(Luận văn thạc sĩ) đánh giá tình trạng người mang ký sinh trùng sốt rét không biểu hiện triệu chứng bằng kỹ thuật rt – qpcr tại huyện tuy đức, tỉnh đắk nông
Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống
1
/ 125 trang
THÔNG TIN TÀI LIỆU
Thông tin cơ bản
Định dạng
Số trang
125
Dung lượng
2,83 MB
Nội dung
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC QUY NHƠN ĐINH THỊ NGỌC DUYÊN ĐÁNH GIÁ TÌNH TRẠNG NGƢỜI MANG KÝ SINH TRÙNG SỐT RÉT KHÔNG BIỂU HIỆN TRIỆU CHỨNG BẰNG KỸ THUẬT RT-qPCR h TẠI HUYỆN TUY ĐỨC, TỈNH ĐĂK NÔNG Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 8.42.01.14 Hƣớng dẫn khoa học: TS.BS Huỳnh Hồng Quang TS Trần Thanh Sơn LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng với cán y tế, nghiên cứu viên Viện Sốt rét-Ký sinh trùng-Côn trùng Quy Nhơn giảng viên Đại học Quy Nhơn đồng thực Các số liệu kết nêu luận văn hoàn toàn trung thực chƣa đƣợc cơng bố cơng trình khác Tác giả luận văn Đinh Thị Ngọc Duyên h LỜI CẢM ƠN Trƣớc hết ,tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến tồn Q thầy trƣờng Đại học Quy Nhơn, Quý thầy cô Khoa Khoa học Tự nhiên Đồng thời, cho gửi lời cảm ơn sâu sắc, lịng kính trọng biết ơn đến hai giáo viên trực tiếp hƣớng dẫn : TS BS Huỳnh Hồng Quang TS Trần Thanh Sơn - hai thầy giáo dành nhiều thời gian, tâm huyết , tận tình hƣớng dẫn, truyền đạt kiến thức, giúp đỡ chỉnh sửa toàn đề cƣơng ,luận văn nhƣ động viên tơi q trình học tập làm luận văn Xin trân trọng cảm ơn đến Ban Lãnh đạo, Quý thầy cô, đồng nghiệp công tác Khoa Nghiên cứu Điều trị, Khoa Xét nghiệm - Sinh học phân tử thuộcViện Sốt rét - Ký sinh trùng - Côn trùng Quy Nhơn tạo điều kiện cho tham gia thực hành tốt thực địa nhƣ la bơ, đóng góp ý kiến sâu sắc thảo luận văn hoàn chỉnh Xin trân trọng cảm ơn đến Ban Giám hiệu nhà trƣờng, Phòng Đào tạo Sau đại h học Trƣờng Đại học Quy Nhơn, Khoa Khoa học Tự nhiên giúp cho tơi hồn thiện hồ sơ dự tuyển cao học, đồng thời tạo điều kiện thuận lợi để học tập nghiên cứu Trân trọng cảm ơn BGH nhà trƣờng, Quý thầy cô đồng nghiệp Trƣờng THPT số Tuy Phƣớc, Tỉnh Bình Định – nơi tơi cơng tác chia sẻ phần trách nhiệm, công việc lịch giảng dạy linh hoạt suốt thời gian theo học lớp Đào tạo Thạc sĩ , Ngành Sinh học thực nghiệm, Trƣờng Đại học Quy Nhơn Kính gửi lời cảm ơn đến Cha mẹ - ngƣời mong muốn tiến bộ, thành đạt Cảm ơn ông xã trai động lực mạnh mẽ, gánh vác việc gia đình cho tơi n tâm học tập, nghiên cứu hồn thành luận văn Cuối cùng, tơi xin cảm ơn đến tất ngƣời dân , trạm y tế thôn, buôn chia sẻ thông tin mẫu bệnh phẩm để số liệu xét nghiệm nghiên cứu cách đầy đủ Tác giả luận văn Đinh Thị Ngọc Duyên ĐÁNH GIÁ TÌNH TRẠNG NGƢỜI MANG KÝ SINH TRÙNG SỐT RÉT KHÔNG BIỂU HIỆN TRIỆU CHỨNG BẰNG KỸ THUẬT RT-qPCR TẠI HUYỆN TUY ĐỨC, TỈNH ĐĂK NÔNG h Học viên: Đinh Thị Ngọc Duyên | Chuyên ngành: Sinh học Thực nghiệm Mã số: 8.42.01.14 | Khóa: 21, Trƣờng Đại học Quy Nhơn Giới thiệu: Sốt rét vấn đề y tế công cộng quan trọng tỷ lệ mắc chúng có xu hƣớng giảm vùng sốt rét lƣu hành Việt Nam, song ổ chứa tiềm ẩn ngƣời mang trùng không triệu chứng (NMTKTC) thách thức lộ trình loại trừ sốt rét Nghiên cứu tiến hành nhằm xác định tỷ lệ NMTKTC kỹ thuật RT-qPCR với đích mRNA tỉnh Đăk Nơng Phƣơng pháp nghiên cứu: Nghiên cứu cắt ngang dựa vào cộng đồng giai đoạn (20192020) Xét nghiệm lam máu nhuộm giêm sa, test nhanh RT-qPCR để chẩn đoán sốt rét Phân tích liệu Excel v.2010 Kết quả: Trong số 2809 ngƣời điều tra, tỷ lệ NMTKTC chung 4,6% theo vùng SRLH từ cao đến thấp xã Quảng Trực, Đăk Ngo Đăk Buk So thời điểm mùa mƣa mùa khô cho tỷ lệ lần lƣợt 12,8% so với 12,6%; 3,6% so với 3,6%, 1,5% so với 1,8%, thay đổi tỷ lệ hai mùa khơng có ý nghĩa, nhƣng khác biệt có ý nghĩa vùng lƣu hành Kết luận: Cùng sốt rét có triệu chứng, NMTKTC làm tăng thêm gánh nặng bệnh tật vùng nghiên cứu Do đó, lộ trình LTSR theo định hƣớng đến năm 2030, NMTKTC khía cạnh cần quan tâm Từ khóa: Ký sinh trùng sốt rét máu không triệu chứng, tỷ lệ mắc EVALUATION OF ASYMPTOMATIC MALARIA PARASITEMIA BY RT-qPCR TECHNIQUE IN DISTRICTS OF TUY DUC, DAK NONG PROVINCE Backgrounds: Malaria is still an important public health and its prevalence has been declining in malaria endemic zones in Vietnam, but hidden reservoir of asymptomatic parasitemia as challenge in malaria elimination roadmap This study aimed to determine the prevalence of asymptomatic subjects by one-step reverse transcription-quantitative PCR take mRNA targets (RT-qPCR) technique in Dak Nong province Methods: A community based cross-sectional study was conducted in 2019-2020 The multistage sampling technique was employed to select 2940 participants in total of three communes per district A standard microscopy and rapid diagnostic test were used to diagnosis, and RT-qPCR to diagnosis Analyzed data using microsoft excel version 2010 Results: Analyzed data from 2809 subjects, 4.6% were confirmed to be asymptomatic malaria parasite carriers According to high, moderate, and low endemic communes of Quang Truc, Dak Ngo, and Dak Buk So in the mid-wet and mid-dry season surveyed point have 12.8% vs 12.6%; 3.6% vs 3.6%, and 1.5% vs.1.8%, respectively, non-significanntly changed in two seasons, but significantly changed between different malaria endemic zone Conclusions: Along with symptomatic malaria, asymptomatic carriers will be plus more burden of disease in the study sites Therefore, on the way for malaria elimination back on the agenda by 2030, asymptomatic malaria need to concern Key words: Asymptomatic malaria parasitemia, prevalence MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài luận văn Mục tiêu nghiên cứu Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn Bố cục luận văn Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU h 1.1 Tình hình sốt rét giới Việt Nam qua báo cáo năm 2017-2018 1.1.1 Trên toàn cầu 1.1.2 Tình hình sốt rét Việt Nam năm 2017-2018 1.2 Một số phƣơng pháp phát hiện, chẩn đoán sốt rét 11 1.2.1 Xét nghiệm lam máu nhuộm giêm sa 12 1.2.3 Xét nghiệm sinh học phân tử chẩn đoán ký sinh trùng sốt rét 15 1.3 Một số nghiên cứu đánh giá ngƣời mang KSTSR không triệu chứng 16 Chƣơng ĐỐI TƢỢNG VÀ HƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 38 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 38 2.1.1 Tiêu chuẩn tuyển chọn 38 2.1.2 Tiêu chuẩn loại trừ 38 2.2 Địa điểm thời gian 38 2.3 Thiết kế nghiên cứu 40 2.4 Cỡ mẫu 40 2.5 Thu thập mẫu nghiên cứu 42 2.6 Quy trình nghiên cứu 42 2.7 Biến số số đánh giá nghiên cứu 42 2.8 Kỹ thuật sử dụng nghiên cứu 44 2.8.1 Xét nghiệm lam máu soi KHV 44 2.8.2 Kỹ thuật xét nghiệm chẩn đoán nhanh SD-Bioline HRP2/pLDH Pf/Pv 44 2.8.3 Kỹ thuật phân tử RT-qPCR phát loài thể Plasmodium spp 45 2.9 Phân tích số liệu 46 2.9.1 Phân tích liệu 46 2.9.2 Dự kiến kết đầu 46 2.10 Khía cạnh đạo đức nghiên cứu 46 2.10.1 Sự chấp thuận Hội đồng Đạo đức 47 2.10.2 Cam kết tham gia nghiên cứu thông qua 47 h 2.10.3 Quyền lợi đối tƣợng tham gia 47 2.10.4 Bảo mật thông tin số liệu 47 2.10.5 Dịch vụ chăm sóc y tế 48 2.10.6 Sự khích lệ động viên đối tƣợng tham gia hoàn tất 48 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 49 3.1 Đặc điểm chung nhóm đối tƣợng tham gia nghiên cứu 49 3.2 Tỷ lệ nhiễm ký sinh trùng ngƣời không triệu chứng RTqPCR 52 3.2.1 Tỷ lệ bệnh nhân có KST Plasmodium spp dƣơng tính khơng triệu chứng 52 3.2.2 Kết định lồi Plasmodium spp ca dƣơng tính xã 62 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 81 KẾT LUẬN 81 1.1 Tỷ lệ nhiễm KSTSR thể vơ tính ngƣời khơng biểu triệu chứng 81 1.2 Xác định loài Plasmodium spp giao bào phƣơng pháp RT-qPCR 81 KIẾN NGHỊ 82 TÍNH MỚI, TÍNH KHOA HỌC VÀ ĐIỂM HẠN CHẾ ĐỀ TÀI 82 3.1 Tính 82 3.2 Tính khoa học 82 3.3 Điểm hạn chế 83 CƠNG TRÌNH KHOA HỌC ĐÃ CƠNG BỐ CỦA TÁC GIẢ 84 DANH MỤC CÁC TÀI LIỆU THAM KHẢO 85 QUYẾT ĐỊNH GIAO ĐỀ TÀI LUẬN VĂN THẠC SĨ (bản sao) h DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT ACTs Artemisinin-based Combination Thuốc phối hợp có thành phần Therapies artemisinins Bệnh nhân sốt rét CRFs Case Report Forms Mẫu Báo cáo ca bệnh DNA Deoxyribonucleic acid Acid deoxyribonucleic GCPs Good Clinical Practices Thực hành lâm sàng tốt KHV Kính hiển vi KST Ký sinh trùng KSTSR Ký sinh trùng sốt rét LHSR Lƣu hành sót rét LTSR Loại trừ sốt rét MDA Mass Drug Administration PCSR Phòng chống sốt rét PCR Polymerase Chain Reaction Nested PCR Nested Polymerase Chain Reaction PCR lồng P falciparum Plasmodium falciparum P vivax Plasmodium vivax P malariae Plasmodium malariae P ovale Plasmodium ovale P knowlesi Plasmodium knowlesi qPCR Quantitative PCR Phản ứng chuỗi trùng định lƣợng RDTs Rapid Diagnostic Tests Xét nghiệm chẩn đoán nhanh RNA Ribonucleic acid RT-qPCR Reverse Transcriptase qPCR PCR đ lƣợng chép ngƣợc us-qPCR Ultra-qPCR PCR định lƣợng siêu nhạy SOPs Standard Operational Procedures Quy trình thực hành chuẩn TCYTTG Tổ chức Y tế giới WHO World Health Organization h BNSR Điều trị thuốc hàng loạt Phản ứng chuỗi trùng hợp DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Các tỉnh/ thành có số KSTSR cao năm 2018 vàso với 2017 Bảng 2.1 Cỡ mẫu ngƣời không biểu triệu chứng 41 Bảng 2.2 Các biến số số thu thập nghiên cứu 43 Bảng 3.1 Đặc điểm dân số nhóm nghiên cứu xã thuộc huyện Tuy Đức 49 Bảng 3.2 Đặc điểm lâm sàng nhóm nghiên cứu xã thuộc huyện Tuy Đức 51 Bảng 3.3 Xét nghiệm lam máu test chẩn đoán nhanh xã, huyện Tuy Đức 52 Bảng 3.4 Tỷ lệ KSTSR (+) kỹ thuật RT-qPCR xã có lƣu hành sốt rét huyện Tuy Đức thời điểm mùa khô .53 Bảng 3.5 Tỷ lệ KSTSR (+) kỹ thuật RT-qPCR xã lƣu hành sốt rét huyện Tuy Đức thời điểm mùa mƣa 54 h Bảng 3.7 Định loài Plasmodium spp xã lƣu hành sốt rét huyện Tuy Đức 62 Bảng 3.6 So sánh tỷ lệ nhiễm KSTSR kỹ thuật RT-qPCR xã lƣu hành sốt rét huyện Tuy Đức hai thời điểm mùa mƣa mùa khô 55 Bảng 3.8 Xác định giao bào Plasmodium spp thời điểm mùa mƣa xã lƣu hành sốt rét huyện Tuy Đức 63 Bảng 3.9 Xác định giao bào Plasmodium spp thời điểm mùa khô xã lƣu hành sốt rét huyện Tuy Đức 64 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Bản đồ phân bố ký sinh trùng sốt rét toàn quốc năm 2018 Hình 1.2 Cơ cấu ký sinh trùng sốt rét toàn quốc năm 2018 10 Hình 1.3 Quy trình làm lam máu nhuộm giêm sa chẩn đoán sốt rét 13 Hình 1.4 Phiên giải kết test nhanh sốt rét phát P faciparum/ P.vivax 14 Hình 1.5 Nguyên lý phiên giải kết PCR chẩn đoán sốt rét 15 Hình 2.1 Bản đồ xã nghiên cứu thuộc huyện Tuy Đức, tỉnh Đắk Nông 39 Hình 3.1 Xác định giống Plasmodium spp nhóm nghiên cứu kỹ thuật RT-qPCR hệ thống máy ABI 7500 fast 53 Hình 3.2 Định lồi Plasmodium spp nhóm có kết KSTSR dƣơng tính kỹ thuật RT-qPCR hệ thống máy ABI 7500 fast 62 h