(Luận văn) nghiên cứu nhân giống lan kim tuyến (anoectochilus setaceus blume) bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào tại viện nghiên cứu và phát triển lâm nghiệp

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NGÔ THẾ CƯỜNG NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG LAN KIM TUYẾN (Anoectochilus setaceus Blume) BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO TẠI VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN LÂM NGHIỆP, TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÁI NGUYÊN LUẬN VĂN THẠC SĨ LÂM NGHIỆP Thái Nguyên – 2022 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NGÔ THẾ CƯỜNG NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG LAN KIM TUYẾN (Anoectochilus setaceus Blume) BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO TẠI VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN LÂM NGHIỆP, TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÁI NGUYÊN Ngành: Quản lý tài nguyên rừng Mã số ngành: 8.62.02.11 LUẬN VĂN THẠC SĨ LÂM NGHIỆP Người hướng dẫn khoa học: TS DƯƠNG VĂN THẢO TS NGUYỄN MINH CHÍ Thái Nguyên - 2022 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa sử dụng để bảo vệ học vị Nội dung tổng quan thảo luận luận văn có tham khảo sử dụng tài liệu, thông tin đăng tải tác phẩm, tạp chí theo danh mục tài liệu tham khảo luận văn Thái Nguyên, ngày 02 tháng 11 năm 2022 Học viên Ngô Thế Cường ii LỜI CẢM ƠN Đề tài “Nghiên cứu nhân giống Lan Kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume) phương pháp nuôi cấy mô tế bào Viện nghiên cứu Phát triển Lâm nghiệp” Viện Lâm nghiệp Phát triển bền vững, Trường Đại Học Nơng Lâm Thái Ngun hồn thành theo chương trình đào tạo cao học chuyên ngành Quản lý tài nguyên rừng, khóa học K28 Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên Tác giả xin chân thành cảm ơn quan tâm, giúp đỡ Ban Giám hiệu, Phòng Đào tạo sau đại học thầy, cô giáo Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên suốt trình học tập nghiên cứu thực luận văn Tác giả xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Dương Văn Thảo TS Nguyễn Minh Chí tận tình hướng dẫn, truyền đạt kiến thức, kinh nghiệm quý báu, hướng dẫn tác giả q trình hồn thành luận văn Tôi xin cảm ơn Viện Nghiên cứu Phát triển Lâm nghiệp Viện Lâm nghiệp Phát triển bền vững, Trường Đại học Nông lâm Thái Ngun tạo điều kiện giúp tơi có sở vật chất nghiên cứu hoàn thiện luận văn Cuối tác giả xin chân thành cảm ơn người thân gia đình, đồng nghiệp bạn bè giúp đỡ, động viên tác giả suốt thời gian học tập hoàn thành luận văn Xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, tháng 11 năm 2022 Tác giả Ngô Thế Cường iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC .iii DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU vi DANH MỤC CÁC HÌNH viii DANH MỤC VIẾT TẮT ix MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục tiêu nghiên cứu đề tài .2 Ý nghĩa đề tài 3.1 Ý nghĩa khoa học 3.2 Ý nghĩa thực tiễn Chương TỔNG QUAN NGHIÊN CỨU 1.1 Tổng quan nhân giống in vitro .3 1.1.1 Khái quát nuôi cấy mô tế bào 1.1.2 Tính tồn (Totipotence) tế bào 1.1.3 Sự phân hóa phản phân hóa tế bào 1.1.4 Cơ sở nuôi cấy mô tế bào thực vật .4 1.1.5 Thành phần môi trường nuôi cấy mô tế bào thực vật .4 1.1.6 Các giai đoạn nhân giống vơ tính 1.2 Tổng quan nghiên cứu Lan Kim tuyến giới .9 1.2.1 Phân loại, đặc điểm hình thái tình hình phân bố 1.2.2 Giá trị kinh tế 10 1.2.3 Giá trị dược liệu 10 iv 1.2.4 Nhân giống Lan Kim tuyến 11 1.3 Tổng quan nghiên cứu Lan Kim tuyến Việt Nam .12 1.3.1 Phân loại, đặc điểm hình thái tình hình phân bố 12 1.3.2 Giá trị kinh tế 13 1.3.3 Giá trị dược liệu 13 1.3.4 Nhân giống Lan Kim tuyến 14 Chương NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 19 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 19 2.1.2 Phạm vi nghiên cứu 19 2.2 Nội dung nghiên cứu 19 2.3 Phương pháp nghiên cứu .20 2.3.1 Hóa chất thiết bị phục vụ nghiên cứu 20 2.3.2 Phương pháp kế thừa tài liệu 21 2.3.3 Phương pháp nghiên cứu đặc điểm hình thái lồi Lan Kim tuyến có xuất xứ Thái Ngun 21 2.3.4 Phương pháp nghiên cứu nhân giống Lan Kim tuyến phương pháp nuôi cấy mô tế bào 21 2.3.4.1 Phương pháp nghiên cứu khử trùng mẫu tạo vật liệu vô trùng 21 2.3.4.2 Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng số chất KTST (GA3, BAP) đến khả nhân nhanh chồi 23 2.3.4.3 Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng số chất kích thích rễ (IAA, NAA, IBA) đến khả rễ in vitro Lan Kim tuyến 25 2.3.4.4 Phương pháp nghiên cứu giá thể thích hợp để Lan Kim tuyến sau giai đoạn in vitro 26 2.3.5 Phương pháp phân tích xử lý số liệu 27 v Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 28 3.1 Đặc điểm hình thái lồi Lan Kim tuyến có xuất xứ Thái Nguyên .28 3.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng thời gian khử trùng HgCl2 0,1% đến khả tạo mẫu Lan Kim tuyến vô trùng 33 3.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng số chất kích thích sinh trưởng (GA3, BAP) đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim tuyến 36 a) Ảnh hưởng GA3 đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim tuyến 36 b) Ảnh hưởng BAP đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim tuyến 38 c) Ảnh hưởng nồng độ BAP kết hợp với GA3 đến khả nhân nhanh chồi mẫu Lan Kim tuyến .39 3.4 Kết nghiên cứu ảnh hưởng số chất kích thích rễ (IAA, NAA, IBA) đến khả rễ in vitro Lan Kim tuyến 42 3.5 Kết nghiên cứu giá thể thích hợp để Lan Kim tuyến sau giai đoạn in vitro 46 3.6 Đề xuất giải pháp nhân giống lồi Lan Kim tuyến có xuất xứ Thái Nguyên .49 KẾT LUẬN 52 Kết luận 52 Kiến nghị 53 TÀI LIỆU THAM KHẢO 54 KẾT QUẢ XỬ LÝ SỐ LIỆU .57 vi DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU Bảng 2.1 Thành phần môi trường MS 20 Bảng 2.2 Các cơng thức thí nghiệm ảnh hưởng thời gian khử trùng HgCl2 0,1 % đến khả tạo vật liệu vô trùng Lan Kim tuyến 22 Bảng 2.3 Các cơng thức thí nghiệm ảnh hưởng nồng độ GA3 đến khả nhân nhanh chồi từ mẫu Lan Kim tuyến .23 Bảng 2.4 Các công thức thí nghiệm ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả nhân nhanh chồi từ mẫu Lan Kim tuyến .24 Bảng 2.5 Các công thức thí nghiệm ảnh hưởng tổ hợp GA3 BAP đến khả nhân nhanh chồi mẫu Lan Kim tuyến 25 Bảng 2.6 Các công thức thí nghiệm ảnh hưởng IAA, NAA, IBA đến khả rễ mẫu chồi Lan Kim tuyến 26 Bảng 2.7 Các công thức thí nghiệm giá thể để ngơi Lan Kim tuyến sau giai đoạn in vitro 27 Bảng 3.1 Ảnh hưởng thời gian khử trùng HgCl2 0,1% đến khả tạo vật liệu vô trùng Lan Kim tuyến 34 Bảng 3.2 Ảnh hưởng GA3 đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim tuyến 37 Bảng 3.3 Ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả nhân nhanh chồi từ mẫu Lan Kim tuyến 38 Bảng 3.4 Ảnh hưởng tổ hợp GA3 BAP đến khả nhân nhanh chồi mẫu Lan Kim tuyến 40 Bảng 3.5 Ảnh hưởng nồng độ IAA đến khả rễ Lan Kim tuyến in vitro 42 Bảng 3.6 Ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả rễ Lan Kim tuyến in vitro 43 vii Bảng 3.7 Ảnh hưởng nồng độ IBA đến khả rễ Lan Kim tuyến in vitro 44 Bảng 3.8 Ảnh hưởng giá thể đến khả sinh trưởng phát triển Lan Kim tuyến giai đoạn sau ni cấy mơ ngồi vườn ươm 47 viii DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 3.1 Hình ảnh mẫu Lan Kim tuyến phân bố ngồi tự nhiên thơn Cổ Đình, xã Hồng Nơng, huyện Đại Từ, tỉnh Thái Nguyên 28 Hình 3.2 Hình ảnh mẫu Lan Kim tuyến xuất xứ Thái Nguyên lữu trữ Viện Lâm nghiệp Phát triển bền vững, Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên 30 Hình 3.3 Hình thái thân lồi Lan Kim tuyến xuất xứ Thái Nguyên 31 Hình 3.4 Hình thái loài Lan Kim tuyến xuất xứ Thái Nguyên .32 Hình 3.5 Hình thái hoa lồi Lan Kim tuyến xuất xứ Thái Nguyên 32 Hình 3.6 Hình thái rễ loài Lan Kim tuyến xuất xứ Thái Nguyên .33 Hình 3.7 Hình ảnh Lan Kim tuyến sau khử trùng cấy môi trường MS 35 Hình 3.8 Mẫu Lan Kim tuyến cấy mơi trường nhân nhanh có bổ sung 0,2 mg/l GA3 + 1,5 mg/l BAP 41 Hình 3.9 Hình ảnh Lan Kim tuyến cấy mơi trường có bổ sung IBA 1,0mg/l 45 Hình 3.10 Cây Lan Kim tuyến trồng giá thể rêu trắng Chile + xơ dừa (2:1) sau tháng 48