Trang 1 TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINHKHOA KHOA HỌC SINH HỌCNHÂN GIỐNG LAN KIM TUYẾN ANOECTOCHILUS SETACEUS BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY IN VITROTP Thủ Đức, Tháng 10 năm 2023BÁO
TRƯỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA KHOA HỌC SINH HỌC BÁO CÁO TIỂU LUẬN THIẾT BỊ VÀ KỸ THUẬT CNSH NHÂN GIỐNG LAN KIM TUYẾN (ANOECTOCHILUS SETACEUS) BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY IN VITRO GVHD: TS Huỳnh Văn Biết KS Trương Quang Toản TP Thủ Đức, Tháng 10 năm 2023 THÀNH VIÊN NHÓM Họ tên MSSV Đồn An Bình 21126019 Lê Ngọc Thế Hoa 21126346 Nguyễn Ngọc Nhi 21126442 NỘI DUNG 01 Đặt vấn đề 02 Kỹ thuật nhân giống in vitro 03 Kết luận ĐẶT VẤN ĐỀ • Lan Kim tuyến tên khoa học Anoectochilus setaceus • Là dược thảo q • Số lượng ít, mọc rải rác bị khai thác mức Hình Anoectochilus setaceus Blume • Nhân giống in vitro mang lại hiệu kinh tế lớn • Duy trì nhân nhanh kiểu gen quý • Làm vật liệu cho công tác tạo giống, nhân nhanh điều kiện vơ trùng Hình Nhân giống in vitro KỸ THUẬT NHÂN GIỐNG IN VITRO Thiết bị Hình Nồi hấp tiệt trùng Hình Tủ cấy vô trùng Chuẩn bị môi trường nuôi cấy Chất điều hịa sinh trưởng Chất khống đa lượng Than hoạt tính Hóa chất Chất khống vi lượng Agar Đường Chuẩn bị mơi trường ni cấy Mơi trường thích hợp cho nuôi cấy mô lan Kim tuyến (Anoectochilus setaceus) ni trường có nguồn gốc Knud* Các giai đoạn nhân giống in vitro Giai đoạn vào mẫu Nhân nhanh chồi Tái sinh rễ Chuyển vườn ươm Giai đoạn vào mẫu tạo mẫu vô trùng tái sinh mẫu ni cấy • Khử trùng mẫu nhằm loại bỏ nấm, vi khuẩn, virus • Yếu tố ảnh hưởng kết khử trùng: phương pháp lấy mẫu, thời điểm lấy mẫu, thời gian khử trùng, hóa chất khử trùng • Mơi trường dùng tạo mẫu vơ trùng: Knud • Vật liệu vơ mẫu: mắt đốt ngang thân Cơng thức khử trùng: • Ngâm mẫu cồn 70⁰ 10 giây • Ngâm NaClO 2% 10 phút • Sau rửa mẫu nước cất hấp Hình Mẫu mắt đốt ngang thân sau 15 ngày ni cấy 10 • Cắt mẫu thân thành đoạn có 2-3 chồi nách • Cấy vào môi trường Knud* + 0,5mg/l BAP + 0,3mg/l Kinetin + 0,3mg/l αNAA + 20g/l NAA + 20g/l sucrose + 100ml/l ND + 100ml/l dịch chiết khoai tây + 7g/l agar • Mục đích tái sinh mẫu tái sinh quan từ mẫu nuôi cấy 11 Nhân nhanh chồi • Các mẫu cấy sau thời gian nuôi, chồi nách phát triển thành chồi chùm 35-40 ngày cấy chuyền • Lấy đốt thân từ vơ trùng • Cắt mẫu thành đoạn chứa chồi hay 1-3 đốt thân 12 • Cấy mẫu vào môi trường nhân nhanh phù hợp: Knud* + 0,5mg/l BAP + 0,3mg/l Kinetin + 0,3mg/l αNAA + 20g/l NAA + 20g/l sucrose + 100ml/l ND + 100ml/l dịch chiết khoai tây + 7g/l agar • Giai đoạn nhân nhanh chồi không nên kéo dài lâu để tránh biến dị soma Hình Mẫu in vitro phối hợp hai nhóm chất auxin cytokinin sau 12 tuần nuôi cấy 13 Tái sinh rễ • Các chồi hình thành q trình ni cấy phát rễ tự sinh cấy sang mơi trường khác để kích thích tạo rễ • Lan Kim tuyến loại có u cầu dinh dưỡng thấp • Mơi trường rễ tạo hoàn chỉnh Knud/2 + 5% than hoạt tính Hình Ảnh hưởng than hoạt tính đến rễ 14 Chuyển vườn ươm • Các nuôi cấy in vitro sau tái sinh hồn chỉnh chuyển ngồi vườn ươm • Yếu tố định nghiên cứu đưa in vitro vườn ươm giá thể (dớn, xơ dừa, bột dừa…) • Dớn xơ dừa giá thể phù hợp • Thời gian cho thích nghi phù hợp ngày • Thời gian che luống phù hợp 10 ngày 15 KẾT LUẬN • Phương pháp khử trùng tạo mẫu thích hợp rửa xà phịng đem ngâm cồn 70⁰ 10 giây sau ngâm NaClO 2% 10 phút • Cơ quan vào mẫu thích hợp mắt đốt ngang thân • Giá thể phù hợp với lồi Lan Kim tuyến là: 50% Dớn + 50% xơ dừa 16 TÀI LIỆU THAM KHẢO • Nguyễn Tiến Bân (chủ biên) (2005) Danh lục loài thực vật Việt Nam, Tập 3, Nxb Nơng nghiệp, Hà Nội • Chính Phủ Nước Cộng hòa xã hội chủ nghĩa Việt Nam (2006) Nghị định số 32/2006/NĐ-CP • Nguyễn Trần Phước Huy Đỗ Thị Mai Trinh (2023) Nhân giống in vitro lan Kim tuyến (Anoectochilus sp.) Tạp chí Khoa học Đại học cần Thơ, 59(2): 76-83 • Phí Thị Cẩm Miện (2012) Nghiên cứu nhân nhanh in vitro loài Lan Kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume) 17 nhằm CẢM ƠN THẦY VÀ CÁC BẠN ĐÃ LẮNG NGHE