Xây dựng hệ thống tái sinh cây rau muống bằng công nghệ nuôi cấy mô tế bào

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA NÔNG HỌC □ □ KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: “XÂY DỰNG HỆ THỐNG TÁI SINH CÂY RAU MUỐNG BẰNG CÔNG NGHỆ NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO” Sinh viên thực : LÊ VĂN NAM Mã sinh viên : 632540 Lớp : K63-NNCNCA Người hướng dẫn : PGS.TS NGUYỄN THANH TUẤN Bộ môn : DI TRUYỀN VÀ CHỌN GIỐNG CÂY TRỒNG HÀ NỘI, 2022 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan kết số liệu nghiên cứu “Xây dựng hệ thống tái sinh rau muống công nghệ nuôi cấy mô tế bào” tuyệt đối trung thực chưa cơng bố trước Đề tài, nội dung báo cáo sản phẩm mà nỗ lực nghiên cứu trình học thực tập phòng Di truyền Tế Bào Thực Vật – Viện Cơng nghệ Sinh học Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm trước môn, khoa nhà trường cam đoan Hà Nội, ngày … tháng … năm 2022 Sinh viên thực Lê Văn Nam LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, xin gửi lời cảm ơn chân thành đến PGS.TS.Nguyễn Thanh Tuấn, PGS.TS Đỗ Thị Huyền TS Lê Thị Bích Thuỷ tạo điều kiện theo sát hướng dẫn suốt thời gian thực khố luận tốt nghiệp Tơi xin gửi lời cảm ơn đến PGS TS Đỗ Thị Huyền, TS Lê Thị Bích Thuỷ, phịng Di truyền Tế bào Thực vật – Viện Công nghệ Sinh học tạo điều kiện thuận lợi cho thực đề tài Tôi xin cảm ơn thầy, cô giáo khoa Nông học – Học viện Nông nghiệp Việt Nam truyền đạt cho kiến thức, tận tình bảo suốt trình học tập trường Trong thời gian thực khóa luận tốt nghiệp, nhận hướng dẫn hỗ trợ tận tình từ tất anh, chị cán phòng Di truyền Tế bào Thực vật – Viện Công nghệ Sinh học Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến toàn thể anh, chị cán Phịng Cuối cùng, tơi muốn gửi lời cảm ơn tới gia đình bạn bè ln bên ủng hộ, giúp đỡ động viên suốt trình học tập vừa qua Mặc dù cố gắng hồn thành khóa luận tốt nghiệp phạm vi khả có thể, nhiên khơng tránh khỏi thiếu sót, mong nhận cảm thơng bảo tận tình từ q thầy để đề tài hồn thiện Hà Nội, ngày … tháng … năm 2022 Sinh viên thực Lê Văn Nam TĨM TẮT Mục đích đề tài: Xác định môi trường tối ưu tái sinh rau muống từ mô sẹo nuôi cấy in vitro dựa việc khảo sát ảnh hưởng môi trường chất kích thích sinh trưởng đến q trình tạo mơ sẹo, tạo chồi, rễ rau muống Phương pháp nghiên cứu kết thu được: Mơi trường muối khống Murashige Skoog (1962) sử dụng để ni cấy rau muống in vitro Trong q trình tiến hành thí nghiệm, chúng tơi tiến hành thí nghiệm: Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng chất khử trùng thời gian khử trùng đến mẫu cấy rau muống làm nguyên liệu chọn giống Kết với nồng độ Giaven NaClO 50 % khử trùng thời gian 20 phút cho kết tối ưu Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng mơi trường khống chất kích thích sinh trưởng đến ni cấy tạo mô sẹo rau muống Kết nghiệm thức CT4 (MS bổ sung BAP mg/l, KIN mg/l, NAA mg/l) cho kết tối ưu Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng mơi trường khống chất kích thích sinh trưởng đến ni cấy tạo chồi từ mô sẹo rau muống Kết nghiệm thức CT3 môi trường ½ MS bổ sung chất thích thích sinh trưởng (nồng độ BAP mg/l, nồng độ KIN mg/l nồng độ NAA mg/l) Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng mơi trường khống chất kích thích sinh trưởng đến ni cấy tạo rễ từ chồi rau muống Kết nghiệm thức CT3 mơi trường ½ MS với nồng độ chất kích thích sinh trưởng (nồng độ IBA 0.5 mg/l nồng độ NAA mg/l)cho kết tối ưu MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN LỜI CẢM ƠN TÓM TẮT MỤC LỤC DANH MỤC VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH ẢNH PHẦN MỞ ĐẦU 10 1.1 Đặt vấn đề 10 1.2 Mục đích yêu cầu 11 1.2.1 Mục đích 11 1.2.2 Yêu cầu 11 PHẦN TỔNG QUAN TÀI LIỆU 12 2.1 Giới thiệu rau muống 12 2.1.1 Nguồn gốc 12 2.1.3 Đặc điểm thực vật học rau muống 14 2.1.4 Giá trị dinh dưỡng giá trị sử dụng rau muống 15 2.2 Các nghiên cứu rau muống nước 16 2.2.1 Các nghiên cứu rau muống Việt Nam 16 2.2.2 Các nghiên cứu rau muống giới 17 2.3 Nuôi cấy mô tế bào thực vật 18 2.3.1 Lịch sử hình thành phát triển ni cấy mơ thực vật 18 2.3.2 Ưu điểm nhân giống in vitro 19 2.3.3 Hạn chế nhân giống in vitro 20 2.3.4 Các bước nhân giống in vitro 21 2.3.5 Tính tồn tế bào 22 2.3.6 Các hướng tái sinh từ mô thực vật 23 2.3.7 Môi trường nuôi cấy mô thực vật 24 2.4 Một số thành tựu nuôi cấy mô tế bào 26 PHẦN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 3.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 27 3.2 Vật liệu nghiên cứu 27 3.2.1 Đối tượng nghiên cứu 27 3.2.2 Trang thiết bị thí nghiệm 27 3.2.3 Môi trường nuôi cấy 27 3.3 Nội dung nghiên cứu 28 3.4 Phương pháp nghiên cứu 28 3.4.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng mơi trường khống chất kích thích sinh trưởng đến ni cấy tạo chồi từ mơ sẹo rau muống 31 3.4.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng mơi trường khống chất kích thích sinh trưởng đến ni cấy tạo rễ từ chồi rau muống 32 3.4.5 Phương pháp xử lí số liệu 33 PHẦN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 34 4.1 Ảnh hưởng thời gian khử trùng đến mẫu cấy rau muống làm nguyên liệu chọn giống 34 4.2 Ảnh hưởng mơi trường khống chất kích thích sinh trưởng đến ni cấy tạo mơ sẹo rau muống 38 4.3 Ảnh hưởng môi trường ni cấy chất kích thích sinh trưởng đến ni cấy tạo chồi từ mô sẹo rau muống 46 4.4 Ảnh hưởng mơi trường ni cấy chất kích thích sinh trưởng đến nuôi cấy tạo rễ từ chồi rau muống 50 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 56 5.1 Kết luận 56 5.2 Kiến nghị 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO 57 PHỤ LỤC 59 DANH MỤC VIẾT TẮT Tên đầy đủ Tên viết tắt BAP 6-Benzylaminopurine KIN 6-furfurylaminopurine Kinetin NAA α-naphthaleneacetic acid IBA 3-Indolebutyric acid 2,4D 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid MS Môi trường nuôi cấy theo Murashige Skoog (1962) KH2PO4 Potassium phosphate MgSO4.7H2O Magnesium sulphate KNO3 Potassium nitrate NH4NO3 Ammonium nitrate CaCl2 Calcium chloride H3BO3 Boric acid MnSO4.H2O Manganese sulphate Na2MoO4.2H2O Sodium molybdate ZnSO4.4H2O Zinc sulphate KI Potassium iodide CuSO4.5H2O Cupric sulphate CoCl2.6H2O Cobalt chloride FeSO4.7H2O Ferous sulphate heptahydrate Na2ETDA Ethylenediamine Tetraacetic Acid Disodium Salt DANH MỤC BẢNG Bảng Thành phần dinh dưỡng 100g rau muống 15 Bảng 3.1 Các công thức nuôi cấy tạo mô sẹo 30 Bảng 3.2 Các mơi trường khống nồng độ chất kích thích sinh trưởng để ni cấy tạo chồi từ mô sẹo 31 Bảng 3.3 Các mơi trường khống nồng độ chất kích thích sinh trưởng để nuôi cấy tạo rễ 32 Bảng 4.1 Ảnh hưởng thời gian khử trùng đến tỉ lệ mẫu 34 tỉ lệ nảy mầm 34 Bảng Ảnh hưởng mơi trường ni cấy chất kích thích sinh trưởng đến khả tạo mô sẹo rau muống 39 Bảng Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy chất kích thích sinh trưởng đến ni cấy tạo chồi rau muống 46 Bảng 4 Ảnh hưởng mơi trường ni cấy chất kích thích sinh trưởng đến nuôi cấy tạo rễ từ chồi rau muống 51 DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 4.1 Biểu đồ tỉ lệ nảy mầm bệnh sau khử trùng hạt rau muống 35 Hình 4.2 Mẫu hạt nuôi cấy môi trường MS 36 Hình Mẫu hạt sau tuần nuôi cấy môi trường MS 37 Hình 4 Mẫu hạt sau tuần nuôi cấy môi trường MS 37 Hình Mẫu hạt sau tuần nuôi cấy môi trường MS 38 Hình Biểu đồ tỉ lệ tạo mô sẹo rau muống 40 Hình Mẫu mơ sẹo sau 1- tuần ni cấy thí nghiệm CT1 42 Hình Mẫu mơ sẹo sau 1- tuần ni cấy thí nghiệm CT2 42 Hình Mẫu mơ sẹo sau 1- tuần ni cấy thí nghiệm CT3 43 Hình 10 Mẫu mơ sẹo sau 1- tuần ni cấy thí nghiệm CT4 43 Hình 11 Mẫu mơ sẹo sau 1- tuần ni cấy thí nghiệm CT5 44 Hình 12 Mẫu mơ sẹo sau 1- tuần ni cấy thí nghiệm CT6 44 Hình 13 Mẫu mơ sẹo sau 1- tuần ni cấy thí nghiệm CT7 45 Hình 14 Mẫu mơ sẹo sau 1- tuần ni cấy thí nghiệm CT8 45 Hình 15 Biểu đồ tỉ lệ tạo chồi rau muống hệ số tạo chồi 47 Hình 16 Chồi rau muống ni cấy môi trường MS 49 Hình 17 Chồi rau muống ni cấy mơi trường ½ MS 49 Hình 18 Mô sẹo đốt thân bật chồi sau tuần ni cấy 49 Hình 19 Mô sẹo thân, mấu không bật chồi sau tuần ni cấy 50 Hình 20 Số rễ trung bình /chồi chiều dài trung bình rễ rau muống 52 Hình 21 Rễ rau muống nuôi cấy môi trường MS 54 Hình 22 Rễ rau muống ni cấy mơi trường ½ MS 54 Hình 23 Đo chiều dài rễ rau muống 55 PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Sự phát triển kỹ thuật nuôi cấy mô thực vật có định hướng đáng kể nghiên cứu công nghệ sinh học thực vật Nhờ ứng dụng thành tựu mẻ công nghệ sinh học kỹ thuật nuôi cấy mô, kỹ thuật tái tổ hợp di truyền, người ta tạo giống trồng khơng có suất cao mà chống chịu với sâu bệnh, hạn hán… Bên cạnh nghiên cứu tăng trưởng phát triển nghiên cứu kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật mang lại nhiều lợi ích kinh tế quan trọng nhân giống trồng Hiện nay, cơng nghệ nhân giống vơ tính in vitro phổ biến Bởi vì, nhân giống vơ tính in vitro có nhiều ưu điểm mà phương pháp nhân giống khác khơng có như: sản xuất số lượng lớn giống thời gian ngắn diện tích nhỏ; tạo virus; sản xuất quanh năm chủ động kiểm soát yếu tố ngoại cảnh; tạo có khả hoa, sớm; dễ dàng tạo giống trồng Vì vậy, việc nhân giống trồng phương pháp vơ tính in vitro cần thiết Rau muống (Ipomoea aquatica) loài thực vật nhiệt đới bán thủy sinh thuộc họ Bìm bìm (Convolvulaceae), loại rau ăn trồng phổ biến khắp vùng nhiệt đới cận nhiệt đới giới Rau muống loại rau có giá trị dinh dưỡng cao loại rau thiết yếu Đông Nam Á (Khamwan cs., 2003) Cây rau muống loại rau quen thuộc, lại chưa nghiên cứu nhiều nước ta Từ nghiên cứu nhân giống vơ tính in vitro, thực đề tài thực đề tài:” Nghiên cứu hệ thống tái sinh rau muống cơng nghệ ni cấy mơ tế bào” 10 Hình 17 Mô sẹo thân, mấu không bật chồi sau tuần nuôi cấy 4.4 Ảnh hưởng mơi trường ni cấy chất kích thích sinh trưởng đến nuôi cấy tạo rễ từ chồi rau muống Các chồi cao từ 2-3 cm thu thí nghiệm tạo chồi từ mô sẹo rau muống cấy chuyển sang môi trường nuôi cấy khác để nghiên cứu khả kích thích tạo rễ từ chồi rau muống Môi trường nuôi cấy (môi trường nền) chọn mơi trường MS ½ MS có bổ sung chất kích thích sinh trưởng (IBA NAA) Các nghiệm thức sử dụng nồng độ IBA từ 0,1-0,5 mg/l nồng độ NAA 1mg/l Kết thí nghiệm sau tuần theo dõi thể bảng 4.4 đây: 50 Bảng 4 Ảnh hưởng mơi trường ni cấy chất kích thích sinh trưởng đến nuôi cấy tạo rễ từ chồi rau muống Trung Trung bình bình số chiều dài rễ rễ/chồi (mm) 4a 30,80a ** 3,60a 25a * 4,50b 37,67b ** 4,50b 31,53a * CV (%) 21,9 21 LSD0.05 1,7 12,3 Cơng thức CT1: ½ MS + 0,1 mg/l (IBA) + mg/l (NAA) CT2: MS + 0,1 mg/l (IBA) + mg/l (NAA) CT3: ½ MS + 0,5 mg/l (IBA) + mg/l (NAA) CT4: MS + 0,5 mg/l (IBA) + mg/l (NAA) Đặc điểm rễ Ghi chú: Các chữ a, b, c, thể sai khác có ý nghĩa thống kê cơng thức cột với độ tin cậy p =0,05 *: rễ xanh đậm, to, nhiều rễ bên **: rễ xanh, mảnh, thưa rễ bên 51 Số rễ trung bình chiều dài trung bình rễ (mm) 40 35 30 25 20 15 10 CT1 CT2 CT3 số rễ trung bình CT4 chiều dài trung bình Hình 18 Số rễ trung bình /chồi chiều dài trung bình rễ rau muống Kết bảng 4.4 hình 4.20 cho thấy, sau tuần nuôi cấy chồi rau muống mơi trường ni cấy bổ sung chất kích thích sinh trưởng có ảnh hưởng đến số rễ trung bình chiều dài trung bình rau muống Về số rễ trung bình, sau đem chồi rau muống cấy môi trường tái sinh rễ cho số rễ giao động từ 3-5 rễ chồi Cụ thể, nghiệm thức CT1 với mơi trường ni cấy ½ MS nghiệm thức CT2 môi trường nuôi cấy MS có nồng độ chất kích thích sinh trưởng (nồng độ IBA 0,1 mg/l nồng độ NAA mg/l) cho số rễ trung bình chồi rễ với CT1, 3,6 rễ với CT2 Khi tăng nồng độ IBA từ 0,1 mg/l lên 0,5 mg/l giữ nguyên nồng độ NAA mg/l số rễ trung bình chồi 4,5 rễ Về chiều dài trung bình rễ, sau đem chồi rau muống cấy môi trường tái sinh rễ cho kết chiều dài trung bình từ 25mm đến 37,67mm Cụ 52 thể, nghiệm thức CT1 với mơi trường ni cấy ½ MS nghiệm thức CT2 mơi trường ni cấy MS có nồng độ chất kích thích sinh trưởng (nồng độ IBA 0,1 mg/l nồng độ NAA mg/l) cho trung bình chiều dài rễ 30,8 mm với CT1, 25 mm CT2 Khi tăng nồng độ IBA từ 0,1 mg/l lên 0,5 mg/l giữ nguyên nồng độ NAA mg/l chiều dài trung bình rễ 37,67 mm với CT3, 31,53 mm với CT4 Về đặc điểm rễ, rễ rau muống nuôi cấy môi trường CT2 CT4 màu xanh đậm, dày, nhiều rễ bên cịn rễ ni cấy mơi trường CT1 CT3 màu xanh, rễ mảnh Như vậy, mơi trường ni cấy (½ MS MS) mà có nồng độ chất kích thích sinh trưởng mơi trường ½ MS cho kết tốt môi trường MS tái sinh rễ rau muống Rễ rau muống nuôi cấy môi trường MS màu xanh đậm, dày, nhiều rễ bên rễ ni cấy mơi trường ½ MS màu xanh, rễ mảnh hơn, lượng rễ bên thưa rễ dài so với rễ nuôi cấy môi trường MS Giữa nồng độ chất kích thích sinh trưởng (IBA 0,5 mg/l, NAA mg/l IBA 0,1 mg/l, NAA mg/l) mơi trường ni cấy nồng độ chất kích thích sinh trưởng (IBA 0,5 mg/l, NAA mg/l) cho kết tốt Nghiệm thức CT3 cho kết tái sinh rễ tối ưu 53 Hình 19 Rễ rau muống nuôi cấy môi trường MS Hình 20 Rễ rau muống ni cấy mơi trường ½ MS 54 Hình 21 Đo chiều dài rễ rau muống 55 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận  Nồng độ NaClO 50% thời gian 20 phút cho kết tối ưu để khử trùng hạt rau muống với tỉ lệ mẫu chiếm 97,60 % tỉ lệ nảy mầm 68,51%  Môi trường nuôi cấy MS bổ sung BAP mg/l, KIN mg/l, NAA mg/l, PH 5,7-5,8 cho kết tối ưu nhất, phản ứng tạo sẹo nhanh, sẹo kích thước lớn có màu trắng, đồng  Mơi trường ni cấy ½ MS bổ sung chất kích thích sinh trưởng (nồng độ NAA mg/l kết hợp KIN mg/l), PH 5,7-5,8 cho kết tạo chồi từ mô sẹo rau muống tốt với tỉ lệ 55,57 %  Môi trường nuôi cấy ½ MS bổ sung chất kích thích sinh trưởng (nồng độ IBA 0,5 mg/l kết hợp với NAA mg/l), PH 5,7-5,8 cho kết tạo nhiều rễ chiều dài rễ lớn 5.2 Kiến nghị  Tiếp tục nghiên cứu, tiến hành thí nghiệm tạo sẹo, tạo chồi, tạo rễ rau muống môi trường ni cấy khác  Bên cạnh đó, mở rộng hướng nghiên cứu đối tượng trồng quan trọng khác 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tham khảo tiếng Việt Đỗ Năng Vịnh (2005), Công nghệ tế bào thực vật Nhà xuất Nông Nghiệp Lê Thị Xã, Đỗ Thành Luân Nguyễn Khởi Nghĩa (2020) Khảo sát khả kích thích nảy mầm sinh trưởng rau muống số dòng vi khuẩn cố định đạm tổng hợp IAA Nguyễn Thị Ngọc Dinh, Phạm Tiến Dũng, Nguyễn Hồng Hạnh, Trần Anh Tuấn (2015) Hiệu sử dụng dung dịch thủy canh hữu sản xuất rau muống Nguyễn Đạt Phương, Nguyễn Xuân Lộc (2021) Nghiên cứu sinh trưởng rau muống bổ sung than sinh học trấu hấp phụ amoni Phạm Ngọc Thụy, Nguyễn Đình Mạnh, Đinh Văn Hùng, Nguyễn Viết Tùng, Ngô Xuân Mạnh (2013) Hiện trạng kim loại nặng (Hg, As, Pb, Cd) đất, nước số rau trồng khu vực Đông Anh, Hà Nội Trần Viết Cường, Đồn Thu Hịa, Lê Hồng Sơn, Phạm Quang Hà, Nguyễn Mạnh Khải (2014) Nghiên cứu ảnh hưởng bón than sinh học đến tích lũy số kim loại nặng rau muống trồng đất xám bạc màu Tài liệu tham khảo tiếng Anh Edwin E., George Ph.D (1993/1996), Plant propagation by tissue culture Exegetics Limited 2nd edition Zimmerman J.L (1993), “Somatic Embryogenesis: A model for Early Development in Higher Plant” The Plant Cell 5, pp 1411-1423 Kozai T, Watanabe K & Jeong BR (1995) Stem elongation and growth of Solanum tuberosum L in vitro in response to photosynthetic photon flux, photoperiod and difference in photoperiod and dark period temperatures Scientia Hort 64: 1–9 Murashige T., Skoog F (1962), “A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures”, Phisiology of Plant 15, pp 473-497 57 Haberlandt, G., 1902 Kulturversuche mit isollierten pflanzenzellen S.B Weisen Wien Naturwissenschaften.111, 69-92 Hirai, Shizuka; Ishibuchi, Toyohito; Watabe, Shinpei; Makita, Miki; Kishida, Chiaki; Takagaki, Michiko; Kurauchi, Nobuyuki; Egashira, Yukari 2008 Protective effect of red-stemmed type of Ipomoea aquatica Forsk against CCl4-induced oxidative damage in mice Khamwan, K., Akaracharanya, A., Chareonpornwattana, S., Choi, Y.-E., Nakamura, T., Yamaguchi, Y., Sano, H., Shinmyo, A., 2003 Genetic Transformation of Water Spinach (Ipomoea aquatica) Plant Biotechnology 20, 335–338… Malakar, C., & Choudhury, P P N (2015) Pharmacological potentiality and medicinal uses of Ipomoea aquatica Forsk: a review Asian J Pharm Clin Res, 8(2), 60-63 Xin, J., Huang, B., Yang, Z., Yuan, J., Dai, H., & Qiu, Q (2010) Responses of different water spinach cultivars and their hybrid to Cd, Pb and Cd–Pb exposures Journal of Hazardous Materials, 175(1-3), 468-476 58 PHỤ LỤC Phụ lục Các thành phần môi trường nuôi cấy Thành phần MS1 MS2 Hoá chất Hàm lượng (g/L) MgSO₄.7H₂O 7,4 CaCl₂ 6,64 NH₄NO₃ 33 KNO₃ 38 KH₂PO₄ 3,4 H3BO3 6,2 MnSO4.H2O 16,9 ZnSO4.4H2O 8,6 KI 0,83 Na2MoO4.2H2O 0.25 CuSO4.5H2O 0,025 CoCl2.6H2O 0,025 FeSO4.7H2O 5,56 Na2EDTA 7,46 My Inositol 100mg/l Nicotinic acid 0,5mg/l Thiamine HCl 0,1mg/l Glycine 2mg/l MS3 MS4 (Vitamin) 59 Phụ lục 1 Mơi trường MS Thể tích MS1, MS2, MS3, MS4 = 1000ml Thành phần Thể tích (ml) MS1 50 MS2 MS3 MS4 Đường 30g Agar 8g Phụ lục Thành phần pha lít mơi trường MS Cách pha 50 ml chất kích thích sinh trưởng (KIN, BAP, NAA, IBA):  Cân 0.5g (KIN, BAP, NAA, IBA)  Nhỏ từ từ NaOH 1M chất kích thích sinh trưởng bị hịa tan  Thêm nước cất để đạt 50 ml 60 Phụ lục Xử lí số liệu phần mềm IRRISTAT 1.Nảy mầm BALANCED ANOVA FOR VARIATE SB FILE NNB 3/ 8/22 19:28 :PAGE NAY MAM VARIATE V003 SB LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 16468.9 5489.64 107.64 0.000 * RESIDUAL 408.000 51.0000 * TOTAL (CORRECTED) 11 16876.9 1534.27 BALANCED ANOVA FOR VARIATE NM FILE NNB 8/ 8/22 19:28 :PAGE NAY MAM VARIATE V004 NM LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 3720.67 1240.22 64.71 0.000 * RESIDUAL 153.333 19.1667 * TOTAL (CORRECTED) 11 3874.00 352.182 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE NNB 8/ 8/22 19:28 :PAGE NAY MAM MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 SB 86.6667 137.333 175.667 178.000 NM 131.667 112.000 123.333 85.0000 SE(N= 3) 4.12311 2.52763 5%LSD 8DF 13.4450 8.24233 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE NNB 8/ 8/22 19:28 :PAGE NAY MAM F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT (N= 12) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | SB 12 144.42 39.170 7.1414 4.9 0.0000 NM 12 113.00 18.767 4.3780 3.9 0.0000 2.Tạo sẹo BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLS FILE AX 3/ 8/22 22: 61 | :PAGE TI LE SEO VARIATE V003 TLS LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 358.292 51.1845 94.49 0.000 * RESIDUAL 16 8.66669 541668 * TOTAL (CORRECTED) 23 366.958 15.9547 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE AX 8/ 8/22 22: - :PAGE TI LE SEO MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 3 3 TLS 30.0000 30.0000 30.0000 24.3333 30.0000 30.0000 19.0000 25.0000 SE(N= 3) 0.424919 5%LSD 16DF 1.27391 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE AX 8/ 8/22 22: :PAGE TI LE SEO F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT (N= 24) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | TLS 24 27.292 3.9943 0.73598 2.7 0.0000 | 3.Bật chồi BALANCED ANOVA FOR VARIATE SMSBT FILE AC 3/ 8/22 10:58 :PAGE TAO CHOI VARIATE V003 SMSBT LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 236.917 78.9722 21.54 0.000 * RESIDUAL 29.3333 3.66667 * TOTAL (CORRECTED) 11 266.250 24.2045 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSBT FILE AC 9/ 8/22 10:58 :PAGE 62 TAO CHOI VARIATE V004 HSBT LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 125476E-02 418253E-03 0.05 0.983 * RESIDUAL 644590E-01 805737E-02 * TOTAL (CORRECTED) 11 657137E-01 597397E-02 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE AC 9/ 8/22 10:58 :PAGE TAO CHOI MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 SMSBT HSBT 7.00000 1.09722 5.33333 1.08333 16.6667 1.10556 12.0000 1.11026 SE(N= 3) 1.10554 0.518246E-01 5%LSD 8DF 3.60506 0.168995 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE AC 9/ 8/22 10:58 :PAGE TAO CHOI F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT (N= 12) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | SMSBT 12 10.250 4.9198 1.9149 18.7 0.0005 HSBT 12 1.0991 0.77292E-010.89763E-01 8.2 0.9829 | 4.Số rễ chiều dài rễ BALANCED ANOVA FOR VARIATE SR FILE DRE 3/ 8/22 10:11 :PAGE VARIATE V003 SR LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 1.50000 500000 0.60 0.635 * RESIDUAL 6.66667 833333 * TOTAL (CORRECTED) 11 8.16667 742424 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CDR FILE DRE 3/ 8/22 10:11 :PAGE VARIATE V004 CDR LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 241.387 80.4622 1.86 0.214 * RESIDUAL 345.260 43.1575 63 * TOTAL (CORRECTED) 11 586.647 53.3315 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE DRE 3/ 8/22 10:11 :PAGE MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 SR 4.00000 3.66667 4.50000 4.50000 CDR 30.8667 25.0000 37.6667 31.5333 SE(N= 3) 0.527046 3.79287 5%LSD 8DF 1.71864 12.3682 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE DRE 3/ 8/22 10:11 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT (N= 12) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | SR 12 4.1667 0.86164 0.91287 21.9 0.6353 CDR 12 31.267 7.3028 6.5694 21.0 0.2135 64 |