Nghiên cứu ảnh hƣởng nồng độ các chất điều hòa sinh trƣởng đến sự tái sinh chồi in vitro từ đoạn thân mang mắt ngủ của Dạ yến thảo .... 1.3 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU Thí nghiệm đƣợc nghiên cứ
ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƢỜNG ĐẠI HỌC AN GIANG KHOA NÔNG NGHIỆP - TÀI NGUYÊN THIÊN NHIÊN CHUYÊN ĐỀ TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC TÁI SINH CHỒI IN VITRO TỪ ĐOẠN THÂN MANG MẮT NGỦ CỦA HOA DẠ YẾN THẢO (Petunia hybrid) PHẠM KIM LUÔNG AN GIANG, THÁNG 05 NĂM 2023 ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƢỜNG ĐẠI HỌC AN GIANG KHOA NÔNG NGHIỆP - TÀI NGUYÊN THIÊN NHIÊN CHUYÊN ĐỀ TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC TÁI SINH CHỒI IN VITRO TỪ ĐOẠN THÂN MANG MẮT NGỦ CỦA HOA DẠ YẾN THẢO (Petunia hybrid) PHẠM KIM LUÔNG DSH192931 LỚP: DH20SH GIẢNG VIÊN HƢỚNG DẪN DIỆP NHỰT THANH HẰNG AN GIANG, THÁNG 05 NĂM 2023 ii CHẤP NHẬN CỦA HỘI ĐỒNG Chuyên đề “Tái sinh chồi in vitro từ đoạn thân mang mắt ngủ hoa Dạ yến thảo Petunia hybrid” sinh viên Phạm Kim Luông thực dƣới hƣớng dẫn giảng viên Diệp Nhựt Thanh Hằng Phản biện Phản biện Nguyễn Thị Mỹ Duyên Trƣơng Ánh Phƣơng Cán hƣớng dẫn Diệp Nhựt Thanh Hằng MỤC LỤC MỤC LỤC iv DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH vii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT viii CHƢƠNG GIỚI THIỆU 1.1 TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI 1.2 MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU 1.3 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU 1.4 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 1.5 NHỮNG ĐÓNG GÓP CỦA NGHIÊN CỨU CHƢƠNG TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 2.1 GIỚI THIỆU VỀ DẠ YẾN THẢO 2.2 LƢỢC KHẢO VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 2.2.1 Giới thiệu Dạ yến thảo 2.2.1.1 Phân loại khoa học 2.2.1.2 Đặc điểm hình thái 2.2.1.3 Đặc điểm phân bố 2.2.2 Kỹ thuật vi nhân giống 2.2.2.1 Những ƣu điểm nhƣợc điểm kỹ thuật vi nhân giống (in vitro) 2.2.2.2 Cơ sở nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.2.2.3 Quy trình vi nhân giống 2.2.2.4 Thành phần môi trƣờng nuôi cấy 2.2.2.5 Điều kiện nuôi cấy 13 2.2.3 Những nghiên cứu liên quan Dạ yến thảo 15 2.2.3.1 Ngoài nƣớc 15 2.2.3.2 Trong nƣớc 17 CHƢƠNG 18 iv PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 3.1 MẪU NGHIÊN CỨU 18 3.2 THIẾT KẾ NGHIÊN CỨU 18 3.2.1 Địa điểm thời gian nghiên cứu 18 3.2.2 Môi trƣờng nuôi cấy 18 3.2.3 Điều kiện nuôi cấy 18 3.3 CÔNG CỤ NGHIÊN CỨU 18 3.3.1 Trang thiết bị 18 3.3.2 Hóa chất 19 3.4 TIẾN TRÌNH NGHIÊN CỨU 19 3.4.1 Thí nghiệm 1: Ảnh hƣởng nồng độ javel thời gian khử trùng đến tạo nguồn vật liệu khởi đầu 19 3.4.2 Thí nghiệm 2: Tái sinh chồi in vitro từ đoạn thân mang mắt ngủ Dạ yến thảo 21 3.5 PHÂN TÍCH DỮ LIỆU 22 CHƢƠNG 24 KẾT QUẢ DỰ KIẾN 24 4.1 THÍ NGHIỆM 1: ẢNH HƢỞNG CỦA NỒNG ĐỘ JAVEL VÀ THỜI GIAN KHỬ TRÙNG ĐẾN SỰ TẠO NGUỒN VẬT LIỆU KHỞI ĐẦU 24 4.2 THÍ NGHIỆM 2: TÁI SINH CHỒI IN VITRO TỪ ĐOẠN THÂN MANG MẮT NGỦ CỦA DẠ YẾN THẢO 31 TÀI LIỆU KHAM KHẢO 41 PHỤ LỤC 43 DANH MỤC BẢNG Bảng Thành phần môi trƣờng nuôi cấy Bảng Các nguyên tố khoáng Bảng Bố trí thí nghiệm khử mẫu 20 Bảng Nghiên cứu ảnh hƣởng nồng độ chất điều hòa sinh trƣởng đến tái sinh chồi in vitro từ đoạn thân mang mắt ngủ Dạ yến thảo 22 Bảng Tỷ lệ mẫu nhiễm đoạn thân Dạ yến thảo sau 14 ngày SKC (%) 24 Bảng Tỷ lệ mẫu chết đoạn thân Dạ yến thảo sau 14 ngày SKC (%) 27 Bảng Tỷ lệ mẫu in vitro đoạn thân Dạ yến thảo 14 ngày SKC (%) 29 Bảng Số chồi đoạn thân Dạ yến thảo sau tuần SKC (chồi) 32 Bảng Chiều cao chồi đoạn thân Dạ yến thảo tuần SKC (cm) 34 Bảng 10 Đƣờng kính cụm chồi đoạn thân Dạ yến thảo sau tuần SKC (cm) 36 Bảng 11 Số đoạn thân Dạ yến thảo sau tuần SKC (lá) 38 vi DANH MỤC HÌNH Hình Hoa Dạ yến thảo Hình Tủ cấy đƣợc chuẩn bị chiếu tia UV 20 Hình Đoạn thân Dạ yến thảo bị nhiễm khuẩn nhiễm nấm sau 14 ngày cấy 26 Hình Đoạn thân Dạ yến thảo sau ngày sau cấy 28 Hình Đoạn thân Dạ yến thảo sau 14 ngày sau cấy 28 Hình Mơ sẹo hình thành dƣới đáy chồi tuần SKC 33 Hình Sự phát triển chiều cao chồi nghiệm thức P0 P4 sau tuần sau cấy 34 Hình Sự phát triển mẫu cấy Dạ yến thảo sau tuần SKC 39 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT NAA Alpha-naphthaleneacetic acid BA Benzylamino purine TDZ Thidiazuron MS Murashige Skong Mg/L Milligram/lit SKC Sau cấy viii CHƢƠNG GIỚI THIỆU 1.1 TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI Dạ yến thảo (Petunia hybrida L.) cịn có tên gọi khác Yến thảo hoa hay Dã yên thảo, loài thực vật có hoa thuộc họ Cà (Solanaceae), có nguồn gốc từ nƣớc miền Nam châu Mỹ Đây loại chịu nhiệt, hoa có màu sắc đa dạng nhƣ trắng, hồng, đỏ, tím… dáng phong phú Dạ yến thảo thƣờng đƣợc trồng chậu trang trí, chậu hoa treo nhà, vƣờn, làm viền cho khu vƣờn tơ điểm cho góc vƣờn hay nhà thêm thêm rực rỡ, chăm sóc tốt hoa quanh năm (Phạm Hồng Hộ, 2000) Hiện nay, Dạ yến thảo đƣợc trồng chủ yếu từ hạt, nhiên giá bán hạt giống Dạ yến thảo cao, từ 1.000 - 3.000 đ/hạt tùy loại hoa đơn, kép hay khảm Mặt khác, Dạ yến thảo có hạt nhỏ, tỷ lệ nảy mầm hạt tƣơng đối thấp khoảng 60%, có tỷ lệ chết cao, mà giá bán giống Dạ yến thảo hiên cao Ngoài ra, Dạ yến thảo cịn nhân giống phƣơng pháp giâm cành, nhiên phƣơng pháp nhân giống có hệ số nhân thấp, giâm cành có sức sống yếu gieo hạt nhanh tàn Phƣơng pháp nhân giống nuôi cấy mô tế bào thực vật đƣợc áp dụng phổ biến nhiều đối tƣợng trồng Một số ƣu điểm bật nhân giống phƣơng pháp nuôi cấy mô hệ số nhân cao, thời gian ngắn tạo số lƣợng lớn giống tƣơng đối đồng nhất, giống bệnh, giá thành thấp Do đề tài “Tái sinh chồi in vitro từ đoạn thân mang mắt ngủ hoa Dạ yến thảo Petunia hybrid” đƣợc tiến hành nhằm phân tích thay đổi hình thái q trình phát sinh chồi in vitro từ đoạn thân mang mắt ngủ Dạ yến thảo, góp phần hồn thiện q trình vi nhân giống Dạ yến thảo 1.2 MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU Tìm thời gian nồng độ chất khử trùng thích hợp cho việc tạo nguồn vật liệu khởi đầu Tìm đƣợc nồng độ chất điều hịa sinh trƣởng thích hợp cho việc tái sinh chồi in vitro từ đoạn thân mang mắt ngủ Dạ yến thảo 1.3 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU Thí nghiệm đƣợc nghiên cứu từ đoạn thân mang mắt ngủ Dạ yến thảo Petunia hybrid khỏe mạnh, không sâu bệnh đƣợc mua từ nhà vƣờn Sa Đéc 1.4 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU Khảo sát thời gian nồng độ chất khử trùng đến tạo nguồn vật liệu khởi đầu Khảo sát chất điều hòa sinh trƣởng đến khả tái sinh chồi in vitro từ đoạn thân mang mắt ngủ Dạ yến thảo 1.5 NHỮNG ĐÓNG GÓP CỦA NGHIÊN CỨU Kết đề tài nghiên cứu cung cấp thông tin cần thiết nhằm góp phần hồn thiện giai đoạn khử trùng tái sinh chồi từ đoạn thân mang mắt ngủ Dạ yến thảo Nghiên cứu giúp chọn đƣợc nồng độ chất điều hịa sinh trƣởng có hệ số tái sinh chồi tối ƣu dành cho Dạ yến thảo