Nhân giống lan kim tuyến (anoectochilus setaceus blume) bằng kỹ thuật nuôi cấy in vitro

Trang 1 TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINHKHOA KHOA HỌC SINH HỌCNHÂN GIỐNG LAN KIM TUYẾN ANOECTOCHILUS SETACEUS BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY IN VITROTP Thủ Đức, Tháng 10 năm 2023BÁO

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

KHOA KHOA HỌC SINH HỌC

NHÂN GIỐNG LAN KIM TUYẾN

(ANOECTOCHILUS SETACEUS) BẰNG KỸ THUẬT

NUÔI CẤY IN VITRO

TP Thủ Đức, Tháng 10 năm 2023

BÁO CÁO TIỂU LUẬN THIẾT BỊ VÀ KỸ THUẬT CNSH

GVHD: TS Huỳnh Văn Biết

KS Trương Quang Toản

Họ và tên MSSV

Đoàn An Bình 21126019

Lê Ngọc Thế Hoa 21126346

Nguyễn Ngọc Nhi 21126442

THÀNH VIÊN NHÓM

1

Đặt vấn đề

03 Kết luận

Kỹ thuật nhân giống in vitro

NỘI DUNG

02

01

2

1 ĐẶT VẤN ĐỀ

• Lan Kim tuyến tên khoa học là Anoectochilus setaceus.

• Là một trong những dược thảo quý

• Số lượng ít, mọc rải rác và bị khai thác quá mức

Hình 1 Anoectochilus setaceus Blume 3

• Nhân giống in vitro mang lại

hiệu quả kinh tế lớn nhất

• Duy trì và nhân nhanh các

kiểu gen quý hiếm

• Làm vật liệu cho công tác

tạo giống, nhân nhanh ở

điều kiện vô trùng

Hình 2 Nhân giống in vitro

4

2 KỸ THUẬT NHÂN GIỐNG IN VITRO

Hình 3 Nồi hấp tiệt trùng

Thiết bị

Hình 4 Tủ cấy vô trùng

5

Chuẩn bị môi trường nuôi cấy

6

Hóa chất

Chất khoáng

đa lượng

Chất khoáng

vi lượng

Đường

Than hoạt tính

Agar Chất điều hòa

sinh trưởng

Chuẩn bị môi trường nuôi cấy

7

Môi trường nền thích hợp nhất cho nuôi cấy mô lan Kim tuyến (Anoectochilus setaceus) là nuôi trường có nguồn gốc Knud*

Giai đoạn vào mẫu Nhân nhanh chồi

Tái sinh rễ Chuyển cây ra vườn ươm

Các giai đoạn nhân giống in vitro

8

Giai đoạn vào mẫu tạo mẫu vô trùng và

tái sinh mẫu nuôi cấy

• Khử trùng mẫu nhằm loại bỏ nấm, vi khuẩn, virus

• Yếu tố ảnh hưởng kết quả khử trùng: phương

pháp lấy mẫu, thời điểm lấy mẫu, thời gian khử

trùng, hóa chất khử trùng

• Môi trường dùng khi tạo mẫu vô trùng: Knud

• Vật liệu vô mẫu: mắt đốt ngang thân

9

Công thức khử trùng:

• Ngâm mẫu trong cồn 70 ⁰

trong 10 giây

• Ngâm trong NaClO 2%

trong 10 phút

• Sau đó rửa mẫu bằng

nước cất đã hấp Hình 5 Mẫu mắt đốt ngang thân sau 15 ngày nuôi cấy

10

• Cắt mẫu thân thành đoạn có 2-3 chồi nách.

• Cấy vào môi trường Knud* + 0,5mg/l BAP +

0,3mg/l Kinetin + 0,3mg/l αNAA + 20g/l NAA + 20g/l

sucrose + 100ml/l ND + 100ml/l dịch chiết

khoai tây + 7g/l agar

• Mục đích tái sinh mẫu là tái sinh các cơ

quan từ mẫu nuôi cấy

11

Nhân nhanh chồi

• Các mẫu cấy sau thời gian nuôi, chồi nách phát

triển thành chồi chùm cứ 35-40 ngày có thể cấy chuyền

• Lấy đốt thân từ cây đã vô trùng

• Cắt mẫu thành các đoạn chứa 1 chồi ngọn hay

1-3 đốt thân

12

• Cấy mẫu vào môi trường nhân nhanh

phù hợp: Knud* + 0,5mg/l BAP +

0,3mg/l Kinetin + 0,3mg/l αNAA + 20g/l NAA + 20g/l

sucrose + 100ml/l ND + 100ml/l dịch

chiết khoai tây + 7g/l agar

• Giai đoạn nhân nhanh chồi không nên

kéo dài quá lâu để tránh biến dị soma

13

Hình 6 Mẫu in vitro phối hợp hai

nhóm chất auxin và cytokinin sau

12 tuần nuôi cấy

Tái sinh rễ

• Các chồi hình thành trong quá trình

nuôi cấy có thể phát rễ tự sinh hoặc

cấy sang một môi trường khác để

kích thích tạo rễ

• Lan Kim tuyến là một loại cây có yêu

cầu về dinh dưỡng thấp

• Môi trường ra rễ tạo cây hoàn chỉnh

là Knud/2 + 5% than hoạt tính

Hình 7 Ảnh hưởng của

than hoạt tính đến rễ.

14

Chuyển cây ra vườn ươm

• Các cây nuôi cấy in vitro sau khi đã tái sinh hoàn chỉnh sẽ

được chuyển ra ngoài vườn ươm

• Yếu tố quyết định và được nghiên cứu khi đưa cây in vitro ra

vườn ươm là giá thể (dớn, xơ dừa, bột dừa…)

• Dớn và xơ dừa là giá thể phù hợp nhất

• Thời gian cho cây thích nghi phù hợp nhất là 8 ngày

• Thời gian che luống cây phù hợp nhất là 10 ngày

15

3 KẾT LUẬN

• Phương pháp khử trùng tạo mẫu sạch thích

hợp là rửa sạch bằng xà phòng rồi đem ngâm

trong cồn 70 trong 10 giây sau đó ngâm trong ⁰

NaClO 2% trong 10 phút

• Cơ quan vào mẫu thích hợp nhất là mắt đốt

ngang thân

• Giá thể phù hợp nhất với loài Lan Kim tuyến

là: 50% Dớn + 50% xơ dừa

16

• Nguyễn Tiến Bân (chủ biên) (2005) Danh lục các loài thực

vật Việt Nam, Tập 3, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội.

• Chính Phủ Nước Cộng hòa xã hội chủ nghĩa Việt Nam

(2006) Nghị định số 32/2006/NĐ-CP.

• Nguyễn Trần Phước Huy và Đỗ Thị Mai Trinh (2023)

Nhân giống in vitro lan Kim tuyến (Anoectochilus sp.) Tạp

chí Khoa học Đại học cần Thơ, 59(2): 76-83.

• Phí Thị Cẩm Miện (2012) Nghiên cứu nhân nhanh in vitro

loài Lan Kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume) nhằm

bảo tồn nguồn dược liệu quý.

TÀI LIỆU THAM KHẢO

17

CẢM ƠN THẦY VÀ

CÁC BẠN ĐÃ LẮNG NGHE