Xác định vai trò của HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung Ương.Xác định vai trò của HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung Ương.Xác định vai trò của HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung Ương.Xác định vai trò của HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung Ương.Xác định vai trò của HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung Ương.Xác định vai trò của HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung Ương.Xác định vai trò của HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung Ương.Xác định vai trò của HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung Ương.Xác định vai trò của HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung Ương.Xác định vai trò của HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung Ương.Xác định vai trò của HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung Ương.Xác định vai trò của HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung Ương.Xác định vai trò của HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung Ương.Xác định vai trò của HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung Ương.Xác định vai trò của HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung Ương.Xác định vai trò của HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung Ương.Xác định vai trò của HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung Ương.Xác định vai trò của HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung Ương.Xác định vai trò của HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung Ương.Xác định vai trò của HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung Ương.Xác định vai trò của HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung Ương.Xác định vai trò của HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung Ương.Xác định vai trò của HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung Ương.Xác định vai trò của HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung Ương.Xác định vai trò của HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung Ương.Xác định vai trò của HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung Ương.Xác định vai trò của HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung Ương.Xác định vai trò của HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung Ương.Xác định vai trò của HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung Ương.Xác định vai trò của HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung Ương.Xác định vai trò của HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung Ương.Xác định vai trò của HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung Ương.Xác định vai trò của HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung Ương.Xác định vai trò của HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung Ương.Xác định vai trò của HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung Ương.Xác định vai trò của HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung Ương.Xác định vai trò của HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung Ương.Xác định vai trò của HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung Ương.Xác định vai trò của HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung Ương.Xác định vai trò của HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung Ương.
ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Đối tượng nghiên cứu
Đối tượng nghiên cứu là các bệnh nhân ung thư cổ tử cung được điều trị tại Khoa Phụ ung thư, Bệnh viện Phụ sản Trung ương từ ngày 01 tháng 01 năm 2017 đến ngày 31 tháng 12 năm 2020
- Bệnh nhân được chẩn đoán mắc UTCTC và điều trị tại Khoa Phụ ung thư, Bệnh viện Phụ sản Trung ương
- Kết quả giải phẫu bệnh được thực hiện tại Khoa Giải phẫu bệnh, Bệnh viện Phụ sản trung ương
- Kết quả xét nghiệm HPV dương tính với HPV 16, HPV 18 hoặc ít nhất một trong 12 nhóm HPV nguy cơ cao bằng Hệ thống máy xét nghiệm HPV DNA Cobas 4800 của hãng Roche và còn lưu lọ mẫu bệnh phẩm
- Bệnh nhân UTCTC không xét nghiệm HPV hoặc không phải xét nghiệm bằng máy Cobas 4800 của hãng Roche
- Thông tin thu thập không đầy đủ, mẫu không đảm bảo thực hiện các xét nghiệm khác trong nghiên cứu.
Phương pháp nghiên cứu
Nghiên cứu sử dụng thiết kế mô tả cắt ngang, trong đó áp dụng kỹ thuật thu thập số liệu tiến cứu
2.2.2 Thời gian và địa điểm nghiên cứu 2.2.2.1 Thời gian:
- Lấy số liệu từ 01 tháng 01 năm 2017 đến ngày 31 tháng 12 năm 2020
- Thu thập mẫu: Khoa Phụ Ung thư, Bệnh viện Phụ sản Trung ương Tất cả các đối tượng nghiên cứu đều được chẩn đoán, điều trị và quản lý bệnh UTCTC tại khoa
- Xử lý mẫu: Khoa Giải phẫu bệnh, Bệnh viện Phụ sản Trung ương và Khoa Vi sinh, Bệnh viện Bệnh Nhiệt đới Trung ương
Khoa Giải phẫu bệnh, Bệnh viện Phụ sản trung ương: thực hiện các quy trình xử lí mẫu bệnh phẩm, đánh giá và phân tích các mẫu tế bào, mô Dựa vào các phương pháp phân tích đưa ra kết quả cho nghiên cứu
Khoa Vi sinh, Bệnh viện Bệnh Nhiệt đới Trung ương: thực hiện xét nghiệm xác định chủng vi rút HPV (của 1/12NCC) và giải trình tự gen của HPV16 và 18
2.2.3 Cỡ mẫu và kỹ thuật chọn mẫu nghiên cứu Cỡ mẫu nghiên cứu được tính theo công thức sau: n = (1 2 / 2) (1 2 )
- n : Cỡ mẫu - Z(1-/2) : Trị số Z với mức độ tin cậy 95%, áp dụng test 2 đuôi, do đó trị số Z(1-/2) =1,96
- p : Tỷ lệ ước tính nhiễm HPV nguy cơ cao ở bệnh nhân được chẩn đoán UTCTC theo Phạm Việt Thanh (2009) là 70% 11
Theo công thức trên tổng số bệnh nhân sẽ được sàng lọc 164 bệnh nhân
Với giả thiết với 10% bệnh nhân không tuân thủ quy trình, không đáp ứng đầy đủ tiêu chuẩn lựa chọn, tương ứng 16 bệnh nhân Vì vậy, nghiên cứu viên quyết định chọn cỡ mẫu cuối cùng cho nghiên cứu là 180 bệnh nhân
1 Tại Bệnh viện Phụ sản trung ương:
Chúng tôi lựa chọn những bệnh nhân điều trị tại Khoa Phụ ung thư, được chẩn đoán mắc UTCTC và đồng thời những bệnh nhân này cũng có kết quả xét nghiệm HPV dương tính với máy Cobas 4800
Những bệnh nhân đảm bảo đáp ứng đủ tiêu chuẩn lựa chọn ở trên sẽ tiến hành thu thập thông tin, theo dõi bệnh cảnh lâm sàng, các chỉ số cận lâm sàng
Thông tin cận lâm sàng và lâm sàng của bệnh nhân được đánh giá theo các biến số và chỉ số nghiên cứu
2 Tại Bệnh viện Bệnh nhiệt đới Trung ương:
Tất cả các lọ mẫu bệnh phẩm tế bào CTC sau khi đã làm xét nghiệm Cobas 4800 (của những bệnh nhân trên) ở Bệnh viện Phụ sản Trung ương sẽ được thu thập được đóng gói và vận chuyển tới khoa vi sinh Bệnh viện Bệnh nhiệt đới Trung ương để tiến hành xét nghiệm
Bảng 2.1 Địa điểm và xét nghiệm Địa điểm thực hiện Xét nghiệm
Khoa Giải phẫu bệnh, Bệnh viện Phụ sản Trung ương
Mô bệnh học Định tuýp HPV bằng máy Cobas 4800 Khoa Vi sinh, Bệnh viện Bệnh
Nhiệt đới Trung ương Định tuýp HPV nhóm 1/12 NCC Giải trình tự gen HPV16 và HPV18
2.2.5 Biến số, chỉ số nghiên cứu 2.2.5.1 Biến số, chỉ số nghiên cứu
Bảng 2.2 Các biến số, chỉ số nghiên cứu
Tính theo năm, dương lịch
Tham khảo hồ sơ bệnh án
2 Nơi ở Định tính Thành thị
Tham khảo hồ sơ bệnh án
3 Nghề nghiệp Định tính Đang đi học Làm văn phòng Lao động tự do Làm ruộng
Khám, tham khảo hồ sơ bệnh án
4 Số lần mang thai Định lượng Số lần thụ thai
Tham khảo hồ sơ bệnh án
5 Số lần sinh con Định lượng
Tham khảo hồ sơ bệnh án
6 Số lần sẩy thai Định lượng a Số lần sẩy thai, nạo hút thai thai lưu <
22 tuần b Chửa ngoài tử cung c Chửa trứng
Tham khảo hồ sơ bệnh án
7 Số lần con sống Định lượng
Số con sống tới thời điểm vào viện
Tham khảo hồ sơ bệnh án
8 Tiền sử viêm CTC Định tính a Có b Không
Tham khảo hồ sơ bệnh án
9 Kinh nguyệt Định tính a Mãn kinh: xảy ra khi suy giảm chức năng buồng trứng, người phụ nữ ngừng hành kinh b Rối loạn kinh nguyệt: kinh nguyệt ra không theo chu kỳ c Kinh đều
Tham khảo hồ sơ bệnh án
Triệu chứng cơ năng Định tính a Không triệu chứng b Ra máu âm đạo bất thường: ra máu âm đạo không liên quan kỳ kinh c Ra khí hư bất thường d Kinh nguyệt bất thường
Tham khảo hồ sơ bệnh án
Triệu chứng thực thể Định tính a CTC bình thường b Lộ tuyến CTC c Nang Naboth d Polyp CTC e CTC dễ chảy máu khi chạm f CTC sùi, loét
Tham khảo hồ sơ bệnh án
12 Kết quả tế bào âm đạo,
CTC Định tính a ASCUS b AGUS c LSIL d HSIL e Ung thư biểu mô vảy f Ung thư biểu mô tuyến
13 Mô bệnh học Ung thư biểu mô
CTC Định tính a Ung thư vảy + Ung thư tế bào vảy
+ Vi xâm nhập: ung thư vảy tại chỗ b Ung thư tuyến
+ Ung thư tuyến tiết nhày
+ Ung thư tuyến nội tiết
+ Ung thư tế bào trong
+ Ung thư tuyến khác c Ung thư biểu mô khác
+ Ung thư tế bào kính
+ Ung thư thần kinh nội tiết + Ung thư tuyến bàng quang + Ung thư tuyến đáy
Chẩn đoán Giai đoạn UTCTC Định tính
- Giai đoạn 0 - Giai đoạn I - Giai đoạn II - Giai đoạn III - Giai đoạn IV
Kết quả xét nghiệm, phân định tuýp
Công cụ nguy cơ cao
Giải trình tự gen HPV Định lượng
- Nhiễm HPV16 hoặc 18 (đơn nhiễm), hoặc đồng nhiễm HPV 16, 18, 1/12 loại nguy cơ cao thì Xác định genotype E6, E7, L1 của HPV16, 18
- Nhiễm HPV 1/12 thì chỉ xác định loại tuýp HPV, không giải trình tự gen
Kết quả xét nghiệm, giải trình tự gen
* Mục tiêu 1: Mô tả đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng ung thư cổ tử cung tại Bệnh viện Phụ sản Trung ương
- Đặc điểm chung của đối tượng nghiên cứu - Phân bố giai đoạn UTCTC
- Triệu chứng lâm sàng của UTCTC - Đặc điểm tổn thương cổ tử cung của UTCTC - Kết quả giải phẫu bệnh của UTCTC
- Kết quả chẩn đoán hình ảnh của UTCTC
* Mục tiêu 2: Xác định các tuýp HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung - Kết quả phân bố genotype của HPV
- Kết quả xác định genotype của HPV - Phân bố các genotype ở bệnh nhân UTCTC đơn nhiễm/ đa nhiễm HPV - Liên quan giữa genotype HPV với độ tuổi của ĐTNC
- Liên quan giữa genotype HPV với giai đoạn UTCTC - Liên quan giữa genotype HPV với tình trạng lâm sàng cổ tử cung - Kết quả phân tích trình tự gen E6, E7 và L1 của HPV 16, 18 ở bệnh nhân UTCTC
- Số lượng và kiểu đột biến của các sublineage HPV16/ HPV 18 - Mối liên quan giữa các sublineage của HPV16 và HPV18 với với tình trạng cổ tử cung
2.2.6 Phương pháp thu thập số liệu và một số kỹ thuật sử dụng trong nghiên cứu
2.2.6.1 Các kỹ thuật sử dụng trong nghiên cứu
* Xét nghiệm sinh hóa, công thức máu, miễn dịch theo quy trình của Bộ y tế và hướng dẫn của hãng hóa chất, thiết bị
* Kỹ thuật định tuýp HPV DNA bằng máy Cobas 4800 hãng Roche (phụ lục2)
Test Cobas HPV là một công cụ quan trọng trong chẩn đoán và sàng lọc vi rút HPV, đặc biệt trong việc phát hiện các loại HPV nguy cơ cao như HPV 16 và HPV 18, có mối liên quan mạnh đến ung thư cổ tử cung Test này mang lại tiện lợi và độ chính xác cao trong việc đánh giá nguy cơ nhiễm HPV và theo dõi sự phát triển của bệnh trong quá trình điều trị và theo dõi
Hệ thống này hoạt động dựa trên nguyên lý của kỹ thuật phân tử, sử dụng phản ứng PCR (Polymerase Chain Reaction) và lai acid nucleic để khuếch đại và phát hiện các loại HPV DNA
Hình 2.1 Hệ thống máy Cobas 4800 của hãng Roche
* Kỹ thuật giải trình tự gen bằng máy ABI 3130/3100 (Applied Biosystems) (phụ lục 3)
Chúng tôi áp dụng phương pháp giải trình tự gen bằng máy giải trình tự gen ABI 3130/3100 là một hệ thống tự động được sản xuất bởi Applied Biosystems, một công ty chuyên về công nghệ di truyền và sinh học phân tử
Máy này được sử dụng rộng rãi trong các phòng thí nghiệm để tiến hành quá trình giải trình tự DNA và RNA
Nguyên lý hoạt động của máy giải trình tự gen ABI 3130/3100 dựa trên phương pháp giải trình tự Sanger, một trong những phương pháp cổ điển nhất để xác định trình tự nucleotid trong một đoạn DNA hoặc RNA Quá trình giải trình tự Sanger sử dụng phản ứng PCR để tạo ra một chuỗi các đoạn DNA có chiều dài khác nhau, và sau đó sử dụng phương pháp điện di để phân tích và xác định trình tự của các đoạn này
Máy giải trình tự gen ABI 3130/3100 có khả năng xử lý nhiều mẫu đồng thời, giúp tăng năng suất và hiệu quả của quá trình giải trình tự
Hình 2.2 Các bước thí nghiệm giải trình tự gen
* Kỹ thuật xác định genotype của 12 tuýp nguy cơ cao (phụ lục 4)
Kỹ thuật này nhằm xác định các genotype của một trong 12 tuýp nguy cơ cao mà đã được xét nghiệm Cobas xác định
2.2.6.2 Công cụ thu thập số liệu - Bệnh án nghiên cứu - Trang thiết bị, hóa chất sử dụng trong nghiên cứu:
+ Bộ dụng cụ lấy mẫu xét nghiệm Cobas HPV DNA: Chổi quét chuyên dụng, ống nhựa chứa dung dịch để bảo quản
+ Bộ dụng cụ phục vụ giải trình tự gen: Kit tách chiết DNA vi rút:
QIAamp DNA Mini Kit (QIAGEN), Proteinase K, Buffer AL, Buffer AW1, Buffer AW2, Buffer AE, Cồn tuyệt đối (Merck KGaA), Nước cất (1st BASE), 2x KAPA2G Robust Hotstart Ready Mix (KAPA BIOSYSTEMS), Agarose (NORGEN), Đệm TBE 1X (NORGEN), Kit tinh sạch sản phẩm PCR: DNA Clean and Concentrator (Zymo Research), SEQUENCING REACTIONS- BigDye® Terminator V3.1 Cycle Sequencing Kit (Applied Biosystems), Kit tinh sạch sản phẩm PCR Squencing ZR DNA Sequencing Clean-up Kit (Zymo Research), Cặp mồi MY09 và MY11, Máy ly tâm Centrifuge 5424 (Eppendorf), Máy vortex (Labnet), Máy PCR Mastercycler gradient (Eppendorf), Máy ủ nhiệt Techine Dri-BlockR (Barloworld Scientific), Máy điện di (BioRad), Máy soi gel (BioRad)
+ Các vật liệu làm phiến đồ: Spatula, tăm bông, lam kính
2.2.6.3 Phương pháp thu thập số liệu
Cách thu thập số liệu được thực hiện theo các bước sau:
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
Đặc lâm sàng, cận lâm sàng của bệnh nhân ung thư cổ tử cung
Bảng 3.1 Đặc điểm chung của đối tượng nghiên cứu
Các đặc điểm chung Số lượng
Tuổi trung bình ± SD (Tuổi thấp nhất - Tuổi cao nhất)
Nghề nghiệp Đang đi học 03 1,7
Tuổi trung bình của nhóm nghiên cứu là 43,77 ± 9,71, với giá trị cao nhất là 73 tuổi và thấp nhất là 21 tuổi Nhóm tuổi từ 35 - 54 tuổi chiếm 67,2%
Tỷ lệ đối tượng nghiên cứu sống tại thành thị chiếm 65,5%
Tỷ lệ đối tượng nghiên cứu đang đi học chiếm tỷ lệ 1,7%
Bảng 3.2 Đặc điểm tiền sử sản phụ khoa của đối tượng nghiên cứu Đặc điểm Số lượng (n0) Tỷ lệ % (100%) Số lần mang thai
Tỷ lệ ĐTNC chưa mang thai là rất thấp chiếm 1,1%, nhóm mang thai từ 3 lần trở lên chiếm 77,3%
Các ĐTNC phần lớn đã từng đẻ, chỉ có 1,7% bệnh nhân chưa đẻ lần nào
Về tình trạng kinh nguyệt, có 81,1% bệnh nhân vẫn đang trong thời kỳ kinh nguyệt, trong khi 18,9% đã bước vào giai đoạn mãn kinh
Bảng 3.3 Lý do vào viện của đối tượng nghiên cứu
TT Lý do Số lượng
Ra máu do quan hệ 27 15,0
Ra khí hư bất thường 18 10,0 Đau hạ vị 04 2,2
Phần lớn ĐTNC được nhập viện là do phát hiện khi khám sàng lọc khi đi khám định kỳ, chiếm 53,9%
Nguyên nhân ra máu âm đạo của ĐTNC có hai loại chính: tự nhiên chiếm 18,3% và ra máu do quan hệ chiếm 15,0%
Triệu chứng ra khí hư bất thường và đau hạ vị chiếm tỷ lệ thấp trong các lý do phải nhập viện
Bảng 3.4 Phân bố bệnh nhân theo giai đoạn UTCTC Giai đoạn Số lượng (n0) Tỷ lệ % (100%)
Tỷ lệ bệnh nhân UTCTC ở giai đoạn 0 là 53,3%, giai đoạn I là 44,5% và có 2,2% ở giai đoạn II
58 Bảng 3.5 Liên quan tuổi ĐTNC theo giai đoạn UTCTC
Nhận xét: Độ tuổi không có liên quan đến giai đoạn bệnh của UTCTC
Sự khác biệt không có ý nghĩa thống kê với p > 0,05
3.1.2 Đặc điểm lâm sàng UTCTC Bảng 3.6 Một số triệu chứng cơ năng của bệnh nhân UTCTC
Ra máu âm đạo sau QHTD 27 15,0
Ra máu âm đạo bất thường 31 17,2
Ra khí hư bất thường 8 4,4 Đau bụng hạ vị 4 2,2
Tỷ lệ bệnh nhân không có triệu chứng cơ năng là rất cao, chiếm 61,1%
Trong số những triệu chứng cơ năng phổ biến, ra máu âm đạo bất thường (tự nhiên) chiếm 17,2%, ra máu sau quan hệ tình dục chiếm tỷ lệ 15,0%
Biểu đồ 3.1 Tình trạng tổn thương cổ tử cung khi khám bằng mỏ vịt Nhận xét:
Cổ tử cung không tổn thương chiểm tỉ lệ nhỏ 12,8%
Bảng 3.7 Một số đặc điểm cổ tử cung của bệnh nhân UTCTC Tình trạng cổ tử cung Số lượng Tỷ lệ %
Tổn thương cổ tử cung phổ biến nhất trong nghiên cứu là viêm, chiếm tỷ lệ 45,6% Tiếp theo là sùi với tỷ lệ 12,8%, lộ tuyến (10,0%), loét (10,0%) và sùi loét (8,9%) Tỷ lệ tình trạng cổ tử cung bình thường là 12,8%
3.1.3 Đặc điểm cận lâm sàng của bệnh nhân UTCTC Bảng 3.8 Một số đặc điểm tế bào học của bệnh nhân UTCTC
Tế bào học Số lượng Tỷ lệ %
Tế bào không điển hình (*) 34 19,3
Ung thư biểu mô vảy 29 16,5
Ung thư biểu mô tuyến 7 4,0
Không làm tế bào học 4 2,2
Ghi chú: (*) ASCUS, AGUS, AGC, AGC-AIS, ASCUS-H, ASG-H Nhận xét:
Tỷ lệ bệnh nhân có kết quả tế bào học bình thường và tổn thương lành tính chiếm 14,8%
Tỷ lệ bệnh nhân có kết quả tế bào không điển hình (*) là 19,3%
Tỷ lệ bệnh nhân được chẩn đoán là HSIL là 34,6%, trong khi tỷ lệ bệnh nhân được chẩn đoán là LSIL là 10,8%
Ung thư biểu mô vảy chiếm tỷ lệ 16,5%, trong khi ung thư biểu mô tuyến chiếm tỷ lệ 4,0%
Có 4 bệnh nhân trong nghiên cứu không thực hiện tế bào học, tỷ lệ này chiếm 2,2%
Bảng 3.9 Kết quả giải phẫu bệnh của bệnh nhân UTCTC Kết quả giải phẫu bệnh Số lượng Tỷ lệ %
Ung thư biểu mô vảy 141 78,3
Ung thư biểu mô tuyến 38 21,1
Ung thư tế bào thần kinh 01 0,6
Tỷ lệ bệnh có kết quả giải phẫu bệnh là ung thư biểu mô vảy chiếm 78,3%; ung thư biểu mô tuyến là 21,1% và ung thư tế bào thần kinh 0,6%.
Các tuýp HPV và các biến thể trong ung thư cổ tử cung
Bảng 3.10 Tỷ lệ nhiễm genotype HPV chung ở bệnh nhân UTCTC
Nhiễm HPV Số lượng Tỷ lệ %
(*): Bao gồm nhóm 1/12 nguy cơ cao (NCC) và các nhóm đồng nhiễm HPV Nhận xét:
Tỷ lệ nhiễm HPV 16 chung trong nghiên cứu chiếm 52,2%; nhiễm HPV 18 chung chiếm 18,9% và còn lại là nhóm khác chiếm 28,9%
Bảng 3.11 Phân nhóm nhiễm genotype HPV ở bệnh nhân UTCTC
Phân nhóm nhiễm HPV Số lượng Tỷ lệ % Đơn nhiễm 137 76,1 Đồng nhiễm 43 23,9
Tỷ lệ bệnh nhân được xác định mắc đơn nhiễm HPV 76,1% và nhóm đồng nhiễm HPV chiếm 23,9%
Bảng 3.12 Kết quả phân bố genotype của HPV ở bệnh nhân UTCTC
TT Phân bố Genotype HPV Số lượng
Từ 2 genotype NCC trở lên 12 6,6
Tỷ lệ nhiễm HPV có sự khác nhau trong các genotype Đơn nhiễm HPV 16 là loại phổ biến nhất, chiếm tỷ lệ cao nhất là 52,2%, nhiễm HPV 18 là 18,9% và 1 trong 12 genotype nguy cơ cao là 5,0%
Sự nhiễm trùng cùng lúc của HPV 16 và 18 là 2,2%, nhiễm HPV 16 kết hợp với biến thể trong nhóm NCC là 9,4%
Nhóm nhiễm HPV 18 kết hợp với biến thể trong nhóm NCC là 5,0%
Nhóm nhiễm nhiều genotype trong nhóm NCC chiếm 6,6%
Có 01 trường hợp nhiễm trùng ba loại HPV gồm HPV 16, 18 và cả nhóm NCC chiếm tỷ lệ 0,6%
Bảng 3.13 Phân bố các genotype ở bệnh nhân UTCTC đơn nhiễm HPV (n7)
HPV genotype Số lượng (n7) Tỷ lệ (100 %)
Tổng cộng có 10 loại genotype HPV được xác định trong nhóm đơn nhiễm của bệnh nhân UTCTC
Chủ yếu là nhóm nhiễm HPV 16, tiếp theo là HPV 18 Ngoài ra, đơn nhiễm các loại HPV khác (1 trong 12 tuýp HPV nguy cơ cao), bao gồm 8 loại, có tỷ lệ thấp riêng biệt cho mỗi loại, lần lượt là 0,7% và 1,5%
Biểu đồ 3.2 Tỷ lệ nhiễm các genotype trong nhóm đơn nhiễm HPV Nhận xét:
Tỷ lệ đơn nhiễm HPV 16 là 68,6%; HPV 18 là 24,8% và 1 trong 12 tuýp nguy cơ cao chiếm 6,6%
Bảng 3.14 Phân bố các genotype ở bệnh nhân UTCTC đồng nhiễm
HPV (nC) Đồng nhiễm HPV genotype Số lượng (nC) Tỷ lệ (100 %)
65 Đồng nhiễm HPV genotype Số lượng (nC) Tỷ lệ (100 %) HPV 16, 18 và NCC
Từ 2 genotype NCC trở lên
Tổng cộng 19 nhóm được xác định có đồng nhiễm các genotype HPV trong nghiên cứu
Biểu đồ 3.3 Phân nhóm nhiễm HPV trong nhóm đồng nhiễm các genotype Nhận xét:
Nhóm đồng nhiễm loại HPV 16 và NCC có tỷ lệ cao nhất là 39,5%
Nhóm đồng nhiễm HPV 16 và 18 chiếm 9,3%
Nhóm nhiễm từ 2 genotype thuộc nhóm NCC trở lên chiếm 27,9%
3.2.2 Mối liên quan giữa các genotype của HPV và các yếu tố nguy cơ Bảng 3.15 Liên quan giữa genotype HPV với độ tuổi của bệnh nhân
HPV16 HPV18 Khác p Số lượng
Kết quả phân tích thống kê Fisher exact cho thấy có mối liên quan đáng kể giữa độ tuổi và genotype HPV của bệnh nhân, xác nhận bằng giá trị p < 0,05
67 Bảng 3.16 Liên quan giữa genotype HPV với các giai đoạn UTCTC
Kết quả phân tích thống kê cho thấy chưa tìm thấy mối liên quan có ý nghĩa thống kê giữa genotype HPV và các giai đoạn UTCTC, được xác nhận với giá trị p > 0,05
Bảng 3.17 Liên quan giữa genotype HPV với tình trạng lâm sàng CTC
Tình trạng lâm sàng cổ tử cung Không tổn thương Có tổn thương p Số lượng Tỷ lệ % Số lượng Tỷ lệ %
Sự khác biệt không có ý nghĩa thống kê giữa tình trạng tổn thương ở CTC với nhiễm HPV 16, nhiễm HPV 18 với p > 0,05
3.2.3 Đặc điểm gen E6, E7 và L1 của HPV16 và HPV18 ở bệnh nhân UTCTC Bảng 3.18 Kết quả phân tích trình tự gen E6, E7 và L1 của HPV 16, 18 ở bệnh nhân UTCTC
HPV type Lineage Sublineage Số mẫu n %
Asian - American (AA1) D3 3 2,59 18 (48 mẫu) Asian - Amerindian (AA) A1 48 100,0 Nhận xét:
Có tổng cộng 116 mẫu HPV16 được phân chia thành bốn dòng khác nhau như sau:
- Dòng European (Ep): Chiếm tỷ lệ 38,78% trong số các mẫu HPV16
Trong dòng này, có các sublineage sau: o Sublineage A1: Chiếm tỷ lệ 11,2% o Sublineage A2: Chiếm tỷ lệ 1,72% o Sublineage A3: Chiếm tỷ lệ 25,86%
- Dòng Asian (As): Chiếm tỷ lệ 53,45% trong số các mẫu HPV16 o Sublineage A4: Chiếm tỷ lệ 53,45%
- Dòng African-2 (Afr2a): Chiếm tỷ lệ 5,17% trong số các mẫu HPV16
Trong dòng này, chỉ có một sublineage: o Sublineage D1: Chiếm tỷ lệ 5,17%
- Dòng Asian-American (AA1): Chiếm tỷ lệ 2,59% trong số các mẫu HPV16 Trong dòng này, chỉ có một sublineage: o Sublineage D3: Chiếm tỷ lệ 2,59%
- Đối với HPV18, tất cả các mẫu đều thuộc dòng Asian-Amerindian (AA) và sublineage A1
Bảng 3.19 Số lượng và kiểu đột biến của các sublineage HPV16 A1 -E6,
Trong số 20 mẫu (17,2%) HPV16 thuộc sublineage A1, có ghi nhận các đột biến ở gen E6 và E7, cũng như gen L1 Cụ thể, có 5 đột biến được xác định trong gen E6 (C143A, T178G, A289G, A403G, A532G), 9 đột biến trong gen E7 (A647G, G666A, T732C, T795G, T846C), và 10 đột biến trong gen L1 (T5659C, A6695C, G6721A, A6803T, C6826T, C6854T, C6865T, C6970T, G6994A, G7060A/T)
Các đột biến có tần suất cao được ghi nhận ở các vị trí sau:
Bảng 3.20 Số lượng và kiểu đột biến của các sublineage HPV16 A2-E6,
Có một mẫu thuộc sublineage A2 của HPV16 Trong mẫu này, đã ghi nhận có một đột biến ở gen E6 (A131G) và một đột biến ở gen L1 (T5659C)
Tuy nhiên, không ghi nhận có đột biến nào ở gen E7
Bảng 3.21 Số lượng và kiểu đột biến của các sublineage HPV16 A3-E6,
Trong số 65 mẫu HPV16 thuộc sublineage A3, đã ghi nhận 5 đột biến ở gen E6 (T109C, T178G, A289G, A403G, A532G), 3 đột biến ở gen E7 (G666A, T732C, T795G), và 4 đột biến ở gen L1 (G7060A) Tần suất đột biến cao được ghi nhận tại vị trí G666A trong gen E7 và G7060A trong gen L1
Bảng 3.22 Số lượng và kiểu đột biến của các sublineage HPV16 A4-E6,
Trong các mẫu thuộc sublineage A4 của HPV16, ghi nhận có 5 đột biến ở gen E6 (T109C, T178G, A289G, A403G, A532G) Gen E7 cũng ghi nhận có 5 đột biến gồm A647G, G666A, T732C, T846G Còn gen L1 có tới 17 đột biến, tuy nhiên, tần suất cao được ghi nhận tại vị trí A6180C và G7060
Bảng 3.23 Số lượng và kiểu đột biến của các sublineage HPV16 D1-E6,
1 mẫu - - - C A T - T T T A T 1 mẫu - - - - 1 mẫu - - - T - - - - A 1 mẫu - - - T - - - - 1 mẫu - - - - C - - - A Nhận xét:
Trong các mẫu thuộc sublineage D1 của HPV16, ghi nhận có 6 đột biến ở gen E6 (G145T, T286A, A289G, C335T, T350G, A532G) Gen E7 cũng ghi nhận có 5 đột biến (A647G, T732C, T789C, T795G, T846C) Còn gen L1 có tới 16 đột biến
Bảng 3.24 Số lượng và kiểu đột biến của các sublineage HPV16 D3-E6,
1 mẫu - A T C A C C - T C A T - T T T A T 1 mẫu - A T C A C C - T C A T - T T T A T 1 mẫu C A T C A C C - T C A T - T T T A T Nhận xét:
Trong các mẫu thuộc sublineage D3 của HPV16, ghi nhận có 6 đột biến ở gen E6 (G145T, T286A, A289G, C335T, T350G, A532G) Gen E7 cũng ghi nhận có 5 đột biến (A647G, T732C, T789C, T795G, T846C) Còn gen L1 có tới 18 đột biến
Hình 3.1 Hình ảnh đột biến 350 G>T (E6), 647 A>G (E7), 7060 G>A (L1) của HPV16
Bảng 3.25 Số lượng và kiểu đột biến của các sublineage HPV18 A1-E6,
Các chủng HPV18 đều thuộc sublineage A1 Trong sublineage này, ghi nhận có 3 đột biến ở gen E6 (C287G, G450A, G517T) và 5 đột biến ở gen E7 (C640T, G827C, A788C, A864G, A866C) Gen L1 có tới 12 đột biến (A5461C, G5503A, A5518G, G5685T, C5701G, T5798A, C5875T, G6046A, C6460G, C6625G, C6842G)
Các đột biến có tần suất cao ghi nhận trong sublineage A1 của HPV18 bao gồm: C287G trong gen E6, và G5503A, C5701G, C6460G, C6625G, C6842G trong gen L1
Bảng 3.26 Dạng đột biến gen E6, E7 và L1 của HPV16, và HPV18
HPV type Đột biến Gen
Nhận xét: Ở HPV type 16, tỷ lệ đột biến mất nghĩa chiếm 91,4% Điều này có nghĩa là trong số tất cả các đột biến được ghi nhận trong HPV type 16, 91,4% trong số đó được cho là không có tác động đáng kể đến chức năng hoặc ý nghĩa sinh học của vi rút
Trong khi, ở HPV type 18, tỷ lệ đột biến mất nghĩa chiếm 60,0% Điều này có nghĩa là trong số tất cả các đột biến được ghi nhận trong HPV type 18, 60,0% trong số đó được cho là không có tác động đáng kể đến chức năng hoặc ý nghĩa sinh học của vi rút
Hình 3.2 Cây phả hệ của HPV16 dựa trên giải trình tự gen E6, E7 và L1
Cây phả hệ cho thấy sự phân chia của các mẫu HPV16 thuộc các sublineage khác nhau như sau: o Sublineage A3 (trình tự tham thiếu HQ644236): Có 65 mẫu o Sublineage A1 (K02718): Có 20 mẫu o Sublineage A2 (AF536179): Có 1 mẫu o Sublineage A4 (AF534061): Có 22 mẫu o Sublineage D1 (HQ644257): Có 5 mẫu o Sublineage D3 (AF402678): Có 3 mẫu
V N 16 -1 12 V N 16 -1 13 VN 16 -1 11 VN 16 -1 09 VN 16 -1 05 VN 16 -1 04 VN 16 -1 03 VN 16 -1 00 VN 16 -99 VN 16 -98 VN 16 -95 VN 16- 93 VN 16- 91 VN 16- 90 VN1 6-89 VN1 6-88 VN16 -84 VN16 -83 VN16-8 2 VN16-79 VN16-78 VN16-77 VN16-76 VN16-74 VN16-73 VN16-72 VN16-71 VN16-69 VN16-68 VN16-6 7
VN16-31 VN16-36 VN16-20 VN16-18 VN16-12 VN16-3 AF5340 61-A4 VN16- 75 VN16 -106 VN16 -58 VN1 6-56 VN1 6-5
VN 16-6 VN 16- 7 VN 16- 9 VN 16 VN -46
Hình 3.3 Cây phả hệ của HPV18 dựa trên giải trình tự gen E6, E7 và L1
Cây phả hệ của HPV18 cho thấy toàn bộ 48 mẫu đều thuộc sublineage A1 (AY262282) Điều này cho thấy sự đồng nhất trong sublineage A1 của HPV18 trong tập dữ liệu được nghiên cứu
VN 18 -4 2 1 0 -4 -4 39 38 18 18 18- -37 18- VN -36 VN 18 VN VN 18 VN VN
Bảng 3.27 Mối liên quan giữa sublineage của HPV16 và HPV18 với dạng đồng nhiễm
HPV type Sublineage Số mẫu Đơn nhiễm Đồng nhiễm p)
Dựa trên kết quả nghiên cứu cho thấy có sự khác nhau có ý nghĩa thống kê (χ2, p0,05) trong mẫu đồng nhiễm của HPV18 với các loại HPV khác Điều này có thể cho thấy sublineage A1 của HPV18 có khả năng không ảnh hưởng đáng kể đến mẫu đồng nhiễm với các loại HPV khác
Bảng 3.28 Mối liên quan giữa các sublineage của HPV16 và HPV18 với các giai đoạn bệnh UTCTC
Giai đoạn 0 Giai đoạn I Giai đoạn II p
Nghiên cứu đã được tiến hành để xem xét sự khác nhau giữa các sublineage với các giai đoạn bệnh UTCTC của HPV16 và HPV18, tuy nhiên, kết quả cho thấy không tìm thấy mối liên quan đáng kể (p>0,05) giữa các sublineage cho cả HPV16 và HPV18 và giai đoạn bệnh Điều này cho thấy rằng các sublineage khác nhau của HPV16 và HPV18 chưa thấy có mối liên hệ có ý nghĩa thống kê với các giai đoạn bệnh, đồng nghĩa với việc sublineage của cả HPV16 và HPV18 không ảnh hưởng mạnh mẽ đến phát triển và tiến triển của bệnh UTCTC
Bảng 3.29 Mối liên quan giữa các sublineage của HPV16 và HPV18 với với tình trạng tổn thương ở cổ tử cung
Tình trạng tổn thương ở cổ tử cung p (Fissher exact)
Nhận xét Khác là những trường hợp viêm lộ tuyến, sùi loét của cổ tử cung
Mối liên quan giữa các sublineage của HPV16 và HPV18 với tình trạng cổ tử cung chỉ cho thấy sublineage A4 của HPV16 có mối liên hệ đáng kể với tình trạng cổ tử cung (p
