Trang 1 CHẨN ĐOÁN BỆNH DỊCH TẢ LỢN CỔ ĐIỂN BẰNG PHƯƠNG PHÁP ELISATRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP.. HỒ CHÍ MINHKHOA KHOA HỌC SINH HỌCGVHD: TS.. Huỳnh Văn Biết Trương Quang ToảnNhóm: 1Môn học :
TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH KHOA KHOA HỌC SINH HỌC CHẨN ĐOÁN BỆNH DỊCH TẢ LỢN CỔ ĐIỂN BẰNG PHƯƠNG PHÁP ELISA GVHD: TS Huỳnh Văn Biết Trương Quang Toản Nhóm: 1 Môn học : Thiết bị và KT CNSH Thứ sáu, ngày 27 tháng 10 năm 2023 1 Thành viên nhóm 21126245 Nguyễn Phan Bảo Vy Nguyễn 21126230 Nguyễn Thị Ngọc Tuyền 21126441 Lương Thảo Nhi 2 NỘI DUNG 01 Giới thiệu 02 Tổng quan và nguyên lý về kỹ thuật Elisa 03 Phương pháp 04 Kết quả dự nghiên cứu kiến 3 01 Giới thiệu 4 Dịch tả lợn cổ điển • Pestivirus là một chi Hình 1: Bệnh dịch tả lợn Hình 2: Virus virus, thuộc họ cổ điển CSF Flaviviridea 5 • CSF (Classical swine fever) – dịch tả lợn cổ điển gây ra bởi 1 loại virus RNA sợi đơn thuộc chi Pestivirus, được bao bọc mã hóa cho một polyprotein duy nhất Nguyên nhân: ▪ Nguồn lây chính của bệnh thông qua đường tiêu hóa hay đường hô hấp ▪ Chuồng trại không vệ sinh ▪ Lây truyền cơ học phổ biến qua ủng, quần áo,… Triệu chứng: • Biểu hiện đầu tiên sau 3-15 ngày, phổ biến là gây sốt, bệnh tích trên da, co giật, xuất huyết và có thể diễn biến thứ cấp hoặc mãn tính Lợn con nếu mắc bệnh sẽ gây tử vong 6 Triệu chứng Hình 3: Lợn buồn nôn, Hình 4: Lợn lười vận động tiêu chảy Hình 5: Lợn xuất huyết Hình 6: Lợn da trắng chuyển sang màu 7 Tổng quan và nguyên lí về kỹ thuật 02 Elisa 8 Tổng quan về kỹ thuật Elisa ❑ Dựa trên sự kết hợp đặc hiệu giữa kháng thể- kháng nguyên, phát hiện bằng kháng thể đánh dấu khi cho thêm cơ chất, enzyme sẽ thủy phân cơ chất thành một chất có màu ❑ Phương pháp cho phát hiện và định lượng vật chất Hình 7: Elisa 9 Nguyên lí hoạt động của bộ kit test ⮚ Bộ kit test này hoạt động dựa trên nguyên lý elisa sandwich ⮚ Elisa sandwich định lượng kháng nguyên giữa hai lớp kháng thể Hình 8: Elisa sanwich trực tiếp 10 Phương pháp 03 nghiên cứu 11 Nguyên vật liệu Mẫu : huyết thanh nghi ngờ chứa kháng nguyên Anti-CSFV E2 ab coated plate 10X sample treatment buffer 10X washing buffer Dilution buffer 20X whole blood treatment buffer HRPO anti-CSFV conjugate Strong positive control Weak positive control Negative control TMB subtrate Stop solution 12 Quy trình thực hiện 50 µl dilution 100 µl HRPO 50µl stop buffer để pha anti-CSFV solution loãng mẫu conjugate Ủ 60 phút, 370C Rửa 3-5 lần 1 2 3 4 5 6 7 Đáy giếng gắn 50 µl mẫu, đối 100 µl TMB Đọc kết kháng thể chứng âm, đối substrate quả kháng kháng chứng dương Ủ tối, 10 phút OD 450 nguyên CSFV (tỉ lệ pha loãng nm E2 1 :2) 13 04Kết quả dự kiến 14 Đọc kết quả Sau khi có kết quả sử dụng máy đo OD đọc kết quả ở 450nm Sử dụng công thức trên để Hình 9: Kết quả tính và kết luận: % SP ≥ 20% => dương tính % SP 15~20% => nghi ngờ % SP ≤ 15% => âm tính 15 Tài liệu tham khảo 1 Bệnh Dịch TẢ lợn cổ điển (CSF) Available at:https://thuoctrangtrai.com/benh-dich- ta-lon-co-dien-csf-nd83603.html (Accessed: 25 October 2023) 2.file:///C:/Users/nguye/Documents/Zalo%20Received%20Files/A%CC%89nh%20ma % CC%80n%20hi%CC%80nh%202023-03-23%20lu%CC%81c %2016.44.41%20(1).pdf 3.Tổng Quan VỀ Bệnh dịch TẢ lợn cổ điển (CSF - classical swine fever) HappyVet Available at: https://happyvet.vn/tin-tuc/benh-dich-ta-lon-co-dien-csf.html (Accessed: 25 October 2023) 4 MEDLATEC, B viện đa khoa (2020) Đối tượng và Cách thức thực hiện xét nghiệm Elisa, Bệnh viện đa khoa MEDLATEC Available at: https://medlatec.vn/tin- tuc/doi-tuong-va-cach-thuc-thuc-hien-xet-nghiem-elisa-s58-n16722 (Accessed: 25 October 2023) 5 Những điều cơ bản về kỹ Thuật Elisa (no date) Những điều cơ bản về kỹ thuật ELISA Available at: https://biomedia.vn/review/nhung-dieu-co-ban-ve-ky-thuat- elisa.html (Accessed: 25 October 2023) 16 CẢM ƠN ĐÃ LẮNG NGHE 17