báo cáo kiến tập cơ sở thực tập khối xét nghiệm bệnh viện đa khoa đức giang

Hòa bệnh phẩm khuẩn lạc vào giọt nước muối sinh lý và dàn mỏng đềuBƯỚC 2Cố định tiêu bản+ Để khô tự nhiên+ Cô định tiêu bản bằng cách cắt qua ngọn lửa đèn cồn 2-3 lần, mỗi lần 5-10 giâyB

TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM

BÁO CÁO KIẾN TẬP

Môn:

Họ và tên:

Ngày sinh:

Lớp:

Mã SV:

Vi sinh

Đỗ Tuấn Kiệt 12/08/1998 20A31A01 20A31010006

Hà Nội, ngày 6 tháng 12 năm 2023

TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI BÁO CÁO KIẾN TẬP

Môn kiến tập: Vi sinh – ký sinh trùng

Họ và tên sinh viên: Đỗ Tuấn Kiệt Mã số SV: 20A31010006 Lớp: 20A31A01 Khóa: Năm học: 2023 - 2024

Cơ sở thực tập: Khối Xét nghiệm Bệnh viện Đa khoa Đức Giang

Địa chỉ: BV Đa khoa Đức Giang – Trường Lâm – Long Biên - HN

Thời gian thực tập: 29/11/2023 – 06/12/2023

Mục lục

Nội dung thực tập 4

1. Phòng miễn dịch 4

Test nhanh sắc ký miễn dịch: 4

2 Phòng nhuộm soi, lao 6

2.1 Quy trình nhuộm gram 6

2.2 Quy trình nhuộm Zielh Neelsen 9

3 Phòng nuôi cấy 11

3.1 Phân loại bệnh phẩm 11

3.2 Quy trình nuôi cấy dựa trên bệnh phẩm 12

3.3 Quy trình nuôi cấy dựa vào chủng vi sinh vật 14

Kinh nghiệm rút ra 18

Lời cảm ơn

Em xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đối với các cô và các anh chị khoa Vi

sinh của Bệnh viện Đa khoa Đức Giang, đặc biệt là Trưởng khoa B BS CKII Đào Quang

Trung, chị phó trưởng khoa CN.CKI Nguyễn Thị Thuỷ đã tạo điều kiện cho chúng em

thực tập ở khoa để có thêm nhiều kinh nghiệm hơn Em xin chân thành cảm ơn Kỹ thuật viên trưởng: CN.Vũ Thị Thu Trang cùng các anh chị trong khoa đã trực tiếp giảng dạy

em hoàn thành tốt khóa kiến tập

Trong quá trình thực tập, cũng như là trong quá trình làm báo cáo kiến tập khó tránh khỏi sai sót rất mong cô và các anh chị bỏ qua Đồng thời do trình độ kiến thức cũng như kinh nghiệm thực tiễn còn hạn chế nên bài báo cáo không thể tránh khỏi những thiếu sót, em rất mong nhận được những ý kiến đóng góp của cô và anh chị để em học thêm được nhiều kinh nghiệm và sẽ hoàn thành tốt hơn bài báo cáo tốt nghiệp sắp tới

Nội dung thực tập

1 Phòng miễn dịch

Test nhanh sắc ký miễn dịch:

Định tính phát hiện kháng nguyên/ kháng thể trong huyết tương của mẫu bệnh phẩm

giếng thử Đọc kết quả sau 20 phút (không đọc kết quả sau 30 phút)

giếng (S) Nhỏ giọt buffer vào giếng thử Đọc kết quả sau 15 phút (không đọc kết quả sau 20 phút)

giếng thử Nhỏ 1 giọt buffer vào giếng thử Đọc kết quả sau

15 phút (không đọc kết quả sau 20 phút)

giếng thử Nhỏ 1 giọt buffer vào giếng thứ Đọc kết quả sau

15 phút (không đọc kết quả sau 20 phút)

giống (S) Nhỏ 3 giọt bufer vào giếng thừ Đọc kết quả sau 15

phút (không đọc kết quả sau 20 phút)

giếng thử Nhỏ 3 giọt buffer vào giếng thử Đọc kết quả sau 15 phút (không đọc kết quả sau 20 phút)

giếng thử Nhỏ 3 giọt buffer vào giếng thử Đọc kết quả sau 15 phút (không đọc kết quả sau 20 phút)

giếng (S) Nhỏ 3 giọt buffer vào giếng thử Đọc kết quả sau 15 phút (không đọc kết quả sau 20 phút)

Nhỏ 190ụ1 R3 vào giếng 1 Nhỏ tiếp 10ụl huyết thanh (huyết tương) vào giếng 1, trộn đều Hút 25ụ1 huyết thanh (huyết tương) pha loãng từ giếng 1 sang các giếng 2 và 3 Nhỏ 75u1 R1 vào giếng 2, 75ul R2 vào giếng 3 Đọc kết quả sau 45 phút

TB Nhỏ 10µl huyết thanh (huyết tương) vào

giếng (S) Nhỏ 3 giọt buffer vào giếng thử Đọc kết quả sau 15 phút (không đọc kết quả sau 20 phút)

Kết quả đánh giá dựa vào

Vạch chứng C: chứa cộng hợp kháng thể để kiểm chứng, để chắc chắn lượng mẫu đã

đủ và lớp màng đã thấm tốt Nếu không xuất hiện vạch màu này, kết quả là không hợp lệ

và cần phải xét nghiệm lại bằng test thử khác

Vạch thử T: phủ kháng nguyên/ kháng thể để xảy ra phản ứng tạo phức hợp kháng nguyên kháng thể với mẫu thử nếu trong mẫu thử có kháng nguyên/ kháng thể kiểm tra, sau đó tạo vạch màu tại vạch T

Âm tính: Xuất hiện chỉ một vạch chứng C Thông báo không có kháng nguyên/ kháng thể trong bệnh phẩm Kết quả là âm tính hoặc không phản ứng

DƯƠNG TÍNH: Xuất hiện một vạch chứng C và một vạch kết quả T: Thông báo có kháng nguyên dengue NS1 trong mẫu phẩm Kết quả là dương tính hoặc có phản ứng

KẾT QUẢ KHÔNG CÓ GIÁ TRỊ: Nếu không thấy xuất hiện vạch chứng C, kết quả không có giá trị dù xuất hiện vạch kết quả G, M, T màu đỏ tía như hình minh họa bên dưới Làm lại thí nghiệm với một kit thử mới

2 Phòng nhuộm soi, lao

2.1 Quy trình nhuộm gram

BƯỚC 1

Chuẩn bị lam kính, ghi thông tin mẫu bệnh phẩm, có thê nhỏ nước muôi sinh lý hoặc không tùy loại bệnh phẩm Hòa bệnh phẩm (khuẩn lạc) vào giọt nước muối sinh lý và dàn mỏng đều

BƯỚC 2

Cố định tiêu bản + Để khô tự nhiên + Cô định tiêu bản bằng cách cắt qua ngọn lửa đèn cồn 2-3 lần, mỗi lần 5-10 giây

BƯỚC 3 Nhỏ dung dịch tím Gentian, phủ kín bệnh phẩm để 1 phút,

Rửa tiêu bản dưới vòi nước chảy nhẹ

BƯỚC 4 Nhỏ dung dịch lugol, đê 30 s, Rửa tiêu bản dưới vòi nước chảy nhẹ

BƯỚC 5

Tẩy màu : Nhỏ cồn 90°, nghiêng đi nghiêng lại để cồn chảy

từ cạnh nọ sang cạnh kia, khi màu tím trên lam kính vừa phai hết thì rửa nước ngay loại bỏ hết cồn

BƯỚC 6 Nhỏ dung dịch fuchsin, để 30s đến 1 phút, sau đó rửa tiêu bản dưới vòi nước chảy nhẹ

BƯỚC 8 Nhỏ dầu soi, soi vật kính 100 đánh giá kết quả

Đánh giá sau khi nhuộm soi

Đếm các loại vi khuẩn gram (-), gram (+), nấm cũng như hồng cầu bạch cầu để nhận xét đánh giá

Hình ảnh nấm nhuộm gram

Hình ảnh trực khuẩn gram dương

Hình ảnh sợi nấm nhuộm gram Sau khi nhuộm soi sẽ điền vào mẫu đánh giá bệnh phẩm

Với dịch âm đạo được đánh giá dựa trên thang điểm

Với lợi khuẩn gram dương Lactobasillus:

Tình trạng (-) (+) (++) (+++) (++++)

Với Gardnerella gram trung tính có hại gây viêm âm đạo

Đánh giá điểm từ 7 điểm trở lên tính là âm đạo bị viêm

2.2 Quy trình nhuộm Zielh Neelsen

Bước 1 Chuẩn bị lạm kính, ghi thông tin bệnh phẩm, đánh dấu vị trí phết bệnh phẩm và tiến hành phêt bệnh phâm lên lam kính

Bước 2

Cố định tiêu bản + Để khô tự nhiên + Cô định tiêu bản bằng cách cắt qua ngọn lửa đèn cồn 2-3 lần, mỗi lần

5-10 giây

Bước 3

Nhuộm màu : Đặt tiêu bản lên giá nhuộm sau đó phủ đầy dung dịch carbol fuchsin lên mặt tiêu bản

+ Hơ nóng trên ngọn lửa đèn cồn đến khi bốc hơi ( không được để sôi)

+ Để nguội tự nhiên trong 5 phút + Rửa tiêu bản dưới vòi nước chảy nhẹ

Bước 4

Tấy màu : + Phủ dung dịch Acid-alcoho1 3%

+ Để trong 2 phút + Rửa tiêu bản dưới vòi nước chảy nhẹ

Bước 5

Nhuộm nên : + Phủ dung dịch xanh Methylen + Thời gian từ 1 - 2 phút

+ Rửa tiêu bản dưới vòi nước chảy nhẹ

Bước 6 Để khô tiêu bản

Bước 7 Soi dưới kính hiển vi, vật kính dầu Đọc kết quả Lưu lam kính xét nghiệm đến khi có yêu cầu hủy.

Tiêu chuẩn trả kết quả soi AFB bằng phương pháp nhuộm Zielh-Neelsen

⁃ Quan sát AFB (Acid Fast Bacillus) bằng vật kính dầu x100 trên kính hiển vi quang học

⁃ Âm tính: Không quan sát thấy hình ảnh AFB

⁃ Dương tính: AFB là trực khuẩn mảnh (Mycobacterium tuberculosis), kháng cồn, kháng acid, bắt màu đỏ đứng riêng lẻ hay xếp đôi hoặc từng đám trên nền xanh Đếm số lượng

AFB và ghi kết quả theo bảng sau:

* Lưu ý: 1 dòng lam tương đương 100 vi trường Soi ít nhất 1 dòng với tiêu bản dương, 3 dòng với tiêu bản âm

Không thấy AFB Âm tính

> 10 AFB/1 vi trường (soi

ít nhất 20 vi trường)

1-10 AFB/1 vi trường (soi

ít nhất 50 vi trường) Dương tính AFB 2+

10-99 AFB/100 vi trường Dương tính AFB 1+

1-9 AFB/100 vi trường Dương tính Ghi số lượng AFB cụ

thế/100 vi trường

Hình ảnh vi khuẩn lao

3 Phòng nuôi cấy

3.1 Phân loại bệnh phẩm

3.2 Quy trình nuôi cấy dựa trên bệnh phẩm

Ký hiệu Loại bệnh phẩm Chuấn bị thạch Thực hiện

NP Dịch ty hầu Máu Soco Lấy que bệnh phẩm ria

tạo vùng nguyên thủy Lấy que cấy vô trùng cấy phân vùng (4 vùng)

lấy bệnh phẩm (mảnh đờm) ria tạo vùng nguyên thủy

PF Dịch màng phổi Máu, MAC,

Soco, BHI

Dùng que cấy vô trùng khác cấy phân vùng (4 vùng) (MAC cấy 3 vùng) Dùng que cấy vô trùng (dùng pipet vô trùng) lấy bệnh phẩm ria tạo vùng

MAC, Soco), tăng sinh vào canh thang BHI Dùng que cấy vô trùng khác cấy phân vùng (4 vùng) Lấy 1 giọt bệnh phẩm lên lam kính và

(đánh giá hông câu, bạch cầu, vi khuẩn, nấm)

lụi lây bệnh phâm lên thạch máu và cây đêm, lấy bệnh phâm lên thạch UTI và cây phân vùng (3 vùng) Lây 1 giọt nước tiêu lên lam kính và đậy

la men, soi tươi sơ bộ (đánh giá hông câu, bạch câu, vi khuân,

nam)

lấy bệnh phấm ria tạo vùng nguyên thủy Dùng que cấy vô trùng khác cấy phân vùng (4 vùng) (MAC cấy 3 vùng)

động Quét code của chai cấy máu-> điền thông tin

số thứ tự chai cấy máu

thang Tood -> ngày hôm sau cấy chuyển sang thạch

BA Dịch phế quản Máu, MAC, Soco Dùng que cấy vô trùng

lấy bệnh phâm ria tạo vùng nguyên thủy Dùng que cấy vô trùng khác cấy phân vùng (4 vùng) (MAC cấy 3 vùng)

SW Mủ vết thương Máu, MAC, BHI + Bệnh phẩm được lấy

vào que tăm bông: dùng que ria tạo vùng nguyên thủy

Lấy que cấy vô trùng cấy phân vùng (4 vùng thạch máu, 3 vùng thạch MAC), tăng sinh que tăm bông trong canh thang BHI

+ Bênh phẩm được lây vào lọ vô trùng: Dùng que cây vô trùng lấy bệnh phẩm tạo vùng nguyên thủy Dùng que cây vo trùng khác cây phần vùng (4 vùng thach máu, 3 vùng thạch MAC), dùng pipet vô trùng lây bệnh phâm tăng sinh

3.3 Quy trình nuôi cấy dựa vào chủng vi sinh vật

TCV2

(S.aureus)

(1) Hình Thái Khuân Lạc: Thạch Máu Khuân Lạc Dạng S Và Tan Máu Beta, Thạch Mac Không Mọc, Nhuộm Xem Cầu Khuẩn Gram (+) Tụ Đầm (2) Tính Chất Sinh Vật Hoa Học: Coagulase Dương Tính, Catalase Dương Tính (3) Xử Trí Tiếp Theo : Định Danh Card GP Và Kháng Sinh Đồ Card AST-GP67

TCD2

(S.epidermidis) (1) Hình thái khuẩn lạc: Thạch máu Khuẩn lạc dạng S, trắng, Không tan máu

Thạch Mac Không mọc Nhuộm xem cầu khuẩn Gram (+) (2) Tính chất Sinh vật hóa học:

Coagulase Âm tính, Catalase dương tính (3) Xử trí tiếp theo: Định danh Card GP

và kháng sinh đồ Card AST-GP67 TCT2

(S.saprophiticus)

(1) Hinh thái khuân lạc: Thạch máu khuân lạc dạng S, Không tan máu Thạch Mac Không mọc Nhuộm xem cầu khuẩn Gram (+) (2) Tính chất sinh vật hoa học:

Coagulase âm tính, Catalase dương tính (3) Xử trí tiếp theo: Định danh Card GP và

Kháng sinh đồ Card AST-GP67 PC2

(S.pneumoniae)

(1) Hình thái khuân lạc: Thạch máu khuân lạc tròn lôi, bóng, tan máu alpha Thạch Mac không mọc Nhuộm xem cầu khuẩn Gram (+) hình ngọn nến (2) Tính chất Sinh vật hoa học: Catalase âm tính (3) Xử trí tiếp theo làm test Optochin

PC3

(S pneumoniae) Ngày thứ 3: test Optochin dương tính làm kháng sinh đồ card AST-ST03 LCB2

(S agalactiae)

1) Hình thái khuấn lạc: Thạch Strep B Khuẩn lạc hồng Nhuộm xem: Cầu khuẩn Gram (+) (2) Tính chất Sinh vật hóa học: Catalase âm tính (3) Xử trí tiếp theo làm Camp test

Streptococus agalactiae LCA2

(S pyogenes) (1) Hình thái khuẩn lạc: Thạch máu, thạchsoco Khuân lạc nhỏ dạng S, Tan máu

Beta

Thạch Mac Không mọc Nhuộm xem cầu khuẩn Gram (+), (2) Tính chât Sinh vật

hóa học: Bacitracin dương tính Catalase

âm tính (3) Xử trí tiếp theo: Định danh Card GP và Kháng sinh đồ Card AST-ST03

Ecoli2 (1) Hình thái khuẩn lạc: Thạch máu, thạch

soco Khuân lạc dạng S, tròn lôi, bóng Thạch Mac khuẩn lạc màu Hông Nhuộm xem trực khuân Gram (-)

(2) Tính chất Sinh vật hóa học: Oxydase âm tính (3) Xử trí tiếp theo: Định danh Card GN và Kháng sinh đồ Card AST-204

Kleb2

(K Pneuoniae)

(1) Hình thái khuẩn lạc: Thạch máu, thạch soco Khuẩn lạc dạng S, nhày Thạch Mac: khuẩn lạc màu Hông nhày Nhuộm xem trực khuân Gram (- (2) Tính chất Sinh vật hóa học Oxydase âm tính

(3) Xử trí tiêp theo Định danh băng card

GN và Kháng sinh

đồ card AST-204 ACI2

(A.baumanii) (1) Hình thái khuân lạc: Thạch máu, thạchsoco khuân lạc dạng S, trăng Thạch Mac

Khuẩn lac dạng s Nhuộm xem Cầu trực khuẩn Gram (-)

(2) Tính chât Sinh vật hoa học: Oxydase Am tính Catalase dương tính

(3) Xử trí tiếp theo: Định danh bằng card

GN và Kháng sinh đồ Card AST-240

soco Khuẩn lạc lan đồng tâm mùi thối Thạch Mac Khuân lac dạng s Nhuộm xem trực khuẩn Gram (-) (2) Tính chất Sinh vật hóa học

Oxydase Am tinh (3) Xừ trí tiếp theo: Định danh bằng card GN và Kháng sinh

đồ Card AST-204

soco khuần lạc dẹp nhày bờ không đều, ánh kim, mùi thơm Thạch MH: màu xanh Nhuộm xem: Trực khuẩn Gram () (2) Tính chất Sinh vật hóa học: Oxydase dương tính (3) Xử trí tiếp theo: Định danh card GN

Kháng sinh đồ Card AST-240

Khuẩn lạc không mọc.

xâm Thạch Mac: Không mọc, Nhuộm xem: Trực khuẩn Gram (-) (2) Tính chất Sinh vật hóa học: Test XV

Hemophilus influenzae

Phương pháp cấy 4 vùng phân tách vi khuẩn

Thiết bị nuôi cấy máu tự động Bact/Alert 3D

Kinh nghiệm rút ra

Sau buổi kiến tập dù ngắn hạn nhưng em đã học được rất nhiều điều từ các anh chị khoa Vi sinh – Bệnh viện đa khoa Đức Giang đồng thời được trải nghiệm nhiều điều mới

mà không thể có được trên ghế nhà trường

Trong quá trình thực tập ở đây, e đã được học cách vận hành căn bản nhất của phòng

vi sinh lâm sàng Lần đầu tiên em được tham gia trực đêm cùng các anh chị tại khoa, vì tối mẫu ít và thưa nên các anh chị có thời gian nhiều để giảng giải cho bọn em Các anh chị phụ trách trực không ngần ngại hướng dẫn, đưa cho chúng em những kinh nghiệm làm để cải thiện kĩ năng của bản thân hơn Lần đầu tiên em cấy bằng que tre chưa được quen nên cấy sai và xấu, sau khi được chỉ dạy và có thời gian tập luyện khả năng cấy của

em đã khá hơn rất nhiều Đồng thời em cũng được thực hành làm các test nhanh, thực hành kĩ thuật nhuộm gram

Mặc dù thời gian kiến tập tại viện là không lâu nhưng đã giúp em có rất nhiều bài học quý giá là hành trang cho em sau này sau khi ra trường

Điểm và nhận xét của giáo viên hướng dẫn ,

ngày tháng năm

Giáo viên hướng dẫn

(Ký và ghi rõ họ tên)