SKLM DƯỢC LIỆU CHỨA ANTHRANOID I PHƯƠNG PHÁP SKLM 1 Nguyên Tắc Dựa vào hệ số phân tách khác nhau của chất cần phân tích giữa 2 pha pha động và pha tĩnh Chất cần phân tích được hấp phụ ( hoặc phân bố,[.]
SKLM DƯỢC LIỆU CHỨA ANTHRANOID I PHƯƠNG PHÁP SKLM Nguyên Tắc Dựa vào hệ số phân tách khác chất cần phân tích pha: pha động pha tĩnh Chất cần phân tích hấp phụ ( phân bố, trao đổi ion) pha tĩnh, pha động chạy qua pha tĩnh đồng thời kéo theo chất cần phân tích, Dựa vào hệ số phân bố khác chất pha động pha tĩnh ta tách riêng thành phần hỗn hợp cần phân tích Các thành phần sau tách riêng biệt khỏi hỗn hợp lưu giữ pha tĩnh Sau nhận biết chất cần phân tích ánh sáng thường ( chất phân tích có màu) soi huỳnh quang bước sóng 254nm, 366nm phun thuốc thử màu, quét lên bề mặt mỏng thiết bị densitometer – thiết bị đo cường độ phản xạ ánh sáng từ khả kiến chất cần phân tích…Tùy thuộc chất chất cần phân tích ta sử dụng phương pháp để phát vết chất hỗn hợp cần phân tích Các đại lượng đặc trưng a Hệ số lưu giữ R f Đại lượng đặc trưng cho mức độ dịch chuyển chất phân tích hệ số lưu trữ R f Trị số tính tỷ lệ khoảng cách di chuyển chất phân tích khoảng cách dịch chuyển pha động Rf= dR dM Trong đó: d R khoảng cách từ điểm xuất phát đến tâm vết phân tích (cm) d M khoảng cách từ điểm xuất phát đến mức dung môi pha động (đo đường vết, tính cm) R f có giá trị dao động b Hệ số lưu trữ tương đối Rr Rr = dR, x d R ,c Trong đó: d R , x đường chất cần phân tích (cm) d R ,c đường chất chuẩn (cm) ( Giá trị Rr gần chất cần phân tích chất chuẩn đồng nhất) Ứng dụng a Định tính Thường dựa vào trị số R f mẫu thử mẫu chuẩn chạy sắc ký điều kiện Đôi sắc ký không liên tục không xác định tuyến dung môi pha động, người ta dùng hệ số lưu giữ tương đối Rr để đặc trưng cho chất phân tích b Thử tinh khiết Dùng SKLM để kiểm tra mức độ tinh khiết hợp chất thể vết lạ sắc ký đồ c Định lượng Có cách để định lượng chất vết sắc ký Cách 1: Tách chiết chất phân tích sắc ký dung mơi thích hợp Sauk hi làm dịch chiết, định lượng chất phân tích kỹ thuật thích hợp phổ hấp thụ, huỳnh quang, cực phổ…Phương pháp người dung có nhiều trở ngại lại nhiều thời gian Cách 2: Định lương trực tiếp mỏng Đo diện tích hay cường độ màu vết ký Hiện dung ký thuật: Densitometer: Chiếu chum tia vào vết sắc ký đo cường độ huỳnh quang Xử lý án sang với camera kỹ thuật số: Quét mỏng với hệ thống phân tích hình ảnh, camera kỹ thuật số có độ phân giải cao để thu nhận hình ảnh vết sắc ký Xử lý liệu máy tính ... người ta dùng hệ số lưu giữ tương đối Rr để đặc trưng cho chất phân tích b Thử tinh khiết Dùng SKLM để kiểm tra mức độ tinh khiết hợp chất thể vết lạ sắc ký đồ c Định lượng Có cách để định lượng