bài 3 phân tách và nhận dạng casein

Cuối cùng đợi quan sát hiệntượng Biện Luận •Khi so sánh đối chiếu kết quả thu được với một nhóm khác có sự khác biệt vềmặt thông số, kết quả đo có thể sự khác nhau ấy do một trong những

Bộ Công Thương Trường Đại Học Công Nghiệp Thành Phố Hồ Chí Minh

🙟🙟🙟🙟🙟

BÁO CÁO THỰC HÀNH MÔN: Hóa sinh học Giảng viên: Lưu Thảo Nguyên

Lớp: DHTP18BTT

Mã học phần: 422000373102

Nhóm thực hành:1

Tổ 4 Dương Mạnh Duyệt : 22698641

Nguyễn Đoàn Thiên Ân : 22707421

Đào Trung Hậu 22724181

Bài 3 PHÂN TÁCH VÀ NHẬN DẠNG CASEIN 3

I Lý thuyết 3

Bài 4 xác định nitơ tổng số theo phương pháp KJELDAHL 6

(xác định hàm lượng protein thô) 6

I.quy trình thí nghiệm: 6

BÀI 5: KHẢO SÁT HOẠT TÍNH ENZYM PROTEASE 10

I Lý thuyết 10

BÀI 6: ĐỊNH LƯỢNG ĐƯỜNG KHỬ BẰNG PHƯƠNG PHÁP DNS 15

I.Quy trình thí nghiệm 15

Bài 8:ĐỊNH LƯỢNG MỘT SỐ CHỈ SỐ DẦU MỠ 18

I XÁC ĐỊNH CHỈ SỐ acid 18

2

Bài 3 PHÂN TÁCH VÀ NHẬN DẠNG CASEIN

I Lý thuyết

II Thực hành

1 Phân tách casein trong sữa

Lấy becher 250ml đem đi cân 20g sữa xong rồi đem đi nung dưới bể ổn nhiệt ởnhiệt là 40 C rồi khuấy đều dung dịch Dùng ống nhỏ giọt để nhỏ từng giọt acid0acetic rồi khuấy đều cho đến khi xuất hiện kết tủa rồi dừng lại Sau đó đem dungdịch đó bỏ vào ống nhựa có nắp xanh rồi đem đi ly tâm Lấy dung dịch đó ra khỏimáy li tâm và bỏ hết nước Rồi lấy kết tủa cho vào becher , bỏ một ít ethanol95% vào để dễ lấy kết tủa trong ống Dùng pipet 10ml hút thêm ethanol cho đếnkhi đủ 25ml bỏ vào becher Rồi khuấy đều cho đến khi chất rắn lắng xuống , loại

bỏ chất lỏng chứa chất béo Dùng pipet 10ml để hút 25ml cồn cho vào becher cóchứa chất rắn Rồi đem đi lọc để lấy chất rắn đó , rồi đem đi sấy khô và cân đểlấy kết quả

3

Cân 20g becher 250

Đun dưới bể

ổn nhiệt 40 Co

Nhỏ từng giọt acid acetic, khuấy đều

Đem đi ly tâm

msữa Casein Giấy

3 Phản ứng ninhydrin :

Lấy 5 ống nghiệm sạch đánh số từ 1 đến 5 Sau đó dùng ống nhỏ giọt để nhỏ 15giọt 2% glycine vào ống nghiệm 1 , rửa sách rồi lấy tiếp 2% gelatin nhỏ 15 giọtcho vào ống nghiệm 2 , cứ như thế với 2% albumin vào ống nghiệm 3 Lấy 1 cáibecher cho một ít casein từ thí nhiệm trên rồi pha với 50ml nước cất Sau đó dungống nhỏ giọt đã rửa sách để lấy 15 giọt casein vừa pha cho vào ống ngiệm 4 , vàdùng ống nhỏ giọt đã rửa sách lấy 15 giọt 1% tyrosine cho vào ống nghiệm 5 Đem ống nhỏ giọt đi rửa sach rồi lấy 5 giọt thuốc thử ninhydrin 0,1% cho vào tất

cả ống nghiệm từ 1 đến 5 Rồi đem đi gia nhiệt ở bể nước sôi trong 5p Cuốicùng đợi quan sát hiện tượng

4

Too long to read on your phone? Save

to read later on your computer

Save to a Studylist

4 The xanthoprotein test :

Lấy 5 ống nghiệm sạch đánh số từ 1 đến 5 Sau đó dùng ống nhỏ giọt để nhỏ 15giọt 2% glycine vào ống nghiệm 1 , rửa sách rồi lấy tiếp 2% gelatin nhỏ 15 giọtcho vào ống nghiệm 2 , cứ như thế với 2% albumin vào ống nghiệm 3 Lấy 1 cáibecher cho một ít casein từ thí nhiệm trên rồi pha với 50ml nước cất Sau đó dungống nhỏ giọt đã rửa sách để lấy 15 giọt casein vừa pha cho vào ống ngiệm 4 , vàdùng ống nhỏ giọt đã rửa sách lấy 15 giọt 1% tyrosine cho vào ống nghiệm 5 Đem ống nhỏ giọt đi rửa sach rồi lấy 10 giọt HNO cho vào tất cả ống nghiệm từ3

1 đến 5 Rồi đem đi gia nhiệt ở bể nước sôi trong 5p Cuối cùng đợi quan sát hiệntượng

Biện Luận

•Khi so sánh đối chiếu kết quả thu được với một nhóm khác có sự khác biệt vềmặt thông số, kết quả đo có thể sự khác nhau ấy do một trong những nguyên nhânsau:

5

Do phươ ng pháp c a nhóm em thu th p sai trong quá trình làm s kiên ủ ậ ựnhẫẫn và bình tĩnh seẫ giúp cho sốố li u đ t kêốt qu tốốt h n Nh ng có th ệ ạ ả ơ ư ể

do mẫốt đi s nhẫẫn trong các khẫu làm g i là đốốt cháy giai đo n dẫẫn đêốn ự ọ ạsai sốố

+ Hoặc do nhóm khác khi đối chiếu với họ do họ đo chưa rõ ràng chưa có sự đồng nhất về mặt số liệu từ đó dẫn đến kết quả ghi có sự khác biệt

+ Về mặt dụng cụ có thể do nhóm em hoặc nhóm Mai đối chiếu số liệu khi

sử dụng dụng cụ có thể chưa kiểm tra về mặt ổn định thiết bị đo không tốt hoặc bị hỏng dẫn đến sai số

+ Về ảnh hưởng bên ngoài do thời tiết như (mưa, gió, nhiệt độ, không khí) khi tác động vào dù chỉ là nhỏ nhất có thể làm là số liệu lệch đi khá đáng kể

Bài 4 xác định nitơ tổng số theo phương pháp KJELDAHL

(xác định hàm lượng protein thô)

Thưc phẩm

Để vào tủĐun từ từ

Để nghiêng bình

H2SO4

đậ đặ

BìnhCân 0,1g thực

Tan bọt, đunsôi

2 chưng cất:

7

Erlen 250ml chứa25ml H2S04

Methyl

đỏ 0 5%

Lấp erlen vàoống sinh hàn sau

Bật nước lạnh chảy vào, hút 10ml

vô cơ hóa pha loãng cho vào phễu

Mở khóa chovào bình c

Tráng phễu 3 lần (lầnthứ 3 cho 5 giọt pp 1% Định phân

bằng NaOHCho 10ml NaOH30%

vào phễu b cho chảy

Quy trình bằng chữ:

- ta chuẩn bị erlen 250ml chứ 25ml H2SO4 0,01N và vài giọt methyl đỏ 0,5% và

ta tiến hành lắp erlen vào ống sinh hàn sao cho đầu ống ngập trong dung dịch Tabật cho nước lạnh chảy vào ống sinh hàn

- ta hút 10ml dung dịch vô cơ hóa đã pha loãng ( đối với mẫu trắng thay bằngnước cất) bên trên bằng bình định mức 100ml cho vào phễu b của máy chưng cất

và mở khóa từ từ cho dung dịch chảy vào bình c ta tiến hành tráng phễu 3 lần vàolần thứ 3 ta cho 5 giọt phenophthalein 0,1% vào phễu và xả từ từ vào bình c vàtráng bằng một ít nước cất ( để lại 1 it nước cất ở đáy để hệ thống kín khí), ta cho800ml nước cất vào bình đun để máy lôi cuốn trong 15 phút rồi hạ erlen xuống đểthêm 2 phút, ta tiến hành rửa vòi bằng nước cất ( nước rửa cho xuống erlen), talấy erlen tiến hành định phân bằng dung dịch NaOH 0,01N đến khi có màu vàngcam

Kết quả chuẩn độ mẫu thật:

bằng 1 ít

Để máy lôi cuốntrong 15p, rồi hạ

Trung bình NaOH

chuẩn độ

26,5

∆V= Vo- V1= 26,5 - 16,5= 10 (ml)

Hàm lượng Nitơ có trong mẫu

Số lượng N trong 100ml dung dịch vô

II Biện luận

Ưu điểm phương pháp Kjeldahl

Phương pháp Kjeldahl được ứng dụng phổ biến và vẫn là phương pháp tiêu chuẩn

để có thể so sánh với các phương pháp khác Với độ chính xác rất cao và khả năng tái sản xuất rất tốt nên đây được xem là phương pháp chủ yếu để ước tính lượng protein trong thí nghiệm

Nhược điểm phương pháp Kjeldahl

Khó để thước đo chính xác Nito vì tất cả nitơ không ở dạng protein Với các loại protein khác nhau thì cần các yếu tố hiệu chỉnh khác nhau do trình tự axit amin khác nhau Việc sử dụng axit sunfuric đậm đặc ở nhiệt độ cao sẽ ít nhiều gây ra một mối nguy hại đáng kể và chất xúc tác cũng vậy Vì thế kỹ thuật này sẽ mất rấtnhiều thời gian để có thể thực hiện

10

BÀI 5: KHẢO SÁT HOẠT TÍNH ENZYM PROTEASE

11

Cân 10g thơm bằng becher

BĐM 100ml

2 Dựng đường chuẩn Tyrosine :

Lấy 6 cái ống nghiệm sạch đánh số từ 0 đến 5 Sau đó cho các chất trong bảngsau vào từng ống nghiệm

Dung dịch hóa

chất

Ống nghiệm0

(Blank)

Sau đó lắc đều tất cả các ống , xong rồi dùng pipet 5ml hút 3ml từ mỗi ống đó

ra 6 ống sạch khác cũng được đánh số như trên Dùng pipet 1ml hút 0,6ml

12

Đem đi ly tâm

6000 vòng / 10p

KQ

thuốc thử Folin Lắc đều tất cả các ống rồi để yên trong vòng 10 p Cuối cùngđem đi đo quang trong với bước sóng 720nm

13

nghiệm

3 Xác định lượng Tyrosin trong dung dịch nghiên cứu

Lấy 2 ống nghiệm sạch đánh dấu 1 và 2 rồi thêm những chất trong bảngsau vào :

Thử thật (ống 1) Thử không (ống 2)Dung dịch casein 1% (ml) 5 5

Dung dịch enzyme mẫu (ml) 1 1

Lắc đều và giữa ở nhiệt độ phòng trong 30p

Để yên trong 30p , rồi đem đi ly tâm

Sau khi đem đi ly tâm , rồi dùng 2 ống nghiệm sạch khác đánh dấu A ,B Dùngpipet 5ml hút dung dịch đã ly tâm cho vào mỗi ống 5ml dung dịch Sau đó thêmdùng pipet 10ml hút NaOH 0,5N cho vào mỗi ống 10ml Xong lắc đều 2 haiống , rồi dùng pipet 5ml hút dung dịch của cả hai ống ra hai ống nghiệm mới cóđánh dấu 1, 2 với 3ml của ống A qua ống 1 và 3ml của ống B ra ống 2 Rồi thêmvào mỗi ống 0,6 ml thuốc thử folin được hút bằng pipet 1ml Rồi lắc mạnh đểyên trong 10p cả hai ống , xong đem đi đo quang với bước 720nm

14

ống 1 ống 2

Kết Quả

Phương trình: y= 0,1051x

Thay y= 0,191 vào phương trình => x= 1,817(

Hoạt độ Enzyme Protease được tính theo công thức:

Hoạt độ P = = 9,054(UI/g)

Biện Luận :

•Khi so sánh đối chiếu kết quả thu được với một nhóm khác có sự khác biệt vềmặt thông số, kết quả đo có thể sự khác nhau ấy do một trong những nguyên nhânsau:

+ Do phương pháp của nhóm em thu thập sai trong quá trình làm sự kiên nhẫn và bình tĩnh sẽ giúp cho số liệu đạt kết quả tốt hơn Nhưng có thể do mất đi sự nhẫn trong các khâu làm gọi là đốt cháy giai đoạn dẫn đến sai số.+ Hoặc do nhóm khác khi đối chiếu với họ do họ đo chưa rõ ràng chưa có sự đồng nhất về mặt số liệu từ đó dẫn đến kết quả ghi có sự khác biệt+ Về mặt dụng cụ có thể do nhóm em hoặc nhóm Mai đối chiếu số liệu khi

sử dụng dụng cụ có thể chưa kiểm tra về mặt ổn định thiết bị đo không tốt hoặc bị hỏng dẫn đến sai số

+ Về ảnh hưởng bên ngoài do thời tiết như (mưa, gió, nhiệt độ, không khí) khi tác động vào dù chỉ là nhỏ nhất có thể làm là số liệu lệch đi khá đáng kể

BÀI 6: ĐỊNH LƯỢNG ĐƯỜNG KHỬ BẰNG PHƯƠNG PHÁP DNS

Chưng cấtđến khi nướccạn

Định mức lên100ml

Đo bước sóng

540nm

*Nguyên liệu:

1g mẫu nho cần định lượng đường được cân chính xác,nho được nghiền nhỏ sau

đó hút một lượng H2SO4 10% được thêm vào cho đến khi ngập dung dịchmẫu.Dung dịch được đun cách thủy đến khi cạn thì dừng.Mẫu được lấy ra và chotừng giọt NaOH(nồng độ 20%) để trung hòa mẫu.Mẫu sau khi được trung hòađược pha loãng và được định mức thành một thể tích nhất định(100ml).Nếu dungdịch có cặn thì cần được đem đi lọc

thủy cho đến khi dung dịch trong ống nghiệm chuyển sang màu nâu đỏ,để nguội

và thêm 4ml nước cất

-Đem mẫu thử và mẫu trắng đồng thời đi đo quang với nhau ở bước sóng540nm.Ta được đồ thị chuẩn glucose với trục tung là mật độ quang trục hoành lànồng độ glucose

-Xác định hàm lượng đường khử trong dung dịch trích:Phản ứng của dung dịchđường cần phân tích với thuốc thử DNS được tiến hành tương tự như phần xâydựng đồ thị chuẩn.Sau các bước,ta đem đo quang ở bước sóng 540nm,ta được giátrị mật độ quang(OD mẫu).Nồng độ đường trong mẫu được xác định nhờ vàođường chuẩn glucose đã dựng bên trên

II.Kết quả

17

III.Biện luận

Nhận xét và biện luận

•Khi so sánh đối chiếu kết quả thu được với một nhóm khác có sự khác biệt vềmặt thông số, kết quả đo có thể sự khác nhau ấy do một trong những nguyên nhânsau:

+ Do phương pháp của nhóm em thu thập sai trong quá trình làm sự kiên nhẫn và bình tĩnh sẽ giúp cho số liệu đạt kết quả tốt hơn Nhưng có thể do mất đi sự nhẫn trong các khâu làm gọi là đốt cháy giai đoạn dẫn đến sai số.+ Hoặc do nhóm khác khi đối chiếu với họ do họ đo chưa rõ ràng chưa có sự đồng nhất về mặt số liệu từ đó dẫn đến kết quả ghi có sự khác biệt+ Về mặt dụng cụ có thể do nhóm em hoặc nhóm Mai đối chiếu số liệu khi

sử dụng dụng cụ có thể chưa kiểm tra về mặt ổn định thiết bị đo không tốt hoặc bị hỏng dẫn đến sai số

+ Về ảnh hưởng bên ngoài do thời tiết như (mưa, gió, nhiệt độ, không khí) khi tác động vào dù chỉ là nhỏ nhất có thể làm là số liệu lệch đi khá đáng kể

Kết luận :

Định lượng đường khử bằng phương pháp DNS cho kết quả nhanh

chóng, thực hiện dễ dàng Tuy nhiên, các đường khử khác nhau cho màu sắc khác nhau với thuốc thử DNS Do đó, phương pháp này không được khuyến khích dùng cho xác định hỗn hợp đường khử

Bài 8: ĐỊNH LƯỢNG MỘT SỐ CHỈ SỐ DẦU MỠ

-giá đỡ Buret, -Ether trung tính,

Đối với các loại tinh dầu có nhiều este dễ bị xà phòng hóa ,ta sử dụng dung dịch NaOH 0,05N

Chuẩn độbằng NaOH

Xuất hiệnmàu hồng

A(NaOH dùng) B(lượng dầu)

•Khi so sánh đối chiếu kết quả thu được với một nhóm khác có sự khác biệt

về mặt thông số, kết quả đo có thể sự khác nhau ấy do một trong những nguyênnhân sau:

+ Do phương pháp của nhóm thu thập sai trong quá trình làm sự kiên nhẫn

và bình tĩnh sẽ giúp cho số liệu đạt kết quả tốt hơn Nhưng có thể do mất đi

sự nhẫn trong các khâu làm gọi là đốt cháy giai đoạn dẫn đến sai số.+ Hoặc do nhóm khác khi đối chiếu với họ do họ đo chưa rõ ràng chưa có sự đồng nhất về mặt số liệu từ đó dẫn đến kết quả ghi có sự khác biệt+ Về mặt dụng cụ có thể do nhóm em hoặc nhóm Mai đối chiếu số liệu khi

sử dụng dụng cụ có thể chưa kiểm tra về mặt ổn định thiết bị đo không tốt hoặc bị hỏng dẫn đến sai số

+ Về ảnh hưởng bên ngoài do thời tiết như (mưa, gió, nhiệt độ, không khí) khi tác động vào dù chỉ là nhỏ nhất có thể làm là số liệu lệch đi khá đáng kể

Đây là một trong những tiêu chuẩn đánh giá mức độ oxh của dầu

21

Chỉ số acid được tính 2,28 còn thấp do đó chất lượng của chất béo còn cao

II Chỉ số peroxide

2.1)Lý thuyết

Khi có O không khí,các acid béo có trong thành phần của dầu mỡ nhất là2các acid béo không no dễ dang bị ôi hóa một phần và tạo thành peroxide Hiện tượng này xảy ra làm dầu mỡ bị ôi hay bị khô

Việc xác định chỉ số peroxide có thể dựa vào phản ứng sau:

-Cân 5g dung dịch dầu đem xác định chỉ số peroxide

-Thêm vào 30ml hỗn hợp Cloroform –Acid acetid tỉ lệ 1:2 -Lắc đều

-Thêm tiếp 1ml dung dịch KI bão hòa Đậy nắp

- Lắc cẩn thận trong 1p(thỉnh thoảng mở nắp),để yên 5p trong bóngtối

-Thêm vào 50ml hỗn hợp nước cất.Định phân dung dịch Na2S2O30,002N nhỏ 10 giọt hồ tinh bột 1% cho tới khi dung dịch mất màu xanh tímhoàn toàn

22

-Đồng thời làm thí nghiệm kiểm chứng không có chất béo.Nếu chuẩn màu trắng vượt quá 0,1ml Na2S2O3 thì phải pha lại hóa chất.

V là số ml dung dịch natri thiosulfat đã dùng trong mẫu thử:

V là số ml dung dịch natri thiosulfat đã dùng trong mẫu trắng:;

hòa

Lắcđều

30ml

chloroform-Erlen 250ml

50mlNướccất

•Khi so sánh đối chiếu kết quả thu được với một nhóm khác có sự khác biệt vềmặt thông số, kết quả đo có thể sự khác nhau ấy do một trong những nguyên nhânsau:

+ Do phương pháp của nhóm thu thập sai trong quá trình làm sự kiên nhẫn

và bình tĩnh sẽ giúp cho số liệu đạt kết quả tốt hơn Nhưng có thể do mất đi

sự nhẫn trong các khâu làm gọi là đốt cháy giai đoạn dẫn đến sai số.+ Hoặc do nhóm khác khi đối chiếu với họ do họ đo chưa rõ ràng chưa có sự đồng nhất về mặt số liệu từ đó dẫn đến kết quả ghi có sự khác biệt+ Về mặt dụng cụ có thể do nhóm em hoặc nhóm Mai đối chiếu số liệu khi

sử dụng dụng cụ có thể chưa kiểm tra về mặt ổn định thiết bị đo không tốt hoặc bị hỏng dẫn đến sai số

+ Về ảnh hưởng bên ngoài do thời tiết như (mưa, gió, nhiệt độ, không khí) khi tác động vào dù chỉ là nhỏ nhất có thể làm là số liệu lệch đi khá đáng kể

NHẬN XÉT

Chỉ số peroxide được tính trên 2/333 <10 được tính là tường đối mới do

được coi là ôi thiu

24