Xác định nồng độ và khảo sát mối liên quan của các dấu ấn sinh học VEGF, APOA1, C7 trong huyết thanh với các đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạcNghiên cứu một số dấu ấn sinh học trong huyết thanh ở bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạc
ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Đối tượng nghiên cứu
Nghiên cứu này tập trung vào bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạc, đồng thời so sánh với nhóm đối chứng bao gồm bệnh nhân đái tháo đường type 2 không có biến chứng võng mạc và những người khỏe mạnh Đối tượng nghiên cứu là cả nam và nữ, được khám và điều trị tại bệnh viện E và bệnh viện Mắt Trung ương trong khoảng thời gian từ tháng 1 năm 2020 đến tháng 3 năm 2023.
2.1.1 Tiêu chuẩn lựa chọn bệnh nhân
Các bệnh nhân khám và điều trị trong thời gian từ tháng 01/2020 đến 3/2023 phù hợp với tiêu chuẩn lựa chọn bệnh nhân và tự nguyện tham gia nghiên cứu
Chẩn đoán Đái tháo đường (ĐTĐ) theo tiêu chuẩn của Hiệp Hội Đái tháo đường Mỹ (ADA) 2019 dựa vào bốn tiêu chí chính: a) Glucose huyết tương lúc đói (FPG) ≥ 126 mg/dL (7 mmol/L) sau ít nhất 8 giờ nhịn ăn; b) Glucose huyết tương ≥ 200 mg/dL (11,1 mmol/L) sau 2 giờ làm nghiệm pháp dung nạp glucose đường uống 75g (OGTT), với quy trình nhịn đói và chế độ ăn hợp lý trước đó; c) HbA1c ≥ 6,5% (48 mmol/mol); d) Mức glucose huyết tương bất kỳ ≥ 200 mg/dL (11,1 mmol/L) ở bệnh nhân có triệu chứng kinh điển của tăng glucose huyết Nếu không có triệu chứng, các xét nghiệm chẩn đoán cần được lặp lại trong khoảng thời gian từ 1 đến 7 ngày để xác định chẩn đoán chính xác.
- Bệnh nhân đã có chẩn đoán ung thư, viêm khớp dạng thấp
- Bệnh nhân có đục môi trường trong suốt không soi được đáy mắt
- Bệnh nhân đã được điều trị tiêm VEGF nội nhãn, hoặc đã điều trị laser quang đông
- Bệnh nhân mắc đái tháo đường các type khác
- Bệnh nhân không phù hợp tiêu chuẩn lựa chọn ở trên
- Bệnh nhân không đồng ý tham gia nghiên cứu
Người khỏe mạnh được chọn từ những người đến khám sức khỏe không mắc đái tháo đường, không mắc bệnh lý võng mạc.
Phương pháp nghiên cứu
2.2.1 Thiết kế nghiên cứu và sơ đồ nghiên cứu
- Nghiên cứu mô tả cắt ngang có nhóm chứng
Các đối tượng nghiên cứu được chia thành ba nhóm gồm:
Nhóm 1: Bệnh nhân đái tháo đường type 2 có biến chứng võng mạc
Nhóm 2: Bệnh nhân đái tháo đường type 2 không có biến chứng võng mạc
Nhóm 3: Người khỏe mạnh không mắc đái tháo đường và bệnh lý võng mạc
- Cỡ mẫu: dựa theo nghiên cứu của Bình VT (2021) có tỉ lệ mắc VMĐTĐ là 0,425, dùng công thức cỡ mẫu cho ước lượng một tỉ lệ n = 𝑍 / ( )
Công thức tính cỡ mẫu cho thấy n = 66,29, do đó cỡ mẫu tối thiểu cho nhóm có biến chứng võng mạc là 67 Nghiên cứu đã thu thập được 75 bệnh nhân trong nhóm này, cùng với 75 bệnh nhân không có biến chứng võng mạc đái tháo đường (VMĐTĐ) và 75 người khỏe mạnh Tổng số bệnh nhân tham gia nghiên cứu là 225, bao gồm 217 đối tượng tại bệnh viện E và 8 bệnh nhân tại bệnh viện Mắt Trung ương.
Hình 2.1 Sơ đồ nghiên cứu 2.2.2 Nội dung nghiên cứu
2.2.2.1 Các bước tiến hành nghiên cứu
Tất cả các đối tượng nghiên cứu được thu thập thông tin về đặc điểm chung như tuổi và giới tính, cùng với tiền sử bệnh lý và khám lâm sàng Quy trình bao gồm khám mắt và chỉ định các xét nghiệm hóa sinh, bao gồm xét nghiệm máu để đo các chỉ số như glucose, ure, creatinine, acid uric, cholesterol, triglyceride, HDL_C, LDL_C và HbA1C Bệnh nhân được lấy 2mL máu vào ống chống đông K2-EDTA để thực hiện xét nghiệm công thức máu và 2mL máu chống đông Heparin cho các xét nghiệm sinh hóa.
Phân tích số liệu lâm sàng và cận lâm sàng, cùng với việc định lượng nồng độ protein, là bước quan trọng trong việc đánh giá tình trạng sức khỏe của bệnh nhân Kết quả từ phân tích khối phổ cho phép chúng ta hiểu rõ hơn về các protein có liên quan, giúp phân loại và điều trị hiệu quả cho từng nhóm bệnh nhân Việc này không chỉ nâng cao chất lượng chăm sóc sức khỏe mà còn mở ra hướng nghiên cứu mới trong y học.
Thu thập mẫu tại Bệnh viện E và Bệnh viện Mắt Trung ương
Thông tin chung, tiền sử, lâm sàng, cận lâm sàng
Nhóm bệnh nhân đái tháo đường
Thông tin chung, tiền sử, khám tổng quát, khám mắt, các kết quả xét nghiệm
Nghiên cứu này bao gồm 75 người khỏe mạnh, trong đó nồng độ protein VEGF, APOA1 và C7 được định lượng bằng phương pháp ELISA Đồng thời, phân tích proteomic được thực hiện thông qua phương pháp khối phổ trên mười mẫu huyết thanh từ từng nhóm nghiên cứu.
Chẩn đoán xác định, chấn đoán mức độ biến chứng võng mạc đái tháo đường được thực hiện bởi các bác sỹ lâm sàng phụ trách trực tiếp
Trong quá trình nghiên cứu, mẫu bệnh phẩm được thu thập vào buổi sáng từ người tham gia, yêu cầu không ăn ít nhất 8 giờ trước đó Mỗi người tham gia sẽ cung cấp 4mL máu, được chia vào 02 ống xét nghiệm chứa hạt silicagen Các ống mẫu này cần được giữ thẳng trong 30-60 phút ở nhiệt độ phòng để hình thành cục máu đông, sau đó sẽ được ly tâm với tốc độ 5000 vòng/phút.
Sau 10 phút ở nhiệt độ phòng, huyết thanh được tách ra từ ống máu và chuyển vào ống Eppendorf Mẫu được bảo quản ở nhiệt độ -30°C và được vận chuyển trong hộp bảo quản lạnh theo nguyên tắc an toàn sinh học đến phòng thí nghiệm bộ môn Y dược học cơ sở, Trường Đại học Y dược - Đại học Quốc gia Hà Nội Cuối cùng, mẫu được lưu trữ tại tủ lạnh -80°C.
Tất cả các thông tin chung, lâm sàng và chỉ số cận lâm sàng sẽ được thu thập và lưu vào mẫu bệnh án nghiên cứu
2.2.2.2 Các biến số, chỉ số nghiên cứu:
- Tuổi (năm): phân bố độ tuổi ở từng nhóm nghiên cứu
- Giới (nam, nữ; tỷ lệ nam/nữ) ở từng nhóm nghiên cứu
+ Thời gian mắc đái tháo đường: dưới 5 năm, từ 5-10 năm, từ 10-15 năm và trên 15 năm
+ Tăng huyết áp: có/không
Lạm dụng rượu được xác định theo tiêu chuẩn DSM-5 của Hiệp hội Bệnh lý tâm thần Mỹ, dựa vào số lượng và tần suất tiêu thụ Cụ thể, nam giới được coi là lạm dụng rượu nếu uống hơn 14 ly mỗi tuần hoặc 4 ly trong một lần, trong khi nữ giới có ngưỡng là hơn 7 ly mỗi tuần hoặc 3 ly trong một lần.
Theo định nghĩa của WHO, việc hút thuốc lá được phân thành hai nhóm chính: nhóm "Có" bao gồm những người hiện đang hút thuốc hoặc đã bỏ thuốc trong vòng dưới 5 năm, trong khi nhóm "Không" gồm những người chưa bao giờ hút thuốc hoặc đã bỏ thuốc được 5 năm trở lên.
- Tiền sử gia đình có người mắc đái tháo đường: có/không
- Chỉ số khối cơ thể (Body Mass Index – BMI) (kg/m 2 ):
+ BMI = Cân nặng / Chiều cao 2
+ Phân độ BMI theo tiêu chuẩn chẩn đoán béo phì của tổ chức y tế thế giới (WHO) dành cho các nước Châu Á 112
Bảng 2.1 Tiêu chuẩn béo phì của WHO cho các nước châu Á 112
- Huyết áp: bệnh nhân được nghỉ ngơi trước khi đo huyết áp, đo huyết áp tay phải, đo hai lần rồi lấy trung bình cộng của hai lần đo
- Khám mắt: được thực hiện bởi các bác sĩ chuyên khoa Mắt
+ Đo thị lực 2 mắt: không kính và có kính theo bảng thị lực Snellen, quy đổi sang thị lực Logmar
+ Đo nhãn áp bằng nhãn áp kế Maclakov
+ Khám bán phần trước: để đánh giá các môi trường trong suốt, phát hiện tình trạng viêm nhiễm
+ Soi đáy mắt: Đánh giá tình trạng võng mạc, dịch kính, gai thị
- Xác định, đánh giá các tổn thương võng mạc do đái tháo đường theo phân loại bệnh VMĐTĐ của Hội đồng nhãn khoa quốc tế (2017) 3
Bảng 2.2 Phân loại bệnh võng mạc ĐTĐ của Hội đồng nhãn khoa quốc tế
Dấu hiệu có thể quan sát với soi đáy mắt có giãn đồng tử
Bệnh VMĐTĐ không tăng sinh
Bệnh VMĐTĐ không tăng sinh nhẹ chỉ có sự xuất hiện của vi phình mạch Trong khi đó, bệnh VMĐTĐ không tăng sinh vừa có vi phình mạch cùng với các tổn thương khác, nhưng mức độ nhẹ hơn so với bệnh VMĐTĐ không tăng sinh nặng.
Bệnh VMĐTĐ không tăng sinh nặng: Bất kỳ các dấu hiệu sau:
- Xuất huyết trong võng mạc 20 điểm hoặc nhiều hơn trong mỗi góc phần tư võng mạc
- Tĩnh mạch chuỗi hạt ≥ 2 góc phần tư
- Bất thường vi mạch trong võng mạc ≥ 1 góc phần tư và không có tân mạch
Một hoặc nhiều hơn các dấu hiệu sau:
- Xuất huyết dịch kính hoặc trước võng mạc
- Phân mức thị lực thành ba nhóm theo phân loại của ICD-10 (2019) với bảng thị lực LogMar:
Bảng 2.3 Phân mức thị lực thành ba nhóm theo phân loại ICD-10
(2019) 113 Mức độ thị lực Thị lực tốt nhất sau chỉnh kính Thị lực bình thường hoặc giảm nhẹ < 0,6
Thị lực giảm trung bình đến nặng Từ 0,6 đến 1,3
Thị lực gần mù và mù > 1,3
Các chỉ số hóa sinh máu và công thức máu là yếu tố quan trọng trong nghiên cứu y học Mẫu bệnh phẩm từ Bệnh viện Mắt Trung ương được chuyển về Bệnh viện E để tiến hành xét nghiệm Tại Khoa Sinh hóa và Huyết học của Bệnh viện E, các xét nghiệm được thực hiện với các khoảng tham chiếu cụ thể, đảm bảo độ chính xác và tin cậy trong kết quả.
Bảng 2.4 Các chỉ số hóa sinh máu, công thức máu và dải tham chiếu
Chỉ số Dải tham chiếu Thiết bị
Nữ: 58-96 àmol/L Cholesterol toàn phần < 5,2 mmol/L
Số lượng hồng cầu Nam: 4,5-5,9 (T/L)
- Mức lọc cầu thận (MLCT) tính theo công thức MDRD (Modification of Diet in Renal Disease) 114
MLCTcre = 186,3 × S Cr -1,154 (mg/dL) × tuổi-0,203 × 0,742 (nếu là nữ)
(MLCTcr: Mức lọc cầu thận ước tính dựa vào Creatinin; SCr: Nồng độ Creatinin huyết thanh)
- Nồng độ VEGF (pg/mL), APOA1 (mg/dL), C7 (àg/mL) trong mẫu huyết thanh
- Kết quả phân tích định tính các protein được nhận dạng trong mẫu huyết thanh theo phương pháp khối phổ
- Tủ an toàn sinh học cấp II
- Máy li tâm, nồi hấp vô trùng dụng cụ, tủ lạnh âm sâu -80 0 C, tủ ấm, máy cất nước, máy vortex, máy spindown, máy là đá vảy …
- Máy phân tích Elisa: Máy đọc mật độ quang Epoch 2 (Biotek, Mỹ)
- Máy điện di ngang Cleaver Scientific (Anh)
- Máy soi gel và chụp ảnh tự động: GelDoc-it2- UVP (Mỹ)
- Sinh hiển vi khám bệnh
- Bông, kim tiêm vô trùng
- Hộp vận chuyển mẫu bảo quản lạnh lưu động
- Các loại ống xét nghiệm máu
- Micropipette cỏc loại (0,5-10àL, 20-100àl, 200-1000àl)
- Ống Eppendorf thể tích 1,5mL
- Ống falcon thể tích 15mL, 50mL
2.2.3.3 Hóa chất và sinh phẩm
- Hóa chất Elisa: kit Elisa Human VEGF, APOA1, C7 (MyBioSource, Mỹ) + Kit Elisa phân tích VEGF (MBS355343)
+ Kit Elisa phân tích APOA1 (MBS564036)
+ Kit Elisa phân tích C7 (MBS765771)
- Kit loại Albumin/IgG: Pierce TM Albumin/IgG Removal Kit (Number:
- Urea, Thiourea, Dithiothretiol, Iiodoacetamide: Biorad, Mỹ
- Sodium dodecyl sulfate: Sigma, Mỹ
- Tris base: Bio Basic, Canada
2.2.4 Kỹ thuật định lượng protein VEGF, APOA1, C7:
Mẫu huyết thanh bệnh nhân được lưu trữ ở nhiệt độ âm 80 độ C đã được rã đông để tiến hành định lượng các protein Việc định lượng protein huyết thanh VEGF, APOA1, và C7 được thực hiện bằng phương pháp Elisa (enzyme-linked immunosorbent assay) sử dụng bộ kit ELISA của MyBioSource (Mỹ) Cụ thể, kit Elisa phân tích VEGF là MBS355343, kit Elisa phân tích APOA1 là MBS564036, và kit Elisa phân tích C7 là MBS765771.
Nguyên lý: Kỹ thuật sandwich ELISA
Kháng thể đặc hiệu được phủ sẵn trên các giếng, sau đó thêm chất chuẩn, mẫu và kháng thể đặc hiệu thứ hai liên hợp Biotin cùng dung dịch đệm rửa Quá trình rửa giúp loại bỏ các kháng thể không liên kết Chất nền TMB được sử dụng để phát hiện phản ứng enzyme HRP, và hóa chất dừng chuyển sản phẩm từ màu xanh sang màu vàng Mật độ màu vàng tỷ lệ thuận với lượng protein trong mẫu, được đo ở bước sóng 450nm Lập đường chuẩn giúp tính nồng độ protein trong từng mẫu, với mỗi mẫu được phân tích lặp lại 2 lần để đảm bảo độ chính xác.
Phân tích được tiến hành tại phòng thí nghiệm của bộ môn Y dược học cơ sở - Trường Đại học Y dược - Đại học quốc gia Hà Nội
Các bước thực hiện trình bày cụ thể trong phần phụ lục
2.2.5 Kỹ thuật phân tích khối phổ các protein trong mẫu huyết thanh: 2.2.5.1 Xử lý và tách chiết protein
Phân tích khối phổ là một kĩ thuật hiện đại và tốn kém, thường được thực hiện ở nước ngoài Do đó, chúng tôi đã chọn các mẫu điển hình có độ tương đồng cao về chỉ số lâm sàng và cận lâm sàng để tiến hành phân tích Cụ thể, chúng tôi đã thực hiện phân tích khối phổ trên mười mẫu huyết thanh từ ba nhóm nghiên cứu: nhóm người khỏe mạnh, nhóm không bị bệnh tim mạch và nhóm có bệnh tim mạch Các đối tượng được lựa chọn dựa trên sự đồng nhất về các thông số chung như tuổi và giới, cũng như các dữ liệu cận lâm sàng như kết quả xét nghiệm hóa sinh máu và công thức máu.
Mẫu huyết thanh bệnh nhân được lưu trữ ở nhiệt độ -80ºC sẽ được rã đông và ly tâm lạnh ở 4ºC với tốc độ 3000G trong 10 phút để loại bỏ phần mỡ (ly tâm lần 1) Sau đó, tiếp tục ly tâm ở 4ºC với tốc độ 10000G trong 10 phút, dịch nổi được hút ra và chuyển vào các ống Eppendorf 1,5 ml mới (ly tâm lần 2) Phần tủa sẽ được rửa sạch bằng đệm PBS và ly tâm thêm một lần nữa với tốc độ 10000G trong 10 phút để làm sạch (ly tâm lần 3) Quá trình này được lặp lại để đảm bảo độ sạch tối ưu cho mẫu.
Mẫu huyết thanh đã được xử lý bằng kit Pierce™ Albumin/IgG Removal (Thermo Scientific, Mỹ) nhằm thu nhận hai protein chủ yếu trong huyết tương, đó là Albumin và IgG Quy trình thực hiện chi tiết được mô tả trong phụ lục.
2.2.5.2 Điện di SDS-PAGE và thủy phân protein
Xử lý và phân tích số liệu
Sau khi thu thập dữ liệu, chúng tôi đã thực hiện phân tích thống kê bằng phần mềm SPSS 25.0 Các số liệu được trình bày dưới dạng trung bình hoặc trung vị, cùng với khoảng giá trị của các biến liên tục một cách hợp lý.
Trong nghiên cứu thống kê, để so sánh sự khác biệt giữa hai hoặc nhiều nhóm biến phân loại, các phương pháp như kiểm định Chi-squared, kiểm định ANOVA, kiểm định Mann-Whitney và kiểm định Kruskal-Wallis thường được áp dụng Những phương pháp này giúp phân tích dữ liệu của các biến liên tục giữa các nhóm khác nhau Bên cạnh đó, chỉ số Odds Ratio (OR) và khoảng tin cậy 95% (95% CI) được tính toán để đánh giá khả năng mắc bệnh hoặc nguy cơ tiến triển của bệnh.
Nghiên cứu này phân tích mối liên quan giữa nồng độ protein VEGF, APOA1 và C7 với các thông số lâm sàng và cận lâm sàng thông qua test tương quan Spearman Bên cạnh đó, việc xác định điểm cắt của các protein này giúp dự đoán khả năng mắc bệnh VMĐTĐ thông qua đường cong ROC.
- Tất cả các phân tích cho kết quả có ý nghĩa thống kê khi p < 0,05.
Đạo đức nghiên cứu
Nghiên cứu đã được chấp thuận bởi Hội đồng đạo đức nghiên cứu y sinh học trường Đại học y Hà Nội số IRB-VN01.001/IRB00003121/FWA
Nghiên cứu đã được Bệnh viện E và Bệnh viện Mắt Trung ương phê duyệt, trong đó người tham gia được thông báo đầy đủ về mục đích, lợi ích và các ảnh hưởng bất lợi có thể xảy ra Bệnh nhân có quyền rút lui khỏi nghiên cứu bất kỳ lúc nào Thông tin cá nhân của bệnh nhân được bảo mật và chỉ được sử dụng cho mục đích nghiên cứu.
Thời gian và địa điểm nghiên cứu
- Thời gian nghiên cứu: từ tháng 1/2020 đến tháng 03/2023
Bệnh viện Mắt Trung Ương
+ Địa điểm phân tích mẫu:
Phân tích định lượng protein VEGF, APOA1, C7 bằng kỹ thuật ELISA được thực hiện ở labo nghiên cứu tại trường Đại học Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội
Tại labo nghiên cứu của trường Đại học Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội, quy trình tách chiết protein, điện di protein và chuẩn bị mẫu phân tích khối phổ được thực hiện Đồng thời, việc phân tích và nhận dạng protein thông qua phương pháp sắc ký lỏng nano kết nối khối phổ được tiến hành tại viện Hàn lâm khoa học Đài Loan Academia Sinica.
Các biện pháp khống chế sai số trong nghiên cứu
Để khắc phục vấn đề, nhóm lấy mẫu cần được đào tạo để thu thập đúng số lượng và loại ống nghiệm cần thiết Nghiên cứu sinh sẽ trực tiếp thực hiện việc thu thập mẫu, sau đó mã hóa mẫu bằng một mã code duy nhất và lưu trữ tại vị trí quy định Thông tin liên quan đến mẫu sẽ được ghi chép cẩn thận trong sổ nghiên cứu và file danh sách bệnh nhân.
- Sai quy trình kỹ thuật:
Để khắc phục, cần chuẩn hóa tất cả quy trình kỹ thuật và viết thành hướng dẫn thực hiện Xét nghiệm Elisa phải được thực hiện hai lần cho mỗi mẫu Các xét nghiệm sinh hóa và huyết học khác được thực hiện tại bệnh viện E, nơi có uy tín cao.
- Sai thông tin của đối tượng nghiên cứu:
Để khắc phục vấn đề, cần sử dụng các công cụ thu thập thông tin được thiết kế phù hợp với mục tiêu nghiên cứu Việc chẩn đoán bệnh và xác định giai đoạn bệnh VMĐTĐ được thực hiện bởi các bác sĩ chuyên khoa Mắt Nghiên cứu sinh sẽ trực tiếp thu thập thông tin, ghi chép đầy đủ từ hồ sơ bệnh án, phỏng vấn bệnh nhân và kết quả thí nghiệm vào bệnh án nghiên cứu theo mẫu.
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
Đặc điểm chung của đối tượng nghiên cứu
3.1.1 Đặc điểm chung của đối tượng nghiên cứu
Nghiên cứu đã được thực hiện trên 225 đối tượng, bao gồm 150 bệnh nhân đái tháo đường type 2 (trong đó 75 người có biến chứng võng mạc và 75 người không có biến chứng) và 75 người khỏe mạnh Kết quả nghiên cứu cho thấy đặc điểm về tuổi và giới của các đối tượng được trình bày chi tiết trong bảng 3.1.
Bảng 3.1 Đặc điểm về tuổi và giới ở các nhóm nghiên cứu Đặc điểm NKM nu
Nghiên cứu cho thấy sự phân bố giới tính của các nhóm đối tượng: nữ chiếm 40,0% (54), nam 27,4% (37) và 32,6% (44) Phân tích sử dụng kiểm định Kruskal-Wallis và kiểm định Chi-square cho thấy có sự khác biệt đáng kể giữa nhóm người khỏe mạnh (NKM) và nhóm đái tháo đường không biến chứng võng mạc (Không BCVM) cũng như nhóm đái tháo đường có biến chứng võng mạc (có BCVM) với p0,05) Tuy nhiên, khi so sánh tỉ lệ mắc biến chứng võng mạc giữa hai nhóm bệnh nhân có thời gian mắc đái tháo đường trên và dưới 10 năm, nhóm bệnh nhân mắc đái tháo đường trên 10 năm có nguy cơ mắc biến chứng võng mạc cao hơn 7,11 lần so với nhóm dưới 10 năm (p