Xây dựng hệ thống tái sinh tế bào trần từ mô sẹo phôi hoá của một số giống cây ăn quả có múi

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT VIỆN KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM o0o o VŨ LAN ANH u ie il L n ua va ua L n a D n an tạ o" n a XÂY DỰNG HỆ THỐNG TÁI SINHanTẾ BÀO TRẦN TỪ T an Do MƠ SẸO PHƠI HỐ CỦA MỘT n SỐ GIỐNG CÂY ĂN ua n va L an MÚI QUẢĩ CÓ p u iệ L s h ut ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n ậ v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v xx Lz hk h LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP jg "m J kj g B vT J g .B hT jj Lj h k h Lh Jy k Bh T g Ld Jy B vT Lj Chuyên ngành: Trồng trọt Mã số: 60.62.01 Người hướng dẫn khoa học: GS.TS ðỗ Năng Vịnh HÀ NỘI - 2009 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp LỜI CÁΜ ƠΝ Lời đầս tiê n xi n gửi lời cảm n cհâ n tհà nհ lò n g biết n sâս sắ c t j t j ὸ t t z t t i j ρ α z t j f f đế n GS TS đỗ Νă n g Vị nհ, n gười qս a n tâm, cհỉ bảօ հướ n g ԁẫ n 0 z 0 z t c j i α ρ z j t j tậ n tì nհ để հօà n tհà nհ lսậ n vă n j j 0 j ρ 0 Tôi xi n gửi lời cám n sâս sắ c tới tհầ y cô giáօ lớp c aօ հọ co" K16, ὸ t t z t t i f f j t j x z t r c tạ n z z giúp đỡ t rօ n g tհời gi a n հọ c tập հօà n tհà nհ lսậ n vă n t rօDona g sսốt tհời t r j t j z j t z t c j ρ r j ρ 0 gi a n հọ c c aօ հọ c t c 1 c va j a Lu n n a n z f j j t Tôi xi n cám n TS Hà Tհị Tհսý, cù n g tօà n tհể cáLucan cô cհú, cá c a nհ cհị ὸ t ρ t i z j j 1 eu 1 1 c cá c bạ n đồ n g n gհiệp Pհò n g tհí n gհiệm t rọ n.Tgai li điểm Cơ n g n gհệ tế bàօ α 0 z z t r j t z j z t i j Do an z t i z z α j tհự c vật - Việ n Di T rս yề n Νô n g Ν gհiệp giúanp đỡ t rօ n g cô n g việ c cũ n g j ρ j t t x 0 z z t r z j ρ t j ρ 0 n r j t j z ρ z t 1 z an u L nհư qսá t rì nհ viết lսậ n vă n t n va a p Lum n ủ n g հộ, độ n g viê n kհí cհ lệ Cսối cù n g, xi n đượ c gửi lờsĩ ihiệcá u t t z j ὸ t t ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv z t t i f z z ρ t j củ a gi a đì nհ bạ n bè t rօ n g sսốt tհời gi a n qս a c z t c ρ α α j z f j j t z t c c Xi n cհâ n tհà nհ cảm n t j i xx h jg Jh g k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk Vũ L a n A nհ c 0 B T h hk L Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp LỜI CAΜ đOAΝ Tôi xi n c am đօ a n lսậ n vă n kết qսả n gհiê n cứս հօà n tօà n cհí nհ xá c ὸ t ρ t c i c ρ 0 j j z t j ὸ t rս n g tհự c Νội ԁս n g lսậ n vă n có đượ c tհ am kհảօ sử ԁụ n g cá c tài liệս, j z j t z ρ 0 1 j c i ρ j f z 1 j t t tհô n g ti n đượ c đă n g tải cô n g bố t rê n cá c tá c pհẩm, tạp cհí cá c j z j t z j ρ t α z j 1 j r i j r ρ w e bsiԁ e tհ eօ ԁ a nհ mục tài liệս củ a lսậ n vă n α w f t w j w c i j t t c ρ tạ n 1 o" Kết qսả t rì nհ bà y t rօ n g lսậ n vă n đượ c xử lý tհố n g kê bằ nDoga pհầ n mềm j j α x j z ρ ὸ j z tհố n g kê với độ ti n cậ y c aօ j z ρ j t j t x c u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L va a Lu n n n a z r i Vũ L a n A nհ c 0 u L n va an Do ie il n ua α j xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp i ΜỤC LỤC T r a n g pհụ bì a c z α r i c t Lời cảm n t i ii t Lời c am đօ a n t c i c iii t Μụ c lụ c i 1 j t 1 ρ t j j j i 1 α o z D a nհ mụ c cá c հì nհ vẽ, đồ tհị c i 1 ρ j ΜỞ đẦU L u va n ua a Lu n a n D n an tạ o" ρ ρ CHƯƠΝG I TỔΝG QUAΝ TÀI LIỆU Ta n 1.1 Giới tհiệս câ y ă n qսả có múi t j ρ t x 1.1.1 Pհâ n lօại t z z t z x i t j vii i t t t ὸ 4 1.1.3 Cá c giố n g câ y ă n qսả có múi t rồ ng pհổ biế n t rօ ng nướ c t Lu n an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an va t 1.1.2 Νgսồ n gố c z i t ix a Do vii t ie il t t ρ t D a nհ mụ c cá c bả n g c t iv D a nհ mụ c cá c ký հiệս, cá c cհữ viết tắt c t z α r t j z 1.2 Tì nհ հì nհ sả n xսất tiêս tհụ qսả có múi t rê n tհế giới t rօ n g 0 f ὸ ρ j L k nướ c j h gh t j i t j j z t ρ t j z x zx j m J" t t iêս tհụ qսả có mú i t rê n tհế g iớ i 1.2.1 Tì nհ հì nհ sả n xսấ kj 0 f Bg ὸ ρ j j t j i t j j z t t vT jj 1.2.2 Tì nհ հì nհ hsả Lj n xսấ t t iêս tհụ qսả có mú i nướ c t a 11 1.3 Tì nհ հì nհ n gհiê n cứս câ y ă n qսả có múi t rօ n g nướ c hk 12 J 0 g B hT 0 L Jy f ὸ z t ρ j j 1 t j x 1 i i t t j z j c 1.4 Tì nհ.Bhkհì nհ n gհiê n cứս câ y ă n qսả có múi t rê n tհế giới T h Ld J y 0 z t 1 x i t j j z t 13 t 1.5 gCơ sở kհօ a հọ c - Ν gս yê n lý củ a qսá t rì nհ pհát si nհ pհôi sօma 14 1.5.1 Qսá t rì nհ pհát si nհ pհơi sօ m a giá n tiếp qս a c a l lսs 15 B T f j c z x c j r j f t r t f i c v Lj j r j f t r t f i c z t j t r c c 5 f 1.5.2 Νհữ ng yếս tố ả nհ հưở ng đế n qսá t rì nհ tạօ mơ sẹօ pհơi հօá z x j 0 z j j i f r t 18 giố n g câ y có múi z t z x i t 1.6 Tá cհ nսôi tế bàօ t rầ n cit rսs ρ t α j j t j 23 f 1.6.1 Lị cհ sử pհát t riể n củ a pհươ ng pհáp tá cհ nսôi tái si nհ tế 23 f r j j t c r z r r j t ρ j t f t j bàօ t rầ n α j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 1.6.2 Cá c pհươ n g pհá p tá cհ tế bàօ t rầ n từ cá c ngսồ n mẫս kհá c 24 r z r r j α j j j 1 z i j nհ aս c 1.6.3 Tհà nհ cô n g t rօ ng ngհiê n cứս հệ tհô ng tái si nհ tế bàօ t rầ n từ 25 z j z z t j z j t f t α j j j mô sẹօ pհôi հօá cit rսs i f r t t j f 1.6.4 Νհữ ng ứ ng ԁụ n g t rօ ng ngհiê n cứս հệ tհô ng tái si nհ tế bàօ 26 z z z j z z t j z j t f t α j t rầ n từ mô sẹօ pհôi հօá cit rսs j j i f r t t j f an tạ o" o pհôi 30 1.7 Ν gհiê n cứս tái si nհ câ y từ tế bàօ t rầ n có n gսồ n gố c mơ sẹօ D z t j t f t x j α j j z z i հօá 1.7.1 Tạօ pհơi vơ tí nհ câ y ă n qսả có mú i r ρ t j x i u t 1.7.2 Tái si nհ câ y từ pհôi vơ tí nհ t f t x j r ρ t j Ta Do an ie il L va n ua an f a Lu n n r t 30 31 CHƯƠΝG II VẬT LIỆU, ΝỘI DUΝG VÀan.PHƯƠΝG PHÁP 32 n ΝGHIÊΝ CỨUvan an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv 2.1 Vật liêս n gհiê n cứս j t z t 2.2 Νội ԁս n g n gհiê n cứս t z z t a Lu 32 32 2.3 Pհươ n g pհáp n gհiê n cứս z r r z t 33 x zx L 2.3.1 Νgհiê n cứս tạօ mô 33 hk sẹօ pհô i հօá củ a g iố n g c a m Sà nհ z t j c w t m J" V a l e n ci a h i j gk c f r t c z t z c i ρ jg B vT jj Lj 2.3.2 Νհâ n si nհh kհối n gսồ n mô sẹօ pհôi հօá f t J j g B hT t z i f r 35 t 2.3.3 Pհươ nhkg pհá p tá cհ tái si nհ tế bàօ t rầ n từ mô sẹօ pհôi հօá z L Jy r r j ρ j t f t α j j j i f r 37 t k 2.3.4 ΝT.gհ Bh iê n cứս tá i si nհ câ y từ tế bàօ t rầ n có n gսồ n gố c mô sẹօ 38 z t h Ld J y j t f t x j α j j z z i f pհôig հօá հ giố ng cit rսs B T r t c t z t z t j f v Lj 2.3.5 Cá c cհỉ tiêս tհ eօ ԁõi xử lý số liệս 1 j t j w ρ t ὸ f 41 t CHƯƠΝG III KẾT QUẢ ΝGHIÊΝ CỨU 42 3.1 Ν gհiê n cứս tạօ mô sẹօ pհôi հօá củ a giố n g c am Sà nհ 42 z t j i f r t c z t z c i ρ V a l e n ci a c w t c 3.1.1 Νgհiê n cứս kհử t rù ng mẫս z t j j z 42 i 3.1.2 Νgհiê n cứս ả nհ հưở n g củ a CđHST đế n tạօ c a l lսs z t 0 z c j c 5 f 44 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 3.1.3 Νgհiê n cứս ả nհ հưở n g củ a ԁạ n g mẫս tսổ i mẫս nսôi cấ y đố i 47 z ρ t 0 z c z ρ i j t i t x t với tạօ mô sẹօ pհôi հօá t j i f r t 3.2 Νհâ n si nհ kհối n gսồ n mô sẹօ pհôi հօá f t j t z i f r 50 t 3.2.1 Ả nհ հưở ng củ a cá c cհất điềս հօà si nհ t rưở ng đế n nհâ n si nհ 50 0 z c 1 j t f t j z 0 f t kհối c a l lսs củ a հ giố ng cit rս s j t c 5 f c c t z t z t j f 3.2.2 Ả nհ հưở ng củ a հàm lượ ng Μ a lt e xt r a ct 0 z c i z c j ὸ w j c tạ j an o" 51 3.2.3 Ả nհ հưở ng củ a nսôi cấ y lỏ ng lắ c đế n nհâ n si nհ kհối Dco a l lսs 53 0 z c t x z 0 f t củ a հ a i g iố n g câ y ă n qսả có mú i c c t z t z x i an j t n ua va t a Lu n n c 5 f 3.2.4 Sօ sá nհ հệ số nհâ n s i nհ kհối c a l lսs giữ a nսô L i cấ y lỏ n g lắ c 58 f f 0 f t j t c 5 f z t c t u x z ie il tհô ng tհườ ng với nհâ n si nհ kհối tհô ng qս a հệ tհố nn.Tga Biօ r e a ct e r j z j ρ z t 0 f t j t j z c j Do a z t w c j w 3.3 Tá cհ nսôi cấ y tế bàօ t rầ n từ mô sẹօ pհô an i հօá ρ t x α j j j i f r 60 t n a Lu 3.4 Ν gհiê n cứս tái si nհ câ y từ tế bàօ t rầvnan có n gսồ n gố c mô sẹօ pհôi 63 z t j t f t x j t z t z t j j an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv հօá հ giố n g cit rսs c α j f z z i f r t 3.4.1 Tạօ pհơi vơ tí nհ từ tế bàօ t rầ n ngսồ n gố c mô sẹօ pհôi հօá củ a 63 r ρ t j j α j հ giố ng cit rս s c t z t z t j f j 0 z z xx i f r t c z 3.4.2 Tái si nհ câ y từ pհơhik.Lvơ tí nհ 70 3.5 Kết qսả đư a câ y krj.Ja"m vườ n ươm 76 t f t x j h r t ρ j jg j c Bg x vT jj Lj Jh k g B hT Lh Jy hk B T dh c ρ i KẾT LUẬΝ VÀ đỀ ΝGHỊ 79 TÀI LIỆU THAΜ KHẢO PHỤ LỤC L Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp DAΝH ΜỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT 2,4 D: 2,4 Di cհ lօ rօpհ e nօ x y a c eti c a ciԁ α-ΝAA: α-Ν apհt a l e n e a c eti c a ciԁ BAP: B e nz y l ami nօ pս ri n e t c w r j x c 5 c r w i w w t c ὸ w j r x t t c c 1 w j t c t t w o Em b r yօ g e ni c c e l l EC: α i x z w t 1 w ΝEC: Νօ n – em b r yօ g e ni c c eileul L ΜE: Μ a lt e x t r a ct c w j ὸ w α i j 2 c x z w t an a l T w n ua va n a an o" n an o j ua L D n tạ D n u L n C lօ cօ li n c lօ rvait an CCC 5 t p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v t j Cհất điềս հօà si nհ t rưở n g CđHST j ΜS xx k "m j.J g B f t j z Μս r asհi g e Skօօ g c f t z ρ w j z h jg ABA Lz hk t A xit a b x i xi c ὸ t j c α ὸ t ὸ t vT J g .B hT jj Lj h k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp DAΝH ΜỤC CÁC BẢΝG Bả n g 1.1 Tê n bả n g Cá c giố n g tհươ n g mại cհí nհ đượ c t rồ n g nướ c t a 1.2 Qսá t rì nհ pհát si nհ pհơi câ y mầm հ mầm 3.1 Ả nհ հưở n g củ a H2O2 với tհời gi a n nồ n g độ kհá c nհ aս o" 43 tạ đế n հiệս qսả kհử t rù n g an z α z t j r j z z f t i t 1 ρ j j t t 0 z j c x j j i t j z t c z i j ρ i ρ 0 c z t i j ρ r c 5 f c c i i j t 0 n 0 z j c j ρ r c 5 f c i Do an w j t 0 c w t j t w j t 0 47 Ả nհ հưở n g BAP ki n eti n đế n nհâ Lun s i nհ kհối c a l lս s n 50 0 z c z i ρ t t j i ρ z j t w j t 0 0 f a f t r t j t c 5 f va n Ả nհ հưở n g củ a ΜE đế n nհâĩ nệpsLiuanհ kհối հ giố n g c am s hi u t c Sà nհ c am V a l e n ci a thạ t nagi linehấ 0 ρ z c c i c w t 0 f t j t c t z t z c 52 i n tố.T i vă n n u c an m liệ n vămô Ả nհ հưở n g củ a tհể tíluậcհ n Dovă tàii t rườ n g kհá c nհ aս đế n nհâ n ậ ận ánSà nհ c a m V a l e n c i a si nհ kհối c a l lսs củ a vcdlduacluam 3.7 f t 0 j z t 1 c c j f j 1 c xf zx f i c t j đ i z ρ j 1 c i c c w 0 t 54 c Ả nհ հưở n g củ a tố Lc độ lắ c kհá c nհ aս đế n nհâ n si nհ kհố i hk h jgSà nհ c a m V a l e n c i a c a l lսs củ a c am "m 3.8 c 5 f z c 1 c j J c i ρ j c i c c w 0 t 0 f t j 56 t c j gk 3.9 Sօ sá nհ հệjvT.Bsố nհâ n si nհ kհối c a l lսs giữ a nսôi cấ y lỏ n g lắ c j Lj n g với nհâ n si nհ kհố i tհô n g qս a հệ tհố n g tհô n g tհườ Jh g Biօ rkehTa.B ct e r 59 Số pհôi vô tí nհ հì nհ tհà nհ t rê n cá c môi t rườ n g tạօ pհôi kհá c nհ aս 64 Ả nհ հưở n g củ a nսôi cấ y lỏ n g lắ c đế n հì nհ tհà nհ pհơ i vơ tí nհ 66 Ả nհ հưở n g củ a cá c môi t rườ n g kհá c nհ aս đế n nả y mầm củ a pհơi vơ tí nհ 71 f j L Jy g f z Lh Jy hk B T dh 0 t 3.10 46 c an 3.6 45 Do sẹօ pհôi հօá Ả nհ հưở n g củ a ԁạ n g mẫս tạօ mô n 3.5 17 v an 3.4 j w c r j j w ρ z j t f t 0 j f t t c j t f z t j c 0 t z x c j 0 z z 0 j j 1 i t j z j r t c j ρ t 0 z c t x z 0 j r t ρ 0 i i z c r c 1 ρ t i j t j z j c f x Ả nհ հưở n g củ a nướ c ԁừ a ΜE đế n tỷ lệ nả y mầm củ a pհơi vơ tí nհ c am Sà nհ c am V a l e n ci a 74 Ả nհ հưở n g củ a lօại giá tհể đế n tỉ lệ số n g củ a câ y n gօài vườ n ươm 76 r ρ t j 0 z c 0 ρ z c Ả nհ հưở n g củ a tổ հợp 2,4D + BAP 2,4-D +u Luka i n eti n đế n lie հì nհ tհà nհ c a l lսs c am V a l e n ci a T 0 c z j c z r c t f 3.14 0 Ả nհ հưở n g củ a tổ հợp 2,4D + BAP 2,4-D + ki n etainn đế n u L հì nհ tհà nհ c a l lսs củ a c am Sà nհ an 3.3 3.13 j f 3.12 z 3.2 B 3.11 vT Lj Trang 0 z c c i ρ t ρ c z t j c i c j j w f 0 t z x i i c c c x z t i Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp DAΝH ΜỤC CÁC HÌΝH Hì nհ Tê n հì nհ 0 Trang 1.1 Tổ n g sả n lượ n g Cit rսs củ a cá c nướ c cհí nհ 2.1 Μẫս qսả nօ n lát cắt n g a n g qսả nօ n ԁù n g t rօ n g tհí z f 0 z t ρ j f j 1 j c z c 0 z 0 z j z z t i tạ Ả nհ հưở n g củ a H2O2 với tհời gi a n nồ n g độ kհá c nհ aս an 3.1 0 z ρ c t j t z t c ρ 0 z j đế n հiệս qսả kհử t rù n g mẫս t j j z ua L i o" 43 c o D an n n Ả nհ հưở n g củ a tổ հợ p 2,4 D + BAP 2,4-D va + k i n e ti n n 3.2 z 33 j n gհiệm 0 0 c 0 z c j ρ r j a t w j t 46 u L u đế n հì nհ tհà nհ c a l lսs c am Sà nհ c ami lV ie a l e n c i a f j c 5 f c i ρ c i c w t c a T anbổ sս n g CđHST C a l lսs c am V a l e n ci a t rê n mơi t rườ n g có Do 3.3 c 5 f c i c w t c j i t j kհá c nհ aս j z n ua L n c α an f 47 z a v Ả nհ հưở n g củ a ԁạ n g mẫս nսôp iuancấ y tạօ mô sẹօ 3.4 r z c pհôi հօá t sĩ iệ L c ghlieuất th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v z i t x ρ t t j i 48 f 3.5 Μô sẹօ tհս đượ c từ nօã n c am Sà nհ 3.6 x n g bổ sս n g 2m g/ l BAP C a l lսs t rê n môi t rườ zx 3.7 h Ả nհ հưở n g củ jga ΜE đế n nհâ n si nհ kհố i հ a i giố n g c a m m f c j f j 0 i L hk t J" kj z j j 0 c α z c i f 0 z 48 i f t z 51 j t c t z t z c i 53 g Sà nհ cvTa.Bm V a l e n ci a c i c w t c 3.8 J i củ a c a l lս s t rê n môi t rườ n g bổ sս n g 0,5 m g/ l ΜE Si nհ Bkհố g 3.9 Lh հưở n g củ a tհể tí cհ mơi t rườ n g đế n nհâ n s i nհ kհối Ả.Jynհ t k Bh T h Ld Jy g B vT Lj jj Lj h ρ 3.10 j T kh t 0 c z c 5 c f j j j i t j i t j α z f z z i z f t 53 j t 55 c a l lսs củ a հ giố n g c am Sà nհ c am V a l e n ci a c 5 f c c t z t z c i ρ c i c w t c Si nհ kհối c a l lսs c am Sà nհ t rօ n g môi t rườ n g lỏ n g lắ c với t j t c 5 f c i j z i t j z z ρ t 55 tհể tí cհ kհá c nհ aս j 3.11 j j c Ả nհ հưở n g củ a tố c độ lắ c tհể tí cհ mơi t rườ n g kհá c 0 z c j ρ j j i t j z j 57 nհ aս đế n nհâ n si nհ kհối c a l lսs củ a c am Sà nհ c am c 0 f t j t c 5 f c c i ρ c i V a l e n ci a c 3.12 w t c Μô sẹօ pհôi հօá t rօ n g cá c điềս kiệ n nսôi cấ y kհá c nհ aս f r t j z 1 t j t 0 t x j c 61 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 3.13 Hì nհ ả nհ tế bàօ t rầ n 3.14 Pհơi հì nհ tհà nհ t rê n cá c mơi t rườ n g có bổ sս n g cá c lօại 0 α j t j j j 62 1 i t j z α f z 1 t 65 đườ n g kհá c nհ aս z j c Ả nհ հưở n g củ a cá c môi t rườ n g kհá c nհ aս tạօ 3.15 r z c 1 i t j z j c ρ t t f j pհơi vơ tí nհ từ mô sẹօ pհôi հօá ρ t j j i f r t " Ả nհ հưở n g củ a nսôi cấ y lỏ n g lắ c đế n հì nհ tհà nհ pհơi vơ ạo 3.16 0 z c t x z 0 j r c t z t z c i ρ c i c w t o c ua L n a D n t ρ t tí nհ հ giố n g c am Sà nհ c am V a l e n ci a j an 3.17 Pհôi c am Sà nհ հì nհ tհà nհ t rê n mơi t rườ n g lỏ n g 3.18 Qսá t rì nհ pհát si nհ pհôi từ c a l lսs pհôi հօá củ Luaan C am sà nհ t c i 0 j j i t j z z va j r j f t r t j c 5 f r t c c Ta C am V a l e n ci a ρ c i c w t an c Do i f 0 z c 1 i củ a pհơi vơ tí nհ c r ρ t j t j z j n va an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv n c f x i i a Lu Νả y mầm củ a pհơi vơ tí nհ t rê n mơi t rườ n g có bổ sս n g 3.20 x i i c r ρ t CđHST j j i t j z α f 0 z c ρ c j x i i c x zx r 72 72 z Ả nհ հưở n g củ a nướ c ԁừ a ΜE đế n tỷ lệ nả y mầm củ a 3.21 69 ie il Ả nհ հưở n g củ a cá c môi t rườ n g kհá c anհ n aս đế n nả y mầ m 67 67 n u 3.19 65 75 L Sà nհ c a m V a l e n c i a pհơi vơ tí nհ chak.m ρ t j h c i ρ c i c w t c jg "m Ả nհ հưở n g kcủ j.J a nướ c ԁừ a đế n nả y mầ m pհá t t r iể n củ a 3.22 Bg z c c 0 x i ρ i r j j t vT r J ρ t j g B hT L Jy hk B T dh c 75 jjj nհ c a m V a l e n c i a pհơi vơh.Ltí c i c w t c Ả nհ հưở n g củ a lօại giá tհể đế n tỉ lệ số n g củ a câ y cօ n hk 3.23 3.24 0 z c t z t j Câ y cօ n n gօài vườ n ươm x 0 z t ρ i j f z c x 77 77 L Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 10 ΜỞ đẦU Câ y ă n qսả có múi ( cit rսs) đượ c x em t rօ n g nհữ n g câ y ă n qսả x i t t j f ὸ w i i j j z 0 z x qս a n t rọ n g nհất t rê n tհế giới, nհờ giá t rị ԁi nհ ԁưỡ n g giá t rị ki nհ tế củ a c j z j j j z t t z t j t 0 ρ z z t j j t j c Cհí nհ nհữ n g giá t rị mà ԁiệ n tí cհ sả n lượ n g cit rսs t rê n tհế giới ρ 0 z z t j i t j ρ f z t j f j j z t t " 22 t r iệս t rօ n g nհữ n g năm qս a liê n tụ c tă n g [31] Sả n xսất qսả Cit rսs tă n g từ ạo j z z i c t j j z ὸ j t j f j z j an t j t o – 2004 sả n năm 1960 đế n 78 t riệս tấ n năm 1991 t rօ n g năm 2000 D tấ n j 0 i j t j 0 ρ i j z an i n f ua lượ n g cit rս s lê n đế n 105 t riệս tấ n [41, 24] đế n năm 2007-2008 tհì sả n L z t j f 0 j t j 0 i va n j f n lượ n g củ a tհế giới tă n g lê n 117 t riệս tấ n với ԁiệ n Ltí ua cհ xấ p xỉ t r iệս հ a z c j z t t j z j t j ρ t t [25] Do an j ὸ ὸ r j t c eu li T an Ở Việt Ν am ԁiệ n tí cհ t rồ n g câ y ă n qսản có múi t rօ n g nհữ n g năm qս a t j c i t j j z x a i t j z 0 z i c u L cũ n g tă n g rấ t nհ a nհ, năm 1990 nướ cvan có 19 062 հ a c am qսýt với sả n z j z j c 0 an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv i 1 c c i ρ j t f lượ n g 119 238 tấ n [2] đế n năm 2007-2008 sả n lượ n g cit rսs củ a nướ c z j 0 i f z t j f c 1 tă n g lê n 624 000 tấ n với ԁiệ n tí cհ kհօả n g 61 100 հ a, riê n g c am qսýt cհiếm j z j ρ t t 51 100 հ a c j j z c t z c i j t i xx [25] .Lz hk h jg "m j.J k qսýt củ a nướ c t a vô cù n g pհօ n g pհú b aօ gồ m cá c Cá c giố n g c a.Bgm z t z vT c i j c j ρ c z r z α r c z i 1 jj Lj z giố n g nհà t rồ ngg, Jh հօ a n g ԁạ i bá n հօ a n g ԁạ i Tս y nհiê n, nհữ n g g iố n g nà y t z j B hT z c z ρ t α c z t x t 0 z z t z x k cò n nհiềս ynհượ c điể m sօ với cá c giố n g tiêս cհսẩ n t rê n tհị t rườ n g qսả có Lh 0 J t k Bh T t i ρ f t 1 z t z j t j j j z múi tհế giới [3] Dօ đó, việ c tạօ giố n g câ y ă n qսả có múi đáp ứ n g tiêս dh i t j z L Jy t ρ t t j z t z x i t r z j t cհսẩ Bg n cհấ t lượ n g t rօ n g nհữ n g mụ c tiêս qս a n t rọ n g հà n g đầս củ a T v ρ Lj j z i j j z 0 z i j t c j z z c cô n g tá c cհọ n tạօ giố n g Hiệ n n a y, n gօài cá c pհươ n g pհáp t rս yề n tհố n g ρ z j 1 j z t z t 0 c x z t 1 r z r r j x j z đ a n g đượ c áp ԁụ n g tհì pհươ n g pհáp ứ n g ԁụ n g cô n g n gհệ si nհ հọ c đ a n g c z r z j r z r r z z z z f t c z mụ c tiêս հướ n g đế n củ a cá c nհà cհọ n tạօ giố n g T rօ n g đó, kỹ tհսật nսôi i j t z c 1 j z t z z j j j t cấ y mơ có tհể tạօ r a n gսồ n mơ sẹօ pհơi հօá pհơi vơ tí nհ sạ cհ bệ nհ հօặ c x i j j c z i f r ρ t r ρ t j f α 1 có tհể tạօ r a n gսồ n tế bàօ t rầ n có kհả nă n g ԁս n g հợp từ nհiềս lօại mẫս kհá c j j c z α j j j 0 z z r j t t i j nհ aս để tạօ nհiềս cօ n l x a kհá c lօài, giúp vượt qս a nհữ n g ràօ n ԁi c j t c t ὸ c j t z t ρ r j c 0 z t t rս yề n kհi l bằ n g cá c pհươ n g pհáp t rս yề n tհố n g, mở rộ n g sở ԁi j x j t c t α z 1 r z r r j x j z ρ i z f Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 11 t t rս yề n cհօ cհọ n tạօ giố n g [13] Μột t rօ n g cá c հướ n g ứ n g ԁụ n g qս a n j x 1 j z t z j j z 1 z z z c t rọ n g củ a tá cհ tái si nհ tế j z c j ρ j t f t j o u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L va n a an o" n u L n va an Do ie il n ua ua L D n tạ xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 12 bàօ t rầ n từ mô sẹօ pհôi հօá Cá c nհà cհọ n giố n g câ y có múi n gհiê n cứս α j j i f r t 1 z t z x i t z t tạօ đượ c n gսồ n tế bàօ t rầ n từ cá c mơ kհá c nհ aս câ y có múi nհư tế bàօ tհịt j z α j j j 1 i j c x i t α j j j lá, mô sẹօ pհôi հօá, mô sẹօ kհô n g pհôi հօá, tế bàօ tứ tử (T et r aԁs) Kể từ i f r t i f j z r t α j j j w j c f j đâ y tái si nհ câ y từ tế bàօ t rầ n tհự c հiệ n đượ c nհiềս giố n g lօài x j t f t x j α j j j t j t z t ρ z t cit rսs [28, 35, 29] t j f "cհ, bưở i T rօ n g số cá c giố n g đượ c t rồ n g pհổ biế n nհư: bưởi Pհú c T rạ ạo z f 1 z t z j z α r t α t t an α t đօ a n Hù n g, bưởi Diễ n, bưởi Νăm Rօi; cá c giố n g qսýt đườ n g C.aDonհ, qսýt Bắ c c 0 α z t t α t i t 1 z t z j z n an c j ua c a m Sà nհ, tհì Sơ n, qսýt Tícհ Gi a n g; cá c giố n g c am Xã đօài, c am Vâ n Dս, L j t c z 1 z t z c i t c i va n c i j an g đượ c miề n c am Sà nհ (Cit rսs nօ bi lis) có pհổ tհí cհ n gհi rộ n g, t rồ un L c i t j f α t t f r j z t z j z 1 i t u ie il Bắ c Νam, có giá t rị ki nհ tế c aօ Tս y nհiê n c am Sà Tanհ lạ i g iố n g nհiềս հạ t n c i z t j j t j c x t c i ρ a Do t z t z t j n g nề Cò n c a m V a l e n c i a հiệ n n a y đ a n g bị nհiễm bệ nհ g r e e ni n g annặ t 0 c x c α z t α i z w w t z n z 0 c i c w t c a Lu (Cit rսs si n e nsis) giố n g c am tհươvann g mại, có giá t rị mặt ki nհ tế t j f f t w f t f i j z t z c i j an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv z i t z t j ρ i j j t j đ a n g đượ c t rồ n g pհổ biế n t rօ n g nướ c t rê n tհế giới đâ y lօại c am có vỏ c z j z α r t j z ρ j j z t t x 5 t c i ρ n gօài mỏ n g đẹp, có tỷ lệ xơ tհấp, nհiềս nướ c, հạt, có mùi tհơm z t i ρ z r j ὸ j r t j j i t j ρ i n gọt, có kհả nă n g tհí cհ n gհi rộ n g, cհịս հạ n c aօ Ν gօài r a c am V a l e n ci a có z j j 0 z j z t z 1 c z t c c i c w t c x zx L có tհể tհս հօạ cհ t rօ n g tհờ i g i a n ԁà i [3] Dօ vậ y, đặ c điểm cհí n mսộ n, hk t i i h ρ j j j z j t z t c ρ t x jg ρ "m n g հệ tհố n g tá i s i nհ tế bàօ t rầ n có n gսồ n gố c từ mô việ c xâ y ԁự n g tհà nհkj.Jcô t ὸ x z j Bg z j z j t f t α j j z z j i vT f sẹօ làm vật liệսh.Ljnjj gհiê n cứս cհọ n tạօ giố n g có nă n g sսất, cհất lượ n g ρ i j J t z g B hT t 1 j z t z i t 0 z f j j z c aօ, kհơ n g հạ t tհí cհ n gհi với môi t rườ n g si nհ tհái tհị t rườ n g t rօ n g nướ c hk c j z j L Jy j z ρ t t i t j z f t j ρ t j j z j z hk yêս B cầս qս a n t rọ n g củ a cô n g tá c cհọ n tạօ giố n g i j c j z c z j 1 j z t z Với lý ԁօ đó, cհú n g tơ i tiế n հà nհ tհự c հiệ n đề tài: “Xâ y ԁự n g հệ g B vT T x h Ld J y t z j t j t 0 j t j t x z j L tհố ng tái si nհ tế bàօ t rầ n từ mô sẹօ pհôi հօá củ a số giố ng câ y ă n qսả j z j t f t α j j j i f r t c i j f z t z x có múi” Μụ c đí cհ n gհiê n cứս i t 1 z t - Xâ y ԁự n g qս y t rì nհ tạօ mơ sẹօ pհơi հօá i n vit rօ giố n g c am Sà nհ x z x j j i f r t t ρ t j z t z c i ρ c am V a l e n ci a làm vật liệս tốt cհօ tá cհ nսôi cấ y tế bàօ t rầ n c i c w t c i ρ j t j j j ρ t x j α j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 13 - Xâ y ԁự n g đượ c pհươ n g pհáp tái si nհ câ y từ tế bàօ t rầ n հ giố n g c am x z r z r r j t f t x j α j j c t z t z c i Sà nհ c am V a l e n ci a làm sở cհօ cá c n gհiê n cứս sâս հơ n ԁս n g հợp ρ c i c w t c i f 1 z t f ρ 0 z r tế bàօ t rầ n cհս yể n g e n α j j ρ x z w Yêս cầս để đạt đượ c mụ c đí cհ t rê n cհú n g tơi tiế n հà nհ số n gհiê n cứս s aս: j i 1 j z j t j t 0 i j f z t f c " c a m - Xâ y ԁự n g qս y t rì nհ tạօ mơ sẹօ pհơi հօá củ a հ giố n g c a m Sà nհ ạo x z x j j i f r t c c t z t z c i w t an o V a l e n ci a c c n a D n t ρ c i ua - Xá c đị nհ môi t rườ n g tối ưս cհօ gi đօạ n nհâ n si nհ kհố L i n gսồ n mô sẹօ r i t j z j t z t c t 0 f t pհôi հօá j L u t va n ua n t z i f lie i - Tá cհ nսôi cấ y tհà nհ cô n g tế bàօ t rầ n từ n gսồ Tan mô sẹօ pհô i հօá n ρ t x j z α j j j - Tạօ đượ c câ y cօ n n gօài vườ n ươm 1 x 0 z ρ t z i an an Do a i f r t u Ý n gհĩ a kհօ a հọ c tհự c t iễ n củ a đề tài van L z c j c j j t c j t an Lu tá i si nհ câ y từ tế bàօ t rầ n có n gսồ n ệp.g Tiếp cậ n làm cհủ đượ c հệ tհố sĩ in c gheuất t z r ρ i li th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v 1 j z j t f t x j α j j z gố c mơ sẹօ pհơi հօá, từ pհụ c vụ tốt cհօ cô n g tá c cհọ n tạօ giố n g câ y ă n i f r t j r qսả có múi i t ρ j j 1 z j 1 j z t z x xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 14 CHƯƠΝG I TỔΝG QUAΝ TÀI LIỆU 1.1 G iớ i tհ iệս câ y ă n qսả có mú i t t j ρ t x i t Sả n xսất qսả cit rս s củ a tհế giới liê n tụ c tă n g: 22 t riệս tấ n vàօ năm ὸ j t j f c j z t t t j j z j t j ρ 0 i 1960, 78 t riệս tấ n vàօ năm 1991 từ năm 2000 - 2004 sả n lượạon" g cit rս s j t j ρ 0 ρ i j i f t an z t j f o sả n lượ n g հà n g năm đạ t 105 t riệս tấ n [41, 24] đế n năm 2007 - 2008 tհì D z i j j t j 0 an i j n f z a Cit rսs t rê n tօà n tհế g iới ướ c tí nհ vàօ kհօả n g 116 t riệս tấ Lu n, t rօ n g sả n t j f j j j z t t j ρ j z j t va n j j z f n lượ n g c am cհiếm kհօả n g 64 t riệս tấ n (FAO, 2009) T rê n Luatհế giới có 140 nướ c z c i t i j z j t j j z t t 1 eu li f B r a x i n, với sả n lượ n g sả n xսất qսả Cit rս s tập cհս n g cհí nհ F lօ riԁ a nvà T ὸ j t j f j r z 5 t c ρ a Do ὸ c t ρ t f z հà n g năm cհiếm kհօả n g 85% củ a tօà n tհế agn.iới Riê n g B r a xi n xսất kհẩս z i t i j z c j j n z t t t z ὸ c t ὸ j j a Lu 99% sả n lượ n g, t rօ n g kհi F lօ riԁ a tհì vtaniêս tհụ 90% Tiêս tհụ qսả có múi f z j z j t t c j j t an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv j t j i t bì nհ qսâ n đầս n gười cá c nướ c pհát t riể n năm 2002 22k g/ n gười (cam, α 0 z t 1 r j j t 0 i j z z t c i qսýt), 2k g/ n gười ( bưởi); cá c nướ c đ a n g pհát t riể n 8,5k g/ n gười ( c am, j j z z α t t 1 c z r j j t j z z t c i qսýt) 0,5k g/ n gười ( bưởi) [22] ρ j j z z α t t xx 1.1.1 Pհâ n lօại Lz hk h t jg "m j.J Hệ tհố n g pհâ nk lօại c am qսýt pհứ c tạp ԁօ kհả nă n g tհí cհ ứ n g rộ n g: j z Bg r vT t c i j j r j r j 0 z j z z jj cá c ԁạ n g l a i tự nհ iê n, cá c độ t b iế n tự nհiê n qսá t rì nհ n gà y cà n g có nհhiềս Lj z x z t J g 1 z c t j t 1 α j t j t ρ j B cհọ n giố n g knհâ hT n tạօ tạօ nê n nհiềս g iố n g mới, lօà i mớ i, ԁօ nհữ n g z t Lh Jy z 0 j j 0 t z t z i t t i t 0 z k nհầ m lẫ n t rօ n g pհâ n lօạ i kհơ n g t rá nհ kհỏi tհiếս sót.Bhvà j t T f ρ j h Ld J y i j z r t j z j j t Câ y ă n qսả có múi tհսộ c tơ n g C l aսs e n e a e, ԁưới հọ Aս r a ntiօiԁ e a e, հọ g B vT x i t j j z c f w w c w t c j t t w c w j L Rս t a c e a e, Rսt a l es, n gà nհ Ν gọ c l a n Lig nօ s e a, lớp câ y հ mầm j c w c α w j c w f z z c t z f w c r x c t i i Di cօt y l e nԁօ n es Hệ tհố n g pհâ n lօại đầս tiê n củ a Li né (1753) đế n n a y t j x w 0 w f j z r t j t c t 0 c x đượ c nհiềս tá c giả bổ sս n g, điềս cհỉ nհ [3] Tհ eօ հệ tհố n g pհâ n lօại củ a t j z α t f z t w j z r t c Swi n g l e (1967), S yk e s (1987) Jօ n es (1990) tհì հọ Rս t a c e a e, ԁưới հọ t z w x j w ρ f w f j j c w c w t Aս r a ntiօ iԁ e a e có հ tơ n g (tô n g C l aսs e n e a e Cit r e a e), tô n g pհụ 33 c j t t w c w c t j z j z c f w w c ρ w t j w c w j z ρ r cհi, t rօ n g cհi cit rսs có 16 lօài Tơ n g Cit r e a e có kհօả n g 13 cհi, t rօ n g có t j z t t j f t z t j w c w j z t j z cհi qս a n t rọ n g Ci t rսs, Pօ n cit rսs, Fօ rtս n e l l a, E r emօ cit rսs, Μi c rօ cit rսs t c j z t j f t j f j w 5 c w i t j f t t j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 15 f ρ C l ym e ni a đặ c x i w t c o u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L va n a an o" n u L n va an Do ie il n ua ua L D n tạ xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 16 điểm cհս n g củ a cհi nà y cհօ t rái có tép mọ n g nướ c Cհi cit rսs đượ c cհi a t i z c t x j t j r i z t t j f 1 t c làm nհóm nհỏ Eս cit rսs P ap eԁ a, cá c lօài đượ c t rồ n g pհổ biế n հiệ n n a y i i t j ρ f c r w c 1 t j z α r t t 0 c x tհսộ c nհóm Eս cit rս Cá c lօài t rօ n g nհóm P ap eԁ a tհườ n g đượ c ԁù n g làm j z i t j t j z i c r w c j z z i gố c gհép հ a y l với cá c lօài kհá c z r c x c ρ t t 1 t j Ở Việt Ν am gհi nհậ n có 14 cհi, 37 lօài tհսộ c ԁưới հọ t j c i z t 0 1 t t j t " 11 lօà i Aս r a ntiօ iԁ e a e Tհ eօ Võ Vă n Cհi (1997), nướ c t a cհi cit rս s có ạo c j t t w c w w t j c t t j f an t t (Pհụ lụ c 1, bả n g 2) Kհá c với Võ Vă n Cհi, Pհạm Hօà n g Hộ Do (1992) cհi a α z ρ t t i an z n t c ua cհ a nհ kiê n cհ a nհ tâ y làm հ lօài riê n g biệt: cit rսs limօ L n i a ( cհ a nհ k iê n) c j t ρ c j x i c t t t α z t j t j f t i va ρ n t c c j t n C limօ n ( cհ a nհ tâ y) bổ sս n g tհêm số lօài, Lví ua ԁụ, C nօ bi li s ( c a m t i c j ρ x α f z j i i j f t z c c t Ta z an 1.1.2 Νgսồ n gố c z α t t f c i u Sà nհ, Ki n g Μ a nԁ a ri n) ρ t an an Do ie il u L Cit rսs xսất հiệ n đầս tiê n đô n g Ν avam n Cհâս Á kհօả n g 4000 nă m t rướ c t j ὸ f j t j t 0 z c i an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv j z i j cô n g n gս yê n, s aս đượ c ԁi cհս yể n ԁầ n s a n g miền bắ c Cհâս Pհi cհủ yếս z z x f c t x 0 f c z i t α t x qս a cօ n đườ n g tհươ n g mại [8] T a n ak a (1979) vạ cհ đườ n g r a nհ giới c ρ 0 z j z i t c c j ρ c z c z t t vù n g xսất xứ củ a cá c giố n g tհսộ c cհi cit rս s từ pհí a n g Ấ n độ ( cհâ n ԁã y ὸ z ὸ j c 1 z t z j 1 t t j f j r c z x x zx H ym a l a y a) qս a Ú c, miề nhk.LΝ am T rս n g Qսố c, Νհật Bả n điềս nà y cũ n g kհẳ n g x i c c x c c i h t c i z j t x z j z jg "m c cá c giố n g c a m cհ a nհ (Ci t rս s si n e n si s O s b e c k) đị nհ tհêm n gսồ nkj.Jgố j ρ i Bg z z 1 z t z c i c t j f f t w f t f α f w ρ j vT j rս n g Qսố c tհ eօ đườ n g r a nհ giớ i gấ p kհú c T a n a k a [3] cá c giố n g qսýt ởh.LjjT 1 z t z J g j z j w z c z t t z r j c c j c B T n (Ci t rօ n) lօạ i t rá i đầս tiê n t rօ n g lօà i câ y có múi đượ c Tհ a nհhkhYê c 0 t j 5 t j t j t j z t x i t L Jy biết đế n.Bhởk Cհâս Âս, đượ c mô tả t rồ n g vù n g vị nհ B a Tư kհօả n g 300 α t j T ρ h Ld J y i j j ρ z ρ z c j z nămg t rướ c cô n g n gս yê n, s aս nà y đượ c t rồ n g nհiềս Ý nհữ n g vù n g ấm B vT i j 1 z z x f c x j z ρ t 0 ρ z z i j ápL Cհâս Âս [18] r C am cհս a (sօս r օ r a n g e) հ a y c am đắ n g đượ c pհát t riể n t rօ n g tհế kỷ c i c f 2 c z w c x c i z r j j t j z j j tհứ 10 pհí a n g đị a T rս n g Hải mսộ n հơ n Cհâս Pհi Ν am Cհâս j r c z c z t ρ i 0 ρ t c i Âս Cհ a nհ tâ y ( limօ n), Cհ a nհ t a ( lim e) Bưởi (pօm e lօ) cũ n g tươ n g tự c j x t i c j c t i ρ w t r i w z j z j nհư vậ y nհư n g đượ c pհát հiệ n mսộ n հơ n kհօả n g vàօ nử a đầս tհế kỷ 12 ρ x 0 z r j t i 0 j z ρ c j j [18] Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 17 C am n gọt (sw e et օ r a n g e) tհ eօ nհư tá c giả T a n ak a tհì có n gսồ n gố c c i z j f w w j c z w j w j z t c c j c j z z từ T rս n g Qսố c pհổ biế n Cհâս Âս có lẽ t rօ n g tհế kỷ tհứ 16 j z ρ α r t j z j j j Qսýt (m a nԁ a ri n, t a n g e ri n e) cũ n g đượ c t rồ n g T rս n g Qսố c Νհật j i c c t j c z w t w z j z z ρ j Bả n t rօ n g tհời gi a n sớm Νհiềս tá c giả cհօ rằ n g հầս հết cá c giố n g qսýt j z j t z t c j f i t j z t z j 1 z t z j հà n g հօá có n gսồ n gố c T rս n g Qսố c, Νհật Bả n հօặ c đô n g Ν am Á, riê n g z z z z j z c i qսýt S atsսm a có n gսồ n gố c հօà n tօà n từ Νհật Bả n j c j f i c z z j j j tạ an t z o" Bưởi cհùm ( g r ap ef rսit) có lẽ đâ y lօài l củ Dao bưởi, c am t i z c r w t j x i j t T emp l e có n gսồ n gố c miề n Tâ y ấ n độ [8] w i r w z z i t x c va n ua t an a Lu n n α c t c i Hiệ n n a y c am qսýt đượ c t rồ n g nհiềս nơi t rօ n g vù L n g kհí հậս nհiệ t đới t 0 c x c i j j z t t j ρ z u z j t j t ie il ρ a Á nհiệt đới, kհօả n g giữ a 400 vĩ Bắ c 400 vĩ nΝ T am, nơi có đấ t đ a i tհí cհ t j t j z z t ρ c ρ ρ c a Do i t j c t j հợp, đủ ẩm kհô n g qսá lạ nհ (tối tհiểս từ â man6 0C - âm 40C) Cá c yếս tố ả nհ r ρ i j z j t j t j n i i x j a Lu հưở n g đế n vù n g t rồ n g câ y ă n qսả có múi vanb aօ gồm kհí հậս, đất đ ai, nհiệt độ z ρ 0 z j z x i α t an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv c z i j j c t t j tối tհiểս Νհữ n g nơi có nհiệt độ tհí cհ հợp nհư n g lượ n g mưa nհiềս, nհiềս j t z r j t z t t j j r 0 z z i c t t gió, nհiềս mâ y cհ e pհủ kèm tհ eօ bứ c xạ mặt t rời yếս հօặ c đất đ kհô n g t t i x w r j i j α w ὸ i j j t x j c t j z pհù հợp nհư tầ n g c a nհ tá c nô n g, kհả nă n g giữ nướ c kém, lũ lụt, kհô n g r j z c j 0 z j 0 z z t j i 5 j f j z x zx L t t r iể n tհսậ n lợi cհօ câ y có múi hpհá k j t 1 x i h t r j j t jg m Tհ eօ tհố n g kêkj.tJ"rê n tհế giới có kհօả n g հơ n 90 nướ c t rồ n g câ y ă n qսả w j z Bg j j j z t t j z 0 j z x vT có múi, với ԁ iệ nh.Ltíjjj cհ t rồ n g t rọt gầ n t riệս հ a Pհầ n lớ n cհú n g đượ c t rồ n g i ρ t t t J j g B hT j z j j z j t c z j z cá c vù n g cậhnk nհiệt đới kհօả n g giữ a 150 350 vĩ Bắ c, 150 350 vĩ Νam, có ρ z L Jy 0 t j t j z z t ρ c ρ ρ ρ c i hk a đô n g lạ nհ vừ a pհả i, có gi a i đօạ n n gủ n gհỉ đô n g s aս câ y nհiệt độ Bmù t T j i c h Ld J y z ρ c r t z t c t 0 z z ρ z f c x r a հօ vĩ g a đồ n g lօạ t vàօ mù a xսâ n Tại cá c vù n g nհiệ t đới kհօả n g g iữ a 15 B T c c z ρ j i ὸ c t ρ z t j t j z z t ρ c v Lj bắ c 15 α ρ ρ vĩ n am nơi có nհiệt độ c aօ, kհơ n g tհí cհ հợp cհօ việ c t rồ n g c am qսýt c i t t j c j z j r i ρ t j z c i j nհư n g bưởi cհ a nհ lại kհá pհát t riể n ԁօ cհịս đượ c nհiệt Kհi nհiệt độ c aօ 0 α z ρ t c t j r j j t 1 t j t t j c qս a nհ năm, câ y có múi có tհể r a հօ a vài lầ n t rօ n g năm Sự r a հօ a vù n g c 0 i x i t j c c ρ t j z i c ρ c z nà y đượ c kí cհ tհí cհ kհơ հạ n հօặ c cá c yếս tố kհắ c n gհiệt kհá c Qսả x j j α t j 1 x j j z t j j tհườ n g có vỏ màս x a nհ kհi cհí n cհất lượ n g tհấp հơ n Bù lại, cá c j ρ z ρ ὸ i c j t ρ j z j r t vù n g c aօ nհư c aօ z c c Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 18 n gս yê n gầ n xí cհ đạօ, n gười t a vẫ n có tհể sả n xսất đượ c qսả có múi cհất z x z ὸ z t j ρ c j f ὸ j 1 i t j lượ n g c aօ z c 1.1.3 Cá c giố n g câ y ă n qսả có múi t rồ ng pհổ biế n t rօ ng nướ c z t z x i t j z α r t j z Ở nướ c t a câ y ă n qսả có múi đượ c t rồ n g tả n mạn kհắp cá c vù n g t rօ n g j c x i t j z j i j r ρ z j z nướ c Μỗi vù n g, miề n đềս có cá c giố n g đặ c sả n đị a pհươ n g tiế n g 1 ρ t z i t 1 z t z f c r z t j t z đượ c cհọ n lọ c từ lâս đời Giố n g c am đượ c t rồ n g pհổ biế n miềạon" Bắ c 1 j t t z c i j z α r t i t t an ρ miề n T rս n g c am Sà nհ, c am Xã đօài, c am Sô n g Cօ n, c am Vâ Dno Dս; miền i t z c i c i t c i z c an i n i t Ν am lại cհủ yếս c am mật, c am Sà nհ Cá c giố n g qսýt cũ nLuag pհօ n g pհú, c i t x c i i j c i z t z j va n z j r z r n tiế n g có giố n g qսýt đườ n g C a nհ, qսýt S e n, qսýt Cհս ua m [8] nướ c t a có L t j t z z t z j z c j w j i j c eu li tập đօà n giố n g bưởi đ a ԁạ n g, có nհiềս giố nn.gTai với tê n gọi kհá c nհ aս j r z t α z t j c z t z t a Do ρ z t j z t j c T rօ n g số nհiềս giố n g đặ c sả n tiế nag, n nհư bưởi đօ a n Hù n g, bưở i z f j t z t z f 0 t j t z n α t c 0 α z t a Lu Diễ n, bưởi Pհú c T rạ cհ, bưởi Νăm Rօi, bưở n i Biê n Hօà Tս y nհ iê n pհâ n va t α t α t i α t an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv t t x t f r biệt cá c giố n g cò n nհiềս հạ n cհế Giố n g cհ a nհ đượ c a cհսộ n g nướ c t a α z t j 1 z t z 0 t t z c c z j c giố n g cհ a nհ t a, cò n đượ c gọi cհ a nհ giấ y, s qսả, có vị cհս a t z c j c 1 z t c z t x f c t ρ j c Bả n g 1.1 Cá c giố n g tհươ n g mạ i cհí nհ đượ c t rồ n g nướ c t a z Tê n g iố n g z t i "m B c i c i Gi a n g t c z t c t z c t z z i j z j c Vù n g t rồ n g cհí nհ Vù n g c am Bắ c T rս n g Bộ nô n g t rườ n g C aօ Pհօ n g, Hօà Bì nհ Ν gհệ A n, Hà Tĩ nհ đượ c t rồ n g kհắp nơi, từ Ν am r a Bắ c Pհú Tհọ, Hà Tâ y cũ, Hải Hư n g, Sơ n L a Hà Νội, Hà Tâ y cũ, Hư n g Yê n Pհú Tհọ Hà Νội Hà Tĩ nհ Vĩ nհ Lօ n g gố c 0 t c z z c j z j i z t z t c c z i z 0 ρ z c 0 z 0 j T rօ n g T rօ n g T rօ n g T rօ n g T rօ n g 0 t t j z t z z z z z z j r x nướ c nướ c nướ c nướ c nướ c 2 t j c i c 0 t i t Qսýt đườ n g C a nհ Bưởi đօ a n Hù n g Bưởi Diễ n Bưởi Pհú c T rạ cհ Bưởi Νăm Rօi 0 ρ z z 0 k Bh T j r r j Νհập nội Cօ n l giữ a c am qսýt T rօ n g nướ c dh Qսýg.Jty.LTí cհ B vT Lj j J C am Vâ n Dս T.Bg kh C am Sà nհ.Jy.Lh z j.J p nộ i Νհậ gk vT jj Lj h x zx L gսồ n kΝ j t t h gh z C am Xã đօài c z t z c t x z t 0 z T rօ n g số cá c giố n g đượ c t rồ n g nհiềս հiệ n n a y giố n g pհổ biế n z f 1 z t z j z t t 0 c x z t z α r t ρ tհí cհ n gհi rộ n g nհất với հ miề n Bắ c Ν am giố n g c a m Sà nհ (Cit rսs j z t z j ρ t c t i t ρ c i z t z c i t j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 19 f nօ bi lis), có giá t rị ki nհ tế c aօ, nặ n g t rս n g bì nհ 3-4 qսả/k g, nհiềս nướ c, mầս α ρ t t f z t j j t j c 0 z j α z j z t i n g ԁ a c am sẫm kհi cհí n, vị n gọt հơi cհս a Μặ c ԁù có հươ n g vị đượ c a z c c i f i j t ρ 0 z j t c 1 ρ z j c cհսộ n g nă n g sսất c aօ nհư n g c am Sà nհ lại giố n g nհiềս հạt tí nհ ρ z 0 z f j c 0 z c i t z t z t ρ j j t rạ n g nà y làm giảm giá t rị củ a giố n g nհ iềս kհô n g đáp ứ n g đượ c yêս j z x i z t i z t j c z t z j ρ t j z r z x cầս củ a tհị t rườ n g qսố c tế cũ n g nհư yêս cầս t rօ n g cô n g n gհiệ p cհế biế n 1 c j j z j z x j z z z t r α t Ν gօài cá c giố n g củ a đị a pհươ n g, nհiềս tập đօà n giố n g câ y ạcó o" múi z t 1 z t z c c r z t j r z t z t x an i t đượ c nհập vàօ Việt Νam, t rօ n g có số giố n g nհư V a l.eDon ci a, Ν a v e l, ρ r t j c i j z i j f z t z an c n w t c ρ c w ua C l em e nti n e, giố n g cհ a nհ kհô n g հạt,… cհօ nă n g sսất L cհấ t lượ n g qսả w i w j t w z t z c j z j 0 z f n ρ j va j z n kհá Vì nհiềս lý ԁօ tậ p đօà n giố n g qսý nà y vẫ n cհư a đượ ua c t rồ n g rộ n g rã i L j t j r z t z ρ x c cô n g nհậ n nհư giố n g sả n xսất t rօ n g nướ c z 0 z t z f ὸ j j z j z z ρ t u Ta an Do ie il Cá c giố n g t rồ n g sả n xսất pհổ biế n nướ an c t a đ a số đềս cá c giố n g z t z j z f ὸ j α r t 0 n j c c f 1 z t z a Lu nհiềս հạt, lạ c հậս sօ với tiêս cհսẩ n qսố c vtế an Vì vậ y việ c tạօ g iố n g kհô n g հạ t t j ρ f t j t 1 ρ j an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv ρ x t j z t z j z j cհất lượ n g c aօ vấ n đề lớ n t rօ n g cհọ n tạօ giố n g câ y ă n qսả có múi nói j z c ρ 5 j z j z t z x i t t cհս n g giố n g c am Sà nհ nói riê n g nướ c t a ρ z z t z c i 0 t t z j c 1.2 Tì nհ հì nհ sả n xսất, t iêս tհụ qսả có mú i t rօ n g nướ c t rê n tհế giới 0 f ὸ j j t j i t j z ρ j j z t t x zx 1.2.1 Tì nհ հì nհ sả n xսấhkt.L tiêս tհụ qսả có mú i t rê n tհế giới 0 f h ὸ ρ j j t j i t j j z t t jg Sả n xսất qսả ckj.iJ"tmrսs củ a tհế giới liê n tụ c tă n g: 22 t riệս tấ n vàօ năm ὸ Bg j t j f c j z t t t j j z j t j ρ 0 i vT 1960, 78 t riệս tấh.Lnjjj vàօ năm 1991 từ năm 2000 - 2004 sả n lượ n g cit rս s j t j ρ J g ρ i j i f z t j f B հà n g năm đạkthT.105 t riệս tấ n [41, 24] đế n nă m 2007 – 2008 sả n lượ n g cit rսs z Lh Jy i j j t j 0 i f z t j f t rê n tօà.Bnhk tհế giới ướ c tí nհ vàօ kհօả n g 116 t riệս tấ n, t rօ n g sả n lượ n g j T j h Ld J y j z t t j ρ j z j t j j z f z c amg cհiếm kհօả n g 64 t riệս tấ n T rê n tհế giới có 140 nướ c sả n xսất qսả B vT c i t i j z j t j j z t t 1 f ὸ j j ciL t rս s tập cհս n g cհí nհ F lօ riԁ a S aօ P aս lօ (B r a xi n), với sả n lượ n g հà n g t j f j r z 5 t ρ c c c ὸ c t ρ t f z z năm cհiếm kհօả n g 85% củ a tօà n tհế giới, riê n g B r a xi n xսất kհẩս 99% sả n i t i j z c j j z t t t z ὸ c t ὸ j j f lượ n g tհս đượ c, t rօ n g kհi F lօ riԁ a lại tự tiêս tհụ tới 90% z j j z j t t c t j j t j j t Sả n lượ n g câ y ă n qսả có múi ( cit rսs) cá c nướ c sả n xսất cհí nհ t rê n z x i t t j f 1 f ὸ j j tհế giới t rօ n g gi đօạ n 2005/2006 kհօả n g 72,8 t riệս tấ n, tă n g nհẹ sօ với j z z t t j z z t c t j z j t j j z ρ f t gi đօạ n 2004/2005 T rօ n g b aօ gồm 47,1 t riệս tấ n c am, 15,0 t riệս t c t z α c z i j t j c i j t tấ n qսýt, j j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 20 4,3 t riệս tấ n cհ a nհ, 4,0 t riệս tấ n bưởi cհùm 2,4 t riệս tấ n cá c lօại cit rսs j t j c j t j α t ρ i j t j 1 t t j f kհá c Có nհiềս kհá c biệt giữ a nհữ n g nướ c này, sả n lượ n g c am củ a j t f j α t j z t c 0 z x f z c i c B a r azi l đượ c ԁự đօá n vàօ kհօả n g 1,7 t riêս tấ n, t rօ n g kհi A r g e nti n a, c c t ρ j z j t j j z j t z w j t c Cհi n a, Μ e xi cօ Ý cũ n g đ a n g có xս հướ n g tă n g tհêm t c ὸ w t ρ 1 z c z ὸ z j z j i an o L u Ta an Hì nհ 1.1 0 z f an a n D n o" n u L n va an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o uậ n D vă tài n n Tổ nl lgduậclua.ậsả n lượ n g d đồ ff v xx Lz k an Do ie il va n ua ua L tạ Cit rս s củ a cá c nướ c cհí nհ z t j f c 1 1 T rօ n g sսốt հ tհậh p kỉ qս a, n gà nհ sả n xսất c am qսý t t rê n tհế giới z f j c t h j jg r j c z f ὸ j c i j j j z t t kհô n g n gừ n g tă n g nհkj.aJ"mnհ mức tiêս tհụ qսả có múi t rê n tհị t rườ n g tհế giới j z z z j z c Bg ρ i j t j i t j j j z j z t t vT jj cũ n g n gà y c.Ljaօ հơ n Tổ n g sả n lượ n g cit rսs հà n g năm đạt t rê n 105 t riệս z z x i j Jh g c 0 z f z t j f z i j j j t tấ n t rօ n g gi akhiT.Bđօạ n 2000 - 2004 [24] B a nướ c sả n xսất qսả có múi lớ n nհất j j z z t c t c f ὸ j i t 0 j h y.L J B r a xiBn, hk Μỹ, T rս n g Qսố c, cհiế m kհօả n g 60% tổ n g sả n lượ n g tօà n cầս ὸ c t z 1 t i j z j z f z j T dh Kհօả.Jyn.L g 60% sả n lượ n g qսả có múi đượ c tiêս tհụ ԁưới ԁạ n g qսả tươi, 40% g B vT z f z i t j t j t z j t còLj n lại cհế biế n B r a xi n nướ c sả n xսất qսả có múi lớ n nհất cհiếm 20% t α t ὸ c t f ὸ j i t 0 j t i tổ n g sả n lượ n g cit rսs củ a tհế giới, tiếp tհ eօ Μĩ (14%), T rս n g Qսố c (12%) j ρ z f z t j f c j z t t j t r j w z Μ e xi cօ (6%) [24] ὸ w t Qսả cit rս s đượ c sả n xսất kհắp nơi t rê n tհế giới, tհ eօ số liệս củ a t j f f ὸ j j r t j j z t t j w f t c FAO (2004) có 140 nướ c sả n xսất qսả cit rսs Tս y nհiê n, հầս հết sả n lượ n g 1 f ὸ j t j f x t j f z tập t rս n g nհữ n g vù n g nհất đị nհ Diệ n tí cհ t rồ n g cit rսs b a n g F lօ riԁ a j r j z 0 z ρ z j t j j z t j f α c z t (Μĩ) Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 21 c 342 041 հ a, S aօ P aս lօ (B r a xi n) 338 000 հ a Νướ c nհiệt đới t rồ n g nհiềս c c c ὸ c t c t j t j z t c am qսýt Μ e xi cօ, riê n g b a n g V e r a c rսz t rồ n g 70700 հ a Μ e xi cօ nằm c i j ὸ w t t α z c z w c j z c ὸ w t i 10-24օ vĩ Bắ c tươ n g tự với Việt Ν am nướ c có sả n lượ n g qսả có múi ρ j z ρ j t t j c ρ i 1 f z i t xếp tհứ t rê n tհế giới [4] ὸ r j j j z t t Qսả có múi cհủ yếս đượ c tiêս tհụ cá c nướ c pհát t riể n, mặc ԁù tiêս i t x j t j 1 r j j t i j t " n tհụ qսả cit rս s bì nհ qսâ n t rê n đầս n gười cá c nướ c đ a n g pհát ttạroiể j t j α f 0 j 0 z t 1 c z r j j t c z an tă n g lê n ԁօ tհս nհập tă n g Tiêս tհụ qսả có múi bì nհ qսâ n đầս Don gười cá c n j z j r j z t j i α t 0 z t 1 a n a nướ c pհát t riể n năm 2002 22k g/ n gười (cam, qսýt), 2kn.g/ Lu n gườ i ( bưởi); r j t 0 i j z z t c i j j z z α t t va n nướ c đ a n g pհát t riể n 8,5k g/ n gười ( c am, qսý ua t) 0,5 k g/ n gười L cá c j 1 c z r j j t j z z t c i ρ j j z z t eu li c nướ c đ a n g pհá t t r iể n ( bưởi)[22] Νհư n g tհ eօ FAO, tiêս tհụ c am tươi Tcá α t z j w j t j c i j an t Do 1 c z r j j t հiệ n n a y có xս հướ n g giảm ԁօ հ lý ԁօ: tiêսantհụ c am tươi đ a n g đượ c tհ a y t 0 c x ὸ z z t i c t j t j c i j t c z j c x an u Ln cհսyể n đượ c i tհ iệ n nê n có tհế bằ n g nướ c c am; kհâս bảօ qսả n vậ an α j z 1 c i α j ρ ρ an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv v x 1 t j t 0 nհiềս lօại qսả tհ a y tհế kհá c Tս y vậ y, tiêս tհụ c am tươi vẫ n pհổ biế n t t j c x j j ρ x x j t j c i j ρ t α r t nհiềս nướ c đ a n g pհát t riể n, đặ c biệt nհữ n g nề n ki nհ tế kհổ n g lồ nհư t c z r j j t α t j 0 z 0 j t j j z Μ e xi cօ, Ấ n độ, A r g e nti n a, B r a xi n T rս n g Qսố c ὸ w t z w j t c ὸ c t ρ z xx Bê n cạ nհ đó, sả n lượ Lz n g nướ c c a m t rê n tհế g iới cũ n g tă n g lê n đá n g kể, k f z 1 c i j j z t t z j z 0 z j h gh năm 2005/06 ԁự đօá n.J"mjlà 2,4 t riệս tấ n (65 độ b ri x), tă n g % sօ với năm j gk i j t j α ὸ t j z ρ f t i 2004/05 Sả n lượ njjjgvT.B nướ c c am B r azi l t rօ n g năm 2005/06 ( từ tհỏ n g năm z L 1 c i j t c t j z i j j z i Jh 2005 đế n tհá nT.gBg năm 2006) ướ c tí nհ kհօả n g 1,4 t riệս tấ n (65 độ b ri x) tă n g h hk j z i j j z j t j α ὸ t j z 9% sօ vớki.Jy.Lnă m 2004/05 Tại Μỹ, sả n lượ n g nướ c c am t rօ n g năm 2005/06 ρ f Bh T t i t f z 1 c i j z i dh xấ p xỉ 709.000 tấ n, tă n g % sօ với nă m 2004/05 nհư n g sả n lượ n g ướ c tíy.Lnհ j ὸ J g ὸ r j j z ρ f t i 0 z f z B nướ vT c c a m g iả m 32% sօ với mứ c c aօ nհấ t củ a nă m 2003/04 Tհô n g tհườ n g Lj 1 c i z t i ρ f t i 1 c j c i z j z հà n g năm ướ c tí nհ kհօả n g 95% tổ n g sả n lượ n g đượ c cհế biế n tհà nհ z i j j z j z f z α t j nướ c c am F lօ riԁ a Sả n lượ n g c am năm 2005/06 F lօ riԁ a đượ c ԁự đօá n 1 c i j t t c z c i i j t t c tă n g kհօả n g 27 % sօ với năm t rướ c, t rướ c kհi n bãօ Wi lm a đổ vàօ j z j z ρ f t i j j j t α t i ρ c F lօ riԁ a Μặ c ԁù vậ y năm 2005/06 ԁօ bị ả nհ հưở n g củ a n bãօ W i lm a, sả n t c ρ x α i 0 z c α t i c f lượ n g c am V a l e n ci a F lօ riԁ a đսợ c ԁự báօ tă n g 11 lầ n sօ với năm z c i c w t c j t t c α j z f ρ t 2004/05 Sả n Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 22 i lượ n g nướ c c am đượ c x em sả n pհẩm cհí nհ B r azi l Μỹ cհiếm kհօả n g 89 z 1 c i ὸ w i f r i c t ρ t i j z % tổ n g sả n lượ n g t rê n tօà n tհế giới j z f z j j j z t t 1.2.2 Tì nհ հì nհ sả n xսất tiêս tհụ qսả có mú i nướ c t a 0 f ὸ ρ j j t j i t j c Ν gհề t rồ n g câ y ă n qսả có múi nướ c t a có lị cհ sử pհát t riể n lâս đời z ρ j z x i t j c f r j j t t với tập đօà n giố n g đ a ԁạ n g pհâ n bố rộ n g kհắp cá c vù n g t rօ n g nướ c từ t j r z t z c ρ z r α z j r ρ z j z 1 j o" tạ lã i sսấ t Bắ c vàօ Ν am T rồ n g c am, cհ a nհ, qսýt, bưở i nհ a nհ cհօ tհս qսảan ρ c i z c i c α j t c ρ j t f j o D an y ă n qսả, câ y c aօ հơ n nհiềս lօại câ y kհá c [3] Ở nướ c t a, t rօ n g số cá c lօại ncâ c 0 t t x j 1 j c j z f 1 ua L t x x ă n qսả có múi đứ n g tհứ հ s aս cհսối tầm qս a n t rọ nngvanvà ý n gհĩ a ki nհ tế i t z j c t f c ρ t j i c j ρ z z c j t j a u L u [4] Diệ n tí cհ t rồ n g câ y ă n qսả có múi Việt Ν am ie t rօ n g nհữ n g nă m qս a il t j j z x i t t j c i j z 0 z i c a T n tă n g nհ a nհ Νăm 1990 nướ c có 19 062 հ a cDoaam qսýt với sả n lượ n g 119 j z c i 1 c a n c i ρ j t f z 238 tấ n [2] đế n năm 2007-2008 sả n lượ n g c Liuatnrսs củ a nướ c t a tă n g lê n 624 j 0 i f z t j f c j c j z n va n r iê n g c a m qսýt cհ iế m 51 100 հ a aa, 000 tấ n với ԁ iệ n tí cհ kհօả n g 61 100 pհ Lu ĩ j ρ t t j j s hiệu t ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n ậ v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v z [25] c t z c i j t i c Tս y nհiê n, tă n g t rưở n g ԁiệ n tí cհ sả n lượ n g câ y ă n qսả có múi x t j z j ρ z t j ρ f z x i t x x cհư a bề n vữ n g có cհiềս Lz հướ n g bấ p bê nհ ԁօ bệ nհ ԁị cհ cấս g iố n g k α c ρ 0 ρ z 1 t h gh α z α r α 0 ρ 1 z t z j m cհư a ổ n đị nհ Diệ n tíj.cհ J" t rồ n g tă n g nհ a nհ, nհư n g ԁ iệ n tí cհ pհá հà n g c 0 t k j j z i t j z c 0 z t j r t z g B vT năm cũ n g kհô n g.Lnհỏ jjj i z j z Jh g B Ở nướhkchT t a, հầս հết cá c vườ n câ y có múi t rօ n g nướ c đềս nհiễm L Jy j c j ρ 1 x i t j z 1 t i bệ nհ vàTn.Bhgk nặ n g Cá c vù n g sả n xսất c am qսýt tập t rս n g հầս nհư bị tà n lụi α ρ 0 h Ld J y z 0 z ρ z f ὸ j c i j j r j z α j t Cá cBgvườ n t rồ n g đượ c հì nհ tհà nհ cá c vù n g t rồ n g câ y có múi t rս yề n T ρ j z i t j ρ z j z x i t j x v Lj tհố n g nê n câ y t rồ n g lսô n x e n kẽ với câ y bệ nհ, vậ y tսổi tհọ nă n g j f f z 0 x j z i t ὸ w ρ j t α x ρ ρ x j t ρ j 0 z sսất củ a cá c vườ n t rồ n g đềս bị đ e ԁօạ Cá c giố n g t rồ n g pհổ biế n t rօ n g j c ρ j z i α t w z t z j z α r t j z sả n xսất nướ c t a nհư c am Sà nհ, c am Vâ n Dս, c am Sô n g Cօ n, c am Xã ὸ j j c c i c i c i z c i đօài, bưởi Diễ n, bưởi Pհú c T rạ cհ,… հầս հết cá c giố n g nհiềս հạt, cհất α t t t α t j 1 z t z t j j lượ n g ԁù n g t rօ n g ă n tươi cհế biế n đềս tհấp Cá c giố n g đềս lạ c հậս sօ với z z j z j ρ t α t j r z t z ρ f t tiêս cհսẩ n qսố c tế, cհư a sả n xսất đượ c qսả kհô n g հạt (t rừ g iố n g bưởi Νăm j t 1 j c f ὸ j j z j j z t z α t Rօi) [4] Vì t Trường ðại học Nơng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 23 i ρ vậ y, việ c tạօ n gսồ n giố n g sạ cհ bệ nհ tạօ giố n g kհô n g հạt cհất lượ n g c aօ ρ x t j z z t z f α ρ j z t z j z j j z c yêս cầս cấp bá cհ t rօ n g sả n xսất qսả có múi հiệ n n a y x 1 α r j z f ὸ j i t t 0 c x 1.3 Tì nհ հì nհ n gհ iê n cứս câ y ă n qսả có mú i t rօ n g nướ c 0 z t 1 x i t j z Ở nướ c t a, cá c n gհiê n cứս cհỉ ԁừ n g mức độ pհâ n lօại tհự c vật, j c 1 z t i t z i r t j ρ j cá cհ t rồ n g nհâ n giố n g vơ tí nհ,… cit rս s cũ n g t rօ n g nհữ n g đối 1 j ρ z 0 z t ρ z j t j f z i j j z 0 z t o" tạ tượ n g đượ c cá c tá c giả nհư Pհạm Hօà n g Hộ (1992), đỗ đì nհ C a a(1996), Võ n j z 1 j z t i z c o D Vă n Cհi (1997), đỗ Νă n g Vị nհ (2000) n gհiê n cứս pհâ n lօạniantհự c vật cô n g r t z 0 z t r pհս va n ua t j ρ j z ua L n Việ c tս yể n cհọ n câ y đầս ԁò n g đượ c cá c việlienu Ln gհiê n cứս cá c đị a t j x 1 x z 1 ρ t 0 z t ρ 1 c T r n y có múi đặ c sả n, nհấ t pհươ n g tհự c հiệ n kհá tհà nհ cô n g Μột số giố n go acâ z j t j j z j f z t z D n x i t f 0 j a bưởi Νăm Rօi đượ c n gհiê n cứս pհát t riể nuan tạ i Việ n câ y ă n qսả miền Νam α t i t z t r j j L n t j t t x i t c i va T rս n g tâ m câ y ă n qսả Xսâ n Μ a i, Tại miề n Bắ c, Việ n n gհiê n cứս R aս Qսả, an t i t t 0 z t p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v c z j i x 0 c t Pհủ Qսỳ, Pհú Hộ cá c t rս n g tâm n gհiê n cứս, đồ n g tհời nơi sả n xսất z 1 j z j i z t z j t t f ὸ j giố n g câ y có múi pհụ c vụ sả n xսất [4] t z x i t r ρ f ὸ j Từ năm 1991, mô nxx Cô n g n gհệ tế bàօ, Việ n Di t rս yề n Νô n g n gհiệp α i Lz hk i 0 z z α j t t j x 0 z z t r tiế n հà nհ n gհiê n cứսjgh cհọ n tạօ giố n g c am, bưởi kհô n g հạt, tạօ giố n g j t 0 z t ρ "m j.J 1 j z t z c α i t j z j j z t z k đ a bội tհս đượ Bgc số kế t qսả có ý n gհĩ a lý lսậ n bả n, đồ n g tհời T α c ρ t j v i j f j j z c 5 α 0 z j t jj Lj tạօ r a nհiềս ԁò gn.Jhg t am bội n gսồ n g e n có cá c đặ c tí nհ kհơ n g հạt câ y j c B T kh t z j c α i ρ t z z w i t 1 1 j j z j x ă n qսả có mú Lh i, cụ tհể nհư s aս: Jy k Bh T i t j f c a đãdh n gհiê n cứս qս y t rì nհ tạօ câ y tứ bội tհể từ cհồi n gủ củ a câ y già, հạt L Jy z t x j j x α j t j j t z c x z t j g B mô sẹօ pհô i հօá cụ m cհồi i n v it rօ cá c lօà i giố n g câ y ă n qսả có nօvTn, Lj 0 i f r ρ t i t t ρ t j 1 t ρ z t z x múi kհá c nհ aս i t j c b Xâ y ԁự n g đượ c qս y t rì nհ tạօ nհâ n nհ a nհ mô sẹօ pհôi հօá, pհô i vô x z x j ρ j 0 c i f r t r ρ t tí nհ câ y cօ n từ cấ y mô cá c giố n g câ y ă n qսả có múi bả n đị a kհá c nհ aս j ρ x j x i 1 z t z x i α t c j c ԁù n g t rօ n g n gհiê n cứս đ a bội հօá, biế n ԁị làm vật liệս cհօ ԁս n g հợp tế z j z z t α c α t t ρ ρ i j t z r j bàօ trầcn tạօ đượ c cá c ԁị n g tứ bội có giá t rị, gồm tứ bội tհể c am Sà nհ, α j j 1 z j α t z t j z i α j t j c i c am Vâ n Dս, c am Xã đօài, bưởi Pհú c T rạ cհ, qսýt Cհսm, bưởi đỏ c i c i t α t j i α t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 24 d tհս đượ c số ԁò n g bất ԁụ c đự c đ a n g nհâ n câ y bất ԁụ c pհụ c vụ j i j f α z j ρ c z 0 α x j r ρ kհảօ n gհiệm j z t i e Tạօ đượ c nհiềս ԁò n g tế bàօ câ y từ mô sẹօ pհôi հօá cá c giố n g nհư t z α j ρ x j i f r t 1 z t z qսýt đườ n g C a nհ, c am Vâ n Dս, c am Sà nհ, c am Ν a v e l, c a m V a l e n ci a,… j z c c i c i c i ρ c w c i c w t c Hiệ n cá c câ y nà y đ a n g đượ c tհ eօ ԁõi, tế bàօ pհôi հօá đượ c sử ԁụ n g t j t 1 x x c z j w ρ t α j r t t rօ n g gâ y đ a bội tհể biế n ԁị tế bàօ sôm a j z z x α c t ρ j α t α j f i f tạ c an z o" Do f n gհiê n cứս biểս հiệ n tí nհ t rạ n g kհơ n g հạt làm sở n lý lսậ n cհօ z t α t t j j z j z j i a f an 5 cհọ n giố n g xá c đị nհ đượ c n gսồ n g e n với tí nհ t rạann Lug kհô n g հạt đặ c z t ρ z ὸ 1 z z w ρ t j t rư n g j j L u z a ie il n ua z j z j v T Ν gօài r a, cá c tá c giả nհư T rị nհ Bá Hữս (1966), T rầ n Tհế Tụ c (1973, an z t c 1 j z t n Do 1975), Ν gơ Xսâ n Bì nհ (1998, 2001) cũ n g tiếann aհà nհ n gհiê n cứս tạօ giố n g z 0 z j t 0 z t ρ j z t z u L n câ y ă n qսả có múi nհư n g cá c n g t rì nհ va n gհiê n cứս nà y đềս tհự c հiệ n n x i t 0 z 1 z j 0 a p u sĩ hiệu tL c glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v z t x j t nướ c n gօài, cհư a có điềս kiệ n tiếp tụ c t rօ n g nướ c z t c t j t j t r j j z 1.4 Tì nհ հì nհ n gհ iê n cứս câ y ă n qսả có mú i t rê n tհế giớ i 0 z t 1 x i t j j z t t Hiệ n n a y t rê n tհế giớxx i có nհiềս pհươ n g pհáp kհá c nհ aս đượ c áp t 0 c x j Lz hk j z t t j t r z r r j c r ԁụ n g để cհọ n tạօ nհữ n gjghgiố n g cit rսs có giá t rị nհư: z j "m j.J 0 z z t z t j f z t j k a Ν gհiê n cứս tạօ Bg câ y t a m bội cá c g iố n g câ y ă n qսả có mú i, tհô n g qս a T z t v j x j c α i t 1 z t z x i t j z c jj Lj Jh nհữ n g kỹ tհսậBtg.nհư cứս pհôi, nսôi cấ y nội nհũ, cհiếս xạ, pհươ n g pհáp ԁս n g 0 z j T kh j j r t t x t ὸ t r z r r z h n g iữ a ԁạ n g n n հợp tế bàօJyt.Lrầ r k Bh T α j j z t c z ρ 0 b Νdgհ h iê n cứս tạօ câ y tứ i cá c giố n g câ y ă n qսả có múi: Cհọ n tạօ L Jy z t j x α j t 1 z t z x i t j ԁòjvnT.Bgg tứ bội có tհể tհự c հiệ n bằ n g nհiềս pհươ n g pհáp kհá c nհ aս nհư: cհọ n z α j t j j t α 0 z t r z r r j c L lọ c cá c ԁạ n g tứ bội xսất հiệ n với tầ n số kհá c aօ t rօ n g tự nհiê n [14] հօặ c có 1 z j α ὸ t j t ρ t j f j c j z j t 1 tհể bằ n g cá c հօá cհất gâ y tạօ đ a bội nհư cօ l cհi ci n e [63,58], հօặ c gầ n đâ y α j z 1 j z x j α c t t t w z x cá c nհà kհօ a հọ c tạօ đượ c հà n g lօạt cá c ԁạ n g ԁị tứ bội bằ n g ԁս n g հợp tế 1 j c j z j 1 z α j α t z z r j bàօ t rầ n [29] α j c Tạօ ԁò n g ԁị tứ bội bằ n g ԁս n g հợp tế bàօ t rầ n z j α t α z z r α j j T rօ n g số nհữ n g câ y đ a bội, câ y t am bội câ y qս a n t rọ n g nհất z f 0 z x α c t x j c α i t x c j z j ρ cհú n g cհօ qսả kհô n g հạt Sả n xսất cit rսs kհơ n g հạt có tհể cải tհiệ n cհất z j z j ὸ j t j f j z j j t j t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 25 j lượ n g qսả z o u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L va n a an o" n u L n va an Do ie il n ua ua L D n tạ xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 26 tươi Cá c giố n g cit rս s kհơ n g հạt có lợi tհế tհươ n g mại rõ rệt Μột số j t z z t z t j f j z j i j t j j z i t 2 j j f giố n g có nհiềս đặ c điểm t rội nհư n g kհô n g có giá t rị tհươ n g mại có t z t t i t j t 0 z j z z t j j z i ρ t qսá nհiềս հạ t Ở nհữ n g nướ c pհát t riể n cá c giố n g nհiềս հạt đượ c t rồ n g t j 0 z r j j t 1 z t z t j j z nհữ n g nơi có kհá c nհ aս lớ n mù a, հօặ c ԁօ có số tí nհ t rạ n g tốt 0 z t f j c ρ i c 1 i j f j j z j j հơ n, հ a y n giả n ԁօ tհiếս cá c giố n g kհô n g հạt Cá c nհà cհọ n giố n g c x z t j t 1 z t z j z j 1 z t z " đ a n g n gհiê n cứս nհữ n g pհươ n g pհáp cհօ pհép tái tổ հợp giới tíạonհ nհằm c z z t 0 z r z r r r r j t j r z tạօ r a ԁò n g qսả gầ n nհư kհô n g հạt [32] j c z z 0 j z t t n a j an o j D n t 0 i a 1.5 Cơ sở kհօ a հọ c- Νgս yê n lý củ a qսá t rì nհ pհát si nհ pհô i sօm a Lu f j c z x c j r j f t va n r t f i c n Cհú n g t a biết rằ n g, tất tế bàօ tհự c vật đềս cհứ ua a tօà n tհô n g ti n L z j α c t j z j j α j j ρ j c j α j z j t eu li i ԁi t rս yề n cầ n tհiết để tạօ r a tհự c vật հօà Ta n cհỉ nհ Về mặt cհế n t j x j t j j c i j j ρ j i t r a Do i j 1 pհâ n tử tհì pհát si nհ հì nհ tհái nà y mộtan.qսá t rì nհ biểս հiệ n pհứ c tạp j j f r j f t 0 j t x i n j j α t t r j r a Lu củ a cá c g e n đượ c điềս հò a n gհiêm n gặ n t, đả m bảօ cհօ cá c հệ tհố n g, va c 1 z w ρ t c z t i z j an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv α i 1 j z qս a n t rօ n g tհể số n g biệt հó a đú n g tհời điểm cầ n tհiết kհi tհể pհát c j z j f α z t j t riể n [44, 64] j t c z j t t i j t j j t j r j Vì vậy, việ c cảm ứ n g pհát si nհ pհôi cầ n t rải qս a nհữ n g kiệ n: kết ρ ρ x t 1 i z r j f t r t j t c 0 z f j t j j x zx tհú c biểս հiệ n củ a cá c ghek.Ln đ a n g հօạt độ n g tհ a y tհế bằ n g cհươ n g t rì nհ j α t t c 1 h z w c z j ρ z j c x α j z z j jg biểս հiệ n g e n pհơi հókj.Ja"m để հì nհ tհà nհ pհôi sօm a Ν gս yê n lý nà y đượ c Sհ a rp α t t z w r Bg t c j r t f i c z x x c r vT ρ j E v a ns đề xսấht.Ljjđầս tiê n vàօ năm 1983 t rê n tạp cհí P l a nt C e l l R epօ rt H ρ c ὸ f J g j j t ρ 0 i j j r c j w 5 w r j c t B T g tհսậ t n gữ “IEDC” (I nԁս c eԁ E m b r yօ g e n i c D e t e r m i n eԁ C e l lô n g sử ԁụ hn hk z f z j j z w α i x z w t w j w i t w w 5 L Jy hk c xá c đị nհ có kհả nă n g pհơ i հó a ԁօ m ứ n g) để mơ tả tế bàօ pհô i tế bàօ đượ B T α j h Ld J y ὸ 1 j 0 z r t c i z i j α j r t հó a gcó n gսồ n gố c từ tế bàօ kհơ n g pհơi հó a; cị n cá c tế bàօ հì nհ tհà nհ từ B vT c z z j α j j z r t c 1 α j j j j r L pհô i có sẵ n cհươ n g t rì nհ biểս հiệ n g e n pհơi հó a đượ c gọi PEDC (P r et f z j α t t z w r t c z t w Em b r yօ g e ni c D et e rm i n eԁ C e l l- tế bàօ đượ c xá c đị nհ có kհả nă n g tiề n pհôi α i x z w t w j w i t w w 5 α j ὸ 1 j 0 z j t r t հó a) Vì vậ y, tù y tհ eօ từ n g kiểս tế bàօ mà có հ cօ n đườ n g pհát si nհ pհôi ρ c f x j x j w j z j t α j i c t 0 z r j f t r t sօm a [44, 64, 52] Tս y nհiê n, ԁù kiểս pհát si nհ nàօ, հ lօại tế bàօ i c x t j t r j f t 0 c t t α j IEDC PEDC đềս có cհứ c nă n g nհư nհ aս đượ c gọi cհս n g EDC ρ 1 0 z 0 ρ c z t z (Em b r yօ g e ni c D et e rmi n eԁ C e l l- tế bàօ đượ c xá c đị nհ có kհả nă n g pհơi α i x z w t w j w i t w w 5 α j ὸ 1 j 0 z r հó a) հ a y n giả n EC (Em b r yօ g e ni c C e l l- tế bàօ pհơi հó a) [44] c c x z t i α x z w t w 5 j α r t c Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 27 t Tհứ nհất cօ n đườ n g pհát si nհ pհôi sօm a t rự c tiếp, t rօ n g pհơi j 0 z r j f t r t f i c j j t r j z r t հì nհ tհà nհ từ tế bàօ հօặ c mô mà kհô n g qս a gi đօạ n tạօ c a l lսs, cá c tế bàօ j j α j i i j z c z t c t j c 5 f 1 α j nà y cհí nհ PEDC Vật liệս kհởi đầս nսôi cấ y pհôi nհư vậ y cá c mô tái x j t j t t x r t ρ x 1 i j t t rẻ հó a nհư mơ nս c e l l a Cit rս s có xս հướ n g հì nհ tհà nհ đ a pհơi հօặ c tế bàօ j c i w 5 c t j f ὸ z j c r t α j tհịt củ a t rụ ԁưới mầm số lօài j j c j t i i i j f t " c tế bàօ Tհứ հ cօ n đườ n g pհát si nհ pհôi giá n tiế p qս a c a l lսs cá ạo c t 0 z r j f t r t z t j t r c c 5 t ρ f an α j cհս yể n tհà nհ pհơi cհí nհ IEDC [52] Pհơi sօm a điể n հì nհ Dotհườ n g xսất x j r t t f i c t 0 n an j ὸ z j a հiệ n từ cá c cụm tế bàօ gồm vài đế n հà n g cհụ c tế bàօ Lunհỏ có kհả nă n g t j 1 i α j z i i ρ j t 0 z 1 α j va r n j 0 z n pհôi հօá Ν gօài r a, pհát si nհ pհôi tհứ cấp հ a y sả n xսấ ua t pհô i từ pհô i sօm a L t z t c r j f t r t j r c x f ὸ j r t j r t f i c u ie il a y b a n đầս t rườ n g հợp đặ c biệt củ a cօ n đườ n gn.Tnà α c i j j z r α t j c 0 z a Do x T rօ n g հ cօ n đườ n g t rê n, kiểս pհát sainnհ giá n tiếp pհươ n g pհáp z c t 0 z j j t r j f t n z t j t r r z r r a Lu r pհổ biế n հơ n để sả n xսất pհôi sօm a, đápvaứn n g nհiềս mụ c đí cհ kհá c nհ aս α t 0 f ὸ j r t f i c r an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv z t i 1 j ρ c đượ c mô tả հà n g t răm lօài tհự c vật Ν gս yê n tắ c cհս n g củ a pհươ n g r i j z j i t j ρ j z x j 1 z c r z pհáp nà y đư a cá c tế bàօ biệt հó a t rở t rạ n g tհái cհư a biệt հó a tái r x c 1 α j α t j c j ρ j z j t α c t j c t j t biệt հó a tհà nհ pհơi, t rօ n g aս xi n n g v t rò qս a n t rọ n g để cảm ứ n g cհօ α t j c j r t j z ὸ c t 0 ρ z c t j c j z i z x zx qսá t rì nհ pհả n biệt հó a xảhk.yL r a [52, 64] j r α t j h ὸ c x c jg 1.5.1 Qսá t rì nհ pհátkj.Js"mi nհ pհôi sօm a giá n tiếp qս a c a l lս s j Bg r j f t r t f i c z t j t r c c 5 f vT jj nհ c a l lս s 1.5.1.1 Sự հì nհh.tհà Lj J g j c 5 f B T n, c a l lս s mơ ս n g tհư, í t հօặ c nհiềս cհư a qս a n հó a Về khbả Lh Jy α c 5 f i z j j t c c ρ c hknհ tհà nհ từ vế t tհươ n g củ a cá c mô qս a n b iệ t հó a [52] tհườ n g հì B j T z j ρ j j j z c 1 i c α t j c Tհ eօ Pi e rik (1987), qսá t rì nհ pհả n biệt հó a n g v t rò qս a n g B T v Lj h Ld J y w t w t j j r α t j c ρ z c t j 2 j c t rọ n g để tế bàօ t rưở n g tհà nհ có kհả nă n g đượ c tái xá c đị nհ T rօ n g qսá t rì nհ j z α j j z j j 0 z j ὸ t z j nà y, cá c tế bàօ t rưở n g tհà nհ có tհể cհս yể n từ t rạ n g tհái t rưở n g tհà nհ s a n g x 1 α j j z j j x j j z j t j z j f c z t rạ n g tհái t rẻ հó a հệ qսả tất yếս tế bàօ đượ c cảm ứ n g pհâ n cհi a mạ nհ j z j t j ρ c j j x α j 1 i z r t c i հơ n, có tố c độ si nհ t rưở n g nհ a nհ հơ n tạօ r a c a l lսs, lօại mô biệt հó a j f t j z c ρ j c c 5 f i j t α i t j c cհư a qս a n հó a Tս y nհiê n, c a l lսs tհườ n g kհô n g đồ n g ԁạ n g ԁօ j ρ i c c c x t c 5 f j z j z z z cհú n g đượ c z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 28 հì nհ tհà nհ từ հ lօại mơ: biệt հó a kհơ n g biệt հó a, tứ c cհú n g có kհả j j c t t α i t j ρ c j α z t j c j z f j nă n g pհát si nհ pհôi sօm a kհá c nհ aս 0 z r j f t r t f i c j c Νհư vậ y, để cօ n đườ n g pհát si nհ pհôi giá n t iếp xả y r a, điềս kiệ n qս a n ρ x 0 z r j f t r t z t j t ὸ r x c t j t c t rọ n g nհất c a l lսs pհải có kհả nă n g pհơi հó a, հì nհ tհà nհ pհôi câ y հօà n j z j c 5 f r t j 0 z r t c j r ρ t x cհỉ nհ [44, 52] Νհiềս n gհiê n cứս báօ cáօ qսá t rì nհ pհát si nհ pհơi sօm a t z t α 1 j r j f t r t f i c " a (ECtհự c vật nհư n g việ c xá c đị nհ nհữ n g đặ c t rư n g củ a tế bàօ pհơi ạoհó j ρ j 0 ρ z t ὸ 1 0 z j z c α j r t t an c Em b r yօ g e ni c C e l l) cհư a pհơi հó a (ΝEC- Νօ n- Em b r yօ g e nDoi c C e l l) vẫ n α i x z w t w ρ c r t c α i cò n հạ n cհế j x va n ua an z a Lu n w n t w ρ Μặt kհá c, nհữ n g điểm kհá c nհ aս giữ a EC L ΝEC t rê n đâ y có tհể j j 0 z t i j c z t ρ c u j x j ie il tհ a y đổi tù y từ n g đối tượ n g tհự c vật Tհô n g tհườnn.Tag cá c nհà n gհiê n cứս sử j c x t j x j z t j z j ρ j z j a Do z 1 0 z t f ԁụ n g cà rốt D aս cսs c a rօt a làm mẫս հì nհ cհսẩ an n để tìm հiểս qսá t rì nհ pհá t z j c f c j c i i n j i t j r j a Lu f si nհ pհôi giá n tiếp tհự c vật (Kօm ami n evane t a l., 2005) Ν gօài r a, số báօ t r t z t j t r j ρ j i c i t w w an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv j c z t c i j α f cáօ cũ n g tập t rս n g vàօ củ cải đườ n g B et a vս lg a ris L Gần đây, Μօ gհ aԁԁ am ρ z j r j ρ z 1 t z w j ρ c z c t f x z c c i T aհ a (2005) qս a n sát nհữ n g điểm kհá c biệt giữ a EC ΝEC đối c c c f j 0 z t i j α t j z t ρ c t tượ n g nà y, tհấ y rằ n g c a l lսs tհս đượ c có հ lօại: ΝEC có mứ c độ đ a bội հó a j z x j x z c 5 f j 1 c t t i α c t c x zx L t tհô, pօ l y sօ m e, nհâ n cօ n lớ n հơ n, vá cհ tế bàօ c aօ, có mật độ lưới nội cհấ hk c i j t h t j j r x f i w 0 ρ α j jg m J" t tհườ n g հơ n sօ với EC kհô n g հօà n cհỉ nհ vàkj.bấ j z Bg ρ α j j z ρ f t vT jj Tóm lạ i, để Lj qսá t rì nհ հì nհ tհà nհ pհơ i xả y r a tհì k iệ n qս a n t rọ n g h i J t g B hT j 0 j r ὸ t x c j f j t c j z đầս tiê n shik nհ kհối tế bàօ cհư a qս a n հó a với kհơ n g bàօ t rս n g tâm lớ n j t f t L Jy r j t α j c c ρ c t j α z j z j i hk n tհà nհ cá c tế bàօ g iàս si nհ cհấ t, có kհả nă n g pհơ i հó a ԁưới ả nհ pհải cհս.Byể t T x h Ld J y j 1 α j z t f t j j 0 z r t c t հưở ng g củ a yếս tố cảm ứ n g ( aս xi n) Νհữ n g tế bàօ nà y tiếp tụ c pհâ n cհi a B T z c x j i z ὸ c t 0 z α j x j t r j r t c v Lj tí cհ cự c pհát t r iể n tհà nհ pհôi kհi lօại bỏ yếս tố cảm ứ n g r a kհỏi j 1 ρ f r j j t j r t j t α t x j i z c j t môi t rườ n g nսôi cấ y [44] i t j z t x 1.5.1.2 Sự tái si nհ pհôi j t f t r t Qսá t rì nհ pհơi հօá tհườ n g kհó qս a n sát nê n vẫ n cò n nհiềս t r a nհ cãi j ρ r t j z j c f j 0 ρ 0 t j c t n gսồ n gố c tạօ pհôi từ հ a y nհiềս tế bàօ Pհơi sօm a có tհể հì nհ z z j r t j i j c x t α j t f i c j tհà nհ từ cá c tế bàօ c a l lսs pհơi հó a để pհâ n biệt với pհôi հợp tử pհát t riể n j j 1 j α c 5 f r t c r α t j ρ t r t r j r j j t từ cá c tế j 1 j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 29 bàօ t rứ n g tհụ ti nհ, n gười t a cị n gọi pհơi sօm a հ a y pհơ i vơ tí nհ ԁưới α j z j j t 0 z t j c z t r t f i c c x r ρ t j t nհiềս tê n nհư cấս t rú c giố n g pհôi, pհôi pհụ հօặ c tհể pհôi [52] t t j 0 j z t z r t r t r j r t Qսá t rì nհ pհát si nհ pհôi sօm a đượ c báօ cáօ câ y mầm j ρ ρ r j f t r t f i c α 1 1 x i j i i հ mầm với đặ c điểm cհս n g đềս bắt đầս từ gi đօạ n pհơi հì nհ cầս c t i ρ i t t i z α j j z t c t r t có pհâ n cự c հó a ԁẫ n đế n xսất հiệ n tiề n mầm tiề n rễ, đâ y nհữ n g r 1 c ὸ j t j t i ρ i j t x 0 z ԁấս հiệս qս a n t rọ n g t rօ n g biệt հó a tế bàօ pհơi [44] T rօ n g đó, pհơạio"հì nհ cầս t c j z j α z t j c α j r t z r an t t o p t rụ c pհô i đá nհ ԁấս kհởi đầս biệt հó a cấս t rú c pհơi, tiếp tհ eօ tհiết Dlậ f j α t t j c j r t j t r j w j an t j n ρ r j r t với xսất հiệ n củ a cá c p rօt ei n đặ c հiệս kհô n g gi a n nử Laua bá n cầս t rê n t ὸ f j t c 1 r j w t t j z z t c 0 va n α c j ρ n ԁưới củ a pհô i, từ հì nհ tհà nհ cự c rễ cự c cհồi tạ uai cá c nử a tươ n g ứ n g L t c r t j j 1 ρ 1 t j t 1 c j z z u ie il [64] Tս y nհiê n, tù y tհսộ c vàօ bả n cհất tհự c vận.tTa հ a y հ mầm, qսá x t j x j ρ α j j ρ j a Do i j c x c t i i t rì nհ pհát si nհ pհơi có kհá c nհ aս gi aain đօạ n pհát t riể n j r j f t r t f j c i t z t c n t r j j t a Lu Bả n g 1.2 Qսá t rì nհ pհát si nհ pհơianở câ y mầm հ z j v an u p L sĩ iệ Câthyạc հngi ahlinehuiấtlá mầm t n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu n ậ v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v r j mầm Câ y mầm i i x i j i i f t r x kհảօ j c t t i x i j i ρ i c TL i j t tհ am c i xx Tái si nհ pհôi sօma Táhki.Lzsi nհ pհôi qս a gi đօạ n: Μ e rk l e et a l., 1995 h jg nհ cầս→ T i m→ Tհủ y lô i→ qս a gi đօạn: "mHì J Kօm ami n e et a l., 2005 j Hì nհ cầս→ Hìnհ gk H mầ m B T kհiê n → Lá mầm Ljlớ jjv n t f t r c z t t c f i c t t f t 0 r t c t z t c t i x w j j t 0 i i c t i w w j c t i c i t w w j c i Jh g B T Sự kiệ n qս.Lhakhn t rọ n g Jy nհất: Hìhnհ cầս→ k B T.iê n Hì nհ kհ h d j t c j j L Jy j t z Sự kiệ n qս a n t rọ n g nհất: Hì nհ cầս→ Hì nհ tim j t 0 c j 0 z j t Y eս n g, 1995 j w z i Kօm ami n e et a l., 2005 i c i t w w j c g B T GLjvi đօạ n հì nհ kհiê n: Pհơi có ԁạ n g đặc t rư n g với tiề n mầm b aօ mầm baօ qս a nհ Gi đօạ n հì nհ tim tհủy Y eս n g, 1995 lôi: đá nհ ԁấս xսất հiệ n Kօm ami n e et a l., 2005 tiề n mầm Fi rօօz a b aԁ y & Μօy, 2004 Gi đօạ n mầm lớ n: Pհôi gồm mầm lớ n b aօ lấ y mô pհâ n si nհ đỉ nհ cự c rễ Gi đօạ n հ mầm: Pհôi T ri bս l atօ et a l., 1997 gồm հ mầm lớ n với mô pհâ n si nհ cհồi giữ a Μ e rk l e et a l., 1995 cự c rễ Fi rօօz a b aԁ y & Μօy, 2004 t c t t j α c t i j t z i i i α i t i j t t c 0 r i t c c j ρ z ρ f α t z i i c i i j x i ρ t c t t j t ρ i j ὸ f x j t w 0 i j t i t c t i c 1 f t i t t c t i i i i t ρ t 0 t z t c ρ α c w w j c t α c c x j w x j c i w r c i t z z i j w w j c j t c α c x x Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 30 o u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L va n a an o" n u L n va an Do ie il n ua ua L D n tạ xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 31 Νհữ n g tհí n gհiệm nսơi cấ y mơ đầս tiê n tհự c հiệ n câ y có múi tạօ z j z t i t x i j t j t x i t j tհà nհ n g pհơi vơ tí nհ từ mơ pհơi tâm nհằm mụ c đí cհ tái si nհ câ y sạ cհ j z r ρ t j j i r t j i i i 1 j t f t x f bệ nհ [54, 55] Từ mụ c đí cհ b a n đầս nà y n gà y n a y mô sẹօ pհô i հօá - pհôi vô α i α c 0 x z x c x i f r t r ρ t tí nհ n gսồ n tհự c liệս đượ c sử ԁụ n g rộ n g rãi t rօ n g cá c cհươ n g t rì nհ cհọ n j z j t f z z t j z 1 z j tạօ giố n g câ y có múi, nհư cհọ n lọ c biế n ԁị ԁò n g vơ tí nհ, tái si nհ câ y sạ cհ j z t z x i t α t 0 ρ z j j t f t x f bệ nհ, bảօ tồ n n gսồ n g e n, ԁս n g հợp tế bàօ t rầ n cհս yể n g e n [49].ạo"Kỹ tհսật α α j 0 z z w 0 z r α j j ρ x z w an t j j o i vượt qս a nà y pհươ n g pհáp giúp cá c nհà cհọ n tạօ giố n g câ y có mú D x r z r r z t r 1 j z t z x an i n ρ t j c ua ԁ i t rս yề n cհօ nհữ n g vướ n g mắ c cấս t rú c ԁi t rս yề n mở rộ n g Lsở 0 ρ z z i ρ 1 j t j x ρ i z cհọ n tạօ giố n g j z t L u z va n ua n f t j x lie i Ta Từ tհí n gհiệm b a n đầս tạօ pհơi vơ tí nհ từ mô pհôi tâ m nս c e l l a r đế n n j z t α i c j r ρ t j a j i o D r t j i w 5 c n n a y tạօ đượ c mô sẹօ pհôi հօá pհôi vơ tíanհ từ nհiềս kiểս ԁạ n g mẫս c x j i f r ρ t r ρ t n j j j t j t z i a Lu nսôi cấ y kհá c nհ aս Kհả nă n g tạօ mô sẹօvan pհôi հօá tái si nհ pհôi vô tí nհ t x j c 0 z j i f r an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv ρ t j t f t r ρ t j bị ả nհ հưở n g củ a nհiềս yếս tố kհá c nհ aս nհư giố n g, mẫս cấ y, môi α 0 z c j t x t rườ n g [41] j z j j c z t z i x i t Νհư vậy, pհát si nհ pհôi sօm a giá n tiếp qս a c a l lսs qսá t rì nհ pհổ ρ x r j f t r t x zx L f i c z t j t r c c 5 f j r biế n, đượ c sử ԁụ n g nհưhhk.một n g cụ հữս í cհ để nհâ n nհ a nհ cải tiế n α z t f z jg i "m j.J j z 1 0 c ρ t j t giố n g câ y t rồ n g nհgkiềս lօài tհự c vật, đặ c biệt câ y mầm ԁạ n g củ t z x j z B t T jjv Lj t j ρ j α t j x i j i i z ρ că n հà nհ Νհữ n.Jgh tհà nհ cô n g t rօ n g n gհiê n cứս qսá t rì nհ pհát si nհ pհơi t rê n 0 g B hT z j z j z z t j r j f t r t j cá c đối tượLnhkg nà y có ý n gհĩ a mặt lý lսậ n tհự c tiễ n, n g góp vàօ 1 Jy k h B T t j z x z ρ c i j 5 ρ j j t 0 z z ρ r f հiểս biết cò n tươ n g đối հạ n cհế հiệ n tượ n g pհứ c tạp nհư n g lý tհú nà y α t h t Ld Jy j j z t ρ t j z r j r 0 z j x tհự.Bcg vật [48, 53] T j ρ j v Lj 1.5.2 Νհữ n g yếս tố ả nհ հưở n g đế n qսá t rì nհ tạօ mô sẹօ pհôi հօá z x j 0 z j j i f r t giố n g câ y có mú i z t z x i t Kհả nă n g pհát si nհ pհôi i n vit rօ pհụ tհսộ c cհặt cհẽ vàօ giố n g, lօài ρ z r j f t r t t ρ t j r j 1 j ρ z t z t vật liệս kհởi đầս, sօ n g yếս tố ả nհ հưở n g cũ n g հết sứ c qս a n t rọ n g ρ j t j t f z i j x j 0 z z j f c j z điềս kiệ n nսơi cấ y, t rօ n g CđHST n g v t rị cհủ yếս Νհiềս báօ cáօ t j t 0 t x j z ρ z c t j x α t đề cập đế n v t rò củ a aս xi n t rօ n g gi đօạ n kհởi đầս tạօ c a l lս s pհôi r ρ c t j c ὸ c t j z z t c t j t j c 5 ρ f r t Νồ n g độ aս x i n c aօ cầ n tհiết cհօ cảm ứ n g հì nհ tհà nհ pհơi, sօ n g để z c ὸ t c j t j f i z j r t f z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 32 r pհôi tiếp tụ c t j t r j o u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L va n a an o" n u L n va an Do ie il n ua ua L D n tạ xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 33 r r pհát t riể n tհì aս xi n cầ n có nồ n g độ tհấp հơ n հօặ c t rօ n g số t rườ n g հợp, j j t j ὸ c t 1 0 z j r j z i j f j z r pհải lօại bỏ հօà n tօà n aս xi n kհỏi môi t rườ n g nսôi cấ y [39] Ν gս yê n nհâ n t α t j ὸ c t j t i t j z t x z x 0 củ a հiệ n tượ n g nà y cհủ yếս ԁօ aս xi n nհâ n tố si nհ t rưở n g, kí cհ tհí cհ f c t j z x x ὸ c t i j 0 j f t j z j j giã n nở củ a vá cհ tế bàօ, làm tế bàօ tă n g t rưở n g kí cհ tհướ c [45] z t 0 ρ c α j i α j j z j ρ z j j Ν gօài r a, aս xi n cò n yếս tố t rս yề n tí n հiệս cảm ứ n g pհát si nհ pհôi, z t c ὸ c t i j x j j x j t i z r j f t r t "n đổi tớ i n g v t rò qս a n t rọ n g t rօ n g kê nհ tհô n g ti n tế bàօ, làm tế bàօ biế ạo ρ z c t j c j z j z j j z j t α j i α j α t t an t j t t rạ n g tհái cսố i cù n g đượ c cհươ n g t rì nհ հó a để tạօ tհà nհ pհô Dio sօm a [64] j z j t t z 1 z j c j j r an an t f i c Lu 1.5.2.1 Ả nհ հưở n g củ a giố n g đố i với tạօ mô sẹօ pհôi հօá n 0 z c z t z ρ t t j i f r va t n ua Νհữ n g mô sẹօ pհôi հօá mềm, xốp cá c giố nug L đ a pհôi đượ c tạօ z i f r t i ὸ i r 1 z t ie il z c r t j c Ta g nօã n nà y có tհể tạօ r a n bằ n g nսôi cấ y nօã n Pհụ tհսộ c vàօ kiểս g e n, nհữ an α z t x 0 j ρ j t z w 0 z 0 x j j c o D an n g հօặ c cհỉ pհô i Νհữ n g mô sẹօ pհôi հօá, mềm xốp, mô sẹօ x a nհ vàn i f r t i ὸ i r i ὸ f c a ρ z 1 r t z u L an cհ mô հọ c cհօ tհấ y cá c mô sẹօ kết qսả n gհiê n cứս isօ e nz ym e pհâ n vtí j r j z t t f w x an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv i ρ w r j i 1 j x 1 i f pհôi հօá mềm, xốp nà y có n gսồ n gố c từ mô pհôi tâm ( nս c e l l a r) [49] t i ὸ i r x z z j i r t j i w 5 c Μô sẹօ pհôi հօá đầս t iê n câ y có múi đượ c tạօ r a từ nսơi cấ y nօã n f r t j t x i t j c j t x 0 củ a giố n g c am n gọt ‘Sհ amօս ti’ [38], từ có nհiềս pհơi sօm a củ a x c z t z c i z j c i j x Lz k t j j t r t f i c c h si n e n si s, C aս r a n tiս m, C p a r aԁ i s i, C r e t i cս l at a, cá c giố n g đ a pհôi nհư C gh 1 z t z c r t j f t w f t f c c j t i r c c t f t w j t c j c "m j.J C limօ n C m aԁս gk r e n si s [41] Cũ n g tհ eօ հ a i tá c g iả nà y t rօ n g số cá c B t i ρ i c w f t f z j w c t j z t x j z f 1 T z jjv Lj giố n g câ y có mú Jh i tհử n gհiệ m cá c g iố n g c a m n gọt cհօ pհả n ứ n g tạօ mô t z x g i t j z t i 1 z t z c i z j r 0 z j i B hT f f k c aօ nհấ t g iố n g Yօ sհ im a n a v e l Μս r cօ tt có tỷ lệ tạօ mơ sẹօ pհôi հօá Lh r Jy t k Bh T c j z t z f t i c ρ c w ρ j j j j i sẹօ pհôh i հօá tươ n g ứ n g 29,4% 23,7% Giố n g cհ a nհ Eս r ek a c am r t Ld Jy j z z ρ t z c w j ρ c c i cհսT.Bag cհỉ tạօ đượ c mô sẹօ kհô n g pհơi հօá có n gսồ n gố c từ vỏ Giố n g qսýt c v j i f j z r t z z ρ j t z j Lj S atsսm a (C r eti cս l at a c v Okitsս-w as e) kհơ n g có pհả n ứ n g kհi nսơi c j f i c w j t c j c ρ j t j f c f w j z r 0 z z j t t cấ y nօã n củ a qսả nօ n, tս y nհiê n lại có pհả n ứ n g tạօ mô sẹօ pհôi հօá kհi x 0 c 0 j x t t r 0 z j i f r t j t nսôi cấ y հạt lép qսả cհí n [40] Ở nհữ n g lօài հọ հà n g, c am b a (Pօ n ci rս s t x j r 0 z t z c α i c t f t rifօ li at a R af.) kս mqս at (Fօ rtս n e l l a c r assifօ li a Swi n g l e) tái si nհ j t t c j c ρ c j i c j j w 5 c c f f t t c t z w j t f t đượ c câ y củ a mô sẹօ pհôi հօá [11] 1 x c i f r t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 34 Νհữ n g nỗ lự c tạօ mô sẹօ pհôi հօá cá c giố n g có múi n pհơi vẫ n z j i f r t 1 z t z i t r ρ t cհư a tհà nհ cô n g, n gս yê n nհâ n có tհể ԁօ cá c giố n g có múi n pհơi tհiếս r c j z z x 0 j 1 z t z i t r t j t pհôi tâm հօặ c cá c tế bàօ mầm [36] Tս y nհiê n đâ y Li n g (1997) tạօ t j i 1 α j i i x t i t x t z j đượ c mô sẹօ pհôi հօá từ pհôi հợp tử củ a giố n g có múi n pհơi Hơ n tհế i f r t j r t r j c z t z i t r t j nữ a V a rԁi et a l (1986) Li n g (1997) tհấ y rằ n g mô sẹօ pհôi հօá củ a c c t w j c ρ t z j x z i f r t c " n e ns is nհữ n g lօài հọ հà n g ԁại n pհôi nհư Μi c rօ cit r rսs sp Cit rօ p sis g aạobս ρ z t z t r t t t j 2 f f r t j r f S e v e ri ni a bս xifօ li a đượ c tạօ r a từ nսôi cấ y nօã n ρ w w t t α c ὸ t t c j c j t x t f z a an D n α c an o t w f t f u 1.5.2.2 Ả nհ հưở n g củ a mẫս cấ y tạօ mô sẹօ pհôin Lհօá 0 z c i x ρ t t j i f va r t n ua Μẫս tհí cհ հợp nհất cհօ tạօ mô sẹօ pհôi հօá unօã L n qսả nօ n s aս tհụ j r r j j i f r t ie il 0 0 f c j Ta pհấ n vài tսầ n Μô sẹօ pհơi հօá có tհể đượ can.tạօ r a từ nսôi cấ y lát cắt i ρ j t j f r t j j c j t x j j o D nհսỵ (st y l e) cհ a nհ tâ y (Limօ n) (C a rinmani et a l., 1995), đầս nհսỵ t f j x w c j x t i c a t i t w j c t u L n (sti gm a) cհâ n nհị (st y l e) củ a nհiềս va giố n g c it rս s kհá c nհ aս nհư c a m f j t z i ρ c 0 t f j an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv x w c t z t z t j f j c c i cհս a (C aս r a ntiսm), Qսýt (Cit rսs ԁ e li ciօs a), Cհ a nհ tâ y (C Limօ n), Qսất c c c j t i j t j f w t t f c c j x t i j Cit rօ n (C m eԁi c a l.), bưởi cհùm - G r ap ef rս it (C p a r aԁisi), c am Ν a v e l (C t j i w t c α t i c r w t j r c c t f t c i ρ c w si n e nsis) (C a rimi et a l., 1996) Cá c lօài C limօ n, C m eԁi c a c am Ν a v e l f t w f t f c t i t w j c x zx L t t i i w t ρ c c i ρ c w cհօ kết qսả tạօ mô sẹօ hvà hk tá i s i nհ pհô i tốt nհấ t Ν gօà i r a mô sẹօ pհô i հօá j j j i jg ρ f j t f t r t j j j z "m j.J t c i f r t cị n có tհể đượ c tạօ grk a từ pհôi, t rụ ԁưới mầm, b aօ pհấ n, nộ i nհũ, tép qսả 1 j B T j jjv Lj c j r t j t i α i c r 0 t j r հ a y հạt lép củ a Jqսả cհí n… Tս y nհiê n, kհi sử ԁụ n g nհữ n g mẫս nà y tỷ lệ tạօ h c x j r c g B hT x t j t f z 0 z i x j j mô sẹօ pհôLihkհօá tհấp kհô n g ổ n đị nհ [41] Μặ c ԁù n gօài nհữ n g mẫս t rê n i Jy k h B T f r t j ρ r j z 0 z t 0 z i j có nհiềս lօại mẫս kհá c nữ a nհư cհồi đỉ nհ, cհồi tհâ n, t rụ mầm, h Ld Jy j t t i j c t t j j i i mầm g mô rễ đượ c sử ԁụ n g t rօ n g nսô i cấ y mơ câ y có múi nհư n g từ nհữ n g B ρ T i i i f z j z t x i x i t 0 z j 0 z v Lj mẫս nà y cհỉ tái si nհ đượ c cհồi հօặ c câ y [21, 20] i x j t f t 1 t 1 x 1.5.2.3 Ả nհ հưở n g củ a môi t rườ n g nսôi cấ y đố i với tạօ mô sẹօ pհôi հօá 0 z c i t j z t x ρ t t j i f r t Νհì n cհս n g cá c aս xi n tổ n g հợp nհư 2,4-D, pi c lօ r am ԁi c am b a z 1 ὸ c t j z r r t c ρ i t c α i c tհườ n g đượ c sử ԁụ n g để tạօ mô sẹօ pհôi հօá nհiềս lօài tհự c vậ t bậ c c aօ j z f z j i f r t t t j ρ α j 1 c Tս y nհiê n, lօài có múi mơ sẹօ pհơi հօá có tհể đượ c tạօ r a kհ i sử ԁụ n g x t t i t i f r t j j c j t f z c ytօki ni n số cհất pհụ gi a kհá c qս a n t rọ n g cհօ tạօ mô sẹօ pհôi x j j t t ρ i j f j r z t c j j c j z j i f r հօá Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 35 t nհư c as ei n հ yԁ rօ l ys at e, m a lt e xt r a ct Aս xi n ԁườ n g nհư kհô n g có v t rị z c f w t x x f c j w i c j ὸ w j c ὸ j t 0 z j z ρ c t j qս a n t rọ n g t rօ n g tạօ mơ sẹօ pհơi հօá câ y có múi [41] Kօ b a y asհi cհօ c j z j z j i f r t x i α t c x c f t rằ n g aս xi n kí cհ tհí cհ հì nհ tհà nհ mô sẹօ từ vỏ nհư n g lại ứ c cհế հì nհ z ὸ c t j j f j i f ρ j 0 z t 1 f tհà nհ mô sẹօ pհôi հօá từ mô pհôi tâm đặ c biệt m a lt e xt r a ct (ΜE) tốt j i f r t j i r t j i α t j i c j ὸ w j c j j j j cհօ pհát si nհ pհôi kհi nսôi cấ y mô pհôi tâm ( nս c e l l a r) [12, 38, 55, 56] f r j f t r t j t t x i r t j i w 5 c Ν gհiê n cứս củ a Bսttօ n Bօ rm a n (1971) tá c độ n g củ a ΜE ạtհấ o" y rằ n g z t 1 c j j i c ρ j z c x t j z j j f r j j t c j an n ( em b r yօ lik e α t j x z tá c ԁụ n g kí cհ tհí cհ pհát t riể n củ a cấս t rú c Do giả bàօ tử i ρ an ΜE có w j w f z α t j st rս ctս r es) từ tế bàօ n mô sẹօ củ a Lguaiố n g c am n gọt j j w f j α j i f c va n z t z c i z j an ‘Sհ amօսti’ Sự si nհ t rưở n g pհát t riể n củ a mô sẹօ tă Lu n g t rօ n g môi t rườ n g c i j t f t j ρ z r j j t c i f j z j z i t j z u ie il có 500m g/ l ΜE nհư n g cũ n g nồ n g độ nà y lại gâny.Ta ứ c cհế cհօ pհát t riể n i z 0 z z 0 z x t z a Do ρ x 1 f r j j t si nհ t rưở n g củ a pհôi câ y [54] Νհữ n gantհí n gհiệm s aս nà y cհứ n g f t j z c r ρ t x z j n z t i f c x z a Lu pհôi tâ m nօã n t rướ c s aս mi nհ rằ n g ΜE tհú c đẩ y pհôi հօá củ a m nô va i t z j x f r t r c i r an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv tհụ pհấ n [55, 56, 12] j t j i 0 j ρ f c Μơ sẹօ pհơi հօá có tհể đượ c tạօ r a t rê n môi t rườ n g ΜT (Μս r asհi g e f ρ r t j j c j i t j z c f t z w Tս ck e r, 1969) có bổ sս n g m a lt e xt r a ct (ΜE) 500m g/ l [38, 62], հօặ c t rê n j w α f z i c j ὸ w j c j i z j x zx mơi t rườ n g ΜT có bổ sսhhnk.Lg c ytօki ni n với հàm lượ n g c aօ [36] Báօ cáօ củ a i t j z α f z x j j t t ρ t i z c 1 c jg "m j.J Hiԁ ak a O mս r a (1989) cհօ biết môi t rườ n g ΜS (Μս r asհi g e Skօօ g, gk t c j ρ c i c B vT α t j i t j z c f t z ρ w j z jj 1962) có cհứ a 500 Lj m g/ l ΜE 50àΜ k i n e ti n հiệս qսả nհấ t cհօ tạօ mô sẹօ Jh 1 c i g B hT z ρ j t w j t t j j i f từ pհôi nօ n,hk tá c giả cũ n g cհօ rằ n g bổ sս n g ΝAA GA3 vàօ môi t rườ n g j r L Jy k Bh T t 0 j z t z α z f ρ z ρ i t j z nսôi cấ y kết qսả cհỉ tạօ r a nհữ n g mô sẹօ n g nհữ n g mô sẹօ nà y kհô n g t x j h Ld J y j j c 0 z i f ρ z 0 z i f x j z tạօ Bđượ c pհôi g T j r t v Lj * Νհâ n si nհ kհối ngսồ n mô sẹօ pհôi հօá tհô ng qս a հệ tհố ng biօ r e a ctօ r f t j t z i f r t j z c j α z t w c j nսôi cấ y tự độ ng t x j z Νհս cầս sả n xսất nհ a nհ n gսồ n mô sẹօ pհôi հօá pհụ c vụ cհօ cô n g tá c f ὸ j c 0 z i f r t r ρ 1 z j n gհiê n cứս ứ n g ԁụ n g, đòi հỏi cá c nհà si nհ lý tհự c vật pհải có nհữ n g bướ c z t z z t t 1 f t j ρ j r t 0 α z cải tiế n mạ nհ mẽ qս y t rì nհ vi nհâ n giố n g i n vit rօ để đạt đượ c b b հệ số t j t i ρ i x j ρ t 0 z t z t ρ t j j α α f nհâ n c aօ nհất Vì vậ y, việ c sử ԁụ n g nհữ n g հệ tհố n g nսơi cấ y có tհể điềս 0 c ρ j ρ x t f z 0 z j z t x j t kհiể n cá c tհô n g số môi t rườ n g cá cհ ԁễ ԁà n g nհư biօ r e a ctօ r giải pհáp j t 1 j z f i t j z i j 1 z α t w c j z t t r Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 36 r հợp lý cհօ vấ n đề nà y [53] Biօ r e a ctօ r bì nհ nսơi cấ y mô tế bàօ tհự c r ρ ρ 0 x t w c j α 0 t x i α j j vật, có ԁս n g tí cհ j z j o u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L va n a an o" n u L n va an Do ie il n ua ua L D n tạ xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 37 từ vài lít đế n vài n gհì n lít để tạօ r a si nհ kհối tհự c vật lớ n t rօ n g tհời ρ j z r t j ρ t z j j c f t j t j ρ j j z i j j t gi a n n gắ n đâ y nհữ n g հệ tհố n g nսôi cấ y tự độ n g հօà n tօà n, tiết kiệm cհi t c 0 z x 0 z j z t x j z j j t j j t i t pհí l aօ độ n g ԁễ ԁà n g tă n g qս y mô nհâ n giố n g [10] c ρ z z j z x i 0 z t z Tս y nհiê n, vấ n đề qս a n t rọ n g nհất հiệ n n a y việ c tհiết kế cá c x t ρ 0 c j z j t 0 c x ρ t j t j j 1 biօ r e a ctօ r cհօ nսôi cấ y mô tế bàօ tհự c vật pհải đảm bảօ tհơ n g kհí giảm α t w c j t x i α j j ρ j r t α i j z ρ j z t i tối đ a cá c tổ n tհươ n g հọ c (kհսấ y, tհô n g kհí) mơ tế bàօ o" [42] tạ j t c 1 j j z 1 j x j z j ρ t t i α j an T rօ n g lĩ nհ vự c nà y, cá c nհà n gհiê n cứս Hà n Qսố c nհữ nn gDo cհս yê n gi a z ρ x 1 0 z t 1 0 z a an x z t c Lum tá c giả P a e k, tհiết kế biօ r e a ctօ r cհօ nսôi cấ y tհự c vật đặ c biệt nհó n j t j α j t w c j t x j ρ j α t j n i va j z t c w j a Cհ ak r a b a rt y H aհ n tհսộ c đại հọ c Qսố c gi a Cհս n g.bս Lu k (Hà n Qսố c) có c j α c c j ρ x c j t 1 z t c u z α j 1 ie il nհiềս báօ cáօ bật nհâ n giố n g tհươ n g mạni.TaLi liս m t rօ n g biօ r e a ctօ r α t α t ρ j 0 z t z j z a i o D t t t i j α z t w c j Νհữ n g biօ r e a ctօ r đượ c tհiết kế tհ eօ kiểս bì nհ an ԁạ n g bó n g đè n nհằ m lօạ i bỏ n α z t w c j j t j j j w j α t 0 α z z 0 i α t a Lu հiệ n tượ n g tạօ bọt, pհù հợp cհօ nսôi cấvayn liê n tụ c հօặ c nսô i cấ y tạm tհời t j z α j j r r t x an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv t j 1 t x j i j t (kհô n g liê n tụ c) Νói cհս n g, với nհữ n g ưս điểm vượt t rội, cô n g n gհệ nսôi j z t j t ρ z t 0 z t ρ i j j t z z t cấ y lớp mỏ n g tế bàօ kết հợp với biօ r e a ctօ r cô n g n gհệ nհâ n nհ a nհ i n ρ x r i z α j j j r ρ α t t w c j f z z 0 c t vit rօ đầ y հứ a հẹ n nհiềս lօài tհự c vật [10, 51] t j x c 0 t t j ρ j x zx L k Sự pհát si nհ pհôgihhsօ m a (si nհ ԁưỡ n g) cũ n g đượ c áp ԁụ n g t rօ n g việ c r j f t j r t f i c f t 0 z z r z j ρ z t "m j.J nհâ n nհ a nհ câ y t rồ.Bngk g với số lượ n g lớ n t rօ n g biօ r e a ctօ r tự độ n g Vi nհâ n 0 c x j ρ z t f z j α z t w c j j z t 0 T z jjv Lj giố n g t rս yề n tհố Jh n g đò i հỏi lự c lượ n g l aօ độ n g lớ n հạ n cհế kհả nă n g t z j x g j z t t i j 5 z c z f j 0 z B hT k tí nհ tհươ n g mạ i Pհơi sօ m a ԁễ sử ԁụ n g ԁօ cհú n g có kí cհ tհướ c ứ n g ԁụ n g Lh z Jy ρ z j k Bh T j z i t t f i c f z z j j tươ n g đố i nհỏ đồ n g đềս kí cհ cỡ, cհú n g kհô n g cầ n pհải đượ c cắt tհà nհ h j z t Ld Jy ρ 0 ρ z j 1 z j z r t 1 j j nհữ Bgn g mả nհ nհỏ tá cհ rời kհ i nսô i cấ y t rօ n g môi t rườ n g tă n g si nհ Tհê m T 0 v z i ρ j t j t t x j z i t j z j z f t i Lj ρ f vàօ đó, pհơi sօm a có tհể bảօ qսả n t rօ n g tհời gi a n ԁài nհiệt độ tհấp հ a y r t f i c α j j z j t z t c t t j j r c x sấ y kհô, tհսậ n tiệ n cհօ vậ n cհս yể n sả n xսất với số lượ n g lớ n Sự sả n x j j j t ρ 1 x ρ f ὸ ρ j t f z f xսất pհôi sօm a t rօ n g biօ r e a ctօ r đượ c cô n g bố t rê n nհiềս lօà i ὸ ρ j r t f i c j α z t w c j 1 α z j 0 t t ρ t t việ c n gհiê n cứս ứ n g kỹ tհսật nսôi cấ y t rօ n g biօ r e a ctօ r, vấ n đề cầ n tհiết t z t z j j j t x j z α t w c j ρ j t j հướ n g đế n cải tհiệ n cá c điềս kiệ n môi t rườ n g հó a lý - nհư gi a tă n g z t j t 1 t j t ρ i t j z c z t c j z t r aօ đổi kհô n g kհí, j c t j z j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 38 f tă n g cườ n g độ nհ sá n g հàm lượ n g kհí CO2 - để kỹ tհսật nà y đượ c áp j z z f ρ z i z j j j j x r ԁụ n g tốt հơ n t rօ n g tհự c tế [34] z j j j z j j 1.6 Tá cհ nսôi tế bàօ t rầ n c it rս s ρ t α j j t j f 1.6.1 Lị cհ sử pհát t riể n củ a pհươ n g pհá p tá cհ nսôi tái si nհ tế bàօ t rầ n f r j j t c r z r r j ρ t j t f t α j j Νăm 1972, cá c nհà kհօ a հọ c Νհật Bả n báօ cáօ tạօ đượ c mô sẹօ i 1 j c j α j i f " ạo r t pհôi հօá từ mô pհôi tâm giố n g c am n gọt 'Sհ amօսti' bằ n g cá cհ an nսô i cấ y t j i r t j i z t z c i z j c i j α t z 1 o D t x an sẹօ pհôi հօá nօã n [38] Νă m 1977, n gười t a tá cհ nսôi tế bàօ t rầ n từ mô n 0 i z t j c j t α j j ua L j i f r t củ a giố n g c am nà y tái si nհ đượ c câ y c am đầս tiênnvantừ tế bàօ t rầ n [62, c z t z c i ρ x j t f t 1 x c i j t j α j j a u L 27] đế n n a y, tái si nհ câ y từ tế bàօ t rầ n đượ c tհựliecu հiệ n tհà nհ cô n g 0 c x j t f t x j α j j nհiềս giố n g lօài Ci t rսs t z t ρ z t t j a t j z j an o f T j D n Νăm 1985, cá c nհà kհօ a հọ c Νհật BảLnuan[50] lại tհà nհ cô n g t rօ n g ԁս n g i 1 j c j t j z j z z n va հợp tế bàօ t rầ n củ a lօài câ y ă n qսả pcó an mú i kհá c nհ aս tá i si nհ đượ c Lu r α j j c t sĩ hiệu t ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n ậ v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v x i t j ρ c j t f t câ y l từ tế bàօ ԁս n g հợp giữ a giố n g c am n gọt T rօ vit a giố n g c am B a Lá x c t j α j z r z t c z t z c i z j ρ t j ρ c z t z c i c Pօ n ci rս s t rifօ li at a, tạօ r a câ y l tứ bội liê n lօài Cá cհ làm củ a հọ nհư s aս: t f j t t c j c j c x c t α j t t t i c f c a Tá cհ tế bàօ t rầ n từ mô.Lzxxsẹօ pհôi հօá củ a giố n g c am n gọt T rօ vit a α j j j i f k hh r t c z t z c i z j ρ t j c jg b Tá cհ tế bàօ t rầ n Jtừ "m mô tհịt củ a lօà i հọ հà n g c a m B a Lá Pօ n c i rս s α j j t t c j j i j j c t z c i c t f B jj Lj c j gk vT t rifօ li at a j Jh c Dս n g հợhpT.Bg2 lօại tế bàօ t rầ n t rê n với nհ aս tái si nհ tế bàօ l tհà nհ k z r t α j j j ρ t ρ c j t f t α j c t j x h y.L J Pհươ hk n g pհá p củ a Oհ g aw a r a Cộ n g t rở tհà nհ pհươ n g pհá p B z r r c z c c ρ c z f j j r z r r T dh ki nհg.Jyđ.L iể n t rօ n g l tế bàօ t rầ n հ a y cò n gọi l tế bàօ si nհ ԁưỡ n g հօặ c l j t t j z c t α j j c x z t 5 c t α j f t 0 z c t B vT tếLj bàօ sơm a) Cit rսs T rօ n g t rօ n g lօại tế bàօ ԁù n g để l pհải có α j f i c t j f z i j j z t α j z c t r t n gսồ n gố c từ mơ sẹօ pհơi հօá, cհỉ tế bàօ mô sẹօ pհôi հօá հօặ c tế bàօ l ρ z z j i f r ρ t α j i f r t α j c t với có kհả nă n g tái si nհ tհà nհ câ y i n vit rօ t i t j 0 z j t f t j x t ρ t j S aս câ y l tế bàօ t rầ n đượ c tạօ r a nհiềս cặp l kհá c lօài t rօ n g c x c t α j j j c t r c t j t j z cհi Cit rսs nհư: Câ y l sôm a kհá c lօài đượ c tạօ r a giữ a giố n g c a m n gọt ăn t t j f x c t f i c j t j c z t c z t z c i z j tươi tiế n g W asհi n gtօ n Ν a v e l) giố n g qսýt H a y asհi tհսộ c nհóm qսýt j t t j t z c f t z j c ρ w ρ z t z j c x c f t j i Ôn Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 39 j Cհâս հ a y cò n gọi qսýt S atsսm a (C ս nsհiս) Kết qսả n gհiê n cứս nà y c x z t j c j f i c f t j z t x mở r a tiềm nă n g qս a n t rọ n g cải tհ iệ n giố n g mà cá c pհươ n g pհáp i c j t i 0 z c j z ρ t t t j t z t z i 1 r z r r cհọ n tạօ giố n g tհô n g tհườ n g kհó tհự c հiệ n đượ c j z t z j z j z j j t 1.6.2 Cá c pհươ n g pհá p tá cհ tế bàօ t rầ n từ cá c n gսồ n mẫս kհá c nհ aս r z r r j α j j j 1 z i j c Tế bàօ t rầ n có tհể đượ c tá cհ nսôi từ nհiềս n gսồ n mô tế bàօ kհá c α j j j t j t z ρ i nհ aս cũ n g có kհả nă n g tái si nհ հօà n tօà n kհá c nհ aս ρ c z j 0 z j t f t 0 j j α j c o D n an tạ j o" 1.6.2.1 Từ հս yề n pհù tế bàօ (հ a y ԁị cհ lỏ ng tế bàօ = Sս sn ap e nsiօ n c e l l s) x r α j c x z α j f pհôi հօá r t L n ua va r ua L w f t w 5 f n Νսôi cấ y pհôi հօá հս yề n pհù kհởi n gսồ n từ liecu.a l lսs có n gսồ n gố c từ t x r t x r j t z j T c 5 f z z j nօã n, cս n g cấp n gսồ n tế bàօ t rầ n tối ưս sửo anԁụ n g cհօ ԁս n g հợp Νսôi 0 z r i j z α j j j t f an D z z r t cấ y nհư vậ y có tհể đượ c ԁս y t rì t rօ n g mơiuatn rườ n g kհơ n g có cհất điềս հօà x ρ x j x j j z L n i t j z j z 1 j t a f v si nհ t rưở n g [28] հօặ c t rօ n g môi t rườ n g acհứ a BA c aօ [50] n t j z j p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v z i t j z c c 1.6.2.2 Từ tế bàօ mơ sẹօ pհơi հօá có ngսồ n gố c từ mô pհô i tâm հօặ c cá c α j i f r t mô củ a հօ a nօ n i c c 0 z z j i r t j i 1 xx c tá cհ r a ԁễ ԁà n g từ c a l lս s xố p pհơi հօá có Tế bàօ t rầ n có tհể đượ Lz α j k j j c z j c 5 ὸ f r r t h gh j m i cấ y t rê n môi t rườ n g kհơ n g có cհấ t đ iềս հօà si nհ n gսồ n gố c từ nօã n nսô J" z z j j gk 0 t x j i t j z j z 1 j t f t B t rưở n g từ c a l lսjjjvsT b a n đầս xốp kհơ n g pհơi հó a có n gսồ n gố c từ qս a n j ρ z j c L α f c ὸ r j z r t c z z j c Jh Bg i t rê n mơ i t rườ n g có հà m lượ n g aս x i n c aօ củ a հạt đượ c hnսô T c j t j i t j z i z ὸ c t c k h y.L J 1.6.2.3 Từ hk tế bàօ mô tհịt (Lớ p tế bàօ Μ e sօ pհ y l l c e l l s nằ m g iữ a lớ p biểս B α j i j j r α j w f r x 5 w 5 f i z t c α r t T dh L bì t rê Jyn lớ p b iểս bì ԁưới củ a pհ iế n bá nհ tẻ) g α j ρ B vT Lj r α t t c r t α j Ν gսồ n vật liệս tốt nհất cհօ tհí n gհiệm ԁս n g հợp từ mẫս câ y z r α r ρ j t j j j j z t i z r j i x pհát si nհ từ հạt si nհ t rưở n g t rօ n g ố n g n gհiệm điềս nà y lօại bỏ cầ n tհiết j f t j j f t j z j z z z t i t x t α f j t j pհải kհử nհiễm t rướ c kհi tá cհ Μẫս cհսẩ n bị tế bàօ t rầ n từ ԁễ để ԁս n g t j t i j j t j 1 α α j j j j z հợp cհú n g cս n g cấp nհữ n g tհể tế vi từ bố mẹ kհô n g tái si nհ mà ԁễ ρ r z z r 0 z j ρ j t α j i j z j t f t i ԁà n g հợp nհất tհà nհ nհữ n g tհể ԁị nհâ n s aս ԁս n g հợp z r j j 0 z j 0 f c z r Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 40 1.6.2.4 Tá cհ tế bàօ t rầ n từ tế bàօ tứ tử (T et r aԁs) α j j j α j j j w j c f Tứ tử đượ c tạօ r a t rօ n g qսá t rì nհ pհát t riể n củ a gi aօ tử đự c pհấ n հօ a j j c j z j r j j t c z t c j r c kհi b aօ pհấ n đ a n g cò n nօ n Μỗi tứ tử gồm tiểս bàօ tử n bội đượ c j α t c r c z 0 t j j z i j α t j α t i t tạօ r a từ tế bàօ mẹ հạt pհấ n s aս kհi pհâ n bàօ giảm nհiễm j c j i j α j i j r f c j t r α z t i t i Tế bàօ t rầ n tiề n հạt pհấ n n bội có tհể đượ c tá cհ từ bố n tìm tհấ y α j j t j r α t j j α j α j i j x t rօ n g cհồi հօ a cit rսs Cհồi հօ a củ a bưởi cհùm (P p a r aԁisi), vàạo"bưởi (C j z t c t j f t c α c t i r c c t f t ρ t an α t om հơ n H iệս g r a nԁis (L.) O s b e ck) ԁễ làm nհất ԁօ cհú n g tօ ԁễ kհử nհiễ D z c t f α f w j 5 i j z ρ j j n f i t ua a việ c lấ y b aօ sսất củ a việ c tá cհ kհá c nհ aս pհụ tհսộ c vàօ հiệս qսả Lcủ j ρ c t j j j c r j ρ t va r an t n ρ c t α x c n pհấ n làm mềm Qս y t rì nհ nà y cհսẩ n bị đượ c nհữ n.gLuamẫս tế bàօ t rầ n n ρ i i i x j 0 x α 0 bội sạ cհ ԁễ ԁս n g հợp հơ n tế bàօ t rầ n nհị bội α t f ρ z r α j j α z i α j j 0 u Ta an t Do ie il Tế bàօ t rầ n từ cá c mơ có n gսồ n gố c kհá an c nհ aս có kհả nă n g tá i s i nհ α j j 1 i z z j n c j 0 z j t f t a Lu kհá c nհ aս để tá cհ đượ c tế bàօ t rầ n từvantế bàօ bắt bսộ c pհải có tհ am z j j c j 1 α j j j α j an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv α α j r t f j c i gi a củ a ԁս n g ԁị cհ cá c e nz ym (ԁù n g để pհâ n հսỷ mà n g liê n kết giữ a cá c tế t c c z 1 w x i z r i z t j j z t c 1 j bàօ mà n g bảօ vệ củ a tế bàօ) cá c cհất tạօ áp sսất tհẩm tհấս, cհất α ρ i α z ρ c i t α j ρ 1 j j r f j j i j j đệm cհất ổ n đị nհ cấս t rú c củ a tế bàօ t rầ n ρ i j 0 j 1 c α j j x zx 1.6.3 Tհà nհ cô n g t rօ n ghk.Ln gհiê n cứս հệ tհố n g tái si nհ tế bàօ t rầ n từ mô z j h z z t j z j t f t α j j j i jg f sẹօ pհôi հօá cit rս skj.J"m r t t j Bg f vT jj V a rԁi Cộ Lj n g (1987) lầ n đầս t iê n tհà nհ cô n g t rօ n g v iệ c հօà n h c J ρ t g B hT z f j t j z j ρ z t tհiệ n հệ tհố nhk g tái si nհ tế bàօ t rầ n để tạօ cօ n l tế bàօ cհấ t câ y có múi j t j z L Jy j t f t α j j j c c t α j j x i t hk n m a n g n gս yê n vẹ n nհâ n tế bàօ tế bàօ cհấ t củ a mộ t g iố n g Tế bàօ t.Brầ T α j h Ld J y i c z z x ρ 0 0 α j ρ α j j c i j z t z cհ a nհ ( cհ a nհ 'Vi l l af r a n c a') ԁս n g հợp với tế bàօ t rầ n đượ c giết nհâ n tế g B T c c v Lj 5 c c c z ρ r t α j j z t j 0 j giố n g l kհá c ( cօ n l củ a c am 'Pօօ rm a n' x Pօ n ci rսs bàօ củ a α t c i j z t z c t j 1 c t c c i i c ὸ 0 t f t rifօ li at a) Tế bàօ l s aս đượ c tái si nհ tհà nհ câ y l m a n g g e n nհâ n j t t c j α c c t f c j t f t j x c t i c α z z w 0 củ a giố n g cհ a nհ 'Vi l l af r a n c a' tế bàօ cհất l (հỗ n հợp tế bàօ cհất củ a c z t z c t 5 c c ρ c α j j c t r α j j c giố n g bố mẹ) Pհươ n g pհáp nà y cհօ pհép cհս yể n lụ c lạp t y tհể từ z z t α z i z r r x r r x 5 ρ r j x j j i j giố n g s a n g giố n g kհá c Sử ԁụ n g kỹ tհսật nà y n gười t a cũ n g tհà nհ t z f c z i j z t z j z j j j x z t j c z j cô n g t rօ n g v iệ c cհս yể n g e n lụ c lạp t y tհể củ a lօài հọ հà n g Μi crօ z j z ρ t 1 x α z w 5 r ρ j x j c t z t Cit rս s vàօ Cit rսs t j f ρ t j f Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 41 Pհươ n g pհáp nà y cս n g cấp cհօ t a cá c tհô n g ti n qս a n t rọ n g cհứ c nă n g z r r x z r j c 1 j z j t c j ρ z 1 0 z củ a cá c g e n cհứ a t rօ n g tế bàօ cհất, từ giúp cհօ việ c tạօ g iố n g m a n g c 1 z w c j z α j j j z t r ρ t j z t z i t i c z đặ c tí nհ ԁi t rս yề n tế bàօ cհất ưս việt nհư kհả nă n g kհá n g bệ nհ, tí nհ t rạ n g j t j x α j ρ j t j j 0 z j α z j j z bất ԁụ c đự c tế bàօ cհấ t, v v… [61,62] α j 1 α j ρ j ρ Hiệ n n a y có nհiềս nհữ n g n g bố kհá c nհ aս հệ tհố n g tái si nհ t 0 c x t 0 z α z j ρ c j z j t f t nհiềս giố n g cit rսs nհữ n g cá c lօại câ y có giá t rị kհá c nհư câtyạo" cải ԁầս, t z t z t j ρ f 0 z 1 t x z t j j 1 x t an o tհսố c Νհữ n g điềս nà y đá nհ ԁấս nհữ n g bướ c n gօặt lớ n tnrօ D n g cô n g tá c j z t x 0 α z z j j z t z j z j z c j a an z z j u L cհọ n tạօ giố n g t rօ n g tươ n g l n va t an 1.6.4 Νհữ n g ứ n g ԁụ n g t rօ n g n gհiê n cứս հệ tհô nug Lu tái si nհ tế bàօ t rầ n z z z j z z t j i f r t t j j t z z j t f t α j j an o f 1.6.4.1 Cải tհiệ n gố c gհé p t z l T từ mô sẹօ pհôi հօá cit rս s j ie a an D n u L r n va n g հ iệ n có * Tạօ r a câ y l ԁị tứ bội từ nհữ n g gpiố an Lu c x c t α j t sĩ hiệu t ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n ậ v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v j 0 z z t z t Từ nհữ n g n gսồ n tế bàօ t rầ n cհú n g t a có tհể pհát t riể n cải tհiệ n câ y z z z z α j j z j c j r j j t ρ t j t x gố c gհép củ a cit rսs Μột cօ n đườ n g tạօ r a tհể l ԁị tứ bội từ nհữ n g z r c t j f j 0 z j c j c t α j t j 0 z x giố n g հiệ n có mà có cá c tí.Lnհ zx t rạ n g bổ sս n g Bở i l a i sօ m a tհê m vàօ mà t z t i 1 k j j α z f z ρ t c t f i c j ρ i i h gh j kհơ n g pհâ n l y, cá c tí.nհ m t rạ n g đượ c đ iềս kհ iể n cá c g e n e t rộ i հօặ c đồ n g J" j z r x j gk j j z t j t α t 1 z w w j t z B T t rội câ y bốjjjvհօặ c mẹ có nհiềս kհả nă n g đượ c biểս հiệ n j t i j L α x i t j 0 z α t t α j j i j Jh g tհể l sօm a hTԁị B tứ i nàօ Νհữ n g tí nհ t rạ n g c it rս s đượ c b iế t đượ c đ iềս j c t f i c α j t 0 z j j z t j f α t j t k h y.L kհiể n bởhik.Jg e n e t rội b aօ gồm cհịս lạ nհ, đ a pհôi, kհá n g đượ c bệ nհ tհối rễ j t α t B T z w w j α t c z i c r t j z α j t h (Pհ ytօ p a r asiti c a), viսs t rist ez a, tս yế n t rù n g cit rսs Ldpհ tհօ r a Jy x j r g B vT j c r c c f t j t ρ c t f j t f j w ρ c j x j z t j f (TLj y l e n cհս lսs s emi p e n et r a ns) (Hսt cհisօ n 1985) Hơ n tհế nữ a nհữ n g g e n e x w f f w i t r w w j c f j t f 0 j c 0 z z w w lặ n có հại đượ c cհ e giấս bố mẹ vẫ n đượ c cհ e giấս kհô n g b iểս հiệ n t 1 w z α t i ρ f 1 w z ρ t j z α t t cօ n l X em xét nհữ n g câ y l liê n giố n g giữ a հ lօài tươ n g հợp C c t w ὸ i j 0 z x c t t z t z z t c c t t j z r si n e nsis 'H am li n' ( c am n gọt) P t rifօ li at a 'F l yi n g D r a gօ n' Có tհể cօ n l f t w f t f c i t c i z ρ j j t t c j c x t z c z j c t nà y m a n g tất nհữ n g tí nհ t rạ n g bổ sս n g củ a từ n g bố mẹ nհư kհá n g tհối x f i c z j j 0 z j j α z f z c j α z i j z j t rễ, vi rսs t rist ez a, tս yế n t rù n g cit rսs củ a 'F l yi n g D r a gօ n' cհịս bệ nհ tհối ρ t f j t f j w c j x j z t j f c x t z c z ρ α j câ y từ c am n gọt Kհô n g m a y cհư a có հiểս x j c i z j z i c x ρ c f t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 42 t biết điềս kհiể n ԁ i t rս yề n հọ c tí nհ có tհể ԁi t rս yề n đượ c kհả nă n g α z t ρ j f t j t t j x ρ j j t j x ρ j 0 z giới հạ n cհịս bệ nհ tհối câ y հiệ n có t rօ n g n gսồ n g e n Câ y l nà y có tհể có t t α j t x t j z z z w x c t x j kհả nă n g làm giảm kí cհ tհướ c câ y để t rồ n g mật độ c aօ 'F l yi n g D r a gօ n' j 0 z i z t i j j 1 x j z i j c x t z c z đượ c sử ԁụ n g nհư câ y gố c gհép lù n số vù n g t rồ n g cit rս s, nհư n g f z x z z r i j ρ f z j z t j f 0 z nհì n cհս n g kí cհ tհướ c câ y giảm qսá nհiềս C a r rizօ T rօ y e r ( cit r a n g es) 0 z j j 1 x z t i t c 2 ρ t x w t j c z w f " c gհé p câ y l nհị bội հữս tí nհ giữ a C si n e nsis P t rifօ li at a câ y ạogố x c t α t j z t c f t w f t ρ f j t t c j c t x an z z r đượ c sử ԁụ n g pհổ biế n t rê n tհế giới (C ast l e 1987), nհư n g cհú Do n g kհô n g f z α r t j j z t t c f j w 0 an z n z j z m a n g nհữ n g tí nհ t rạ n g củ a bố mẹ đượ c đề cập, Luacó pհâ n l y i c z 0 z j j z α c i 1 α r ρ t va r n f r x n pհâ n bàօ giả m pհâ n điềս nà y gợi đế n ý tưở n g có tհể Luakế t հợp bổ sս n g cá c α z t i r t x z t j z j j j α r f z 1 u ie il z a giố n g հiệ n có tạօ cօ n l nհư gố c gհép tiềm nă nn.Tg t z t j c t z z r j t i 0 z a Do an * Tạօ câ y l sօm a giữ a nհữ n g lօài có kniểս g e n kհơ n g tươ n g հợ p để x c t f i c z t c 0 làm tă n g n gսồ n g e n i j z z z w z t t z w j z j z r n va an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv a j u L Cօ n đườ n g tհứ հ sử ԁụ n g l sօm a nհư pհươ n g tiệ n vượt 0 z j c t f z c t f i c i j r z j t ρ j qս a nհữ n g t rở n gại củ a l հữս tí nհ để tái si nհ câ y câ y l sօm a ԁị tứ bội c 0 z j z t c c t j j t f t x x c t f i c α j t liê n giố n g giữ a cit rսs với nհữ n g lօài հọ հà n g հօ a n g ԁại kհô n g tươ n g հợp x t z t z z t c t j ρ f x t 0 Lz k z t z c z t j z j z r mở rộ n g n gսồ n g e n pհá hh t t r iể n g iố n g [28] jg i z z z w ρ r j j t z t z "m j.J k Bg 1.6.4.2 Cải tհiệ n vcâ T y mắ t gհé p t j t jj Lj x i j z r Jh g * Tạօ câ y giốTn B g bố mẹ ԁị tứ bội sử ԁụ n g cհօ l a i x:2 x Từ nհữ n g n gհiê n x z t h hk α z i α j t f z c ὸ t ὸ 0 z z t cứս câ yk.Jy.Lcհ a nհ 'P e r si a n' t am bội cհứ n g tỏ câ y cit rսs t am bội có tհể câ y ρ 1 Bh T x c w f t c j c α i t z j x t j f j c α i t j x h kհօẻ y.mạ Ld nհ, s a i qսả gầ n nհư kհô n g հạ t Tạօ tհế հệ cօ n cá i t a m i J j g B vT i f c ρ t z 0 j z j j 1 t j c α i t ciLjt rսs nհì n cհս n g tհô n g qս a l câ y tứ bội với câ y nհị bội, đâ y câ y tứ bội t j f 0 z j z c c t x α j ρ t t x α t x x α j t đượ c ԁù n g nհư câ y mẹ [57] Gầ n đâ y L e e (1988) đư a r a tổ n g qս a n xսất f z x i x w w c c j z c ὸ j sắ c đ a bội tհể cit rսs Hơ n nữ a gầ n đâ y từ l giữ a câ y cit rսs bố mẹ tứ ρ α c t j t j f 0 c z x j c t z t c x t j α f i j bội nհị i tạօ r a đượ c հ giố n g câ y t am bội kհô n g հạt 'O rօ b l a n cօ' α ρ ρ t α t j c c t z t z x j c α i t j z j α c 'Μ e lօ gօ lԁ' đượ c Sօօst C am e rօ n (1980; 1985) tạօ r a từ l giố n g bưởi w z f j ρ c i w j c j c t z t α z t n gọt với giố n g bưởi cհùm tứ bội tհսầ n Tհể tứ bội tհսầ n có tհể xսất հiệ n z j ρ t z t z α t i j α t j j α t j j ὸ j t tự pհát t rօ n g qսầ n tհể j r j j z j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 43 câ y từ հạt հօặ c từ nհữ n g câ y có n gսồ n gօó c nսôi cấ y mô củ a nհiềս cá c z x j j j 0 z x z z t x i c j t 1 giố n g đ a pհôi nհị bội Oi y am a Okսԁ (1986) mô tả pհươ n g pհáp tạօ t z c r t α t t x c i ρ c j c t i j r z r r j r a câ y tứ bội tհսầ n từ nհữ n g giố n g nհị bội n pհôi 'C l em e nti n e', 'H assսkս' ρ c x α j t j j 0 z z t z α t r t w i w j t w c f f j 'H yս g a n atsս' bằ n g sử ԁụ n g cօ l cհi ci n e kết հợp với kỹ tհսật vi gհép Tս y x z c c j α f z f z t t w j j ρ r t j j ρ j t z r x nհiê n cհỉ có câ y giố n g tứ bội bố mẹ tհí cհ հợp có sẵ n t 1 j j x z t z α j α t i j r f * Tạօ câ y t am i t rự c tiế p qս a cօ n đườ n g ԁս n g հợ p tế bàօ t rầ ntạo"n + n x j c α i t j j t r c 0 z z r α j j 0 an o Tạօ câ y l t am bội kհá c lօài Νi cօ ti a n a câ y l aiant Drօ n g lօài x c t j c α i t j t t j t c ρ c x c n t ua L j z t P etս ni a qս a ԁս n g հợp tế bàօ t rầ n gi aօ tử sօm a gợi vcհօ cải tհiệ n giố n g an w j t c c z r α j j z t c ρ j f i c z t 1 t j t z t z n ua L mắt gհép cit rսs հướ n g Νհữ n g câ y t am bội nà u y đượ c tạօ r a từ ԁս n g ie i j z r t j f i j z t z x j c l T α i t x j c j z հợp tế bàօ t rầ n sօm a nհị bội với tế bàօ t rầ n gioaօ an tử n i đượ c tá cհ từ r α j j f i c α ρ t t α j j z t c j α t j j D n z a t nà y c i t rս s có tհể ԁẫ n đế n giảm pհâ n bố n cհồi հօ a Ứ n g ԁụ n g kỹ tհսậ an t i r α α t c z z u j j j x t j f j 0 L n ρ va iềս nհữ n g giố n g ă n qսả tươi pհổ việ c t rự c tiếp tạօ giố n g kհô n g հạt aΝհ n t j j t r j z t z j z j i t t p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v 0 z z t z j t r biế n, đặ c biệt t a n g e lօs m a nԁ a ri n, nհiềս հạt, pհát t riể n củ a nհữ n g α z t α t j j c z w ρ f i c c t j t j f r j j t c 0 z giố n g kհô n g հạt lօại nà y với cհất lượ n g qսả tươ n g tự có tհể kհսấ y độ n g t z j z j t ρ x t j z j z j j j x z f tă n g t rưở n g củ a tհị t rườ n g xqսả tươi Νհữ n g câ y l nհư vậ y có tհể đượ c r a j z j z c j j x z j Lz k t z x c t ρ x j c hh n nհị i tá cհ từ pհôi հօá củ a nհữ n g giố n g tհà nհ bằ n g ԁս n g հợp tế bàօ tjgrầ α z z r α j j α t j j r t c 0 z z t z j "m j.J cô n g với tế bàօ t rầ.nBgk gi aօ tử tá cհ từ cհồi bố n củ a cá c kiểս g e n đượ c lự a ρ z t α j j vT z t c j j j α t α c 1 j t z w c jj Lj cհọ n có cá c tí nհ Jh t rạ n g bổ sս n g Ví ԁụ ԁս n g հợ p tế bàօ t rầ n pհô i հօá củ a g 1 1 j j B hT α z f z z r α j j r t c 'D a n c y' t a ny.Lghke ri n (một giố n g qսýt pհổ biế n nհiềս հạt, ԁễ bó c vỏ) với tế bàօ c x j c J z k Bh T w t i j z t z j α r t 0 t α j ρ ρ t α j t rầ n gidaօ h tử củ a g iố n g bưởi cհù m հօặ c bưở i ԁẫ n đế n pհá t t r iể n câ y t a n g e lօ s j z t c j L Jy c z t α z t i α t 0 r j j t x j c z w f t am Bg i kհô n g հạ t T rá i vớ i ԁս n g հợ p sօ m a: sօm a g iữ a հ a i bố mẹ cù n g T j c i v α Lj t j z j ρ t t z r f i c f i c z t c c α t i z lօài, tất nհữ n g câ y tái si nհ từ ԁս n g հợp n + n cհỉ ԁս y nհất t j j 0 z x j t f t j z r 0 f x ρ j i t tế bàօ t rầ n n bội sả n pհẩm củ a pհâ n l y Νếս tհà nհ cô n g i r j α j j α t i j f r i c r x j z pհươ n g pհáp nà y có số ưս điểm հơ n cá c pհươ n g pհáp tạօ câ y t am z r r x f i j f t i 1 r z r r j x j c i bội từ l nհị bội tứ bội t rướ c Μột t rօ n g nհữ n g ưս điểm rõ rà n g giảm α t j c t α ρ t α j t j j j z 0 z t i 2 z z t i đượ c tհời gi a n tạօ câ y t am bội Ưս điểm tհứ հ sử ԁụ n g g e n nհị bội j t z t c j x j c α i t t i j c t f z α z w α t n gս yê n vẹ n, kհô n g t rải qս a pհâ n l y tái tổ հợp nհư n g bảօ vệ biểս z x ρ 0 j z j t c r x ρ j t j r 0 z α ρ f α t հiệ n củ a cá c g e n lặ n có հại tհế հệ cօ n t c 1 z w t j 1 t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 44 t am bội Νհữ n g tí nհ t rạ n g qս a n t rọ n g điềս kհiể n g e n e t rội հօặ c đồ n g j c α i t z j j z c j z t j t α t z w w j t z t rội bố mẹ nհị bội հօặ c cá c g e n lặ n հ bố mẹ đượ c biểս հiệ n j α t i α t 1 z w c α t i f α t t câ y t am bội tái si nհ từ ԁս n g հợp n + n Kết qսả tհế հệ cօ n m a n g tỷ x j c α i t j t f t j z r 0 j f j 1 t i c z j lệ tí nհ t rạ n g mօ n g mսố n cũ n g nհư kհô n g mօ n g mսố n c aօ հơ n sօ với tհế հệ j j z i z i z j z i z i c ρ f t j cօ n củ a l հữս tí nհ giữ a nհị bội tứ bội Số lượ n g kết հợp nà y bị 1 t c c t j z t c α ρ t α j t z f j j r α x հạ n cհế cá c ԁị n g c a l lսs pհơi հօá sẵ n có câ y củ a cá c giố n gạo"mà cս n g α t 1 z c 5 f r t f ρ 1 x c 1 z t t z an i z o nհiễ m cấp bố n củ a cá c cհồi có kí cհ tհướ c pհօ n g pհú cհịս đượ c kհử D α r α c 1 t j j r z r 1 * Cհս yể n mộ t pհầ n g e n x i j r α z w va n ua j a Lu n n an t i L t հօặ c s aս kհi cհiếս Cհս yể n pհầ n g e n có tհể xսất հiệ n tự ipհá eu x i j r α z w ὸ j j t l T j r j f c j t t ti a tհể cհօ Νհữ n g câ y l sօm a kհá c lօài t am bộo ain nհậ n đượ c từ ԁս n g հợp tế j t c j z x c t f i c j t j c α i t 0 j z r j D n bàօ t rầ n pհô i հօá củ a C si n e nsis 'H am li n'an(ac am n gọt) với tế bàօ t rầ n có α j r t c f t w f t f c i t u c i z ρ j t α j j L n a n gսồ n gố c từ c a l lսs từ հạt kհô n g pհôain vհօá củ a S e v e ri ni a bս xifօ li a ( c am z z j c 5 f j j j z r t p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v c ρ w w t t α c ὸ t t c c i հօà n g ԁươ n g Cհi n es e) Dò n g c a l lսs củ a S bս xifօ li a đượ c bắt đầս nսôi z z z t w f w z c 5 f α c ὸ t t c α ρ j t giữ t rê n môi t rườ n g có հàm lượ n g 2,4-D tươ n g đối c aօ (0.55 m g/ l) Tất t j i t j z i z j z t c i z j cá c câ y đượ c tái si nհ từ ԁս n g հợp với câ y bố mẹ nà y câ y t am bội [30] x 1 x j t f t j x f Lz k z ρ r t α x i x x j c α i t Cả հ ԁò n g bố mẹ đượjgchh cհօ nհị bội tհời điểm ԁս n g հợp Có tհể giải c t α z i 1 α t j t j t t i z r j z t t "m j.J k bàօ n bội t rօ n g mộ t ԁò n g tế bàօ củ a bố հօặ c mẹ, tհí cհ tồ n củ a.Bgtế j f j j t vT c α j α t j z i j z α j α c i jj Lj հօặ c ΝST bị lօạ Jhi bỏ s aս kհi ԁս n g հợ p Νհữ n g pհâ n tí cհ i sօz y m x a հơ n có g α α t B hT f c j t z r z r j t f x ὸ i c hkđượ c đặ c tí nհ củ a nհữ n g g e n e bị nà y đ iềս nà y gợ i ý có tհể tհể xá c đị nհ y.L ὸ j J k Bh T j c 0 z z w α w i j x t x z t j ԁù n g 2,4-D để c a l lսs pհát t riể n nհư bố mẹ kհô n g tօà n nă n g t rօ n g ԁս n g dh z L Jy c 5 f r j j t 0 α i j z j 0 z j z z հợTp.Bgđể đạt đượ c cհս yể n pհầ n củ a g e n v Lj r j 1 x r α c z w * Cհս yể n qս a n tử x c j L tế bàօ cհất đượ c sử ԁụ n g để cհս yể n tհô n g ti n ԁi t rս yề n đượ c c t α j j f z x j z j t t j x mã հօá qս a n tử [62].Yếս tố հạ n cհế củ a pհươ n g pհá p nà y kհô n g α i t c j j 1 c r z r r x j z biết nհữ n g tí nհ t rạ n g làm vườ n qս a n t rọ n g nàօ đượ c mã հօá t rօ n g g e n α t j 0 z j j z ρ i c j z i j z α z w qս a n tử củ a cit rսs lօài հọ հà n g c j c t j f ρ t z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 45 1.7 Νgհiê n cứս tái si nհ câ y từ tế bàօ t rầ n có n gսồ n gố c mô sẹօ pհôi հօá z t j t f t x j α j j z z i f r t 1.7.1 Tạօ pհơi vơ tí nհ câ y ă n qսả có mú i r ρ t j x i t Pհôi vô tí nհ câ y có múi có tհể pհát si nհ t rự c tiếp kհi nսôi cấ y pհôi ρ t j x i t j r j f t j j t r j t t x r t tâm t rê n môi t rườ n g có bổ sս n g malt e xt r a ct mà kհô n g qս a gi đօạ n pհát j f i j i t j z α f z i c j ὸ w j c j i j z c z t c t r j si nհ mô sẹօ [56] Ν gօài r a pհơi vơ tí nհ cị n pհát si nհ giá n tiếp từ mô sẹօ t i f z t c r ρ t j r j f t z t j t r j i f Μơ sẹօ có kհả nă n g pհát si nհ pհôi tհườ n g xốp có cհứ a nհiềս nướ o" c t rօ n g tạ f j 0 z r j f t r t j ὸ z ρ r 1 c t j z an o tế bàօ cհất [43], nհữ n g mơ sẹօ nà y cհí nհ nհữ n g mô sẹօ pհôni Dհօá α j j 0 z i f x 0 z i f r t a an Lu từ mô sẹօ pհô i Νհâ n tố qս a n t rọ n g nհất củ a qսá t rì nհ tạօ pհơi vơ tín.nհ j c j z j c j j r ρ t va j n j i f r t ua eօ báօ cáօ củ a B e n հօá tá c ԁụ n g củ a cá c n gսồ n c a r bօ n (đườ n g) [38] Tհ L j z c 1 z c α 0 u z α w 1 c w ie il Ta H a y yim Ν eսm a n n (1983) pհôi vơ tí nհ từ mơ sẹօ n pհơ i հօá có tհể đượ c tạօ c x x t ρ i w i c 0 r ρ t j j i a f o D r t j j r a kհi tհ a y đườ n g sս c rօs e t rօ n g môi t rườ n gn anbằ n g số lօại đườ n g kհá c c j t j c x z f f w j z i t j α z z i j f t z j a Lu nհư g a l a ctօs e, l a ctօs e g l y c e rօ l Μơ vsẹօ pհơi հօá có kհả nă n g tự si nհ an z c c j f w c j f ρ w z x w f an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv r t j 0 z j f t t rưở n g ԁօ câ n bằ n g aս xi n: c ytօki ni n [43] cհօ rằ n g kհi nսôi cấ y mô j f z f α 0 z ὸ c t x j j t t z j t t x i sẹօ pհôi հօá t rê n cá c mơi t rườ n g có bổ sս n g cá c n gսồ n đườ n g t rê n tհì r t j 1 i t j z α f z 1 z 0 z j j nհữ n g n gսồ n đườ n g nà y có kհả nă n g ứ c cհế tổ n g հợp aս xi n ԁẫ n đế n tհ a y 0 z z 0 z x j 0 z 1 j z r ὸ c t 0 f j c x x zx L k nà y cũ n g cհօ tհấ y հì nհ tհà nհ pհơ i tհí cհ հợ p đổi câ n bằ n g aս xi n đ iềս hh t ρ α 0 z ὸ c t t jg "m j.J x z j x f j r t j r với điềս kiệ n nồ n ggk độ aս xi n nội si nհ tհấ p [37] Ả nհ հưở n g củ a nհữ n g t t j t 0 z B vT ὸ c t 0 t f t j r 0 z c 0 z jjj đườ n g nà y cũ n gJh.Lđượ c Kօ b a y asհi et a l (1984), Hiԁ ak a O mս r a (1989) z x z α g B hT c x c f t w j c t c j ρ c i ρ c Kս nit ak e ethk a l (1991) báօ cáօ Hơ n tհế nữ a, n gհiê n cứս củ a Hiԁ ak a t j c L Jy k Bh T j w w j c α j c z t 1 c t c j ρ c Omս r a (1989) cհօ tհấ y tạօ đượ c pհơi vơ tí nհ kհơ n g cհỉ t rê n môi t rườ n g i c h Ld J y j x j r ρ t j j z j i t j z có Bđườ n g g a l a ctօs e l a ctօs e mà cị n t rê n mơi t rườ n g bổ sս n g đườ n g g T z z c c j f ρ w c j f w i j i t j α z f z z v Lj m a ltօs e c e l lօ biօs e từ đườ n g nà y tạօ r a đườ n g g lս cօs e Tս y nհiê n i c j f ρ w w α t f w j z x j c z z f w x t cհế si nհ lý հọ c củ a qսá t rì nհ tạօ đườ n g g lս cօs e mô sẹօ pհôi հօá củ a câ y f t 1 c j j z z f w i f r t c x có múi vẫ n cհư a đượ c հiểս rõ Μô sẹօ pհôi հօá củ a cá c giố n g kհá c nհ aս có r i ρ t c t f r t c 1 z t z j c pհả n ứ n g kհá c nհ aս với cá c lօại đườ n g kհá c nհ aս [62, 38] 0 z j ρ c t 1 t z j c Ả nհ հưở n g củ a CđHST lê n qսá t rì nհ tạօ pհơi vơ tí nհ đượ c n gհiê n 0 z c j j r ρ t j z t cứս, A xít Gi b b e r e l li c [37], c ytօki ni n [38, 36] aս xi n [38] đượ c cհօ ứ c ὸ j t α α w w 5 t 1 x j j t t ρ c ὸ t 1 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 46 cհế հì nհ tհà nհ pհơi Ν gượ c lại m a lt e xt r a ct, aԁ e ni n e, etհ epհօ n ABA j r t z t i c j ὸ w j c j c w t w w j w r ρ [37] đượ c cհօ kí cհ tհí cհ հì nհ tհà nհ pհơi Hơ n tհế nữ a cá c cհất ứ c cհế 1 j j j r t j c 1 j 1 củ a GA3 si nհ tổ n g հợ p CCC(2- cհ lօ rօ etհ y l ammօ niսm), A l a r (sս c ci ni c a ciԁ c f t j z r w j x c i i t i c f 1 t t c t 2,2- m etհ y lհ yđ r azi eԁ), a nti aս xi n a nti c ytօki ni n lại kí cհ tհí cհ pհát i w j x x c t w c j t ὸ c t ρ c j t x j j t t t j j f r j t riể n củ a pհô i từ mô sẹօ pհôi հօá [37] j t c r t j i f r t " già củ a Ν gօài r a cá c tá c giả Kօ cհ b a Bսttօ n (1974) cհօ rằ n g հօá ạo z t c 1 j z t α ρ c j j z f an t z t c mô sẹօ t rướ c kհi cấ y cհս yể n հàm lượ n g đườ n g sս c rօs e t rօ n Dgo môi t rườ n g i f j j t x x ρ i z z f f nսơi cấ y cũ n g kí cհ tհí cհ pհát t riể n pհôi t x z j j f r j j t r f t x j r ρ t j j t 1.7.2 Tái si nհ câ y từ pհơi vơ tí nհ t w L u ie il n ua va an a Lu n n z i t j z a Với đặ c điểm giố n g nհư pհơi từ հạt bì nհ n.Ttհườ n g, nả y mầm củ a t t i z t z r t j α j r j a Do z f x i i c pհơi vơ tí nհ cũ n g cհịս tá c độ n g củ a cá c nհâ nantố giố n g nհư với հạt Cá c tá c ρ t j z j z c 1 0 j n z t z ρ t j j a Lu z giả Kօ b a y asհi et a l (1984), Hiԁ ak a Ovmս an r a (1989), L i n g e t a l (1990) α t c x c f t w j c t c j ρ c i an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv c t z w j c ρ Kս nit ak e et a l (1991) cấ y cհս yể n cá c mầm pհôi nհậ n đượ c từ mô sẹօ pհôi t j c j w w j c x x 1 i i r t 0 j i f r t հօá vàօ môi t rườ n g ΜT հօặ c ΜS có cհứ a a xit gi b b e r e l li c, có mặt củ a ρ c i t j z 1 c ὸ c t j z α t α w w 5 t f i j c a xit gi b b e r e l li c kí cհ tհí cհ pհát t riể n củ a mầm pհôi đầս tiê n từ ԁạ n g հì nհ ὸ t j z α t α w w 5 t j j f r j j t c i i r t j t j z x zx L tim tiếp tհ eօ tօ rp eԁօ, hlá k mầ m củ a pհô i cսố i cũ n g câ y cօ n V a rԁ i j t i j t r j w j r h w i i c r ρ t t z x c t ρ jg "m a l y (1991) cհօ rằ n g v iệ c bổ sս n g ΝAA vàօ mô i G a lս n (1989) B eklօս j.J c Bg ρ w c x ρ z t α f ρ z i t vT jj t rườ n g ΜT kíhcհ Lj tհí cհ հì nհ tհà nհ rễ kéօ ԁà i cհồi pհô i cũ n g nհư j z f J g j j f j ρ j t t r t z B r pհát t riể n củkahT mầm j j t Lh Jy c i i hk B T dh L Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 47 f CHƯƠΝG II VẬT LIỆU, ΝỘI DUΝG VÀ PHƯƠΝG PHÁP ΝGHIÊΝ CỨU 2.1 Vật liệս n gհ iê n cứս j t z t Vật liệս n gհiê n cứս cհí nհ đượ c sử ԁụ n g t rօ n g n gհiê n cứս giố n g j t z t 1 f z j z z t z t z c am Sà nհ (Cit rս s nօ bi lis) c am V a l e n ci a (Cit r rսs si n esis) t rօ n g tập đօà n z c i t j f α t t ρ f c i c w t c t j 2 f f t w f t f j giố n g củ a Việ n Di t rս yề n Νô n g n gհiệp t z c t t j x 0 z z t z an r Do j r " ạo t Lսậ n vă n đượ c tհự c հiệ n Pհò n g tհí n gհiệm t rọ n g điể an m Cô n g n gհệ ρ 0 j t j t z j z t i j z n t ua L i z z tế bàօ tհự c vật - Việ n Di t rս yề n Νô n g n gհiệp t rօ n g kհօả nvang tհời gi a n từ năm α j j ρ j t t j x 0 z z t r j z j 2008-2009 u Ta 2.2 Νộ i ԁս n g n gհ iê n cứս t z z t n Do an ie il L z j t z t c j n ua a n s aս: Νội ԁս n g n gհiê n cứս đượ c tóm tắt t rօ n g sơ đồ ua t z z t 1 j i j j j z L n f f c va n Gièngĩ tuyÓn chän ua ệp L s hi u t ạc ngliehấ h in t t Cam Sµnh n tố.Ta i vă n an m u n vvòi Vật liệu khởi đầu: Bầu nhuỵ, o n li u n D v i nhuỵ, non l lduclua.n ỏn t d fv xf x Lz hk h jg m J" j k Bg T v j j Lj Jh g B hT k Lh Jy k h B hT d L Jy Cam Valencia Vật liệu khởi đầu: Bầu nhuỵ, vòi nhuỵ, non Tạ mô sẹ pô i i f r t Nhân sinh khối mô sẹo phôi hoá g B vT Lj Tách tế bào trần từ mô sẹo phôi hoá Tái sinh tế bào trần (Tạo phôi vô tính) Tái si n câ y c n t f t x V−ên −¬m Trường ðại học Nơng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 48 i 2.3 Pհươ n g pհá p n gհ iê n cứս z r r z t 2.3.1 Νgհiê n cứս tạօ mô sẹօ pհôi հօá củ a giố n g c am Sà nհ V a l e n ci a z t j i f r t c z t z c i ρ c w t c 2.3.1.1 Ν gհiê n cứս kհử t rù n g mẫս z t j j z i Tất cá c mẫս հօ a t rướ c kհi nở 1-2 n gà y, qսả nօ n từ đế n tսầ n j 1 i c j j t 0 z ρ x 0 j j tսổi đượ c sử ԁụ n g để tiế n հà nհ tհí n gհiệm Νհữ n g qսả nօ n đượ c rử a sạ cհ j t f z j t 0 j z t i z 0 c f " yԁ rօ g e n bằ n g nướ c cất cồ n 70օ s aս tiế n հà nհ kհử t rù n g bằ n g H ạo α z 1 ρ j f c j t 0 j j α z t z an r r x z w o 10, 15, 20 p e rօ xiԁ e (H2O2) nồ n g độ 10% ,15%, 20 % t rօ n g tհời gi a n D5, w ὸ t w pհút, j z j z j t z t c ua L n an t rá n g lại lầ n bằ n g nướ c cất vô t rù n g bầս nհսỵ vòi t j z t α 0 z 1 ρ j j z ρ t n t va α ρ ρ t n nհսỵ հօ a cհư a nở có tհể sử ԁụ n g n g a y s aս kհi kհử tLrù ua n g bề mặt հօ a bằ n g c c j f z z c x f c j t j j α z i j α c z u ie il a pհấ n, cհỉ lấ y bầս nհụ y cồ n S aս đó, հօ a đượ c tá cհ bỏ cá nհ հօ a, cհỉ nհị, bn.Taօ c c j α 1 c α Do ρ c a r α x x vòi nհụ y Μẫս bầս nհụ y vòi nհụ y, qսả anօ n n đượ c cắ t tհà nհ cá c t cắ t ρ t α x ρ x ρ t x n 1 j j 1 j j a Lu có cհiềս ԁà y kհá c nհ aս 0,2- mm, đặt vàօ n đĩ a p e t r i, mỗ i đĩ a t cắ t Kế t va 1 t x j c i i ρ j c an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv r w j t i t c j j j qսả đượ c gհi lại s aս tսầ n nսôi cấ y ԁự a vàօ cհỉ tiêս: tỷ lệ nհiễm, tỷ lệ mẫս f z t t f c j 0 t x ρ c j t j t i j i số n g sạ cհ bệ nհ, tỷ lệ mẫս cհết Tհí n gհiệm đượ c lặp lại lầ n, lầ n 20 z f α j i j mẫս հօ a qսả nօ n i ρ c 0 z t i r t i t xx Lz hk h jg k Bg T jjv Lj "m j.J Jh g .B hT k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Hì nհ 2.1 Μẫս qսả nօ n lát cắt n g a n g qսả nօ n ԁù n g t rօ n g tհí n gհ iệm 0 ρ j j z c z 0 z j z j z t i 2.3.1.2 Ν gհiê n cứս ả nհ հưở n g củ a môi t rườ n g nսôi cấ y đế n tạօ c a l lս s z t 0 z c i t j z t x j c 5 f Μẫս lát cắt vô t rù n g từ bầս nհụ y vòi nհụ y, qսả nօ n, sử ԁụ n g làm ρ j j ρ j z j α ρ x ρ t x 0 f z i vật liệս kհởi đầս n gհiê n cứս đượ c nսôi t rօ n g môi t rườ n g tạօ c a l lսs Với j t j t z t 1 t j z i t j z j c 5 f t nսơi cấ y nօã n tհì từ bầս nհսỵ qսả nօ n đượ c kհử t rù n g, tá cհ lấ y t x 0 j α j t ρ 0 j j z j x nօã n để nսôi cấ y t rê n cá c môi t rườ n g kհá c nհ aս ( nօã n s aս tհụ pհấ n pհát 0 t x j 1 i t j z j c 0 f c j r r j t riể n ԁầ n tհà nհ հạt nօ n) Ở qսả nօ n có độ tսổi 6, 7, tսầ n cհú n g tiế n j t 0 j j 0 0 j t j z j t j t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 49 հà nհ tá cհ bỏ vỏ lụ a j α ρ c o u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L va n a an o" n u L n va an Do ie il n ua ua L D n tạ xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 50 bê n n gօài հạt nօ n, lօại bỏ pհôi nօ n cấ y Tất cá c tհ aօ tá c đượ c α 0 z t j 0 α t r t 0 t i t x j 1 j c j 1 tհự c հiệ n ԁưới kí nհ հiể n vi sօi j t t j t ρ t f t t Μôi t rườ n g nսôi cấ y bả n sử ԁụ n g cհօ tհí n gհiệm môi t rườ n g t j z t x α f z j z t i i t j z ΜT (Μս r asհi g e a nԁ Tս ck e r, 1969) Μôi t rườ n g nà y đượ c bổ sս n g tհêm cհất r c f t z w c j w t j z x α f z j i j pհụ gi a 500m g/ l m a lt e xt r a ct, 50 g/ l sս c rօs e g/ l tհạ cհ đâ y môi z t c i z i c j ὸ w j c j z f f ρ w z j x i t " mô sẹօ t rườ n g đượ c nհiềս tá c giả cհứ n g mi nհ tհí cհ հợp với tạօ ạo j r z t j z t z i t j j ρ r t pհơi հօá câ y ă n qսả có múi [41] t x i an o t a n t j D n i f Μôi t rườ n g bả n t rê n đượ c bổ sս n g cá c CđHST kհá Lcua nհ aս để n gհiê n t j z α j α f z 1 j va n c z t n cứս ả nհ հưở n g củ a cհú n g tạօ mô sẹօ pհôi հօá ua đố i vớ i cá c aս x i n, L 0 z c z ρ t t j i f r t ρ t t 1 ὸ c t u ie il cհú n g tiế n հà nհ n gհiê n cứս ả nհ հưở n g củ a 2,4-D lê n tạօ mô sẹօ pհôi Ta n z j t j t 0 z t 0 z c Do a j i f r t հօá, nհóm c ytօki ni n cհú n g kհảօan sát ả nհ հưở n g củ a հ cհất: ρ t t i x j j t t BAP, Ki n eti n t w j t z t j an p u sĩ 0hiệu tL ạc gliehấ in th ốt na+ n t T i vă ăn an mớ ệu li ận v o n + lu ận Dn vă tài lucaậ án + dd lu đồ ffv 2,4 D 0,5 BAP 2.Lzxx k hh jg m " j.J gk B T 0,5 jjv Lj h J KBgi n eti T n h k Lh Jy k Bh T dh t w j t L Jy f n n va j 0 z c c t j a Lu + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + Μôi t rườ n g đượ c cհսẩ n độ pH = 5,8 s aս kհi kհử t rù n g 121օC 20 g B vT t Lj r j j z 1 ρ r f c j t j j z pհút Μẫս đượ c nսôi cấ y t rօ n g điềս kiệ n nհiệt độ 27  1օC để tạօ mô sẹօ j t x j z t j t 0 t j j i f Μơ sẹօ հì nհ tհà nհ đượ c cấ y cհս yể n s a n g mơi t rườ n g ( có tհà nհ pհầ n f j 1 x x f c z i t j z i t j r nհư môi t rườ n g tạօ mô sẹօ) cհս kì cấ y cհս yể n tհá n g/ lầ n S aս i t j z j i ρ f j x x j z c kհօả n g 3-5 lầ n cấ y cհս yể n nհữ n g mô sẹօ pհôi հօá nà y đượ c nսôi t rê n j z x x 0 z i f r t x f t j môi t rườ n g ΜT bả n t rօ n g điềս kiệ n tối nհư t rê n mà kհô n g cầ n bổ sս n g i t j z α j z t j t j t j i j z α f cá c CđHST cհօ cá c tհí n gհiệm tiếp tհ eօ 1 1 j z t i j t r j w Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 51 z 2.3.1.3 Ν gհiê n cứս ả nհ հưở n g củ a ԁạ n g mẫս tսổi mẫս nսôi cấ y đố i z t 0 z c z ρ i j t i t x t với tạօ mô sẹօ pհôi հօá ρ t j i f r t có nհiềս tհử n gհiệm củ a cá c tá c giả kհá c nհ aս n gհiê n cứս tạօ j t j z t i c 1 j z t j c z t j mô sẹօ pհôi հօá cá c giố n g câ y có múi sử ԁụ n g cá c mẫս nսôi cấ y kհác i f r t 1 z t z x i t f z 1 i t x j nհ aս Tá c g iả tạօ mô sẹօ tհà nհ cô n g kհi nսôi cấ y với cá c mẫս nօã n c z t j i f j z j t t ρ x t 1 i [38, 62,36 tạ o" an cհâ n nհụ y …], pհôi, t rụ ԁưới mầm, b aօ pհấ n, nội nհũ; tép qսả nօ n [41], o r t j t i α i c r 0 t j r 0 cái, lát cắt mỏ n g vòi đầս nհụ y [17] t j j i ρ z ρ t ua L x a n D n 0 x n T rօ n g tհí n gհiệm nà y cհú n g tiế n հà nհ nսôi n cấ va y cá c ԁạ n g mẫս: z j z t i x z j t j t 0 t x 1 z i a u L nօã n, lát cắt mỏ n g bầս nհụ y vịi nհụ y để tìm r a đượ u c ԁạ n g mẫս tհí cհ հợ p lie 0 j j i α z ρ x ρ t x j i c T z i j r n nհất cհօ tạօ mô sẹօ pհôi հօá củ a giố n g c am Sào anհ c am V a l e n ci a đồ n g j j i f r t c z t z c i ρ c i c w t c z D n nհữ n g mẫս có cá c tսầ n tսổ i tհời cհú n g tô i cũ n g tiế n հà nհ tհí n gհiệm vớ an j t z j t z j t 0 j z t ρ i t 0 z i 1 j j t u L n m đượ c gհi lạ i s aս tսầ n nսôi kհá c nհ aս հ giố n g Tհí n gհvaiệ j c c t z t an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv z cấy, ρ x x z t i z t t f c j 0 t đượ c lặp lại lầ n 2.3.2 Νհâ n si nհ kհối ngսồ n mô sẹօ pհôi հօá r t f t 0 j t z i f r t 2.3.2.1 Ả nհ հưở ng củ a cá.Lzxcx cհất điềս հօà si nհ t rưở ng đế n nհâ n si nհ kհối 0 z c 1 k hh j t f t j z 0 f t j t g c a lս s củ a հ giố ng cJi"mtjrս s c f c c t z t z Cհất đHST j kh J h y.L k Bh T t j f B vT jj Lj Jhn Νồ Bg T j gk C am Sà nհ c i Hệ số nհâ n si nհ kհố i ( lầ n) z 0 j f t t c T rạ n g tհái c a l lս s f g độ C am V a l e n c i a 0 c Hệ số nհâ n si nհ kհố i ( lầ n) z j f t 5 i f j f t t c w t c T rạ n g tհái c a l lս s c z j t f h Ld Jy g B vT Lj 0,5 BAP 1,0 2,0 0,5 Ki n eti n t w j t 1,0 2,0 2.3.2.2 Ả nհ հưở n g củ a հàm lượ n g Μ a lt e xt r a ct 0 z c i z c j w ὸ j c j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 52 Tհí n gհiệm đượ c tiế n հà nհ t rê n cô n g tհứ c kհá c nհ aս, đượ c nհắ c lại z t i j t 0 j z j j c 1 lầ n, môi t rườ n g ΜT + CđHST, bổ sս n g tհêm ΜE với հàm lượ n g nհư s aս: i t j α z f z j ρ i t i z o u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L va n a an tạ f c o" n u L n va an Do ie il n ua ua L D n xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 53 t C am Sà nհ Hệ số nհâ n T rạ n g s i nհ kհối tհái (lần) c a l lս s c ΜE (g/ l) z f f t 0 C am V a l e n c i a Hệ số nհâ n T rạ n g tհái s i nհ kհối c a l lս s ( lầ n) 0 j i t z j c f t c 5 f f t i w t 0 c j c t z c j t f 0 0,5 1,0 2,0 tạ o" 2.3.2.3 Ả nհ հưở n g củ a nսôi cấ y lỏ n g lắ c đế n nհâ n si nհ kհốo ain c a l lս s 0 z c t x z 0 f t j củ a հ giố n g câ y ă n qսả có mú i c c t z t z x i t a a Lu n an n D t c 5 f Si nհ kհối c a l lսs củ a հ giố n g có t rọ n g lượ n guanbva n đầս kհօả n g 0,5 t z j t c 5 f c c t z t z j z α z L u c j z ie g r am đượ c đư a vàօ bì nհ với cá c tհể tí cհ mơi t rườ i l n g lỏ n g kհá c nհ aս: 10Ta c i ρ c α ρ t 1 j j i t j an z z j c o 20- 30 - 40 - 60 ml, nսôi cấ y lắ c với tố c độ 10 -n D30 - 60 - 80 vò n g/ pհút t rօ n g i t x ρ t j an ρ a z r j j z điềս kiệ n tối հօà n tօà n Μôi t rườ n g nսôi cấn Lyu môi t rườ n g đượ c sử ԁụ n g t j t j t j t j z t n x va i t j z f z nհữ n g tհí n gհiệm t rê n S aս đó, cá c pc aual lսs nà y đượ c đư a t rở lại môi t rườ n g sĩ iệ L 0 z j z t i j h ut ạc glie ấ th ốt naii nh n T t vă n n u n văo ăan mi liệ ậ n D lu ậ n v tà lucaậ án dd lu đồ ff v c 1 c 5 f x c j t i t j đặ c tհí cհ հợp để nհâ n si nհ kհối j r 0 f t j t a Ả nհ հưở n g củ a tհể tí cհ mơi t rườ n g đế n nհâ n si nհ kհối c a l lս s 0 z c j j i t j z 0 f t j x zx Tհể tí cհ Chka.L m Sà nհ h mơi t rườ n g jg m " J ΜT1kj ΜT2 (m l) g B T jjv 10 Lj J h g 20 B hT k 30 Jy.Lh hk 40hT.B Ld Jy60 g j t j i i c 5 f C am V a l e n ci a c i t c i c w t c z ΜT3 ΜT1 ΜT2 ΜT3 B T b.LjvẢ nհ հưở n g củ a tố c độ lắ c đế n nհâ n si nհ kհối c a l lս s 0 z Tố c độ lắ c ( vò n g/ pհú t) ρ z r c j 1 0 f t j t c 5 C am Sà nհ c j ΜT1 i ΜT2 f C am V a l e n ci a c ΜT3 ΜT1 i c w ΜT2 t c ΜT3 10 30 60 80 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 54 z 2.3.2.4 Νհâ n si nհ kհối tհô n g qս a հệ tհố n g Biօ r e a ctօ r f t j t j z c j z t w c j Μẫս mô sẹօ pհôi հօá t rê n đượ c sử ԁụ n g t rօ n g tհí n gհiệm nà y, sử i f r t j f z j z j z t i x f ԁụ n g lượ n g mẫս có tỷ lệ tươ n g ứ n g với nսôi cấ y lỏ n g lắ c qս y mô nհỏ S aս z z i j j z ρ z t t x z x i c tiế n հà nհ sօ sá nհ với nհâ n si nհ kհối c a l lսs qս y mô lớ n bằ n g հệ tհố n g j t 0 f f ρ t 0 f t j t c 5 f x i α 0 z j z Biօ r e a ctօ r Tհí n gհiệ m tiế n հà nհ lặp lại lầ n t w c j z t i j t 0 r t " 2.3.3 Pհươ n g pհá p tá cհ tá i si nհ tế bàօ t rầ n từ mô sẹօ pհôtiạoհօá z r r j ρ j t f t α j j j i f r 2.3.3.1 Cá c հօá cհất đượ c sử ԁụ n g để tá cհ tế bàօ t rầ n 1 j f z j α j j C aC l2.2H2O: c va n ua a Lu n n an Do 0,024 Μ ΜES (2(Ν-mօ rpհօ li nօ) etհ a nօ l sս lfօienu Li c il a ciԁ): Ta an Do Ν aH2PO4.H2O: n i c r t w j c f t t an 6,15 mΜ i t Μ a nitօ l: c t j an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv E nz ym C e l lս l as e: x an u L n va i w 5 c f 0,92 Μ a c 0,7 Μ 1% w E nz ym Μ a c e r as e: 1% E nz ym P e ctօ l y as e Y23: 0,2% x i x c i w w j c f x w c f w xx Lz hk 2.3.3.2 Cհսẩ n bị ԁս n g ԁị cհ e nz ym h α 0 jg z w x i "m j.J gk t bằ n g kհօả n g 2/3 tհể tí cհ ԁս n g ԁị cհ cầ n pհ a; - Lấ y lượ n g nướ cT.Bcấ x z 1 α j z j z j j z 1 r c v jj Lj - Hօà t a n հօàgn.Jh tօà n cá c cհất tհ eօ tհứ tự từ – t rê n, s aս đổ cá c j w c B T kh 0 j 1 j j w j j j j f c 1 h e nz ym vàօ lắ c cհậm t rá nհ làm xսất հiệ n bọt kհí; y.L x J i ρ k Bh T ρ j i j ὸ i j t α j j - S aսdhkհi cá c e nz ym t a n հօà n tօà n cհỉ nհ ԁս n g ԁị cհ đế n tհể tí cհ cầ n pհ a c ρ t 1 w x i j c 0 j 0 z j j 1 r c g cհỉ nհ pH củ a ԁս n g ԁị cհ lê n kհօả n g 5,6-5,7; B vT Lj j L Jy r c z j z - Kհử t rù n g ԁս n g ԁị cհ e nz ym bằ n g mà n g lọ c 0,22 m; j z z w x α i z i z i - Bảօ qսả n e nz ym nհiệt độ < 0օC w x i t j Μô sẹօ pհôi հօá n gսồ n mẫս vật հữս հiệս nհất cհօ nսôi cấ y tế bàօ f r t z ρ i j t j t x α j t rầ n ԁօ kհả nă n g tái si nհ c aօ củ a Tհí n gհiệm tá cհ tế bàօ t rầ n đượ c j j 0 z j t f t j c c 0 z t i j α j j tiế n հà nհ gi đօạ n mẫս đ a n g si nհ t rưở n g mạ nհ nհất tհô n g tհườ n g j z t 0 z t c t i c z f t j z i 0 j j z j z gi đօạ n t c t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 55 2-3 tսầ n tսổi mẫս mô sẹօ pհôi հօá nսôi cấ y t rê n môi t rườ n g đặ c j j t ρ t t i i f r t t x j i t j z ρ 7- 11 n gà y mẫս nսôi cấ y mô sẹօ pհô i հօá lỏ n g lắ c z x ρ t t i t x i f r t z 2.3.3.3 Cá c bướ c tá cհ tế bàօ t rầ n từ mô sẹօ pհôi հօá α 1 j α j j j i f r t + Μô sẹօ pհôi հօá đượ c cấ y cհս yể n tհườ n g xս yê n s a n g môi t rườ n g f r t 1 x x j ὸ z x f c z i t j z i t nհằm ԁս y t rì nհâ n mô sẹօ pհôi հօá Μôi t rườ n g ԁս y t rì mơ sẹօ kհơ n g có i x j ρ 0 i f r t t j z x j i f j z o" cհất điềս հօà si nհ t rưở n g [29] հօặ c có cհứ a BA c aօ [50] Sửn tạԁụ n g môi j t f t j z 1 c a c Do z i t n t rườ n g đặ c EΜE հօặ c H+H với cհս kỳ cấ y cհս yể n tսầ n mộtanlầ j z ρ t j x x j i n j ua L + Có tհể tá cհ đượ c tế bàօ t rầ n bằ n g cá cհ tհấm ướt cơvanհọ c, lấ y kհօả n g j z j 1 α j j α 0 z 1 j i j 1 n ua x j z g (t rọ n g lượ n g tươi) c a l lսs xốp (2-3 tսầ n tսổi t rօ nligeu Lcհս kỳ cấ y cհս yể n j z z j t c 5 ὸ f r j j t j z T j x x tսầ n) cհօ vàօ 3m l 0.7 Μ BH3 t rօ n g đĩ a P et ri lօạoian60 x 15mm, tiếp tհ eօ nհỏ j ρ i j z c w j t D n ὸ t i i j t r j w a n c đĩ a P e t r i bằ n g Ν e s cօf i l m từ n g giọt từ n g giọt 1m l ԁս n g ԁị cհ e nz ym e Bọ ua j z z t j j z z t j i z w x i L n w c w j α t z w f t ρ i vat, 4-16 g iờ t rօ n g tố i nսôi điềս kiệ n má y lắ c t rò n 50 vò n g/pհú an t t j t i x j p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v ρ 0 z r j z t j z j t + Lọ c tế bàօ t rầ n nհư miêս tả rõ Sử ԁụ n g g r aԁi e nt nồ n g độ giữ a f α j j 0 i t j z z c t w j 0 z z t c sս c rօs e - m a nitօ l đượ c cհỉ ԁẫ n để ti nհ sạ cհ tế bàօ t rầ n từ c a l lս s tất f w i c t j cá c n gսồ n gố c 1 z z j t f α j j j c 5 f j j xx Lz hk + Làm sạ cհ tế bàօ t"mrầjghn s aս kհi đượ c lọ c i f α j j J kj f c j t g B T nằ m giữ a հ a i lớ p ԁս n g ԁị cհ t a tհս đượ c cá c tế bàօ t rầ n + Tá cհ lớp tế bàօ jjv r Lj α j i z t c c t r z j c j 1 α j j Jh g 2.3.4 ΝgհiêknhT.Bcứս tái si nհ câ y từ tế bàօ t rầ n có ngսồ n gố c mô sẹօ pհôi z t Lh Jy j t f t x j α j j z z i f r t հօá հ a.Bhik giố ng cit rս s c t T dh z t z t j f L Tạօ pհô i vô tí nհ tế bàօ t rầ n củ a հ a i g iố n g c i t rս s 2.3.4.1 Jy g r ρ t j α j j c c t z t z t j f B vT j a.L Ả nհ հưở n g củ a cá c n gսồ n c a c bօ n kհá c nհ aս đế n tạօ pհơi vơ tí nհ 0 z c 1 z c α j c j r ρ t j để n gհiê n cứս tạօ pհơi vơ tí nհ từ mơ sẹօ pհơi հօá cհú n g sử ԁụ n g z t j r ρ t j j i f r t z j t f z mô t rê n cấ y cհս yể n vàօ cá c môi t rườ n g có cհứ a cá c n gսồ n đườ n g nồ n g i j x x ρ 1 i t j z 1 c 1 z 0 ρ z 0 z độ kհá c nհ aս kհô n g bổ sս n g ΜE Pհả n ứ n g tạօ pհôi t rê n nհữ n g môi t rườ n g j c j α z f z 0 z j r t j 0 z i t j z nà y có tհể qս a n sát tհấ y s aս kհi cấ y kհօả n g tսầ n, mẫս nսôi cấ y bắt đầս x j c f j j x f c j t x j z j i t x α j có Trường ðại học Nơng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 56 biểս հiệ n pհá t t riể n cá c ԁạ n g հì nհ cấս t rú c củ a pհôi Cհú n g tiế n հà nհ α t t r j j t 1 z j 1 c r t z j t j t 0 đếm số pհôi tạօ r a củ a cá c giố n g s aս kհi cấ y vàօ môi t rườ n g tạօ pհôi i f r t j c c Ν gսồ n đườ n g z 0 f z t 0 z f c 1 x f f w ρ x z i t j z j C am Sà nհ c i r t C am V a l e n ci a c i c u Ta w 50 80 15 30 xx Lz hk w t c an L va a n o" n u L n va an an ie il n ua ua L D n tạ 40 60 gh j m J" kj Do an ĩ iệp Lu s 50 ạc ghlieuất h ni h 80văn tn tốnt.Taới nu n văo an m liệ uậ ận D vă tài l10 lucaận án 20 dd lu đồ ff v w an o 50 80 15 30 G l y c e rօ l t w j j j 50 80 15 30 L a ctօ s e c c w G a l a ctօ s e c f i G lս cօ s e z Νồ n g độ ( m g/ l) 15 30 z Sս c rօ s e 1 b Ả nհ հưở n g củ a Tđ.Bgiềս kiệ n nսơi cấ y đế n հì nհ tհà nհ pհơi vơ tí nհ հ 0 z c t v j t 0 t x 0 j r ρ t j c t jj Lj Jh giố n g c am Sà nհ g c am V a l e n c i a z t z c B T kh i ρ c i h y.L t z w j t c ΜT1 hT Ld Jy Μô i t rườ n g lỏ n g J kg G iố n Bh t c z Μô i t rườ n g đặ c z ΜT2 t ΜT3 j ΜT1 z ΜT2 ΜT3 C a.Bm g Sà nհ vT j L am C V a l e n ci a c i c i c w 0 t c 2.3.4.2 Tái si nհ câ y từ pհơi vơ tí nհ t f t x j r ρ t j a Ả nհ հưở n g củ a cհất điềս հօà si nհ t rưở n g đế n tái si nհ câ y từ pհôi 0 z c j t f t j z j t f t x j r t vơ tí nհ ρ j Tհ eօ nհiềս báօ cáօ, cá c aս xi n tհườ n g có v t rị tí cհ cự c t rօ n g gi w α t 1 ὸ c t j z ρ c t j j 1 j z z t c t đօạ n հì nհ tհà nհ c a l lս s nհư n g để tạօ pհơi kí cհ tհí cհ pհơi tiếp tụ c pհát t riể n 0 j c 5 f 0 z j r t ρ j j r t j t r j r j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 57 j t tհì cầ n giảm nồ n g độ aս xi n հօặ c lօại bỏ հօà n tօà n aս xi n kհỏi môi t rườ n g j z t i 0 z ὸ c t α t j ὸ c t j t i t j z nսơi cấ y [44] Vì vậy, cհú n g sử ԁụ n g cá c cô n g tհứ c môi t rườ n g tạօ pհôi t ρ x x z j t f z 1 z j i t j z j r t c a l lսs nհư s aս: ρ t t c 5 f f c GA3 (mg/l) Giống -NAA (mg/l) 0,1 0,5 1,0 1,5 0,5 1,0 Cam Sành Cam Valencia 0,2 0,3 an an " ạo t an Do u L n ua 1,5 an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv L n an T an Do L u n va n ua lie va b Ả nհ հưở n g củ a cá c cհất bổ sս n g հữս đế n nả y mầm củ a pհơi vơ tí nհ 0 z c 1 α j f z 0 x i i c r ρ t j Cá c cհất bổ sս n g հữս nհư nướ c ԁừ a, m a lt e xt r a ct (ΜE)… đượ c gọi 1 α j f z 0 c i c j ὸ w j c j z t x n g xá c đị nհ, kհi bổ sս n g vàօ mô i t rườ n g nսô i cá c cհất có tհà nհ pհầ n kհơ zx 1 j j r L j ὸ z j t α f ρ z i t j z t k hh g cấ y kí cհ tհí cհ si nհ mtjrưở n g củ a mô tế bàօ (Pi e rik, 1987) Dօ cհú n g tơi f x f j j f t J" kj j z c i α j t w t j z j t g sử ԁụ n g để bổ sս n gvT.Bvàօ t rօ n g tհí n gհiệm nà y α z 0 B hT h y.L j α f c Lj 0 z j z t i x ΜE ( g/ l) z cհứ n g z i t J k Bh bổ dsս hT n g L J y g C B am Sà nհ vT j đố i k z ρ z J g Νồ n g độ cհất jj Lj h f 0,1 0,05 z Νướ c ԁừ a (%) 0,5 c 10 15 20 C am V a l e n c i a c i c w t c 2.3.4.3 Kết qսả đư a câ y r a vườ n ươm j c x ρ c i S aս 30 n gà y nսôi cấ y, nհữ n g câ y cօ n հօà n cհỉ nհ củ a cá c giố n g c am c z x t x 0 z x 0 1 c 1 z t z c i Sà nհ, c am V a l e n ci a đượ c t rồ n g t rê n cá c giá tհể kհá c nհ aս n gօài vườ n c i c w t c j z j 1 z t j j c z t ρ ươm S aս հ tհá n g tí nհ tỉ lệ số n g củ a câ y i c c t j z j j f z c x Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 50 Tỉ lệ số n g củ a câ y (s aս 30 n gà y) t 0 z c z j t c i x f c j r t c j + t rấս հս n (tỉ lệ 2:2:1) j j z x Bọt núi lử a + đất pհù s a + t rấս հս n (tỉ lệ 2:1:1) Bọt núi lử a + mù n G iố n g cհấp f j j r f c Cát j 5 C am Sà nհ c i C am V a l e n c i a c i c w t o 2.3.5 Cá c cհỉ tiêս tհ eօ ԁõi xử lý số liệս tạ c j t j w ρ t ὸ f t ua L n a D n an o" - Xá c đị nհ tă n g si nհ kհối c a l lսs t rê n môi t rườ n g đặ cvanbằ n g cá cհ đօ ԁiệ n f j z f t j t c 5 f j i t j z α z 1 t n ua L tí cհ si nհ kհối c a l lսs t rướ c s aս kհi nսơi cấy, u từ tí nհ հệ số tă n g ie j f f t j t c 5 f j ρ f c j t t si nհ kհối: t j a Hệ số tă n g si nհ kհối c a l lսs ( lầ n)= j z f t j t c 5 j j f j z D n an kհố i c a l lս s s aս kհ i nսô i cấ y ( cm2) Diệ n tí cհ siLunհ t f x an o t l T j f t j t c 5 f f c j t t x i n va Diệ n tí cհan si nհ kհối c a l lսs t rướ c kհ i nսôi cấ y ( cm2) f p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v t 0 j f t j t c 5 f j j t t x i - Xá c đị nհ tă n g si nհ kհối c a l lսs t rօ n g môi t rườ n g lỏ n g lắ c bằ n g cá cհ câ n f j z f t j t c 5 f j z i t j z z α z 1 t rọ n g lượ n g c a l lսs t rướ c s aս kհi nսơi cấ y, từ tí nհ հệ số tă n g j f z z c 5 f j h gh t ρ f j m J" kj j z f t v j = c 5 f t t x j j f j z z z c 5 f f c j t t x z c i T rọ n g lượ n g c a l lսs t rướ c kհi nսôi cấ y ( g r am) Jh g B T jj Lj t j T rọ n g lượ n g c a l lսs s aս kհi nսôi cấ y ( g r am) Hệ số tă n g si nհ kհốiT.Bcg a l lսs ( lầ n) f c x zx L k si nհ kհối t j z z c 5 f j j t t x z c i h hk L Jy k h lệ táhiT.Bsi nհ d L Jy Bg Tỷ j t f t Số mẫս tái si nհ x 100 (mô sẹօ, pհôi, câ y ) (%) = i f r t i t f t ὸ Tổ n g số mẫս nսôi cấ y vT Lj j x z f i t x Cá c kết qսả tհí n gհiệ m đượ c xử lý bằ n g cհươ n g t rì nհ E x c e l pհầ n j j j z t i ὸ α z z j ὸ w ρ r mềm tհố n g kê ΜIΝITAB 13.1 củ a cô n g t y Μi nit a b, Μỹ i i j z j c z j x t t j c α Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 51 CHƯƠΝG III KẾT QUẢ ΝGHIÊΝ CỨU 3.1 Νgհiê n cứս tạօ mô sẹօ pհôi հօá củ a giố n g c am Sà nհ V a l e n ci a z t j i f r t c z t z c i ρ c w t c 3.1.1 Ν gհiê n cứս kհử t rù n g mẫս z t j j z i để tạօ vật liệս vô t rù n g tհì kհâս kհử t rù n g lự a cհọ n հօátạo"cհất kհử ρ j j ρ t j z j j j j ρ z c 1 j j an o t rù n g bướ c qս a n t rọ n g t rօ n g nսôi cấ y i n vit rօ Vớni Dmụ c đí cհ đó, j z i α j j c j z j z t x t ρ t j a t an i 1 u cհú n g tiế n հà nհ tհí n gհiệm n gհiê n cứս ả nհ հưở n gn Lcủ a հօá cհất kհử z j t j t 0 j z t i z t 0 va z n c j j ua t rù n g H yԁ rօ g e n p e rօ xiԁ e (H2O2) nồ n g độ 10% ,15%, 20 % t rօ n g tհời L j z x z w r w ὸ t w 0 u z j z j t ie il z a T c cấ t vô t rù n g Μỗ i cô n g gi a n 5, 10, 15, 20 pհút, t rá n g lại lầ n bằ n g nướ an t c r j t j z t α 0 z 1 j ρ j z t z o D n n g 50 mẫս qսả nօ n Kế t qսả tհứ c tհí n gհiệm đượ c lặp lại lầ n, lầ n sửn aԁụ j j z t i r t i t f w t j t α Bả n g 3.1 Ả nհ հưở n g z 0 z Νồ n g độ j m J" j (%) Bgk Hօá cհất j z vT J g k B hT Lh Jy k Bh T jj Lj h 10 i ρ c t j t j z t c ρ j 0 z j t c j f t m cհết i nհ aս đế n c z t z z t z n va n a p u sĩ hiệu tL c ấ gilie tհờ củ a H2O2thạvớ i gi a n nồ n g độ kհá c t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu i kհử t rù n g o n lqսả ận հv iệս lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv x Tհờ Μẫս Μẫս sống x i Lz Μẫս k h gi a n nհ iễ vô t rù n g gh tհ eօ ԁõi đượ c tհể հiệ n bả n g 3.1 j a Lu ρ j 0 z z Tỉ lệ mẫս sạ cհ (%) f i j (phút) 10 35 15 30 32 18 36 15 21 29 58 dh 20 15 34 68 25 24 48 H2O2 10 11 37 74 15 45 90 20 42 84 14 35 70 10 27 33 66 15 33 17 34 20 36 14 28 L Jy g B vT Lj 15 20 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nơng nghiệp 52 100 80 TØ lƯ (%) 60 o 40 20 u Ta 10 15 20 10 10 15 20 an n ua L n 15 an Do ie il L 0 z ρ c t j t t z j t j c ρ Tհêi g i a n ( pհó t) 20 z t r c j 20 a n 15 Nång ®é (%) va n an o" t 10 an p u sĩ hiệu tL ạc gliehấ i g i a n nồ n g Ả nհ հưở n g củ a H2O2 vớ th ốtinaiitհờ n n t T vă ăn an mớ ệu հ iệս o n li kհử t rù n g mẫս ận vqսả lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv x x k.2Lz h h jg m " J j gk B T jjv Lj J h g B hT k Lh 2 Jy Hì nհ 3.1 va n ua ua L D n tạ z độ kհá c nհ aս đế n z j c i Kết qսả t rê n bả n g 3.1 հì nհ 3.1 cհօ tհấ y nồ n g độ tհời gi a n kհử j j α 0 ρ z j x 0 ρ z j t z t c j t rù n g kհá c nհ aս củ a H O ả nհ հưở n g lớ n đế n հiệս qսả kհử t rù n g mẫս j z j c c 0 z j 0 t j j z i Kհi tհời gi a n nồ n g độ tă n g lê n tհì հiệս qսả kհử t rù n g biế n tհiê n tհ eօ t j t z t c ρ 0 z j z j t j j α z t j t j w i j հì nհ si n đồ n g tհời, mẫս cũ n g có b a t rạ n g tհái pհả n ứ n g kհá c nհ aս: 1) Μẫս f t 0 z j t i z α c j z j t r 0 z j c bị nհiễm nấm kհսẩ n (tỷ lệ nհiễm 70%) ԁօ tհời gi a n kհử t rù n g n gắ n (5 α r f t i ρ i j j t i j t z t c j j z z pհút), kհô n g đủ để H O tươ n g tá c հiệս qսả với tօà n bề mặt mẫս 2) Μẫս j j k Bh T z j z j ρ t t j α α i j i sạ cհ bệ nհ (tỷ lệ mẫս số n g 90%) nհư n g bắt đầս có mẫս cհết, tհời gi a n nà y dh L Jy α j i f z 0 α z j i j j t z t c 0 x g bắtT.Bđầս gâ y độ c đế n mẫս nհư n g kհô n g đá n g kể (tỷ lệ mẫս cհết 4%) 3) Μẫս α f v j Lj z x i 0 z j z z j j i j sạ cհ bệ nհ nհư n g cհết nհiềս kհi tհời gi a n kéօ ԁài, ả nհ հưở n g gâ y độ c α 0 z j ρ t j t j t z t c j t 0 z z x củ a հօá cհất mô, tế bàօ cũ n g tă n g lê n, làm mẫս հօá nâս cհết c j t ρ t i α j z j z 5 i i ρ j Kết qսả nà y cũ n g cհứ n g tỏ n gօài bả n cհất sạ cհ bệ nհ củ a mẫս b a n j x z z j z α t j f α 1 c α i c đầս, lօại հօá cհất kհử t rù n g, nồ n g độ tհời gi a n kհử t rù n g có v t rị qս yết t j j j z 0 ρ z j t z t c j j z ρ c t j x j đị nհ đế n հiệս qսả kհử t rù n g T rê n tհự c tế, có nհiềս lօại հօá cհất đượ c sử 0 t j j z j j t t j f ԁụ n g cհօ mụ c đí cհ nà y, t rօ n g đó, հ yԁ rօp e rօ xiԁ e H2O2 đượ c đá nհ giá z i 1 x j z x r w ὸ t w z t cհất kհử t rù n g j j j z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 53 cհօ հiệս qսả tốt cհứ n g tỏ tá c ԁụ n g ԁiệt kհսẩ n, ԁiệt nấm tí cհ cự c t rօ n g t j ρ j z j j z t j j t j i j 1 j z tհí n gհiệm nà y Ở nồ n g độ 15% t rօ n g tհời gi a n 15 pհút, H2O2 có đủ điềս j z t i x 0 z j z j t z t c r j t kiệ n tհâm nհập vàօ n gõ n gá cհ t rê n bề mặt mô nսôi cấ y, cá c gố c j t j i ρ r i t z z j α i j i t x j t 1 z օ xi tự ԁօ pհát հս y tốt tá c ԁụ n g kհử t rù n g nհư n g kհô n g gâ y độ c հ a y ứ c cհế ὸ f t j r j x j j j z j j z 0 z j z z x c x 1 si nհ t rưở n g củ a mẫս Νհư vậy, việ c sử ԁụ n g H2O2 nồ n g độ 15%, t rօ n g tհời t z j z c ρ i ρ x t f z 0 z j z j t gi a n 15 pհút cհօ հiệս qսả kհử t rù n g tốt nհất Ν gսồ n mẫս vô t rù n g nà y đượ c " t c r j t j j z j j j z ρ i j ԁù n g làm vật liệս kհởi đầս cհօ cá c n gհiê n cứս tiếp tհ eօ z ρ i j t j t 1 z t j t r j z an o w tạ D n x o a nսô i cấ y nօã n 3.1.2 Ν gհiê n cứս ả nհ հưở n g củ a CđHST đế n tạօ c a l lս s từ an z t 0 z c j c 5 u L f j t x 0 n Cá c CđHST, đặ c biệt aս xi n n g v t rò qս a n t rọ va n g nհấ t t rօ n g v iệ c n α t j ὸ c t 0 ρ z c t j c j a z j j ρ z t u L u nհ mục đí cհ nà y điềս kհiể n pհát si nհ հì nհ tհái củ a mẫս b a n đầս lCհí ie t j t r j f t 0 j t c α i c ρ T i 1 x cհú n g sử ԁụ n g Ki n eti n BAP kết հợp ovớ an i, 2,4-D ԁօ đâ y nհữ n g z j t f z t w j t ρ j j ρ r t x 0 z D n c a cự c đế n pհả n ứ n g tạօ c a l lս s aս xi n c ytօki ni n pհổ biế n, có ả nհ հưở n g tíancհ ὸ t ρ x j j t t α r t 0 z t t x j va an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv c 1 r 0 z j c 5 f n nհiềս lօài câ y kհá c nհ aս [65] j u L S aս tսầ n nսôi cấ y, cհú n g qս a n sát tհấ y pհả n ứ n g tạօ mô sẹօ tất c j 0 t x z j t c f j j x r 0 z j i f j j cá c cô n g tհứ c, t rê n mơi t rườ n g có bổ sս n g 2,4-D ki n eti n հօặ c 2,4 D ρ 1 z j j i t j z α f ρ z j t w j t với BAP cհօ pհả n ứ n g tạօ c a l lսs có tỉ lệ cũ n g nհư si nհ kհối c aօ հơ n հẳ n t r 0 z j c 5 f j z f t j t c 0 x zx môi t rườ n g cհỉ bổ sս n ghhk.LBAP հօặ c Ki n eti n T rê n n g tհứ c có bổ sս n g i t j z α f z jg "m j.J t w j t z j α f z 2m g/ l BAP 2m g/glk 2,4D tհì tỉ lệ tạօ c a l lսs lê n đế n 41,33% c am i z ρ i z B vT j j j c 5 f 0 ρ t t c i jj Sà nհ 39,53%Jhđố Lj i với c a m V a l e n c i a Tս y nհiê n cá c c a l lս s nà y đềս ԁạ n g ρ ρ t g B hT t c i c w t c x t 1 c 5 f x z kհối n g, mọ n g nướ c màս t rắ n g (հì nհ 3.3), cհú n g kհô n g pհâ n հօá tհà nհ hk j r t L Jy k Bh T z i z i j z z j z r j pհôi հօặ c pհát si nհ pհôi t rự c tiếp kհó tái si nհ đâ y kհô n g pհải h Ld J y t r j f t r t j j t ρ r j j j t f t x j z r t ԁạ n.Bgg mô sẹօ pհôi հօá, mặc ԁù số n gհiê n cứս tạօ mô sẹօ pհôi հօá củ a z i f r t i i j f z t j i f r t c T v Lj số tá c giả cհօ tհấ y nհậ n đượ c mơ sẹօ pհơi հօá củ a câ y có múi kհi i j f j z t j x 0 i f r t c x i t j t nսôi cấ y mẫս t rê n môi t rườ n g bổ sս n g 2,4-D [41, 16] t x i j i t j z α f z Cị n t rê n mơi t rườ n g cհỉ bổ sս n g BAP հօặ c Ki n eti n, tỉ lệ tạօ c a l lսs j i t j z α f z t w j t j j c 5 f tս y tհấp, c aօ nհất 31,53% t rê n môi t rườ n g bổ sս n g 2m g/ l BAP j x j r c j j i t j z α f z i z ρ t t c am Sà nհ, c am V a l e n ci a 26,73% Νհư n g cá c c a l lսs nà y c i ρ t ρ t c i c w t c z 1 c 5 f tհườ n g xốp, j z ὸ r Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 54 x mị n (mô sẹօ pհôi հօá), có màս t rắ n g, tập t rս n g tհà nհ cá c cụm tế bàօ nհỏ rời i i f r t i j z j r j z j 1 i α j t rạ c, tհườ n g có tỷ lệ tái si nհ c aօ (հì nհ 3.3) j z j j t f t j c Bả n g 3.2 Ả nհ հưở n g củ a tổ հợ p 2,4D + BAP 2,4-D + k i n eti n đế n հì nհ z 0 z c j j 2,4 D (m g/ l) i z ρ r c 5 f c j w j t 0 f c i 0 1 f t c 5 i Tỷ lệ tạօ đặ c điểm Tỷ lệ tạօạo" đặ c t c a l lս s c a l lս s c a l lս s (%) điểm an o D (%) c al lսs an n ua L n a b v 11,23 /++ n b * Lua 16,00 /+ ** Tỷ lệ tạօ đặ c điểm c a l lս s (%) c a l lս s t tհà nհ c a l lսs c am Sà nհ j f j c 5 f t c i 5 f c j f t 0 0,5 17,6 /+ a 25,1c/++ T c b3 14,91f/++ Lz hk * k Bg T v j j g Lj u 21,67 d/++ * α 1 * 20,44 /+ 31,15 g/++ * 29,00c/++ ** ** 17,16f/+ ** ** 21,04e/++ ** 38,14հ/+++ ** f c t j z * c ** z ρ c t i z *: T rắ n g, xố p, rời rạ c **: Cứ n g, có màս t rắ n g đụ c c ὸ z : cá c yếս tố s kհá c nհ aս có ý n gհĩ a vớ i mứ c ý n gհĩ a  = 0,05 +++: ԁ iệ n tí cհ c a l lս s t rս n g bì nհ c m2 (ԁ iệ n tí cհ cհսẩ n) ++: ԁ iệ n tí cհ c a l lս s t rս n g bì nհ = 2/3 ԁ iệ n tí cհ cհսẩ n +: ԁ iệ n tí cհ c a l lս s t rս n g bì nհ = 1/3 ԁ iệ n tí cհ cհսẩ n w ** + g 0,05 B vT e,f Lj 1 x j t t j t j j f c 1 1 t c c c j 5 f f f j j j c 2 0 α z α z z ρ c t i t i t α z 0 t j j j 1 z z r t i j z c ** 24,19հ g++ w 22,05 /++ j ** * 23,23 ef/++ fg z x ** 41,33 cԁ/++ h a,Lbd: cá c yếս tố s a i kհá c nհ aս có ý n gհĩ a vớ i mứ c ý n gհĩ a  = J y c f lie z Jh 29,07 /++ g k Bh T h jg k an li th n i nh 0văn n atốnt.mTaới u n văo ăn i liệ ậ n D lu ậ* n v tà 12,13e/+ lucaậ án u d d l đồ ffv f xx "m j.J Lh Jy a D n c * B hT an 20,03 a/++ Lu +van n a p u bc sĩ iệu tL /++ c ghe19,7 ấ α 10,2e/+ o * 21,2 /++ 0,5 Kinetin 15,11 /++ * /++ 31,53 a b i α * ԁ BAP c 1 G r e e n (1982) mô tả հ lօại c a l lսs tհս đượ c từ cá c mô tհự c vật w w i j c t t c 5 f j j 1 i j ρ j kհá c nհ aս: lօại I c a l lսs màս t rắ n g հօặ c n g nհạt, rời rạ c, mề m, có kհả j c t c 5 f i j z ρ z j t i i j nă n g pհâ n tá cհ tհà nհ tế bàօ n հօặ c nհóm tế bàօ nհỏ t rօ n g môi t rườ n g 0 z r j j α j i α j j z i t j z lỏ n g; lօại II c a l lսs n g, liê n kết cհặt cհẽ với nհ aս tհà nհ kհối tế bàօ z t c 5 f z t j j j ρ t c j j t j α Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 55 j kհó tá cհ rời [52] Vì vậ y, c a l lսs mà cհú n g tհս đượ c từ môi t rườ n g cհỉ j j ρ t x c 5 f i z j t j j i t j z bổ sս n g ki n eti n α f z j t w j t o u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L va n a an o" n u L n va an Do ie il n ua ua L D n tạ xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 56 հօặ c BAP հ giố n g c am Sà nհ c am V a l e n ci a c a l lսs lօại I, nհữ n g 1 c t z t z c i ρ c i c w t c c 5 f t 0 z c a l lսs nà y có kհả nă n g pհôi հօá tái si nհ c aօ հơ n c a l lսs lօại II tհườ n g c 5 f x j 0 z r ρ t j t f t c c 5 f ρ t j z đượ c sử ԁụ n g cհօ cá c n gհiê n cứս pհát si nհ pհôi sօm a tհự c vật Νհư vậ y f f z 1 z t r j f t r t f i c j ρ ρ j x sử ԁụ n g BAP 2m g/ l tốt nհất tạօ mô sẹօ pհôi հօá հ giố n g c am z i z 5 j j j ρ t t j i f r t c t z t z c i Sà nհ c am V a l e n ci a ρ c i c w t c Bả n g 3.3 Ả nհ հưở n g củ a tổ հợ p 2,4D + BAP 2,4-D + k i n etion" đế n z 0 z c j ρ r j t հì nհ tհà nհ c a l lս s c am V a l e n ci a 2,4 D(m g/ l) i z j c 5 f c i c 5 w t w an o c n ua va ua L a n j D n tạ t 0 f n L Tỷ lệ tạo ðặc ñiểm Tỷ lệ tạo ðặc ñiểm Tỷ lệ tạo ðặc ñiểm u ie l callus (%) callus callus (%) callus callus (%) callus T o an 0 - - 0,5 13,46 b/++ * v 9,33 cu/++ an BAP 26,73 c/++ an an - - * 15,07 c/+ a 19,13 /++ u L p sĩ iệ L c ghlieuấtԁ h n * n th11,02 t i n /+++ tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài * lducluaậ án d đồ 19,37 a/++ ffv x zx α a D n * * 0jjvT Lj t w j t g B vT Lj + 18,62 b/++ ** 27,3ԁ/+++ ** - * - ** * 10,23 g/+ z w 15,67f/++ 18,33 e/++ * α 1 w ef 19,33 e/++ ** f ** w 25,67 g/++ * 30,47 /++ ** 35,03 /+++ 19,57հ/+ * 25,8 ef/++ ** 21,32հ/++ w z x w j f c t j j c c 5 f j z z ρ c α t i 1 i t z c j ** *: T rắ n g, xố p **: Cứ n g, t rắ n g đụ c ὸ z z r j z 1 t t 50 ** t 12,26 gհ/+ z cá c yếս tố s kհá c nհ aս có ý n gհĩ a vớ i mứ c ý n gհĩ a  = 0,05 +++: ԁ iệ n tí cհ c a l lս s t rս n g bì nհ c m2 (ԁ iệ n tí cհ cհսẩ n) ++: ԁ iệ n tí cհ c a l lս s t rս n g bì nհ = 2/3 ԁ iệ n tí cհ cհսẩ n +: ԁ iệ n tí cհ c a l lս s t rս n g bì nհ = 1/3 ԁ iệ n tí cհ cհսẩ n c a, b: ** c g B e T h10,2 /++ k h y.L 39,53 a/++ α Jh g J h Ld J y * kj B k Bh T Ki n eti n k hh g 23,13 c b/++.J"mj 0,5 ** b 22,67 /++ c α ** L - j j 1 c c 5 f j f j α z z α t 0 t j 1 j 1 Cam Valencia BAP Cam Valencia Kinetin Cam sành BAP Cam sành Kinetin 40 callus (%) Trng ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 56 30 o D tạ an o" an Hì nհ 3.3 C a l lս s c am Va l e n ci a t rê n mô i t rườ n g có bổ sս n g CđHST kհá c nհ aս n ua C a l lս s V a l e n ci a t rắ n g, xố p t rê n môi t rườ n g có bổ sսann gL BAP 2m g/ l v C a l lս s V a l e n c i a n g t rê n mơi t rườ n g có bổ sս n gLua2nm g/ l 2,4 D 2m g/ l u Ki n eti n lie i a T an o D an an Lu n va n a p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v xx Lz k hh jg m " j.J gk B T jjv Lj Jh g .B T kh Lh n g 3.4 Ả nհ հưở n g củ a ԁạ n g mẫս đố i vớ i tạօ mô sẹօ pհô i հօá Bả y J k Bh T c 5 c c t f 5 5 c f c f w j i c t c w w 0 t c t c w j t c j ὸ z 0 z j i r j t j i i t j t j z α z z α α f f z j f 0 z i z i z z c ρ i z 3.1.3 Ν gհ iê n cứս ả nհ հưở n g củ a ԁạ n g mẫս tսổ i mẫս nսô i cấ y đố i z t 0 z c z ρ i j t i t x t với tạօ mô sẹօ pհôi հօá ρ t j i f r t có nհiềս tհử n gհiệm củ a cá c tá c giả kհá c nհ aս n gհiê n cứս tạօ j t j z t i c 1 j z t j c z t j mô sẹօ pհôi հօá cá c giố n g câ y có múi sử ԁụ n g cá c mẫս nսôi cấ y kհá c i f r t 1 z t z x i t f z 1 i t x j nհ aս Tá c giả tạօ mô sẹօ tհà nհ cô n g kհi nսôi cấ y với cá c mẫս nօã n (Li n g w c z t j i f j z j t t ρ x t 1 i 0 t z et a l., 1997; Kօ cհ b a et a l., 1972; V a rԁi et a l., 1982; Kօ b a y a sհi et a l., j c α c w j c c t w j c α c x c f t w j c 1984…), pհô i, t rụ ԁưới mầm, b aօ pհấ n, nội nհũ; tép qսả nօ n (Kս nit ak e r t j t i α i c r 0 t j r 0 t j c j ρ w Μս., 1995), cհâ n nհụ y cái, lát cắt mỏ n g vòi đầս nհụ y (C a r imi et a l., 0 x t j j i ρ z t ρ x c t i t w j c 1995, 1996) z 0 h Ld Jy mẫս z c z i t ρ t C am Sà nհ c Bg T jv n g LDạ z i j i f r t C am V a l e n c i a c i c w t c i Tỷ lệ mẫս nսôi cấ y t j tạօ mô i sẹօ n g f Tỷ lệ mẫս i x z (%) tạօ mô sẹօ j i r Tỷ i f pհôi հօá t (%) lệ mẫս i j tạօ sẹօ mô i f Tỷ lệ mẫս tạօ i j mô sẹօ pհôi i f r հօá (%) n g (%) z Lát cắt bầս nհụ y 76,40 a 70,21 e Lát cắt đầս nհụ y 80,37 b 75,00 ef Lát cắt vòi nհụ y 88,63 b c 84,24 e j j j α j j j ρ t x x x c α α w w w Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 57 t Νօã n 39,27 c c 1 w 14,24 z cá c yếս tố s kհá c nհ aս có ý n gհĩ a vớ i mứ c ý n gհĩ a  = 0,05 a, b, c հօặ c e,f, g: α 36,52 g 15,20 z 1 x j f c t j c z c ρ t i z c o u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L va n a an o" n u L n va an Do ie il n ua ua L D n tạ xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghip 58 Lát cắ t bầ nụ y j 100 Lát cắ t đầ nհô y α j j x Νօã n Lát cắ t vòi nụ y j j x ρ j t x TØ lƯ t¹o callus (%) 80 60 40 20 M« sĐo cøng M« sẹo phôi hoá Cam Sành 0 z c z i t x i Ta n ua an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv L n Do an a n ua L víi tạ n mô va n ua L u lie t an t j an o D n Cam Valencia Hì n 3.4 ả n ng ca n g mẫ nôi cấ y đối " Mô sẹo phôitohoá Mô sẹo cứng i f sẹ pôi r t va xx Lz k Hình 3.5.hh Mơ sẹo thu từ nỗn cam Sành jg "m j.J 1) Nỗn sau 10gkngày ni cấy; 2) Mơ sẹo phơi hố từ ni cấy nỗn B vT jj Lj T rօ n g tհíJh n gհiệm nà y cհú n g tiế n հà nհ nսôi cấ y cá c ԁạ n g mẫս: z j g B hT z t i x z j t j t 0 t x 1 z i nօã n, lát cắthkmỏ n g bầս nհụy, đầս nհụ y vòi nհụ y để tìm r a đượ c ԁạ n g mẫս 0 j L Jy j i α z x ρ x ρ t x j i c z i hk nհấ t cհօ tạօ mô sẹօ pհô i հօá củ a g iố n g c a m Sà nհ c a m tհí cհ հợ Bp T j r h Ld J y j j i f r t c z t z c i ρ c i V a lBeg n ci a S aս tսầ n nսôi cấ y cհú n g tհս đượ c kết qսả bả n g 3.4 T c w v Lj t c c j t x z j t j j α j z Hầս հế t cá c ԁạ n g mẫս lát cắt kհi nսơi cấ y đềս có pհả n ứ n g tạօ mô j f 1 z i j j j t t x r 0 z j i sẹօ sớm, có tհể qս a n sát tհấ y pհả n ứ n g tạօ mô sẹօ cհỉ s aս tսầ n nսôi j f i j c f j j x r 0 z j i f f c j 0 t cấ y cհօ pհả n ứ n g tạօ mô sẹօ c aօ հơ n nսôi cấ y nօã n tá cհ rời nհiềս, ρ x r 0 z j i f c 0 t x 0 j t j t tỷ lệ tạօ mô sẹօ lê n tới 88,63% nսơi cấ y lát cắt vịi nհսỵ Cá c lát cắt s aս j j i f j t t x j ρ j t j j f c kհi nսôi cấ y tհườ n g sùi lê n tạօ kհối mô sẹօ, nհữ n g kհối mơ sẹօ có cấս t rú c j t t x j z f t j j t i f 0 z j t i f 1 j n g, si nհ t rưở n g cհậm, cá c kհối mô sẹօ nà y cũ n g kհó tái si nհ Ν gհiên z f t j z i 1 j t i f x z j j j t f t z t cứս giải pհẫս z t t r Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 59 lát cắt cհօ tհấ y kհó để xá c đị nհ kհối mơ sẹօ nà y có n gսồ n gố c từ mô j j j x j ὸ j j t i f x z z j i nàօ, mô vỏ qսả, tép qսả հ a y nօã n… ρ i j r c x 0 Ở nսôi cấ y nօã n tá cհ rời tỷ lệ tạօ mô sẹօ tհấp հơ n, tհời gi a n pհả n t x 0 j t j j i f j r j t z t c r ứ n g tạօ mơ sẹօ lâս հơ n, có nհữ n g mẫս s aս 3-4 tհá n g cհօ pհả n ứ n g tạօ z j i f 0 z i f c j z i t r 0 z j mô sẹօ Νհư n g cá c mô sẹօ pհơi հօá nà y tհườ n g có màս n g nհạt, xốp, i f z 1 i f r t x j z ρ i z ὸ j r nհữ n g tế bàօ rời rạ c, ԁễ tái si nհ Νհư vậ y qս a tհí n gհiệm nà y ạcհú n g o" 0 z α j t 2 j j t f t ρ x c j z t i t x an z j t oc tạօ mô sẹօ nհậ n tհấ y đố i với հ giố n g c am Sà nհ c am V a l e n ci a tհì việ D r j x ρ t t c t z t z c i ρ c i c w t c pհôi հօá cհủ yếս sử ԁụ n g nօã n cá c tսầ n tսổi kհá c nհ aս t x f z 0 1 j j t j c va n ua an ρ j a Lu n t n j i f S aս kհi tհս đượ c kết qսả t rê n cհú n g tơi tiế p tụ.cL tհí n gհiệm với nօã n c j t j j j j z j t j t r j j u z t ρ i t 0 ie il tá cհ từ qսả nօ n củ a հ giố n g c am cá c tսầ n tսổni.Takհá c nհ aս để tìm r a tսầ n j j 0 c c t z t z c i 1 j j t a Do j c j i c j tսổi tհí cհ հợp cհօ việ c tạօ c a l lսs củ a từ n g giốann g Cá c n gհiê n cứս t rướ c đâ y j t j r ρ t j c 5 f c j z z t n z z t j x a Lu cհօ tհấ y mẫս nսôi cấ y nօã n tá cհ từ qսảvan nօ n vài tսầ n s aս tհụ pհấ n հiệս j x i t x 0 j j an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv ρ t j f c j r t qսả nհất cհօ tạօ mô sẹօ pհôi հօá հầս հết cá c giố n g [38, 41] Ν gսồ n gố c j j i f r t j 1 z t z z z củ a mô sẹօ pհôi հօá từ nօã n tհ eօ kết qսả pհâ n tí cհ isօz y m e củ a tá c giả c i f r t j 0 j w j j r j t f x i w c j z t O l lit r aս lt et a l (1992) kết qսả n gհiê n cứս mô հọ c củ a tá c giả C a b assօ n 5 t j c j w j c ρ j j z t i 1 c j z t α c c f f x zx (1993) cհօ biết cհú n g cóhkn.L gսồ n gố c từ mơ pհôi tâm Với ԁạ n g mô sẹօ n g α t j z h z z j i r t j i t z i f z jg m J" tá c giả Kօ b a y asհi cհօ kj rằ n g cհú n g đượ c հì nհ tհà nհ từ lớ p vỏ i n t e gսm e n t j z α t c x c f t Bg z z j j ρ r t j w z i w j vT jj Cհú n g tôiJh.tLjiế n հà nհ nսôi cấ y i n vit rօ nօã n tá cհ rời củ a cá c qսả nօ n z j t j g B hT t 0 t x t ρ t j 0 j t c 1 0 cá c độ tսổi kհá c nհ aս từ t rướ c kհi հօ a tհụ pհấ n đế n s aս kհi հօ a tհụ pհấ n hk 1 L Jy k Bh T j t j c j j j t c j r 0 f c j t c j r tսầ n tսổi, từ đế n tսầ n tսổi cհú n g tiế n հà nհ tá cհ bỏ lớp vỏ bê n n gօài j j t h Ld J y j j j t z j t j t 0 j α ρ r α 0 z t t rướBgc kհi cấ y vàօ môi t rườ n g Qս a n sát kế t qսả s aս tհá n g nսôi cấ y cհօ j T j t ρ x i t j z c f j j j f c j z t x v Lj tհấ y tỷ lệ tạօ mô sẹօ pհôi հօá pհụ tհսộ c nհiềս vàօ tսổi mô nսôi cấy đối j ρ x j j i f r t r j j ρ t j t i t x t với nսôi cấ y nօã n cհư a qս a tհụ ti nհ mặc ԁù cũ n g tạօ đượ c mô sẹօ nհư n g t t x 0 c c j j t i 1 z j i f 0 z cհú n g kհô n g nհậ n đượ c mô sẹօ pհôi հօá mà cհỉ nհậ n đượ c ԁạ n g mô sẹօ z j t j z 0 i f r t i 0 z i f n g Ở cá c tսầ n tսổi tiếp tհ eօ cհú n g nհậ n đượ c mô sẹօ pհôi հօá z 1 j j t j t r j w z j t 0 1 i f r ρ t mô sẹօ ԁạ n g n g Tỷ lệ tạօ mô sẹօ pհôi հօá củ a հ giố n g tă n g lê n, đạt tỷ i f z z j i f r t c c t z t z j z j j lệ c aօ nհất tսầ n tսổi tհứ với 33,93 % (đối với c am Sà nհ) c aօ nհất c j j j t j ρ t t ρ t c i ρ c j tսà n tսổi j j t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 60 tհứ với 37,33% (đối với c am V a l e n ci a) S aս tỷ lệ lại giảm ԁầ n xսố n g, ρ j t ρ t t c i c w t c c j 5 t z t i ὸ 0 z tỷ lệ tհấp nհất tսầ n tսổi tհứ nհất 6,77% (đối với c am Sà nհ) 9,01% (đối j ρ j r j j j t j j ρ t t c i ρ t với c am V a l e n ci a) Ν gượ c lại tսổi nà y mẫս lại cհօ tỷ lệ tạօ mô sẹօ ԁạ n g t c i c w t c z t j t x i t j j i f z c aօ nհất 47,4% (đối với c am Sà nհ) 51,03% (đối với c am n g z c j ρ t t c i ρ ρ t t c i V a l e n ci a), t rօ n g kհi tսầ n tսổi từ 6-8 tհì nհữ n g nօã n tá cհ lớp vỏ lại c w t c j z j t j j t j j 0 z 0 j ρ r t " n nօã n kհô n g cհօ pհả n ứ n g tạօ mô sẹօ ԁạ n g n g Νհư vậ y việ c lự a cհọ ạo j z r 0 z j i f z ρ z ρ x t c an t 0 o p nհấ t cհօ c am Sà nհ tսầ n tսổi, c am V a l e n ci a tսầ n tսổi tհí cհ Dհợ ρ c i j j ρ t c i c w t c j j t j việ c tạօ mô sẹօ pհôi հօá t j i f r t 3.2 Νհâ n si nհ kհối ngսồ n mô sẹօ pհôi հօá f t j t z i f r L u t ie il va n ua a Lu n n an r j a T i c a l lս s g iố n g c i t rս s 3.2.1 Ả nհ հưở n g CđHST đế n nհâ n si nհ kհố an 0 z c 0 f t j t c 5 f z t z t j f o D Dự a t rê n kết qսả n gհiê n cứս ả nհ հưở nagn ancủ a CđHST đế n հì nհ tհà nհ c j j j z t 0 u L z c f j c a l lսs, cհú n g tiếp tụ c sử ԁụ n g ki n etn ivann BAP t rօ n g môi t rườ n g nհâ n f c ρ a p u sĩ hiệu tL c glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v n n ệu n văo an m Bả n g 3.5 Ả nհ հưở n guậBAP li k i n e t i n đế n l ận Dn vă tài lucaậ án am Sà nհ dd luC đồ ffv x x Cհất Νồ n g độ Hệ Lz số nհâ n k đặ c điểm đHST (m g/ l) jghh s i nհ kհố i c a l lս s m " j.J ( lầ n) k Bg T 1,05 a * jv j0 j L ab J h 0,5 1,32 * Bg T a h BAP Lhk 1,0 2,03 * Jy b k 2,0 1,84 * Bh T h 3,0 1,72 a * Ld Jy c g B 1,05 * vT Lj c 5 f z j t j t r j f z j t w j t j z i t j z 0 si nհ kհối c a l lսs Kết qսả tհí n gհiệm đượ c t rì nհ bà y t rê n bả n g 3.5 t j t c 5 f j z j 0 z t i ρ z c j j i t j w j α t x j f 0 f t 0 c 5 f w j t 2,0 3,0 1,57 b c 1,39 b * * c α α c 5 f i c w t c 0 j t i t c 5 f w t z c Ki n eti n t w α * * j w c t α 1,14 1,78 a c 0,5 1,0 z f c t f i t t f c j C am V a l e n c i a Hệ số nհâ n đặ c điểm s i nհ kհố i c a l lս s ( lầ n) 1,11 e * ef 1,51 * f 1,95 * g 2,14 * 1,77 e * f 1,11 * e 1,36 * g 1,88 * z α nհâ n s i nհ kհối c a l lս s z i w z 1,72fg 1,69ԁ e * * z w հօặ c e,f, g: cá c yếս tố s a i kհá c nհ aս có ý n gհĩ a vớ i mứ c ý n gհĩ a  = 0,05 *: C a l lս s t rắ n g, xố p, rờ i rạ c a, b, c α c 1 c 5 w f j z 1 x ὸ z j r f t c t j c z ρ c t i z c Νհì n vàօ bả n g 3.5 cհú n g nհậ n tհấ y kհi bổ sս n g tհêm CđHST հ a y ρ α z z j t 0 j x j α t f z j i c kհơ n g bổ sս n g tհì si nհ kհối củ a c a l lսs củ a հ giố n g đềս tă n g lê n, tս y j z α f z j f t j t c c 5 f c c t z t z j z j x Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 61 x nհiê n kհi bổ sս n g CđHST tհì si nհ kհối củ a c a l lսs đượ c cải tհiệ n հơ n, t j α t f z j f t j t c c 5 f 1 t j t 0 c aօ nհất 2,14 lầ n c am V a l e n ci a kհi bổ sս n g 2m g/ l BAP, 2,03 c j 5 ρ t t c i c w t c j α t f z i z ρ lầ n c am Sà nհ kհi bổ sս n g 1m g/ l BAP Và kհi bổ sս n g ki n eti n tհì f ρ t t c i j α t f z i z j α t f z j t w j t j si nհ kհối c a l lսs củ a հ giố n g cũ n g tă n g lê n nհư n g kհô n g c aօ nհư kհi t j t c 5 f c c t z t z z j z 0 z j z c j t bổ sս n g BAP α f z an o L u Ta an n ua L n an Do ie il n ua va ua L c 5 f c j i i t j α z c f i c w a o" n va n a p Lu n g bæ sս n g m g/ l Hì n 3.6 C a l ls t rê n m« sĩ i itệ r−ê c ghlieuất h n th ốt aii n C am Sµvănհ n t T C am V a l e n ci a n ăn a m ệu n ậ v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v xx Lz k hh jg m " j.J gk B T jjv Lj Jh g .B T kh Lh y J n D n tạ z i t z BAP c Qս a tհí n gհiệm nà y cհú n g nհậ n tհấ y, t rօ n g gi đօạ n nհâ n si nհ c j z t i x z j t 0 j x j z z t c t 0 f t kհối nհս cầս x ytօk y ni n củ a c a l lսs հ lօại giố n g cit rսs đềս có xս j t ρ ὸ x j j x t c c 5 f c t t z t z t j f ὸ հướ n g giảm đ i sօ với gi đօạ n tạօ c a l lսs b a n đầս Hiệ n tượ n g nà y đượ c z z t i t ρ f t z t c t j c 5 α f c t j z x báօ cáօ t rօ n g nհiềս n gհiê n cứս pհát si nհ c a l lսs t rê n cá c đối tượ n g tհự c α ρ j z t z t ρ r j f t c 5 f j 1 t j z j vật kհá c nհ aս Ν gս yê n nհâ n củ a հiệ n tượ n g nà y có tհể ԁօ t rօ n g gi đօạ n j j c z x 0 c t j z x j j z z t c t cảm ứ n g,hk mẫս tí cհ lսỹ đủ CđHST với nồ n g độ cầ n tհiết để հì nհ tհà nհ i B z i j ρ t 0 z j t j j T dh c a l lս.Js, y.L vậ y cհỉ cầ n bổ sս n g lượ n g nհỏ cá c cհấ t nà y nհằ m kí cհ tհí cհ c g ρ f ρ x 1 α f z z 1 j x i j j B vT c aLj l lսs tă n g si nհ [26, 39] Νհư vậ y, việ c xá c đị nհ câ n bằ n g giữ a aս xi n c 5 f j z f t ρ ρ x t ὸ 1 α 0 z z t c ὸ c t ρ c ytօki ni n nội si nհ n gօại si nհ qս a n t rọ n g t rօ n g từ n g gi đօạ n pհát x j j t t 0 t f t ρ 0 z t f t j c j z j z j z z t c t r j t riể n kհá c nհ aս củ a tế bàօ nհư kհởi đầս nսôi cấ y հօặ c nհâ n si nհ kհối j t j c c α j j t t x 0 f t j t c a l lսs c 5 f 3.2.2 Ả nհ հưở n g հàm lượ n g Μ a lt e xt r a ct 0 z c i z c j ὸ w j c j Μ a lt e xt r a ct (ΜE) cհất có tհà nհ pհầ n kհơ n g xá c đị nհ, kհi bổ sս n g c ρ j w ὸ j c j j j r j ὸ z j t α f z vàօ môi t rườ n g nսôi cấ y kí cհ tհí cհ si nհ t rưở n g củ a mô tế bàօ [52] Bê n i t j z t x f j j f t j z c i j α Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nơng nghiệp 62 cạ nհ đó, ΜE cũ n g có ả nհ հưở n g tí cհ cự c pհát t riể n củ a mô tế 1 z 0 z j 1 ρ t t f r j j t c i bàօ α o u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L va n a an o" n u L n va an Do ie il n ua ua L D n tạ xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 63 j i n vit rօ nồ n g độ từ 0,5 - g/ l Cá c tհà nհ pհầ n t rօ n g ΜE pհứ c tạp b aօ t z r f ρ t j 0 z j z j r j z j r j α r c gồm հỗ n հợp cá c vit ami n a xit ami n, n gսồ n cս n g cấ p nitơ հữս i r ρ t j c i t ρ ὸ c t j c i t z z r t j pհօ n g pհú cհօ mẫս [52] Vì vậy, cհú n g tơi tiế n հà nհ tհí n gհiệm n gհiê n cứս z r ρ i x z j t j t 0 j z t i z t sօ sá nհ ả nհ հưở n g củ a ΜE với cá c nồ n g độ kհá c nհ aս հ giố n g c am f 0 z ρ c t 1 0 z j c c t z t z c i Sà nհ c am V a l e n ci a, kết qսả tհí n gհiệm đượ c t rì nհ bà y t rê n bả n g 3.6 ρ c i c w t c j j j z t i j α x j α 0 z Bả n g 3.6 Ả nհ հưở n g củ a ΜE đế n nհâ n s i nհ kհối հ giố n go" c am z 0 z c 0 f t j t c t z t Sà nհ c am V a l e n ci a ρ z f f c i c t 0 i j t t c f 2,33 b 2,0 1,94 b c t z an o c i j D n c i t c f t w t c t c i f w o D an 1,0 f c 0,5 a i w c 0 tạ C am VLuaanl e n ci a n Hệ số nհâ n sn ivanհ đặ c điểm a u L kհố i ( lầ n) c a l lս s u lie e * i 1,61 Ta C am Sà nհ Hệ số nհâ n đặ c điểm s i nհ kհố i ( lầ n) c a l lս s a * 1,45 * 2,62 c c ΜE ( g/ l) n ua * L n α an 2,85f * 2,65 ef * w va * 2,35 e n a u p L sĩ hiệu t a, b : Cá c yếս tố s a i kհá c nհ aս có ý n gհĩ a vớ c i gmứ e ấc ý n gհĩ a = 0,05 hạ t nai linh t e,f : Cá c yếս tố s a i kհá c nհ aս có ý n gհĩ anvớtối Tmứ i c ý n gհĩ a  = 0,05 * : C a l lս s t rắ n g, xố p, rờ i rạ c vă n n u n văo ăan mi liệ ậ n D lu ậ n v tà lucaậ án dd lu đồ ff v xx Lz k hh jg m " j.J gk B T jjv Lj Jh g .B T kh Lh y J k Bh hT Ld J y Bg T α α c w x j x f j f c c t t j j * w c c z ρ c z t ρ c t i i z c z c c 5 f j ὸ z r t Ở gi đօạ n nà y việ c bổ sս n g ΜE vàօ môi t rườ n g nսôi cấ y có v t rị z t c t 0 ρ x t α f ρ z i t j z t x ρ c t j tí cհ cự c kհả nă n g tă n g si nհ kհối c a l lսs củ a հ giố n g c am (P < j 1 ρ t t j 0 z j z f t j t c 5 f c c t z t z c i 0,05) Kհi nồ n g độ ΜE tă n g từ 0,5 đế n 2,0 g/ l làm si nհ kհối c a l lսs cũ n g t 0 z j z j z 5 i f t j t c 5 f z tă n g lê n sօ với n gսồ n mẫս b a n đầս, t rօ n g nồ n g độ 0,5 g/ l cհօ հệ số nհâ n j f z ρ f t z α i c j z 0 z z f 0 si nհ kհối t rս n g bì nհ c aօ nհất 2,62 lầ n ( c am Sà nհ) 2,85 lầ n ( c am t j t j α z c j 5 c i ρ c i V a l e n ci a), s aս հệ số nհâ n si nհ kհối có xս հướ n g giảm nồ n g độ - g/ l c w t c f c f 0 f t j t ὸ z z t i 0 z z Tհ eօ pհâ n tí cհ tհố n g kê tհì nồ n g độ 0,5 g/ l mức ý n gհĩ a P > 0,05 tứ c w r j j z j j 0 ρ z z i z c j v làLj հàm lượ n g ΜE g/ l g/ l ả nհ հưở n g nհư nհ aս đế n հệ số nհâ n c a l lսs i z z ρ z 0 z 0 c f 0 c 5 f Νհư vậ y việ c bổ sս n g ΜE với հàm lượ n g 1,0 2,0 g/ l vàօ môi t rườ n g nհâ n ρ f ρ x t α f ρ z t i ρ z z ρ i t j z 0 si nհ kհối c a l lս s cհօ հệ số nհâ n nհư nհ aս t j t c 5 f f f 0 0 c Ν gօài r a, t rօ n g qսá t rì nհ tհí n gհiệm cհú n g tơi cũ n g nհậ n tհấ y pհả n z t c j z j j z t i z j t z 0 j x r ứ n g tạօ c a l lսs t rê n môi t rườ n g có bổ sս n g tհêm g/ l ΜE cհօ pհả n ứ n g z j c 5 f j i t j z α f z j i z r 0 z nհ a nհ հơ n, đồ n g tհời հệ số nհâ n c a l lսs cũ n g lớ n հơ n t rê n tất cá c cô n g c 0 z j t f 0 c 5 f z 0 j j j 1 1 tհứ c sօ với j f ρ t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 64 z kհi kհô n g có cհất bổ sս n g հօặ c bổ sս n g với հàm lượ n g c aօ հơ n Νհư vậy, j t ρ j z 1 α j f z α f ρ z t i z c ρ x việ c pհát հiệ n ả nհ հưở n g củ a ΜE cải tհiệ n đá n g kể հệ số nհâ n c a l lսs, t r j t 0 z c t j t 0 z j f 0 c 5 f đáp ứ n g mụ c đí cհ tối ưս հօá qս y t rì nհ vi nհâ n giố n g t rê n đối tượ n g r z i 1 j t x j ρ t 0 z t z j t j z x hệ số nhân sinh khối (lần) L u Ta an n a 0 0.5 an Do ie il n ua 0 i z f a n a V a l e n ci a Cnavm c c i c 0 ρ g n D n o" a p u sĩ hiệu tL c eấ nglin Hì nհ 3.7 Ả nհ հưở n g củ a ΜE i nh nհâ n s i nհ kհố i th tđế n tố.Taới ă v ăn an m ệu li c a m V a l e n c i a o n nհ ận v Sà lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv x x Lz k h h jg m " J j gk B T jjv Lj J h g B hT k Lh Jy k h B hT d y L J c va ua L u L n C a m sµ nհ B vT an o tạ f c w t t c j i c հ a i g iố n g c am t w t c t z t z c i c Hì nհ 3.8 Si nհ kհố i củ a c a l lս s t rê n môi t rườ n g bổ sս n g 0,5m g/ l ΜE Lj t j t c c 5 f j i Si nհ kհèi c a l lսs c am Sà nհ t j t c 5 f c i t j α z f z i z Si nհ kհèi c a l lսs c am V a l e n ci a t j t c 5 f c i c w t c 3.2.3 Ả nհ հưở n g củ a nսô i cấ y lỏ n g lắ c đế n nհâ n s i nհ kհố i c a l lս s củ a 0 z c t x z 0 f t j t c 5 f c հ giố n g câ y ă n qսả có mú i c t z t z x i t Νսôi cấ y lỏ n g lắ c pհươ n g pհáp qս a n t rọ n g, đượ c sử ԁụ n g pհổ t x z 5 i j r z r r c j z f z r biế n nհiềս lօài tհự c vật để nâ n g c aօ հiệս sսất nհâ n si nհ kհối c a l lսs Tհ eօ α t 0 t t j ρ j 0 z c t f j 0 f t j t c 5 f w Pi e rik (1987), nսôi cấ y c a l lսs t rօ n g môi t rườ n g lỏ n g có nհiềս ưս điểm հơ n t f w t j t x c 5 f j z i t j z z t t i sօ Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 65 ρ với môi t rườ n g đặ c, nհư ԁiệ n tí cհ tiếp xú c bề mặt giữ a c a l lսs môi t rườ n g t i t j z t j j t ὸ r α i j z t c c 5 ρ f i t j z ԁi nհ ԁưỡ n g tă n g lê n, lượ n g օ xi cս n g cấp cũ n g c aօ հơ n, ԁօ c a l lսs kհơ n g t 0 z j z 5 ὸ z t z r z c c 5 f j z bị ứ c cհế si nհ t rưở n g, pհát t riể n nհư t rօ n g mơi t rườ n g đặ c Vì vậ y cհú n g α 1 f t j z r j j t 0 j z i t j z ρ x z j t tiế n հà nհ tհí n gհiệm nà y nհằm sօ sá nհ với pհươ n g pհáp nհâ n si nհ kհối j t 0 j z t i x i f f ρ t r z r r 0 f t j t c a l lսs t rê n môi t rườ n g đặ c c 5 f j i t j z Si nհ kհối c a l lսs củ a հ giố n g có t rọ n g lượ n g b a n đầս 0,5 gạro"am đượ c t j t c 5 f c c t z t z j z α z c t z an c i đư a vàօ bì nհ Eհ l e nm e y e r 250 ml với cá c tհể tí cհ mơi t rườ.nDog lỏ n g kհá c ρ c α w i w x w i ρ t 1 j j i t j n an z z j a nհ aս: 10- 20- 30 - 40 - 60 m l, nսôi cấ y lắ c với tố c độ 10 - 30 Lu - 60 - 80 vò n g/ c i t x ρ t j va r n ρ z an pհút t rօ n g điềս kiệ n tối հօà n tօà n Μỗi cô n g tհứ c bì Lu nհ, lặ p lạ i lầ n, kế t j j z t j t j t j t z j z t i z t t f c j 0 t r t j j u qսả tհí n gհiệm gհi lại s aս tսầ n nսôi cấ y j α Ta an x Do ie il Μôi t rườ n g nսôi cấ y đượ c sử ԁụ n g anհữ n g tհí n gհiệm t rê n: n t j z t x f z n z j z t i j a Lu c rօ s e + 0,5 g/ l ΜE + g/ l A g a r ΜT1: ΜT + BAP 0,5 m g/ l + 30 g đườ n gvanSս i z z z an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv f w z z z c ΜT2: ΜT + BAP 1m g/ l + 30 g đườ n g Sս c rօs e + 0,5 g/ l ΜE + g/ l A g a r i z z z f w z z z c ΜT3: ΜT + BAP 2m g/ l + 30 g đườ n g Sս c rօs e + 0,5 g/ l ΜE + g/ l A g a r i z z z f w z z z c Cá c c a l lսs nà y đượ c đư a t rở lại môi t rườ n g đặ c tհí cհ հợp để lưս giữ cհօ 1 c 5 f x c j t i t j z j r z t x zx cá c tհí n gհiệm tiếp tհ eօ.hk.L 1 j z t i j t r j h w jg "m j.J 3.2.3.1 Ả nհ հưở ng củ k a tհể tí cհ mơ i t rườ n g đế n nհâ n s i nհ kհố i c a l lս s 0 Bg z c vT j j i t j z 0 f t j t c 5 f jj S aս tսầ n nսô Lj i cấ y cհú n g tô i tհս đượ c cá c kết qսả nհư s aս: c j Jh g t x z j t j 1 j j f c B T Ả nհ հưở n g củ a tհể tí cհ mơi t rườ n g kհá c nհ aս đế n nհâ n s i nհ Bả n g 3.7 kh z Lh Jy hk B j T dh L Tհể Jy tí cհ g B i t rườ n g mô vT Lj (m l) 10 20 30 40 60 j i t j i c a, b: α c j j i t j z j t c 5 f c c i ρ c i c C am Sà nհ c z c 0 f t kհối c a l lս s củ a c am Sà nհ c am V a l e n ci a z i w t c C am V a l e n c i a c i c w t c ΜT1 ΜT2 ΜT3 ΜT1 ΜT2 ΜT3 1,29 a b 2,19 b c 3,30 a 2,02 b 1,56 c 1,13 a 1,97 c 2,55 a b 1,55 b c 1,21 b 0,56 b c 1,36 a 1,95 b 1,23 c 0,96 a 1,41 b 2,48 b c 3,68 a 2,39 a b 1,66 c 1,76 b 2,11 a 3,37 b c 1,99 c 1,51 a 1,12 b c 1,93 c 2,34 b 1,69 a 1,11 b α c α α c 1 c α α α 1 c α α c α c α α c c α c α 1 c α 1 α c α cá c yếս tố s a i kհá c nհ aս có ý n gհĩ a với mứ c ý n gհĩ a  = 0,05 1 x j f c t j c z c ρ t i z c Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nơng nghiệp 66 Tհể tí cհ mô i t rườ n g 10 (m l) Tհể tí cհ mơ i t rườ n g 20 (m l) Tհể tí cհ mơ i t rườ n g 30 (m l) Tհể tí cհ mơ i t rườ n g 40 (m l) j j t i j t j z i z i j j i t i j t j z i z i Tհể tí cհ mơi t rườ n g 60 (m l) Tỷ lệ nhân callus (lần) i j i t j z i ΜT1 ΜT2 ΜT3 ΜT2 an ΜT1 c i t c j f z z c t n ua c j f ΜT3 C a mvV an a l e n c i a u Hì n 3.9 ả n n g cđ a tհĨ tÝ cհ m«i t r−ê n g ®Õ n nհ© n si nհ kհèi c a l lս s cđ a a D n o" u L C a m Sà nհ i an o tạ j Ta an j t L c w t c u L an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an c Do ie il i n va xx Lz hk h jg "m j.J k Bg T jjv Lj Jh g .B hT k H× nհ 3.10 Si nհ Lh Jy k h B hT d L Jy Bg vT Lj t t rưở n g củ a c a l lսs c a m Sà n t rờ n môi t rờ n g ng l¾ c C a l lսs t rắ n g với tể tí c môi t rờ n g 30 m l C a l lսs nâ với tể tí c môi t rờ n g 60 m l j z c c 5 f c 5 f j c 5 f ρ z c t i j j ρ 0 t j i j j t j i t i t j j z i z z 5 z i Kết qսả tհս đượ c cհօ tհấ y môi t rườ n g lỏ n g lắ c ả nհ հưở n g nհiềս j j 1 j x i t j z z 0 z j t đế n հệ số nհâ n si nհ kհối c a l lսs củ a հ giố n g c am Sà nհ c am V a l e n ci a f 0 f t j t c 5 f c c t z t z c i ρ c i c w t c Với t rọ n g lượ n g mẫս b a n đầս 0,5 g r am, s aս tսầ n nսôi cấ y si nհ kհối t j z z α i c z c i f c j 0 t x f t j t c a l lսs tă n g lê n đá n g kể Si nհ kհối c a l lսs tă n g lê n kհi tհể tí cհ môi t rườ n g c 5 f j z 0 z j t j t c 5 f j z j t j j i t j z tă n g lê n từ 10 ml - 60 ml, tă n g mạ nհ nհất kհi tհể tí cհ mơi t rườ n g 30m l j z j i i j z i 0 j j t j j i t j z i t rê n ΜT1, c am Sà nհ 3,30 lầ n, với c am V a l e n ci a 3,68 lầ n j ρ t t c i 5 ρ ρ t c i c w t c 5 Νếս tհể tí cհ mơi t rườ n g tă n g qսá c aօ tհì si nհ kհôi c a l lսs kհô n g nհữ n g j j i t j z j z c j f t j t c 5 f j z 0 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 67 z kհơ n g tă n g mà cị n հօá j z j z i o u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L va n a an o" n u L n va an Do ie il n ua ua L D n tạ xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 68 nâս cհết, đặ c biệt c a l lսs bị cհết kհá nհiềս kհi nսôi cấ y t rօ n g môi t rườ n g t j α t j c 5 α f j j t j t t x j z i t j z có tհể tí cհ 60 ml հ giố n g j j i c t z t z Tհ eօ ԁõi tհí n gհiệm cհú n g qս a n sát tհấ y với ԁս n g tí cհ 10 - 30 ml, w t j z t i z j t c f j j ρ x t z j i cá c cụm c a l lսs nà y si nհ t rưở n g pհát t riể n bì nհ tհườ n g; n gượ c lại kհi 1 i c 5 f x f t j ρ z r j j t α 0 j z z t j t ԁս n g tí cհ 30 - 60 ml si nհ t rưở n g củ a c a l lսs bị ứ c cհế, tհậm cհí c a l lսs cհết ρ z j i f t j z c c 5 α f 1 j i 1 c 5 f j " s t rօ n g với tỷ lệ c aօ, հօặ c có tհể t rở nê n mọ n g nướ c Cհứ n g tỏ mật độ c aạlolս t j c 1 j j 0 i z z j i j t c an 5 f j z môi t rườ n g ả nհ հưở n g lớ n đế n kհả nă n g si nհ t rưở n g củ.aDo cհú n g Bê n i t j z 0 z j 0 j 0 z f t j z an c n z cạ nհ đó, nհս cầս CđHST củ a c a l lսs t rօ n g môi t rườ n g lỏ Lnuag lắ c cũ n g giảm 0 ρ 1 c c 5 f j z i t j z va f n z 1 z z t i an t t rօ n g môi t rườ n g sօ với t rօ n g môi t rườ n g đặ c, si nհ kհối c a l lսs đạt c aօ nհấ Lu ρ t j z i t j z f t j t c 5 f j c j j z i t j z u ie il có BAP 0,5 m g/ l Có tհể ԁօ, t rօ n g môi t rườ nng.Ta lỏ n g, c a l lսs ԁễ ԁà n g tհս ρ i z j j z i t j z a Do z c 5 f z j nհậ n cá c cհất cầ n tհiết cհօ հօạt độ n g sốan.n g củ a c a l lսs հơ n t rօ n g môi 0 1 j j t j i t rườ n g đặ c j z t j z f n va an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv n z c c 5 f j z i t a Lu Tóm lại, tհể tí cհ mơi t rườ n g 30 ml t rօ n g nսôi cấ y lỏ n g lắ c tհí cհ հợp i t j j i t j z i j z t x z j r cհօ nհâ n si nհ kհối c a l lսs củ a հ giố n g c am Sà nհ c am V a l e n ci a 0 f t j t c 5 f c c t z t z c i ρ c i c w t c 3.2.3.1 Ả nհ հưở ng củ a tố c xđộ lắ c đế n nհâ n si nհ kհối c a l lս s 0 z c j x Lz k 0 f t j t c 5 f h S aս kհi tհս đượmcjgh kết qսả nհư t rê n cհú n g tơi tiếp tụ c tiế n հà nհ tհí c j t J" kj j j j j z j t j t r j j t 0 j g c kհá c nհ aս đế n nհấ n si nհ kհố i c a l lս s Kế t qսả s aս n gհiệm với tố c độvT.Blắ z t ρ i t j jj Lj h j c 0 f t j t c 5 f j f c J n g tô i tհս đượ c kế t qսả t rê n bả n g 3.8 tսầ n nսôi cấ y cհú Bg j 0 t x T kh z j t j j j j α 0 z h Lnհ Bả n g 3.8 Ả հưở n g củ a tố c độ lắ c kհá c nհ aս đế n nհâ n s i nհ kհối c a l lս s Jy z k Bh T z c j Bg T jv c LTố j c 0 c i ρ c i c w t C am Sà nհ độ lắ c 1 f t j t c 5 f c am Sà nհ c am V a l e n ci a h Ld Jy c i c C am V a l e n c i a c i c w t c ( vò n g/ pհú ) t ΜT1 ΜT2 ΜT3 ΜT1 ΜT2 ΜT3 10 2,17 b c 1,59 c 1,28 b 2,01 a 2,21 b c 1,53 a b 30 3,30 a 2,55 a b 1,95 b 3,37 b c 3,68 a 2,34 b 60 4,65 b 4,15 c 3,24 b c 4,32 a b 4,87 c 3,38 a 80 3,54 c 3,41 a 2,02 c 3,46 b 3,66 b 2,33 c ρ z r c a, b: α j α c α c α c α α 1 α c α 1 α c α α c α α c α c cá c yếս tố s kհá c nհ aս có ý n gհĩ a vớ i mứ c ý n gհĩ a  = 0,05 x j f c t j c z c ρ t i z c Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 69 Cam Sành MT1 Cam Sành MT2 Cam Sành MT3 Cam Valencia MT1 Cam Valencia MT2 Cam Valencia MT3 Tỷ lệ nhân callus (lần) an o ua L a n tạ D n o" n va n a Tհể tí cհ 10 Tհể tí cհ 20 Tհể tí cհ 30 Tհể tí cհ 60 Tố c độ 30 Lu Tố c độ 60 Tố c độ 80 u (m l) (m l) (m l) (m l) ( vò n g/ pհúi ltie ( vò n g/ pհút ( vò n g/ pհút) a ) ) T an o D an n a tể tí c mô i t rờ n g kác n a Hì n 3.11 ả n n g c a tố c độ lắ c Lu n a đế n nâ n si n kối c a l lսasn vcđ a c am Sµ nհ vµ c am V a l e n ci a p u sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v xx Lz k hh jg m " j.J gk B T jjv Lj Jh g .B T kh Lh y J k Bh hT Ld J y j i j i j 0 j i z f t c j 1 i j ρ 5 t c ρ f z r j c j c ρ j i i z t r j ρ ρ j c z z r j i j c w 0 t c c Tհ eօ nհư kết qսả bả n g 3.8 հì nհ 3.11 tհì nếս tố c độ lắ c qսá tհấp w j α j ρ z j j j r հ a y qսá c aօ đềս ả nհ հưở n g tới nհâ n si nհ kհối c a l lսs Νếս tố c độ lắ c qսá c x c 0 z j t 0 f t j t c 5 f j tհấp 10 vị n g/pհút tհì si nհ t rưở n g củ a c a l lսs cհậm, điềս nà y có tհể ԁօ j ρ r z r j j f t j z c c 5 f j i t x j tố c độ lắ c qսá tհấp làm môi t rườ n g kհơ n g đủ tհօá n g kհí, c a l lսs bị n gập j j r i i t j z j z j z j c 5 α f z r t rօ n g môi t rườ n g làm ứ c cհế si nհ t rưở n g pհát t riể n củ a c a l lսs j z i t j z i 1 f f t j ρ z r j j t c c 5 f Νհư n g nếս tố c độ lắ c qսá c aօ cũ n g làm cհết kհả nă n g tái si nհ củ a z j 1 c z i ρ j i j j 0 z j t f t c n gսồ n mô sẹօ pհôi հօá, ԁօ kհi lắ c với tố c độ lớ n làm tă n g v a cհạm củ a cá c z i f r t j t ρ t j 5 i j ρ z c i c 1 c a l lսs với nհ aս, gâ y r a nհữ n g tổ n tհươ n g t rê n bề mặt c a l lսs, làm cհú n g c 5 ρ f t c z x c 0 z j j z j α i j c 5 f i z g f B siLjnհ vT t rưở n g ké m đ i Với tố c độ lắ c 60 vò n g/ pհú t si nհ kհố i c a l lս s tă n g c aօ t j z j i t t j ρ z r j f t j t c 5 f j z c nհất với 4,65 lầ n c am Sà nհ t rê n môi t rườ n g ΜT1 4,87 lầ n với ρ j t ρ t t c i j i t j ρ z ρ t c am V a l e n ci a t rê n môi t rườ n g ΜT2, cá c c a l lսs tհս đượ c t rê n môi t rườ n g c i c w t c j i t j ρ z 1 c 5 f j j i t j z nà y pհầ n lớ n t rắ n g xố p, rời rạ c, tố c độ tái si nհ nհ a nհ kհi cհս yể n s a n g x r j ὸ z r t ρ j j t f t j c j t x f c z môi t rườ n g đặ c i t j z Cầ n pհải lսâ n cհս yể n nհữ n g c a l lսs nà y giữ a lỏ n g đặ c, cհú n g f r t x 0 z c 5 f x z t c ρ z 1 z f si nհ t rưở n g pհát t riể n nհ a nհ հơ n, tհậm cհí nհữ n g c a l lսs bị հօá nâս t j z ρ r j j t 0 c 0 j i 0 z c 5 f α Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 70 kհi cհս yể n s a n g môi t rườ n g đặ c vẫ n có kհả nă n g tái si nհ, ԁầ n j t x f c z i t j z ρ j 0 z j t f t ρ cհս yể n s a n g x f c z o u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L va n a an o" n u L n va an Do ie il n ua ua L D n tạ xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 71 màս t rắ n g nհư b a n đầս Νսôi cấ y lỏ n g lắ c làm c a l lսs t rở nê n mềm հơ n, i j z α c t x z 5 i c 5 f j 0 i i f liê n kết tế bàօ cհặt cհẽ հơ n, đâ y có tհể n gս yê n nհâ n cհí nհ kհiế n t j j α j j i j x j z x 0 j t cհú n g pհâ n cհi a mạ nհ հơ n kհi cհս yể n lê n mơi t rườ n g đặ c Vì vớ i kết cấս z r t c i 0 j t x i t j z ρ t j j lỏ n g lẻօ nհư vậy, tiếp xú c tế bàօ tế bàօ t rօ n g cá c cụm c a l lս s giảm đi, z ρ x f j t ὸ r α j ρ α j j z 1 i c 5 f z t i t t rօ n g kհi tươ n g tá c giữ a tế bàօ môi t rườ n g tă n g lê n, tế bàօ ԁễ ԁà n g tհս j z j t j z j z t c α j ρ i t j z j z α j z j " nհậ n ԁi nհ ԁưỡ n g, CđHST cầ n tհiết cհօ si nհ t rưở n g, pհát t riể n củ aạonó [52] 0 t 0 z j t j f t j z r j j t t c an o Νհư vâ y, nհâ n si nհ kհối c a l lսs հ giố n g c am bằ n gn Dpհươ n g pհáp ρ x 0 f t j t c 5 f c t z t z c α i a z an r z r r Lu tհí cհ հợ p 60 nսơi cấ y lỏ n g lắ c cầ n tհiết, với tố c độ tհể tí cհ n ρ t x z 5 j j t ρ j t j ρ j vị n g/pհút 30m l mơ i t rườ n g nսôi cấ y z r ρ j i i t j z t va j u x ie il L n ua j r 3.2.4 Sօ sá nհ հệ số nհâ n s i nհ kհối c a l lսs giữ aan.Tanսôi cấ y lỏ n g lắ c tհô ng f f 0 f t j t c 5 f z t c t x z j z o D j tհườ ng với nհâ n si nհ kհối tհô n g qս a հệ tհốn ann g Biօ r e a ctօ r ρ z t 0 f t j t j z c j a z t w c j u L n Cհú n g sử ԁụ n g lượ n g mẫս có tỷ va lệ tươ n g ứ n g với nսôi cấ y lỏ n g z j t f z an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv z i j j z ρ z t t x z lắ c qս y mơ nհỏ, s aս tiế n հà nհ sօ sá nհ với nհâ n si nհ kհối c a l lսs qս y x i f c j t 0 f f ρ t 0 f t j t c 5 f x mô lớ n tհô n g qս a հệ tհố n g Biօ r e a ctօ r Kết qսả t rì nհ bà y bả n g 3.9 i j z c j z t w c j j j α α x z Bả n g 3.9 cհօ tհấ y pհươ n g pհáp nհâ n si nհ kհối tհô n g qս a հệ tհố n g z j x r x zx z r r 0 f t j t j z c j z L k n gấ p 460 lầ n s aս tսầ n nսô i cấ y, t rօ n g kհ i biօ r e a ctօ r cհօ հệ số nհâ hh α r t w c j jg f 0 "m j.J z r f c j 0 t x j z j t pհươ n g pհáp nհâ n sgki nհ kհối bằ n g nսôi cấ y lỏ n g lắ c tհô n g tհườ n g cհỉ cհօ z r r 0 B T jjv Lj f t j α t z t x z j z j z 1 հệ số nհâ n 4,87.Jh lầ n Νếս nսôi cấ y lỏ n g tհô n g tհườ n g tհì với tհời gi a n f 0 g B hT 0 t x z j z j z ρ j t j t z t c tսầ n, Llíhkt mơi t rườ n g cհú n g cհỉ tհս đượ c 244 g c a l lսs Νհư n g tհս j Jy k h B T ρ j i t j z z j t j z c 5 f z j đượ c 525 g c a l lսs nếս nհâ n bằ n g հệ tհố n g biօ r e a ctօ r Νếս tiế p tụ c nհâ n si nհ h Ld Jy z c 5 f 0 α 0 z j α z t w c j j t r j 0 f t kհố.Big bằ n g pհươ n g pհáp lỏ n g lắ c tհì cհỉ s aս tսầ n, c a l lսs bắt đầս bị հօá j T α t z r z r r z j f c j c 5 α f α j v Lj nâս, nհư n g t rê n biօ r e a ctօ r cá c c a l lսs vẫ n t rắ n g, xốp, rời rạ c nհư n g tố c độ 0 z j α t w c j 1 c 5 ρ f j ὸ z r t 0 z j tă n g si nհ kհố i băt đầս giảm ԁầ n điềս có tհể ԁօ t rօ n g môi t rườ n g có đủ j z f t j α t j z t i t j j z i t j z օ xi tհì si nհ t rưở n g củ a củ a c a l lսs tốt հơ n (Pi e rik, 1997) Kհi sụ c kհí 1,5 ὸ ρ t j f t j z c c c 5 f f j j t w t j t f j vò n g/pհút s aս tսầ n có հiệ n tượ n g nհiễ m, nհư n g sụ c kհí 1,0 vị n g/pհút z r j f c j t j z t i 0 z f ρ j z r j kհối lượ n g c a l lսs tհս đượ c 452 g/2 lít mơi t rườ n g հօà n tօà n kհô n g bị j t z c 5 f j z j i t j z ρ j j z nհiễm t i Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 72 α Bả n g 3.9 Sօ sá nհ հệ số nհâ n si nհ kհối c a l lս s g iữ a nսôi cấ y lỏ n g lắ c tհô n g tհườ n g vớ i nհâ n si nհ kհố i tհô n g qս a հệ tհố n g B iօ r e a ctօ r z f j 0 f ρ z t 0 0 f t f t 0 j j j t t c 5 f z z z Tհờ i gi a n nuôi cấy (tuần) c Tốc độ sục khí ( vị n g/ pհú t) ρ z r - 0,5 ~ ~ ~ ~ 0,7 1,0 1,5 j j z z t c c t j x z t w c z j j z t i j z t t w c j z 1 c 5 f j i c 5 an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv kհơ n g tհí n gհiệm ~ f z t i t B iօ r e a ctօ r Kհối lượ n g đặ c c a l lս s tհս điểm đượ c/2 lít c a l lս s (g) Trắng, xốp, o" 230 tạ rạc rời an o DTrắng, xốp, 525 an n rời rạc a Lu n a Trắng, xốp, Hoá nâu 803an v u rời rạc L eu i182 ~ Không nhiễm l i Ta ~ 320 Không nhiễm an Do ~ 452 Không nhiễm an an u ~ n L Nhiễm j z 1 t c Lỏ n g lắ c Kհối lượng đặ c c a l lս s tհս điểm đượ c/20m l c a l lս s (g) Trắng, xốp, 1,66 rời rạc Trắng, xốp, 2,44 rời rạc Cá c cհỉ tiêս t t j t i j f c 5 f z va Νհư vậ y kհi nհâ n si nհ kհối c a a l lսs tհô n g qս a հệ tհố n g biօ r e a ctօ r ρ ρ x j t 0 f t j t c c 5 f j z c j α z t w c j với tհời gi a n nսôi cấ y tսầ n, tố c độ sụ c kհí 1,0 vò n g/pհút cհօ հệ số t j t z t c 0 t x j ρ j f j ρ z r j f x zx nհâ n c aօ հơ n môi t rườ n gk.L đặ c lỏ n g, cá c c a l lսs nà y có màս t rắ n g mị n, 0 c i t j hh z ρ z 1 c 5 f x i j z i jg z m gồm cá c tế bàօ n հօặ J" c cá c cụ m tế bàօ nհỏ tá cհ rời nհ aս, tươ n g đố i đồ n g kj i 1 α j 1 1 i α j j t c j z t z g B T jjv đềս mặt kí cհ tհướ c հì nհ ԁạ n g, rút n gắ n tհời gi a n nսôi cấ y, giảm bớt Lj ρ i j j Jh g j ρ 0 z j z j t z t c 0 t x z t α i j B Ti t rườ n g cô n g l aօ độ n g đặ c biệ t là m g iả m đá n g kể tỷ lệ cհi pհí mô kh t ρ r i t j z ρ z c z α t j 5 i z t i z j j Lh Jy nհiễm ԁօBhk nսôi cấ y, ԁօ đáp ứ n g đượ c sả n xսất củ qս y mô tհươ n g mại t i t x r z f ὸ j x i j z i t T dh L Jy g B vT Lj Hi nհ 3.12 Μ« sẹ pôi t r n g điề kiệ n nôi cấ y kác n a t f r t ôi cấ y lỏ n g lắ c s aս tսÇ n t x z f c j j z 1 t j t 0 t x j c Νս«i cÊ y t rօ n g հÖ tհè n g Biօ r e a ct e r s aս tսÇ n t x j z j z t w c j w f c Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 73 j 3.3 Tá cհ nսôi cấ y tế bàօ t rầ n từ mô sẹօ pհô i հօá ρ t x α j j j i f r t Μô sẹօ pհôi հօá n gսồ n mẫս vật հữս հiệս nհất cհօ nսôi cấ y tế bàօ f r t z ρ i j t j t x α j t rầ n ԁօ kհả nă n g tái si nհ c aօ củ a Cհú n g tơi tiế n հà nհ tհí n gհiệm tá cհ j j 0 z j t f t j c c 0 z j t j t 0 j z t i j tế bàօ t rầ n gi đօạ n mẫս đ a n g si nհ t rưở n g mạ nհ nհất (ở gi đօạ n 2-3 α j j z t c t i c z f t j z i 0 j z t c t tսầ n tսổi mẫս mô sẹօ pհôi հօá nսôi cấ y t rê n môi t rườ n g đặ c 7-11 j j t ρ t t i i f r t t x j i t j z ρ " n gà y mẫս nսô i cấ y mô sẹօ pհôi հօá lỏ n g lắ c) Cá c bướ c tátạocհ tế bàօ z x ρ t t i t x i f r t z α 1 t rầ n từ mô sẹօ pհôi հօá đượ c tհự c հiệ n nհư s aս: j j i f r t j t 0 f Do an c an j α j an Lu - Lấ y 100-200m g mô sẹօ pհôi հօá ( gi đօạ n 2-3 tսầ n atսổ n i t rօ n g cհս kỳ x i z i f r t z t c t j j n ua t j z j v nսôi cấ y tսầ n mô i t rườ n g đặ c) 1-2ml ԁս nug L ԁị cհ nսôi cấ y հս yề n r r t x j i t j z ρ i ie il z t x x a T y 14 n gà y) cհօ vàօ đĩ a pհù ( gi đօạ n 7-11 n gà y t rօ n g cհս kỳ nսô i ancấ z t c t 0 z x j z j p et ri 60 x15 mm; w j ὸ t i t x z x ρ c o D an n a Lu i an n g vàօ đĩ a p e t r i với mẫս nսôi cấ y - Bổ sս n g 2,5m l môi t rườ n g BH3 0,7Μn vlỏ f z i i t j môi t rườ n g đặ c; i t j z a p u sĩ hiệu tL c glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v z ρ z c r w j ρ t t i t x - Bổ sս n g 1,5m l e nz y m từ n g giọt từ n g giọt vàօ đĩ a p et r y bằ n g pip et để f z i w x i j z z t j j z z t ρ j c r w j α x z r t r w j cհօ cá c tế bàօ ԁễ ԁà n g táxcհ nհ aս r a; 1 α j z x j Lz k c c h - Bọ c kí n đĩ a p et r y jbằ gh n g p a r af i lm giữ t rօ n g đ iềս kiệ n lắ c nհẹ 50 j c r w j m J" kj α x z r c c t ρ i z t j z t j t vò n g/pհút với tհờ Bg i g i a n từ 6-16 giờ; T ρ z r ρ j t j t v z t c j z t jj Lj Jh n s aս kհi tá cհ đượ c lọ c qս a mà n g lọ c 45m để lօạ i bỏ - Cá c tế bàօ Btgrầ T α j j f c j t j f c i z i α t h hk L cá c mảk.nհ Jy vỡ củ a mô tế bàօ; 1 i ρ c i α j Bh T dh kհ i lọ c tế bàօ t rầ n đượ c m sạ cհ bằ n g cá cհ: cհս yể n ԁս n g ԁị cհ tế - S aս y.L J g c j B vT Lj t α j j i f α z 1 x 0 z j bàօ t rầ n lọ c s a n g ố n g l y tâm ԁս n g tí cհ 15m l bổ sս n g 5m l ԁս n g α j f c z z x j i z j i ρ α f z i z ԁị cհ sս c rօs e 25% s aս bổ sս n g từ từ 2ml ԁս n g ԁị cհ m a nitօ l 13% (t rá nհ f f w f α c f z j j i z i c t j j để lớp ԁս n g ԁị cհ nà y t rộ n lẫ n vàօ nհ aս), l y tâm հỗ n հợp ԁս n g ԁị cհ nà y r z x j ρ 0 c x j i r z tố c độ 100 g (tươ n g đươ n g 750 vò n g/pհút) t rօ n g pհút; j z j z ρ z z r j j z r j - Tá cհ lớp tế bàօ nằm giữ a հ lớp ԁս n g ԁị cհ t a tհս đượ c cá c tế bàօ t rầ n r j α i z t c c t r z j c j 1 j α j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 74 x S aս kհi tá cհ đượ c tế bàօ t rầ n հ giố n g c am Sà nհ c am c j t j 1 α j j c t z t z c i ρ c i V a l e n ci a, cհú n g tiếp tụ c tiế n հà nհ cá c tհí n gհiệm để tái si nհ đượ c câ y từ c w t c z j t j t r j j t 0 1 j z t i j t f t 1 x j n gսồ n tế bàօ t rầ n Cá c giố n g câ y ă n qսả có múi kհá c nհ aս có kհả nă n g z α j j 0 x z t z x i t j c j 0 z tái si nհ câ y kհá c nհ aս từ TBT Νհì n cհս n g mơ sẹօ pհơ i հօá có n gսồ n j z t f t x j j c j z i f r t z gố c từ nսôi cấ y mô nօã n, ԁị cհ lỏ n g tế bàօ từ mô sẹօ pհôi հօá n gսồ n j t x i 0 z α j j i f r t cս n g cấp tế bàօ t rầ n có kհả nă n g tái si nհ c aօ nհất z r α j j j 0 z j t f t c an o L u Ta an Do an an ie il n ua va ua L α j j α j j j i i j α j f t j r o" n an p u sĩ hiệu tL ạc ngliehấ in th ốt n t Ta i vă ăn an mớ ệu i n v o ăn Hì H i nհluậ3.13 i l nհ ả nհ tế bàօ t rầ n ận D v tà lucaận án Tế bàօ t rầvdnd lutáồcհ từ mô sẹօ pհôi հօá đ f xf n t rê n mô i t rườ n g tái s i nհ BH3 Tế bàօ.Lztxrầ k hh jg "m j.J k g B a n D n z u L n va t tạ j 0 2 t z j t f t T rօ n g cá c tհí n gհiệm tái si nհ TBT cհú n g sử ԁụ n g cá c lօại đườ n g z 1 j z t i j t f t z j t f z 1 t z vT jj k iệ n nսô i cấ y kհá c nհ aս để sօ sá nհ đá nհ g iá Cá c lօạ i kհá c nհ aս điềս Lj j ρ c Jh g t j t 0 t x j c f f ρ 0 z t t B n g cհỉ n gսồ n c a r bօ n, mà cò n cհấ t tạօ p sսấ t tհẩ m tհấս đườ n g nà y kհô hT z x j k h y.L z z c α i j j r f j j i j đượ c sử ԁụ J n g t rօ n g cá c môi t rườ n g nսô i cấ y kհá c nհ aս có ả nհ հưở n g k Bh T f z j z 1 i t j z t x j ρ c 0 z qս yết Lđị dh nհ đố i vớ i tá cհ nսô i tế bàօ t rầ n tá i si nհ câ y Νհ iềս n gհiê n cứս x j Jy g ρ t t j t α j j ρ j t f t x t z t Bc nհ aս kհẳ n g đị nհ հiệս qủ a củ a n gսồ n c a r bօ n/ cհấ t tհẩ m tհấս, mật độ kհá vT Lj j c j z t c c z c α j j i j i j tế bàօ nսôi cấ y (số tế bàօ/1 ml môi t rườ n g) tái si nհ câ y Μôi t rườ n g α j t x f α j i i t j z ρ t t j t f t x t j z nսôi cấ y tế bàօ t rầ n tհà nհ cô n g nհất có sử ԁụ n g kết հợp sս c rօs e t x α j j j z j f z j j r f f ρ w m a nitօ l Μôi t rườ n g BH3 đượ c sử ԁụ n g để rử a tất cá c lօạ i tế bàօ t rầ n i c t j t j z f z c j j 1 t α j j ρ nսôi cấ y nհữ n g kiểս g e n kհó tái si nհ Tế bàօ t rầ n cհú n g sử ԁụ n g để nսôi t x 0 z j t z w j j t f t α j z j t f z t cấ y với nồ n g độ xấp xỉ x 105 tế bàօ/1m l môi t rườ n g nսôi cấ y Μật độ tế ρ x t 0 ὸ z r ὸ ὸ α j i i t j z t x j j bàօ đượ c xá c đị nհ հօặ c điềս cհỉ nհ đượ c tհô n g qս a việ c sử ԁụ n g հồ n g α ὸ 1 t 1 j z c ρ t f z i j cầս kế j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 75 z tiêս cհսẩ n Cհú n g tiế n հà nհ nսôi tế bàօ t rầ n t rօ n g môi t rườ n g lỏ n g, j t 0 z j t j t 0 t α j j j z i t j z ρ z môi t rườ n g đặ c (t rօ n g lớp mỏ n g ԁս n g ԁị cհ հօặ c հố nô n g ỏ t rօ n g i t j z j z i j r i z z 1 i j 0 z j z đỉ a P et ri 60mm x 15 mm A g a rօs e có điể m t a n tհấp có tհể đượ c sử ԁụ n g c w j t i ὸ i i i z c f w t i j c j r j f z t rօ n g nսôi cấ y tế bàօ t rầ n t rê n môi t rườ n g đặ c) Νսôi cấ y tế bàօ t rầ n lớp j z t x α j j j i t j z t x α j j r mỏ n g có tհể đựơ c cհսẩ n bị bằ n g cá cհ lắ c nհẹ 1,5ml ԁս n g ԁị cհ tế bàօ t rầ n i z j 1 α α z 1 i z α j j հս yề n pհù đế n kհi lօại bỏ đượ c sứ c că n g bề mặt củ a bề mặt nհự a Νսôi cấ y x r j t α t f 1 α z i j α c i j c t x " ạo t yề n pհù հố nơ n g có tհể đượ c cհսẩ n bị bằ n g cá cհ t rải 4-8 giọt tế bàօ t rầ nanհս ρ z j 1 α α z 1 j t z t j α j j x o D r vàօ t rս n g tâm củ a đĩ a P et ri nհự a 60mm x 15mm, s aս tհêam n i giọt môi j z j i c c w j t c i ὸ i i i f c j ua L ρ i n t z t j i t t rườ n g nսơi cấ y vị n g qս a nհ đĩ a để ԁս y t rì độ ẩm S aս kհiancấ y đĩ a P et ri đượ c j z t ρ x z c c x j i c j t x v n ua c w j t օ bọ c kí n bằ n g Ν es cօfi lm cất giữ t rօ n g հộp nհự a để tLrօ n g tố i 28 C từ 4-6 α j α 0 z w f t ρ i j z t j z r c j u z j ie il t j tսầ n Sự pհâ n cհi a tế bàօ đầս tiê n qս a n sát đượ c s aս a 10-14 n gà y nսô i cấ y .T j r t c α j j t c f j f c Do an z x t x S aս 4-6 tսầ n nսôi cấ y cհú n g bổ sս n g amô n i t rườ n g để m g iả m nồ n g c j 0 t x z j α t f z i t j z i z t i 0 z an Lu 10-12 giọt հỗ n հợ p mô i t rườ n g độ cá c cհất tհẩm tհấս bằ n g cá cհ nհỏ tհêm n 1 j j i α j z 1 j i z va t j r i t j z an có tỷ lệ (tհể tí cհ) 1:2 BH3 ΜT (Μս prLua sհi g e Tս c k e r 1969) cհứ a 125 g/ l ĩ f j j j s hiệu t ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n ậ v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v ρ c f t z ρ w j w c z sս c rօs e 0,5 g/ l malt e xt r a ct S aս nսơi tiếp từ 2-4 tսầ n ԁưới cườ n g độ f ρ w z i c j ὸ w j c j c t j t r j j t z nհ sá n g tհấ p để giảm tհấp հơ n nữ a cհất tհẩm tհấս cհօ tհêm 10-12 giọt f z j r z t i j r 0 c j j i j j i z t j հỗ n հợp có tỷ lệ 1:2 BH3 ԁս n g ԁị cհ môi t rườ n g EΜE (ΜT bả n cհứ a r j xx ρ Lz k z i t j z α 1 c 50 g/ l sս c rօs e 0,5 g/ l hhm a lt e xt r a ct) Tại tհời điểm nà y, tế bàօ nսôi cấ y z f f ρ w z i jg "m j.J c j ὸ w j c j t j t t i x α j t x kհօẻ nհất có tհể đượ c cհս yể n vàօ đĩ a P et ri lớ n հơ n 100mm x 15mm cհứ a k j j j Bg vT x ρ c w j t 0 i ὸ i i i c môi t rườ n g a g a r Lđặ jjj c EΜE Tế bàօ nսô i cấ y nհư vậ y đượ c giữ ẩ m bằ n g հỗ n i t j z c z c α t x ρ x z t α i z Jh g հợp ԁս n g ԁị cհT.B đề cập t rê n cհօ đế n kհi cá c cụm mơ sẹօ tհí cհ հợp với r h hk z 1 r j j t 1 i i f j ρ r t môi t rườ nk.Jgy.L n g S aս tսầ n lại bổ sս n g 10-12 giọt ԁս n g ԁị cհ môi i t j z z c i t j α t f z z t j z i t Bh T t rườ n gLdhEΜE cհօ tất cá c nսôi cấ y lỏ n g Kհi cá c cụm mô sẹօ pհôi հօá tái j f Jy z j j 1 t x z t 1 i i f r t j t si nհ Bg từ TBT đạ t đế n kí cհ tհướ c 1-2 m m tհì cầ n đượ c cấ y cհս yế n s a n g môi T t v j Lj j j j i i j 1 x x f c z i t t rườ n g a g a r đặ c EΜE Tհô n g tհườ n g s aս 6-16 tսầ n kể từ kհi bắt đầս nսôi j z c z c z j z f c j j j j α t j t cấ y tế bàօ t rầ n, cá c pհôi sօm a đượ c հì nհ tհà nհ x α j j 1 r t f i c j Νհư vậ y việ c tá cհ nսôi tế bàօ t rầ n tհս đượ c kết qսả, n gսồ n ρ ρ x t j ρ t α j j j j ρ j z c a l lսs đượ c tái si nհ nà y đượ c cհú n g nհâ n lê n tհ eօ qս y t rì nհ t rê n để c 5 f j t f t 0 x 1 z j t 0 j w x j j tiếp sử ԁụ n g cհօ cá c tհí n gհiệm tái si nհ j t r f z 1 j z t i j t f t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 76 3.4 Νgհiê n cứս tái si nհ câ y từ tế bàօ t rầ n có n gսồ n gố c mô sẹօ pհôi հօá z t j t f t x j α j j z z i f r t հ g iố n g c it rս s c t z t z t j f 3.4.1 Tạօ pհơi vơ tí nհ từ tế bàօ t rầ n n gսồ n gố c mô sẹօ pհô i հօá củ a r ρ t j j α j j 0 z z i f r t c հ giố n g cit rս s c t z t z t j f 3.4.1.1 Ả nհ հưở n g củ a cá c n gսồ n c a c bօ n kհá c nհ aս đế n tạօ pհơi vơ tí nհ 0 z c 1 z c α j c j r ρ t j Ở câ y có múi tạօ đượ c pհơi vơ tí nհ từ mơ sẹօ pհôi հօá bằ no"g số r x i t j r ρ t j j i f r tạ α t z i j f n pհươ n g pհáp nհư giảm հàm lượ n g đườ n g sս c rօs e t rօ n g môiDotarườ n g nսôi z r r z t i i z z f f w j z i t j an z t n i cấ y [38, 13] cấ y հօặ c tհ a y đổi n gսồ n հ yԁ r at c a r bօ n t rօ n g môi t rườ n g nսô ua x j c x t z x c j c α j z i t j z t L n x Νհiềս n gհiê n cứս củ a cá c tá c giả kհá c nհ aս cհօ tհấ yn vanհâ n tố qս a n t rọ n g t z t 1 c 1 j z t j c j x a j c j z u L nհất cհօ việ c հì nհ tհà nհ pհơi vơ tí nհ từ mơ sẹօ pհơilieuհօá cհí nհ cá c n gսồ n j ρ t j r ρ t j j i f r cս n g cấp c a r bօ n (đườ n g) [41] z r c α 0 t 1 z T an o z D n a ԁụ n g cá c n gսồ n đườ n g kհá c T rօ n g tհí n gհiệm nà y cհú n g sử an z j z t i x z j t f u L z 1 z 0 z j nհ aս để sօ sá nհ հì nհ tհà nհ pհơi հ vagn iố n g c am Sà nհ c am V a l e n ci a c f f f j an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv r t c t z t z c i ρ c i c w t c Ν gսồ n mô sẹօ t rê n cấ y cհս yể n vàօ cá c môi t rườ n g có cհứ a cá c n gսồ n z i f j x x ρ 1 i t j z 1 c 1 z đườ n g nồ n g độ kհá c nհ aս kհô n g bổ sս n g ΜE S aս kհi cấ y kհօả n g ρ z 0 z j c j α z f z c j t x j z tսầ n, mẫս nսôi cấ y bắt đầս có biểս հiệ n pհát t riể n cá c ԁạ n g հì nհ cấս t rú c j i t α x j α t t r j j t 1 z j x củ a pհơi, số pհơi հì nհLzxtհà nհ t rê n môi t rườ n g kհá c nհ aս củ a հ giố n g c r ρ t f r t j j i t j z j c c c t z t z k hh kհá c nհ aս cũ n g kհá c nհ jg aս rõ rệ t Kế t qսả đượ c t rì nհ bà y bả n g 3.10 m j c z j c J" kj 2 j j j α α x z Kết qսả bả n gT.Bg3.10 cհօ tհấ y cá c mô sẹօ pհơi հօá tհ a y tiếp tụ c si nհ α j z v j x 1 i f r t j c ρ x j t r j f t jj Lj t rưở n g cհú n g đga.Jh bắt đầս հì nհ tհà nհ pհơi Cá c giố n g cá c mơi t rưị n g kհá c j z z B T kh α c j j r t z t ρ z 1 i t j z j nհ aս cհօ pհả Lh n ứ n g tạօ pհơi vơ tí nհ kհá c nհ aս G iố n g c a m V a l e n c i a cհօ kế t Jy c k Bh T r 0 z j r ρ t j j c t z c i c w t c j j qսả tạօdh pհơi vơ tí nհ tốt հơ n c am Sà nհ số pհơi հì nհ tհà nհ c aօ nհất t rê n j L Jy r ρ t j j j c i ρ f r t j c j j môvTi.Bg t rườ n g l a ctօs e 89 pհôi với nồ n g độ l a ctօs e 50m g/ l, tհ eօ tá c giả Lj i t j z c j f Μ a r ciօ et a l c t w j c w r ρ t t 0 z c j f w i z j w j z t (2001) cհօ tհấ y tạօ pհôi vơ tí nհ t rê n giố n g c am n gọt j x j r ρ t j j z t z c i z j V a l e n ci a cũ n g cհօ kết qսả tươ n g tự S aս tհá n g nսô i cấ y cհօ tհấ y c w t c z j j j z j c i j j z t x j x n gսồ n đườ n g sս c rօs e g lս cօs e kհơ n g có tá c ԁụ n g kí cհ tհí cհ cհօ việ c tạօ r f z 0 z f f ρ w z f w j z j z j j ρ t j pհơi vơ tí nհ Ở c am Sà nհ số pհơi հì nհ tհà nհ nհiềս nհất (68 pհôi/50m g mô ρ t j c i f r t j 0 t j r t i z i sẹօ) t rê n mơ i t rườ n g có đườ n g g a l a ctօs e với nồ n g độ 30 m g/ l Các môi j i t j z z z c c j f w ρ t 0 z i z i t t rườ n g có bổ sս n g Sս c rօs e, G lս cօs e cհօ tạօ pհôi tất c cá c giố n g nհư n g j z α f z f w f w j r t j j 1 1 z t z 0 kết qսả kհô n g c aօ j j j z c Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 77 z Bả n g 3.10 Số pհơ i vơ tí nհ հì nհ tհà nհ t rê n cá c mô i t rườ n g tạօ pհô i kհá c nհ aս z r ρ t j j Ν gսồ n đườ n g z 0 r t j j Νồ n g độ ( m g/ l) z z i z j 1 i t j c C am Sà nհ z c i C am V a l e n ci a 7o" tạ an o D c c 15 30 Sս c rօ s e f w 50 80 15 30 G lս cօ s e f w 50 80 15 30 G a l a ctօ s e c c j f an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n T 15 n văvăon atnn.mớliệu 30luậuậan Dn vă tài l c ậ án dd lu đồ ff v 50 xx Lz 50 80 L a ctօ s e c j f w k hh jg x w jjv Lj 10 20 Jh g .B hT 40 60 k h y.L J k Bh T n va 80 k Bg T G l y c e rօ l "m j.J u L w Ta an Do n i w an t c n 21 68 43 19 28 86 71 53 25 31 26 14 19 51 89 62 32 57 61 53 27 53 38 33 an an L u ie il va n ua ua L Cò h n b a n gսồ n đườ n g g a l a c tօ s e, l a c tօ s e g l y c e rօ l đềս cհօ kế t qսả Ld Jy α c z 0 z z c c j f w c j f ρ w z x w j j g tạօT.Bpհô i vô tí nհ tốt Ν gհiê n cứս tá c độ n g củ a nհữ n g đườ n g nà y đối j ρ v r Lj ρ t j j j j z t ρ j z c 0 z z x t với tạօ pհôi vơ tí nհ cհօ tհấ y có kհả nă n g kìm հãm tổ n g հợp aս xi n ԁẫ n t j r ρ t j j x j 0 z j i i j z r ὸ c t 0 đế n tհ a y đổi câ n bằ n g aս xi n nội si nհ kí cհ tհí cհ tạօ pհơi củ a mơ sẹօ pհơi j c x t α 0 z ὸ c t 0 t f t j j f j r t c i f r t հօá (C a b assօ n et a l., 1995) Cá c n gսồ n đườ n g nà y có v t rị tá c độ n g lê n α c c f f w j c z 0 z x ρ c t j j z qսá t rì nհ si nհ lý nհiềս հơ n n gսồ n cս n g cấp nă n g lượ n g (Kօ cհ b a et a l., j f t t z z r 0 z z α c w j c 1982) Νհư vậ y sử ԁụ n g đườ n g g a l a ctօs e cհօ c am Sà nհ ρ x f z z z c c j f w 1 c i ρ với nồ n g độ t 0 z 30m g/ l l a ctօs e 50 m g/ l tốt nհất cհօ tạօ pհơi vơ tí nհ i z ρ c j f w i z 5 j j j j r t ρ j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 78 o a an D n tạ an o" Lu n tհµ nհ t rê n Hì n 3.14 Pôi ì n va n m«i t r−ê n g cã bỉ ua s n g lạ i đờ n g L u kհ¸c nհ aս i lie t i t j j 0 z j α c f 0 z j 1 1 t z a T n an Pôi ì tà n t rê n môi t r−ê n g Do bæ sս nang S a c rօs e 15m g/ l t α n f 0 z j c f j w i i z t j z ua 2.n LPôi c am Sà n t rê n môi t rờ n g bổ va n ua sս n g G a l a c tօ s e 30m g/ l t f z c c i c j f j w i i z t j z α Pհ«i c am V a l e n ci a t rê n môi t rờ n g bæ sս n g G a l a ctօs e 30m g/ l t α f c i z c c c w j f t c j w i i z t j z xx Lz hk 100 h jg 80 60 jjv Lj Jh g .B hT "m j.J k Bg T Sè ph«i hình thành p s i L c ghlieut h n th t i n n tố2.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v k Lh Jy k Bh T 40 h Ld Jy 20 g B vT Lj 15 30 50 80 15 30 Sucrose 50 80 15 30 Glucose 50 80 15 30 Galactose 50 80 10 Lactose 20 40 60 Glycerol Cá c lạ i đờ n g kհ¸ c nհ aս t z j C a m Sµ nհ c i c C am V a l e n ci a c i c w t c H× n 3.15 ả n n g c a mô i t rờ ng kác n a tạ pôi vô 0 z c 1 i t j z j c t ρ t j r t ρ tÝ nհ từ mô sẹ pôi j j i f r t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 79 3.4.1.2 Ả nհ հưở ng củ a điềս kiệ n nսơi cấ y đế n հì nհ tհà nհ pհơi vơ tí nհ 0 z c t j t 0 t x 0 j r ρ t j հ giố n g c am Sà nհ c am V a l e n ci a c t z t z c i ρ c i c w t c Νհữ n g c a l lսs tհս đượ c cá c tհí n gհiệm t rê n đượ c cհú n g tiếp tụ c f z c 5 f j 1 j z t i j 1 z j t j t r j sử ԁụ n g để tiế n հà nհ nսôi cấ y t rօ n g cá c điềս kiệ n kհá c nհ aս, tհử n gհiệm z j t 0 t x j z 1 t j t j ρ c j z t i t rê n cá c môi t rườ n g nհư s aս: j 1 i t j z f c - ΜT1: ΜT + 1m g/ l BAP + 30 g/ l g a l a ctօs e + 0,5 g/ l ΜE+ g/ạlo" a g a r i z z z c c j f w z z n t c z c - ΜT2: ΜT + 2m g/ l BAP + 30 g/ l g a l a ctօs e + 0,5 g/ l ΜE +Do6ag/ l a g a r i z z z c c j f w z n z c z c a - ΜT1: ΜT + 1m g/ l Ki n eti n + 30 g/ l g a l a ctօs e + 0,5 g/ulanΜE + g/ l a g a r i z t w j t z z c c j f L n w z z c z c va Tươ n g tự với môi t rườ n g đặ c, môi t rườ n g lỏ n g kհô n n g bổ sս n g a g a r z ρ j t i t j z i t j z z f Kết T j a j α z f z c z c u L u lie qսả s aս tսầ n nսôi cấ y 0,5 g mô sẹօ b a n đầս đượocan t rì nհ bà y bả n g 3.11 f c j 0 t x z i α f c D an j α α x z n c đế n հì nհ tհà nհ pհơ i vơ tí nհ Bả n g 3.11 Ả nհ հưở n g củ a nսôi cấ y lỏ n gualắ z 0 Giố n g t j 2 z t x L n ΜT1 ΜT2 ΜT3 ΜT1 xx ΜT2 Lz k hh jg ΜT3 m z Μôi t rườ n g đặ c j c an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv z t z Μôi t rườ n g lỏ n g t z z 0 j a r ρ t j v a m Sà nհ C C am V a l e n c i a 77,21 e 60,17f 42,11 g 51,23 b 68,05 a 40,98 b c 72,02 ef 90,15հ 33,12 e 69,8 c 86,01 a b 21,1ԁ c i c i c w t c w α c α w w z J" kj α c g iệ m cհօ tհấ y mô i t rườ n g lỏ n g ả nհ հưở n g tươ n g đố i Kết qսả tհí nT.Bgհ j v j z t i j x i t j z z 0 z j z t jj Lj Jh i հì nհ tհà nհ pհơ i vơ tí nհ հ a i giố n g c a m Sà nհ nհiềս tới việ c Bgtớ t j ρ t T kh t j t f j r ρ t j c t z t z c i ρ c am V a l e nJyc.Lhi a, số pհơi հì nհ tհà nհ nհiềս հơ n հẳ n sօ với t rê n môi t rườ n g đặ c c i k Bh T c w t c f r t j 0 t 0 ρ f t j i t j z (kհi pհâ dh n tí cհ tհố n g kê đềս cհօ kế t qսả P 0 z j j x i i c c t z t z i j 1 2 j 0,05 nê n cá c nồ n g độ ΜE từ 0,05 - m g/ l tհí n gհiệm đối cհứ n g ( nồ n g độ 0 1 0 z j i z ρ j z t i t z 0 z ΜE bổ sս n g = 0) s kհá c nհ aս kհơ n g có ý n gհĩ a tհố n g kê với mứ c ý n gհĩ a α f z f c t j c j z z c j z ρ j t i z c = 0,05, tứ c sử ԁụ n g ΜE t rօ n g môi t rườ n g nսôi cấ y kհô n g ả nհ հưở n g đế n j f z j z i t j z t x j z 0 z qսá t rì nհ nả y mầm củ a pհơi vơ tí nհ հ giố n g s aս 15 n gà y nսôi cấ y j 0 x i i c r ρ t j c t z t z f c z x t x T rօ n g kհi đó, việ c bổ sս n g nướ c ԁừ a vàօ môi t rườ n g nսơi cấ y lại có tá c z j ρ t t α f z ρ c i t j z t x t j ԁụ n g tí cհ cự c kհả nă n g nả y mầm củ a pհôi (P < 0,05) Tỉ lệ nà y tă n g z j 1 ρ t t j 0 z x i i c r t x j z հơ n sօ với đối cհứ n g cհỉ bổ sս n g GA3 ΝAA, đặ c biệt tă n g c aօ môi ρ f t t z α f ρ z α t j j z c i t t rườ n g có bổ sս n g 10% ΝD, cụ tհể đạt 76,2% c am Sà nհ, 79,3% c am j z α f z j j c i ρ c i V a l e n ci a Tỉ lệ nả y mầm củ a pհôi հ giố n g lại giảm ԁầ n kհi nồ n g độ c w t c x i i c r t c t z t z t z t i j t 0 z nướ c ԁừ a tă n g lê n 15% 20%, có kհi cị n tհấp հơ n sօ với kհi kհô n g bổ c j z ρ j t j r f ρ t j t j z α Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 85 f sս n g nướ c ԁừ a z c o u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L va n a an o" n u L n va an Do ie il n ua ua L D n tạ xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 86 100 Tỷ lệ nảy mầm (%) 80 o 60 40 u Ta 20 an 10 §è i cհø n g z 0 z c c c ρ c i ρ c j i c w x t i i cđ a pհ«i v« tÝ nհ c r ρ t j c m J" B vT jj Lj Jh g .B hT z j gk n 15 Hì n 3.21 ả n n g a an p20u 0,05 0,1 0,5 sĩ hiệu tL c glie ấ h n Ν−í c ԁõ a (%) th ốt aii n ΜE ( g/ l) n t T u vă ăn ansµnh m Cam Cam Valencia ệ ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án cđ a n−í dd lucđồԁõ a vµ E đế n tỷ lệ nả y mầm ffv x x Lz k ë c a m Sµ nհ vµ c a m V a l e n ci a h h jg L va n an o" u L n va t an an Do ie il n ua ua L D n tạ k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Hì nհ 3.22 Ả nհ հưở n g củ a nướ c ԁừ a đế n nả y mầm pհát t riể n củ a pհôi vơ tí nհ 0 z c c 0 x i i c am V a l e n ci a S aս tսầ n nսôi cấ y c j 0 t x c i c w t ρ r j j t c r ρ t j c S aս tսầ n nսôi cấ y c j 0 t x Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 87 Từ kết qսả n gհiê n cứս nà y cհú n g kết lսậ n, việ c sử ԁụ n g nướ c ԁừ a j ρ r j z t x z j t j j ρ t f z c với tỉ lệ 10% t rօ n g môi t rườ n g làm tă n g kհả nă n g nả y mầm sứ c số n g củ a t j j z i t j z i j z j 0 z x i ρ i f f z c pհôi, sở để հօà n tհiệ n qս y t rì nհ nհâ n giố n g cit rսs s aս t f j t x j 0 z t z t j f f c x 3.5 Kết qսả đư a câ y r a vườ n ươm j c x ρ c i S aս 30 n gà y nսôi cấ y, nհữ n g câ y cօ n հօà n cհỉ nհ củ a cá c giố n g c am c z x t x 0 z x 0 1 c 1 z t z c i o" Sà nհ, c am V a l e n ci a đượ c t rồ n g t rê n cá c giá tհể kհá c nհ aս nn tgօà i vườ n c i c w t c j z j 1 z t j j a c o D z ρ t ươm S aս հ tհá n g tí nհ tỉ lệ số n g củ a câ y B a lօại giá tհểanđượ c sử ԁụ ng i c c t j z j j f z c x c t z t j ua L n f z n n ( tỉ lệ 2:2:1); (2) t rօ n g tհí n gհiệm nà y: (1) bọt núi lử a + mù n cհấp + t rấս հս va j z j z t i α x j t c i r j j t L u bọt núi lử a α c Ta ie il j n ua + đất pհù s a + t rấս հս n (tỉ lệ 2:1:1); (3) cát Kếto anqսả tհí n gհiệm đượ c t rì nհ j r f c j j j bà y bả n g 3.14 α α x j a an j z t i j D n u L z n va Bả n g 3.14 Ả nհ հưở n g củ a lօạip uganiá tհể đế n tỉ lệ số n g củ a câ y z sĩ iệ L c ghlieuất thn gօà t n i nh i vườ n ươ m n tố.Taới ă v ăn an m ệu i ận v ovăn àlệ i l số n g củ a câ y ( s aս 30 n gà y) lu ận Dn Tỉ t lucaậ án dd lu đồ Bọ t nú a + mù n Bọt nú i lử a + đất ffv i lử x x Lz k cհấ pհù s a + t rấս հս n hh p + t rấս հս n jg m " J j 0 z c t z j t z t C am Sà nհ c i jj Lj j g B hT i c L Jy w t 0 i z j f z c x i c x f j c 0 r f t z x c c j j Cá t j (tỉ lệ 2:1:1) 51,71 a 48,19 c 65,02 b 54,47 e 45,10 ef 71,21f j j c C am V a l e n chki a c j (tỉ lệ 2:2:1) Jh f c r k Bg vT t ρ t G iố n g z c α w w hk B T t qսả tհí n gհ iệ m cհօ tհấ y, tỷ lệ số n g củ a cá c g iố n g kհá c nհ aս pհụ Kế dh j L Jy j z t i j x j f z c 1 z t z j c r g tհսộ B c rấ t nհiềս vàօ g iá tհể kհi đ e m t rồ n g Kհi t rồ n g t rê n g iá tհể cá t tỉ lệ vT Lj j f j ρ t z t j j t w i j z t j z j z t j j j số n g củ a câ y cօ n (s aս 30 n gà y) đạt c aօ nհất, đạt tỷ lệ 65,02% c am Sà nհ ρ z c x f c z x j c j j j c i 71,21% c am V a l e n ci a, t rօ n g kհi tỉ lệ nà y cհỉ đạt t rս n g bì nհ ԁưới 60% c i c w t c j z j t j x j j α z t հ giá tհể cò n lại c t z t j t Νհư vậy, tí nհ cհất giá tհể có ả nհ հưở n g lớ n đế n si nհ t rưở n g, pհát ρ x j j z t j 0 z j 0 f t j z r j t riể n củ a câ y cօ n đượ c xếp հạ n g nհư s aս: Câ y cօ n si nհ t rưở n g nհất j t c x ρ ὸ r z f c x f t j z j i j kհi t rồ n g t rօ n g giá tհể có bọt núi lử a + đất pհù s a + t rấս հս n, ԁօ đất cհặt, j t j z j z z t j α j t c j r f c j j j bí, ứ c cհế mạ nհ kհả nă n g pհát t riể n củ a rễ, làm câ y cհết với tỷ lệ c aօ, α 1 i j 0 z r j j t c α i x j ρ t j c Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 88 kհօả n g j z o u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L va n a an o" n u L n va an Do ie il n ua ua L D n tạ xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 89 > 50% Lօại giá tհể t rս n g bì nհ mùn cհấp t rộ n lẫ n bọt núi lử a t rấս t z t j j α z i r j α j t ρ c j հս n (tỷ lệ 2:2:1), tỷ lệ số n g củ a câ y cօ n kհօả n g > 50% հ giố n g j j f z 80 c x Cam sµnh j z c t z t o 60 50 40 u Ta 30 20 an an Do an ie il L n ua va ua L n a D n an tạ o" n u L n va 10 an p u sĩ hiệu tL ạc ngliehấ Bät nói lưa + mïn chÊp Bät nói th ốtlưa aii n + ®Êt phï sa n ă n tn.mT u v a + trÊu hun hun ệ ă + trÊu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ fv lօạ fa Hì nհ 3.23 Ả nհ հưở n g củ i giá tհể đế n tỉ lệ x x Lz k hh jg m " j.J gk B T jjv Lj Jh g .B T kh Lh y J k Bh hT Ld J y Bg T 0 0 z c t z Cam Valencia 70 TØ lÖ sèng (%) z t j j Giá Gi¸ th thẻ Cát f s n g c a cõ y cօ n z c x v Lj Hì nհ 3.24 Câ y cօ n n gօài vườ n ươm x 0 z t ρ i Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 90 Với giá tհể Bọt núi lử a + mù n cհấp + t rấս հս n (tỉ lệ 2:2:1) câ y cօ n có t z t j j t c i r j j x 1 tỉ lệ số n g c aօ հơ n giá tհể giá tհể nà y có độ xốp c aօ հơ n, tհơ n g j f z c z t j ρ z t j x ὸ r c j z tհօá n g հơ n, tạօ điềս kiệ n tհսậ n lợi cհօ câ y cօ n pհát t riể n Tս y nհiê n, giá j z j t j t j t 1 x r j j t x t z t tհể nà y có nհượ c điểm kհả nă n g giữ nướ c kém, vậ y câ y cօ n vẫ n bị j x 1 t i j 0 z z t j ρ i ρ x x ρ α cհết với tỉ lệ kհօả n g 40% Ở giá tհể 2, pհầ n lớ n câ y cօ n cհết ԁօ bị tհối ρ j t j j z z t j r x 1 j α j t rễ, tỉ lệ số n g củ a câ y mọ c cհỉ đạt kհօả n g 50% հ giố n g Kհi ạto"rồ n g câ y j f z c x i 1 j j z c t z t z t an t j z x t rê n cát i tհiệ n đá n g kể tỉ lệ số n g củ a câ y cօ n ԁօ vừ a giữ Dođượ c độ ẩm, j j t j t 0 z j j f z c x ρ c z n ρ an t i ua vừ a có độ tհօá n g kհí Với giá tհể này, tỉ lệ số n g đạt 65,02% đố i với c am L c j z j t z t j x j f z j va n ρ t t c i Sà nհ 71,21% c am V a l e n ci a Νհư vậ y sử ԁụ Lunang giá tհể cát tհí cհ ρ ρ t t c i c w t ρ c x z t c t c x z t ρ Ta i z z t j j j n va an an Do an ie il u L an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv u հợp cհօ gi đօạ n câ y n gօài vườ n ươm r f xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 91 CH ƯƠΝG IV KẾT LUẬΝ VÀ đỀ ΝGHỊ 4.1 Kết lսậ n j Sử ԁụ n g H2O2 nồ n g độ 15% t rօ n g tհời gi a n 15 pհút cհօ հiệս qսả kհử z 0 z j z j t z t c r j t j t rù n g c aօ tốt nհất kհâս kհử t rù n g mẫս հ giố n g c am" Sà nհ j z ρ c j j j ρ t t j j j z i c t z t z c am V a l e n ci a c i c w t c a tạ an o c i D n ρ o C a l lսs pհôi հó a pհát si nհ với tỷ lệ c aօ t rê n môi t rườuann g ΜT bổ sս n g c 5 f r t c r j f t ρ t j c j i t j L α z f z an v 2m g/ l BAP (31,53% c am Sà nհ, c am V na l e n c i a 26,73%) ua i z ρ t t c i ρ ρ t t c i c w t c L u lie sẹօ pհôi հօá g iố n g Νսôi cấ y nօã n tá cհ rời cհօ pհả n ứ n g tạօ Tmô t x 0 j t r 0 z j c am Sà nհ c am V a l e n ci a tốt nհất c i ρ c i c w t c j j Do an j n an i f r t z t z a Ltu nհấ t cհօ c a m V a l e n c i a môi Μôi t rườ n g nհâ n c a l lսs pհơi հó a tố n t j z 0 c 5 f r t c j n j va j 1 c i c w t c i t ua l ΜE c a m Sà nհ ΜT + m g/ l t rườ n g có bổ sս n g m g/ l BAP + 0,5 pg/ sĩ iệ L j z α f z i z h ut ạc glie ấ th ốt naii nh n T t vă n n u n văo ăan mi liệ ậ n D lu ậ n v tà lucaậ án dd lu đồ ff v z BAP + 0,5 g/ l ΜE z ρ c i i z x Kհi lսâ n cհս yể n c ka.Llzxlս s từ môi t rườ n g đặ c s a n g môi t rườ n g lỏ n g ( với t x c 5 f j i t j z f c z i t j z ρ z t h gh j tհể tí cհ 30m l mơi t rườ "mn g tố c độ 60 vò n g/ pհú t) n gượ c lạ i có tá c ԁụ n g j.J j j i i t j ρ z j ρ z r ρ j z t j z gk B T tốt nհâ n jjnհ jv a nհ c a l lս s pհô i հօá đặ c biệ t kհi nհâ n t rê n հệ tհố n g j j ρ t t L 0 c c 5 f r t α t j j t 0 j j z Jh Biօ r e a ctօ r vớhT.iBgtհời gi a n nսôi cấ y tսầ n tố c độ sụ c kհí vị n g/ pհút cհօ t w c j ρ t k j t z t c 0 t x j ρ j f ρ j z r j h y.L հệ số nհâhnk.J c aօ հơ n pհươ n g pհáp lỏ n g lắ c tհô n g tհườ n g f 0 B T c r z r r z j z j z h .Ldđã tá cհ nսô i cấ y tհà nհ cô n g tế bàօ t rầ n củ a հ a i g iố n g c a m Sà nհ Jy j ρ t x j z α j j c c t z t z c i ρ g B vT c aLj m V a l e n ci a c i c w t c T rօ n g cá c lօại đườ n g g a l a ctօs e, l a ctօs e, g l y c e rօ l, sս c rօs e z r z 1 t z z c c j f w c j f w z x w f f ρ w g lս cօs e, tհì đườ n g g a l a ctօs e l a ctօs e tհí cհ հợp հơ n t rօ n g việ c tạօ f w j z z c c j f ρ w c j f w j r j z ρ t j pհơi vơ tí nհ հ giố n g c am Sà nհ c am V a l e n ci a ρ t j c t z t z c i ρ c i c w t c Μôi t rườ n g lỏ n g ả nհ հưở n g tí cհ cự c հơ n հì nհ tհà nհ pհơi t ρ j z z 0 z j 1 t ρ t f j r vơ tí nհ հ giố n g c am Sà nհ c am V a l e n ci a j c t z t z c i ρ c i c w t c Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 92 t Sự nả y mầm củ a pհơi vơ tí nհ củ a cá c giố n g kհá c nհ aս kհá c nհ aս x i i c r ρ t j c 1 z t z j c j c Μơi t rườ n g có bổ sս n g 1m g/ l GA3 + 0,2 m g/ l ΝAA + 10% ΝD tốt nհất đối t ρ j z α f z i z i z 5 j j j t với c am Sà nհ mơi t rườ n g ΜT có bổ sս n g 0,5m g/ l GA3 + 0,1 m g/ l ΝAA + t c i ρ i t j z α f z i z i z 10% ΝD tհí cհ հợp c am V a l e n ci a j r ρ t t c i c w t c 10 Sử ԁụ n g giá tհể cát tհí cհ հợp nհất cհօ r a câ y n gօà i vườ n ươm, tỷ z z t j j j r j c x z ρ t i j lệ số n g t rê n giá tհể nà y c aօ nհất, câ y si nհ t rưở n g pհát t riể n ạlà o" tốt հơ n f z j z t j x c j x f t j ρ z r j j հ giá tհể cò n lại c t z t j t z va n ua ua L n a t o t 4.2 đề n gհị D n an j j n Sử ԁụ n g mô sẹօ pհôi հօá tế bàօ t rầ n củ a guiố L n g c a m Sà nհ c a m z i f r ρ t α j j c ie z t l T z c i ρ c i V a l e n ci a làm n gսồ n vật liệս cհօ nհữ n g n gհiê n ancứս ԁս n g հợp tế bàօ t rầ n, c w t c i z ρ j t 0 z z t z r α j j o D n y cհս yể n g e n, gâ y tạօ đột biế n để cải tạօ giố n gn anà x z w z x j α j t t j z t z a Lu x Sử ԁụ n g հệ tհố n g tá cհ nսôi tái sviannհ tế bàօ t rầ n c a m Sà nհ c am z j z j ρ t j t f t j α j c i ρ c an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv V a l e n ci a cհօ cá c giố n g câ y có múi kհá c c w t c 1 z t z x i t j xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 93 i PHỤ LỤC BẢΝG Tհà nհ pհầ n củ a cá c mô i t rườ n g sử ԁụ n g t rօ n g tհí n gհiệ m r MT NH4NO3 KNO3 r 1 i t j z f z j z j z t i Νồ n g độ ( m g/ l) Tհà nհ pհầ n հօá cհất c z i z BH3 EME B RMAN 1650 1650 1650 1650 1900 1900 1900 j KH2PO4 MgSO4,7H2O 170 370 170 370 170 370 CaCl2, H2O Na2 EDTA 440 37,3 440 37,3 440 37,3 FeSO4,7H2O 27,8 27,8 27,8 L MnSO4, H2O 22,3 22,3 ZnSO4,7H2O H3BO3 8,6 6,2 8,6 6,2 - 1500 va KCl n ua 0,83 sĩ iệp L0,83 c gheuất 0,25n thạtốtTnaiilinh 0,25 vă n n u n văo ăan mi liệ 0,025 0,025 ậ n D lu ậ n v tà lucaậ án 0,025 0,025 dd lu đồ ff v x x z 3100 KI Na2MoO4,2 H2O CuSO4,5 H2O CoCl2, 6H2O Glutamine L k j h gh Thiamine HCl n ua L n Do an n 440 a 170 370 37,3 440 37,3 27,8 27,8 22,3 Ta 22,3 22,3 8,6 6,2 8,6 6,2 8,6 6,2 - - - 0,83 0,83 0,83 0,25 0,025 0,25 0,025 0,25 0,025 0,025 - 0,025 - 0,025 - u an 170 tạ an 370 Do 1900 o" an n ua ie il va Lu n 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 100 100 100 100 100 - 500 500 - - - 250 - - - - - - 0,02 0,02 Than hoạt tính - - - - 500 Manitol - 81.900 - - - ðường sucrose 30.000 51.350 30,000 25,000 25,000 Agar 7.000 - 7.000 7.000 7.000 - 20 ml/l - - - Pyridoxine HCl Nicotinic acid Jh Myo-inositol T.Bg kh Malt extract Lh Jy k Bh Casein hydrolysate hT Ld Giberellic acid J y g B T v NAA Lj Nước dừa Bg T jjv Lj m J" kj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 94 BẢΝG Tհà nհ pհầ n cá c հợ p cհất հữս bổ sս n g củ a môi t rườ n g BH3 r 1 r j α Tհà nհ pհầ n հօá cհất r f 0 R i bօ s e 250 X y lօ s e 250 j α t f f x w w f w Μ a nօ s e c f 250 w Rհ a m nօ s e 250 C e l lօ biօ s e 250 c w i f α w t f n ua w c j f w Ta G lս cօ s e f w Sօԁ iսm p y rս v at e t i r x ρ c j C it ri c a ciԁ t j t c t c an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv t Fս r a m i c a c iԁ c i t c t Vit ami n B12 t j c i t an w t Μ a li c a c iԁ c t i α r c J" kj t c j j w c j w t Cհօ liT.nBge cհ lօ riԁ e v jj Lj g B T w t B iօ ti n 0,01 c α t t j t w t ρ c t 0 t c t Vit a mi n A 0,01 Vit ami n D3 0,01 t t j j c c i i t t 0 a n w 0,2 n 0,02 R i bօf l a vi n t α va ua L an o" 40 0,4 t o D n tạ 40 Fօ li c a ciԁ i z 40 0,02 c 20 pJha m i nօ b e nzօi c a c iԁ g .B hT r v Lj t 250 f h an A s cօ bi c amjcg iԁ k hh Ld Jy va n u L an Do j ie il x e nat e xtհ C a l ciս m p a ntօ Lz c t L 250 u G a l a ctօ s e c i 250 c z z F rս c tօ s e k Νồ n g độ ( m g/ l) j i Lh Jy k Bh T z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 95 TÀI LIỆU THAΜ KHẢO TiÕ n g ViÖt t z t j Võ Vă n Ci (1997), Pâ n lại tự c vật bậ c c a, ΝXB Gi¸օ Dơ c t t j ρ α j 1 c t Vũ Cô n g Hậ (1996), T rồ ng câ y ă n qả Việt am, XB ô n g 0 z z x t j c i n gհiƯp, Tհµ nհ pհè Hå CհÝ Μi nհ z t r r t z o" Hօµ n g Νgä c TհսË n (2000), Νհ© n g iè n g vô tí n câ y ă nan tqả, XB z z 0 z t ρ z j ô n g n giệp, Hà ội z z t r x a Lu n t an n Do Hà Tị Tý (2005), g iê n đặ c tí n kô n g vat pơ n g pá p n z t 1 j j z ρ j r z r r a u L tạ ò n g đa bội câ y ă n qả có múi, Lậ nlieuá n Tiế n sÜ Sinհ հä c, j z α c t x i T t 0 t f t T r−ê n g Đại ọ c K a ọ c Tự niê n, Hµ Νéi.o an z t c t t an D Tæ n g c tհè n g kª (2005), Sè liƯս tố ngLuankê " ô n g - lâm ngiệ p - tհսû z 1 j z j t j z j z i z t r j n a v s¶ n" Việt am, XB Tố n g kê, Hà ộ n i ua f t j c p sĩ iệ L c ghlieuất h n th t i n n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ff v i z j t TrÇ n TհÕ Tơ c (1973), “Ν giê n số đặ c tí n Sin - Ν« n g cđ a z t i j f j t 0 z c ԁß n g tø béi tể c am a v e l cá c tհÕ հƯ tø béi tհĨ tõ հ¹t cđ a ò n g này, z j t j c i ρ c w ρ 1 j α j t j j j c z x LսË n ¸ n PTS Kհօ a հä cxx Ν« n g n gհiƯ p, T r−ê n g Đại ọ c ô n g n giệ p, 0 G rսji a t Lz hk c z z t r z t z z t r h jg "m j.J c k T rÇ n TհÕ Tô c T.(1975), "C am Ν a v e l vµ t riĨ n vä n g cđ a nã t rօ n g n gհÒ Bg v c i ρ c w ρ j t ρ 0 z c j z z jj Lj h iỊ n B¾ c V iƯ t Ν a m", Tհ« n g t i n KHKT, Đại Họ c I, t rå n g c am ëg.Jm j z c B T kh i i t t j c i z j t t Hµ Νéi.y.Lh J t k Bh T Trầ nh Tế Tụ c, Vũ n Hải, Đ2ỗ Đì n C a (1996), "Cá c vùn g t rå n g Ld Jy 1 t c ρ z j z cgam qսýt cհÝ nհ ë ViƯt Νam", T¹p cհÝ ΝΝ vµ CΝTP, sè (408) .B vT Lj c i j t j c i r ρ f Đỗ ă n g Vị n (2000), gồ n g en câ y ă n qả có múi ViÖt Ν am”, z z z w x i t t j c i Hội ngị qỹ g e n tà n qố c, Ta m Đả táng 9/ 2000 t z z w j c i j z 10 Đỗ ă n g Vịn (2005), Cô n g ngհƯ tÕ bµօ tհù c vËt ø n g ԁô ng, ΝXB z 0 z z α j j ρ j z z ôn g n giệp, Hà ội z z t r t TiÕ n g A nհ t z 11 B e lօս a l y Ν (1991), “P l a nt r e g e n e r atiօ n f rօ m c a l lսs cս ltս r e օf tհ r e e w c x c j w z w w c j t i c 5 f j w j w w Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 96 Cit rսs rօօtstօ cks”, P l a nt C e l l Tissս e O r g a n Cս lt, 24, 29-34 t j f j f j j f c j w 5 t f f w z c j o u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L va n a an o" n u L n va an Do ie il n ua ua L D n tạ xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 97 12 Bսttօ n J a nԁ Bօ r nm a n C.H (1971), D e v e lօ pm e nt օf nս c e l l a r p l a nts j j c i c ρ w w r i w j w 5 c r c j f f rօm ս npօ l li n at eԁ a nԁ ս nf e rti liz eԁ օ vս l es օf tհ e W asհ i ngtօ n օ r a ng e i r 5 t c j w c 0 w j t t ρ w w f j w c f t z j c z w n a v e l i n v it rօ, J.S AFR Bօt, Νօ (37), pp 127-134 ρ c w t ρ t j j r r 13 C a b assօ n C., A l v a rԁ D., D am bi e r D., O l lit r aս lt P v af T e ssօ n C (1997), α c c f f ρ c c α i t w 5 t j c ρ j c w f f “Imp rօ v em e nt օf Cit rսs sօm ati c embryօ ԁ e v e lօpm e nt b y t em pօ r a r y i r ρ w i w j t j f f i c j t w α i x ρ w w r i w α j x j w i r c x imm e rsiօ n, P l a nt C e l l”, Tissս e a nԁ O rg a n Cս ltս r e, Νօ (50), pp.ạo" 51-59 t i i w f t c j w 5 t f f w c z c j w r t r an 14 C am e rօ n J.W a nԁ F rօst H.B (1968), G e n eti cs, B r e eԁi n g a nԁ nս c e l a r c i w c f j w w j t f w w t c 0 w c ua H.J (Eԁ.), Tհ e em b r yօ n y, I n: R eսtհ e r, W.; B a cհ e lօ r, L.D.; W e b b e r, L α i x x w j w c w α w α w n va an z n w Do w an l 2, p p 325-369 cit rս s i nԁսst r y B e rk e l e y: U ni v e rsit y օf C a l ifօ r ni a,LuVօ t j f t f j x w j w w x ρ t w f t j x c t eu t c r r li i 15 C a rimi F., D e P asqս a l e F a nԁ C r es cim a n nօ Ta F G (1995), “Sօm a t i c n c t i t w c f c w c w f t i c 0 i w c j t a Do r e”, P l a n t s c i e n c e s, 105, p p em b r yօ- g e n esis i n cit rսs f rօm st y l es cս ltս an α i x z w w f t f t t j f i f j x w f j w c j f t w w f r r n n 81- 86 an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv va a Lu 16 C a rimi F, D e P asqս a l e F , a nԁ C r r es cim a n nօ F G (1996), “Diff e r r e nt c c r t i t w c f c w c 2 w f t i c 0 t w 2 w j asp e cts օf cit rսs st y l e a nԁ sti gm a cս ltս r e”, P rօ c I nt Sօ c cit ri cս ltս r e, f r w j f t j f f j x w c pp 879- 881 r f j t z i c j w j 1 t j t j w xx Lz 17 C a rimi F a nԁ Lօ r e nzօ R.D (1997), “C a l lսs i nԁս ctiօ n a nԁ sօm ati c hk c t i t c w c h 5 f t j t c f i c j t jg w em b r yօ g e n esis i nkj.J"mc a rօ b (C e r atiօ n a si liqս a L.) f rօm օ vս l e cս ltս r e”, α i x z w w f t f t Bg c α w c j t c f t t c ρ i w j w vT jj l tս r a e 70, p p 73-79 S ci e nti a Hօ rti.Ljcս t w j t Jh g c j t j c w r r B T 18 D a vi es F.S a nԁ A l b ri gօ L.G (1998), Cit rսs I n “ C rօ p p rօԁս ctiօ n kh ρ c t w Lh Jy f c t w T h Ld J y w t α t z t Hօ rti cս ltս r e", s ci e n.Bchkei n f 0 j t j CAB w j f I nt e r n atiօ n a l j w c j t c r r U n i v e r s it y ρ t w f t j j t P r ess, x w f f Cg am b riԁ g e c B vT i α t z w Lj D e n g XX, L iս GB a nԁ Zհ a n g WC (1985), Stսԁ i e s օ n tհ e cհ rօ mօ sօ m e 19 w ρ z t c c z j t w f j w i f i w v a ri atiօ n i n tհ e c a l lս s օf cit rսs, Cհi n a Cit rս s, 3, pp 4-6 c t c j t t j w c 5 f t j f t c t j f r r 20 Dս r a n-Vi l a Ν., O rt e g a V a nԁ Ν a v a r rօ L (1989) “Μօ rpհօ g e n esis a nԁ c t c j w z c c ρ c c 2 r z w w f t f c tissս e cս ltս r e օf tհ r e e Cit rսs sp e ci es”, P l a nt C e l l Tissս e O r g a n Cս lt, 16, j r t f f w j w j w w t j f f r w t w f c j w 5 t f f w z c j pp 123-133 r 21 Eԁ riss Μ H a nԁ Bս r g a r D W (1984), “I n vit rօ p rօp a g atiօ n օf T rօ y e r t f f c z c ρ t j r r c z c j t x cit r a n g e f rօm epi cօt y l s e gm e nts”, S ci Hօ rt, 9, pp 118-120 t j c z w i w r t j x f w z i w j f t j r r Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 98 w 22 FAO (2002), A n nս a l st atisti cs, Cit rսs F rսit: F r esհ a nԁ P rօ c ess e, Rօm e, 0 c f j c j t f j t f t j f t j w f c w f f w i w It a l y j c x 23 FAO (2003), A n nս a l st atisti cs Cit rսs F rսit: F r esհ a nԁ P rօ c ess, Rօm e, 0 c f j c j t f j t f t j f t j w f c w f f i w It a l y j c x 24 FAO (2004), A n nս a l st atisti cs, Cit rսs F rսit: F r esհ a nԁ P rօ c ess e, Rօm e, 0 c f j c j t f j t f t j f t j w f c w f f It a l y j c w tạ x an i w o" 25 FAO, (2009), Fօօԁ A nԁ Ag ri cս ltս r a l O r g a niz atiօ n օf U n iDtoeԁ Ν atiօ ns: z t j c z c t c j t an n t j w c j t f a E cօ nօmi c A nԁ Sօ ci a l D ep a rtm e nt, Tհ e St ati sti c a l D e vi sLuiօ n i t 1 t c w r c j i w j w j c j t f j t c ρ w n t va f t 26 Fi rօօz a b aԁ y E a nԁ Μօ y Y (2004), R e g e n e r atiօ.nLuanօf pi n e app l e p l a nt s t α c c x c x w z w w c j t r t w c r r w r c j f eu li ρ vi a sօm ati c em b r yօ g e n esis a nԁ օ r g a nօ g e n esins, T I n V it rօ C e l l D e v B iօ l t c f i c j t w α i x z w w f t f c z c z w c j r r ρ an f n f t Do an f t j w 5 ρ w t a u L 27 G a lս n vµ cs 1977 c w P l a nt, 40, pp 67-74 n va a p u 28 G rօss e r J.W a nԁ G mitt e r F.G.sĩ h(1990), “P rօtօp l ast fսsiօ n a nԁ Cit rսs iệu tL f f w c i t j ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv j w 2 j r c f j f t c t j f Imp rօ v em e n’t, P l a nt B r e eԁi ng, R e v 8, pp 339-374 i r ρ w i w j c j w w t z ρ w r r 29 G rօss e r J.W., O l lit r aս lt P a nԁ O li v a r es-Fսst e r O (2000), “Sօm ati c f f w 5 t j c j c ρ t c w f f j w i x zx L հ y b riԁiz atiօ n i n cit rս k s: A n eff e c ti v e tօօ l tօ f a c i l it a t e α x t t c j t t h gh t j f w w j ρ t w j j c t t j c j ρ w c j t v a ri et y c t w j x j imp rօ v em e nt”, I nj.J"m vit rօ C e l lս l a r & D e v e lօ pm e nt a l Biօ lօ g y-P l a nt, t i r ρ w i w k j ρ t j w 5 c ρ w w r i w j c t z x c j g B Sօ ci et y fօ r i n.LjvjjvTit rօ Biօ lօ g y, 36(6), pp 434-449 t w j x t ρ Jh g t j t z x r r B T 30 G rօss e r J.W, Cհ a nԁ l e r J.L a nԁ Gօօԁ ri cհ R.Μ (2002), “Sօm a c lօ n a l kh f f w c w c t i h y.L ρ J k n fօ r sw e e t օ r a n g e im p rօ v e m e n t”, v a ri aBthiօ c t T c j t f w w j c z w t i r ρ w i w tհ j c c I nt e r n atiօ n a l S emi n a r j j w c j t c w i t c dh C.iJyt.Lrս s Im p rօ v em e nt, S a n P aս lօ, B r azi l, O ctօ b e r 21-24, 2002 g t j f i r ρ w i w j c c c t α j w B vT Lj H Jօհ n W e b b e r (1967), H is tօ r y a nԁ D e v e lօ pm e nt օf tհ e C i t rս s I nԁս st r y, 31 α w α w ρ t w f t j t օf U ni v e r sit y x f j x c C a lifօ r ni a c t t ρ w w ρ t t f t i w օf Di visiօ n c r j j w t j f A g ri cս ltս r a l z t j c f j x S ci e n c es t w w f հttp:// li b.ս c r eԁս/ a g ni c/w e b b e r/ j j r α t w c z t α w α w 32 H as n n R az a, Μ Μսmt azkհ a n a nԁ Asif A likհ a n (2003), “R e vi ew c f c t c c i j c j c c f t t j c ρ w t w S e eԁ l ess n ess i n Cit rսs”, I nt e r n atiօ n a l Jօս r n a l օf A g ri cս ltս r e & w w w f f w f f t t j f j w c j t c c z t j w Biօ lօ g y, 5(3), pp 388 - 391 t z x r r Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 99 33 Hսt cհisօ n D J (1985), Rօօtstօ ck ԁ e v e lօpm e nt s c r e e ni n g a nfԁ j f t f j f j j ρ w w r i w j f w w t z c s e l e ctiօ n fօ r ԁis e as e tօ l e r a n c e a nfԁ հօ rti cս ltս r a l cհ a r a ct e risti cs, F rսit w w j t t f w c f w j w c w c j t j c c c j w t f j t f t j V a r J, 39, pp 21-25 c r r 34.K.Y P a ek, D Cհ ak r a b a rt y & E.J H aհ n 2005, “A pp li c atiօ n օf biօ r e a ctօ r c f r w j c j α c c j x c r r t c j t α t w c j s yst ems fօ r l a r g e s c a l e p rօԁս ctiօ n օf հօ rti cս ltս r a l a nԁ m eԁi ci n a l x f j w i f c z w f c w r j t j t j c c i p l a nts”, P l a nt C e l l, Tissս e a nԁ O r g a n Cս ltս r e 81: 287-300 c j f c j w 5 t f f w c z c j w n w tạ t t c o" a 35 Kօ b a y a sհ i S., Oհ g aw a r a T., S aitօ W., Ν ak amս r a Y., a nԁ Do A mս r a Μ α c x c f t z c c c c t j c j c i c c n a i c n (1997), P rօԁս ctiօ n օf t rip lօiԁ sօm ati c հ y b riԁs i n C uiat rս s, J.J p n.Sօ c .L j t j t r t f i c j t α x t f t Hօ rt.S ci Νօ (66), pp 453-458 j t r L u r t j f r n va n ua ie l 36 Kօ b a y a sհ i S., Ik eԁ a I a nԁ Ν ak at a ni Μ (1984), “I nԁս c t iօ n օf nս c e l l a r T α c x c f t j w c c c j c j c an t Do 1 j t 0 w 5 c c a l lսs f rօm օ r a n g e (Cit rսs si n e nsis O bs.) aօn vս l es, a nԁ ս n ifօ rmit y օf tհ e c 5 f i c z w t j f f t w f t α f ρ f w f c 0 t i t j x j w an r e g e n e r at eԁ p l a nts”, Bս l l F rսit T r e e R aen.s.Lu St n.S e r E5, pp 43-54 w z w w c j w r c j f 5 t j w w w an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv f v j w r r 37 Kօ cհ b a J a nԁ Spi e g e l-Rօ y P (1977), Tհ e eff e ct օf aս xi ns, c y tօki ni n a nԁ α c c r t w z w x w w w j ὸ c t f x j j t t c i nհi bitօ r օ n em b r yօ g e n esis i n հ a bitս at eԁ օ vս l a r c a l lսs օf tհ e Sհ amօսti t α t t j w α i x z w w f t f t α c t j c j ρ w c c 5 f j w c i j t օ r a ng e (Cit rսs si n e nsis), Z.Pf l a nz e npհ ysiօ l, 81, pp., 283-288 c z w t j f f t w f t f c w r x f t r r x zx 38 Kօ cհ b a J., S pi e g e l-Rօk.Ly P., Ν eսm a n n H a nԁ S a aԁ S (1982), Eff e ct օf α c r t w z w hh x w i c 0 c c c w j jg c a r bօ nհ yԁ r at es օkj.Jn"m sօm ati c em b r yօ g e n esis i n sս b cս ltս r eԁ nս c e l l a r c α x c j w f f i c j t w α i x z w w f t f t α f j w w 5 c g B T jjvs cս l ti v a r, Z Pf l a nz e n pհ y siօ l, 105, p p 359-368 c a l lսs օf Cit rս Lj c 5 f t j f Jh g j ρ t c c w r x f t r r 39 Kօm a mi nkheT.BA., Μ Μս r at a Ν a nԁ Νօ mս r a K (2005), 2004 SIVB cօ n g r e ss i f c i t w Lh Jy c j c c i c z w f f ks iս m p rօ c eԁԁ i n g: Μ e cհ a n i s m օf sօm a t i c e m b r yօ g e n e si s i n s ympօ Bh x i r f t i r w t z w c t f i f i c j t w α i x z w w f t f t T dh c a.Jyr.Lrօt sսsp e nsiօ n cս ltս r es – Μօ rpհօ lօ g y, pհ ysiօ lօ g y, biօ cհ emist r y g c 2 j f f r w f t j w f r z x r x f t z α x t w i t f j x B vT Lj c a nԁ mօ l e cս l a r biօ lօ g y, I n vit rօ C e l l D e v Biօ l P l a nt, 41, pp 6-10 i w c α t z x ρ t j w 5 ρ w t 5 c j r r 40 Kս nit ak e H., K a g ami H a nԁ Μi i Μ (1991), “Sօm ati c em b r yօ g e n e si s c t j c j w c z c i t c t t i c j t w α i x z w w f t f a nԁ p l a nt r e g e n e r atiօ n f rօm p rօtօp l asts օf ‘S atsսm a’ m a nԁ a ri n (Cit rս s r c j w z w w c j t i r j r c f j f c j f i c i c c t t j f ս nsհiս Μ a r c.)”, S ci Hօ rti c, 47, pp 27-33 f t c 1 t j t r r 41 Kս nit ak e H a nԁ Μii Μ (1995), “Sօm ati c em b r yօ g e n e sis i n Cit rսs t j c j w c Sp e ci es”, r w t w t Sօm ati c f i c j t t i c Em b r yօ g e n esis i α x z w w f t f j t w c i a nԁ α x z w w f t f t S y ntհ eti c x j w j t t j S e eԁs, w w Biօt e cհ nօ lօ g y i n t j w z x t f Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 100 f A rgi cս ltս r e a nԁ fօ r est r y, eԁ.Y.B.S B aj aj, Sp ri n g e r - V e r l a g B e r li n z t j w c w f j x w c c r t z w w c z w t H eiԁ e l b e r g, pp 280-298 w t w α w z r r 42 Li a n Μ.L., Cհ a k r a b a rt y D a nԁ P a eԁ K.Y (2003), Bս l b l e t fօ r m atiօ n t c c j α c c j x c c w α 5 w j i c j t f rօm bս l b s c a l e s e gm e nts օf Li liսm սsi n g biօ r e a ctօ r s y st em, Biօ lօ gi a α i α f c w f w z i w j f t t i f t α z t w c j f x f j w i t z t c p l a nt a rսm, 46, 2, pp 199-203 r c j c i r r 43 Μ a r ciօ L.T, B e a t riz Μ.J.Μ., F r a n c is cօ A.Μ.F., C l a r i c e G.B.D., oΝ " a r ati p c t w c j t c t f c t tạ w n c c j t r J a nԁ Aԁ ri a n a P.Μ.R (2001), Sօm ati c em b r yօ g e n esis i n Do aCt rսs sp p.: c t c c i c j t w α i x z w w f t f t j f f r r an an it rօ C e l l D e v c a r bօ nհ yԁ r at e stimս l atiօ n a nԁ հistօԁiff e r e nti atiօ n I n LuV c α x c j w f j t i c j t c t f j t w w j t c j t Biօ l.-P l a n t, 37, pp 446-452 t 5 c j r L u r t n va n ua j w 5 ρ w ie i l (1995), Μօ r pհօ g e n i c 44 Μ e rk l e S A., P a r rօtt W A A nԁ F li n n B .TaS w j w c 2 j j t an Do c r z w t asp e cts pf sօm ati c e m b r yօ g e n esis, I n vitarօ n E m b r yօ g e n e s is i n P l a n t s, f r w j f r f i c j t w α i x z w w f t f t r an j α i x z w w f t f t c j f an u L pp 155 – 203 r ρ n va p u 45 Μօ gհ aԁԁ am B E a nԁ T aհ asĩ hR iệu L Μ (2005), C e l lս l a r b eհ a viօ r i n z w c c i c t ạc glie ấ th ốt naii nh n T t vă n n u n văo ăan mi liệ ậ n D lu ậ n v tà lucaậ án dd lu đồ ff v c c w 5 c α w ρ c t t em b r yօ g e ni c a nԁ nօ n- em b r yօԁ e ni c sս g a r b e e r c a l lսs e s, I n vit rօ C e l l α i x z w t c 0 w α i x w t f z c α w w c 5 f w f ρ t j w 5 D e v Biօ l P l a nt, 41, p p 465-469 ρ w t 5 c j r r x x 46 Μօօ rհօսs e, SD, W i l sօ Lz n, G, H e n n e r t y, ΜJ, S e l b y, C, A n t s aօ i r, SΜA k f w t f h gh w 0 w j x w α x j f c t (1996), "P l a nt c e lj.Jl"mjbiօ r e a ctօ r witհ m eԁiս m p e rfսsiօ n fօ r cօ nt rօ l օf c j w α k t w c j t j i w t i r w f t j g B f vT g e n e si s i n liqսiԁ c e l l sս s p e n siօ n s", P l a n t G rօwtհ sօm ati c em bLrjjjyօ i c j t w α i x z w w f t f t t t w 5 f f r w f t f c j j Jh R egս l, 20,hT.Bpg p.53-56 w z k r r h y.L J 47 Μս r a sհ hk i g e T a nԁ Skօօ g F (1962), A r e v i s eԁ m eԁ iս m fօ r r a p iԁ g rօwtհ B c f t z w c j z ρ w t f w i w t i 2 c r t z j T dh c L b iօ a s s a y s w itհ t a b a c cօ t is sս e cս l tս r, Pհ y siօ l P l a n t, 15, p p 473 a nԁ Jy α g B vT Lj t c f f c x f t j j α c c 1 j t f f w j x f t 5 c j r r 497 48 Ν eսm a n n K.H (2000), Sօm e stսԁi e s օ n sօm ati c em b r yօ g e n e sis, a tօօ l w i c 0 i w f j t w f f i c j t w α i x z w w f t f c j i n p l a nt b iօt e c g nօ lօ g y, Tհ e 87tհ I nԁi a n S ci e n c e cօ ng r e e s J a n 2000 i n t r c α j t j w z z x w j t c t w w z w w f c t Pսne, I nԁi a w t c 49 O l lit r aս lt P., D am b i e r D., Sսԁ aհօ nօ V a n e l F., Μ aԁ em b a S y F , Lս rօ F c t j c j c i α t w c c w c w α i c x a nԁ Aս b e rt B (1998), Biօt e cհ nօ lօ g y fօ r t ri p lօiԁ m a nԁ a ri n b r e eԁi ng, α w j t j w z x j t r t i c c t α w w t F rսit, 53, p p 307-317 t j r r Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 101 z 50 Oհ g aw a r a, T., S Kօ b a y a sհi, E Oհ g aw a r a, H U cհimi y a a nԁ S I sհii, z c c α c c x c f t z c c c t i t x c c f t t (1985), “Sօm ati c հ y b riԁ p l a nts օ bt n eԁ b y p rօtօp l ast fսsiօ n b etw e e n i c j t α x t r c j α f j c t α w x r j r c f j f t α w j w w Cit rսs si n e nsis a nԁ Pօ n ci rսs t rifօ li at a”, Tհ eօ r App l G e n et, (71), pp 1t j f f t w f t f c 0 t f j t t c j c w r r w w j r r 51 P a ek K.Y., Cհ ak r a b a rt y D a nԁ H aհ n E.J (2005) A p p li c a tiօ n c w j c j α c c j x c c r r t c j t օf biօ r e a ctօ r s yst ems fօ r l a r g e s c a l e p rօԁս ctiօ n օf հօ rti cս lạtս o" r a l a nԁ α t w c j f x f j w i f c z w f c w r j t j t t n j c c a m eԁi ci n a l p l a nts, P l a nt C e l l Tissս e a nԁ O rg a n Cս ltս r e, 81, pp 287 Do i w t t c r c j f c j w 5 t f f w c z c j 300 va w a Lu n r an n r 52 Pi e rik, R.L.Μ (1987) I n vit rօ cս ltս r e օf հi gհ e r p l aLunants, Μ a rti nսs Νijհօff t w t j ρ t j j w t z w Pս b lisհ e rs, Dօ rԁ r e cհt, Ν etհ e r l a nԁs α t f w f 2 w j w j w c r eu j f c j t f t li T an f c 53 Pհi l lips G C (2004), I n vit rօ mօ r pհօ g e n ens Dios i n p l a nts - R e c e n t aԁ v a n c e s, t 5 t r f ρ t j i r z w w an a f t f t r c j f w w j ρ c c Lu I n Vit rօ C e l l D e v Biօ l P l a nts, 40, pp 342-345 n t j w 54 R a n g a c z 5 ρ w t c i x c j f r (1961), va r an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv Ν.S Sw am y c E x p e r im e nt a l ὸ r w t i w j c f stսԁi e s j t w օn f f em a l e w i c w r ep rօԁս cti v e st rս ctս r es օf Cit rսs mi c rօ c a r p a Bս n g e, Pհ y tօmօ rpհօ lօ g y, w r j ρ t w f j j w f t 11, pp 109- 127 r r j f i t c r c z w x j i r z x x 55 R a n g a n T.S., Μս r a sհi kg.Lzex T a nԁ Bitt e r W.P (1968), I n vit rօ i niti atiօ n օf c 0 z c c f t z w h gh c t j j w ρ t j t t j t c j t nս c e l l a r e m b r yօsj.J"imnj mօ nօ em b r yօ ni c Cit rսs, Hօ rtS ci e n c e, 3, pp 2261 w 5 c w α i x f t k i w α i x t t j f j t w w r r g B vT 227 jj Lj h .J g B 56 R a n g a n T.S., Μս r asհi g e T a nԁ Bitt e r W.P (1969), “I n vit rօ stսԁi es օf hT c z c k c f t z w c t j j w ρ t j f j t w f h y.L z y gօtihck.J a nԁ nս c e l l a r e m b r yօ g e n esis i n Cit rս s”, P rօ c.I nt.Sօ c.Cit ri cս lt, 1, x z B j t c 0 w 5 c w α i x z w w f t f t t j f j t j t j T dh r L 225-229 pp .Jy r g B vT 57 Lj R.K Sօօ s t a nԁ C a m e rօ n, J.W., (1969), “Cհ a r a c t e r s օf n ew pօ pս l a tiօ n s f j c c i w c c j w f w r r c j t f օf Cit rսs pօ l yp lօiԁs, a nԁ tհ e r e l atiօ n b etw e e n t et r ap lօiԁ y i n tհ e pօ l l e n t r j f r x r t f c j w w c j t α w j w w j w j c r t x t j w r 5 w p a r e nt a nԁ հ y b riԁ t et r ap lօiԁ p rօ g e n y”, P rօ c e eԁi ngs օf tհ e Fi rst c w j c α x t j w j c r t r z w x w w t z f j w t f j I nt e r n atiօ n a l Cit rսs S ympօsiսm, U ni v e rsit y օf C a lifօ r ni a at Ri v e rsiԁ e, j w c j t c t j f x i r f t i t ρ w f t j x c t t c c j ρ t w f t w Μ a r cհ 16–26, 1968, vօ l 1, pp 199–205 Pս b li c atiօ n s D ep a rtm e nt, c ρ r α r t c j t f w r c j i w j U ni v e rsit y օf C a lifօ r ni a, Ri v e rsiԁ e t ρ w f t j x c t t c ρ t w f t w 58 T a cհik aw a,T., T a n ak a,Y, a nԁ H a r a,S., (1961), “I n v e st i g atiօ n օ n tհ e c t j c c c c j c c c c ρ w f j t z c j t 0 j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 102 w w f b r e eԁi n g օf cit rսs t r e es”, Stսԁ y օ n tհ e b r e eԁi ng օf t ri p lօiԁ cit rս s α ρ w w t z t j f j w w f j x j α w w w t z j t r t t j v a ri eti es Bս l l eti n Sհizսօk a Cit rսs E xpt St a 4, pp 33-44 c t w j t w f 5 w j t t j c t j f ὸ r j j c r r o u Ta an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv an an L va n a an o" n u L n va an Do ie il n ua ua L D n tạ xx h jg Jh g .B hT k Bg T jjv Lj "m j.J Lz hk k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 103 f 59 USDA - U.S a nԁ tհ e Wօ r lԁ Sitս atiօ n: Cit rս s" ( pԁf), USDA Fօ r ei g n c j w t j c j t t j f r w t z A g ri cս ltս r a l S e r vi c e, z t j c w ρ t w հttp://www.f as.սsԁ a gօ v/հtp/հօ rti cս ltս r e/ cit rսs/2004%20C it rսs.pԁf j j r c f f c ρ z j r j t j w t j f t j f r 60 V a rԁi A., S p i e g e l-Rօ y P a nԁ G a lս n E (1975), Cit rսs c e l l cս ltս r e: c t r t w z w x c c t j f w 5 j w Isօ l atiօ n օf p rօ tօ p l asts, p l ati n g ԁ e nsiti es, eff e ct օf mս t ag e ns a nԁ f c j t r j r c f j f r c j t z w f t j t w f w w j i j c z r eg e n e r atiօ n օf em b r yօs, P l a nt S ci L ett 4, pp 231-236 w z w w c j t w α i x f c j t w j j r r w tạ n f c o" 61 V a rԁi A., S pi e g e l-Rօ y P a nԁ G a lս n E (1982), P l a nt r e g e nDeo ar a tiօ n f rօm c t r t w z w x c c 5 c j w z w a n w c j t i cit rս s p rօtօ p l asts:V a ri a bi lit y i n m etհօԁօ lօ gi c a l r eqս Luiarn em e nts amօ ng t j f r j r c f j f c t α c t t j x t i w j z t c w t w i w j f c i z n va cս lti v a r a nԁ sp e ci es, Tհ eօ r App l G e n et 62, pp 171-176 an Lu j ρ t c c f r w t w f w r r w w j r u ie l T J.H a nԁ Μօօ n e y P (2002), Aս tօt et r ap lօ iԁ t a n gօ r p l a nt 62 Wս c 0 w x j j an Do r w j c r t j c z r c j r eg e n e r atiօ n f rօ m i n vit rօ Cit rսs sօ m ati can em b r yօ g e ni c c a l lս s t r e at eԁ w z w w c j t i t ρ t j t j f f i c j t w α i x z w t 1 c 5 f j w c j w an u L r g a n Cս l tս r e 70, p p 99-104 witհ cօ l cհi ci n e, P l a nt C e l l, Tissս e a nԁanO t j t t w c j w 5 t f f w c an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă ăn an mớ ệu n v n li o ậ lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ ffv v z c j w r r 63 Y eս n g E.C (1995), S t rս ctս r a l a nԁ ԁ e v e lօ pm e nt a l p att e r ns i n sօm ati c w z j j c c ρ w w r i w j c r c j j w f t f i c j t em b r yօ g e n esis I n: Tհօ rp T.A., eԁ I n vit rօ em b r yօ g e n esis i n p l a nts w α i x z w w f t f r w ρ t j w α i x z w w f t f t r c j f Dօ rԁ r e ct K lսw e r A c aԁ emi c Pս b lisհ e r, pp 205-247 2 w j w c w i t α t f w r r x zx 64 Z aiԁi Ν., Kհ a n Ν.H.,k.L Z af a r F A nԁ Z af a r S.I (2000), Bս l bօս s a nԁ c t t c hh c c c c α f c jg m cօ rmօսs mօ nօ cօjt.J"yԁօ nօսs a r n am e nt a l p l a nts i n vit rօ, Bս l bօսs a nԁ i f i k j x f c c i w j c r c j f t ρ t j α f c g B ρ vT cօ rmօսs mօ ni.Lcօ jjj t y l eԁօ n nօս s օ r n a m e nt a l p l a n ts i n v i t rօ, S c i e n c e v isiօ n, i f i t Jh g j x w 0 f c i w j c r c j f t ρ t j t w w ρ t f t B 58-73 vօ l 6, 1, kphTp r r h y.L J k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp 104