Phát hiện helicobacter pylori từ dịch dạ dày bằng kỹ thuật nested pcr

pylori là tác nhân gây viêm loét dạ dày - tá tràng chiếm khoảng 50% dân số của thế giới.ĐẶT VẤN ĐỀ1.... Vi khuẩn Helicobacter pylori Helicobacter pylori là một trong các vi trùng ở người

TP Thủ Đức, 10/2023

T R Ư Ờ N G Đ Ạ I H Ọ C N Ô N G L Â M T H À N H P H Ố H Ồ C H Í M I N H

K H O A K H O A H Ọ C S I N H H Ọ C

BÁO CÁO TIỂU LUẬN

THIẾT BỊ VÀ KỸ THUẬT CÔNG NGHỆ SINH HỌC

T R Ư Ờ N G Đ Ạ I H Ọ C N Ô N G L Â M T H À N H P H Ố H Ồ C H Í M I N H

PHÁT HIỆN Helicobacter pylori

TỪ DỊCH DẠ DÀY BẰNG KỸ THUẬT NESTED PCR

K H O A K H O A H Ọ C S I N H H Ọ C

BÁO CÁO TIỂU LUẬN

THIẾT BỊ VÀ KỸ THUẬT CÔNG NGHỆ SINH HỌC

Hướng dẫn khoa học

TS HUỲNH VĂN BIẾT

Nhóm 9

TRƯƠNG LỆ HOÀI

ĐẶT VẤN ĐỀ

VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

NỘI DUNG

1

H pylori là tác nhân gây viêm loét dạ dày - tá tràng chiếm khoảng 50% dân số của thế giới.

ĐẶT VẤN ĐỀ 1.

1.1 Vi khuẩn Helicobacter pylori

Helicobacter pylori là một trong các vi trùng ở người hiện

diện khắp trên thế giới.

Thu thập mẫu bệnh phẩm và tách chiết DNA tổng số.

Phát hiện DNA đặc trưng của H pylori

bằng phản ứng Nested PCR.

Đánh giá tỷ lệ dương tính.

1.2 Nội dung nghiên cứu

Gồm 3 nội dung chính:

2.1 Vật liệu nghiên cứu

2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

5

•Chủng vi khuẩn H.p1091 do Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương

cung cấp

•Mẫu bệnh phẩm: dịch dạ dày thu nhận từ các bệnh nhân nội soi do

nghi có tổn thương viêm hoặc loét dạ dày tá tràng

2.1 Vật liệu nghiên cứu

Hình 2.1 Nested PCR.

2.2 Phương pháp nghiên cứu

• 2 cặp primer – ngoài (outer) và trong (inner).

• Tăng tính đặc hiệu và độ nhạy.

Nested PCR

7

2.2.1.1 Thu thập mẫu bệnh phẩm

2.2.1 Thu thập mẫu bệnh phẩm và tách chiết DNA tổng số

• Dùng dây vô trùng luồn cùng dây dẫn nội soi hút các dịch trong các ổ loét

dạ dày

• Lưu giữ ở 2 – 8°C.

Hình 2.2 Tách chiết DNA tổng số từ mẫu chủng vi khuẩn 9

2.2.1.2 Định lượng DNA tổng số

2.2.1 Thu thập mẫu bệnh phẩm và tách chiết DNA tổng số

• Thực hiện trên máy Nano Drop ở bước

sóng A260 / A280

Hình 2.4 Máy Nano Drop.

11

2.2.2 Phát hiện DNA đặc trung genome H pylori bằng

2.2.2 Phát hiện DNA đặc trung genome H pylori bằng

Khuếch đại đoạn DNA vòng trong kích

thước dự kiến 230 nucleotides.

Thành phần Thể tích (µl)

GoTaq Green MasterMix

(Promega) 12,5 Primer xuôi 10 pmol

Primer ngược 10 pmol

3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

3.2 Khuyếch đại DNA đặc trưng genome của H pylori

bằng kỹ thuật Nested PCR

Bảng 3.2 Kết quả phân tích từ mẫu bệnh phẩm của bệnh nhân

3.2 Đánh giá mức độ nhiễm H pylori trên các mẫu bệnh phẩm

Tài liệu tham khảo

1 Hà Thị Minh Thi, Nguyễn Thị Mai Ngân và Nguyễn Duy (2020) Nghiên cứu chẩn đoán nhiễm Helicobacter pylori bằng kỹ thuật PCR đặc hiệu gene ureA từ mẫu mô sinh thiết niêm mạc dạ dày ở bệnh nhân bệnh lý dạ dày - tá tràng Tạp chí Y Dược học – Trường Đại học Y Dược Huế

10(2)

2 Nguyễn Hoàng Hiệp, Nguyễn Thu Huyền, Nguyễn Thị Trang, Triệu Tiến Sang, Trần Văn Khoa và Nguyễn Thanh Tùng (2019) Nghiên cứu

xây dựng quy trình chẩn đoán vi khuẩn Helicobacter pylori trong mẫu nước bọt bằng phương pháp PCR Khoa học Y – Dược.

3 Nguyễn Phú Hùng và Trần Ngọc Anh (2020) Phát hiện Helicobacter pylori từ dịch dạ dày bằng kỹ thuật Nested PCR TNU Journal of Science

and Technology 225(08): 112-118.

4 Trần Thị Khánh Tường và Vũ Quốc Bảo (2017) Hiệu quả điều trị của phát đồ 4 thuốc có Bismuth trong điều trị nhiễm Helicobacter pylori

Tạp chí Y Dược học - Trường Đại học Y Dược Huế 7(3).

5 Baj, J., Forma, A., Sitarz, M., Portincasa, P., Garruti, G., Krasowska, D., & Maciejewski, R (2020) Helicobacter pylori Virulence Mechanisms of Bacterial Pathogenicity in the Gastric Microenvironment Cells 10(1): 27.

Factors-6 Lu, J J., Perng, C L., Shyu, R Y., Chen, C H., Lou, Q., Chong, S K., & Lee, C H (1999) Comparison of five PCR methods for detection of

Helicobacter pylori DNA in gastric tissues Journal of clinical microbiology 37(3): 772–774.

7 Macchia, G., Massone, A., Burroni, D., Covacci, A., Censini, S., & Rappuoli, R (1993) The Hsp60 protein of Helicobacter pylori: structure and immune response in patients with gastroduodenal diseases Molecular microbiology 9(3): 645–652.

8 Mishra, S., Singh, V., Rao, G R., Jain, A K., Dixit, V K., Gulati, A K., & Nath, G (2008) Detection of Helicobacter pylori in stool specimens: comparative evaluation of Nested PCR and antigen detection Journal of infection in developing countries 2(3): 206–210

9 Ottiwet, Orawan & Chomvarin, Chariya & Chaicumpar, Kunyaluk & Namwat, Wises & Mairiang, Pisaln (2010) Nested polymerase chain

reaction for detection of Helicobacter pylori in gastric biopsy specimens The Southeast Asian journal of tropical medicine and public health 41:

CẢM ƠN THẦY VÀ CÁC BẠN

ĐÃ CHÚ LẮNG NGHE