xây dựng hệ thống tái sinh cây cà chua lycopersicon esculentum mill khảo sát ảnh hưởng của chất chọn lọc ppt đến mô và cây phục vụ nghiên cứu chuyển gen

THÔNG TIN TÀI LIỆU

Thông tin cơ bản

Tiêu đề	Xây dựng hệ thống tái sinh cây cà chua (Lycopersicon esculentum Mill) khảo sát ảnh hưởng của chất chọn lọc PPT đến mô và cây, phục vụ nghiên cứu chuyển gen.
Tác giả	Trần Văn Tèo
Người hướng dẫn	TS. Nguyễn Hữu Hổ, KS. Lê Tấn Đức
Trường học	Trường Đại học Mở – Bán công TPHCM
Chuyên ngành	Công nghệ Sinh học
Thể loại	Luận văn tốt nghiệp
Năm xuất bản	2004
Thành phố	Thành phố Hồ Chí Minh

Định dạng
Số trang	72
Dung lượng	830,13 KB

Cấu trúc

Chương I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1. Nguồn gốc, phân bố và phân loại (0)
- 1.1. Nguoàn goác (12)
- 1.2. Phaân boá (12)
- 1.3. Phân loại (13)
  - 1.3.1. Chi phuù Eriopericon (0)
    1.3.1.1. Lycopersicum hisrutum Humb (13)
    1.3.1.2. Lycopersicum peruviarum Mill (14)
  - 1.3.2. Chi phuù Eulycopersicon (0)
    1.3.2.1. L.esculentum var commune (14)
    1.3.2.2. L.esculentum vargrandifolium (0)
    1.3.2.3. L.esculentum var.validum (14)
    1.3.2.4. L.esculentum var.puriforme (15)
- 1.4 Di truyền học (16)
- 2.1. Heọ reó (16)
- 2.2. Thaân (17)
- 2.3. Lá (18)
- 2.4. Hoa (19)
- 3. Đặc điểm sinh thái cây cà chua (22)
  - 3.1. Khí hậu (22)
  - 3.2. Nhiệt độ (22)
  - 3.3. Ánh sáng (23)
  - 3.4. Độ ẩm (23)
  - 3.5. Đất (24)
- 4. Tình hình sản xuất cà chua trên thế giới và Việt Nam (24)
  - 4.1. Khả năng mở rộng trồng cà chua ở Việt nam (26)
  - 4.2. Nâng cao dinh dưỡng (27)
  - 4.3. Tính đa dụng của cà chua (28)
- 5. Hiện trạng rau và hướng giải quyết (29)
  - 5.1 Hiện trạng rau (29)
  - 5.2. Hướng giải quyết (31)
  - 6.1. Khái niệm (32)
  - 6.2. Ứng dụng của nuôi cấy mô tế bào thực vật (33)
  - 6.3. Các yếu tố ảnh hưởng việc nuôi cấy (33)
    6.3.1. Sự lựa chọn mẫu nuôi cấy (33)
    6.3.2. Môi trường nuôi cấy (34)
    6.3.2.1. Đường (34)
    6.3.2.2. Ánh sáng (34)
    6.3.2.3. Nhiệt độ (35)
    6.3.2.4. Những yếu tố kỹ thuật khác (35)
  - 6.4. Các chất kích thích sinh trưởng thực vật (35)
    6.4.1. Các auxin (36)
    6.4.1.1 Cơ chế tác động ở mức độ phân tử trong tế bào (36)
    6.4.1.2. Chức năng của auxin (36)
    6.4.1.3. Cơ quan tổng hợp (37)
    6.4.2. Cytokynin (37)
    6.4.2.2. Chức năng (38)
    6.4.2.3. Cơ quan tổng hợp (38)
    6.4.3. Gibberelline (39)
    6.4.3.1. Chức năng (39)
    6.4.3.2. Tổng hợp Gibbereline (39)
    6.4.4. Ethylen (39)
    6.4.5. Acid abscisic (40)
    6.4.5.1. Chức năng (40)
  - 6.5. Các quá trình (40)
    6.5.1. Quá trình tạo mô sẹo (40)
    6.5.2. Quá trình tái sinh (41)
    6.5.2.1. Khái niệm tái sinh (41)
    6.5.2.2. Hệ thống tái sinh (41)
    6.5.2.3. Ý nghĩa của việc tái sinh (42)
    6.5.3.1. Nguồn gốc của vật liệu nuôi cấy (42)
    6.5.3.2. Các môi trường (42)
Chương II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM 1.Thời gian và địa điểm (0)
- 2. Phửụng tieọn thớ nghieọm (0)
  - 2.1. Trang thiết bị và dụng cụ trong thí nghiệm (45)
    2.1.1. Phòng chuẩn bị (45)
    2.1.2. Phòng cấy (45)
    2.1.3. Môi trường (46)
    2.1.3.1. Môi trường tạo cây in- vitro (46)
    2.1.3.2. Môi trường tạo rễ (46)
    2.1.4. Hoá chất (46)
    2.1.5. ẹieàu kieọn nuoõi caỏy (47)
- 3. Vật liệu và phương pháp thí nghiệm (47)
  - 3.1. Vật liệu (47)
  - 3.2. Phương pháp thí nghiệm (0)
    3.2.1. Phương pháp thu thập số liệu (48)
    3.2.2. Các thí nghiệm (49)
    3.2.2.1. Aûnh hưởng của môi trường nuôi cấy đến khả năng tái (49)
    3.2.2.2. Aûnh hưởng của nồng độ NAA đến khả năng ra rễ của cây cà chua tái sinh (49)
    3.2.2.3. Aûnh hưởng của chất chọn lọc PPT đến khả năng tái (49)
    3.2.2.4. Aûnh hưởng của chất chọn lọc PPT đến khả năng tái (50)
    3.2.2.5. Aûnh hưởng của chất chọn lọc PPT đến sinh trưởng và phát triển của cây cà chua (50)
Chương III: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 1. KẾT QUẢ (0)
- 1.1. Thớ Nghieọm 1 (52)
- 1.2. Kết Quả Thí Nghiệm 2 (55)
- 1.3. Thớ nghieọm 3 (0)
- 1.4. Thớ nghieọm 4 (59)
Chương IV KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 1. Kết luận (0)
- 1.1. Hệ thống tái sinh (67)
- 1.2. Nồng độ PPT dùng để chọn lọc cây chuyển Gen (67)
- 2. Đề nghị (67)

Nội dung

VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM 1.Thời gian và địa điểm

Vật liệu và phương pháp thí nghiệm

Sử dụng giống cà chua F1 607 của công ty liên doanh hạt giống Đông Tây

Sau 10 ngày gieo trên môi trường MS, sau đó cắt rời tử diệp và thân trụ dùng làm nguyên liệu cho việc tái sinh

- Nước javel( hoạt chất hypocloric natrium 36 g/l)

- PPT: hoạt chất là phosphinothricin

Môi trường sử dụng trong thí nghiệm:

Môi trường căn bản là môi trường căn bản MS( Murashige & skoog 1962) gồm:

- Vitamin B5 (Gamborg và cộng sự, 1968)

- pH: 5,8 ẹieàu kieọn nuoõi caỏy:

Các thí nghiệm nuôi cấy trong bình tam giác chứa 50ml môi trường, đặt trong phòng sáng

- Cường độ chiếu sáng: 3000-3500 lux

- Thời gian chiếu sáng 10 giờ/ ngày

Các thí nghiệm được bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên đơn yếu tố CRD (Completed RDNAomized Degsin)

3.2.1 Phương pháp thu thập số liệu

- Số mẫu tái sinh/tổng số mẫu : đếm toàn bộ số mẫu tạo chồi trên tổng số maãu caáy

- Số rễ trên cây : đếm toàn bộ số rễ có trên cây

- Xác định tỷ lệ (%) : ×100 caáy đã maãu soá Toồng sinh tái maãu Soá

- Đếm toàn bộ số mẫu không tái sinh (hay số cây chết) trên môi trường sử duùng PPT treõn toồng soỏ maóu (hay toồng soỏ caõy nuoõi caỏy)

- Phân tích thống kê: xử lý số liệu thống kê theo MSTATC, sau đó dựa vào bảng Prob trong bảng ANOVA để quyết định nên trắc nghiệm phân hạng hay không Nếu Prob < 0,05 thường dùng trắc nghiệm LSD ở mức độ tin cậy là 0,01 hay 0,05 để đánh giá kết quả thí nghiệm.

3.2.2.1 Aûnh hưởng của môi trường nuôi cấy đến khả năng tái sinh cây cà chua từ lá mầm và trụ mầm

Hạt cà chua được cho vào bình tam giác nhỏ đã hấp vô trùng, rửa hạt bằng cồn

70 o trong thời gian 1 phút Sau đó rửa lại bằng nước cất vô trùng 3 lần, tiếp đến cho hạt vào dung dịch nước javel 50% trong thời gian từ 10-15 phút(100% hạt được tẩy trắng) và rửa lại bằng nước cất vô trùng 3 lần Sau đó, tiến hành vô mẫu trên môi trường MS Sau 8-10 ngày vô trùng, mẫu cây xuất hiện hai lá mầm hoàn chỉnh, tiến hành cắt hai lá mầm, sao cho không dính mô phân sinh chồi ở gốc tử diệp và cắt lấy hai đoạn thân trụ cũng không dính mô phân sinh Sau đó chúng được chuyển vào môi trường tái sinh có thêm các chất kích thích tố thuộc nhóm auxin và cytokynin ở các nồng độ khác nhau

3.2.2.2 Aûnh hưởng của nồng độ NAA đến khả năng ra rễ của cây cà chua tái sinh

Cây cà chua tái sinh từ lá mầm và trụ mầm sau 6 tuần nuôi cấy được dùng làm mẫu thí nghiệm Thí nghiệm được bố trí theo kiểu 1 yếu tố hoàn toàn ngẫu nhiên gồm 3 nghiệm thức, 3 lần lặp lại tương ứng với 3 môi trường tạo rễ Theo dõi số lượng rễ và chiều dài rễ của mẫu nuôi cấy sau 2 tuần

3.2.2.3 Aûnh hưởng của chất chọn lọc PPT đến khả năng tái sinh lá mầm của cây cà chua

Lá mầm cà chua 10 ngày tuổi được cấy trên môi trường CC2 có bổ sung chất PPT với nồng độ (0; 1; 2; 3; 4; 5 mg/l) Số mẫu là 32 lỏ ù cho mỗi nghiệm thức Theo dõi: số lá mầm chết sau 4 tuần nuôi cấy

3.2.2.4 Aûnh hưởng của chất chọn lọc PPT đến khả năng tái sinh trụ mầm của cây cà chua

Trụ mầm cây cà chua 10 ngày tuổi được cắt lấy hai đoạn, mỗi đoạn 2 cm được cấy trên môi trường CC2 có bổ sung chất PPT với nồng độ(0; 1; 2; 3; 4; 5mg/l) số mẫu là 32 trụ mầm cho mỗi nghiệm thức

Theo dõi: số trụ mầm chết sau 4 tuần nuôi cấy

3.2.2.5.Aûnh hưởng của chất chọn lọc PPT đến sinh trưởng và phát triển của cây cà chua

Cây cà chua tái sinh được nuôi cấy trên môi trường CC2 có bổ sung chất chọn lọc PPT với nồng độ (0; 2; 4; 6; 8; 10mg/l) số mẫu là18 cây cho mỗi nồng độ khác nhau

Theo dõi: nồng độ gây chết cây sau 3 tuần nuôi cấy

3.2.2.6 Khả năng chống chịu của cà chua 1 tháng tuổi đối với thuốc trừ cỏ Basta có hoạt chất PPT

Hạt cà chua được gieo trong trong các chậu kích thước 25x30 cm, thành phần gồm đất, tro trấu, phân chuồng với tỉ lệ 1: 1: 1, mỗi chậu 5 cây Sau một tháng phun thuốc trừ cỏ Basta với các nồng độ (0 ; 50 ;100 ; 150 ;200 ; 300 mg/l) thí nghiệm bố trí gồm 15 cây cho mỗi nồng độ xử lý thuốc

Theo dõi: số cây chết sau hai tuần phun thuốc

CHệễNG III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

Ngày đăng: 08/08/2024, 15:56