Phát hiện denv bằng kỹ thuật rt qpcr

Việt Nam sẽ tham gia thử nghiệm vaccine sốt xuất huyết.. Rapid detection, serotyping and quantitation of dengue viruses by TaqMan.. 2014 Universal Single-Probe RT-PCR Assay for Diagnosis

ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA KHOA HỌC SINH HỌC BÁO CÁO TIỂU LUẬN PHÁT HIỆN DENGUE VIRUS GÂY SỐT XUẤT HUYẾT BẰNG KỸ THUẬT RT-qPCR Môn: Thiết bị và kỹ thuật công nghệ sinh học Giáo viên: TS.Huỳnh Văn Biết Thủ Đức, ngày 25 tháng 10 năm 2023 TÊN THÀNH VIÊN Trần Thị Cẩm Nhung 21126150 Lê Duy Vũ 21126580 Võ Thụy Ngọc Tuyền 21126569 NỘI DUNG I Đặt vấn đề II Tổng quan II Vật liệu và phương pháp I IV Kết quả V Thảo luận và kết luận I.Đặt vấn đề • Sớt x́t hút là mợt những bệnh truyền nhiễm đáng lo ngại hiện thế giới và cả Việt Nam • Tác nhân truyền bệnh là loại m̃i Aedes • Các cơng cụ ch̉n đoán bệnh xét nghiệm huyết học, xét nghiệm kháng thể, RT-qPCR,… Tính đến tháng 10/2023 938.000 ca bệnh cả nước 26 ca tử vong ở phía nam Năm 2022 361.813 ca mắc bệnh II.Tổng quan 01 Bệnh sớt x́t hút • Bệnh m̃i bị nhiếm virus DENV truyền vào người hoặc muỗi hút máu từ người bệnh truyền cho người khác • Bệnh có chủng tương ứng với loại huyết DEN1, DEN2, DEN3, 02 Triệu chứng của bệnh • Khoảng thời gian từ 2-7 ngày đầu là khoảng thời gian quan trọng để phát hiện và điều trị bệnh Tiêu chảy Sốt cao DEN4 Đau đầu Đau Nôn mửa 03 Dengue virus - Dengue virus thuộc chi Flavirus, họ Flaviridae Vật chất di truyền là RNA sợi dương (ssRNA) Cấu tạo DENV Chuỗi polypeptide 04 Cơ chế xâm nhập và biểu hiện của Dengue virus Người bị nhiễm bệnh muỗi đốt Muỗi Aedes aegypti (muỗi vằn) Người mang mầm bệnh sốt xuất huyết Người lành Muỗi mang virus Dengue 05 Phương pháp chẩn đoán • Xét nghiệm huyết học: HI, ELISA • Xét nghiệm kháng thế IgM, IgG • RT-Realtime PCR 06 Kỹ thuật RT-Realtime PCRt RT-Realtime PCR • Là kĩ thuật sử dụng enzyem reverse transcriptase để phiên mã ngược phân tử RNA thành cDNA Sử dụng realtime PCR để khuyếch đại và thu tín hiệu phát quá trình khuyếch đại III Vật liệu và phương pháp 3.1 Vật liệu 3.1.1 Chuẩn bị mẫu bệnh Thu thập mẫu máu của những người bệnh có triệu chứng lâm sàng, nghi ngờ bị bệnh sốt xuất huyết 3.1.2 Chiết xuất RNA Lysis buffer Ly tâm Ethanol Washing buffer Ủ 10 phút X3 8000 vòng/ phút Mẫu Elution buffer 8000 vòng/ phút RNA Huyết RNA sau rửa giải sẽ được bảo quản ở -700C cho đến sử dụng 3.1.3 Thiết kế Probe và Primer • Trình tự các primer (Y.Y.Kong et al,2006): 10 3.1.3 Thiết kế Probe và Primer • Trình tự probe (Y.Y.Kong et al,2006): 11 3.2 Phương pháp 3.2.1 One-step PCR đầu dò TaqMan TaqMan Probe Enzyme RT Primer F, R dNTPs DNA polymerase RNA chiết xuất từ mẫu Đảo trợn hỡn hợp RTqPCR 12 Chương trình nhiệt xảy máy Realtime PCR: - Sau chu kì đầu thu được cDNA - Sau đó là quy trình biến tính DNA bằng cách ln phiên thay đởi nhiệt đợ, giải phóng tín hiệu huỳnh quang, ći cùng là đọc kết quả 13 IV Kết quả 14 V.Thảo ḷn và kết ḷn • Xét nghiệm RT-qPCR là mợt phương pháp chuẩn đoán tuyệt vời phòng thí nghiệm và xác nhận bệnh sớt x́t hút • Tớc độ nhanh, độ nhạy và độ đặc hiệu cao, có thể định lượng • Mới tương quan giữa tải lượng virus với dữ liệu lâm sàng Sử dụng phương pháp Multiplex RT-qPCR với primer đặc hiệu cho chủng DENV đoạn RNA ly trích từ mẫu bệnh phẩm 15 Tài liệu tham khảo Tài liệu nước 1/ Hà Hoàng Kiệm, (2020) Virus Dengue Trong http://www.quyhoandh.org.vn/qh/VIRUSDENGUE-va-ky-thuat-SINH-HoC-PHaN-Tu-CHaN-dOaN-t14891-1249.html 2/ Trung tâm y tế quận 10, (2023) Việt Nam tham gia thử nghiệm vaccine sốt xuất huyết Tài liệu nước 1/ al., Y K (2006) Rapid detection, serotyping and quantitation of dengue viruses by TaqMan Journal of Virological Methods, 123-130 2/ Alm E, Lesko B, Lindegren G, Ahlm C, Soăderholm S, et al (2014) Universal Single-Probe RTPCR Assay for Diagnosis of Dengue Virus Infections PLoS NeglTrop Dis 8(12): e3416 doi:10.1371/journal.pntd.0003416 3/ Murugesan A, Manoharan M Dengue Virus Emerging and Reemerging Viral Pathogens 2020:281–359 doi: 10.1016/B978-0-12-819400-3.00016-8 Epub 2019 Sep 20 PMCID: PMC7149978 16 THANK YOU 17