Báo cáo vi sinh bệnh Động vật phần virus

Protein Virus:Bốn protein capsid, 1A, 1B, 1C và 1D còn được gọi là VP4, VP2, VP3 và VP1, tương ứng, được mã hóa bởi nửa đầu N của ORF và ngoại trừ 1A, đó là được loại trừ khỏi bề mặt vir

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP.HCM VIỆN KHOA HỌC VÀ ỨNG DỤNG

KHOA CHĂN NUÔI – THÚ Y

BÁO CÁO

VI SINH BỆNH ĐỘNG VẬT

PHẦN VIRUS

GIẢNG VIÊN: TRẦN THANH PHONG

LỚP: 21DTYB1

SINH VIÊN: NGUYỄN TRỌNG PHÚC - 2187501216

ĐỀ 9 VIRUS CHUẨN ĐOÁN PHÂN BIỆT 3 LOẠI VIRUS SAU

LỞ MỒM LONG MÓNG (FMD),

DỊCH TẢ HEO TAI XANH (PRRS),

DỊCH TẢ HEO CHÂU PHI (ASF)

LỞ MPPMF LONG MÓNG (FMD)

1 Giới thiệu:

Họ Picornaviridae là những vi rút ARN sợi đơn, nhỏ, không có

vỏ bọc với capsid giả T=3 icosahehral có kích thước 25 - 30 nm,

bao gồm nhiều chi bao gồm chi Enterovirus ( ví dụ: vi rút bại

liệt, virut mũi người, enterovirus 71), chi Aphthovirus ( ví dụ :

FMDV và Vi rút viêm mũi ngựa A— ERAV) và chi Cardiovirus

(ví dụ: mengovirus) Vi-rút lở mồm long móng (LMLM) là một loại vi-rút rất

dễ lây lan, chịu trách nhiệm gây ra các bệnh nghiêm trọng ở vật nuôi Các đợt bùng phát FMDV lớn, chẳng hạn như đợt bùng phát ở Anh năm 2001 cũng ảnh hưởng đến các nước EU khác, là một lời nhắc nhở về hậu quả kinh tế tê liệt của mầm bệnh có khả năng lây nhiễm cao này

2 Hệ gen và protein virus:

a Hệ gen:

Tổ chức bộ gen FMDV tương tự như tổ chức của các picornavirus khác, bao gồm một khung đọc mở đơn lớn (ORF) được bao quanh bởi các vùng 5′ và 3′ chưa được dịch mã có cấu trúc cao (tương ứng là 5′ UTR và 3′ UTR 5′ UTR bao gồm, từ đầu 5′, một đoạn “ngắn” (S) 350 đến 380 nucleotide (nt), một

đường poly(C) 100 đến 420 nt (90% C), và đầu cuối xấp xỉ 700-nt 5′ của đoạn gen “dài” (L), chứa ba hoặc bốn nút giả lặp lại song song, một yếu tố sao chép tác động cis vòng gốc ( cre ), và một vị trí xâm nhập ribosome bên trong loại II

( IRES) FMDV 5′ UTR đóng vai trò quan trọng trong việc bắt đầu dịch mã độc lập với cap của polyprotein của virus và trong quá trình sao chép bộ gen của virus. 3′ UTR dài khoảng 90 nt và được cho là có chứa các yếu tố hoạt động cis cần thiết để sao chép bộ gen hiệu quả

Sơ đồ hệ gen

b Protein Virus:

Bốn protein capsid, 1A, 1B, 1C và 1D (còn được gọi là VP4, VP2, VP3 và VP1, tương ứng), được mã hóa bởi nửa đầu N của ORF và ngoại trừ 1A, đó là được loại trừ khỏi bề mặt virion, có liên quan đến tính kháng nguyên và liên kết với một tập hợp con các integrin phụ thuộc vào RGD và các thụ thể

proteoglycan heparan sulfat trên bề mặt tế bào Các protein phi cấu trúc đại diện cho khoảng hai phần ba số protein được mã hóa ORF và bao gồm L pro , 2A, 2B, 2C, 3A, 3B, 3C pro và 3D pol Quá trình xử lý polyprotein FMDV

được trung gian bởi L pro , 3C pro và 2A L chuyên nghiệp là một protease

giống như papain, ngoài việc tự cắt bỏ chính nó khỏi polyprotein, còn tách yếu

tố khởi tạo dịch mã tế bào eIF4G, dẫn đến ngừng dịch mã phụ thuộc vào nắp vật chủ 3C pro , một thành viên của họ trypsin serine proteinase, thực hiện tất

cả trừ ba quá trình phân tách dẫn đến protein virus trưởng thành và cũng phân

tách protein tế bào chủ FMDV 2A làm trung gian cho quá trình tự phân cắt ở

đầu C của nó, rõ ràng là bằng cách gây ra sự bỏ qua ribosome trong quá trình

tổng hợp polyprotein.

3 Tính chất nuôi cấy và nhân lên:

FMDV serotype A10 61 được nuôi cấy trong dòng tế bào thận của chuột

đồng con, BHK-21 (tế bào BHK-21 (clone 13) đã được duy trì tại Viện Pirbright từ năm 1965) và được tinh chế như mô tả trước đây Tóm lại, các tế bào bị nhiễm bệnh đã được thu hoạch ở mức CPE tối đa, làm tan băng và ly giải được cô đặc bằng cách kết tủa với amoni sunfat. Các hạt được tạo thành viên thông qua lớp đệm sucrose 30% (w/v) trong PBS và được tinh chế bằng cách lắng trong gradient mật độ sucrose 15–45% (w/v) trong PBS Virus tinh khiết được tổng hợp từ các phân số gradient cực đại, được định lượng bằng độ hấp thụ ở bước sóng 260nm (trong đó mật độ quang học là 7,7 = 1 mg/ml) và

được bảo quản ở -80°C.

4 Kháng nguyên và miễn dịch:

Nhiều yếu tố kết hợp lại khiến bệnh lở mồm long móng (FMD) trở thành một trong những bệnh nguy hiểm và khó chữa nhất ở động vật Trong vài năm gần đây, người ta đã chứng minh rằng protein capsid VP1, được phân lập từ

virion loại A và C hoặc được sinh tổng hợp ở E coli biến đổi với gen VP1, có

thể được sử dụng để tạo miễn dịch cho vật nuôi chống lại bệnh LMLM Việc chủng ngừa cho vật nuôi cũng đã đạt được với một đoạn 13 kd (dư lượng axit amin từ 55 đến 179) được phân cắt bằng CNBr từ chuỗi VP1 dài 213 axit amin của virion loại A Các vị trí miễn dịch trên virion nguyên vẹn, Các hạt

tiểu đơn vị 12 S và chuỗi VP1 được phân lập đã được nghiên cứu bằng sự kết hợp của nhiều phương pháp, bao gồm: đánh giá khả năng sinh miễn dịch của các đoạn đặc hiệu VP1 và các peptit tổng hợp và lập bản đồ các kháng thể đơn

Các hạt FMDV từ trong ra ngoài

dòng (Mabs) được tạo ra với vi rút, VP1 và đoạn 13 kd với vi rút , 12 tiểu đơn

vị S , VP1, các mảnh đặc trưng cho VP1 và 32mer sinh tổng hợp Mối tương quan giữa các kết quả này với các vị trí có sự biến đổi trình tự biến thể và kiểu huyết thanh chỉ ra rằng vùng 136-179 của loại A12 VP1 sở hữu bốn văn bia

đặc hiệu trung hòa giả định (khoảng 137-143, 146-151, 152-157 và 170-175)

5 Sức đề kháng:

Vi rút lở mồm long móng (LMLM) mất khả năng lây nhiễm và khả năng

sinh miễn dịch do bị phân ly trong môi trường nuôi cấy dưới pH 6,8. Để nghiên cứu cơ sở phân tử của tính kháng vi-rút đối với sự phân ly do axit gây ra và cải thiện tính ổn định axit của vắc-xin FMD bất hoạt trong quá trình sản xuất, các đột biến FMDV loại O có khả năng kháng bất hoạt axit tăng đã được chọn và các gen mã hóa protein capsid của chúng đã được giải trình tự Ba axit amin

thay thế (VP1 N17D, VP2 D86A và VP4 S73N) đã được tìm thấy trong tất cả các đột biến Khi những sự thay thế này được đưa vào bảy dòng vô tính FMDV

lây nhiễm một mình hoặc kết hợp, một sự thay thế axit amin duy nhất trong

protein VP1, N17D, cũng xuất hiện trong các đột biến kháng axit FMDV loại

C, được phát hiện là nguyên nhân làm tăng khả năng kháng axit đối với FMDV loại O Ngoài ra, mặc dù khả năng thích nghi của vi-rút bị giảm trong

các điều kiện nuôi cấy tiêu chuẩn, nhưng động lực phát triển và độc lực của vi-rút không bị thay đổi đáng kể ở vi-vi-rút đột biến rN17D được giải cứu bằng sự

thay thế VP1 N17D

6 Dịch tễ học và biểu hiện lâm sàng:

a Dịch tễ học:

- Tỷ lệ mắc tích lũy tổng thể được tính bằng cách chia tổng số động vật có dấu hiệu bệnh LMLM cho tổng số động vật trong trang trại vào ngày trước khi dịch bùng phát Tính toán này được lặp lại cho tỷ lệ mắc bệnh tích lũy trong mỗi

loại động vật, trong đó số lượng động vật bị bệnh có dấu hiệu bệnh LMLM

trong mỗi loại được chia cho số lượng động vật trong cùng loại Tỷ lệ chết tích lũy được tính toán theo cách tương tự, sử dụng số lượng động vật chết có triệu chứng lâm sàng của bệnh LMLM làm tử số

- Do dữ liệu quá phân tán (các tham số phân tán ở bò sữa = 4,8, bò thịt = 1,4

và lợn = 55,5), không thể sử dụng mô hình hồi quy Poisson, nhưng mô hình hồi quy Poisson tổng quát và nhị thức âm được coi là những lựa chọn thay thế phù hợp Mô hình đầy đủ được trang bị bằng cách sử dụng cả hồi quy Poisson

tổng quát và hồi quy nhị thức âm và được thử nghiệm về lạm phát bằng 0 bằng gói DHARMa. Nếu cả hai mô hình đều có thể xử lý lạm phát bằng không, thì

mô hình có tiêu chí thông tin Akaike (AIC) thấp hơn đã được chọn Sau đó, quy

trình chọn ngược từng bước được tiến hành để chọn mô hình cuối cùng bằng cách loại trừ các biến độc lập khỏi mô hình lồng nhau đầy đủ cho đến khi xác định được mô hình có AIC thấp nhất

- Dữ liệu về tỷ lệ tử vong được phân tích dưới dạng kết quả nhị phân (không có/có mặt của động vật chết với các triệu chứng lâm sàng của bệnh LMLM)

Phép thử Chi bình phương được sử dụng để xác định ý nghĩa thống kê của

mối liên quan giữa sự hiện diện của động vật chết với bệnh LMLM và loại động vật hoặc thực hành tiêm phòng Nếu số đếm dự kiến trong ô của bảng

ngẫu nhiên nhỏ hơn năm, thì phép thử chính xác của Fisher được sử dụng để thay thế

b Biểu hiện lâm sàng:

- Các dấu hiệu lâm sàng của bệnh LMLM được đặc trưng bởi các mụn nước ở chân, miệng và núm vú Virus bắt đầu bài tiết 2 ngày trước khi xuất hiện các dấu hiệu lâm sàng (4 ngày đối với sữa), và

có thể phát hiện kháng thể từ 3-5 ngày sau

khi xuất hiện các dấu hiệu lâm sàng Lượng

kháng thể cao đạt được sau 2–4 ngày và

duy trì trong nhiều tháng Virus biến mất khi xuất hiện kháng thể ở hầu hết các

bộ phận của cơ thể Tuy nhiên, nó tiếp tục được phát hiện đặc biệt trong dịch thanh quản-hầu họng

- Kháng thể SP thường bắt đầu xuất hiện khoảng 3–4 ngày sau khi xuất hiện

các dấu hiệu lâm sàng, trong khi 6–7 ngày đối với kháng thể NSP

DỊCH TẢ HEO TAI XANH (PRRS)

1 Giới thiệu:

PRRSV thuộc họ Arteriviridae trong chi Arterivirus, bộ Nidovirales Nhóm này cũng bao gồm vi-rút làm tăng lactate dehydrogenase (LDV) của chuột, vi-rút viêm động mạch ở ngựa (EAV) và vi-rút sốt xuất huyết ở khỉ (SHFV) PRRSV là một loại virus nhỏ, có vỏ bọc, đường kính 45-70 nm Virus PRRS có hình thái đa hình Virion có dạng hình cầu đến hình bầu dục với kích thước dao động

từ khoảng 50 đến 65 nm, lõi rỗng, nhiều lớp có đường kính khoảng 40 nm và

bề mặt ngoài nhẵn có nhúng phức hợp protein vỏ

2 Hệ gen và protein virus:

- Bộ gen được bao bọc bởi nucleocapsid được cấu thành từ một chuỗi hai lớp gồm các homodimer protein nucleocapsid bó thành một quả bóng rỗng Lõi nucleocapsid được bao quanh bởi một màng lipid, vỏ bọc nơi các protein cấu trúc được nhúng vào

- Bộ gen của nó bao gồm một phân tử

polycystronic RNA cảm giác dương

polyadenyl hóa, sợi đơn, không phân

đoạn, có kích thước 15,1-15,5 kb Nó

chứa, theo hướng 5' đến 3', chuỗi dẫn

đầu 5', ít nhất 10 khung đọc mở (ORF1a, ORF1b và ORF 2a, 2b, 3, 4, 5, 5a, 6

và 7) và 3' vùng không dịch. ORF1a và ORF1b nằm ngay phía dưới của đầu 5'

và mã hóa một polyprotein sao chép lớn, được cho là tự phân giải protein

thành ít nhất 13 protein phi cấu trúc nhỏ hơn bao gồm cả RNA polymerase phụ

thuộc RNA của virus Gần đây, protein mã hóa chuyển khung (nsp2TF) do sự dịch chuyển khung ribosome trong vùng tương ứng với protein phi cấu trúc 2

đã được mô tả ORF 2a, ORF2b và ORF 3 đến 7 lần lượt mã hóa các protein

cấu trúc GP2a, 2b (còn được định nghĩa là “protein E”), GP3, GP4, M và N.

Những protein này được thể hiện từ một tập hợp 3' các mRNA con được lồng vào nhau GP5, được mã hóa bởi ORF5, là protein vỏ chính và được cho là có liên quan, đơn lẻ hoặc dưới dạng các dị vòng GP5-M, trong quá trình gắn và xâm nhập của virus vào các tế bào đích GP5 chứa epitope trung hòa chính của PRRSV

3 Kháng nguyên và miễn dịch:

a Kháng nguyên:

Để nghiên cứu tính biến đổi kháng nguyên của virus hội chứng hô hấp và sinh sản ở lợn (PRRSV), 18 chủng phân lập tại châu Âu và Canada đã được phân tích với một nhóm gồm 15 kháng thể đơn dòng (MAbs) được tạo ra để chống lại 5 chủng virus PRRS khác nhau của châu Âu và một Canada Hai nhóm kháng nguyên chính đã thu được, phân biệt giữa quần thể người Châu Âu

và Canada, như được minh họa bằng khoảng cách lớn được quan sát giữa các chủng phân lập ở Châu Âu và Canada (D = 0,5619 +/- 0 0625) so với khoảng cách giữa các dòng phân lập ở châu Âu (D = 0,1524 +/- 0,0735) Ma trận khoảng cách cũng cho phép xây dựng sơ đồ cây Phân tích Bootstrap đã được thực hiện để kiểm tra độ tin cậy trong phân nhánh Sơ đồ cây khẳng định sự khác biệt giữa các quần thể PRRSV ở Châu Âu và ở Canada Tính biến đổi kháng nguyên giữa một chủng phân lập và thế hệ con cháu của nó được phục hồi sau một hoặc hai lần truyền trong cơ thể sống đã được kiểm tra trên sáu chủng Nó bị hạn chế đối với protein GP3 của virus

b Sự miễn dịch:

Mục tiêu của những nghiên cứu này là mô tả đặc điểm đáp ứng miễn dịch đối với PRRSV với sự nhấn mạnh vào miễn dịch qua trung gian tế bào Nỗ lực tăng cường đáp ứng miễn dịch gây ra bởi PRRSV giảm độc lực bằng cách sử dụng đồng thời một chất bổ trợ, đã được chứng minh là có hiệu quả với vắc-xin

PRV giảm độc lực, đã thất bại Sau đó, các nghiên cứu đã được thực hiện để

giải quyết liệu mạng lưới cytokine có ảnh hưởng đến phản ứng miễn dịch thứ cấp đối với PRRSV hay không. Interleukin-12 (IL-12) được chứng minh là tăng lên; trong khi đó, EL-10 làm giảm tần số của các tế bào tiết gamma IFN

trong bộ nhớ phản ứng để gọi lại kháng nguyên virus trong ống nghiệm Ngoài

ra, việc sử dụng đồng thời protein IL-12 tái tổ hợp hòa tan hoặc plasmid chứa

cDNA mã hóa protein này với vắc-xin PRRS MLV dẫn đến các phản ứng của tế bào T IFN-gamma T được tăng cường tạm thời trong cơ thể Ngoài ra, khả năng của polynucleotide dsRNA tổng hợp, axit polyinosinic:axit polycytidylic (poly I:C), được tạo phức với poly-L-lysine và carboxymethylcellulose (poly ICLC), được biết là có khả năng tạo ra IL-12, đã được thử nghiệm về khả năng

tăng cường khả năng miễn dịch đặc hiệu với PRRSV do vắc-xin gây ra Trong

khi việc sử dụng đồng thời vắc-xin MLV với rIL-12 hoặc cDNA EL-12 chứa

plasmid có khả năng miễn dịch qua trung gian tế bào đặc hiệu được tăng cường

tạm thời, thì việc sử dụng đồng thời vắc-xin MLV và poly ICLC dẫn đến sự gia

tăng bền vững hơn về tần suất vi-rút- phản ứng IFN-gamma cụ thể Do đó, các cytokine có thể tăng cường các phản ứng miễn dịch qua trung gian tế bào do

vắc-xin PRRS MLV gây ra

4 Sức đề kháng:

PRRS là một trong những bệnh thách thức nhất đối với chăn nuôi lợn trên toàn thế giới Những nỗ lực để kiểm soát bền vững tai họa này bằng cách tiêm phòng vẫn chưa được đáp ứng đầy đủ Với kiến thức và phương pháp ngày càng tăng về khả năng kháng bệnh, một nỗ lực mới trên toàn thế giới đã được bắt đầu để hỗ trợ cuộc chiến chống lại các bệnh ở động vật, dựa trên sự tồn tại của các biến thể gen có giá trị liên quan đến bất kỳ tương tác giữa vật chủ và mầm bệnh Một số nhóm đã đưa ra vô số bằng chứng về sự biến đổi tự nhiên về tính kháng/mẫn cảm với PRRS trong các dòng giống thương mại của chúng tôi Tuy nhiên, cho đến nay, việc khai thác biến thể hiện có đã thất bại do khó phát hiện người mang alen thuận lợi và bất lợi, đặc biệt là đối với các tính trạng đa gen phức tạp như kháng PRRS Hy vọng mới đến từ các công cụ bộ gen mới như giải trình tự thế hệ tiếp theo đã trở nên cực kỳ nhanh và giá thấp Do đó, nghiên cứu đang bùng nổ trên toàn thế giới và trò chơi ghép hình đang được lấp đầy – từ từ nhưng đều đặn Mặt khác, kiến thức từ nghiên cứu cơ bản về virus học và y sinh học đã mở đường cho một “phương pháp can thiệp”, tức là sự biến đổi của các gen then chốt đã được xác định chiếm vị trí then chốt trong cơ chế bệnh sinh của PRRS, như CD163 CD163 được xác định là thụ thể nổi bật trong sự xâm nhập của PRRSV và việc loại bỏ nó khỏi bộ gen bằng cách chỉnh sửa gen đã dẫn đến việc tạo ra những con lợn kháng hoàn toàn với PRRSV – một cột mốc quan trọng trong chăn nuôi lợn hiện đại Cuối cùng, tầm quan trọng của CD163 đối với cân bằng nội môi, nhu cầu phòng thủ và miễn dịch cần có cái nhìn sâu sắc hơn trước khi có thể trả lời sự im lặng hoàn toàn hoặc một phần của nó

5 Dịch tễ học và biểu hiện lâm sàng:

a Dịch tễ học:

Một đặc điểm quan trọng của virus là khả năng tồn tại lâu dài ở lợn mang mầm bệnh (hơn 200 ngày) Tuy nhiên, quan sát thực địa cho thấy rằng hầu hết lợn bị nhiễm bệnh cuối cùng trở nên miễn dịch, sau đó ngừng thải vi-rút sau 60 ngày kể từ khi nhiễm bệnh Điều này đi kèm với sự suy giảm ổn định về hiệu giá kháng thể trong khoảng thời gian từ 4 đến 8 tháng sau khi nhiễm bệnh Người mang mầm bệnh có lẽ là cách phổ biến nhất để đưa vi rút vào đàn hoặc quần thể lợn Vi-rút này có khả năng lây nhiễm cao (liều lây nhiễm chỉ bằng 10 virion) nhưng không có khả năng lây nhiễm cao Nó hiện diện trong dịch tiết mũi, nước tiểu, tinh dịch, dịch tiết tuyến vú và phân Với sự ra đời của thụ tinh nhân tạo, tinh dịch trở thành nguồn lây lan virus chính Virus lây lan dễ dàng khi tiếp xúc trực tiếp Có bằng chứng thực nghiệm hạn chế về sự lan truyền sol khí giữa các trang trại nhưng ý kiến mang tính giai thoại cho thấy nó xảy ra ít nhất là lẻ tẻ Trong một số trường hợp, nhiễm trùng được biểu hiện như một dịch bệnh đường hô hấp hoặc suy sinh sản nhưng trong các đợt bùng phát khác, nhiễm trùng có thể lây lan chậm Nhìn chung, sự lây truyền vi-rút giữa các nhóm lợn vẫn chưa được hiểu rõ Cuộc tranh luận vẫn tiếp tục về vai trò của cả nguồn lây nhiễm dọc và/hoặc bên trong các đợt bùng phát mới

b Biểu hiện lâm sàng:

- Lợn nái, lợn nái và lợn đực giống trong độ

tuổi sinh sản: Các dấu hiệu lâm sàng có thể

bao gồm chán ăn, sốt, thờ ơ, trầm cảm và có

thể bị suy hô hấp hoặc nôn mửa Chứng xanh tím nhẹ ở tai, bụng và âm hộ đã được báo cáo trong một số vụ dịch Các vấn đề về sinh sản, thường là dấu hiệu

rõ ràng nhất, bao gồm giảm số lượng lợn mẹ thụ thai hoặc đẻ Thường có sự gia tăng về tỷ lệ đẻ non, sảy thai muộn, heo con chết non hoặc heo con yếu ớt và thai chết lưu Tỷ lệ chết trước khi cai sữa cao Heo con bú có thể bị khó thở (“thumping”) Ngoài ra, đàn gia súc có thể bị nhiễm nhiều chủng vi rút PRRS

dị loại, không hoàn toàn bảo vệ chéo Ở lợn đực giống, dấu hiệu lâm sàng giống lợn nái và kèm theo giảm chất lượng tinh dịch

- Các dấu hiệu lâm sàng chủ yếu ở lợn con là sốt, ủ rũ, lờ đờ, còi cọc do bệnh toàn thân và viêm phổi Hắt hơi, sốt và thờ ơ, sau đó là khó thở khi thở ra và còi cọc Tuổi mắc bệnh đường hô hấp cao nhất là từ bốn đến mười tuần Tỷ lệ

tử vong sau cai sữa thường tăng rõ rệt, đặc biệt là với các chủng có độc lực cao hơn và sự xuất hiện của các bệnh nhiễm trùng thứ phát và nhiễm trùng đồng thời Lợn già, đặc biệt là lợn còn non, khỏe mạnh cũng có dấu hiệu hô hấp tương tự Nhiễm trùng dị loại có thể dẫn đến bùng phát bệnh hô hấp kéo dài hoặc lặp đi lặp lại

DỊCH TẢ HEO CHÂU PHI (ASF)

1 Giới thiệu:

Vi-rút dịch tả lợn châu Phi (ASFV) là một vi-rút DNA 2 mặt

có đường kính 200 nm bao gồm vỏ, capsid, màng nang bên trong, vỏ lõi và lõi bên trong Bộ gen của virus là một phân tử DNA sợi kép dài 170–190 kb tuyến tính với các đầu đóng liên kết cộng hóa trị Kích thước của DNA là 170kb-190kb tùy thuộc vào chủng vi-rút và mã hóa 150-200 protein vi-rút, bao gồm 68 protein cấu trúc và hơn

100 protein phi cấu trúc Sự lặp lại và mất đi một số trình tự nhất định trong bộ gen của ASFV là một trong những yếu tố dẫn đến sự khác biệt của các chủng ASFV từ các nguồn khác nhau hoặc các thế hệ khác nhau của cùng một chủng

2 Kháng nguyên và miễn dịch:

a Kháng nguyên:

Các protein p54 và p30 của virus ASF có tính kháng nguyên cao, được mã hóa bởi các gen E183L và CP204L tương ứng, được biểu hiện trong

baculovirus cho mục đích chẩn đoán Một phân tích so sánh trình tự của các gen này từ các chủng vi rút thực địa khác nhau, đa dạng về mặt địa lý và được phân lập trong các năm khác nhau, cho thấy rằng cả hai gen đều được bảo tồn hoàn toàn giữa các dòng phân lập Những phân tích so sánh này cho thấy p54 thể hiện khả năng phản ứng tốt hơn p30 Tuy nhiên, p30 tái tổ hợp hiệu quả hơn

để phát hiện kháng thể bằng ELISA, cải thiện sự phân biệt giữa huyết thanh dương tính và âm tính bằng kỹ thuật này Những dữ liệu này cho thấy sự tiện lợi của việc sử dụng p30 làm kháng nguyên ELISA, trong khi p54 nên là kháng nguyên được chọn để phát hiện kháng thể vi rút ASF bằng Western blot Việc

sử dụng kết hợp cả hai loại kháng nguyên để chẩn đoán huyết thanh bệnh ASF

sẽ cải thiện độ nhạy của việc phát hiện người mang mầm bệnh bẩm sinh, tạo điều kiện thuận lợi cho việc giải thích các xét nghiệm và loại bỏ việc sử dụng

vi rút ASF trong sản xuất kháng nguyên

b Sự miễn dịch:

Vắc-xin tiểu đơn vị chống lại ASFV sẽ làm giảm bớt những lo ngại về an toàn liên quan đến việc sử dụng vi-rút sống giảm độc lực và hiệu quả bảo vệ của các tổ hợp kháng nguyên ASFV khác nhau đã được thử nghiệm bằng các

cơ chế phân phối khác nhau Baculovirus thể hiện p30, p72, p54 và p22 (được

mã hóa bởi các gen CP204L, B646L, E183L và KP177R tương ứng) tạo ra các kháng thể trung hòa và trì hoãn sự xuất hiện của các dấu hiệu lâm sàng sau thử thách với chủng ASFV Pretoriuskop 96/4, nhưng cuối cùng đã không bảo vệ động vật khỏi bệnh nặng Miễn dịch với CD2 tương đồng được mã hóa bằng virus (CD2v/EP402R) được biểu hiện bằng các kháng thể do baculovirus tạo ra

có khả năng ức chế sự hấp thu máu và dẫn đến một số biện pháp bảo vệ chống lại thách thức với ASFV độc lực Việc chủng ngừa DNA bằng plasmid mã hóa

sự hợp nhất của miền ngoại bào của CD2v (EP402R) với p30 (CP204L) và p54 (E183L) đã tạo ra sự bảo vệ một phần chống lại sự phân lập E75 gây chết người thông thường khi khung đọc mở được hợp nhất với ubiquitin Khả năng miễn dịch do cả hai nghiên cứu tiêm chủng DNA này tạo ra có liên quan đến khả năng miễn dịch tế bào trong trường hợp không có phản ứng kháng thể Khả năng sinh miễn dịch của 40 gen ASFV khác nhau đã được kiểm tra bằng cách gây miễn dịch cho lợn bằng nhóm plasmid, sau đó tăng cường với nhóm vi rút vắc-xin tái tổ hợp biểu hiện 47 kháng nguyên có nguồn gốc từ 40 gen ASFV khác nhau Một số kháng nguyên mới đã được xác định và lợn được chủng ngừa sau đó thử thách với ASFV độc lực cho thấy lượng virus trong máu và tải lượng virus trong một số mô giảm Nhiều nghiên cứu gần đây đã chứng minh khả năng sinh miễn dịch của adenovirus thiếu sao chép (rAd) và vắc-xin biến đổi Ankara (MVA) biểu hiện một số kháng nguyên ASFV, bao gồm p72 (B646L), p54 (E183L), p30 (CP204L) và pp62 (CP530R)

3 Sức đề kháng:

- Khả năng sống sót khi bị nhiễm ASFv mà không phát triển các dấu hiệu lâm sàng rõ rệt đã được quan sát thấy ở lợn lòi Mặc dù tỷ lệ tử vong trong trường hợp lợn nhà bị nhiễm ASFv thường lên tới 100%, đã có báo cáo về những cá thể lợn nhà sống sót mà không phát triển các dấu hiệu lâm sàng rõ rệt của ASF

- Gen liên quan đến khả năng chống nhiễm ASFv được gọi là RELA Gen này khiến hệ thống miễn dịch phản ứng thái quá khi phát hiện ra bệnh, có thể gây ra những tác động hủy diệt ngay lập tức Sự khác biệt đáng kể trong biểu hiện gen RELA giữa heo kháng và heo mẫn cảm có liên quan đến phản ứng của vật chủ đối với nhiễm ASF RELA là một phần của yếu tố phiên mã nhân tố kappa-B, đóng vai trò quan trọng trong việc kiểm soát căng thẳng và bảo vệ miễn dịch Tuy nhiên, cần nghiên cứu thêm để báo cáo dữ liệu kiểu hình hỗ trợ tính kháng

di truyền đối với nhiễm ASF

4 Hệ gen và protein virus:

a Hệ gen:

Bộ gen Uvira ASFV được lắp ráp,

được gọi là Uvira B53, dài 180.916 bp

có thể được lắp ráp thành 2 nhánh Bộ gen Uvira B53 có hàm lượng GC là 38,5%, mã hóa 168 khung đọc mở (ORF) và có 98,8% nucleotide đồng nhất với kiểu gen ASFV tham chiếu X Kenya 1950 Mối quan hệ phát sinh gen với các bộ gen đại diện được chọn đã tập hợp chủng Uvira B53 cùng với kiểu gen ASFV X được báo cáo cho đến nay So sánh nhiều trình tự bộ gen với hai chủng X kiểu gen ASFV tham chiếu cho thấy 130 trong số 168 ORF được bảo tồn hoàn toàn trong Uvira B53 38 ORF khác khác nhau chủ yếu do SNP và indels (xóa và chèn) Hầu hết 46 gen họ đa gen (MGF) được xác định đều bị ảnh hưởng bởi các biến thể di truyền khác nhau Tuy nhiên, 8 ORF MGF có mặt ở Kenya 1950 và Ken05/Tk1 không có trong bộ gen Uvira B53 bao gồm

ba thành viên của MGF 360, bốn MGF 110 và một MGF 100 trong khi một MGF ORF (MGF 360-1L) ở cuối bên trái của bộ gen đã bị cắt bớt trong Uvira B53 Hơn nữa, ORFs DP96R và p285L cũng không có trong bộ gen của Uvira B53 Ngược lại, ORF MGF 110-5L có trong Uvira B53 và Ken05/Tk1 đã biến mất ở Kenya năm 1950

b Protein:

Có nhiều protein được mã hóa bởi bộ gen của ASFV Những protein này có vai trò trong các giai đoạn khác nhau của chu kỳ lây nhiễm virus Hơn 50 protein được đóng gói thành các hạt vi rút và là thành phần chính của các hạt vi rút đóng vai trò trong giai đoạn đầu của quá trình lây nhiễm vi rút Các protein pp220 và pp62 tạo thành các thành phần chính của vỏ lõi trong virion pp220

và pp62 có thể được phân cắt để tạo ra các protein virion trưởng thành p150, p37, p14, p34, p35 và p15 bởi protease giống SUMO được mã hóa bởi vi rút S273R Những protein này có vai trò quan trọng trong quá trình lắp ráp capsid của virus p54 định vị trên màng ngoài lipid của các hạt vi rút và tham gia vào quá trình xâm nhập của ASFV và đóng vai trò là protein cấu trúc xuyên màng p54 rất quan trọng cho việc tuyển dụng và biến đổi màng ER thành tiền chất của vỏ virus Protein này, cùng với p30 và các protein khác, được coi là một protein kháng nguyên khả thi trong việc phát triển chẩn đoán huyết thanh học p72 với đặc tính kháng nguyên và sinh miễn dịch cao đóng vai trò là thành phần chính của icosahedron virus Protein nằm trên bề mặt capsid của virus và được biểu hiện muộn trong quá trình nhiễm virus

5 Dịch tễ học và biểu hiện lâm sàng:

a Dịch tễ học:

- ASF lần đầu tiên được báo cáo từ Đông Phi vào năm 1921 Nó cũng được báo

cáo ở miền nam, miền trung và Tây Phi vào đầu những năm 1900 và được duy trì ở một trong ba chu kỳ lây truyền khác nhau: chu kỳ sylvatic, ve-lợn nhà và lợn nhà Bồ Đào Nha bùng phát ASF vào năm 1957, lần đầu tiên bên ngoài Châu Phi Một số đợt bùng phát khác sau đó đã xảy ra ở Tây Âu vào những năm 1970 và 1980 Dịch ASF bùng phát ở Nam và Bắc Mỹ chủ yếu xảy ra vào những năm 1980 Đến nay, Papua New Guinea là quốc gia Úc duy nhất báo cáo đợt bùng phát ASF đầu tiên vào năm 2020.Sự lây lan của vi rút ASF có thể là

do sự tăng trưởng về số lượng và sản lượng của lợn; sự hiện diện của một quần thể lợn không có triệu chứng ổ chứa; và toàn cầu hóa Trong thế kỷ 21, các đợt bùng phát ASF đã được báo cáo từ một số quốc gia Châu Âu, Châu Phi, Châu

Á và Thái Bình Dương