Nghiên cứu nhân giống lan kim tuyến (anoectochilus setaceus blume) bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào tại viện nghiên cứu và phát triển lâm nghiệp

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NGÔ THẾ CƯỜNG NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG LAN KIM TUYẾN (Anoectochilus setaceus Blume) BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO TẠI VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN LÂM NGHIỆP, TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÁI NGUYÊN LUẬN VĂN THẠC SĨ LÂM NGHIỆP Thái Nguyên – 2022 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NGÔ THẾ CƯỜNG NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG LAN KIM TUYẾN (Anoectochilus setaceus Blume) BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO TẠI VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN LÂM NGHIỆP, TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÁI NGUYÊN Ngành: Quản lý tài nguyên rừng Mã số ngành: 8.62.02.11 LUẬN VĂN THẠC SĨ LÂM NGHIỆP Người hướng dẫn khoa học: TS DƯƠNG VĂN THẢO TS NGUYỄN MINH CHÍ Thái Nguyên - 2022 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa sử dụng để bảo vệ học vị Nội dung tổng quan thảo luận luận văn có tham khảo sử dụng tài liệu, thông tin đăng tải tác phẩm, tạp chí theo danh mục tài liệu tham khảo luận văn Thái Nguyên, ngày 02 tháng 11 năm 2022 Học viên Ngô Thế Cường ii LỜI CẢM ƠN Đề tài “Nghiên cứu nhân giống Lan Kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume) phương pháp nuôi cấy mô tế bào Viện nghiên cứu Phát triển Lâm nghiệp” Viện Lâm nghiệp Phát triển bền vững, Trường Đại Học Nơng Lâm Thái Ngun hồn thành theo chương trình đào tạo cao học chuyên ngành Quản lý tài nguyên rừng, khóa học K28 Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên Tác giả xin chân thành cảm ơn quan tâm, giúp đỡ Ban Giám hiệu, Phòng Đào tạo sau đại học thầy, cô giáo Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên suốt trình học tập nghiên cứu thực luận văn Tác giả xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Dương Văn Thảo TS Nguyễn Minh Chí tận tình hướng dẫn, truyền đạt kiến thức, kinh nghiệm quý báu, hướng dẫn tác giả q trình hồn thành luận văn Tôi xin cảm ơn Viện Nghiên cứu Phát triển Lâm nghiệp Viện Lâm nghiệp Phát triển bền vững, Trường Đại học Nông lâm Thái Ngun tạo điều kiện giúp tơi có sở vật chất nghiên cứu hoàn thiện luận văn Cuối tác giả xin chân thành cảm ơn người thân gia đình, đồng nghiệp bạn bè giúp đỡ, động viên tác giả suốt thời gian học tập hoàn thành luận văn Xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, tháng 11 năm 2022 Tác giả Ngô Thế Cường iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU vi DANH MỤC CÁC HÌNH viii DANH MỤC VIẾT TẮT ix MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục tiêu nghiên cứu đề tài Ý nghĩa đề tài 3.1 Ý nghĩa khoa học 3.2 Ý nghĩa thực tiễn Chương TỔNG QUAN NGHIÊN CỨU 1.1 Tổng quan nhân giống in vitro 1.1.1 Khái quát nuôi cấy mô tế bào 1.1.2 Tính tồn (Totipotence) tế bào 1.1.3 Sự phân hóa phản phân hóa tế bào 1.1.4 Cơ sở nuôi cấy mô tế bào thực vật 1.1.5 Thành phần môi trường nuôi cấy mô tế bào thực vật 1.1.6 Các giai đoạn nhân giống vơ tính 1.2 Tổng quan nghiên cứu Lan Kim tuyến giới 1.2.1 Phân loại, đặc điểm hình thái tình hình phân bố 1.2.2 Giá trị kinh tế 10 1.2.3 Giá trị dược liệu 10 iv 1.2.4 Nhân giống Lan Kim tuyến 11 1.3 Tổng quan nghiên cứu Lan Kim tuyến Việt Nam 12 1.3.1 Phân loại, đặc điểm hình thái tình hình phân bố 12 1.3.2 Giá trị kinh tế 13 1.3.3 Giá trị dược liệu 13 1.3.4 Nhân giống Lan Kim tuyến 14 Chương NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 19 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 19 2.1.2 Phạm vi nghiên cứu 19 2.2 Nội dung nghiên cứu 19 2.3 Phương pháp nghiên cứu 20 2.3.1 Hóa chất thiết bị phục vụ nghiên cứu 20 2.3.2 Phương pháp kế thừa tài liệu 21 2.3.3 Phương pháp nghiên cứu đặc điểm hình thái lồi Lan Kim tuyến có xuất xứ Thái Nguyên 21 2.3.4 Phương pháp nghiên cứu nhân giống Lan Kim tuyến phương pháp nuôi cấy mô tế bào 21 2.3.4.1 Phương pháp nghiên cứu khử trùng mẫu tạo vật liệu vô trùng 21 2.3.4.2 Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng số chất KTST (GA3, BAP) đến khả nhân nhanh chồi 23 2.3.4.3 Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng số chất kích thích rễ (IAA, NAA, IBA) đến khả rễ in vitro Lan Kim tuyến 25 2.3.4.4 Phương pháp nghiên cứu giá thể thích hợp để ngơi Lan Kim tuyến sau giai đoạn in vitro 26 2.3.5 Phương pháp phân tích xử lý số liệu 27 v Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 28 3.1 Đặc điểm hình thái lồi Lan Kim tuyến có xuất xứ Thái Nguyên 28 3.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng thời gian khử trùng HgCl2 0,1% đến khả tạo mẫu Lan Kim tuyến vô trùng 33 3.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng số chất kích thích sinh trưởng (GA3, BAP) đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim tuyến 36 a) Ảnh hưởng GA3 đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim tuyến 36 b) Ảnh hưởng BAP đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim tuyến 38 c) Ảnh hưởng nồng độ BAP kết hợp với GA3 đến khả nhân nhanh chồi mẫu Lan Kim tuyến 39 3.4 Kết nghiên cứu ảnh hưởng số chất kích thích rễ (IAA, NAA, IBA) đến khả rễ in vitro Lan Kim tuyến 42 3.5 Kết nghiên cứu giá thể thích hợp để Lan Kim tuyến sau giai đoạn in vitro 46 3.6 Đề xuất giải pháp nhân giống lồi Lan Kim tuyến có xuất xứ Thái Nguyên 49 KẾT LUẬN 52 Kết luận 52 Kiến nghị 53 TÀI LIỆU THAM KHẢO 54 KẾT QUẢ XỬ LÝ SỐ LIỆU 57 vi DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU Bảng 2.1 Thành phần môi trường MS 20 Bảng 2.2 Các cơng thức thí nghiệm ảnh hưởng thời gian khử trùng HgCl2 0,1 % đến khả tạo vật liệu vô trùng Lan Kim tuyến22 Bảng 2.3 Các cơng thức thí nghiệm ảnh hưởng nồng độ GA3 đến khả nhân nhanh chồi từ mẫu Lan Kim tuyến 23 Bảng 2.4 Các cơng thức thí nghiệm ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả nhân nhanh chồi từ mẫu Lan Kim tuyến 24 Bảng 2.5 Các công thức thí nghiệm ảnh hưởng tổ hợp GA3 BAP đến khả nhân nhanh chồi mẫu Lan Kim tuyến 25 Bảng 2.6 Các công thức thí nghiệm ảnh hưởng IAA, NAA, IBA đến khả rễ mẫu chồi Lan Kim tuyến 26 Bảng 2.7 Các công thức thí nghiệm giá thể để ngơi Lan Kim tuyến sau giai đoạn in vitro 27 Bảng 3.1 Ảnh hưởng thời gian khử trùng HgCl2 0,1% đến khả tạo vật liệu vô trùng Lan Kim tuyến 34 Bảng 3.2 Ảnh hưởng GA3 đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim tuyến 37 Bảng 3.3 Ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả nhân nhanh chồi từ mẫu Lan Kim tuyến 38 Bảng 3.4 Ảnh hưởng tổ hợp GA3 BAP đến khả nhân nhanh chồi mẫu Lan Kim tuyến 40 Bảng 3.5 Ảnh hưởng nồng độ IAA đến khả rễ Lan Kim tuyến in vitro 42 Bảng 3.6 Ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả rễ Lan Kim tuyến in vitro 43 vii Bảng 3.7 Ảnh hưởng nồng độ IBA đến khả rễ Lan Kim tuyến in vitro 44 Bảng 3.8 Ảnh hưởng giá thể đến khả sinh trưởng phát triển Lan Kim tuyến giai đoạn sau nuôi cấy mơ ngồi vườn ươm 47 viii DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 3.1 Hình ảnh mẫu Lan Kim tuyến phân bố ngồi tự nhiên thơn Cổ Đình, xã Hồng Nơng, huyện Đại Từ, tỉnh Thái Ngun 28 Hình 3.2 Hình ảnh mẫu Lan Kim tuyến xuất xứ Thái Nguyên lữu trữ Viện Lâm nghiệp Phát triển bền vững, Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên 30 Hình 3.3 Hình thái thân lồi Lan Kim tuyến xuất xứ Thái Nguyên 31 Hình 3.4 Hình thái lồi Lan Kim tuyến xuất xứ Thái Nguyên 32 Hình 3.5 Hình thái hoa loài Lan Kim tuyến xuất xứ Thái Nguyên 32 Hình 3.6 Hình thái rễ lồi Lan Kim tuyến xuất xứ Thái Nguyên 33 Hình 3.7 Hình ảnh Lan Kim tuyến sau khử trùng cấy mơi trường MS 35 Hình 3.8 Mẫu Lan Kim tuyến cấy mơi trường nhân nhanh có bổ sung 0,2 mg/l GA3 + 1,5 mg/l BAP 41 Hình 3.9 Hình ảnh Lan Kim tuyến cấy mơi trường có bổ sung IBA 1,0mg/l 45 Hình 3.10 Cây Lan Kim tuyến trồng giá thể rêu trắng Chile + xơ dừa (2:1) sau tháng 48 52 KẾT LUẬN Kết luận Đặc điểm hình thái lồi Lan Kim tuyến có xuất xứ Thái Nguyên: Các mẫu Lan Kim tuyến nghiên cứu thu thập từ thơn Cổ Đình, xã Hồng Nơng, huyện Đại Từ, tỉnh Thái Nguyên lưu giữ Viện Nghiên cứu Phát triển Lâm nghiệp Viện Lâm nghiệp Phát triển bền vững Lan Kim tuyến thuộc dạng thảo, mọc đất, thân đất mọng nước mang mọc xòe sát đất, thân rễ mọc dài Lá hình trứng, gần trịn gốc, chóp nhọn có mũi ngắn, phía ngồi màu nâu đỏ, phía màu xanh vàng nhạt Hoa tự chùm mọc đầu thân Rễ mọc từ mấu thân rễ Kết nghiên cứu ảnh hưởng thời gian khử trùng HgCl2 0,1% đến khả tạo mẫu Lan Kim tuyến vô trùng: Khử trùng mẫu Lan Kim tuyến có đỉnh sinh trưởng HgCl2 0,1% thời gian phút cho kết vào mẫu tốt nhất: tỷ lệ mẫu sống không nhiễm đạt 83,33%, mẫu bị nhiễm 23,33% tỷ lệ mẫu chết 3,33% Kết nghiên cứu ảnh hưởng số chất kích thích sinh trưởng (GA3, BAP) đến khả nhân nhanh chồi Lan Kim tuyến: Bổ sung GA3 có nồng độ 0,2 mg/l với BAP 1,5 mg/l vào môi trường nhân nhanh in vitro Lan Kim tuyến cho hệ số nhân chồi cao đạt 8,18 chồi chiều cao chồi trung bình đạt 8,42 cm/chồi, chồi khỏe, mập, xanh Kết nghiên cứu ảnh hưởng số chất kích thích rễ (IAA, NAA, IBA) đến khả rễ in vitro Lan Kim tuyến: Bổ sung IBA nồng độ 1,0mg/l vào môi trường tạo rễ cho kết rễ tốt với tỷ lệ rễ đạt 100%; số rễ/chồi 4,15 rễ chiều dài trung bình rễ 3,10 cm Kết nghiên cứu giá thể thích hợp để ngơi Lan Kim tuyến sau giai đoạn in vitro: Lan kim tuyến sau giai đoạn in vitro cấy 53 giá thể rêu trắng Chile + xơ dừa (2:1) cho tỷ lệ sống cao đạt 97,78%; Chiều cao trung bình 13,21 cm, cứng khỏe, thân màu xanh sẫm Kiến nghị Cần ứng dụng vào mơ hình trồng thử nghiệm quy mơ lớn bên ngồi phịng thí nghiệm để bảo tồn phát triển lồi Lan Kim tuyến tỉnh Thái Nguyên nói riêng lồi nói chung 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liệu tiếng Việt Nguyễn Quốc Bình (1994), Tạp chí Sinh học, 16(4), 143-145 Bộ Khoa Học Công Nghệ (2007), Sách đỏ Việt Nam (phần thực vật), NXB Khoa học tự nhiên công nghệ, Hà Nội Chính Phủ Việt Nam (2006), Nghị định số 32/2006/NĐ-CP, Danh mục thực vật rừng, động vật rừng nguy cấp quý chế độ quản lý, Hà Nội, Việt Nam Đỗ Mạnh Cường, Vũ Quốc Luận, Nguyễn Việt Cường, Nguyễn Thanh Sang, Nguyễn Hồng Hoàng, Hồ Thanh Tâm, Nguyễn Xuân Tuấn, Trần Hiếu, Hoàng Thanh Tùng, Nguyễn Thị Kim Loan, Dương Tấn Nhựt (2015), Ảnh hưởng số yếu tố lên trình sinh trưởng phát triển lan Gấm (Anoectochilus setaceus Blume) nuôi cấy in vitro, Tạp chí Khoa học Phát triển 2015, tập 13, số 3: 337-344 Trịnh Đình Đạt (2009), Công nghệ sinh học (công nghệ di truyền), tập 4, Nxb giáo dục Nguyễn Quốc Đông Phạm Văn Điển (2016), Lựa chọn mơi trường thích hợp để tạo hoàn chỉnh Lan Kim tuyến (Anoectochilus roxburghii), Tạp chí Khoa học & Cơng nghệ, 149(04), tr:43-50 Phan Xuân Huyên, Nguyễn Văn Kết, Phan Hoàng Đại, Nguyễn Thị Cúc (2016), Nghiên cứu nhân giống In vitro nuôi trồng Lan Gấm (Anoectochilus lylei Rolfe ex Downies) điều kiện ex vitro, Tạp chí Khoa học Đại học Đà Lạt, Tập 6, Số 4, 2016: 481-492 Nguyễn Hùng Mạnh, Nguyễn Văn Sinh, Đỗ Hữu Thư, Trịnh Minh Quang, Đặng Thị Thu Hương, Bùi Thị Tuyết Xuân, Nguyễn Tiến Dũng, Trần Văn Tú, Lê Văn Nhân (2015), Nghiên cứu đặc điểm sinh thái loài Lan Kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume) vườn quốc gia Tam Đảo vùng phụ cận tỉnh Vĩnh Phúc Hội nghị Khoa học toàn quốc Sinh thái Tài nguyên Sinh vật lần thứ 7, tr:1736-1741 Duong Tan Nhut, Nguyen Phuc Huy, Vu Quoc Luan, Nguyen Van Binh, Nguyen Ba Nam, Le Nu Minh Thuy, Dang Thi Ngoc Ha, Hoang Xuan Chien, Trinh Thi Huong, Hoang Van Cuong, Le Kim Cuong, Vu Thi Hien (2011), Shoot regeneration and micropropagation of Panax vietnamensis Ha et Grushv from ex vitro leaf-derived callus, African Journal of Biotechnology, 10(84): 19499-19504 55 10 Phùng Văn Phê, Nguyễn Trung Thành, Vương Duy Hưng (2010), “Đặc điểm hình thái, phân bố lồi Lan Kim tuyến Anoectochilus setaceus Blume Vườn Quốc gia Tam Đảo, tỉnh Vĩnh Phúc”, Tạp chí Khoa học ĐHQGHN, Khoa học Tự nhiên Công nghệ 26 (2010), tr: 104-109 11 Phùng Văn Phê, Nguyễn Thị Hồng Gấm, Nguyễn Trung Thành (2010), “Nghiên cứu kỹ thuật nhân nhanh chồi invitro lồi Lan Kim tuyến Anoectochilus roxburghii (Wall.) Lindl”, Tạp chí Khoa học ĐHQGHN, Khoa học Tự nhiên Công nghệ, 26(2010), tr: 248-253 12 Nguyễn Nam Phương (2019), Nghiên cứu thành phần hóa học Lan Kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume) thu hái Thanh Hóa, Luận văn tốt nghiệp Đại học ngành Dược học, Đại học Quốc Gia Hà Nội, 2019 13 Trương Thị Bích Phượng, Phan Ngọc Khoa (2013), Nhân giống in vitroLan Kim tuyến Anoectochilus setaceus Blume (Wall.) Lindl, Hue University Journal of Science: Agriculture and Rural Development Vol 79, No (2013) 14 Nguyễn Trọng Quyền, Nguyễn Thị Thơ, Khuất Thị Hải Ninh, Bùi Văn Thắng, Hoàng Văn Sâm (2020), Nghiên cứu nhân giống in vitro lồi Lan Kim tuyến (Anoectochilus formosanus Hayata), Tạp chí khoa học nông nghiệp 15 Quyết định 3657/QĐ-BYT “Về việc ban hành danh mục 100 dược liệu có giá trị y tế kinh tế cao để tập trung phát triển giai đoạn 2020-2030” ngày 20 tháng năm 2019 16 Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Lý Anh, Phạm Kim Ngọc, Trần Văn Minh, Nguyễn Thị Phương Thảo (2009), Cơ sở công nghệ sinh học – tập ba công nghệ sinh học tế bào, NXB Giáo dục Việt Nam 17 Nguyễn Quang Thạch Phí Thị Cẩm Miện (2012), Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống loài Lan Kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume) in vitro bảo tồn nguồn dược liệu quý, Tạp chí Khoa học Phát triển, 10(4), tr: 597-603 18 Trần Thị Hồng Thúy, Đỗ Thị Gấm, Nguyễn Khắc Hưng, Phạm Bích Ngọc, Chu Hồng Hà (2015), Nghiên cứu nhân nhanh in vitro loài Lan Kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume) thông qua cảm ứng tạo protocorm like 19 Vũ Văn Vụ, Nguyễn Mộng Hùng, Lê Hồng Điệp (2009), Công nghệ sinh học tập 2-Công nghệ sinh học tế bào, Nxb Giáo dục 56 II Tài liệu Tiếng Anh 20 Acharya K.P., R.P Chaudhary and O.R Vetaas (2009), Medicinal plants of Nepal: Distribution pattern along an elevational gradient and effectiveness of existing protected areas for their conservation Banko Jankari 19(1): 16-22 21 Behera K.K., Pani D and Shahoo S (2010), Effect of plant growth regulator on in vitro multiplucation of turmeric (Curcumar longa L.cv.Ranga), Intenational Journal of Biological Technology, 1(1): 16-23 22 Cheng S.F.& Chang D.C.N (2009), Growth responses and changes of active components as influenced by elevations and orchid mycorrhizae on Anoectochilus formosanus Hayata Botanical Studies 50, 459-466 23 Doris C N Chang, L C Chou, G.C Lee (2007), “New Cultivation Methods for Anoectochilus formosanus Hayata”, Orchid Science and Biotechnology, 1(2), 56-60 24 Jala A and Patchpoonporn W (2012), Effect of BA, NAA and 2,4-D on micropropagation of Jiaogulan (Gynostemma pentaphyllun makino), International Transaction Journal of Enginneering, Management, Applied Sciences & Technologies, 3(4): 363-370 25 Le Dinh Chac, Bui Bao Thinh, Ha Thi Thanh Huong, Ngo Tuan Kiet, Le Quang Huan (2019), Quantification of quercetin, isorhamnetin and ferulic acid in dry extract of Anoectochilus setaceus Blume from Vietnam International Journal of Botany Studies, Volume 4; Issue 5; September 2019; Page No 14-18 26 Nayak S., Parida R and Mohanty S (2011), Evaluation of genetic fidelity of in vitro production of leaf biomas in Kaempferia galangathrough tissue culture, Electronic Journal of Biotechnology, ISSN: 0717-3458 27 Sen A., Goyal A.K., Ganguly K and Mishra T (2010), In vitro multiplication of Curcuma longa Linn – an important medicinal zingiber, Journal of Plant Science, 4: 21-24 28 Shahinozzaman M., Ferdous M.M., Faruq M.O., Azad M.A.K and Amin M.N (2013), Micropropagation of black turmeric (Curcuma caesia Roxb.) through in vitro culture of rhizome bud explants Journal of Central Eurooean Agriculture, 2013, 14(3), p 963-968 29 Sherif N A, Benjamin J H F, Muthukrishnan S., Kumar T.S and Rao M.V (2012), Regeneration of plantlets from nodal and shoot tip explants of Anoectochilus elatus Lindley, an endangered terrestrial orchid, African Journal of Biotechnology,11(29), 7549-7553 KẾT QUẢ XỬ LÝ SỐ LIỆU Phụ lục 1: Kết xử lý Bảng 3.2: Ảnh hưởng nồng độ GA3 đến khả nhân nhanh chồi từ mẫu Lan Kim tuyến BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE 13/ 2/22 13:22 :PAGE VARIATE V003 HSNC LN ER LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ============================================================================= CT 34.4848 8.62120 122.53 0.000 NL * RESIDUAL 176920 562883 884600E-01 703604E-01 1.26 0.336 * TOTAL (CORRECTED) 14 35.2246 2.51604 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCCTB FILE 13/ 2/22 13:22 :PAGE VARIATE V004 CCCTB LN ER SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT NL 63.0274 290680 15.7568 145340 192.00 0.000 1.77 0.230 3 * RESIDUAL 656520 820650E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 63.9746 4.56961 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 13/ 2/22 13:22 :PAGE MEANS FOR EFFECT CT - CT NOS HSNC 1.75667 CCCTB 1.33333 3 5.17667 5.95667 5.66333 7.30333 3 3.58000 2.93000 4.53000 3.15000 0.153145 0.165393 SE(N= 3) 5%LSD 8DF 0.499391 0.539331 MEANS FOR EFFECT NL - NL NOS HSNC 3.74800 CCCTB 4.59000 5 3.87800 4.01400 4.27000 4.32800 SE(N= 5%LSD 5) 8DF 0.118626 0.386827 0.128113 0.417764 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 13/ 2/22 13:22 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN (N= NO 15) OBS HSNC CCCTB 15 15 3.8800 4.3960 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS 1.5862 2.1377 0.26526 0.28647 | 6.8 0.0000 6.5 0.0000 |NL | | | | | | | 0.3360 0.2304 Phụ lục 2: Kết xử lý Bảng 3.3 Ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả nhân nhanh chồi từ mẫu Lan Kim tuyến BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE 13/ 2/22 13:39 :PAGE VARIATE V003 HSNC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT 63.1859 15.7965 137.29 0.000 NL * RESIDUAL 241373 920499 120687 115062 1.05 0.396 * TOTAL (CORRECTED) 14 64.3478 4.59627 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCCTB FILE 13/ 2/22 13:39 :PAGE VARIATE V004 CCCTB LN ER SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT NL 29.7450 7.43624 514.85 0.000 846533E-01 423267E-01 2.93 0.110 * RESIDUAL 115548 3 144435E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 29.9452 2.13894 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 13/ 2/22 13:39 :PAGE MEANS FOR EFFECT CT - CT NOS HSNC 1.20000 CCCTB 2.10000 3 3.86667 5.71333 3.72667 5.08333 7.35667 6.33000 SE(N= 5%LSD 3) 8DF 4.95667 4.43333 0.195842 0.638621 0.693866E-01 0.226263 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS HSNC CCCTB 5 4.72200 4.44000 4.33600 4.42600 4.69400 4.24200 SE(N= 5) 0.151699 0.537466E-01 5%LSD 8DF 0.494674 0.175262 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 13/ 2/22 13:39 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN (N= 15) NO OBS HSNC CCCTB 15 15 4.6187 4.3347 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON TOTAL SS BASED ON RESID SS 2.1439 1.4625 0.33921 0.12018 % | | 7.3 0.0000 2.8 0.0000 |NL | | | | | | | 0.3957 0.1102 Phụ lục 3: Xử lý số liệu Bảng 3.4 Ảnh hưởng tổ hợp GA3 BAP đến khả nhân nhanh chồi mẫu Lan Kim tuyến BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE 13/ 2/22 16:22 :PAGE VARIATE V004 HSNC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= NL 165620 828100E-01 0.74 0.495 GA3$ 536003 536003 4.78 0.040 BAP$ GA3$*BAP$ 10.0608 15.9112 2.51519 3.97780 22.44 0.000 35.49 0.000 5 * RESIDUAL 18 2.01751 112084 * TOTAL (CORRECTED) 29 28.6911 989347 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCCTB FILE 13/ 2/22 16:22 :PAGE VARIATE V005 CCCTB LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= NL GA3$ 156467E-01 782335E-02 853335E-01 853335E-01 BAP$ GA3$*BAP$ 87.3198 18.4248 21.8299 4.60619 0.06 0.943 0.63 0.442 5 162.21 0.000 34.23 0.000 5 * RESIDUAL 18 2.42237 134576 * TOTAL (CORRECTED) 29 108.268 3.73337 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 13/ 2/22 16:22 :PAGE MEANS FOR EFFECT NL - NL NOS 10 HSNC 6.10000 CCCTB 5.89700 10 10 6.02600 6.20700 5.90800 5.85500 0.105870 0.116007 SE(N= 10) 5%LSD 18DF 0.314554 0.344674 MEANS FOR EFFECT GA3$ - 0.2 GA3$ NOS 15 HSNC 6.24467 CCCTB 5.83333 0.3 15 5.97733 5.94000 SE(N= 5%LSD 15) 18DF 0.864422E-01 0.947193E-01 0.256833 0.281425 MEANS FOR EFFECT BAP$ BAP$ NOS HSNC 5.56667 CCCTB 6.48333 0.5 6 6.18833 6.61000 5.85167 7.18333 1.5 6 6.84500 5.34500 7.28000 2.63500 0.136677 0.149764 SE(N= 6) 5%LSD 18DF 0.406088 0.444972 MEANS FOR EFFECT GA3$*BAP$ GA3$ BAP$ NOS HSNC 5.17667 CCCTB 5.66333 0.5 3 5.42333 7.09000 4.87667 7.57667 0.2 0.2 1.5 3 8.17667 5.35667 8.42333 2.62667 0.3 5.95667 7.30333 0.2 0.2 0.2 0.3 0.3 0.5 3 6.95333 6.13000 6.82667 6.79000 0.3 0.3 1.5 3 5.51333 5.33333 6.13667 2.64333 0.193291 0.211799 SE(N= 3) 5%LSD 18DF 0.574295 0.629285 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 13/ 2/22 16:22 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE |GA3$*BAP| GRAND MEAN STANDARD (N= SD/MEAN | 30) DEVIATION C OF V |NL |GA3$ |BAP$ | | |$ | | | | | | | | | NO BASED ON BASED ON OBS TOTAL SS RESID SS % | | HSNC 30 6.1110 0.99466 0.33479 5.5 0.4954 0.0403 0.0000 0.0000 CCCTB 30 5.8867 1.9322 0.36685 6.2 0.9434 0.4415 0.0000 0.0000 Phụ lục 4: Xử lý số liệu Bảng 3.5 Ảnh hưởng nồng độ IAA đến khả rễ Lan Kim tuyến in vitro BALANCED ANOVA FOR VARIATE SRTB FILE 3/ 4/22 11:31 :PAGE VARIATE V004 SRTB LN ER SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT NL 6.67033 1.66758 196933E-01 984666E-02 74.48 0.000 0.44 0.663 3 * RESIDUAL 179107 223884E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 6.86913 490652 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CDR FILE 3/ 4/22 11:31 :PAGE VARIATE V005 CDR LN ER SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT NL 613507 153377 697332E-02 348666E-02 58.17 0.000 1.32 0.320 3 * RESIDUAL 210934E-01 263668E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 641573 458267E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 3/ 4/22 11:31 :PAGE MEANS FOR EFFECT CT SRTB CDR CT 3 1.63333 2.66333 2.08333 2.32000 3 3.44000 3.08667 2.65333 2.47667 2.01000 2.19333 SE(N= 5%LSD NOS 3) 8DF 0.863875E-01 0.296461E-01 0.281701 0.966730E-01 MEANS FOR EFFECT NL - NL NOS SRTB 2.61600 CDR 2.37400 5 2.53000 2.55400 2.34000 2.32200 SE(N= 5) 0.669154E-01 0.229638E-01 5%LSD 8DF 0.218204 0.748825E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 3/ 4/22 11:31 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN (N= 15) NO OBS STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON TOTAL SS BASED ON RESID SS % | | |NL | | | | | | | SRTB 15 2.5667 0.70047 0.14963 5.8 0.0000 0.6626 CDR 15 2.3453 0.21407 0.51349E-01 2.2 0.0000 0.3196 Phụ lục 5: Xử lý số liệu Bảng 3.6 Ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả rễ Lan Kim tuyến in vitro BALANCED ANOVA FOR VARIATE SRTB FILE 3/ 4/22 11:43 :PAGE VARIATE V004 SRTB LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT 5.69751 1.42438 82.68 0.000 NL * RESIDUAL 164320 137813 821600E-01 172266E-01 4.77 0.043 * TOTAL (CORRECTED) 14 5.99964 428546 - BALANCED ANOVA FOR VARIATE CDR FILE 3/ 4/22 11:43 :PAGE VARIATE V005 CDR LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT 1.09107 272767 75.63 0.000 NL * RESIDUAL 130800E-01 654000E-02 288533E-01 360667E-02 1.81 0.224 * TOTAL (CORRECTED) 14 1.13300 809286E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 3/ 4/22 11:43 :PAGE MEANS FOR EFFECT CT SRTB CDR CT 3 1.63333 3.40333 2.08333 2.83000 3 2.65333 2.23667 2.66667 2.55000 1.93333 2.27000 SE(N= 5%LSD NOS 3) 8DF 0.757774E-01 0.346731E-01 0.247102 0.113065 MEANS FOR EFFECT NL SRTB CDR NL 5 2.30000 2.29600 2.51800 2.44600 2.52000 2.47600 SE(N= NOS 5) 0.586969E-01 0.268577E-01 5%LSD 8DF 0.191405 0.875801E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 3/ 4/22 11:43 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN (N= 15) NO OBS SRTB CDR 15 15 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON TOTAL SS 2.3720 2.4800 0.65463 0.28448 BASED ON RESID SS % 0.13125 0.60056E-01 | | 5.5 0.0000 2.4 0.0000 |NL | | | | | | | 0.0431 0.2237 Phụ lục 6: Xử lý số liệu Bảng 3.7 Ảnh hưởng nồng độ IBA đến khả rễ Lan Kim tuyến in vitro BALANCED ANOVA FOR VARIATE SRTB FILE 3/ 4/22 11:56 :PAGE VARIATE V004 SRTB LN ER SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT NL 11.2726 2.81816 180.34 0.000 625333E-02 312667E-02 0.20 0.824 3 * RESIDUAL 125015 156269E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 11.4039 814564 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CDR FILE 3/ 4/22 11:56 :PAGE VARIATE V005 CDR LN ER SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT NL 2.31163 577907 303.89 0.000 264533E-01 132267E-01 6.96 0.018 3 * RESIDUAL 152136E-01 190170E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 2.35329 168092 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 3/ 4/22 11:56 :PAGE MEANS FOR EFFECT CT SRTB CDR CT 3 1.63333 2.15000 2.08333 2.21667 3 2.72333 4.15333 2.92333 3.10333 3.17667 2.57000 SE(N= NOS 3) 0.721731E-01 0.251774E-01 5%LSD 8DF 0.235349 0.821008E-01 MEANS FOR EFFECT NL - NL NOS SRTB 2.75600 CDR 2.63800 5 2.75000 2.79600 2.55800 2.54200 SE(N= 5) 0.559050E-01 0.195023E-01 5%LSD 8DF 0.182301 0.635950E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 3/ 4/22 11:56 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN (N= NO SRTB CDR 15) STANDARD OBS 15 2.7673 15 DEVIATION C OF V |CT |NL | | | | | | 4.5 0.0000 | 0.8235 | 1.7 0.0000 0.0179 SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | 2.5793 TOTAL SS 0.90253 RESID SS 0.12501 0.40999 0.43608E-01 Phụ lục 7: Xử lý kết Bảng 3.8 Ảnh hưởng giá thể đến khả sinh trưởng phát triển mẫu Lan Kim tuyến giai đoạn sau nuôi cấy mô vườn ươm BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLS FILE 3/ 4/22 10:56 :PAGE VARIATE V003 TLS LN ER SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT NL 10410.9 17.7689 2602.73 8.88445 159.63 0.000 0.54 0.604 3 * RESIDUAL 130.438 16.3047 * TOTAL (CORRECTED) 14 10559.1 754.223 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCCTB FILE 3/ 4/22 10:56 :PAGE VARIATE V004 CCCTB LN ER SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT NL 85.8709 1.11689 21.4677 558447 165.12 0.000 4.30 0.054 3 * RESIDUAL 1.04010 130013 * TOTAL (CORRECTED) 14 88.0279 6.28771 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 3/ 4/22 10:56 :PAGE MEANS FOR EFFECT CT CT NOS TLS CCCTB 3 44.4467 71.1100 7.84333 10.0200 3 97.7767 13.2100 3 SE(N= 3) 24.4467 82.2233 6.77667 11.8167 2.33129 0.208177 5%LSD 8DF 7.60210 0.678844 MEANS FOR EFFECT NL - NL NOS TLS 64.0000 CCCTB 9.96600 65.3340 9.58400 62.6680 10.2500 1.80581 5.88856 0.161253 0.525831 SE(N= 5%LSD 5) 8DF ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 3/ 4/22 10:56 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN (N= NO TLS CCCTB 15) OBS 15 64.001 15 9.9333 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | |NL | | | | | | TOTAL SS 27.463 RESID SS 4.0379 | 6.3 0.0000 | 0.6038 2.5075 0.36057 3.6 0.0000 0.0537