Chủ Đề 4 phát hiện vết trên sklm Ứng dụng – Ưu nhược Điểm của sklm

Phát hiện vết trên SKLM Các chất không có màu tự nhiên có thể được phát hiện bằng các kỹ thuật như: soi UV, phun thuốc thử hiện màu, soi UV sau các phản ứng với thuốc thử... Phun thuốc

HỌC PHẦN: HOÁ PHÂN TÍCH

0 1

Phát hiện

vết trên

SKLM

Phát hiện vết trên SKLM

 Các chất không có màu tự nhiên có thể được phát hiện bằng các kỹ

thuật như: soi UV, phun thuốc thử hiện màu, soi UV sau các phản ứng với thuốc thử

Phun thuốc thử tạo

Phun thuốc thử tạo màu

Thuốc thử chọn lọc Màu của vết Ứng dụng trong

phân tích

Ninhydrin Hồng tím Acid amin, các 

nhóm chức amin 2,4-dinitrophenylhydrazone Da cam, đỏ Các hợp chất 

carbonyl Xanh/lục bromocresol Vàng Các acid hữu cơ 2,7 fluorescein Vàng lục Nhiều chất hữu cơ Vanillin/acid sulfuric Xanh lục hồng Alcol, ceton Rhodamin B Huỳnh quang 

Soi dưới đèn UV

b

• Thuốc thử tạo chất phát/tắt huỳnh quang có độ nhạy cao hơn nhiều so với

thuốc thử tạo màu, có thể phát hiện lượng chất nhỏ (vài tram đến vài cho

phép phát hiện chất phân tích ở nồng độ thấp đến phần tỷ (ppb), nồng độ

mà các thuốc thử tạo màu tốt nhất cũng không phát hiện được.

• Các hợp chất hấp thụ tia UV có thể được phát hiện trên các bản mỏng có

chứa chất phát huỳnh quang

• Các hợp chất hấp phụ tia UV làm giảm (tắt) huỳnh quang nên vết của chất

được hình dung như là vùng tối trên một vùng sáng (thường là màu

xanh lá cây)

 

Soi dưới đèn UV

b

Đèn UV phát ra tia UV ở bước sóng 254 và 366nm.

Vết của chất khi soi dưới đèn UV.

Dùng thiết bị đo mật độ

quang

c

• Thiết bị sẽ đo cường độ và so sánh giữa:

 Tia phản xạ (hoặc tia tán xạ, tia phát xạ

huỳnh quang…) từ bề mặt bản mỏng nơi có

chất phân tích (trong thiết bị một chùm

tia)

 Tia sáng từ một phần của bản mỏng, nơi

không có chất phân tích (trong thiết bị hai

chùm tia)

• Sự thay đổi của cường độ tia sáng tỷ lệ với hàm

lượng của chất, được ghi lại dưới dạng các pic

a) Thiết bị một chùm tia

• Khả năng phát hiện vết trong SKLM là rất lớn, có thể áp dụng SKLM cho rất

nhiều các hợp chất không có màu

0 2

Ưu nhược

điểm của

SKLM

Phát hiện chất lạĐịnh tính, bán định lượng, định lượng

Dễ dàng Thực hiện cùng lúc nhiều mẫu

So sánh trực tiếp mẫu thử với mẫu đối chiếu

Tăng sự giãn rộng pic (tạo vết lớn) khi khoảng di chuyển lớn.

Không cho biết sự khác biệt giữa các chất đồng phân đối quang

Chỉ dùng khi cần tách số lượng ít

0 3

Ứng dụng

Định tính và thử độ tinh

khiết

a

• Về nguyên tắc, có thể xác định các chất nhờ giá trị Rf của chất đó Tuy nhiên,

vì giá trị Rf bị ảnh hưởng bởi rất nhiều yếu tố, độ lặp lại thấp nên trong thực

tế thường xác định các chất bằng cách SK so sánh chất phân tích với các

chất đối chiếu trên cùng một SK đồ Chất phân tích X được coi là tinh

khiết khi trên các SK đồ không có vết lạ khác

• Việc xác định thành phần các chế phẩm thuốc phức tạp bằng các phương pháp hoá học thường rất khó thực hiện SKLM có ưu điểm lớn trong việc phân

tích hỗn hợp nhiều thành phần do có khả năng tách và định tính riêng biệt

từng thành phần trong hỗn hợp

• Chuẩn bị mẫu phân tích và lượng chất phân tích đưa lên bản mỏng là những yếu tố quan trọng ảnh hưởng đến kết quả SK

Định tính và thử độ tinh

khiết

a

• Tách chiết chất phân tích trong vết SK bằng dung môi thích hợp

Sau khi làm sạch dịch chiết, chất phân tích được định lượng bằng phương pháp thích hợp (quang phổ UV – Vis, quang phổ huỳnh quang, điện hóa…) Phương pháp ngày nay ít được sử dụng

• Định lượng trực tiếp trên bản mỏng:

 Sử dụng thiết bị đo mật độ quang (densitometer): Dựa và chiều

cao hay diện tích pic của vết chất phân tích và vết chất đối chiếu

 Xử lý với camera kỹ thuật số: quét bản mỏng với hệ thống phân tích

0 4

Câu hỏi

Câu hỏi

Câu 2: Vì sao trị số Rf có độ lặp lại thấp ?

A Do tốc độ dòng pha động thấp

B Do tốc độ dòng pha động cao

C Do thành phần dung môi thay đổi trong quá trình khai

triển sắc kí D Cả 3 đáp án đều sai

Câu hỏi

Câu 3: Thiết bị đo mật độ quang (densitometer) dùng để:

A Phát hiện vết trong bán định lượng và định lượng bằng SKLM.

B Đo mật độ quang của dịch chiết mẫu thử.

C Xác định khối lượng riêng của dung dịch mẫu thử

D Đinh tính mẫu thử bằng cách phun thuốc thử hiện màu.

Câu hỏi

Câu 4: Để phát hiện vết trong SKLM, người ta thường sử dụng:

A Đầu dò UV – Vis, đầu dò quang phổ hấp thụ nguyên tử.

B Đầu dò huỳnh quang, đầu dò cộng kết điện tử.

C Phun thuốc thử hiện màu, soi đèn UV

D Đầu dò MS, đầu dò điện hóa.

TÀI LIỆU THAM KHẢO

1 Giáo trình Hóa phân tích tập 2, PGS.TS Vĩnh Định, PGS.TS Võ Thị Bạch Huệ, nhà xuất bản Y học

2

https://nhathuocngocanh.com/phuong-phap-sac-ki-lop-mong-va-nhung-ung-dung-trong-thuc-tien/