéttrong miệng, biếng ăn và hôn mê, xảy ra trong một đến năm ngày đầu tiên Cácdau hiệu sau đó bao gồm sót, phù chân tay và mặt, vàng da, và nhiều hội chứngrồi loạn chức năng nội tang (Burmeister và ctv, 2016).

Các chủng FCV khác nhau có thể khác nhau về độc lực (mức độ gây bệnh

trong một nhóm hoặc loài vi sinh vật hoặc virus được biểu thị bằng tỷ lệ tử vong

theo ca bệnh va/hoac khả năng sinh vật xâm nhập vào các mô của vật chủ) Ởnhững con mèo bị nhiễm bệnh dai dang, capsid virus (lớp vỏ protein bên ngoài

của virus trưởng thành) đã được chứng minh là tiến hóa thông qua chọn lọc tích

cực qua trung gian miễn dịch, cho phép virus thoát khỏi sự phát hiện của hệ thống

miễn dịch (Burmeister và ctv, 2016).

Một dạng FCV đã được phát hiện là nguyên nhân gây ra bệnh toàn thân

đặc biệt nghiêm trọng ở mèo, tương tự như bệnh xuất huyết ở thỏ (cũng do

calicivirus gây ra) Virus này được gọi là calicillin ở mèo có hệ thống độc lực

(VS-FCV) hoặc bệnh hệ thống có độc lực liên quan đến FCV (VSD)(Burmeister va ctv, 2016).

1.1.5 Dich té

FCV lưu hành trên toàn thế giới Ty lệ nhiễm FCV thay đôi tùy theo môi

trường Ở các hộ gia đình, FCV hiện diện ở khoảng 10% số mèo (6 trạng tháihoạt động hoặc mang mam bệnh), trong khi tỷ lệ mèo nhiễm FCV ở nơi trú anhoặc chuồng nuôi mèo là 25 đến 40% (Regina Hofmann-Lehmann và ctv,2022).

Mèo bị nhiễm FCV thường có biểu hiện lở loét đau đớn ở miệng và

bệnh đường hô hấp trên nhẹ, đặc biệt là ở mèo con, thậm chí là viêm phổi gây

tử vong Tuy nhiên, một nghiên cứu từ Thụy Sĩ đã chứng minh rằng loétmiệng, tiết nước bọt và viêm nướu, viêm miệng thường liên quan đến nhiễmFCV hon là bệnh đường hô hấp trên và chưa đến một nửa số mèo nghi ngờnhiễm FCV được phát hiện dương tính với FCV (Spiri và ctv, 2022) Hiếm khi,các biến thé FCV có độc lực cao có thé gây ra bệnh toàn thân nghiêm trọng với

sự lây lan thành dịch và tỷ lệ tử vong cao FCV có thể được phát hiện tốt nhấtbằng PCR phiên mã ngược Tuy nhiên, kết quả âm tính không loại trừ khả năngnhiễm FCV và mèo khỏe mạnh có thé cho kết quả dương tinh (ReginaHofmann-Lehmamn và ctv, 2022).

1.1.6 Miễn dịch

Bệnh FCV ở méo dé lây lan Mèo khoẻ tiếp xúc trực tiếp với mèo bệnh quanước bot, hắt hoi Virus xâm nhập vào cơ thé mèo qua mũi, miệng hoặc mắt Mèocái bị nhiễm bệnh cũng có thể truyền virus cho mèo con

Để hạn chế mèo nhiễm FCV, những con mèo nên được tiêm phòng FCV

(vaccine cốt lõi); tuy nhiên, việc tiêm phòng bảo vệ mèo khỏi bệnh chứ không bao

vệ mèo khỏi nhiễm trùng, khả năng biến đổi cao của FCV, việc đổi sang (các)chủng vaccine khác có thé hữu ích nếu bệnh xảy ra ở những con mèo đã đượctiêm phòng đầy đủ Miễn dịch do nhiễm trùng không kéo dài suốt đời và khôngbảo vệ chống lại tất cả các chủng; do đó, sau 3 tuần mèo khỏi bệnh nên tiêmphòng bệnh do Calicivirus ở mèo (Regina Hofmann-Lehmann và ctv, 2022).

Mèo nhiễm Calicivirus có thé gây loét trong miệng, đặc biệt là trênlưỡi Nó cũng có thể gây ra viêm miệng, được đặc trưng bởi tình trạng viêm đáng

kế ở miệng và môi

Tình trạng què quặt và sốt xảy ra trong một số trường hợp do FelineCalicivirus ở mèo Ngoài ra, một số con mèo có thể mắc một loại bệnh nghiêmtrọng hơn gây ra nhiễm trùng toàn thân Điều này có thể ảnh hưởng đến các cơquan chính và có thể dẫn đến các vấn đề nghiêm trọng hơn như tôn thương và loét

da, chán ăn, sốt và vàng da (Baker Institute for Animal Health, 2016)

Các triệu chứng nhận biết bệnh FCV như sau:

- Vùng đầu: sưng phù dau

8

- Mắt: chảy địch mắt hoặc viêm kết mạc.

- Mũi: chảy dịch mũi và viêm loét xung quanh vùng mũi.

Hình 1.3 Mèo bị lở loét vùng da mặt (Regina Hofmann-Lehmamn và ctv, 2022).

- Miệng: viêm loét màng miệng và viêm nướu.

Hofmann-Lehmamn và ctv, 2022)

Hình 1.5 Mèo chảy mũi, viêm miệng chảy nước day và vét tray xước ở bàn chan

(Regina Hofmann-Lehmann va ctv, 2022)

10

Các vùng da bị ảnh hưởng của FCV: Các tổn thương đóng vảy và loét ở

mèo nhiễm FCV: mặt, da niêm mạc (môi dưới và mép) và tai của mèo.

(môi dưới và mép) và tai (Regina Hofmann-Lehmamn và ctv, 2022)

1.2 Chan đoán

Chan đoán bệnh FCV dựa vào triệu chứng, bệnh tích của mèo nghi ngờbệnh FCV Dé chan đoán bệnh FCV chính xác phải kết hợp chan đoán lâm sang

và phi lâm sảng.

1.2.1 Chan đoán lâm sàng

Các dấu hiệu lâm sàng ở mèo bị nhiễm FCV dựa vào các triệu chứng

FCV có thé phát triển thể bệnh cấp tính, mãn tính hoặc hoàn toàn không códấu hiệu lâm sàng Mèo mang mam bệnh hoặc nhiễm bệnh thé cận lâm sang có

11

thé chuyền sang lâm sàng khi hệ miễn dịch mèo suy giảm hoặc mèo bị stress như

thay đổi môi trường sống Các dấu hiệu cấp tính của FCV bao gồm: sốt, viêm kếtmạc, chảy nước mũi, hắt hơi và loét miệng (viêm miệng) Viêm phổi có thể pháttriển với nhiễm trùng thứ phát đo vi khuẩn Ngoài bệnh viêm miệng, một số mèo

có thé bị viêm đa khớp, cả hai đều có thé do miễn dich qua trung gian Viêmmiệng và viêm đa khớp có thể phát triển mà không có dấu hiệu nhiễm trùngđường hô hấp trên, nhưng sốt và chán ăn có thé xảy ra Ít phô biến hơn, viêm cầuthận có thé phát triển trong các trường hợp mãn tinh, thứ phát do phức hợp miễn

dịch trung gian tế bao Sự thay đổi lớn của các dấu hiệu lâm sàng khác nhau cho

từng trường hợp riêng lẻ do độc lực của FCV từ các chủng nhiễm khác nhau(Baker Institute for Animal Health, 2016).

VS-FCV có thé gây thành dịch nhanh chóng với ty lệ tử vong lên đến 67%

Các dấu hiệu lâm sàng ban đầu bao gồm chảy nước mắt và mũi, loét miệng, chán

ăn, ủ rủ và xảy ra từ một đến năm ngày đầu tiên Các dâu hiệu muộn hon bao gồm

sốt, phù tay chân và mặt, vàng da và hội chứng rối loạn chức năng đa cơ quan(Baker Institute for Animal Health, 2016).

Chân đoán FCV chỉ dựa vào triệu chứng lâm sàng rất khó, vì các dấu hiệutương tự cũng tương đối giống các bệnh khác trên đường hô hap ở mèo, đặc biệt

là bệnh do virus FHV trên mèo Các kỹ thuật xét nghiệm khác có thể sử dụng baogồm: kỹ thuật xét nghiệm nhanh, nuôi cấy virus, phản ứng chuỗi polymerase và

nhuộm hóa mô miễn dịch

Các dấu hiệu lâm sàng rất khác nhau, bao gồm nhiễm trùng đường hô hấptrên nặng, khó thở, loét miệng va ban chân, phù mặt, viêm ruột, viêm phôi, rốiloạn chảy máu, sốt cao và vàng da Cả hai đợt bùng phát ở Hoa Kỳ va Châu Âu

12

đều có đặc điểm là ty lệ tử vong cao Đợt bùng phát nhiễm VS-FCV ở méo dautiên được ghi nhận ở Đức Các đặc điểm lâm sảng và mô bệnh học có thể so sánhvới các đợt bùng phát được mô tả ở Hoa Kỳ và Châu Âu (Schulz và ctv, 2011).1.2.2 Chan đoán phi lâm sàng

1.2.1.1 Xét nghiệm nhanh

Xét nghiệm nhanh đã được sản xuất nhằm xác định kháng nguyên vàkháng thể của FCV (FCV—Ag/Ab) dựa vào phương pháp sắc ký miễn dịch xen kẽ(sandwich) Kết quả dương tính khi xuất hiện 2 vạch mau hồng ở vùng T (vùngkiểm tra) và vùng C (vùng đối chứng) Theo nhà sản xuất, kit test FCV trên mèo

có độ nhạy lên đến 99%

Có 50 mẫu dịch mũi và họng của những con mẻo có triệu chứng hô hấp có

tỷ lệ dương tính của FCV với khoảng tin cậy 95% (Chen và ctv, 2023).

Hiện nay, nhiều phòng khám thú y sử dụng phương pháp dùng xét nghiệmnhanh với nhiều ưu điểm: đơn giản, tiện dụng, nhanh chóng và có thể được thực

hiện bởi bác sĩ thú y cũng như chủ nuôi Mặt khác phương pháp này dễ dàng thưc

hiện với nhiều loại mẫu bệnh phẩm như huyết tương, huyết thanh, phân

1.2.1.2 Kỹ thuật RT PCR

Các kỹ thuật sinh học phân tử đã được ứng dụng rất nhiều để chân đoán

FCV (Wang và ctv, 2021; Yan và ctv, 2023) Kỹ thuật RT PCR được sử dụng déxác định FCV riêng rẻ hoặc kết hợp dé xác định các mam bệnh khác như felineherpesvirus 1, chlamydia psittaci trên mèo (Sykes va ctv, 2001) Trong nghiêncứu của Wang va ctv (2021), bằng kỹ thuật PCR hoặc RT-PCR tác giả ghi nhận44.3% mẫu dương tính với FCV va 23% mẫu đồng nhiễm FCV và FHV-1 (Wang

Z và, 2021).

13

Chan đoán sinh học phân tử có tầm quan trọng đáng ké trong chân đoán vakhảo sát dịch tễ học về mầm bệnh đường hô hấp trên của mẻo.

Kỹ thuật RT PCR dùng để khuếch đại các đoạn RNA bằng quá trình phiên

mã ngược DNA bồ sung (cDNA) được tổng hợp bang quá trình phiên mã ngược

của khuôn mẫu RNA với enzyme phiên mã ngược.

Các bước chính liên quan trong quy trình RT PCR là

- Chiết xuất RNA: Doan RNA mong muốn được phân lập từ các tế bào hoặc

mô của vi sinh vật Quá trình này có thé thực hiện bang giao thức trích xuất tiêu

chuẩn với TRIzole và có thé được kiểm tra bằng máy đo quang pho RNA cũng

có thể được chiết xuất trực tiếp bằng cách sử dụng chiết xuất RNA

- Thiết kế đoạn mỗi: Luu y dén gen mục tiêu, các đoạn môi thiết kế Cácđoạn mồi này có tính đặc hiệu cao và có khả năng phát triển và duy trì trạng thái

song với công mẫu.

- Tổng hợp cDNA: Phản ứng RT được sử dụng dé sao chép các gen mục tiêu

bằng cách phiên mã ngược RNA Điều nay dẫn dan hình thành cDNA bồ sung và

được khuếch đại hơn nữa bằng cách sử dụng khuếch đại thông thường.

- Khuếch dai PCR: Ở đây, cDNA mới được hình thành đóng vai trò là khuônmẫu cho quá trình khuếch đại PCR cơ bản

14

Tổng hop sợiđầu tiên

Reverse transcription

Tổng hop PCRchu ky dau tién

Khuéch dai PCR

San phamkhuéch dai

Hình 1.7 Quy trình RT PCR (Công ty CPTM thiết bị KHKT Việt Nam)1.2.1.3 Phan lập virus

Phân lập virus được coi là xét nghiệm tiêu chuẩn vàng đề phát hiện FCV

và nó ít nhạy cảm hơn với sự biên đôi gen thường xảy ra ở virus RNA Tuy nhiên,

phương pháp này không dễ áp dụng cho chân đoán thông thường Phân lập virus

15

dựa trên nuôi cấy tế bào đòi hỏi kỹ thuật khéo léo cũng như tốn nhiều công sức vàthời gian hơn Ngoài ra, việc phân lập virus có thê thất bại do sự hiện diện củakháng thể trong dịch ngoại bào có tác dụng ức chế sự nhân lên của virus trong ốngnghiệm.

Tất cả các chất sử dụng dé phan lập virus đều được loc qua bộ lọc có kíchthước lỗ 0,2um và được sử dụng làm vật liệu cấy dé phân lập vi rút Tế bào CRFKđược sử dụng dé nuôi cay va phan lap FCV Cac tế bào CRFK duoc ma trên cácđĩa 12 giếng với nồng độ 1 x 10 Š tế bao/mL trong mỗi giếng Sau khi ủ qua đêm,các đĩa được rửa 3 lần bằng PBS, sau đó thêm 100 uL chất cấy vào lớp tế bào đơnlớp trong mỗi giếng Dé hap thụ virus, các đĩa đã cay được ủ ở 37°C với 5%

CO 2 trong 2 giờ Sau 2 giờ ủ, các đĩa được rửa 3 lần bằng PBS và đồ day lại 300

uL môi trường Dulbecco's Modified Eagle's chứa 5% huyết thanh bào thai

bò Hiệu ứng gây bệnh tế bào (CPE) đã được quan sát thấy trong 3 ngày NếuCPE phát triển, quá trình nuôi cấy tế bào được duy trì cho đến khi phát triển

50%-—70% CPE và sau đó thu thập chất nôi trên bề mặt nuôi cay tế bào Việc xác

định virus được thực hiện bằng cách phát hiện kháng nguyên bằng xét nghiệmRT-PCR như mô tả ở trên Nếu CPE không được quan sát sau 5 lần truyền, kết

quả phân lập vi rút được coi là âm tinh (Kim va ctv, 2020).

1.3 Điều trị

Hiện nay, trên thé giới chưa có thuốc điều trị virus nào được cấp phép dé điềutrị mèo nhiễm virus, mặc dù đã có nhiều nghiên cứu về việc sử dụng thuốc khángvirus trên mèo (Lucy Kopecny, 2020; Thomasy va Maggs, 2016) Các liệu phápđiều trị chính tập trung điều trị triệu chứng, tăng cường sức đề kháng và các liệu

pháp hỗ trợ khác.

16

Virus FCV gây tổn thương tế bào, mô do sự nhân lên của virus Bên cạnh

đó, sự tốn thương còn gây ra do đáp ứng miễn dich qua trung gian tế bào đối vớiECV Do đó, trong liệu pháp điều trị thường sử dụng glucocorticoid để ức chế cácđáp ứng viêm và miễn dịch qua trung gian tế bào Glucocorticoid ức chế hoạtđộng của phospholipase A2 ở tế bào chất Glucocorticoid có tác dụng ức chế sựhình thành viêm ở giai đoạn sớm (giai đoạn giải phóng acid béo từ các

phosphorlipid màng) hơn kháng viêm không steroid Tac dụng kháng viêm còn

được tăng cường nhờ tác dụng giảm tính thấm thành mạch, ức chế sự đi chuyển

của bạch cầu đến tô chức viêm (Võ Thị Tra An, 2014)

Thuốc kháng virus

Thuốc kháng virus tác động bằng cách ngăn cản vào một hoặc nhiều giaiđoạn trong chu kỳ sao chép của virus để ức chế quá trình nhân lên của chúng(Hình 1.8) Cơ chế hoạt động của thuốc kháng virus bao gồm sự chuyên đổi thànhtriphosphate sau khi ức chế tổng hợp RNA của virus Ngoài ra, thuốc kháng virus

có thể làm tăng sức đề kháng của tế bào đối với virus, ngăn chặn sự hấp thụ của

virus và quá trình khử protein của virus trong tế bao gây ra sự ức chế tổng hợpaxit nucleic (Shamaila Kausar và ctv, 2021).

Hiện nay có rất nhiều loại thuốc khang virus được phê duyệt sử dung điều

trị các bệnh do virus gây ra như: amantadine và rimantadine (virus cúm A),

ribavirin (virus hợp bào hô hap), idoxuridine và trifluridine (điều trị tại chỗ viêmgiác mạc do Herpetic), vidarabine va acyclovir (điều trị toàn thân virus herpessimplex và nhiễm virus varicella-zoster), famciclovir va valaciclovir (diéu tri

nhiém virus varicella-zoster bằng đường uống), ganciclovir va foscarnet

17

(cytomegalovirus), va zidovudine, didanosine, zalcitabine và stavudine (virus gây

suy giảm miễn dich ở người)

SS ⁄

7 10 Release

Hình 1.8 Qua trình nhân lên của virus

18

Một thí nghiệm 24 mèo con có dấu hiệu lâm sàng của bệnh đường hô hấptrên cấp tính được phân bổ ngẫu nhiên để nhận doxycycline (5 mg/kg uống mỗi

12 gid) hoặc với famciclovir (90 mg/kg uống mỗi 12 gid) trong 3 tuần Kết quacho thấy không có sự khác biệt đáng kể trong đáp ứng với trị liệu giữa những conmèo được điều trị bằng doxycycline đơn thuần hoặc bằng famciclovir Tuy nhiên,trong nghiên cứu nay chưa xác định được rõ căn nguyên virus nên việc đánh giahiệu quả của famciclovir chưa chuẩn xác (Lucy Kopecny và ctv, 2020)

Một nghiên cứu mới nhất ở Việt Nam, sử dụng thuốc kháng virus

famciclovir điều trị mèo bị nhiễm bệnh do virus Feline Herpesvirus Sau 3 tuần

điều tri, nhóm mèo nhiễm Feline Herpesvirus điều trị bằng thuốc kháng virusfamciclovir có sự cải thiện triệu chứng lâm sảng rõ rệt hon so với nhóm chi điềutrị triệu chứng thông thường (Lê Pham Công Hoang va ctv, 2023).

1.4 Phòng bệnh và kiểm soát

Tiêm ngừa vaccine là biện pháp chính được khuyến cáo để phòng bệnh doFCV, cũng như giảm sự lưu hành virus trên mèo Có nhiều loại vaccine được sửdụng trên thế giới được các nước đã và đang sử dụng Tại Châu Âu, vaccine sống

nhược độc F9 được sử dụng rộng rãi và thường được kết hợp với vaccine phòng

FHV và/hoặc bệnh suy giảm bạch cầu trên mèo (Panleukopeniavirus) (Spiti,

2022) Tuy nhiên, tại Việt Nam hiện nay vaccine mèo chưa được cấp phép lưuhành nên tình hình tiêm chung vaccine cho mèo nói chung va tiêm chủng FCVnói riêng rất hạn chế và chưa chính thức

Bên cạnh vaccine, điều kiện vệ sinh chuồng nuôi, hình thức nuôi, cũng nhưđiều kiện chăm sóc nuôi dưỡng, mật độ nuôi là các yếu tổ nguy cơ cần lưu ý dé cóthé hạn chế sự nhiễm bệnh va lây lan bệnh đo FCV (Spiri, 2022)

19

Vaccine FCV hiệu quả bảo vệ chống lại bệnh nặng nhưng không chống lạinhiễm trùng FCV là một loại virus RNA có tính đột biến cao và đa dạng ditruyền Việc chỉ sử dụng một chủng FCV sống đã được biến đổi trong nhiều thập

kỷ có thể đã thúc đây sự tiến hóa của virus theo hướng có nhiều biến thể khángvaccine hơn Spiri và ctv (2021) đã thực hiện nghiên cứu các dấu hiệu lâm sảng,thời gian và số lượng FCV trong máu, những thay đổi về huyết học và phản ứngprotein giai đoạn cấp tính ở mèo specific-pathogen-free (SPF) sau khi tiêm vắcxin FCV chủng đơn biến đổi dưới da hoặc tiêm giả dược và hai lần công cườngđộc FCV dị loại qua đường miệng Kết quả ghi nhận, không có dấu hiệu lâm sàngcũng như sự phát tán FCV từ vùng hầu họng và RNA máu FCV sau khi tiêmchủng Sau lần lây nhiễm thử nghiệm đầu tiên, mèo được tiêm phòng có điểm lâmsàng thấp hon đáng kề, nhiệt độ cơ thể tăng ít hơn và mức protein giai đoạn cấptính thấp hơn so với mèo đối chứng (Spiri và ctv, 2021)

Hiện nay tại Việt Nam chưa có vaccine tiêm ngừa FCV cho mèo nên việcphòng bệnh FCV cho mèo gặp nhiều khó khăn Vì vậy dé bảo vệ mèo thì cần hạnchế cho mèo tiếp xúc với các mèo thả rong hoặc nuôi theo phương thức nhốt

1.5 Tình hình nhiễm FCV trên thế giới

Trên thế giới, có rất nhiều nghiên cứu về bệnh do FCV gây ra TạiCalifornia, tỷ lệ nhiễm virus FCV dao động từ 15 % đến 31% tuỳ thuộc số lượngmau lấy trong quan thé mèo với tỷ lệ cao hơn trong nhóm mẻo nuôi nhốt chungnhiều cá thể (Bamnasch và Foley, 2005; Pederson và ctv, 2004)

Một nghiên cứu có 104 con méo được thu thập từ méo bệnh FCV qua kếtquả xét nghiệm virus Thực hiện nhỏ răng cho các con mèo có dấu hiệu viêm loét

răng miệng Kết quả điều trị bệnh lâm sảng (32,1%) hoặc cải thiện rất đáng kế

20

(19,6%) và đã đạt được ở 51,8% số mèo trong vòng 38 ngày, tỉ lệ khỏi bệnh(41,1%) hoặc cải thiện đáng kế (19,6%) (Druet va ctv, 2017).

Theo Kruger M và ctv (1996) sử dung famciclovir trong điều trị FCV lâudài được dung nạp tốt và không gây tác dụng phụ

1.6 Tình hình nhiễm FCV tại Việt Nam

Một nghiên cứu mới nhất tại trường Đại học cần Thơ nghiên cứu một sốyếu tố nguy cơ liên quan đến Feline Calicivirus gây bệnh hô hấp ở mèo được thựchiện trên 471 con mèo tại Phòng thí nghiệm Bệnh xá Thú y, Đại học Cần Thơ

Kết quả nghiên cứu cho thay tỷ lệ mèo mắc bệnh qua xét nghiệm nhanh là 6,58%

trên tổng sô mèo Mèo từ 2 năm tuổi trở xuống thì tỷ lệ mắc bệnh cao hơn là 4,98lần so với mèo trên 2 năm tuổi Mèo không được tiêm phòng hoặc tiêm không đủliều có nguy cơ mắc bệnh cao hơn 3,26 lần với những mèo được tiêm phòng đầy

đủ Phương thức nuôi thả có nguy cơ mắc bệnh cao hơn nuôi nhốt là 4,35 lần(Huỳnh Trường Giang và ctv, 2022).

Tới thời điểm hiện tại, chưa có nhiều nghiên cứu về tình hình bệnh FCV

trên mèo tại Việt Nam Bên cạnh đó, việc vaccine mèo chưa được cấp phép tạiViệt Nam nên kết quả nghiên cứu này có thể cung cấp thêm thông tin làm cơ sở

dữ liệu cho việc xem xét đánh giá cho đề xuất sớm cấp phép vaccine để phòngbệnh FCV trên mèo.

21

Chương 2

NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Đối tượng, địa điểm và thời gian nghiên cứu

2.1.1 Đối tượng nghiên cứu

Mèo được đưa đến thăm khám và điều trị tại Dương Vet thành phố Mỹ

Tho, tỉnh Tiền Giang

2.1.2 Đối tượng lấy mẫu

Mèo có biểu hiện lâm sàng: mèo có triệu chứng đường hô hấp trên, giảm

cân, sốt, chán ăn và viêm nướu hoặc miệng bị viêm loét

Thông tin thu thập qua tìm hiểu bệnh sử và thăm khám lâm sàng được ghichép can thận vào phiếu khám bệnh

Dung lượng mẫu xét nghiệm ước theo công thức:

Như vậy ty lệ dương tính với FCV cho thấy FCV dao động (d) từ 25-40%thì d=(0,4-0,25)/2=0,075, giả định nhiễm FCV dự kiến (p) trong nghiên cứu của

22