Giống hoa huệ (polianthes tuberosa l ) nuôi cấy mô do xử lý đột biến bằng tia gamma

NUÔI CẤY MÔ DO XỬ LÝ ĐỘT BIẾN BẰNG TIA GAMMA.TÁC GIẢĐào Thị Tuyết ThanhNguyễn Bảo Toàn Trang 3 NỘI DUNG123GIỚI THIỆU CHUNG VỀ CHỈ THỊ ISSR INTER SIMPLE SEQUENCE REPEAT VẬT LIỆU VÀ PHƯƠ

Trang 1

ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

KHOA KHOA HỌC SINH HỌC

BÁO CÁO MÔN HỌC THIẾT BỊ VÀ KĨ THUẬT TRONG CÔNG NGHỆ SINH HỌC

SỬ DỤNG CHỈ THỊ ISSR TRONG VIỆC ĐÁNH GIÁ ĐA DẠNG DI

TRUYỀN CÁC DÒNG/GIỐNG HOA HUỆ (Polianthes tuberosa L.) NUÔI CẤY MÔ DO XỬ LÝ ĐỘT BIẾN BẰNG TIA GAMMA

Hướng dẫn khoa học:

TS HUỲNH VĂN BIẾT

ThS TRƯƠNG QUANG TOẢN

Nhóm sinh viên thực hiện:

TRƯƠNG THỊ MINH THẠNH PHẠM LÊ TƯỜNG VY

NGUYỄN LÊ THANH VY

Trang 2

TÊN BÀI BÁO

SỬ DỤNG CHỈ THỊ ISSR TRONG VIỆC ĐÁNH

GIÁ ĐA DẠNG DI TRUYỀN CÁC DÒNG/GIỐNG

HOA HUỆ (Polianthes tuberosa L.) NUÔI CẤY

MÔ DO XỬ LÝ ĐỘT BIẾN BẰNG TIA GAMMA.

Trang 3

VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

1

Trang 4

1 GIỚI THIỆU CHUNG VỀ CHỈ THỊ ISSR (INTER SIMPLE SEQUENCE

REPEAT)

• ISSR là các đoạn DNA có kích thước khoảng 100-3000

bp nằm giữa các vùng vi vệ tinh liền kề, có hướng ngược nhau

• Khuếch đại bằng PCR sử dụng các chuỗi vi vệ tinh làm

mồi với một số nucleotide chọn lọc làm neo vào các vùng lân cận không lặp lại (16-18 bp)

• Một mồi duy nhất

2

Trang 5

Hình 1.1 Sơ đồ biểu diễn kĩ thuật

• Dựa trên PCR nên chỉ cần một

lượng nhỏ ADN mẫu

• Kỹ thuật đa điểm nên có khả năng

không tương đồng của các mảnh

có kích thước tương tự

• ISSR, giống như RAPD, có thể gặp

vấn đề về khả năng tái tạo 3

Trang 6

2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Vật liệu

Đối chứng: Mẫu lá của giống hoa huệ 6 cánh và 12 cánh từ An

Giang

Mẫu lá của 2 giống hoa huệ được xử lý đột biến từ giống hoa huệ

12 cánh bằng tia gamma kết hợp với kỹ thuật nuôi cấy mô 22 cánh

và 36 cánh

Hình 2.1 Giống hoa huệ địa phương và giống hoa huệ đột biến a) Giống hoa huệ

có 6 cánh; b) Giống hoa huệ có 12 cánh; c) Giống hoa huệ có 22 cánh; d) Giống hoa huệ 36

cánh

4

Trang 8

Mẫu lá của từng giống được thu thập riêng rẽ và tách chiết DNA sử dụng 2% dung dịch đệm CTAB.

2.2 Phương pháp nghiên cứu

Ly trích DNA tổng số

5

Trang 9

Bảng 2.2 Thông tin các mồi ISSR được sử dụng để đánh giá đa dạng di truyền các

dòng hoa huệ đột biến

Sử dụng 14 mồi ISSR do công ty TNHH Sinh Hóa Phù Sa sản xuất và cung cấp

STT Tên mồi Trình tự (5’- 3’) STT Tên mồi Trình tự (5’- 3’)

1 3A01 (GA)8TC 8 808 (AG)8C

2 3A07 (AG)7CTT 9 836 (AG)8YA

3 3A21 (TG)7ACC 10 840 (AG)8YT

4 3A39 (CA)7GTA 11 842 (AG)8YG

5 3A42 (GACA)4C 12 855 (AC)8YT

6 3A62 (TG)7ACT 13 857 (AC)8YG

7 UBC873 GACAGACAGACAGACA 14 P23SR1 GGCTGCTTCTAAGC

CAAC

7

Trang 10

Bảng 2.3 Chương trình nhiệt của các phản ứng

PCR

Giai đoạn Nhiệt độ

( ) ℃ Thời gian (phút, giây) chu kỳ Số Tiền biến tính 92 5 phút 1

Trang 11

Trang 12

3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

Hình 3.1 Ảnh điện di của các mồi ISSR đối

với các dòng/giống hoa huệ được nghiên

cứu a) Mồi UBC 873; b) Mồi P23SR1; c) Mồi

3A39; d) Mồi 808 1: giống hoa huệ 6 cánh;

2: dòng hoa huệ 22 cánh; 3: dòng hoa huệ

36 cánh; 4: giống hoa huệ 12 cánh; M:

Thang chuẩn 100bp; : băng DNA mới; :

băng DNA mất

3000bp 1250bp 850bp

300bp

3000bp 2000bp 900bp 600bp

1000bp 600bp

1250bp 700bp

Trang 13

Hình 3.2 Ảnh điện di của mồi UBC 873 đối với các dòng/giống

hoa huệ được nghiên cứu 1: giống hoa huệ 6 cánh; 2: dòng hoa

huệ 22 cánh; 3: dòng hoa huệ 36 cánh; 4: giống hoa huệ 12 cánh; M:

Thang chuẩn 100bp; : băng DNA mới; : băng DNA mất

300bp

11

Trang 14

3000bp 1250bp 850bp

300bp

12

Trang 15

300bp

13

Trang 16

Giếng 3 :

• Xuất hiện các băng ở vị trí 1000bp và 2750 bp

• Mất các băng ở vị trí 300;350;850;1250bp

3000bp 1250bp 850bp

300bp

14

Trang 17

Hình 3.3 Ảnh điện di của mồi P23SR1 đối với các dòng/giống

Trang 18

MỒI 3A39 VÀ 808

Cho sản phẩm khuếch đại cũng có sự xuất hiện mới và mất đi các bang DNA nhưng

số lượng ít hơn chỉ với 1 băng khác biệt so với đối chứng

Hình 3.4 Ảnh điện di của mồi 3A39 và 808 đối với các dòng/giống hoa huệ được nghiên cứu

cánh; 4: giống hoa huệ 12 cánh; M: Thang chuẩn 100bp; : băng DNA mới; : băng DNA mất

1000bp 600bp

1250bp 700bp

16

Trang 19

Bảng 3.1 Bảng hệ số tương đồng di truyền của các dòng/giống hoa huệ nghiên

cứu với 4 cặp mồi ISSR

17

Trang 20

3.1 Hệ số tương đồng

• Hệ số tương đồng biến thiên trong khoảng 0,375 đến 0,786

• Chỉ số tương đồng thấp nhất là 0,375 được ghi nhận giữa giống hoa

huệ gốc 12 cánh và dòng hoa huệ đột biến 22 cánh

Trang 21

3.2 Sơ đồ nhánh về mối quan hệ di truyền

Hình 3.5 Sơ đồ hình nhánh về mối quan hệ di truyền giữa

các kiểu gen hoa huệ dựa trên dữ liệu ISSR

19

Trang 22

Dựa trên phân tích đa hình chia 4 kiểu gen hoa huệ thành hai nhóm

chính với chỉ số tương đồng 0.43% Cho thấy mặc dù hai dòng hoa huệ

đột biến được xử lý đột biến từ giống 12 cánh nhưng lại có mối quan hệ

di truyền gần gũi với giống 6 cánh

20

Trang 23

KẾT LUẬN

• Bốn chỉ thị ISSR: UBC873, P23SR1, 3A39 và 808 có thể sử dụng

đánh giá mối quan hệ giữa các dòng/giống hoa huệ đột biến

• Sự đa dạng được thể hiện các giống hoa huệ cấy mô được xử lý

đột biến kết quả 100% băng DNA đa hình Đồng thời có sự khác

biệt về vị trí xuất hiện băng DNA giữa hai giống đối chứng với

nhau và giữa hai dòng đột biến với giống gốc có 12 cánh

• Hệ số tương đồng và sơ đồ nhánh cho thấy có thể chia 4 kiểu

gen hoa huệ thành 2 nhóm và kiểu gen của 2 dòng hoa huệ đột

biến có mối quan hệ di truyền khác biệt so với giống gốc

=> Phương pháp rà soát đột biến giai đoạn đầu hiệu quả để xác

định giống mới

21

Trang 24

TÀI LIỆU THAM KHẢO

• Sử dụng chỉ thị ISSR trong việc đánh giá đa dạng di truyền các

dòng/giống hoa huệ (Polianthes tuberosa L.) nuôi cấy mô do xử lý đột

biến bằng tia gamma - Đào Thị Tuyết Thanh, Nguyễn Bảo Toàn

• Tạo dòng hoa huệ (Polianthes tuberosa L.) Đột biến bằng tia gamma

(60CO) trong điều kiện in vitro - Đào Thị Tuyết Thanh

22

Trang 25

CẢM ƠN MỌI NGƯỜI ĐÃ CHÚ

Ý LẮNG NGHE

23

Tiêu đề	Sử dụng chỉ thị ISSR trong việc đánh giá đa dạng di truyền các dòng/giống hoa huệ (Polianthes tuberosa L.) nuôi cấy mô do xử lý đột biến bằng tia gamma
Tác giả	Đào Thị Tuyết Thanh, Nguyễn Bảo Toàn
Người hướng dẫn	TS. Huỳnh Văn Biết, ThS. Trương Quang Toản
Trường học	Đại học Nông lâm Thành phố Hồ Chí Minh
Chuyên ngành	Khoa học Sinh học
Thể loại	Báo cáo môn học
Năm xuất bản	2017
Thành phố	Thành phố Hồ Chí Minh

Định dạng
Số trang	25
Dung lượng	2,34 MB