Phát hiện denv bằng kỹ thuật rt qpcr

Việt Nam sẽ tham gia thử nghiệm vaccine sốt xuất huyết.. Rapid detection, serotyping and quantitation of dengue viruses by TaqMan.. 2014 Universal Single-Probe RT-PCR Assay for Diagnosis

Trang 1

ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

KHOA KHOA HỌC SINH HỌC

BÁO CÁO TIỂU LUẬN PHÁT HIỆN DENGUE VIRUS GÂY SỐT

XUẤT HUYẾT BẰNG KỸ THUẬT RT-qPCR

Môn: Thiết bị và kỹ thuật công nghệ sinh học Giáo viên: TS.Huỳnh Văn Biết

Thủ Đức, ngày 25 tháng 10 năm 2023

1

Trang 2

TÊN THÀNH VIÊN

Lê Duy Vũ

21126580 Võ Thụy Ngọc Tuyền21126569

Trần Thị Cẩm Nhung

21126150

2

Trang 3

NỘI DUNG

I Đặt vấn đề

II Tổng quan

IV

Vật liệu và phương pháp

V Thảo luận và kết luận

II

I Kết quả

Trang 4

I.Đặt vấn đề

• Sốt xuất huyết là một trong

những bệnh truyền nhiễm

đáng lo ngại hiện nay trên

thế giới và cả Việt Nam

• Tác nhân truyền bệnh là

loại muỗi Aedes.

• Các công cụ chuẩn đoán

bệnh như xét nghiệm huyết

thanh học, xét nghiệm

kháng thể, RT-qPCR,…

Tính đến tháng 10/2023

938.000 ca bệnh trên cả nước

26 ca tử vong ở phía nam

Năm 2022 361.813 ca mắc bệnh

4

Trang 5

II.Tổng quan

Bệnh sốt xuất huyết

• Bệnh do muỗi bị nhiếm virus DENV

truyền vào người hoặc muỗi hút

máu từ người bệnh truyền cho

người khác

• Bệnh có 4 chủng tương ứng với 4

loại huyết thanh DEN1, DEN2, DEN3,

DEN4

02 Triệu chứng của bệnh

• Khoảng thời gian từ 2-7 ngày đầu

là khoảng thời gian quan trọng để

phát hiện và điều trị bệnh

Sốt cao

Đau đầu

Đau cơ Nôn mửa

Tiêu chảy

Trang 6

6

Dengue virus

- Dengue virus thuộc chi Flavirus, họ Flaviridae Vật chất di truyền là RNA sợi dương

(ssRNA).

Cấu tạo DENV Chuỗi polypeptide

Trang 7

04 Cơ chế xâm nhập và biểu hiện của Dengue virus

Muỗi Aedes aegypti

(muỗi vằn)

Người mang mầm bệnh sốt xuất huyết

Muỗi mang virus Dengue

Người lành

Người bị

nhiễm bệnh

do muỗi đốt

Trang 8

05 Phương pháp chẩn đoán

• Xét nghiệm huyết thanh học: HI, ELISA

• Xét nghiệm kháng thế IgM, IgG

• RT-Realtime PCR

06 Kỹ thu t RT-Realtime PCR ật RT-Realtime PCR

• Là kĩ thuật sử dụng enzyem reverse transcriptase

để phiên mã ngược phân tử RNA thành cDNA

Sử dụng realtime PCR để khuyếch đại và thu tín hiệu phát ra trong quá trình khuyếch đại

Trang 9

III Vật liệu và phương pháp

3.1.1 Chuẩn bị mẫu bệnh

Thu thập mẫu máu của những người bệnh có triệu chứng lâm sàng, nghi ngờ bị bệnh

sốt xuất huyết

3.1.2 Chiết xuất RNA

Mẫu

Ly tâm

Huyết thanh

Ủ 10 phút

Ethanol

8000 vòng/ phút

Washing buffer

X3

8000 vòng/ phút RNA

Elution buffer

Lysis buffer

RNA sau khi rửa giải sẽ được bảo quản ở -70 0 C cho đến khi sử dụng.

3.1 Vật liệu

Trang 10

3.1.3 Thiết kế Probe và Primer

• Trình tự các primer (Y.Y.Kong et al,2006):

Trang 11

3.1.3 Thiết kế Probe và Primer

• Trình tự probe (Y.Y.Kong et al,2006):

Trang 12

3.2 Phương pháp

3.2.1 One-step PCR đầu dò TaqMan

Enzyme RT

dNTPs

TaqMan Probe

Primer F, R

DNA polymerase

RNA đã chiết xuất từ mẫu

Đảo trộn hỗn hợp

12

RT-qPCR

Trang 13

Chương trình nhiệt xảy ra trong máy Realtime PCR:

- Sau 2 chu kì đầu thu được cDNA

- Sau đó là quy trình biến tính DNA bằng cách luân phiên thay đổi nhiệt độ,

giải phóng tín hiệu huỳnh quang, cuối cùng là đọc kết quả

Trang 14

IV Kết quả

14

Trang 15

V.Thảo luận và

kết luận

.

• Xét nghiệm RT-qPCR là một

phương pháp chuẩn đoán tuyệt

vời trong phòng thí nghiệm và xác

nhận bệnh sốt xuất huyết

• Tốc độ nhanh, độ nhạy và

độ đặc hiệu cao, có thể

định lượng

• Mối tương quan giữa tải

lượng virus với dữ liệu lâm sàng

Sử dụng phương pháp Multiplex RT-qPCR với từng primer đặc hiệu cho từng chủng DENV

trên đoạn RNA ly trích từ mẫu bệnh phẩm

Trang 16

Tài liệu tham khảo

Tài liệu trong nước

1/ Hà Hoàng Kiệm, (2020) Virus Dengue Trong

http://www.quyhoandh.org.vn/qh/VIRUS-DENGUE-va-ky-thuat-SINH-HoC-PHaN-Tu-CHaN-dOaN-t14891-1249.html.

2/ Trung tâm y tế quận 10, (2023) Việt Nam sẽ tham gia thử nghiệm vaccine sốt xuất huyết

Tài liệu nước ngoài

1/ al., Y K (2006) Rapid detection, serotyping and quantitation of dengue viruses by TaqMan

Journal of Virological Methods, 123-130.

2/ Alm E, Lesko B, Lindegren G, Ahlm C, So¨derholm S, et al (2014) Universal Single-Probe

RT-PCR Assay for Diagnosis of Dengue Virus Infections PLoS NeglTrop Dis 8(12): e3416

doi:10.1371/journal.pntd.0003416.

3/ Murugesan A, Manoharan M Dengue Virus Emerging and Reemerging Viral Pathogens

2020:281–359 doi: 10.1016/B978-0-12-819400-3.00016-8 Epub 2019 Sep 20 PMCID:

PMC7149978.

16

Trang 17

THANK YOU

Tiêu đề	Phát Hiện Dengue Virus Gây Sốt Xuất Huyết Bằng Kỹ Thuật RT-qPCR
Tác giả	Trần Thị Cẩm Nhung, Lê Duy Vũ, Võ Thụy Ngọc Tuyền
Người hướng dẫn	TS. Huỳnh Văn Biết
Trường học	Đại Học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh
Chuyên ngành	Thiết bị và kỹ thuật công nghệ sinh học
Thể loại	tiểu luận
Năm xuất bản	2023
Thành phố	Thủ Đức

Định dạng
Số trang	17
Dung lượng	8,17 MB