Đề tài nghiên cứu khoa học cấp Trường: Ứng dụng nguồn gen xạ khuẩn của Việt Nam trong phòng trừ bệnh hại do vi sinh vật gây ra trên giống sâm bản địa Panax L. có giá trị cao

NỘI DUNG NGHIÊN CỨUChương 1: Cơ sở lý luận và thực tiến về đối tượng nghiên cứu Nghiên cứu về sâm Panax vietnamensis ở Việt Nam Bệnh hại trên sâm do vi sinh vật và phương thức kiểm soát

MẪU 13/KHCN(Ban hành kèm theo Quyết định số 3149 /OD-'ĐHQGIN ngày 20 tháng 09 năm 2022

của Giám đốc Đại học Quốc gia Hà Nội)

ĐẠI HỌC QUOC GIA HÀ NỘI

BAO CÁO TONG KET

KET QuA THUC HIEN NHIEM VU KH&CN

CAP DAI HỌC QUOC GIA HÀ NOI

Tên nhiệm vu: Điều tra tiềm năng hoạt tính sinh học của nguồn gen xạ khuẩn

| của Việt Nam nhằm khai thác phục vụ nền nông nghiệp hữu cơ (Nhiệm vụ hàng năm)

Năm 2022: Ứng dụng nguồn gen xạ khuẩn của Việt Nam trong phòng trừ bệnh

hại do vi sinh vật gây ra trên giông sâm ban địa Panax L có giá trị cao.

Mã số nhiệm vụ:

Chủ nhiệm nhiệm vụ: TS Nguyễn Thị Hải

Hà Nội, 2024

PHÀN I THÔNG TIN CHUNG

1 Tên nhiệm vụ: Điều tra tiềm năng hoạt tính sinh học của nguồn gen xạ khuẩn của Việt Nam nhằm khai thác phục vụ nền nông nghiệp hữu cơ (Nhiệm vụ hàng năm).

Năm 2022: Ung dụng nguồn gen xạ khuẩn của Việt Nam trong phòng trừ bệnh hại do vi sinh vật gây ra trên giống sâm bản địa Panax L có giá trị cao.

2 Mã số: SNKT2022

3 Danh sách thành viên tham gia thực hiện nhiệm vụ

ién VSV & CNSH hư ký/thành viên chính ién VSV & CNSH hành viên chính

ién VSV & CNSH hành viên chính ién VSV & CNSH hành viên chính iện VSV & CNSH [Thanh viên chính

nS Dương Thị Phúc Hậu ign VSV & CNSH

4 Đơn vị chủ trì: Viện Vi sinh vật và Công nghệ sinh hoc, DHQGHN

hành viên chính/NCS

5 Thời gian thực hiện:

5.1 Theo hợp đồng: 12 tháng, từ tháng 12 năm 2022 đến tháng 12 năm 2023

5.2 Gia hạn (nếu có): 12 tháng, từ tháng 12 năm 2023 đến hết tháng 11 năm 2024 5.3 Thực hiện thực tế: 18 tháng, từ tháng 12 năm 2022 đến tháng 7 năm 2024

6 Tổng kinh phí được phê duyệt của nhiệm vụ: 490 triệu đồng.

7 Những thay déi so với thuyết minh ban đầu (nếu có): Không có thay đổi.

(Về mục tiêu, nội dung, phương pháp, kết quả nghiên cứu và tổ chức thực hiện Nêu rõ ly

do thay đổi)

PHẢN II NỘI DUNG NGHIÊN CỨU

Chương 1: Cơ sở lý luận và thực tiến về đối tượng nghiên cứu

Nghiên cứu về sâm Panax vietnamensis ở Việt Nam

Bệnh hại trên sâm do vi sinh vật và phương thức kiểm soát Chương 2: Phương pháp nghiên cứu và số liệu điều tra, phân tích

Vật liệuCác phương pháp nghiên cứuChương 3: Kết quả nghiên cứu và thảo luận Điều tra bệnh hại chính do vi sinh vật gây ra trên hai giống sâm bản địa

Ngọc Linh và Lai Châu trong quá trình canh tác

Xác định một số tác nhân vi sinh vật gây bệnh chính trên trên cây sâm

Ngọc Linh và sâm Lai ChâuTìm kiếm các chủng xạ khuẩn/vi khuẩn đối kháng nắm bệnh

Kết luận

Kiến nghị

Tài liệu tham khảo

PHAN 3: TOM TAT KET QUA NGHIÊN CỨU VA ĐÀO TẠO PHAN IV TINH HÌNH SỬ DỤNG KINH PHÍ

PHU LUC

Phu luc 1: Bang téng hop két qua diéu tra bénh trén cây sâm Ngoc Linh

và sâm Lai Châu

Phụ lục 2: Hồ sơ các chủng gây bệnh đã báo cáo Phụ lục 3: Kết quả sàng lọc 100 chủng xạ khuẩn về hoạt tính kháng nắm

và vi khuân gây bệnh trên cây sâm

34

36

37

3846

49

50

2 Danh mục viết tắt, biểu bảng, hình vẽ

Food and Agriculture Organization

Internal Transcribed SpacerLignocellulose agar

Lactophenol Cotton Blue

Minimum Inhibitory ConcentrationOptical Density

Polymerase Chain Reaction

Potato Dextrose Agar

Phosphate Saline Buffer

Revolutions per minute

Translocation Elongation FactorTryptic soy agar

Vietnam Type Culture CollectionYeast Starch medium

Danh mục bảng

Bảng | Thông tin về một số sản phẩm thương mại nguồn gốc từ vi sinh vật để phòng

trị bệnh hại cho cây sâm

Bảng 2 Trình tự các mỗi sử dụng trong phản ứng PCR khuếch đại các gen phân loại

Bảng 3 Các bệnh hại do nam gây ra trên lá cây nhân sâm và tác nhân gây bệnh

Bảng 4 Kết quả phân lập nam và vi khuẩn từ các mẫu sâm bệnh

Bảng 5 Mức độ gây bệnh của bốn chủng nắm trong thí nghiệm lây nhiễm nhân tạo

Bảng 6 Đường kính khuẩn lạc nắm phụ thuộc môi trường và nhiệt độ sinh trưởng

Bảng 7 Số chủng xạ khuẩn/vi khuẩn có hoạt tính đối kháng 4 chủng nắm gây bệnh

Bảng 8 Danh sách các chủng xạ khuan/vi khuẩn có hoạt tính kháng nắm bệnh trên 70%

Bảng9 Ảnh hưởng của điều kiện nuôi cấy tới sinh trưởng của các chủng đối kháng

Bảng 10 Hoạt tính kháng nam bệnh của các chủng VSV đối kháng ở các thời điểm

Bảng II Giá trị MIC của dịch môi va dịch chiết thô và từ các chủng VSV đối kháng

Danh mục hình

Hình I Bản đồ khu vực điều tra (A) và tỷ lệ mắc bệnh trung bình của các bệnh hại

chính trên cây sâm Panax vietnamensis ở Quảng Nam Kon Tum và Lai châu Lào Cai (B).

-Hình 2 Biểu hiện bệnh trong kỳ khảo sát: trên giống sâm Ngọc Linh: (A) bệnh thối

lá, (B) bệnh thán thư, (C) bệnh thối củ; trên giống sâm Lai Châu: (D) bệnh

thối lá, (E) bệnh thán thư, (F) bệnh thối củ.

Hình 3 Biểu hiện của bệnh thối lá (A, B), thán thư (C) và thối củ (E) do các chủng nắm

bệnh gây ra trên cây sâm trong thí nghiệm lây nhiễm nhân tạo Đối chứng

không lây nhiễm nam trên lá (D) và trên củ (F).

Hình 4 Hình thái khuẩn lạc của chủng nam LNS5 (A-E), KT2.1.2 (F-J), N2.3.1 &O)

và KT1.3.2 (P-T) trên môi trường PDA, LCA và hình ảnh cau trúc sợi nắm,

cuống sinh bào tử và bao tử tương ứng Kích thước thanh bar: 10 yum

Hinh 5 Cây phát sinh chủng loại của chủng nam LNS dựa trên trình tự ITS (A) và

TEF1 (B) so sánh với các trình tự tương ứng đã được công bô.

Hình 6 Cây phát sinh chủng loại của chủng nấm bệnh KT2.1.2 dựa trên trình tự ITS

(A), TEF1 (B) và BT2 (C) so sánh với trình tự tương ứng đã được công bô.

Hình 7 Cây phát sinh chủng loại của chủng nắm N2.3.1 dựa trên trình tự ITS (A) và

BT2 (B) so sánh với các trình tự tương ứng đã được công bô.

Hình 8 Cây phát sinh chủng loại của chủng nấm KTI.3.2 dựa trên trình tự ITS (A) và

TEFI (B) so sánh với trình tự tương ứng đã được công bô.

Hình 9 Khả năng đối kháng các loài nắm bệnh sâm của chủng Bacillus velezensis C15

(A-D), chủng S deccanensis 41912 (E-H) và chủng S malayensis 43825 (I-L).

Hinh 10 Thí nghiệm xác định giá trị MIC của các chủng có hoạt tính đối kháng cao

10

13 17

18

18

23

24 25

27 27 28

1 Mở đầu: Tính cấp thiết, mục tiêu, cách tiếp cận, phạm vi, đối tượng nghiên cứu

1.1 Tính cấp thiết

Panax L là chi thảo mộc lâu năm thuộc họ Ngũ gia bì (Araliaceae), được sử dung từ

hàng ngàn năm trước như một loại thuốc truyền thống ở nhiều nước trên thế giới với nhiều

tác dụng có lợi cho sức khỏe như tim mạch, phòng ngừa ung thư, ngăn chặn suy giảm

miễn dịch, nhiễm độc gan, ngăn ngừa quá trình lão hóa và các bệnh thoái hóa thần kinh

(Radad et al., 2006) Sâm Việt Nam Panax vietnamensis Ha et Grushv được ghi nhận với

2 giống có giá trị kinh tế cao là sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis var vietnamensis) và

sâm Lai Châu Panax vietnamensis var fuscidiscus (Pham Quang Tuyến và cs., 2018;

Nguyen et al., 2023).

Là cây lâu năm, được thu hoạch sau tối thiểu 5 năm canh tác, cây sâm Panax phải đối

mặt với nhiều loại bệnh hại Ở Việt Nam, bệnh hại trên cây sâm chủ yếu được nghiên cứu đối với sâm Ngọc Linh Panax vietnamensis var vietnamensis Các bệnh hại trên lá cây

sâm được công bố gồm có bệnh gi sắt (do nắm Puccinia sp.), bệnh đốm vòng (do nam Alternaria alternata), bệnh than thu (do nắm Colletotrichum sp.) va bệnh chết rạp cây con (do nắm Rhizoctonia solani) (Phan Thúy Hiền va cs., 2016; Mai Văn Quân và cs., 2020).

Liên quan đến rễ/củ ở cây sâm, một số bệnh được báo cáo như bệnh thối củ va bệnh lở cỗ

rễ, vàng lá thối rễ do nắm Phytophthora sp, Pythium sp., và Fusarium sp tấn công qua các vết thương hở trên củ hay phần thân gốc của cây sâm (Phan Thúy Hiền và cs., 2016) Bệnh trên lá thường có thể phát hiện sớm và xử lý bằng cách ly cây bệnh hoặc phun thuốc

diét mầm bệnh, trong khi đó bệnh ở rễ/củ thường khó phát hiện cho đến khi bệnh tiến triển

và biểu hiện héo úa thân lá, thậm chí là chết cây Các bệnh hại chính do trên cây sâm Ngọc

Linh đã được điều tra, tuy đối với cây sâm Lai Châu, các thông tin còn rất hạn chế.

Bệnh hại do vi sinh vật gây ra trên cây sâm chủ yếu được kiểm soát nhờ các loại thuốc bảo vệ thực vật hóa học tổng hợp (như azoxystrobin và polymyxin), tuy nhiên sử dụng lâu

dài sẽ có tác dụng tiêu cực đến môi trường, phá vỡ cân bằng sinh thái môi trường, đặc biệt là

đất canh tác (Kalia, Gosal, 2011) Kiểm soát sinh học bệnh hại là hướng tiếp cận ngày càng

được quan tâm, đặc biệt đối với cây lâu năm như sâm Panax, sẽ giúp tạo ra nguồn sâm dược

liệu quý có chất lượng cao Theo đó, các nhà khoa học đã tập trung tìm kiếm các chủng vi sinh vật đối kháng với các tác nhân gây bệnh trên cây sâm đẻ làm nguyên liệu phát triển sản

phẩm kiểm soát sinh học, trong đó các công bố liên quan vi khuẩn và xạ khuẩn có tỷ lệ cao.

Để đạt được mục tiêu phát triển các chế phẩm sinh học kiểm soát bệnh cho cây sâm,

điều tra xác định đối tượng gây bệnh dé làm kiểm định đánh giá bệnh và sang lọc các chủng

vi sinh vật đối kháng là những công việc có tính quyết định thành công Trong khuôn khổ

nhiệm vụ năm 2022, điều tra bệnh hại đã được thực hiện trên cây sâm Ngọc Linh và sâm Lai

Châu để tìm kiếm các vi sinh vật gây bệnh quan trọng và sử dụng trong sàng lọc tìm kiếm

các chủng đối kháng từ bộ chủng VSV đặc hữu tại VTCC.

1.2 Mục tiêu

Nhiệm vụ điều tra cơ bản về tiềm năng hoạt tính sinh học của nguồn gen vi khuan/xa khuẩn

bản địa trong năm 2022 nhằm thực hiện các mục tiêu cụ thể sau:

- Điều tra về một số bệnh hại do vi sinh vat gây ra trên hai giống sâm bản địa Panax

vietnamensis có giá trị cao là sâm Ngọc Linh (tại Nam Trà My, Quảng Nam) và sâm

Lai Châu (tại Sapa, Lào Cai) và xác định được các tác nhân vi sinh vật gây bệnh

chính để sử dụng làm chủng chuẩn phục vụ công tác kiểm định.

- Xác định được một số chủng xạ khuẩn/vi khuẩn từ bộ chủng đặc hữu của Việt Nam

hiện đang lưu giữ tại Trung tâm nguồn gen VSV Quốc gia (VTCC) có khả năng đối

kháng các tác nhân VSV gây bệnh đã xác định ở trên nhằm mục đích ú ứng dụng trongphát triển chế phẩm kiểm soát sinh học bệnh hại trên cây sâm bản địa

1.3 Cách tiếp cận, phạm vi đối tượng nghiên cứu

Để đạt các mục tiêu đề ra, các nội dung nghiên cứu được tiến hành theo các bước như sau:

- Điều tra bệnh hại chính do vi sinh vật gây ra trên hai giống sâm bản địa Ngọc Linh

và Lai Châu trong quá trình canh tác và thu thập mẫu bệnh

- Phân lập mẫu bệnh để tìm ra những tác nhân gây bệnh thuộc nhóm vi nấm và vi

khuẩn Các chủng phân lập sẽ được đánh giá khả năng gây bệnh bằng cách lây nhiễm

nhân tạo vào cây sâm con và theo dõi biểu hiện bệnh Các chủng gây ra biểu hiện

bệnh trên cây sâm con như mẫu bệnh phân lập ban đầu được xác nhận là tác nhân

gây bênh và sẽ được định danh và xác định về các đặc điểm hình thái, điều kiện sinh

trưởng dé làm chủng chuẩn phục vụ công tác kiểm định và sàng lọc VSV đối kháng.

- Sang lọc tìm kiếm chủng xạ khuan/vi khuẩn đối kháng với các tác nhân gây bệnh đã

xác định Đánh giá sơ bộ về điều kiện nuôi cấy phù hợp (môi trường, thời gian nuôicay) đối với chủng VSV sàng lọc để sinh hoạt chất đối kháng nâm/vi khuẩn gâybệnh Tách chiết hoạt chất thô và xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) của dịch

chiết thô từ các chủng sàng lọc được đối với các chủng gây bệnh kiểm định

2 Nội dung chính:

2.1 Chương 1: Cơ sở lý luận và thực tiễn về đối tượng nghiên cứu của nhiệm vụ

2.1.1 Nghiên cứu về sâm Panax vietnamensis ở Việt Nam

Sâm Việt Nam (Panax vietnamensis) được ghi nhận gồm 03 giống là (i) sâm Ngọc

Linh (Panax vietnamensis var vietnamensis Ha et Grushv.), (ii) sâm Lai Châu (Panax

vietnamensis var fuscidiscus K Komatsu, S Zhu et SQ Cai), va (iii) sâm Langbian

(Panax vietnamensis var langbianensis NV Duy, VT Tran et LN Trieu) (Nguyễn Tập,

2005; Phan Kế Long Và cs., 2013) Sâm Ngọc Linh và sâm Lai Châu được đánh giá là hai

loại có giá trị kinh tế cao và được xếp vào danh mục sản phẩm Quốc gia

Theo cơ sở dữ liệu trên cổng thông tin khoa học và công nghệ Quốc gia, : NUNG 15

năm (1997-2022) có tổng số 35 đề tài nghiên cứu về cây sâm Việt Nam (chủ yếu là sâm

Ngọc Linh) do Bộ KH&CN, Bộ Y tế và Sở KH&CN các tỉnh tài trợ Các nghiên cứu tập

trung trên một số nội dung chính gồm (0 kỹ thuật gây trồng, phương pháp nhân giống, di

thực, (ii) ảnh hưởng của các nhân tố khác nhau đến sinh trưởng và phát triển của cây sâm,

(iii) công nghệ sinh học trong giám định loài, giải trình tự gen, (iv) nhân sinh khối rễ, bào

chế, phân tích thành phần được tính, và (v) canh tác và quản lý dich hại, khai thác và phát

triển nguồn gen.

Sâm Ngọc Linh là loài đặc hữu của vùng núi Ngọc Linh (thuộc hai tỉnh Quảng Nam

và Kon Tum), trong vùng khí hậu nhiệt đới và cũng là loài đặc hữu của Việt Nam

(Nguyễn Tập, 2005; Nguyễn Thượng Dong, 2007) Sâm Ngọc Linh mọc chủ yếu ở dưới tán rừng còn tương đối nguyên sinh nơi có lớp mùn dày và khí hậu âm (Lê Thanh Sơn, 2006) Sâm Lai Châu có mức phân bố hẹp trên dãy núi Pu Si Lung và lân cận (Mường Tè

và Tây Sin Hồ, giáp biên giới với Trung Quốc) và day núi Pu Sam Cáp nằm giữa các

huyện Sìn Hồ và Tam Đường với thành phố Lai Châu, tỉnh Lai Châu Bị người dân bản

địa khai thác quá mức (sử dụng làm thuốc và bán sang Trung Quốc), sâm Lai Châu đang

bị đe doa tuyệt chủng ở mức độ tram trọng (CR) (Phan Kế Long và cs 2013) Hiện nay,

diện tích phân bố tự nhiên của sâm Lai Châu giảm đáng ké chỉ còn lại rat ít trong rừng rậmnguyên sinh mưa mùa nhiệt đới ít bị tác động thuộc vùng núi cao huyện Mường Tè, cây

phân bồ rải rác.

Sâm Ngọc Linh có tổng hàm lượng saponin ~10.82%, cao gấp 2-3 lần so với nhiều

loài nhân sâm khác trên thế giới, thanh phần đa dạng với 52 loại khác nhau (so với sâm

Hàn Quốc có 26 loại saponin), trong đó nhiều loại là các hoạt chất mới Các thành phần dược liệu chính ở sâm Ngọc Linh gồm ginsenoside (GRb1, GRB2, GRd, GRe, GRgl),

majonosid (MR1, MR2), notoginsenosid (N1), vinaginsenosid (VRI, VR2, VR11), và các

thành phần acid amin, các nguyên tố vi lượng, hợp chất sterol, glucid (Nguyễn Thượng

Dong, 2007) Sâm Lai Châu có giá trị dược liệu được đánh giá là tương đương với sâm

Ngọc Linh, có nhiều tiềm năng dé phát triển trồng và chế biến thành hàng hóa phục vụ

nhu cầu trong nước và xuất khẩu, tuy nhiên cho đến nay các nghiên cứu về giống sâm này

còn chưa nhiều (Đỗ Thị Hà và cs., 2018).

Với mục tiêu tăng diện tích canh tác sâm, các nghiên cứu về di thực đã nhận được

quan tâm đặc biệt từ các nhà khoa học và các cơ quan quản lý Đến nay, các nghiên cứu về

di thực sâm chủ yếu liên quan đến đối tượng sâm Ngọc Linh với hai hình thức di thực là

(i) mở rộng canh tác trong vùng phân bố tự nhiên, và (ii) canh tác sang những vùng có

điều kiện sinh thái tương tự (Lương Thị Hoan, 2017; Nguyễn Minh Khởi và cs., 2018) Về

sâm Lai Châu, số lượng các nghiên cứu được công bố còn rất ít, đại điện có thể kể đến

như phân tích thành phần dược liệu trong củ sâm (Đỗ Thị Hà và cs., 201 8) và đánh giá ảnh

hưởng của kỹ thuật canh tác (như thời vụ, cây giống, độ cao của vị trí canh tác so với mực

nước biên, độ che sáng) đến sinh trưởng và năng suất (Tran Thi Kim Huong va cs., 2019).

La cây lâu năm, được thu hoạch sau tối thiểu 5 năm canh tác, cây sâm Panax phải đối

mặt với nhiều loại bệnh hại Ở Việt Nam, các bệnh hại trên lá cây sâm được công bố gồm

có bệnh gi sắt (do nấm Puccinia sp.), bệnh đốm vòng (do nắm Alternaria alternata), bệnh

than thư (do nắm Colletotrichum sp.) và bệnh chết rạp cây con (do nam Rhizoctonia

solani) (Phan Thúy Hiền va cs., 2016; Mai Văn Quân và cs., 2020) Liên quan đến rễ/củ ở

cây sâm, một số bệnh được báo cáo như bệnh thối củ và bệnh lở cổ rễ, vàng lá thối rễ do

nắm Phytophthora sp, Pythium sp., và Fusarium sp tấn công qua các vết thương hở trên

củ hay phần thân gốc của cây sâm (Lee et al., 2004; Narayanasamy et al, 2011; Jin et al.,

7

2018) Bệnh trên lá thường có thể phát hiện sớm và xử lý bằng cách ly cây bệnh hoặc

phun thuốc diệt mầm bệnh, trong khi đó bệnh ở rễ/củ thường khó phát hiện cho đến khi

bệnh tiến triển và ảnh hưởng tới phần phía trên mặt đất với biểu hiện héo úa thân lá, thậm

chí là chết cây Các nghiên cứu trong nước đã cung cấp thông tin về các bệnh hại chính do

VSV gây ra trên cây sâm Ngọc Linh, tuy nhiên thông tin đối với cây sâm Lai Châu còn rất

hạn chê

2.1.2 Bệnh hại trên sâm do vi sinh vật và phương thức kiểm soát

Sâm Panax là loài thảo mộc lâu năm phát triển chậm, cần nhiều thời gian để tăng trưởng và tích lũy ginsenoside Rễ nhân sâm từ 4 đến 6 năm tuổi có sự phát triển và hàm

lượng ginsenoside tốt nhất (Farh et al, 2018) Tuy nhiên, thời gian canh tác dài có thé gây

ra sự thay đổi về các tính chất vật lý và hóa học của đất cũng như làm mat cân bằng hệ vi

sinh vật đất vùng rễ dẫn tới sự gia tăng nguy cơ mắc bệnh của cây sâm (Xiao et al., 2016).

Tới năm 2015 có hơn 20 loài nam gây hại trên cây sâm đã được công bố, chủ yếu từcác nghiên cứu trên cây sâm Hàn Quốc Pznax ginseng Các loài gây bệnh chính gồm có

Alternaria panax, Botrytis cinerea, Colletotrichum gloeosporioides, Colletotrichum

panacicola, Cylindrocarpon destructans va Rhizoctonia solani, được danh giá có tac động

tiêu cực đến ngành trồng sâm tại Hàn Quốc (Cho et al, 2016) Một số bệnh hai thườnggặp do VSV gây ra ở cây sâm gồm có:

- Bệnh thối rễ/thối thân: có biểu hiện lá vàng úa không đồng đều, rễ bị úng nước,

màu vàng nâu, bên trong mềm Tác nhân gây bệnh chính là một số loài nấm khác

nhau, tùy thuộc giống sâm, như Phytophthora cactorum, Pithium ultimum và

Cylindrocarpon destructans gây bệnh thối rễ trên cây sâm Hàn Quốc Panax ginseng(Lee, 2004), Fusarium oxysporum gây bệnh thối rễ trên cây tam thất hoang Panax

notoginseng (Jin et al., 2018), Sclerotinia nivalis gay bệnh trên cây sâm Mỹ Panax

quinquefolius (Wang et al., 2021) Ngoài các loài nam gây bệnh kể trên, vi khuẩn

Ralstonia sp va tuyén tring Meloidogyne hapla cũng được báo các là các tác nhân gây bệnh thối thân/rễ ở nhiều loài nhân sâm (Ma et al., 2013).

- Bệnh phấn trắng: có nắm màu trắng hình tròn phát triển sợi nắm trên cả hai bề mặt

lá Tác nhân gây bệnh trên các giống sâm khác nhau được xác định là Oidium sp.

trên tam thất Panax pseudoginseng trồng ở Trung Quốc, Erysiphe sp trên sâm Mỹ P.quinquefolius trồng ở Canada, và Erysiphe panacis trên sim Hàn Quốc P ginseng vàsâm Mỹ P quinquefolius trồng ở Trung Quốc (Farr, Rossman, 2015; Cho et al.,2016)

- Bệnh than thư: là bệnh chủ yếu gây hại trên cây nhân sâm thuộc các giống khác

nhau, được báo cáo ở nhiều quốc gia Biểu hiện bệnh là các vết hoại tử trên thân lá,

có màu nâu, hình tròn đồng tâm làm héo lá và rụng Wei (1989) đã báo cáo nấm

Colletotrichum dematium va Glomerella cingulata gây bệnh thán thư ở tam thathoang P notoginseng (Wei et al., 1989) Putnam & Du Toit (2003) cũng đã mô tả

bệnh than thư trên cây nhân sâm Mỹ P quinquefolius, tác nhân gây bệnh được xácđịnh là nắm Alternaria panax

- Bệnh đốm vòng do nắm Alternaria panax gây ra, được đặc trưng bởi các đốm tròn,

ngậm nước ở giai đoạn đầu và các đốm tròn khô, màu nâu ở các giai đoạn sau Bệnh được báo cáo trên giống sâm Panax ginseng C.A Meyer ở Hàn Quốc và sâm Panaxquinquefolius L ở Mỹ (Kim et al., 2010; Putnam ef al., 2003)

- Bệnh mốc xám có triệu chứng xuất hiện chủ yếu ở đầu lá và mở rộng ra phía sau

qua gân giữa, dẫn đến nhiễm trùng hình chữ V đặc trưng Các tôn thương ban đầu

giống với bệnh đốm vòng, tuy nhiên ở giai đoạn sau, vết bệnh bao phủ toàn bộ bề

mặt lá, màu lá chuyển sang màu nâu đỏ, vết bệnh phát triển dày đặc và sinh bào tử

làm cho lá nhiễm bệnh có màu xám đặc trưng Tác nhân gây ra bệnh mốc xám trêncây sâm Hàn Quốc và sâm Mỹ được xác định là nam Botrytis cinerea (Farh et ai,

2018; Kim et al., 2010)

Có thé thay rang nắm là tác nhân chính gây bệnh hại trên cây sâm Cùng một biểu

hiện bệnh có thể do nhiều loài nắm gay ra Ngoai ra, tính đặc hiệu giữa tác nhân gây bệnh

và đối tượng cây chủ, được thé hiện qua mối tương quan ba bên giữa giống sâm - vị trí

canh tác — tác nhân gây bệnh, là yếu tố quan trọng được các nhà khoa học dé cập trong các

nghiên cứu về bệnh hại trên cây sâm

Hiện nay, biện pháp chính để phòng trị bệnh do vi sinh Vật gây ra trên sâm là sử

dụng các loại thuốc diệt nắm và vi khuẩn tổng hợp như azoxystrobin, polyxins, dazomet,

dimethyl disulfide, canxi cyanamide carbendazim, (Ma et al, 2021) Tuy có hiệu quả

trong việc kiểm soát bệnh, nhưng việc sử dụng lâu dài các loại thuốc bảo vệ thực vật hóa

học có thể dẫn đến sự gia tăng khả năng kháng thuốc của tác nhân gây bệnh, dư lượng

thuốc hóa học trong đất làm mắt cân bằng hệ vi sinh vật đất, đồng thời ảnh hưởng đến chất

lượng của sản phẩm sâm thu hoạch (Sun et al., 2018) Do đó, việc tìm kiếm các hoạt chất

kháng tác nhân gây bệnh có tính thân thiện với môi trường và an toàn ngay càng được

quan tâm, từng bước giúp giảm sự phụ thuộc vào thuốc bảo vệ thực vật hóa học

Vi sinh vật được biết đến có khả năng sản sinh các chất trao đổi thứ cấp mang hoạt tính

kháng khuẩn Vi khuẩn vùng rễ và vi khuẩn nội sinh là các nhóm VSV có liên quan mật thiết đến cây trồng, được báo cáo sản sinh nhiều hoạt chất đối kháng với các tác nhân gây bệnh

thực vật (Fan et al., 2016) Durairaj et al (2018) đã tìm được hai chủng Pseudomonas

aeruginosa D4 va Bacillus stratosphericus FW3 (sàng lọc từ 300 chủng vi khuẩn phân lập từ

đất trồng sâm ở Hàn Quốc) có hoạt tính đối kháng với 7 loài nắm gây bệnh thối rễ cây nhân

sâm (gồm Neonectria sp., Ilyonectria liliigena, Arthrinium arundinis, Cladosporium,

Eutypella scoparia, Aschersonia sp., va Fusarium sp Sun et al (2018) da cong bố chủng vi

khuẩn Brevundimonas terrae SZ-22 có khả năng kháng nấm phé rộng, kiểm soát bệnh thán

thư (83,7%) và bệnh đốm đen nhân sâm (82,47%), hiệu quả hơn cả thuốc điệt nấm

azoxystrobin đậm đặc 25% (p <0,05) Ngoài ra, chủng SZ-22 còn có hoạt tính kích thích sinh

trưởng đối với thân và rễ của cây nhân sâm, nhờ đó giúp cây tăng sức đề kháng đối với cáctác nhân gây bệnh Vi khuẩn nội sinh có nhiều đại diện được công bố về khả năng đối

kháng với các loài vi sinh vật gây bệnh trên sâm (Hong et al., 201 8) Một số loài vi khuẩn

nội sinh có hoạt tính đối kháng cao đã được nghiên cứu ứng dụng như Bacillusamyloliquefaciens, Bacillus methylotrophicus, Burkholderia stabilis, và Pseudomonas

9

koreensis kháng bệnh do các loại nắm gay ra trên cây nhân sâm (Cho et al., 2007;

Chandler et al., 2011; Chowdhury, Bae, 2018).

Xa khuẩn được biết đến là nhóm vi sinh vật có tiềm năng cao trong sản sinh các hoạt

chất sinh học quý, đặc biệt là các hoạt chất kháng khuẩn (Dhanasekaran et al., 2012).

Chen et al (2019) đã công bố chủng xạ khuẩn Streptomyces diastaticus YIM PH20095

phan lập từ cây tam thất hoang (Panax notoginseng) ở Vân Nam (Trung Quốc) sản sinh

các hoạt chất mới là strepphenazine A — C (1-3) và baraphenazine E4 có hoạt tính kháng

đối với Fusarium oxysporum, Plectosphaerella cucumerina, và Altenaria panax gây bệnh thối rễ (Chen et al., 2019) Xu et al (2022) đã công bố chủng xa khuẩn Streptomyces

cellulosae YIM PH20352 sản sinh hoạt chất mới là rabelomycin kháng cả bốn tác nhân

gây bệnh thối rễ gồm Plectosphaerella cucumerina, Altenaria panax, Fusariumoxysporum và Fusarium solani Ngoài các hợp chất kháng sinh, các peptide kháng nam từchủng xạ khuẩn Streptomyces yatensis cũng được báo cáo (Chen et al., 2021).

Trên thị trường Việt Nam hiện nay có một số sản phẩm thương mại nguồn gốc từ vi

sinh vật để phòng trị bệnh hại cho cây sâm (Bang 1) Các sản phẩm này khai thác các loại

nam/vi khuẩn đối kháng để tiêu diệt mim bệnh, chủ yếu phòng trị các bệnh trên rễ/củ do mầm bệnh trong đất gây ra.

Bảng 1 Thông tin về một số sản phẩm thương mại nguồn gốc từ vi sinh vật để phòng trị

bệnh hại cho cây sâm

Chitosan 1000 ppm - Chong thôi củ

- Liền sẹo nhanhChaetomium spp., | - Diét nam bénh

Trichoderma spp - Tăng sức dé kháng cho cây

- Cải tạo dat, tăng độ tơi xốp

AT

CAN

Nhân sâm là cây lâu năm, có kỳ ngủ đông rụng lá (tháng 12-tháng 1), các mầm bệnh

trên lá có thể tồn tại lâu trong đất và nếu không được xử lý triệt để sẽ lại gây hại ở các

mùa sinh trưởng tiếp sau Nhu cầu tìm kiếm các chủng VSV đối kháng để phát triển đa dạng các sản phẩm kiểm soát sinh học cho cây sâm là cấp thiết Để thực hiện được mục tiêu này thì cần xác định được các tác nhân gây bệnh trên các giống sâm bản địa NgọcLinh và Lai Châu, và sử dụng chúng trong sàng lọc tìm kiếm VSV đối kháng, cũng như

đánh giá hiệu quả phòng trị bệnh.

10

2.2 Chương 2: Phương pháp nghiên cứu và số liệu điều tra, phân tích

2.2.1 Vật liệu

Ching VSV sang lọc: 100 chủng xạ khuẩn và vi khuẩn nội sinh lưu giữ tại Trung

tâm nguồn gen VSV Quốc gia (VTCC).

Thuốc nhuộm Lactophenol Cotton Blue (LPCB): Cotton blue 0,125 g, phenolcrystals 50 g, glycerol 100 ml, lactic acid 50 ml, ethanol 70%

Môi trường thạch LCA: glucose 1 g, KH2PO, 1 g, MgSOa.7HaO 0,2 g, KCl 0,2 g,NaNO: 2 g, yeast extract 0,2 g, agar 16 g, nước cất 1 lít, pH=7

Môi trường thạch TSA 1/5: 3,4 g tryptone, 0,6 g soya peptone, 1 g NaCl, 0,5 g

dextrose, 0,5 g KaHPO¿, 15 g agar

Môi trường thạch PDA: 20 g dextrose, 4 g potato extract, 16 g agar

Môi trường thạch YS: cao nắm men 2 g, tinh bột tan10 g, agar 16 g.

2.2.2 Các phương pháp nghiên cứu

Phương pháp điều tra, thu thập số liệu

Các vườn sâm chuyên canh (tự nhiên và di thực) trồng sâm Ngọc Linh (tại tỉnh

Quảng Nam và Kon Tum) và sâm Lai Châu (tại tỉnh Lai Châu và Lào Cai) được

chọn dé khảo sát Điều tra bệnh sâm được tiến hành theo hướng dẫn của Cẩm nang

chân đoán bệnh cây ở Việt Nam (Burgess và cs 2009).

Phiếu điều tra bao gồm các thông tin liên quan đến giống sâm, diện tích, các loại bệnh

hại, kỹ thuật canh tác được chuyên tới các chủ trang trại canh tác (Phụ lục 1)

Tại mỗi điểm điều tra, diện tích canh tác 2-3 ha được khảo sát với 10 điểm ngẫu

nhiên nằm trên đường chéo được lựa chọn và tại mỗi điểm 10 cây sâm được khảo sát

về các biểu hiện bệnh trên lá và thân Tuổi của cây trong các vườn sâm dao động

trong khoảng từ 1 đến 6 năm.

Các mẫu sâm bệnh được thu thập trong túi giấy, ghi rõ vị tri tọa độ lấy mẫu và đưa về

phòng thí nghiệm dé phân lập tác nhân gây bệnh.

Phân lập tác nhân gây bệnh

Phân lập nam gây bệnh: Mẫu bệnh được cắt thành mảnh nhỏ, đặt trên hai loại môi trườngPDA va LCA vô trùng, ủ ở 25°C trong 7 ngày Sợi nấm sau đó được cấy truyền vào môitrường PDA/LCA mới cho đến khi thu được chủng thuần khiết (Narayanasamy, 2011;

Grahovac et al., 2014)

Phân lập vi khuẩn gay bệnh: Mẫu bệnh được cắt thành các mảnh 2x2 mm, nghiền trong 2

ml dung dịch đệm PBS 1x sử dụng cối và chày sứ vô trùng Thực hiện dãy pha loãng trong

dung dich NaCl 0,9%, và cấy trải 0,1 ml mẫu ở ba nồng độ pha loãng cuối cùng trên đĩa

TSA 1/5, ủ đĩa ở 28°C trong 24-48 giờ Các khuẩn lạc vi khuẩn đơn lẻ được cấy chuyển

sang các đĩa TSA 1/5 mới cho đến khi thu được chủng thuần khiết

I1

Đánh giá mức gây bệnh của vi sinh vật thông qua tái nhiễm nhân tạo

Khả năng gây bệnh của các chủng vi sinh vật phân lập được xác nhận thong qua lay nhiém

nhân tạo trên lá nhân sâm theo định dé Koch Trước tiên, các chủng nắm phân lập được lâynhiễm vào những mảnh lá/củ sâm và đặt trong budng vi khí hậu Sau đó, các chủng vi sinh

vật gây biểu hiện bệnh rõ ràng sẽ được thử nghiệm trên những cây sâm 2 tuổi trong điều

kiện nhà lưới

Thí nghiêm trong tủ vi khí hau:

- Các phan lá/củ từ cây sâm Panax vietnamensis khỏe mạnh được chọn lọc, khử trùng

bể mặt bằng ethanol 70%, sau đó rửa sạch bằng nước cất và để khô tự nhiên.

- Lay nhiễm nấm: Các chủng nấm phân lập được nuôi cay trên các đĩa PDA trong 5-7

ngày, sau đó tạo các thỏi thạch (đường kính 5 mm) bang 6 ống hút vô trùng và đặt lên

bề mặt lá với mặt chứa sợi nắm tiếp xúc với lá (Ara et al 2012) Thỏi thạch môi

trường PDA vô trùng được sử dụng làm đối chứng

- Lay nhiễm vi khuẩn: Các chủng vi khuan phân lập được nuôi lắc 18-20 giờ ở 289C,

160 rpm trong môi trường TSB1/5 và điều chỉnh về giá trị ODaoo là 0,1 Sau đó nhỏ

10 pl dịch huyền phù lên bề mặt lá/củ sâm, đối chứng là lá/củ sâm được nhỏ môitrường TSB1/5 vô trùng

- Các mẫu rễ và lá sau khi lây nhiễm sẽ được đặt trong buồng vi khí hậu ở 25°C, độ ầm

90% trong điều kiện ánh sáng 1000 lux, thời gian sáng/tối là 8 gid/16 giờ Các triệu

chứng bệnh được theo dõi tối đa 30 ngày

Thí nghiệm trên cây sâm con 2 tuổi trong nhà lưới:

- Trước khi lây nhiễm, lá của cây nhân sâm được khử trùng bề mặt bằng ethanol 70%,

sau đó rửa sạch bằng nước cất và để khô trong không khí.

- Các chủng vi sinh vật nghỉ ngờ được nuôi trên đĩa môi trường PDA trong 5-10 ngày

(nam) hoặc TSA 1/5 (vi khuẩn) trong 1-2 ngày, sau đó thu sinh khối và chuẩn bị dịch

huyền phù trong dung dịch đệm PBS Ix tới ODạoo là 0,1 (tương đương với mật độ tế

bao 106-107 CFU/ml).

- Lay nhiễm được tiến hành theo mô tả của Ara et al (2012) Hút 10 pl dịch huyền phù

nhỏ lên bề mặt lá, đối chứng là cây sâm được nhỏ đệm PBS 1x vô trùng

- Cây được trồng trong nhà lưới của trang trại sâm tại Sa Pa dưới điều kiện chăm sóc

thường quy Các triệu chứng bệnh được theo dõi hàng ngày trong 30 ngày liên tục

Tỷ lệ bệnh (%) và chỉ số bệnh (%) được tính toán theo TCVN 13268-5:2022: Bảo vệ

thực vật - Phương pháp điều tra sinh vật gây hại - Phần 5: Nhóm cây dược liệu.

Công thức tính toán như sau:

Trong đó: Ni: Số lượng lá bị bệnh ở cấp độ 1 với vết thương tổn <1% diện tích lá;

Ns: Số lượng lá bị bệnh ở cấp độ 1 với vết thương tổn >1-5% diện tích lá;

Ns: Số lượng lá bị bệnh ở cấp độ 1 với vết thương tổn >5-25% diện tích lá;

Nz: Số lượng lá bị bệnh ở cấp độ 1 với vết thương tổn >25-50% diện tích lá;

No: Số lượng lá bị bệnh ở cấp độ 1 với vết thương tổn >50% diện tích lá;

N: tổng số lá thí nghiệm; K: cấp hại cao nhất trong thang phân cấp

Nghiên cứu đặc điểm hình thái nắm

- Các chủng nắm được nuôi trên đĩa thạch PDA, ủ ở 25°C, 5 — 10 ngày và quan sát hình

thái khuẩn lạc.

- Dùng que cấy vô trùng tách và đưa một ít sợi nắm lên lam kính có sẵn dung dịch

nhuộm bào tử LPCB, đậy lamen lên và dùng tay ấn nhẹ vào giữa lam kính Quan sát

và chụp ảnh bào tử dưới kính hiển vi điện tử Zesiss (Đức).

Tach chiết DNA của vi nắm và định danh bằng kỹ thuật phân tử

- DNA của các chủng nấm bệnh được tách chiết bằng bộ kit EZ-10 Spin Column

Fungal Genomic DNA (Biobasic, Canada)

- Doan ITS (Internal Transcribed Spacer), TEF (translocation elongation factor 1) va

BT2 (beta tubulin) được khuếch đại trong phản ứng PCR (sử dụng kit PCR Promega,

USA) với các cặp mỗi đặc hiệu (Bảng 2)

- Trình tự gen sau đó được phân tích, so sánh với trình tự của các loài có liên quan hiện

đã công bố trên GenBank/Mycobank Cây phân loại được dựng theo phương pháp

neighbour-joining (Saitou, Nei, 1987), trong đó định dang cây được tiến hành dựa

trên phân tích Bootstrap với 1000 lần lặp lại (Felsenstein, 1985) sử dụng phần mềm

BT2 BÓa: 5’-GGTAACCAAATCGGTGCTGCTTTC-3’ Glass & Donaldson,

Bt2b: 5’°-ACCCTCAGTGTAGT-GACCCTTGGC-3’ 1995

EF-2: 5'-GGARGTACCAGTSATCATG-3'

Xác định hoạt tính kháng nắm

TEF

Phuong pháp xác định hoạt tính kháng nam được thực hiện theo Dhanasekaran et al.

(2012), tóm tắt như sau (mỗi thí nghiệm đều được lặp lại 3 lần):

- Các chủng xạ khuẩn/vi khuẩn được nuôi trên môi trường thạch YS/TSA trong 2-7

ngày ở 28°C Các chủng nắm được nuôi trên môi trường PDA trong 7 ngày ở 25°C.

- Thỏi thạch (đường kính 5 mm) chứa nắm được đặt vào tâm đĩa petri (® 6 cm) chứa

môi trường PDA Sau đó, một thỏi thạch (đường kính 5 mm) chứa xạ khuẩn/vi khuẩn

cần xác định hoạt tính được đặt vào vị trí cách tâm đĩa 2 cm, ủ trong 5-7 ngày ở 25°C.

13

- Ty lệ kháng của chủng xạ khuẩn đối với chủng nắm được tính theo cơng thức:

S =(R-r/R x 100%

Trong đĩ: S: Phan trăm ức ché,

R: bán kính khuẩn lạc nam ở phía đối điện vị trí đặt thỏi thạch xạ khuẩn, r: bán kính khuẩn lạc nấm ở phía đặt thỏi thạch xạ khuẩn.

Xác định nơng độ ức chế tối thiểu (MIC)

- Các chủng VSV đối kháng được cấy trên đĩa thạch YS (xạ khuẩn) trong 5-7 ngày

hoặc TSA (vi khuẩn) trong 2-3 ngày ở 28°C.

- Cấy khuẩn lạc đơn của các chủng vào bình tam giác 250 ml chứa 100 ml mơi trường

dịch thể YS hoặc TSB tương ứng và lắc ở 28°C, 180 rpm trong 1-7 ngày Ly tâm dịch nuơi cấy ở 10.000 vịng/phút trong 10 phút.

- Xác định MIC của dịch chiết thơ: Dịch nuơi đã loại tế bào được tách chiết bằng dung

mơi ethyl acetate theo tỷ lệ 1:1 (v/v) Lớp dung mơi chứa hoạt chất được thu hồi và

làm bay hơi bằng máy cơ quay chân khơng ở 30°C Xác định trọng lượng cao khơ thu được và hồ lại sản phẩm trong dung dịch dimethyl sulfoxide (DMSO): nước (tỷ lệ

1:9 v/v) tạo dung dịch gốc cĩ nồng độ 10 mg/ml Cao chiết thơ ở các nồng độ khácnhau (500 pg/ml, 250 pg/ml, 125 pg/ml, 120 pg/ml, 100 pg/ml, 80 pg/ml, 62,5

pg/ml, 60 pg/ml và 31,25 pg/ml) được sử dụng để xác định tính đối kháng theo

phương pháp được mơ tả như ở trên thay cho thỏi thạch chứa vi sinh vật thử nghiệm

(Arasu et al., 2009)

Nghiên cứu các đặc điểm sinh học của các chủng vi sinh vật đối kháng

- Mơi trường sinh trưởng: Các chủng vi khuẩn được nuơi trên các mơi trường dịch thê

LB, TSB và KBM, lắc 160 v/p ở 28°C trong 24 h, so sánh mức sinh trưởng thơng

qua mật độ quang của dịch nuơi ở bước sĩng 600 nm Các chủng nắm được nuơi trêncác đĩa mơi trường LCA, PDA ở 25°C trong 5-10 ngày, so sánh mức sinh trưởng

thơng qua kích thước khuẩn lạc Các chủng xạ khuẩn được nuơi trên các mơi trường

dịch thể YS, ISP2 và ISP4, lắc 160 víp ở 28°C trong 5-10 ngày, so sánh mức sinh

trưởng thơng qua khối lượng sinh khối khơ.

- Nhiệt đơ: Nuơi vi khuan/vi nắm trên mơi trường phù hợp đã xác định ở trên tại các

nhiệt độ 25, 28, 37°C và đánh giá mức sinh trưởng thơng qua ODàoo, khối lượng sinh

khối khơ hoặc kích thước khuẩn lạc như mơ tả ở trên.

- Đối với các chủng đối kháng: Nuơi VSV ở trong mơi trường dịch thé ở nhiệt độ phù

hợp đã xác định Thời điểm thu dịch nuơi là 1, 3, 5 và 7 ngày đối với vi khuẩn; 5, 7

và 10 ngày đối với xạ khuẩn Tiến hành đánh giá hoạt tính đối kháng để xác định

thời điểm sản sinh hoạt chất kháng khuân cao nhất.

Xử lý số liệu

Các thí nghiệm đều được lặp lại 3 lần Dữ liệu được xử lý bằng phần mềm Microsoft

Excel và xây dựng đồ thị bằng phần mềm SigmaPlot.

14

2.3 Chương 3: Kết quả nghiên cứu và thảo luận

2.3.1 Điều tra bệnh hại chính do vi sinh vật gây ra trên hai giống sâm bản địa Ngọc

Linh và Lai Châu trong quá trình canh tác

Khảo sát bệnh sâm và thu thập mẫu được thực hiện trong mùa sinh trưởng của nhân

sâm từ tháng 4 đến tháng 12 năm 2022 tại 3 khu vực (Hình 1A):

- Huyện Nam Trà My tỉnh Quảng Nam (15°01'36"N 107°58'53"E và 15°00'607"N

108°01'660") và huyện Tumorong tỉnh Kon Tum (14°59'30"N 108°O1'16"E và

14°59'38"N 108°01'10" E), nơi canh tác bản địa của giống sâm Ngọc Linh.

-_ Thị trấn Sa Pa tinh Lào Cai (22°21'225"N 103°51'476"E), là điểm di thực của cả

hai giống sâm Ngọc Linh và Lai Châu ,

- Huyện Mường Tè (22°33'42"N 102°49'49"E) va Sin Hồ (22°33'42"N 103°14'4"E)

của tỉnh Lai Châu, nơi canh tác bản địa của giống sâm Lai Châu.

Các trang trại được chọn khảo sát có diện tích từ 2-3 ha, bao gồm diện tích trồng

dưới tán rừng tự nhiên và diện tích trồng trong nhà lưới Cây sâm tại các trang trại có

nhiều độ tuổi khác nhau, từ 1 đến 6 tuổi Hai bệnh trên lá chính được phát hiện với tỷ lệ

mắc đáng kể ở tat cả các trang trại được khảo sát là bệnh than thư với tỷ lệ bệnh trung bình

lần lượt là 5,5% và 10,75%; bệnh thối nhữn lá với tỷ lệ bệnh trung bình lần lượt là 12% và

19%, tương ứng với hai vùng khảo sát Lai Châu - Lào Cai và Quảng Nam - Kon Tum(Hình 1B)

mg Quảng Nam - Kon Tum

EH Lai Châu - Lào Cai

Hình 1 Bản đồ khu vực điều tra (A) và tỷ lệ mắc bệnh trung bình của các bệnh hại chính trên cây sâm

Panax vietnamensis ở Quảng Nam - Kon Tum và Lai châu - Lào Cai (B)

Cây sâm mắc bệnh thán thư được phát hiện trong đợt điều tra có hai dạng biểu hiện bệnh trên lá gồm (i) vết bệnh lớn đường kính 1-3 mm với số lượng ít trên một lá, mô lá

chết khô màu nâu ở giữa, xung quanh có quang vàng trên sâm Ngọc Linh (Hình 2B), và (ii) vết bệnh nhỏ (số lượng nhiều), màu vàng, sau chuyển nâu trên sâm Lai Châu (Hình

15

2E) Biểu hiện bệnh trên sâm Ngọc Linh có nhiều điểm tương đồng so với bệnh thán thư

do nam Colletotrichum acutatum được Mai Văn Quân và cs (2020) mô tả (các đốm màu vàng trên lá lan rộng dần và chuyển sang màu nâu ở giữa, xung quanh có quang vàng khi bệnh tiến triển) Trong khi đó biểu hiện bệnh ở sâm Lai Châu lại khác biệt, có nét tương đồng với bệnh gi sắt do nam Puccinia sp gây ra được tác giả Phan Thúy Hiền và cs.

(2015) mô tả, tuy nhiên vết bệnh không có u nỗi chứa khối bột màu vang/vang nâu Vườn

sâm canh tác dưới tán rừng tự nhiên (Mường Tè) có tỷ lệ cây mắc bệnh thán thư cao hơn

so với các vườn sâm canh tác trong điều kiện nhà lưới (Sin Hồ và Sa Pa) Theo ghi nhận

hàng năm tại các điểm trồng sâm, bệnh thán thư được phát hiện tại hầu hết các lứa tuổi

của cây đang canh tác tại vườn (1 -3 năm).

Hình 2 Biểu hiện bệnh trong kỳ khảo sát: trên giống sâm Ngọc Linh: (A) bệnh thối lá, (B) bệnh thán thư,

(C) bệnh thối củ; trên giống sâm Lai Châu: (D) bệnh thối lá, (E) bệnh thán thư, (F) bệnh thối củ.

Bệnh thối nhữn lá được báo cáo lần đầu tiên trong nghiên cứu này trên cây sâm

Panax vietnamensis với tỷ lệ xuất hiện là 2 — 26%, tương đương với các bệnh trên lá được

báo cáo khác (Bảng 3) Triệu chứng bệnh là những vùng thối rữa, có đường kính từ 5 đến

10 mm với một đếm màu xám đen hoặc đen ở trung tâm (Hình 2A, D) Theo thời gian bệnh phát triển, vết bệnh ngày càng to, lá bị nhiễm bệnh chuyển sang màu đen, dễ rụng.

Bệnh gặp ở cây sâm ở mọi lứa tuổi, với tỷ lệ mắc cao hơn ở cây 2-3 tuổi (tỷ lệ mắc >

20%) so với cây 5-6 tuổi (tỷ lệ mắc 5 - 15%) Sâm Lai Châu có tỷ lệ mắc bệnh cao hơn

sâm Ngọc Linh Cho đến nay, bệnh này vẫn chưa được báo cáo trên các giống sâm Panax

khác, tuy nhiên theo khảo sát tại các nông hộ bệnh có ảnh hưởng nghiêm trọng đến các

trang trại trong nhân sâm ở Việt Nam Được canh tác ở những nơi có độ âm cao và ánh

sáng che phủ, P vietnamensis dễ bị nhiễm bệnh thối mềm lá, thiệt hại về năng suất chưa

được đánh giá chỉ tiết nhưng dự kiến là ở mức đáng kẻ.

Các bệnh liên quan đến củ thường không được nhận biết cho đến khi bệnh tiến triển

nặng, ảnh hưởng đến sức khỏe và làm cây chết Vì vậy, việc điều tra tỷ lệ mắc bệnh ở củ

gặp rất nhiều khó khăn, tuy nhiên triệu chứng thối củ cũng được ghi nhận với tỷ lệ mắc

16

bệnh cao nhất lên tới 18% ở SaPa Bệnh thối củ có biểu hiện các vết bệnh màu nâu đến

nâu đen (Hình 2C, F), vết bệnh ngày càng to, củ bi thối nhũn, rỗng bên trong, phần VỎ Và

thịt củ tách rời.

Bảng 3 Các bệnh hại do nắm gây ra trên lá cây nhân sâm và tác nhân gây bệnh

Biéu hiện bệnh Giong Noibao | Tác nhân gây Tài liệu tham

Vềêt tôn thương 2-20 mm Panax Alternaria Putnam, Toit,

với viền màu nâu và quang | quinquefo panax 2003;

vàng xung quanh -lium L Hill, Hausbeck,

2009.

Lee et al 2019; Wang et al.

2024

Dom hinh oval/tròn đường | Panax Alternaria

kính 3-9 mm với đốm ginseng Quéc alternata trang/vang ở giữa, din đến | Meyer Boeremia

héo và rung lá, cây héo exigua

Panax Trung Boeremia You et al 2015

Panax Pestalotiopsis

Liyanapathira-quinquefo nanjingensis nage et al, -lius 2023

Panax Oc | Colletotrichum | Nakata,

ginseng panacicola Takimoto,

Vét ton thuong hinh tron

Guan et al., 2021b

Vét thương mong nước bat | Panax Botrytis cinerea | Punja, 1997

đầu từ đỉnh lá và lan xuống | quinquefo

phía dưới dọc theo gân giữa | -lium L.

của lá, tạo thành vùng tổn | Panax Botrytis cinerea | Wang et al.,

thương lớn ginseng 2022

Meyer

Các vét tôn thương mong Panax Neocosmospora | Nghiên cứu nước đường kính 5-10 mm | vietnamen ipomoeae nay

Khi bệnh tiến triển, vết -sis Fusarium

thương có thể đạt tới diện miscanthi tích 25% bề mặt lá làm lá bị

bệnh héo rũ và rụng.

17

2.3.2 Xác định một số tác nhân vi sinh vật gây bệnh chính trên trên cây sâm Ngọc

Linh và sâm Lai Châu

2.3.2.1 Phân lập và đánh giá khả năng gây bệnh của các ching vi sinh vật

Từ 61 mẫu sâm bệnh thu thập tại các địa điểm điều tra, tổng số 171 chủng nam và

126 chủng vi khuân đã được phân lập (Bảng 4) Số lượng và đa dạng chủng phân lập được

ghi nhận cao nhất ở mẫu sâm bị bệnh thối nhũn lá.

Thán thư

Thôi củ

Tổng số

Bộ chủng VSV phân lập được từ các mẫu bệnh được sử dụng trong thí nghiệm lây

bệnh nhân tạo trên các bộ phận lá/củ của cây sâm tương ứng với vị trí phân lập chủng.

Trong 126 chủng vi khuẩn đã phân lập không có chủng nào thé hiện khả năng nhiễm bệnh

trong thí nghiệm lây nhiễm nhân tạo Đối với nhóm nắm, trong số 171 chủng đã phân lập

có 4 chủng nắm được xác định là có khả năng gây bệnh theo kết quả thí nghiệm lây nhiễm nhân tạo trên lá/củ sâm trong điều kiện tủ vi khí hậu Tiếp sau, bốn chủng nghi ngờ gây

bệnh được đưa vào thí nghiệm lây nhiễm nhân tạo trên cây sâm 2 tuổi trong điều kiện nhà

lưới tại Sa Pa Kết quả cho thấy các chủng này đã gây bệnh trên lá/củ sâm với tỷ lệ gây

bệnh và chỉ số bệnh ở các mức độ khác nhau (Bảng 5).

Bảng 5 Mức độ gây bệnh của bốn chủng nấm trong thí nghiệm lây nhiễm nhân tạo

Thời gian bắt đầu

sinh sản giống với hai chủng LN5 và KT2.1.2 Kết quả nay khẳng định hai chủng LN5 va

KT2.1.2 là tác nhân gây bệnh thối nhữn lá trên cây sâm Panax vietnamensis.

Ching nấm N2.3.1 gây ra các triệu chứng của bệnh than thư sau 12 ngày lây nhiễm, tương tự như mẫu lá bệnh ở sâm Lai Châu thu thập ban đầu (Hình 3C), là các vết bệnh nhỏ, màu vàng, lá sần sùi Nắm được phân lập lại từ các mẫu lá bị bệnh của thí nghiệm lây

18

nhiễm nhân tạo có hình thái tản nấm và các cơ quan sinh sản giống với chủng N2.3.1,

chứng tỏ chủng nay là tác nhân gây bệnh than thư trên cây sâm Panax vietnamensis.

Ching nam KT1.2.3 gây ra các vét thối nhữn màu nâu den, có quang vàng trên củ sau 40 ngày lây nhiễm nhân tạo (Hình 3E) Nam được phân lập lại từ các mẫu lá bị bệnh

của thí nghiệm lây nhiễm nhân tạo có hình thái tan nắm và các cơ quan sinh sản giống với

chủng KTI.3.2, chứng tỏ chủng này là tác nhân gây bệnh thối củ ở cây sâm trên cây sâm

Panax vietnamensis

Hình 3 Biểu hiện của bệnh thối lá (A, B), than thư (C) và thối củ (E) do các chủng nắm bệnh gây ra trên

cây sâm trong thí nghiệm lây nhiêm nhân tạo Đôi chứng không lây nhiễm nâm trên lá (D) và trên củ (F).

2.3.2.2 Nghiên cứu các đặc điểm hình thái và định danh chủng gây bệnh

Hình thái khuân lạc và hình thái hiển vi của bốn chủng nắm gây bệnh trên cây sâm

Việt Nam P vietnamensis được mô tả cụ thé như sau:

- Ching LNS sinh trưởng tốt trên môi trường PDA, tạo ra các khuẩn lạc màu trắng có

đường kính 60-70 mm (Hình 4A), nhưng sinh trưởng kém trên môi trường LCA

nghèo dinh dưỡng (Hình 4B) Trên môi trường PDA, chủng LNS sản sinh các sợi

nắm có vách ngăn (Hình 4C) với cuống sinh bào tử đính (Hình 4D) Macroconidia có hình trụ đến hình lưỡi liềm với kích thước 25-40x3-5 lum, microconidia có hình elip đến hình trụ với kích thước 7-10x1-3 um (Hình 4E).

- Ching KT2.1.2 sinh trưởng tốt trên môi trường PDA tạo các khuẩn lạc màu hồng

nhạt có đường kính 60-70 mm (Hình 4F), nhưng kém phát triển trên môi trường LCA (Hình 4G) Trên môi trường PDA, chủng này tạo các sợi nam có vách ngăn (Hình 4H) với cuống sinh bào tử đính (Hình 41) Macroconidia thuôn dài, kích thước

12-18x1-3 um, microconidia hình trụ kích thước 2-5x0,5-1 um (Hình 4])

- Ching N2.3.1 hình thành khuẩn lạc có đường kính 40-50 mm, màu vàng cam trên

môi trường PDA (Hình 4K) Trên môi trường LCA, đường kính khuân lạc nắm lớn hơn nhưng mật độ các sợi nắm mỏng (Hình 4L) Hình ảnh hiển vi cho thấy các sợi

nam phân nhánh với vách ngăn (Hình 4M), cuống sinh bào tử không có vách ngăn và

19

bào tử hình trụ, thuôn dài về hai đầu, kích thước 3-4 umX§-9 um (Hình 4N, O),

tương đồng với đặc điểm hình thái của chỉ Colletotrichum.

Hình 4 Hình thái khuân lạc của chủng nam LNS (A-E), KT2.1.2 (F-J), N2.3.1 (K-O) và KT1.3.2 (P-T)

trên môi trường PDA, LCA và hình ảnh cấu trúc sợi nấm, cuống sinh bào tử và bào tử tương ứng Kích

thước thanh bar: 10 um.

Định danh chủng LNS: Vi trí phân loại của chủng LNS được xác định dựa trên so sánh hai trình tự ITS và TEF1 (Hình 5).

Dữ liệu cho thấy chủng này gần gũi nhất với Neocosmospora ipomoeae, ty lệ tương

đồng trình tự ITS là 100% va TEF1 là 99,51% va chủng LN5 được định danh là

Neocosmospora ipomoeae Hai trình tự ITS và TEF1 của chủng này được đăng ký trên

GenBank với mã số lần lượt là PP422928 và PP458365 Các nghiên cứu đã công bố chỉ ra rang N ipomoeae gây bệnh thối thân trên nhiều loại cây trồng khác nhau như cà chua, ớt

(Kwon et al., 2017; Tomita et al., 2021), nhưng lần đầu tiên được báo cáo trong nghiên

cứu này về khả năng gây bệnh thối nhiin lá sâm

20

(NR 154227.1)

Neocosmospora crassa

(GU170647.1) Neocosmospora keratoplastica

Hình 5 Cây phát sinh chủng loại của chủng nắm LN5 dựa trên trình tự ITS (A) và TEFI (B) so sánh với

các trình tự tương ứng đã được công bố.

Định danh chủng KT2.1.2: Vị trí phân loại của chủng KT2.1.2 được xác định dựa trên sosánh ba trình tự ITS, TEF1 và BT2 (Hình 6) do tính phức tạp của chi Fusarium So sánh

cả ba trình tự đều chỉ ra rằng chủng KT2.1.2 gần gũi nhất với Fusarium miscanthi, tỷ lệ

tương đồng về các trình tự so sánh là 99,79% (ITS), 97,67% (TEFI) và 99.68% (BT2).

Các trình tự ITS, TEF1 và BT2 của chủng đã được đăng ký trên GenBank với mã số lần

Fusarium oxysporum Í sp balatas — one (QIWSo4327 nail Fusarium

củ (MH855101.1) : ` (OM960817.1)Fusarium curvatum Fusarium curvatum

Hình 6 Cây phát sinh chủng loại của chủng nắm bệnh KT2.1.2 dựa trên trình tự ITS (A), TEF1 (B) va

BT2 (C) so sánh với trình tự tương ứng đã được công bố.

Về mặt phân loại, Fusarium miscanthi cùng với Fusarium nishikadoi trong nhómnhánh của Fusarium oxysporum Do vậy vị tri phân loại của chủng KT2.1.2 chỉ có thể xác

định được dựa trên so sánh nhiều trình tự gen, gồm có ITS, TEF1 và BT2 (Hình 6).

Fusarium spp được báo cáo là tác nhân gây bệnh héo quan trong ở nhiều loại cây trồng,

ví dụ như F eumartii, F oxysporum, F avenaceum, F solani, F sulphureum và F

tabacinum (Okungbawa, Shittu 2012) Trong nhiéu thap ky, Fusarium miscanthi được coi

là không gây bệnh và không được chú ý (Summerell et al., 2011), cho đến gần đây đã

21

được báo cáo là gây bệnh thối ở tai ngô (Shang et al., 2021) và bệnh héo rũ ở đậu xanh

(Younesi et al., 2021) Trong nghiên cứu này, F miscanthi lần đầu tiên được báo cáo là

tác nhân gây bệnh thối nhữn lá ở sâm Panax.

Định danh chủng N2.3.1: VỊ trí phân loại của chủng N2.3.1 được xác định dựa trên so

sánh hai trình tự ITS và BT2 (Hình 7).

Kết quả so sánh trình tự ITS và BT2 của chủng N2.3.1 với các trình tự liên quan trên

GenBank và MycoBank chi ra rằng chủng nay gần gũi nhất với loài Colletotrichum

fioriniae với 99.80% tường đồng về trình tự ITS và 99.36% tương đồng về trình tự BT2.

Các trình tự ITS và BT2 của chủng nắm này được đăng ký trên GenBank với mã số

PP716536 (ITS) và PP735918 (BT2)

sof N234 sa|_ Collelotrichum fioriniae (KM357293.1)

Hình 7 Cây phát sinh chủng loại của chủng nam N2.3.1 dựa trên trình tự ITS (A) và B12 (B) so sánh với

các trình tự tương ứng đã được công bô.

Colletotrichum spp được biết đến là tác nhân chính gây bệnh thán thư trên nhiều loại

cây trồng Đối với chỉ Panax L., một số loài Colletotrichum đã được báo cáo gây bệnh

than như, như C dematium, C lineola va C panacicola trên cây sâm Hàn Quốc (Panax

ginseng Meyer) (Han et al 2004; Liu et al., 2020), C sojae và trên cây sâm Mỹ (Panax

quinquefolius) (Guan et al., 2021), trong đó C panacicola được đánh giá là tác nhân gây

bệnh phổ biến nhất Ở Việt Nam, loài Colletotrichum acutatum đã được xác định là tác

nhân gây bệnh thán thư trên cây sâm Ngọc Linh (Mai Văn Quân và cs., 2020) Loài

Colletotrichum fioriniae gây bệnh thán thư trên cây sâm Panax vietnamensis lần đầu tiên

được báo cáo trong nghiên cứu này C fioriniae được xác định là tác nhân gây bệnh trên

lá và quả ở nhiều loại cây trồng trên thế giới, chủ yếu ở vùng khí hậu ôn đới (Damm et al.,

2012) Một số loại cây quan trọng thường nhiễm nam C fioriniae gồm có dâu, nho, táo và

việt quất (Dowling et al., 2020), tuy nhiên C fioriniae gây bệnh trên cây sâm chưa được

đề cập trong các công bố trước đây.

Định danh chủng KT1.3.2: Vi trí phân loại của chủng KT1.3.2 được xác định dựa trên so

sánh hai trình tự ITS và BT2 (Hình 8)

Kết quả so sánh các trình tự ITS và BT2 của chủng nắm KT1.3.2 với các trình tự liên

quan trên ngân hàng GenBank và Mycobank chỉ ra rằng chủng này gần gũi nhất với loài

22

Neocosmospora solani (tên gọi cũ là Fusarium solani) với 99.80% tường đồng về trình tự

ITS và 99.53% tương đồng về trình tự TEF1 Các trình tự gen của chủng nam này được

đăng ký trên GenBank với mã số PP935352 (ITS) và PP942996 (TEF1).

Hình 8 Cây phát sinh chủng loại của chủng nam KTI.3.2 dựa trên trình tự ITS (A) và TEF1 (B) so sánh

với trình tự tương ứng đã được công bố.

Bệnh thối củ trên các giống sâm Panax được báo cáo do nhiều loại nấm và vi khuẩn

gay ra, như Cylindrocarpon destructans và Ilyonectria robusta trên giống sâm Hàn Quốc

Panax ginseng (Lu et al., 2015), Cylindrocarpon destructans, Fusarium solani,

Phytophthora cactorum, Phoma herbarum, Rhizoctonia solani trén giống tam thất Panax

notoginseng (Mao et al., 2014) Ở Việt Nam, bệnh thối củ trên sâm Ngọc Linh được cho là

do các loại nắm Phytophthora, Pythium, va Fusarium gây ra, tuy nhiên chưa có các công

bố khoa học về vấn đề này.

2.3.2.3 Nghiên cứu các đặc điểm sinh học của chủng gây bệnh

Ảnh hưởng của môi trường và nhiệt độ nuôi cấy tới sinh trưởng của các chủng nấm

bệnh được đánh giá thông qua kích thước khuẩn lạc trên đĩa môi trường rắn (Bảng 6)

Bảng 6 Đường kính khuẩn lạc nấm phụ thuộc môi trường và nhiệt độ sinh trưởng

Điêu kiện Đường kính khuẩn lạc (mm)

sinh trưởng | Neocosmospora Fusarium Colletotrichum | Neocosmospora

ipomoeae LNS | miscanthi KT2.1.2 | fioriniae N2.3.1 | solani KT1.3.2

ore

a ie a al a a aaa a em

LCA

- Cả bốn chủng nấm đều sinh trưởng kém ở nhiệt độ 37°C Nhiệt độ sinh trưởng tốt

nhất đối với ba chủng LN5, KT2.1.2 và KT1.3.2 là 28°C, tuy nhiên các chủng này

cũng sinh trưởng tốt ở 25°C; đối với chủng N2.3.1 nhiệt độ sinh trưởng tối ưu là

25°G, Cac thi nghiém in vivo trên cây sâm được thực hiện ở nhiệt độ 25°C, do vậy

các chủng nam sẽ được nuôi cay ở nhiệt độ này

2.3.2.4 Xây dựng hỗ sơ của các chủng nắm bệnh mới xác định

Hồ sơ chủng được xây dựng dựa theo quy định tại WFCC và VTCC gồm các thông tin

như sau:

- Thông tin chung: tên khoa học, ký hiệu chủng, mã số tại VTCC, nguồn gốc, mức

an toàn sinh học

- Thông tin về điều kiện nuôi cay: môi trường nuôi cấy phù hợp nhất, điều kiện nuôi

cấy (nhiệt độ, pH, thời gian)

- Cac đặc điểm hình thái: hình thái khuẩn lạc, bảo tử, cuống sinh bao tử (có hình ảnh

minh họa)

- _ Đặc điểm phân loại phân tử: các cây phân loại (dựa trên so sánh các trình tự gen chỉ

thị khác nhau), mã trình tự gen

- M6 tả biểu hiện bệnh đặc trưng (có hình ảnh minh họa).

- _ Điều kiện bảo quản.

- _ Công bố khoa học liên quan.

Hồ sơ chỉ tiết của bốn chủng nắm bệnh mới xác định gồm các thông tin như trên

được trình bày chỉ tiết tại Phụ lục 2 Các chủng này đã được đưa vào catalogue online của

Trung tâm nguồn gen VSV Quốc gia VTCC và sẵn sàng cung cấp cho các đơn vị nghiêncứu dé làm chủng kiểm định

2.3.3 Tìm kiếm các chủng xạ khuẩn/vi khuẩn đối kháng nắm bệnh

2.3.3.1 Sang lọc các chủng xạ khuẩn/%i khuẩn về hoạt tinh kháng nắm bệnh

Công việc sàng lọc được tiến hành trên 100 chủng xạ khuẩn và 20 chủng vi khuẩn nội sinh

sâm Kết quả sang loc in vitro bằng phương pháp đặt thỏi thạch cho thấy, trong số 120

chủng VSV đã tiến hành sàng lọc, có 42 chủng thể hiện khả năng kháng ít nhất 1 trong 4

chủng nắm gây bệnh trên cây sâm (Bảng 7; chỉ tiết tại Phụ lục 3)

24

Bảng 7 Số chủng xạ khuẩn/vi khuẩn có hoạt tính đối kháng 4 chủng nắm gây bệnh

Ching nam bệnh So lượng chủng xa khuan/vi khuẩn có hoạt tính

Không kháng | <50% | >50 và <70%

Neocosmospora ipomoeae LNS _ - BE] 14 ma Fusarium miscanthi KT2.1.2 | 98 | 9 |

3 3

i 85

Colletotrichum fioriniae N2.3.1 88

100Đặc biệt quan tâm là nhóm các chủng xa khuan/vi khuẩn (13 chủng) có hoạt tinh

Neocosmospora solani KT1.3.2

kháng trên 70% đối với it nhất 01 chủng nắm bệnh (Bang 8) Số chủng có hoạt tính đối

kháng Fusarium miscanthi KT2.1.2 là cao nhất (9 chủng), trong khi đó đối kháng

Colletotrichum fioriniae N2.3.1 chỉ có 2 chủng Các chủng này là đối tượng nghiên cứu để

sàng lọc hoạt chất kháng khuẩn ức chế các chủng nam bệnh mới xác định.

22

Đối với xạ khuẩn, chi Streptomyces được biết đến là nhóm có khả năng sản sinh

nhiều hoạt chất sinh học quý, trong đó có các hoạt chất kháng nam Các chủng xạ khuẩn

có hoạt tính đối kháng với nắm gây bệnh trên sâm đã được báo cáo trong một số nghiên cứu gan day Ching S diastaticus YIM PH20095 và S cellulosae YIM PH20352 phân lập

từ cây tam thất hoang ở Vân Nam (Trung Quốc) sản sinh các hoạt chất mới có hoạt tính

kháng đối với Fusarium oxysporum, F solani, Plectosphaerella cucumerina và Altenaria

panax gây bệnh thối rễ (Chen et al., 2019; Xu et al., 2022) Đối với vi khuẩn, chi Bacillus

là nhóm được ứng dụng nhiều trong nông nghiệp với nhiều lợi ích đối với cây trồng Ryu

et al (2014) đã báo cáo chủng B subtilis HK-CSM-1 được phân lập từ đất trồng sâm có

khả năng đối kháng cao với nắm Colletotrichum panacicola (tác nhần gây bệnh thán thư

trên cây sâm) và cho hiệu quả phòng trị bệnh tương đương với thuốc hóa học iminoctadine

tris (Ryu et al., 2014)

Bảng 8 Danh sách các chủng xạ khuân/vi khuẩn có hoạt tính kháng nam bệnh trên 70%

Bacillus velezensis

Bacillus velezensisBacillus velezensis

Bacillus velezensis

wn

an 7

Ba chủng đại diện là Streptomyces deccanensis 41912, S malayensis 43825 và

Bacillus velezensis C15 được lựa chon từ danh sách các chủng cĩ hoạt tinh đối kháng

>70% đề nghiên cứu chỉ tiết hơn (Hình 9) Ngồi hoạt tính đối kháng cao với các chủng nam bệnh, ba chủng này được lựa chọn do (i) cĩ khả năng sinh trưởng tốt cả trên mơi trường ran và mơi trường dich thé và (ii) đại điện cho các lồi khác nhau.

N ipomoeae LNS — F miscanthi KT2.12 N solaniKT1.32 C.fiorimiaeN2.3.1

Hình 9 Khả năng đối kháng các lồi nắm bệnh sâm của chủng Bacillus velezensis C15 (A-D), chủng S.

deccanensis 41912 (E-H) và chủng S malayensis 43825 (I-L).

2.3.3.2 Xác định điều kiện sinh trưởng của các chủng doi kháng đại diện

Một số yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng và hoạt tính kháng nắm của ba chủng S.

deccanensis 41912, S malayensis 43825 và B velezensis C15 đã được nghiên cứu chỉ tiết

và kết quả được tổng hợp tại Bảng 9.

Ching B velezensis C15 sinh trưởng tốt nhất trên mơi trường TSB ở nhiệt độ 37°C

(sau 24 giờ dịch nuơi đạt giá trị ODaoo 3,75) Đối với chủng C15, phương trình tuyến tinh

biểu diễn mối liên hệ giữa giá trị ODøsoo của dịch nuơi cấy và giá tri CFU cũng đã được xác định Y = 2x108xX — 1x105 (R? = 0.9982), trong đĩ X là giá trị ODàoo; Y là mật độ tế bào

(CFU/mL) Áp dụng cơng thức này đối với các giá tri ODaoo đã thu nhận ta cĩ giá trị

CFU/mL hiển thị trên bang (trong ngoặc) Ching xạ khuẩn S deccanensis 41912 sinh trưởng tốt nhất trên mơi trường IPS4 với nhiệt độ 28°C (sau 7 ngày nuơi cấy đạt trọng

lượng sinh khối khơ là 3,3 g/ml) Chung xạ khuẩn S malayensis 43825 sinh trưởng tốt nhất trên mơi trường IPS2 ở nhiệt độ 28°C (sau 7 ngày nuơi cấy đạt trọng lượng sinh khối

khơ là 4,78 mg/ml)

26

Bảng 9 Ảnh hưởng của điều kiện nuôi cấy tới sinh trưởng của các chủng đối kháng

Yêu tô ảnh | S deccanensis 41912 S malayensis 43825 B velezensis C15

huéng Sinh khối khô (mg/mL) Sinh khối khô (mg/mL) | (ODasoo và An,

tO)

34 (68% 10" CFU)

575 (5 x10" CFU)

Trong thi nghiém tiép theo, thoi diém (ngày) chủng VSV đối kháng đạt hoạt tinh

kháng nam cao nhất đã được nghiên cứu (Bảng 10) Thông tin này cần thiết để xác định thời điểm phù hợp đừng quá trình nuôi cấy dé thu hồi hoạt chất.

Bảng 10 Hoạt tính kháng nắm bệnh của các chủng VSV đối kháng ở các thời điểm

Thời điểm Tỷ lệ ức chê nầm bệnh (%)

thu hoạt chât£ : F miscanthi C fioriniae N solaniNhung KT2.1.2 N2.3.1 KTI.3.2

27

- Ching S deccanensis 41912 có hoạt tính kháng đối với cả bốn loài nấm gây bệnh

trên cây sâm được báo cáo trong nghiên cứu này, cao nhất sau 7 ngày nuôi cấy Ty lệ kháng >70% được ghi nhận đối với N ipomoeae LN5 (70,33%), F miscanthi

KT2.1.2 (76,67%) và C fioriniae N2.3.1 (75,88%).

- Ching S malayensis 43825 biéu hiện hoạt tính kháng đối với cả bốn loài nam gây

bệnh trên cây sâm được báo cáo trong nghiên cứu nay, cao nhất sau 7 ngày nuôi cấy.

Tỷ lệ kháng >70% được ghi nhận đối với F miscanthi KT2.1.2 (70,37%).

2.3.3.3 Tách chiết hoạt chất thô và xác định giá trị MIC của các chủng đối khang

Nong độ ức chế tối thiểu (MIC) được xác định đối với dịch chiết thô bằng dung môi ethyl acetate để đánh giá một cách chính xác hơn mức hoạt tính ức chế nắm bệnh của các chủng đối kháng (Bảng 11; Hình 10).

Bảng 11 Giá trị MIC của dịch chiết thô từ các chủng VSV đối kháng

3 chủng nắm bệnh còn lại (100 ug/ml) Đối với chủng S malayensis 43825, dịch chiết thô

chỉ có hoạt tính kháng lại 3 chủng nam bệnh N ipomoeae LNS, F miscanthi KT2.1.2 va

C fioriniae N2.3.1 với MIC ở mức 80-120 pg/ml Sau khi tách chiết hoạt chất thô, chủng

S deccanensis 41912 không thê hiện hoạt tính kháng nấm Như vậy, phương pháp tách

chiết hoạt chất bằng dung môi ethyl acetate chỉ phù hợp với ching S malayensis 43825 và

2.4 Kết luận và kiến nghị

Các nội dung nghiên cứu đã được thực hiện đầy đủ theo như đăng ký trong thuyết minh.

Các kết luận chính thu được như sau:

1 Điều tra bệnh hại trên cây sâm Việt Nam Panax vietnamensis đã được tiễn hành ở

tỉnh Quảng Nam-Kon Tum (Tây Nam Bộ) và tỉnh Lai Châu-Lào Cai (Tây Bắc) trên

hai giống sâm Ngọc Linh và Lai Châu Ba loại bệnh hại được ghi nhận gồm (i) bệnh

thán thư (tỷ lệ bệnh trung bình 5,5%—10,75%), bệnh thối nhữn lá (tỷ lệ bệnh trung

bình 12%—19%) và bệnh thối củ được phát hiện rải rác Bệnh thối nhữn lá lần đầu

tiên được báo cáo trên cây sâm Panax.

2 Đã phân lập và xác định được 4 chủng nắm gây bệnh trên cây sâm theo định đề Koch

và định danh khoa học các chủng này, cụ thể là:

+ Neocosmospora ipomoeae LN5 (VTCC 60050) gây bệnh thối nhũn lá;

+ Fusarium miscanthi KT2.1.2 (VTCC 60051) gây bệnh thối nhiin lá;

+ Colletotrichum fioriniae N2.3.1 (VTCC 60052) gây bệnh than thu;

+ Neocosmospora solani (tên cũ là Fusarium solani) KT1.3.2 (VTCC 60053) gây

bệnh thối củ.

3 Sàng lọc được 13 chủng xạ khuẩn và vi khuẩn có khả năng đối kháng ít nhất 01 trong

số 04 chủng nấm bệnh với tỷ lệ ức chế >70% Ba chủng đại diện là Bacillus

velezensis C15, Streptomyces deccanensis 41912, và Streptomyces malayensis 43825

có phổ kháng rộng được lựa chọn dé nghiên cứu chỉ tiết Kết quả đánh giá như sau:

+ Ching Bacillus velezensis C15 sinh trưởng tốt nhất trên môi trường TSB, 37°C,

sinh chất kháng nam tốt sau 5 ngày nuôi cấy Tỷ lệ kháng >70% được ghi nhận đối với F miscanthi (16,67%) và N solani (70,83%) Hoạt chat từ chủng B velezensis C15 tách chiết trong dung môi ethyl acetate kháng F miscanthi và N.

solani với giá tri MIC là 100 pg/ml

+ Ching Streptomyces deccanensis 41912 sinh trưởng tốt nhất trên môi trường

IPS4, 28°C, sinh chất kháng nấm tốt sau 7 ngày nuôi cấy Tỷ lệ kháng >70% được ghi nhận đối với N.ipomoeae LNS (70,33%), F miscanthi KT2.1.2 (76,67%) và C fioriniae N2.3.1 (75,88%) Hoạt chất từ chủng S đeccanensis 41912 không tách chiết được bằng dung môi ethyl acetate.

+ Ching S malayensis 43825 sinh trưởng tốt nhất trên môi trường IPS2, 28°C, sinh

chất kháng nắm tốt sau 7 ngày nuôi cấy Tỷ lệ kháng >70% được ghi nhận đối với F.

miscanthi KT2.1.2 (70,37%) Hoạt chất từ chủng S malayensis 43825 tach chiết

trong ethyl acetate kháng F miscanthi KT2.1.2 với gia trị MIC là 120 pg/ml.

2.5 Kién nghi

Sang lọc các hoạt chất kháng nấm gây bệnh trên sâm từ bộ chủng có hoạt tính đối kháng đáng chú ý trong nghiên cứu này Trên cơ sở phương pháp tách chiết phù hợp lựa chọn các chủng đáp ứng các quy trình công nghệ để nghiên cứu phát triển chế phẩm kiểm soát

bệnh trên cây sâm Panax vietnamensis

29

2.6 Tài liệu tham khảo

Burgess LW, Knight TE, Tesoriero L, Phan HT (2009) Cam nang chan đoán bệnh cây ở Việt Nam

Chuyên khảo ACIAR số 129a, 210 pp ACIAR: Canberra.

Đỗ Thị Hà, Trần Thị Kim Hương, Phạm Quang Tuyến, Nguyễn Minh Khởi, Lê Thị Loan, Vũ Thị

Diệp (2018) Nghiên cứu đặc điểm hình thái và vi học phục vụ xây dựng tiêu chuẩn cơ sở dược liệu

sâm Lai Châu (Panax vietnamensis var fuscidiscus) Tap chí Dược học 58(8):21-25.

Lương Thị Hoan, Phan Thị Hương Trà, Hoàng Thị Như Nụ, Lê Việt Dũng, Dương Thị Phúc Hậu,

Nguyễn Đăng Minh Chánh (2017) Nghiên cứu tổng quan nhân giống sâm Ngọc Linh (Panax

vietnamensis Ha et Grushv.) Tạp chi Khoa học Lâm nghiệp 4: 26-37.

Nguyễn Minh Khởi và cs (2018) Báo cáo tổng kết đề tài KHCN cấp Nhà nước: Khai thác phát

triển nguồn gen sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv ).

Mai Văn Quân, Ngô Quang Huy, Lê Quang Mẫn, Nguyễn Văn Liêm, Trịnh Xuân Hoạt 2020.

Nắm Colletotrichum acutatum gây bệnh thán thư trên cây sâm Ngọc Linh tại tỉnh Kon Tum Tap

chi Bảo vệ thực vật 1: 14 — 19.

Nguyễn Tập (2005) Các loài thuộc chỉ Panax L ở Việt Nam 7; ap chi Dược liệu 10(3): 71-76.

Nguyễn Thượng Dong (2007) Sâm Việt Nam và một số cây thuốc họ Nhân sâm NXB Khoa học

và Kỹ thuật.

Phan Thuý Hiền, Chu Thị Mỹ, Lê Thị Thu, Đặng Thị Hà, Nguyễn Thị Bình (2016) Thành phần

sâu và bệnh hại sâm Ngọc Linh tại Việt Nam Tạp chí Khoa học và Công nghệ Việt Nam 7(8):7-12.

Phạm Quang Tuyến và cs (2022) Nghiên cứu xây dựng quy trình nhân giống và trồng cây Sâm

Lai Châu (Panax vietnamensis vat fuscidiscus K Komatsu, S.Zhu & S.Q.Cai) Cục Thông tin

khoa học và công nghệ quốc gia, đề tài KHCN Mã số 17029/2020.

Phan Kế Long, Vũ Đình Duy, Phan Kế Lộc, Nguyễn Giang Sơn, Nguyễn Thị Phương Trang, Lê

Thị Mai Linh & Lê Thanh Sơn (2013) Mối quan hệ di truyền của các mẫu sâm thu ở Lai Châu trên

cơ sở phân tích trình ty nucleotide vùng matK và ITSrDNA Tap chí Công nghệ sinh học 12(2): 327-337.

Trần Thị Kim Hương, Hà Thị Thanh Bình, Nguyễn Mai Thơm, Đào Thu Huế (2019) Nghiên cứu

ảnh hưởng của một số biện pháp kỹ thuật trồng đến khả năng sinh trưởng, phát triển và năng suất

của cây sâm Lai Châu (Panax vietnamensis var fuscidicus K Komatsu, S Zhu & S.Q Cai) tại Lai Châu Tap chi Khoa học Nông nghiệp Việt Nam 17(7):588-593.

Trịnh Bá Hoạt, Mai Văn Quân, Ngô Quang Huy, Lê Quang Mẫn, Nguyễn Thành Chung, Hoàng

Văn Chất, Vũ Văn Long (2020) Báo cáo đễ tài KHCN: Nghiên cứu phòng trừ sâu bệnh trên cây

Arasu MV, Duraipandiyan V, Agastian P, Ignacimuthu S (2009) Jn vitro antimicrobial activity of Streptomyces spp ERI-3 isolated from Western Ghats rock soil (India) Journal de Mycologie

Médicale 19(1): 22-28.

Chandler D, Bailey AS, Tatchell GM, Davidson G, Greaves J, Grant WP (2011) The development, regulation and use of biopesticides for integrated pest management Philosophical Transaction of the Royal Society B 366(1573):1987-98.

Chen X, Hu LF, Huang XS, Zhao LX, Miao CP, Chen YW, Li YQ (2019) Isolation and characterization of new phenazine metabolites with antifungal activity against root-rot pathogens

of Panax notoginseng from Streptomyces.Journal of Agricultural and Food

Chemistry 67(41):11403-11407.

30

Cho KM, Hong SY, Lee SM, Kim YH, Kahng GG, Lim YP, et al (2007) Endophytic bacterial communities in ginseng and their antifungal activity against pathogens Microbial Ecology 54(2):341-51.

Cho SE, Park MJ, Choi GS, Park JH, Shin HD (2016) Powdery mildew caused by an Erysiphe sp.

on Korean Ginseng Journal of Phytopathology 164(5): 337-341.

Chowdhury MDEK, Bae H (2018) Bacterial endophytes isolated from mountain-cultivated ginseng (Panax ginseng Mayer) have biocontrol potential against ginseng pathogens Biological Control 126:97-108.

Damm U, Cannon PF, Woudenberg JHC, Crous PW (2012) The Colletotrichum acutatum species complex Studies in Mycology 73(1):37-113.

Dhanasekaran D, Thajuddin N, Panneerselvam A (2012) Applications of actinobacterial fungicides

in agriculture and medicine In: Fungicides for Plant and Animal Diseases, eds by Dhanasekaran

D et al pp 29-54 In Tech, Rijeka.

Dowling M, Peres N, Villani S, Schnabel G (2020) Managing Colletotrichum on fruit crops: A

"complex challenge" Plant Disease 104(9):2301—23 16.

Durairaj K, Velmurugan P, Park JH, Chang WS, Park YJ, Senthilkumar P, Oh BT (2018) An

investigation of biocontrol activity Pseudomonas and Bacillus strains against Panax ginseng root

rot fungal phytopathogens Biological Control 125:138-146.

Fan ZY, Miao CP, Qiao XG, Zheng YK, Chen HH, Chen YW, Guan HL (2016) Diversity, distribution, and antagonistic activities of rhizobacteria of Panax notoginseng Journal of Ginseng Research 40(2):97-104.

Farh ME, Kim YJ, Yang DC (2018) Cylindrocarpon destructans/Ilyonectria radicicola-species complex: Causative agent of ginseng root-rot disease and rusty symptoms Journal of Ginseng Research 42: 9-15.

Farr DF, Rossman AY (2015) Fungal databases Systematic Mycology & Microbiology Laboratory, ARS, USDA In- ternet resource: http://nt.ars grin.gov/fungaldatabases/ (verified Jan

Guan YM, Zhang LL, Ma YY, Zhang Y, Zhang SN (2021) First report of anthracnose of American ginseng caused by Colletotrichum sojae in northeast China Plant Disease 105 (11): 4 May.

Han KD, Alam S, Lee TS, Lee MW (2004) Ginseng anthracnose caused by Colletotrichum

dematium Plant Pathology Journal 20 (3): 196-199.

Hill SN, Hausbeck MK (2009) Factors influencing airborne conidial concentrations of Alternaria panax in cultivated American ginseng gardens Plant Disease 93(12): 1311-1316.

Hong CE, JU Kim, Lee JW, Lee SW, Jo IH (2018) Diversity of bacterial endophytes in Panax ginseng and their protective effects against pathogens 3 Biotech 8(9): 397.

Jin Y, Jiang S, Jiang X (2018) Occurrence of root rot of Panax notoginseng caused by Fusarium oxysporum in China International Journal ofAgriculture and Biology 20(10): 2175-2180.

Kalia A, Gosal SK (2011) Effect of pesticide application on soil microorganisms Archives of

31

Agronomy and Soil Science 57:569-596.

Kim YC, Lee JH, Bae YS, Sohn BK, Park SK (2010) Development of effective friendly approaches to control Alternaria blight and anthracnose diseases of Korean ginseng.

environmentally-European Journal of Plant Pathology 127(4): 443-450.

Kwon JH, Choi O, Kang B, Lee Y, Park J, et al (2017) Identification of Neocosmospora ipomoeae

causing tomato stem rot in Korea Australasian Plant Disease Notes 12 (1): 26 Jul.

Lee SG (2004) Fusarium species associated with ginseng (Panax ginseng) and their role in the

root-rot of ginseng plant Research in Plant Disease 10(4):248-259.

Liyanapathiranage P, Avin FA, Swiggart E, Lopez EF, Parajuli M, Oksel C, Gao Y, Baysal-Gurel

F (2023) First report of leaf spot of Panax quinquefolius caused by Pestalotiopsis nanjingensis in Tennessee and the United States Plant Disease 107:2518.

Lu XH, Jiao XL, Chen AJ, Luo Y, Gao WW (2015) First report of ljyonectria robusta causing rusty root of Asian ginseng in China Plant Disease 99:156.

Ma L, Cao YH, Cheng MH, Huang Y, Mo MH, Wang Y, et al (2013) Phylogenetic diversity of bacterial endophytes of Panax notoginseng with antagonistic characteristics towards pathogens of root-rot disease complex Antonie Van Leeuwenhoek 103(2):299- 312.

Ma G, Gao X, Nan J, Zhang T, Xie X, Cai Q (2021) Fungicides alter the distribution and diversity

of bacterial and fungal communities in ginseng fields Bioengineered 12(1): 8043-8056.

MePartland J., Hosoya T 1998 Species of Colletotrichum on ginseng (Panax) Mycotaxon LXVII 3-8.

Mao ZS, Long YJ, Zhu YY, Zhu SS, He XH, Chen ZJ (2014) First report of Cylindrocarpon destructans causing black root rot of sanqi (Panax notoginseng) in China Plant Disease 98:162.

Narayanasamy P (2011) Detection of fungal pathogens in plants In: Microbial Plant Detection and Disease Diagnosis Springer Netherlands, pp 5-199.

Pathogens-Nguyen HT, Phan LK, Huynh K-LV, et al (2023) Untargeted metabolomics approach for the

differentiation between Panax vietnamensis var vietnamensis and Panax vietnamensis var.

fuscidiscus Metabolites 13 (6): 763.

O’Donnell K, Whitaker BK, Laraba I,et al (2022) DNA sequence-based identification

of Fusarium: A work in progress Plant Disease 106(6): 1597-1609.

Putnam ML, Du Toit LJ (2003) First report of alternaria blight caused by Alternaria panax on ginseng (Panax quinquefolius) in Oregon and Washington, USA Plant Pathology 52(3).

Radad K, Gille G, Liu L, Rausch WD (2006) Use of ginseng in medicine with emphasis on neurodegenerative disorders Journal of Pharmacological Sciences 100(3):175-86.

Ryu H, Park H, Suh DS, Jung GH, Park K, Lee BD (2014) Biological control of Colletotrichum

panacicola on Panax ginseng by Bacillus subtilis HK-CSM-1 Journal of Ginseng Research 38(3):

215-219.

Saitou N, Nei M (1987) The neighbor-joining method: a new method for reconstructing phylogenetic trees Molecular Biology and Evolution 4(4): 406-425.

Sun Z, Yang L, Zhang L, Han M (2018) An investigation of Panax ginseng Meyer growth

promotion and the biocontrol potential of antagonistic bacteria against ginseng black spot Journal

of Ginseng Research 42(3): 304-311.

Tomita Y, Nakajima S, Kubota M, Hirooka Y, Iwamoto C (2021) Stem blight of paprika (Capsicum annuum) caused by Neocosmospora ipomoeae in Tokyo Japan Annual Report of the Kanto-Tosan Plant Protection Society 68:5-10

Wang CH, Shang WJ, Wang Q, Fan SH, Subbarao KV, Xu XM, Hu XP (2021) White rot of Panax

quinquefolius caused by Sclerotinia nivalis Plant Pathology 70(9): 2034-2045.

Wang C, You Z, Fu J, Chen S, Bai D, Zhao H, Song P, Jia X, Yuan X, Xu W, Zhao Q, Pang F (2022) Application of metagenomic next-generation sequencing in the diagnosis of pulmonary

32

invasive fungal disease Frontiers in Cellular and Infection Microbiology 12:949505.

Wang HL, Yang K, Huang HP, ef al (2024) First report of leaf spot caused by Boeremia exigua on Panax ginseng in Liaoning, China Plant Disease 108(1): 2 Jan.

Wei JG, Chen YX, Wu JH (1989) Studies on identification of pathogens of tianqi [Panax notoginseng] anthracnose and its biological characteristics J Guangxi Agr College, 8(1):25-33.

White TJ, Bruns T, Lee S, Taylor JW (1990) Amplification and direct sequencing of fungal ribosomal RNA genes for phylogenetics p 315-322 In: “PCR Protocols: A Guide to Methods and

Applications” (MA Innis, DH Gelfand, JJ Sninsky, TJ White, eds.) Academic Press Inc., New York, 482 pp.

Xiao C, Yang L, Zhang L, Liu C, Han M (2016) Effects of cultivation ages and modes on microbial diversity in the rhizosphere soil of Panax ginseng Journal of Ginseng Research 40:28- 37.

Xu X, Zhao Y, Bao K, Miao C, Zhao L, Chen Y, Li Y (2022) Purification and characterization of anti-phytopathogenic fungi angucyclinone from soil-derived Streptomyces cellulosae Folia

PHAN II TOM TAT KET QUA NGHIÊN CỨU VÀ ĐÀO TẠO

3.1 Hàng hóa, thiết bị, nguyên vật liệu, dây chuyền công nghệ, giống cây trồng, giống vật

04 loài gay | - Neocosmospora ipomoeae

bệnh trên LNS gây bệnh thôi nhiin lá.

Bộ chủng VSV ay đủ sâm Ngọc | - Fusarium miscanthi KT2.1.2

- Colletotrichum fioriniae N2.3.1 gây bệnh than thu.

- Neocosmospora solani KT1.3.2 gay bénh thoi cu.

3 chủng có | - Bacillus velezensis C15:

‘ hoat tinh khang > 70% đôi với F.

Bộ chủng VSV có âm bệ kháng nam | miscanthi và N solani

hoạt tính kháng : bệnh > 70% | - Streptomyces deccanensis

VSV gây bệnh : ; 41912: kháng >70% đôi với N.

trên sâm Ngọc ng vi ipomoeae, F miscanthi va C.

Linh va sâm Lai fioriniae.

Chau - Streptomyces malayensis

43825: kháng >70% đôi với F.

miscanthi

2 Báo cáo mô tả về nguyên lý ứng dụng, phương pháp, tiêu chuẩn, quy phạm; Phần mềm

máy tính; Bản vẽ thiết kế; Quy trình công nghệ; Sơ đỏ, bản đồ; Số liệu, cơ sở dữ liệu; Báo

cáo phân tích; Tài liệu dự báo (phương pháp, quy trình, mô hình, ); Đề án, qui hoạch;

Luận chứng kinh tế-kỹ thuật; Báo cáo nghiên cứu khả thi và các sản phẩm khác,

Yêu cau khoa học hoặc/và chỉ tiêu

TT | Sản phẩm KH&CN kinh tế - kỹ thuật

Duong TPH, Pham TD, Pham TTV, Le HA, | Journal of Plant Có Đạt

Nguyen DT, Khuat TC, Nguyen XN, Dinh Protechtion

TH (2024) Report on emerging foliar soft

rot disease on ginseng Panax vietnamensis and the identification of Neocosmospora

ipomoeae and Fusarium miscanthi as the

causal pathogens.

Research (Q3)

Chap nhan dang

Bao cáo khoa học toàn văn đăng trong kỷ yêu hội nghị quôc tê (có phản biện) thuộc hệ

g Web of Science, Scopus

Pham “Thùy Dương, Dương Thị Phúc Hậu, Tạp chí Bảo vệ

Nguyễn Duy Tới, Nguyễn Xuân Nam, Khuất | thực vật,

Thi Chung, Thái Mạnh Hùng, Dinh Thuy số 3(314): 9-15.

Hang (2024) Báo cáo bệnh than thư trêncây sâm Lai Châu Panax vietnamensis var.

fuscidiscus ở tinh Lai Châu va Lào Cai và

xác định tác nhân gây bệnh

Sách chuyên khảo/Chương sách chuyên khảo được ân hành bởi các nhà xuât bản quôc

tế uy tin (theo xếp hạng hiện hành của Web of Science, Scopus, nhóm A-B của SENSE,nhóm 100 trường đại học (đối với khối khoa học tự nhiên và công nghệ) và nhóm 500 trường đại học (đối với khối khoa học xã hội và nhân văn) hàng đầu thé giới theo xếp

hạng của THE (Times Higher Education), danh mục của Hội đông Giáo sư NN

_ ~+ Nn nl WIN Oo —

* Ghi chú: l

- Cột “Hình thức công bố sản phẩm KH&CN”:

+ Đối với bài báo khoa học và sách chuyên khảo cần ghi rõ thông tin theo thứ tự <tén tác giả, năm

phát hành, tên công trình, tên tạp chí/nhà xuất bản, số phát hành, trang đăng công trình, mã công

trình đăng tạp chi/sach chuyên khảo (DOI), loại tap chi Web of Science/Scopus>.

+ Đối với báo cáo đăng trong kỷ yếu hội thảo cần ghỉ rõ thông tin theo thứ tự <tén fác giả, tên công

trình, tên hội nghị, địa điểm tổ chức, năm phát hành, trang đăng công trình>.

- Các ấn phẩm khoa học (bài báo, sách chuyên khảo ) chỉ được chấp nhận nếu có ghỉ địa chỉ và cảm ơn

tài trợ của ĐHQGHN theo đúng quy định.

- Gửi kèm toàn văn, minh chứng về các sản phẩm công bố.

Dương Thị Phúc Hậu á u thập mẫu sâm bệnh và xác |Chưa bảo vệ

ä inh cac tac nhan a bénh trén

* Ghi chú: Gửi kèm ban photo trang bìa luận án/luận văn và bang hoặc giây chứng nhận nghiên cứu

sinh/học viên cao học nếu học viên đã bảo vệ thành công luận án/luận văn;

35

PHAN IV TINH HÌNH SỬ DỤNG KINH PHÍ

TT |Nội dung chỉ Kinh phí Kinh phí Ghi chú

được duyệt thực hiện triệu đồng †riệu đồng

Chiphitryctiétp sss | 4650 | 4650 | — —-| Nhân công lao độngkhoahoo | 33808 | 33808 | |

| 2_ Nguyên vật liệu, năng lượng | 9886 | 9886 | |

Các chủng xa khuẩn đã sàng lọc có hoạt tính đối kháng cao với các loài nam gây

bệnh mới xác định cần được nghiên cứu chi tiết về các hoạt chất kháng nam dé phat trién san pham sinh học phòng tri bệnh trên cây sâm Ngoc Linh và sâm lai Chau.

Hà Nội, ngày 21 tháng 08 năm 2024Đơn vị chủ trì ; Chủ nhiệm nhiệm vu

, (Ho tên, chữ ky)

Hal)

Nguyễn Thị Hải

36

PHỤ LỤC 1: Bảng tổng hợp kết quả điều tra bệnh trên cây sâm Ngọc linh và sâm Lai Châu

Phương thức | Giống bọ Thán Thôi

thôn 2, xã Trà Linh, | 1591'36°*B Trồng trong

huyện Nam Trà My, | 107958°53''ÐĐ | nhà lưới

tỉnh Quảng Nam Nóc Tac Ngo, thôn

2, xã Trà Linh, 15900°607''B | Trồng dưới tán

huyện Nam Trà My, | 108901°660°*Ð | rừng tự nhiên

Xã Pa vệ Sử, huyện 03434355 x H4 gui 22°33’42”’B Trong dudi tan Lai 6 ø 6

te Tè, tinh Lai 102049°49°*ĐÐ ừng tự nhiên, Châu 12% 30% 0%

Xã Sa Dê Phìnsey GER cai 22018'48''B | Trồng trong Lai ỡ 6 6

SH | huyén Sin Ho, tinh | 102012›2»Ð | nhà lưới Châu | 22% | 2% | 4%Lai Chau

Trung tam Nghién Lai

Chau 16% 10% 0% cứu dược liệu Sa Pa

Thôn Koxia, xã Ngọc Lây, huyện

Tu Mơ Rông, tỉnh Kon Tum

Thôn Măng Rương

2, xã Ngọc Lây, huyện Tu Mơ Rông,

PHỤ LỤC 2: Hồ sơ các chủng gây bệnh đã báo cáo

1 Hồ sơ chủng Neocosmospora ipomoeae LN5

THÔNG TIN CHUNG

Tên khoa Neocosmospora ipomoeae

Ký hiệu LNS

Mã VTCC 60050

Nguồn gốc | Lá sâm Lai Châu bị bệnh thối nhữn

Mức an toàn | Gây bệnh thối nhữn lá trên cây sâm Ngọc Linh và sâm Lai Châu

Đặc điểm - Trên môi trường PDA khuẩn lạc màu trắng có đường kính 60-70 mm, sợi

hình thái nâm có vách ngăn

- Cuống sinh bào tử đính, macroconidia có hình trụ đến hình lưỡi liềm với kích

thước 25-40x3-5 tum, microconidia có hình elip đên hình trụ với kích thước

7-10x1-3 um

Cây phân Neocosmospora variasi

i ề 53 NR 177139.1

loai dựa trên NgocZZiDSida PATER a Neocosmospora jpomoeae

trinh tu ITS i (MG189941.1) 100 (LR583610.1)= Neocosmospora stercicola Neocosmospora noneumartii

98 | Neocosmospora macrospora

._ (LT746218.1) Neocosmospora epipeda

(GU170643.1) (MW834285.1) Neocosmospora martii Neocosmospora mahasenii

(HM534894.1) (HQ728152.1)

Mã trìnhtự | ITS: PP422928

tai GenBank | TEF1: PP458365

Mô tả biểu _ | Bệnh thối nhữn lá được báo cáo lần đầu tiên trên cây sâm Panax vietnamensis với

hiện bệnh tỷ lệ xuât hiện là 2 — 26%, tương đương với các bệnh trên lá được báo cáo khác.

Vệt bệnh thôi rita, có đường kính từ 5 đên 10 mm với một đôm màu xám đen dén

đen ở trung tâm Theo thời gian bệnh phát triên, vết bệnh ngày càng to, lá bị

38