Tìm hiểu quy trình nhân giống hoa đồng tiền in Vitro

Trường ĐH Kỹ Thuật Công Nghệ TP HCM LỜI MỞ ĐẦU Hoa Đồng Tiền có tên khoa học Gerbera jamesonii (còn gọi hoa mặt trời Phu Lăng) Hoa Đồng Tiền phong phú đa dạng với nhiều màu sắc khác như: đỏ, cam ,vàng, trắng, phấn hồng, tím,… Trên bơng hoa có màu đơn nhiều màu xen kẽ Hoa Đồng Tiền có giá trị kinh tế cao, hoa Đồng Tiền chiếm tỉ lệ nhỏ (3-5%) tổng số lồi hoa cắt cành, song khơng thể vắng mặt thị trường hoa Ngày nay, phương pháp nhân giống cổ truyền cách tách chồi từ mẹ khơng cịn phù hợp Do sau thời gian tồn đồng ruộng lâu nên tất yếu nhiễm nhiều loại vi rút vi khuẩn làm cho chất lượng giống khơng cao, thối hóa ảnh hưởng đến chất lượng sản phẩm cành hoa Trong vài năm gần đây, Đà Lạt- Lâm Đồng, việc ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào nhân giống phát triển mạnh mẽ Có nhiều quan nhà nước, công ty, sở tư nhân (Trung Tâm Nghiên Cứu Khoai Tây, Rau & Hoa, Trung tâm Ứng dụng Đà Lạt, công ty Hasfarm, Bonniefarm, Rừng Hoa số sở tư nhân nhỏ) nghiên cứu, ứng dụng lĩnh vực nhân giống loại rau, hoa có nhiều thành công đáng kể Nhân giống hoa Đồng Tiền phương pháp dần phổ biến nhiều người biết đến Đề tài “Tìm hiểu quy trình nhân giống hoa Đồng Tiền in vitro” nhằm tìm hiểu trình nhân giống hoa Đồng Tiền nào, tìm hiểu số biện pháp kỹ thuật nhân giống hoa Đồng Tiền in vitro, nhằm khắc phục nhược điểm đáp ứng yêu cầu Qui trình nhân giống hoa Đồng Tiền in vitro ghi nhận Bộ môn Công Nghệ Sinh Học thuộc Trung Tâm Nghiên Cứu Khoai Tây, Rau & Hoa – Đà Lạt SVTH: Nguyễn Thị Diễm Chi MSSV : 0811110007 Trường ĐH Kỹ Thuật Cơng Nghệ TP HCM I Tính cấp thiết đề tài: Hoa Đồng Tiền xuất nước ta vào năm 1940 đến phát triển nhiều tỉnh thành nước Tuy nhiên, diện tích trồng hoa Đồng Tiền nước thấp, chất lượng hoa số vùng yếu, hoa Đồng Tiền trồng chủ yếu số địa phương như: Đà Lạt, Hải Phòng, Hà Nội, Thành Phố Hồ Chí Minh,… Nguyên nhân hạn chế diện tích chất lượng hoa Đồng Tiền là: − Thiếu giống tốt, không chủ động giống cây, phải nhập giống Do vậy, làm cho chi phí sản xuất cao, mà giá thành thị trường hoa lại chưa cao − Trong điều kiện trồng trọt vùng nhiệt đới nước ta, hoa Đồng Tiền thường nhiễm bệnh, nấm Với nguồn nước ô nhiễm, vệ sinh đồng ruộng kém, cành hoa bị ngắt sát đất dễ mẩn cảm với bệnh nên giống hoa Đồng Tiền dễ bị thối giống Trước tình hình đó, việc tìm biện pháp nhân giống hoa Đồng Tiền bệnh, có chất lượng cần thiết II Mục đích, u cầu ý nghĩa: Mục đích: Tìm hiểu qui trình nhân giống hoa Đồng Tiền in vitro Khảo sát số biện pháp kỹ thuật nhân giống hoa Đồng Tiền in vitro Yêu cầu: Xác định nồng độ BAP tối ưu môi trường MS cho nhân nhanh chồi in vitro giống hoa Đồng Tiền G04.6 Xác định nồng độ NAA tối ưu trình tạo rễ hoa Đồng Tiền in vitro G04.6 Xác định loại giá thể phù hợp với hoa Đồng Tiền SVTH: Nguyễn Thị Diễm Chi MSSV : 0811110007 Trường ĐH Kỹ Thuật Công Nghệ TP HCM Ý nghĩa: Sản xuất sinh trưởng phát triển tốt, đồng bệnh với khối lượng lớn, kịp thời phục vụ cho sản xuất Thuận lợi cho việc áp dụng biện pháp kỹ thuật giai đoạn sản xuất hoa thương phẩm SVTH: Nguyễn Thị Diễm Chi MSSV : 0811110007 Trường ĐH Kỹ Thuật Công Nghệ TP HCM CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tình hình sản xuất hoa: 1.1.1 Tình hình sản xuất hoa giới: Ngày nay, hoa sản phẩm đặc biệt Hoa làm tăng chất lượng sống người hoa đem lại cho người cảm xúc tuyệt vời mà quà tặng khác khơng có Ngày nay, sản xuất hoa Thế Giới phát triển cách mạnh mẽ trở thành ngành thương mại cao Sản xuất hoa mang lại lợi ích to lớn cho kinh tế nước trồng hoa Thế Giới Diện tích hoa Thế Giới ngày mở rộng không ngừng tăng lên Các nước sản xuất hoa lớn Thế Giới là: Nhật với khoảng 3.731 tỷ đôla, Hà Lan khoảng 3.558 tỷ đôla, Mỹ khoảng 3.270 tỷ đôla Sản xuất hoa Thế Giới tiếp tục phát triển mạnh mẽ nước Châu Á, Châu Phi Châu Mỹ La Tinh Mục tiêu sản xuất hoa cần hướng tới giống hoa đẹp, tươi, chất lượng cao giá thành thấp 1.1.2 Tình hình sản xuất hoa Châu Á: Châu Á Thái Bình Dương có diện tích trồng hoa khoảng 134 000 ha, chiếm 60% diện tích hoa Thế Giới Nhưng diện tích hoa thương mại Châu Á nhỏ Tỷ lệ thị trường hoa nước phát triển chiếm 20% thị trường hoa Thế Giới Nguyên nhân nước Châu Á có diện tích trồng hoa bảo vệ thấp Ở hoa trồng điều kiện tự nhiên đồng ruộng Hoa trồng chủ yếu phục vụ cho thị trường nội địa Mấy năm gần thị trường hoa xuất nhiều nước mới, có nước khu vực Châu Á như: Thái Lan, Malaysia, Trung Quốc, Singapore, Ấn Độ SVTH: Nguyễn Thị Diễm Chi MSSV : 0811110007 Trường ĐH Kỹ Thuật Công Nghệ TP HCM Các nước Châu Á có diện tích trồng hoa lớn là: Trung Quốc (3 000 ha), Ấn Độ (65 000 ha), Malaysia (1 218ha), Srilanka (500 ha), Thái Lan (5 452 ha), Việt Nam, Inđônêsia, Philippin Nghề trồng hoa Châu Á có từ lâu đời, trồng hoa thương mại phát triển từ năm 80 kỷ 20 Khi nước Châu Á mở của, tăng cường đầu tư, đời sống nhân dân nâng cao, yêu cầu hoa cho khách sạn, du lịch lớn, thị trường hoa phát triển Các loài hoa trồng Châu Á chủ yếu gồm hai nhóm giống hoa, phân chia chủ yếu dựa vào yêu cầu nhiệt độ chúng: nhóm giống hoa có nguốn gốc nhiệt đới gồm loài hoa hoa Lan (Orchidacea), Anthurium, hoa Đồng Tiền (Gerbera), …và nhóm hoa có nguồn gốc ơn đới như: hoa Hồng (Rosa sp), Cúc (Chrysanthemum sp), Layơn (Gladiolus), Huệ… Các điều kiện thuận lợi hạn chế sản xuất hoa Châu Á 1.1.2.1 − − − − 1.1.2.2 − Điều kiện thuận lợi sản xuất hoa nước Châu Á: Có nguồn gen hoa phong phú, đa dạng Khí hậu nhiệt đới, đủ mưa, nắng, ánh sáng, đất tốt, giá rẻ Lao động dồi dào, giá lao động thấp Chính phủ khuyến khích đầu tư phát triển hoa Các mặt hạn chế sản xuất hoa Châu Á: Thiếu giống hoa đẹp, chất lượng cao Giống hoa thường nhập từ bên − − − Chưa đủ kỹ thuật sản xuất, chế biến hoa thương mại Vốn đầu tư ban đầu cao Vốn vay lãi xuất cao Cơ sở hạ tầng cho sản xuất, chế biến, bảo quản, vận chuyển, xuất thiếu − − − Thông tin thị trường chưa đầy đủ Thiếu vốn đầu tư cho nghiên cứu, đào tạo cán Thuế cao, kiểm dịch khắt khe nước nhập SVTH: Nguyễn Thị Diễm Chi MSSV : 0811110007 Trường ĐH Kỹ Thuật Công Nghệ TP HCM 1.1.3 Tình hình sản xuất hoa Việt Nam: 1.1.3.1 Diện tích trồng hoa Việt Nam: Việt Nam có diện tích tự nhiên 33 triệu Diện tích trồng hoa Việt Nam nhỏ, chiếm khoảng 0,02% diện tích trồng trọt Hoa trồng từ lâu đời Diện tích hoa tập trung vùng trồng hoa truyền thống thành phố, khu công nghiệp, khu du lịch, nghỉ mát Ngọc Hà, Quảng An, Nhật Tân, Tây Tựu (Hà Nội), Đằng Hải, Đằng Lâm (Hải Phịng), Hồnh Bồ, Hạ Long (Quảng Ninh), Triệu Sơn, thị xã Thanh Hóa ( Thanh Hóa), Gị Vấp, Hóc Mơn (Thành Phố Hố Chí Minh), Đà Lạt Đà Lạt vùng sản xuất hoa lớn nước với tổng diện tích trồng hoa khoảng 027 (năm 2005) Theo điều tra tỉnh vùng sinh thái nông nghiệp Việt Nam, lồi hoa trồng sản xuất là: Bảng 1.1: Các loài hoa trồng phổ biến Việt Nam Tên thường gọi Tên khoa học Hoa Hồng Rosa sp Hoa Cúc Chrysanthemum sp Hoa Cẩm Chướng Dianthus caryofullus Hoa Lay Ơn Gladiolus communis Hoa Huệ Polianthes tuberosa L Hoa Loa Kèn Lilium longiflorum Thumb Hoa Thược Dược Dahlia pinnata Cav Hoa Đồng Tiền Gerbera jamesonii SVTH: Nguyễn Thị Diễm Chi MSSV : 0811110007 Trường ĐH Kỹ Thuật Công Nghệ TP HCM Hoa Violet Hoa Lan Orchidaceae Hoa Trà Mi 1.1.3.2 Viola tricolor L Camellia japonica Nois Kỹ thuật sản xuất hoa Việt Nam: Sản xuất hoa Việt Nam dựa vào kinh nghiệm truyền thống áp dụng kỹ thuật nhân giống hoa cổ truyền Cây giống hoa đem trồng gồm giống gieo hạt, mầm, củ, nhánh, từ nuôi cấy in vitro Các phương pháp nhân giống cổ truyền dễ làm, quen với tập quán, kinh nghiệm nông dân, giá thành thấp Do đó, phương pháp phổ biến, chiếm ưu sản xuất Nhược điểm phương pháp chất lượng giống khơng cao Cây hoa trồng lâu bị thối hóa Bệnh, vi rút có nhiều khả lan truyền phát triển, từ làm giảm phẩm chất hoa Các loại hoa trồng từ in vitro như: hoa cẩm chướng, hoa cúc, hoa hồng, hoa đồng tiền,… Cây in vitro dược đưa sản xuất diện tích nhỏ Ưu điểm giống hoa nhân phương pháp in vitro khỏe, bệnh, hệ số nhân giống cao, làm tăng chất lượng hoa Nhưng nhân in vitro địi hỏi phải có thiết bị, giá thành giống cao Hiện thị trường hoa bắt đầu phát triển, phương pháp nhân giống in vitro bắt đầu ứng dụng rộng rãi, điều mà nước trồng hoa tiên tiến áp dụng từ lâu Vai trò hoa kinh tế : Hoa có ý nghĩa to lớn kinh tế vùng nước trồng hoa Trồng hoa đem lại hiệu kinh tế cao so với trồng trồng khác 1.1.3.3 Những điều kiện thuận lợi khó khăn sản xuất hoa Việt Nam a) Những điều kiện thuận lợi sản xuất hoa cắt cành Việt Nam: SVTH: Nguyễn Thị Diễm Chi MSSV : 0811110007 Trường ĐH Kỹ Thuật Công Nghệ TP HCM Việt Nam nước nơng nghiệp Diện tích tự nhiên lớn, 80% dân số sống nghề nông Nông dân cần cù, giàu kinh nghiệm sản xuất Nghề trồng hoa có từ lâu đời Thị trường tiêu thụ hoa nội địa ngày mở rộng Có tiềm xuất hoa nước Một số họ, loài hoa nhiệt đới có nguồn gốc Việt Nam Thích hợp với điều kiện tự nhiên vùng Nhà nước khuyến khích phát triển hoa để phục vụ nhu cầu nước xuất b) Những hạn chế sản xuất hoa Việt Nam: Khí hậu miền Bắc nóng, ẩm mùa hè Đặc biệt tháng đến tháng Số ngày nhiệt độ cao (>300C ), độ ẩm khơng khí cao (85-90%) Mùa đơng có gió mùa đông bắc lạnh Nhiều ngày nhiệt độ 15 0C Độ chiếu sáng ngắn, yếu Miền Nam quanh năm nóng ấm, có mùa nóng khơ mùa nóng mưa, ẩm độ cao Điều kiện khí hậu khơng thuận lợi cho hoa có nguồn gốc ơn đới Chưa có giống hoa chất lượng cao, thích ứng với điều kiện vùng Tuy vùng có số giống đẹp, quý hoa lan, trà, anthurium,… dạng hoa dại Thị trường giới ưu thích dạng hoa lai tạo đẹp có màu sắc sặc sỡ Sản xuất hoa tản mạn Các tiến kỹ thuật sản xuất, bảo quản hoa chưa áp dụng rộng rãi sản xuất hoa Thiếu phương tiện, thiết bị để bảo vệ hoa điều kiện nắng, nóng, mưa bão,… nhà kính, nhà lưới, nhà che,… Thị trường hoa chưa phát triển nước xuất SVTH: Nguyễn Thị Diễm Chi MSSV : 0811110007 Trường ĐH Kỹ Thuật Công Nghệ TP HCM Đội ngũ cán khoa học hoa chưa đào tạo đầy đủ Nhà nước chưa có quyền giống trồng nói chung hoa nói riêng Từ hạn chế việc trao đổi, đầu tư giống hoa nước vào Việt Nam 1.1.3.4 Phương hướng phát triển sản xuất hoa Việt Nam: − Nhà nước cần đầu tư cho công tác nghiên cứu phát triển hoa Việt Nam, để khai thác hợp lý, tận dụng tiềm năng, khắc phục, hạn chế khó khăn, đem lại hiệu cao cho sản xuất hoa nước ta − Trước mắt nên tập trung nghiên cứu, cải tiến giống, đầu tư phát triển loài hoa nhiệt đới quý, đẹp, thị trường chấp nhận, có khả thích ứng với điều kiện tự nhiên vùng hoa lan Phát triển giống hoa ôn đới theo mùa vụ vùng thảo ngun có khí hậu thích hợp − Tăng cường đào tạo cán hoa Áp dụng tiến kỹ thuật sản xuất, bảo quản, chế biến hoa giới vào điều kiện sản xuất hoa vùng − Tạo sở vật chất kỹ thuật cho sản xuất, chế biến, bảo quản hoa nhà lưới, nhà kính, nhà che hoa, kho lạnh, bến bãi bảo quản, lưu giữ phục vụ xuất hoa − Tìm kiếm thị trường tiêu thụ hoa − Ra đời luật quyền giống trồng − Tích cực hợp tác, mời chuyên gia hàng đầu hoa nước tiên tiến sang truyền đạt kinh nghiệm, kỹ thuật sản xuất hoa 1.2 Giới thiệu hoa Đồng Tiền: 1.2.1 Nguồn gốc, phân loại đặc điểm hoa Đồng Tiền: 1.2.1.1 Nguồn gốc: Hoa Đồng Tiền có tên khoa học Gerbera jamesonii Hoa Đồng Tiền gồm nhiều lồi thuộc chi Gerbera Chi có khoảng 30-100 lồi sống hoang dã, phân bố Nam Mỹ, Châu Phi đại lục, Madagascar vùng nhiệt đới Châu Á Chi Gerbera phổ biến trồng vườn chủ yếu giống lai Gerbera jamesonii loài khác Nam Phi Gerbera hybrida Hiện tồn hàng trăm giống khác 1.2.1.2 Phân loại: SVTH: Nguyễn Thị Diễm Chi MSSV : 0811110007 Trường ĐH Kỹ Thuật Công Nghệ TP HCM Giới : Plantae Ngành : Magnoliophyta Lớp : Magnoligopsida Bộ : Asteraceae Phân họ : Mutisioideae Chi : Gerbera 1.2.1.3 Hình 1.1: Cây hoa Đồng Tiền Đặc điểm: Hoa Đồng Tiền thuộc loại hoa lưu niên hoa quanh năm, độ bền hoa cắt cao, coi loài hoa đẹp giới hoa Dựa vào hình thái hoa, người ta chia thành nhóm: hoa đơn, hoa kép hoa đơn nhị kép − Nhóm 1- hoa đơn: hoa có hai tầng cánh, xếp xen kẽ tạo vòng tròn Hoa mỏng yếu hoa kép, màu sắc hoa hơn, điển hình màu trắng, đỏ, tím, hồng − Nhóm 2- hoa kép: cành hoa to, gồm hai tầng cánh, bơng to, đường kính hoa đạt tới 12-15 cm, cánh hoa tụ lại thành bơng nằm đầu trục chính, cuống dài 40-60 cm Màu sắc đa dạng màu trắng, đỏ, vàng, hồng, màu gạch cua − Nhóm 3- hoa đơn nhị kép: bên cánh đơn, bên cánh kép dày đặc, thường màu trắng lớp cánh kép màu cánh sen nhóm khơng đẹp hoa kép SVTH: Nguyễn Thị Diễm Chi 10 MSSV : 0811110007 Trường ĐH Kỹ Thuật Cơng Nghệ TP HCM Hình a: So sánh nghiệm thức Hình b: So sánh nghiệm thức nghiệm thức ( MS MS + 0.2 mg/l NAA) Hình c: So sánh nghiệm thức nghiệm thức ( MS MS + 0.4 mg/l NAA) Hình d: So sánh nghiệm thức nghiệm thức ( MS MS + 0.6 mg/l NAA) Hình e: So sánh nghiệm thức nghiệm thức ( MS MS + 0.8 mg/l NAA) Hình f: So sánh nghiệm thức nghiệm thức ( MS MS + 1.0 mg/l NAA) Bảng 3.3 : Số rễ trung bình hoa Đổng Tiền in vitro G04.6 sau 15 ngày cấy Nghiệm thức Số rễ Nghiệm thức (MS) 1.7 Nghiệm thức (NAA = 0.2 mg/l 1.7 Nghiệm thức (NAA = 0.4 mg/l) 2.1 Nghiệm thức (NAA = 0.6 mg/l) 2.4 Nghiệm thức (NAA = 0.8 mg/l) 2.4 Nghiệm thức (NAA = 1.0 mg/l) 1.9 Biểu đồ 3.3 : Ảnh hưởng NAA trình rễ hoa Đồng Tiền in vitro G04.6 Bảng 3.4 : Chiều dài trung bình rễ sau 15 ngày cấy SVTH: Nguyễn Thị Diễm Chi 50 MSSV : 0811110007 Trường ĐH Kỹ Thuật Công Nghệ TP HCM Nghiệm thức Chiều dài rễ Nghiệm thức (MS) 2.6 Nghiệm thức (NAA = 0.2 mg/l) 1.3 Nghiệm thức (NAA = 0.4 mg/l) 1.2 Nghiệm thức (NAA = 0.6 mg/l) 1.2 Nghiệm thức (NAA = 0.8 mg/l) 1.3 Nghiệm thức (NAA = 1.0 mg/l) 1.3 Biểu đồ 3.4 : Chiều dài trung bình rễ sau 15 ngày cấy  Nhận xét: Qua bảng nhận thấy nghiệm thức (đối chứng) nghiệm thức khơng có khác biệt số lượng rễ chiều dài rễ giảm Ở nghiệm thức số lượng rễ chiều dài rễ trung bình Ở nghiệm thức có số lượng rễ cao chiều dài rễ phù hợp với nhu cầu sản xuất giống Nghiệm thức số lượng rễ giảm so với nghiệm thức trên, khơng đáp ứng nhu cầu sản xuất giống Vậy với mục đích thí nghiệm để giảm chi phí sản xuất nghiệm thức (nồng độ NAA 0,6mg/l) phù hợp SVTH: Nguyễn Thị Diễm Chi 51 MSSV : 0811110007 Trường ĐH Kỹ Thuật Công Nghệ TP HCM NAA auxin nhân tạo, có hoạt tính mạnh nên thường sử dụng trình kích thích rễ để tái sinh hồn chỉnh từ chồi in vitro Sự rễ phụ thuộc vào nhiều yếu tố: hàm lượng auxin nội sinh, tỉ lệ C/N, ánh sáng, trẻ hóa mẫu, kiểu di truyền mẫu cấy NAA tác động lên kéo dài tế bào Hiệu nối tiếp cho gia tăng tính đàn hồi thành tế bào cho xâm nhập nước vào bên tế bào, sức căng thành tế bào giảm tế bào dài Theo Bùi Trang Việt (2002), môi trường chứa auxin (NAA) khơng phối hợp với cytokinin mẫu cấy tăng kích thước mà khơng có phát sinh hình thái rõ rệt Trong mơ thực vật, cytokinin kích thích phân chia tế bào với điều kiện có auxin Ngược lại, nuôi cấy mô nghèo cytokinin, auxin kích thích nhân đơi nhiễm sắc thể, chí tạo tế bào hai nhân, khơng có phân cách, phân vách xảy có cytokinin ngoại sinh 3.3 Ảnh hưởng giá thể Đồng Tiền in vitro vườn ươm: a b SVTH: Nguyễn Thị Diễm Chi 52 MSSV : 0811110007 Trường ĐH Kỹ Thuật Cơng Nghệ TP HCM c Hình 3.3 : Cây Đồng Tiền ex vitro giá thể khác Hình a: Gía thể 100% sơ dừa Hình b: Gía thể 75% sơ dừa + 25% đất than mùn Hình c: Gía thể 50% sơ dừa + 50% đất than mùn SVTH: Nguyễn Thị Diễm Chi 53 MSSV : 0811110007 Trường ĐH Kỹ Thuật Công Nghệ TP HCM Bảng 3.5: Ảnh hưởng giá thể hoa Đồng Tiền ex vitro Nghiệm thức Nghiệm thức (100% sơ dừa) Tỷ lệ sống Chiều cao trung Số trung (%) bình / (cm) bình/ 96.67% 3.83 4.24 83.33% 3.14 4.36 73.33% 3.06 4.14 Nghiệm thức (75% sơ dừa + 25% đất than mùn) Nghiệm thức (50% sơ dừa +50% đất than mùn) Biểu đồ 3.5 : Tỷ lệ sống hoa Đồng Tiền ex vitro trêncác giá thể khác Biểu đồ 3.6 : Ảnh hưởng giá thể chiều cao số hoa Đồng Tiền ex vitro  Nhận xét: Kết cho thấy nghiệm thức (100% sơ dừa) có khác biệt rõ rệt với nghiệm thức lại Ở nghiệm thức 1, tỷ lệ sống, chiều cao hoa Đồng Tiền cao (96.67%, 3.83 cm) so với nghiệm thức lại Đối với số trung bình loại giá thể tương đương nhau, khơng có khác biệt SVTH: Nguyễn Thị Diễm Chi 54 MSSV : 0811110007 Trường ĐH Kỹ Thuật Cơng Nghệ TP HCM Qua thí nghiệm này, ta nên dùng giá thể 100% sơ dừa giai đoạn đưa vườn ươm thích hợp SVTH: Nguyễn Thị Diễm Chi 55 MSSV : 0811110007 Trường ĐH Kỹ Thuật Công Nghệ TP HCM CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận 4.1 Với kết thu từ thí nghiệm, rút kết luận sau: − − Tái sinh hoa Đồng Tiền đế hoa Xử lý đế hoa Đồng Tiền dung dịch Calcium Hypochlorit nồng độ 15% thời gian 15-20 phút − Mơi trường thích hợp để tạo thể nhân giống, nhân nhanh hoa Đồng Tiền in − vitro môi trường MS + 0.3-0.5 mg/l BA Mơi trường thích hợp cho giai đoạn tái sinh hồn chỉnh giống hoa Đồng Tiền in vitro môi trường MS + 0.3 mg/l NAA − Môi trường MS bổ sung 0.5 mg/l BA có ảnh hưởng phát sinh chồi nhiều, đồng đều, khỏe Mơi trường thích hợp nhân nhanh hoa Đồng Tiền in vitro − Môi trường MS bổ sung 0.6 mg/l NAA thích hợp cho việc tạo hoa Đồng Tiền hoàn chỉnh trước vườn ươm − Cây hoa Đồng Tiền in vitro đưa ngồi vườn ươm có tỉ lệ sống cao, chiều cao cây, số trung bình/ tốt trồng giá thể 100% sơ dừa Đề nghị 4.2 Vì thời gian làm đề tài có hạn, em khơng thể khảo sát tất yếu tố ảnh hưởng đến trình tái sinh hoa Đồng Tiền in vitro Nên em có số đề nghị sau: − − Khảo sát tái sinh từ phận khác hoa Đồng Tiền Khảo sát ảnh hưởng số chất điều hòa sinh trưởng thực vật để tăng hệ số nhân − Khảo sát yếu tố ngoại cảnh nhiệt độ, ánh sáng,… ảnh hưởng đến khả tạo chồi, nhân chồi rễ TÀI LIỆU THAM KHẢO SVTH: Nguyễn Thị Diễm Chi 56 MSSV : 0811110007 Trường ĐH Kỹ Thuật Công Nghệ TP HCM ∗ Sách tham khảo nước: Bùi Văn Thế Vinh (2008) Bài giảng Công Nghệ Sinh Học thực vật Trường ĐH Kỹ Thuật Công Nghệ TP Hồ Chí Minh Trần Văn Minh (2004) Công nghệ sinh học thực vật Viện Sinh Học Nhiệt Đới – Trung tâm Khoa học tự nhiên Công Nghệ Quốc Gia Nguyễn Văn Uyển (1993) Nuôi cấy mô thực vật phục vụ công tác giống trồng NXB Nông Nghiệp PGS.PTS Nguyễn Xuân Linh Hoa kỹ thuật trồng hoa Viện khoa học kỹ thuật nông nghiệp Việt Nam – NXB Nông Nghiệp Nguyễn Văn Linh (1998) Hoa kỹ thuật trồng hoa NXB Nông Nghiệp Nguyễn Văn Uyển (1995) Phân bón chất kích thích sinh trưởng NXB Nơng Nghiệp Sinh lý thực vật đại cương, phần II – Phát triển NXB Đại học Quốc gia TP HCM ∗ Tài liệu tham khảo nước ngoài: Barbosa, M H P., Pasqual, M., Pinto, J E B P., Arello, E F., Barros, I., 1992 Salt and indoleacetic acid effect in the root process in vitro of Gerbera jamesonii Bolus ex Hook cv Apple Bloessem Cienc Prat 16, 39-41 Haberlandt G., Sitzungsber Akad Wiss Wien, Math-Naturwiss KI., 1902 First but unsuccessful attempt attempt of tissue using monocots 111, 69-92 Hempel, M., Petos-Witkowska, B., Tymoszuk, J., 1985: The influence of cytokinins on multiplication and subsequent rooting of gerbera in vitro Acta Horticulturae 167: 301-305 Huang, H., LI, L., Shenghui 2001 Tissue culture of Gerbera jamessonii Bolus Jishou Daxue Xuebao Ziran Kexueban 22, 35-41 Gautheret (1940) cultured cambial tissues of Ulmus to study adventinious shoot formation Gautheret R J., C R Acad Sci (Paris) 208, 118-120 Nobecourt P., C R Soc Biol (Paris) 130 1270-1271.White P R., Am, J Bot., (1939) 26 59-64 Successful continuously growing cambial cultures of carrot and tobacco Gautheret R J., C R Acad Sci (Paris) 1934 In vitro culture of cambial tissues of different tress and shrubs failed 198, 2195-2196 SVTH: Nguyễn Thị Diễm Chi 57 MSSV : 0811110007 Trường ĐH Kỹ Thuật Công Nghệ TP HCM Guha S and Maheshwari S C., 1966 First Haploid plants from Dautura androgenesisNature 204, 497 and Nature.1966 212 97-98 Jerzy, M., Lubomski, M., 1991 Adventitious shoot formation on ex vitro derived leaf explants of Gerbera jamesonii Scientia Hortic 47, 155-124 10 Murashige T and Skoog F., 1962 Development of MS medium Physiol Plant., 15, 473-497 11 Murashige T., Skoog, F., 1962 Arevised medium for rapid growth and with tobacco tissue culure Physiol Plant.15,473-497 12 Overbeek J van et al., 1941 Coconut Milk used for growth and development of very young Datura embryos Scinece 94, 350-351 13 Pierik, R L M., Segers, H H M., 1973 Invitro culture of midrib explants of gerbera Adventitious formation and callus induction Z Pflanzenphysiol 69, 204-12 SVTH: Nguyễn Thị Diễm Chi 58 MSSV : 0811110007 Trường ĐH Kỹ Thuật Công Nghệ TP HCM PHỤ LỤC Thành phần môi trường khồng MS (Murashige Skoog, 1962) Khống đa lượng mg/l mM NH4NO3 1650 20.6 KNO3 1900 18.8 CaCl2.2H2O 440 3.0 MgSO4.7H2O 370 1.5 KH2PO4 170 1.25 Khoáng vi lượng mg/l µM KI 0.83 5.0 H3BO3 6.2 100 MnSO4.4H2O 22.3 100 ZnSO4.7H2O 8.6 30 Na2MoO4.2H2O 0.25 1.0 CuSO4.5H2O 0.025 0.1 CoCl2.6H2O 0.025 0.1 Na2.EDTA 37.3 100 FeSO4.7H2O 27.8 100 mg/l µM Myo-Inositol 100 555 Nicotinic acid 0.5 Pyridoxine HCl 0.5 2.5 Vitamine chất hữu khác SVTH: Nguyễn Thị Diễm Chi 59 MSSV : 0811110007 Trường ĐH Kỹ Thuật Công Nghệ TP HCM Thiamine HCl 0.1 0.3 Glycine 2.0 27 14 SVTH: Nguyễn Thị Diễm Chi 60 MSSV : 0811110007 Trường ĐH Kỹ Thuật Công Nghệ TP HCM CÁCH PHA MÔI TRƯỜNG MS TẠI TRUNG TÂM Pha dung dịch mẹ A, B, C, D, E, F Dung dịch Thành phần Lượng hóa chất cần pha dung dịch mẹ KNO3 NH4NO3 CaCl2.2H2O 4.4g/l 3.7g/l KH2PO4 1.7g/l H3BO3 0.62g/l MnSO4.7H2O 1.69g/l ZnSO4.2H2O 0.86g/l CuSO4.5H2O 0.25g/l CoCl2.6H2O 0.25g/l Na2EDTA 0.372g/l FeSO4.7H2O 0.278g/l KI B 16.5g/l MgSO4.7H2O A 19.0g/l 0.83g/l Na2MoO4.2H2O 0.25g/l C D E SVTH: Nguyễn Thị Diễm Chi 61 MSSV : 0811110007 Trường ĐH Kỹ Thuật Công Nghệ TP HCM Glycine Nicotinicacid 50mg/100ml Pyridoxin-HCl 50mg/100ml Thiamin-HCl 10mg/100ml Myo-inositol F (VITAMIN) 200mg/100ml 10.000mg/100ml Pha môi trường làm việc: Chuẩn bị bình dung tích lít, chứa sẵn 400ml nước cất, sau hòa thêm: 50ml A +5ml B + 1ml C + 5ml D + 5ml E + 5ml F (VITAMIN) 30g đường + chất điều hòa sinh trưởng (nếu cần thiết) + thêm nước cho đủ 1000ml, khuấy đều, trung hòa pH = 5.8, cuối cho 7g agar vào khuấy đều, đun cho tan hết agar đổ vào bình tam giác (hoặc bình nhựa chịu nhiệt) hấp tiệt trùng SVTH: Nguyễn Thị Diễm Chi 62 MSSV : 0811110007 ... Qui trình nhân giống hoa Đồng Tiền in vitro: Qui trình nhân giống in vitro hoa Đồng Tiền tiến hành theo quy trình sau: Vật liệu ban đầu (mẫu non khỏe chọn vườn mẹ) Tạo thể nhân giống in vitro Nhân. .. nhân giống hoa Đồng Tiền in vitro Yêu cầu: Xác định nồng độ BAP tối ưu môi trường MS cho nhân nhanh chồi in vitro giống hoa Đồng Tiền G04.6 Xác định nồng độ NAA tối ưu trình tạo rễ hoa Đồng Tiền. .. hoa hồng, hoa đồng tiền, … Cây in vitro dược đưa sản xuất diện tích nhỏ Ưu điểm giống hoa nhân phương pháp in vitro khỏe, bệnh, hệ số nhân giống cao, làm tăng chất lượng hoa Nhưng nhân in vitro địi