Nghiên cứu tái sinh chồi in vitro cây dưa lưới (Cucumis melo L.)

Bài viết Nghiên cứu tái sinh chồi in vitro cây dưa lưới (Cucumis melo L.) được thực hiện với mục đích tạo nguồn nguyên liệu khởi đầu in vitro khỏe mạnh, không bị sâu bệnh từ nuôi cấy các cơ quan sinh dưỡng, góp phần hoàn thiện quy trình nhân giống in vitro cây dưa lưới để tạo ra một lượng lớn cây giống phục vụ nhu cầu sản xuất ở quy mô công nghiệp.

HUAF JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCE & TECHNOLOGY ISSN 2588-1256 Vol 6(2)-2022:2994-3004 NGHIÊN CỨU TÁI SINH CHỒI IN VITRO CÂY DƯA LƯỚI (Cucumis melo L.) Trần Thị Triêu Hà*, Lã Thị Thu Hằng, Dương Thanh Thủy Trường Đại học Nông Lâm, Đại học Huế *Tác giả liên hệ: tranthitrieuha@huaf.edu.vn Nhận bài: 15/10/2021 Hoàn thành phản biện: 28/11/2021 Chấp nhận bài: 30/11/2021 TÓM TẮT Nghiên cứu thực để xây dựng quy trình tái sinh chồi dưa lưới in vitro từ loại mô dưa lưới nảy mầm Kết nghiên cứu cho thấy, thời gian thích hợp để khử trùng hạt dưa lưới dung dịch H2O2 15% phút với tỷ lệ mẫu 80%, tỷ lệ hạt sống nảy mầm 100% Mô lá, cuống đốt thân in vitro nảy mầm từ hạt có khả cảm ứng phát sinh hình thái cao mầm, trụ mầm chồi đỉnh Môi trường thích hợp để tạo mơ sẹo từ phiến cuống mơi trường có bổ sung 0,3 mg/L NAA (naphthaleneacetic acid) 0,3 mg/L IBA (indole-3 butyric acid) với tỷ lệ tạo mô sẹo đạt từ 80% - 100% Mơi trường có bổ sung 0,5 mg/L BAP (6-benzylaminopurine) 0,1 mg/L NAA môi trường thích hợp cho q trình cảm ứng tạo chồi từ mô sẹo, tỷ lệ tạo chồi 100% với số chồi/mẫu 4,3 chồi Môi trường nuôi cấy bổ sung 0,6 mg/L BAP 0,3 mg/L kinetin mơi trường thích hợp để tái sinh chồi trực tiếp từ đốt thân, tỷ lệ tạo chồi 100%, số chồi tạo thành 2,2 chồi/mẫu 1,93 chồi/mẫu Từ khóa: Dưa lưới, Mơ sẹo, Tái sinh chồi STUDY ON IN VITRO SHOOTS REGENERATION OF Cucumis melo L Tran Thi Trieu Ha*, La Thi Thu Hang, Duong Thanh Thuy University of Agriculture and Forestry, Hue University ABTRACT This study was undertaken to establish the in vitro shoot regeneration protocol of the Cucumis melo L The seeds of melon were sterilized with 15% H2O2 solution from to 11 minutes The results showed that sterilization for minutes gave the best with the clean sample rate of 80% and a germination rate of 100% The leaves, petioles and nodal segments from in vitro grown seedlings were more effective as explants for organogenesis than cotyledons, hypocotyls and apical shoots The mediums for callus formation from leaves and petioles were basal medium supplemented with 0.3 mg/L NAA (naphthaleneacetic acid) or 0.3 mg/L IBA (indole-3 butyric acid) with the ratio of callus formation of 80-100% The basal medium supplemented with 0.5 mg/L BAP and 0.1 mg/L NAA was suitable for shoots generation from callus The ratio of shoot formation was 100% with 4.3 shoots/callus The basal mediums supplemented with 0.6 mg/L BAP (6-benzylaminopurine) or 0.3 mg/L kinetin were the most suitable for shoot regeneration from nodal segments with 100% shoot formation, 2.2 shoots/explant and 1.93 shoots/ explant, respectively Keywords: Callus, Cucumis melo, Shoots regeneration 2994 Trần Thị Triêu Hà cs TẠP CHÍ KHOA HỌC & CƠNG NGHỆ NƠNG NGHIỆP MỞ ĐẦU Dưa lưới (Cucumis melo L.) loại rau ăn quan trọng giới Dưa lưới có thời gian sinh trưởng ngắn, trồng nhiều vụ năm với suất dao động từ 20 - 30 tấn/ha (CESTI, 2019) Hiện nay, dưa lưới ưa chuộng, có giá trị kinh tế cao có nhiều chất dinh dưỡng tốt cho sức khỏe (Keng Hoong, 2006; Lin cs., 2011) Dưa lưới trồng phổ biến nhiều nước giới Nhật Bản, Hàn Quốc, Trung quốc, Israel, Việt Nam… Mặc dù vậy, dưa lưới hầu hết trồng từ hạt giống lai F1 có giá thành cao, khơng chủ động nguồn giống Vì vậy, để đáp ứng nhu cầu nguồn giống có chất lượng, đồng đều, khơng bị sâu bệnh, giới có nhiều nghiên cứu tập trung lĩnh vực nhân giống vơ tính in vitro dưa lưới Các tác giả nghiên cứu ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng BAP (6benzylaminopurine), kinetin, NAA (naphthaleneacetic acid), acid Gibberellic, IBA (indole-3 butyric acid), IAA (indole acetic acid) đến khả tái sinh, nhân nhanh tạo hoàn chỉnh in vitro chủ yếu thông qua nuôi cấy chồi đỉnh, đoạn thân, đốt thân dưa lưới (Ahmad Jatoi, 1999; Keng Hoong, 2005; Lin cs., 2011; Parvin cs., 2013; Sebastiani Ficcadenti, 2015; Bezirganoglu, 2017; Naderi Mahmoudi, 2017; Grozeva cs., 2019) Ở Việt Nam, Nguyễn Văn Việt cs (2018) sử dụng chồi đỉnh dưa lê Kim hoàng hậu, giống dưa loài với dưa lưới để nghiên cứu ảnh hưởng BAP, kinetin, NAA loại đường nồng độ đường đến khả tạo chồi tạo hoàn chỉnh in vitro (Nguyễn Văn Việt cs., 2018) Tuy nhiên, hầu hết nghiên cứu sử dụng vật liệu nuôi cấy chồi đỉnh đốt thân Trong nhân giống vơ tính in vitro, chồi đỉnh đốt thân thường sử dụng làm mô nuôi cấy để tái sinh chồi trực tiếp cịn có https://tapchi.huaf.edu.vn DOI: 10.46826/huaf-jasat.v6n2y2022.902 ISSN 2588-1256 Tập 6(2)-2022:2994-3004 phương thức tạo chồi gián tiếp thông qua giai đoạn mô sẹo từ nuôi cấy quan sinh dưỡng khác mô lá, mô thân, mô rễ (Nguyễn Hoàng Lộc, 2011) Nghiên cứu thực với mục đích tạo nguồn nguyên liệu khởi đầu in vitro khỏe mạnh, không bị sâu bệnh từ nuôi cấy quan sinh dưỡng, góp phần hồn thiện quy trình nhân giống in vitro dưa lưới để tạo lượng lớn giống phục vụ nhu cầu sản xuất quy mô công nghiệp NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu nghiên cứu Nguồn mẫu: nguồn mẫu sử dụng thí nghiệm hạt giống dưa lưới F1 ORS8H211 nhập từ Israel công ty A-Farm (Đà Nẵng) cung cấp Hóa chất khử trùng: dung dịch H2O2 nồng độ 15% Chất điều hòa sinh trưởng: BAP, kinetin, NAA, IBA 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Phương pháp bố trí theo dõi thí nghiệm Thí nghiệm 1: Nghiên cứu hiệu phương pháp khử trùng Mẫu hạt dưa lưới rửa nước xà phịng lỗng, sau rửa vòi nước chảy Trước khử trùng hạt H2O2 15% với thời gian phút, phút, phút, phút 11 phút, hạt ngâm cồn 70% 30 giây Cuối hạt rửa nước cất vô trùng lần cấy lên mơi trường ni cấy Thí nghiệm bố trí theo kiểu ngẫu nhiên hồn tồn, lặp lại lần, lần theo dõi mẫu Thời gian theo dõi thí nghiệm 14 ngày Các tiêu theo dõi: tỷ lệ mẫu nhiễm (%), tỷ lệ mẫu sống (%), tỷ lệ mẫu chết (%) Thí nghiệm 2: Nghiên cứu ảnh hưởng NAA/IBA đến khả cảm ứng tạo mô sẹo mô nuôi cấy Cây nảy mầm từ hạt sử dụng làm vật liệu để ni cấy in vitro thí 2995 HUAF JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCE & TECHNOLOGY nghiệm cấy khởi động Các loại mô: phiến lá, cuống lá, mầm, trụ mầm cấy lên môi trường nuôi cấy có bổ sung chất kích thích sinh trưởng NAA (0,0 - 0,5 mg/L) IBA (0,0 - 0,5 mg/L) với nồng độ khác Thí nghiệm bố trí theo kiểu ngẫu nhiên hồn tồn, lặp lại lần, lần theo dõi 10 mẫu Thời gian theo dõi thí nghiệm tuần Các tiêu theo dõi: tỷ lệ mẫu tạo mô sẹo (%); đặc điểm mơ sẹo Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng BAP/kinetin đến khả tái sinh chồi từ mô sẹo Mô sẹo thu từ nuôi cấy mô cấy vào môi trường bổ sung BAP (0,0 - 0,7 mg/L) kinetin (0,0 - 0,7 mg/L) với nồng độ khác để thăm dò khả tạo chồi từ mơ sẹo Thí nghiệm bố trí theo kiểu ngẫu nhiên hồn tồn, lặp lại lần, lần theo dõi 10 mẫu Thời gian theo dõi thí nghiệm tuần Các tiêu theo dõi: tỷ lệ mô sẹo tạo chồi (%), số chồi/mẫu (chồi) Thí nghiệm 4: Ảnh hưởng BAP kết hợp với NAA đến khả tái sinh chồi từ mô sẹo Mô sẹo thu từ nuôi cấy mô cấy vào môi trường bổ sung BAP với nồng độ tốt thí nghiệm kết hợp với NAA (0,0 - 0,2 mg/L) để thăm dị khả tạo chồi từ mơ sẹo Thời gian theo dõi thí nghiệm tuần Thí nghiệm bố trí theo kiểu ngẫu nhiên hồn tồn, lặp lại lần, lần theo dõi 10 mẫu Thời gian theo dõi thí nghiệm tuần Các tiêu theo dõi: tỷ lệ mô sẹo tạo chồi (%), số chồi/mẫu (chồi) 2996 ISSN 2588-1256 Vol 6(2)-2022:2994-3004 Thí nghiệm 5: Ảnh hưởng BAP/kinetin đến khả tạo chồi trực tiếp từ chồi đỉnh đốt thân Chồi đỉnh đốt thân (đoạn thân mang mắt ngủ) có kích thước khoảng 0,5 cm nảy mầm in vitro cấy lên môi trường nuôi cấy có bổ sung BAP (0,0 - 0,9 mg/L) kinetin (0,0 - 0,9 mg/L) với nồng độ khác để thăm dò khả tạo chồi trực tiếp in vitro Thí nghiệm bố trí theo kiểu ngẫu nhiên hoàn toàn, lặp lại lần, lần theo dõi mẫu Thời gian theo dõi thí nghiệm tuần Các tiêu theo dõi: tỷ lệ mẫu tạo chồi (%), số chồi/mẫu (chồi) 2.2.2 Môi trường điều kiện nuôi cấy Môi trường nuôi cấy bản: Môi trường Murashige & Skoog (Murashige & Skoog, 1962) bổ sung 25 g/L saccharose, 6,5 g/L agar Môi trường điều chỉnh pH 5,8 - 6,0 trước hấp khử trùng nhiệt độ 120oC 20 phút Điều kiện ni cấy: Tất bình ni đặt điều kiện nhân tạo với nhiệt độ phịng ni 25 - 27oC, cường độ chiếu sáng 2.000 lux, thời gian chiếu sáng 12 h/ngày Thời gian địa điểm nghiên cứu: Tất thí nghiệm thực từ tháng 1/2021 đến tháng 8/2021 phịng thí nghiệm Nuôi cấy mô tế bào thực vật, khoa Nông học, trường Đại học Nông Lâm, Đại học Huế 2.2.3 Phương pháp xử lý số liệu Các số liệu thu xử lý phần mềm Microsoft Excel 2010 Statistis 9.0 phân tích phương sai nhân tố (One-Way ANOVA) mức α = 0,05 Trần Thị Triêu Hà cs TẠP CHÍ KHOA HỌC & CƠNG NGHỆ NÔNG NGHIỆP KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Hiệu phương pháp khử trùng Mẫu hạt rửa nước xà phịng lỗng, sau khử trùng H2O2 ISSN 2588-1256 Tập 6(2)-2022:2994-3004 15% với thời gian khác Hiệu khử trùng mẫu H2O2 15% sau 14 ngày trình bày Bảng Bảng Ảnh hưởng thời gian khử trùng mẫu Hiệu khử trùng Thời gian khử trùng Tỷ lệ mẫu nhiễm Tỷ lệ mẫu chết Tỷ lệ mẫu sống (phút) (%) (%) (%) 93,33a 0,00b 6,67c 86,67a 0,00b 13,33c b b 46,67 0,00 53,33b c b 13,33 6,67 80,00a c a 11 6,67 46,67 46,67b LSD0,05 21,01 13,29 24,86 Trong cột, chữ a, b, c khác thể sai khác có ý nghĩa thống kê công thức mức α = 0,05 Bảng cho thấy, tăng thời gian khử trùng mẫu H2O2 15% từ phút lên phút tỷ lệ mẫu sống tăng từ 6,67% lên 80,00% Tiếp tục tăng thời gian khử trùng lên 11 phút tỷ lệ nhiễm giảm đồng thời tỷ lệ mẫu chết tăng nên tỷ lệ mẫu sống giảm đáng kể cịn 46,67% Quan sát thí nghiệm nhận thấy rằng, sau 14 ngày nuôi cấy tất mẫu sống nảy mầm thành hoàn chỉnh Nguyễn Văn Việt cs (2018) sử dụng NaClO 6% để khử trùng hạt dưa lê Kim hoàng hậu thời gian phút thu tỷ lệ mẫu 96,7% tỷ lệ hạt nảy mầm 93,3% Tỷ lệ mẫu thí nghiệm tác giả cao kết nhiên tỷ lệ nảy mầm thành hoàn chỉnh hạt giống khử trùng H2O2 15% thí nghiệm chúng tơi đạt 100% Điều giải thích H2O2 có tác dụng nhẹ mơ ni cấy bị ảnh hưởng so với NaOCl (Nguyễn Hoàng Lộc, 2011) https://tapchi.huaf.edu.vn DOI: 10.46826/huaf-jasat.v6n2y2022.902 Hình Hạt dưa lưới nảy mầm in vitro Thanh bar: cm 3.2 Ảnh hưởng NAA/IBA đến khả tạo mô sẹo mô nuôi cấy Các mô phiến lá, cuống lá, mầm, trụ mầm dưa lưới nảy mầm in vitro cấy lên mơi trường ni cấy có bổ sung chất điều hịa sinh trưởng thuộc nhóm auxin NAA IBA với nồng độ 0,0 - 0,5 mg/L để thăm dị khả tạo mơ sẹo Bảng Bảng cho thấy, môi trường khơng bổ sung chất điều hịa sinh trưởng mơ ni cấy hồn tồn khơng có cảm ứng tạo mơ sẹo, sau thời gian vàng chết Qua q trình theo dõi thí nghiệm, chúng tơi nhận thấy mơi trường có bổ sung chất điều hịa sinh trưởng, mơ sẹo bắt đầu hình thành sau 15 ngày nuôi Mô sẹo xuất vết cắt sau mọc đầy bề mặt mô nuôi cấy 2997 HUAF JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCE & TECHNOLOGY ISSN 2588-1256 Vol 6(2)-2022:2994-3004 Bảng Ảnh hưởng NAA đến khả tạo mô sẹo mô nuôi cấy (sau tuần) Phiến Cuống Lá mầm Trụ mầm Tỷ lệ NAA Đặc Tỷ lệ tạo Đặc Tỷ lệ tạo Đặc Tỷ lệ tạo Đặc tạo mô (mg/L) điểm mô sẹo điểm mô sẹo điểm mô sẹo điểm sẹo mô sẹo (%) mô sẹo (%) mô sẹo (%) mô sẹo (%) 0,00 (Đối 0,00c 0,00c 0,00c 0,00c chứng) 0,10 30,00b ++ 56,67b ++ 40,00a + 43,33a + a a b 0,30 91,67 +++ 100 +++ 16,67 + 23,33b + 0,50 100a ++ 100a ++ 13,33b + 16,67b + LSD0,05 16,53 5,44 7,69 13,31 Trong cột, chữ a, b, c khác thể sai khác có ý nghĩa thống kê công thức mức α = 0,05 + : Mô sẹo màu trắng, ướt; ++: Mô sẹo màu trắng, xốp;+++: Mô sẹo xanh, khô; -: Mô nuôi cấy chết Đối với mô phiến cuống lá, cảm ứng phát sinh mô sẹo tốt môi trường có bổ sung 0,3 mg/L NAA với tỷ lệ tạo mộ sẹo 91,67% 100%, mơ sẹo hình thành có màu xanh khơ Khi tăng nồng độ NAA lên 0,5 mg/L tỷ lệ tạo mô sẹo từ phiến cuống sai khác khơng có ý nghĩa thống kê so với mơi trường có bổ sung 0,3 mg/L NAA, mơ sẹo hình thành xốp khơng có màu xanh Trên mơi trường có bổ sung NAA, mầm trụ mầm có tỷ lệ cảm ứng tạo mô sẹo không cao Tỷ lệ tạo mô sẹo mầm trụ mầm đạt cao 40,00% 43,33% mơi trường có bổ sung 0,1 mg/L NAA Quan sát thí nghiệm chúng tơi nhận thấy rằng, mơ sẹo hình thành từ mầm trụ mầm có màu trắng, mọng nước sau thời gian khơng phát triển chết NAA chất thuộc nhóm auxin có tác dụng kích thích q trình cảm ứng tạo mô sẹo nuôi cấy in vitro nên nhiều tác giả sử dụng bổ sung vào môi trường nuôi cấy để thăm dị khả cảm ứng tạo mơ sẹo Quang cs (2019) bổ sung 0,3 mg/L NAA vào môi trường nuôi cấy mô lá, mô thân Adenosma indianum (Lour.) cho kết tạo mô sẹo tốt (Quang cs., 2019) Bảng Ảnh hưởng IBA đến khả tạo mô sẹo mô nuôi cấy (sau tuần) Phiến Cuống Lá mầm Trụ mầm Tỷ lệ IBA Đặc Tỷ lệ tạo Đặc Tỷ lệ tạo Đặc Tỷ lệ tạo Đặc tạo mô (mg/L) điểm mô sẹo điểm mô sẹo điểm mô sẹo điểm sẹo mô sẹo (%) mô sẹo (%) mô sẹo (%) mô sẹo (%) 0,00 (Đối 0,00d 0,00c 0,00c 0,00c chứng) 0,10 23,00c ++ 70,00b +++ 13,33bc + 16,67b + b a a 0,30 80,00 +++ 100 +++ 53,33 + 43,33a + 0,50 100a + 100a +++ 16,67b + 23,33b + LSD0,05 19,60 9,41 16,31 13,31 Trong cột, chữ a, b, c khác thể sai khác có ý nghĩa thống kê công thức mức α = 0,05 + : Mô sẹo màu trắng, ướt; ++: Mô sẹo màu trắng, xốp;+++: Mô sẹo xanh, khô; -: Mô nuôi cấy chết Bảng cho thấy, môi trường nuôi cấy bổ sung 0,3 mg/L IBA, mô phiến lá, cuống lá, mầm trụ 2998 mầm có tỷ lệ cảm ứng tạo mơ sẹo tốt với tỷ lệ tạo mô sẹo 80%, 100%, 53,33% 43,33% Trần Thị Triêu Hà cs TẠP CHÍ KHOA HỌC & CƠNG NGHỆ NƠNG NGHIỆP Tương tự mơi trường bổ sung NAA, môi trường bổ sung IBA, mô sẹo hình thành từ phiến cuống có màu xanh khơ mơ sẹo hình thành từ mầm trụ mầm có màu trắng, mọng nước sau thời gian nuôi cấy khơng phát triển thêm bị chết Trong nhóm auxin, bên cạnh NAA, IBA sử dụng để bổ sung vào môi ISSN 2588-1256 Tập 6(2)-2022:2994-3004 trường nuôi cấy in vitro nhằm mục đích tạo mơ sẹo Nghiên cứu Quang cs (2019) mô lá, cuống lá, đoạn thân Adenosma indianum (Lour.) cho thấy, mô lá, cuống môi trường bổ sung 0,3 mg/L IBA cho kết tạo mô sẹo tốt Trong đó, đoạn thân, mơi trường bổ sung 0,5 mg/L cho kết tạo mô sẹo tốt (Quang cs., 2019) A B C D Hình Mơ sẹo hình thành từ mơ phiến (Hình A), cuống (Hình B) mơi trường bổ sung 0,3 mg/L NAA từ mầm (Hình C), trụ mầm (Hình D) mơi trường bổ sung 0,1 mg/L NAA Thanh bar: cm 3.3 Nghiên cứu khả tái sinh chồi từ mô sẹo Trong nhân giống vơ tính in vitro, chất điều hịa sinh trưởng có khả điều khiển q trình phát sinh hình thái mơ ni cấy Nhóm chất điều hịa sinh trưởng cytokinin (BAP, kinetin, zeatin,…) có vai trị kích thích q trình tạo chồi ni cấy in vitro, BAP kinetin thường sử dụng chúng có hoạt tính cao bền với nhiệt (Nguyễn Hoàng Lộc, 2011) Trong vi nhân giống, chồi đỉnh đốt thân thường sử dụng rộng rãi để làm nguyên liệu nuôi cấy chồi thường tái sinh trực tiếp từ mô sinh trưởng tốt Bên cạnh đó, loại mơ khác mơ lá, thân, rễ sử dụng làm ngun liệu ni cấy in vitro Tuy nhiên, q trình tạo chồi từ loại mô thường gián tiếp thông qua giai đoạn mô sẹo, loại mơ có độ biến động di truyền cao Để khắc phục vấn đề này, mô sẹo sử dụng để tạo chồi thường mô sẹo tái sinh (mô sẹo sơ cấp) từ mô nuôi cấy không qua cấy chuyền nhiều lần (Nguyễn Hoàng Lộc, 2011) Ở nghiên cứu này, sử dụng mô sẹo sơ cấp có nguồn gốc từ để tái sinh chồi in vitro Mơ sẹo cấy lên mơi trường có bổ sung chất điều hòa sinh trưởng BAP kinetin để thăm dò khả tái sinh chồi từ mô sẹo Bảng Ảnh hưởng BAP đến khả tái sinh chồi từ mô sẹo (sau tuần) Khả tái sinh chồi BAP (mg/L) Tỷ lệ mẫu tạo chồi (%) Số chồi/mẫu (chồi) 0,00 (Đối chứng) 0,00e 0,00d 0,10 13,33d 1,67c 0,30 30,00c 2,56b 0,50 80,00a 3,59a b 0,70 63,33 3,26a LSD0,05 13,29 0,48 Trong cột, chữ a, b, c khác thể sai khác có ý nghĩa thống kê công thức mức α = 0,05 https://tapchi.huaf.edu.vn DOI: 10.46826/huaf-jasat.v6n2y2022.902 2999 HUAF JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCE & TECHNOLOGY Bảng cho thấy, BAP có tác dụng thúc đẩy trình tạo chồi từ mơ sẹo Ở mơi trường khơng bổ sung BAP, mơ sẹo khơng có cảm ứng tạo chồi Khi tăng nồng độ BAP từ 0,1 mg/L đến 0,5 mg/l tỷ lệ mơ sẹo tạo chồi số chồi/mẫu tăng đạt giá trị cao mơi trường có bổ sung 0,5 mg/L BAP với tỷ lệ mẫu tạo chồi 80%, số chồi/mẫu 3,59 chồi Khi tiếp tục tăng nồng độ BAP lên 0,7 mg/L tỷ lệ mơ sẹo tạo chồi giảm cịn 63,33%, số chồi tạo thành khơng sai khác có ý nghĩa thống ISSN 2588-1256 Vol 6(2)-2022:2994-3004 kê so với mơi trường có bổ sung 0,5 mg/L BAP Chee (1991), nghiên cứu tái sinh chồi giống dưa lưới “Topmark” từ mơ sẹo cho thấy mơi trường có bổ sung BA kinetin có tác dụng kích thích q trình tạo chồi từ mơ sẹo Bổ sung BA với nồng độ 0,75 mg/L 1,0 mg/L cho tỷ lệ mô sẹo tạo chồi 60% 80% Bên cạnh đó, mơi trường bổ sung 6,0 mg/L kinetin 1,5 mg/L IAA cho tỷ lệ mô sẹo tạo chồi 20% (Chee, 1991) Bảng Ảnh hưởng kinetin đến khả tái sinh chồi từ mô sẹo (sau tuần) Khả tái sinh chồi Kinetin (mg/L) Tỷ lệ mẫu tạo chồi (%) Số chồi/mẫu (chồi) e 0,00 (Đối chứng) 0,00 0,00d d 0,10 16,67 1,67c c 0,30 33,33 2,50b a 0,50 83,33 3,52a b 0,70 66,67 2,85b LSD0,05 14,85 0,52 a, b, c Trong cột, chữ khác thể sai khác có ý nghĩa thống kê cơng thức mức α = 0,05 Bảng cho thấy, kinetin có tác dụng kích thích q trình cảm ứng tạo chồi từ nuôi cấy mô sẹo Khi bổ sung kinetin nồng độ 0,1 - 0,5 mg/L vào môi trường nuôi cấy, tỷ lệ mô sẹo tạo chồi số chồi tạo thành tăng đạt giá trị cao mơi trường có bổ sung 0,5 mg/L kinetin với 83,33% mô sẹo tạo chồi số chồi/mẫu 3,52 chồi Trong nhân giống in vitro, kết hợp chất thuộc nhóm cytokinin auxin với tỷ lệ thích hợp có tác dụng kích thích phân chia mạnh mẽ tế bào, ảnh hưởng đến hình thành phân hóa chồi từ mơ ni cấy (Nguyễn Hồng Lộc, 2011) Vì chúng tơi tiếp tục nghiên cứu ảnh hưởng BAP kết hợp với NAA đến khả tái sinh chồi mô sẹo Trong thí nghiệm này, chúng tơi sử dụng mơ sẹo in vitro tái sinh từ mô cấy lên mơi trường có bổ sung BAP nồng độ 0,5 mg/L kết hợp với NAA với nồng độ khác để thăm dò khả tái sinh chồi từ mô sẹo Bảng Ảnh hưởng BAP kết hợp với NAA đến khả tái sinh chồi từ mô sẹo (sau tuần) Chất điều hòa sinh trưởng (mg/L) Khả tái sinh chồi BAP NAA Tỷ lệ mẫu tạo chồi (%) Số chồi/mẫu (chồi) 0,00 ab 0,50 83,33 3,56c (Đối chứng) 0,50 0,05 90,00a 4,01b 0,50 0,10 100a 4,30a 0,50 0,15 86,67a 3,72c b 0,50 0,20 66,67 3,24d LSD0,05 18,19 0,28 Trong cột, chữ a, b, c khác thể sai khác có ý nghĩa thống kê cơng thức mức α = 0,05 3000 Trần Thị Triêu Hà cs TẠP CHÍ KHOA HỌC & CƠNG NGHỆ NƠNG NGHIỆP Bảng cho thấy, bổ sung NAA kết hợp với BAP với tỷ lệ thích hợp vào mơi trường ni cấy có tác dụng kích thích q trình cảm ứng tạo chồi từ mơ sẹo Trên mơi trường có 0,5 mg/L BAP bổ sung thêm NAA (0,05 - 0,1mg/L) số chồi tạo thành trung bình cao có ý nghĩa thống kê so với công thức đối chứng (không bổ sung thêm NAA) với số chồi/mẫu 4,01 chồi 4,30 chồi Tuy nhiên, tiếp tục tăng nồng độ NAA tỷ lệ mơ sẹo tạo chồi số chồi/mẫu có khuynh hướng giảm Ở mơi trường có bổ sung 0,5 mg/L BAP 0,2 mg/L NAA tỷ lệ mẫu tạo chồi giảm 66,67% số chồi/mẫu 3,24 chồi Theo dõi thí nghiệm, nhận thấy môi trường này, số mơ sẹo khơng có cảm ứng tạo chồi mà có khuynh hướng tiếp tục ISSN 2588-1256 Tập 6(2)-2022:2994-3004 hình thành tế bào mô sẹo mọng nước dần chuyển sang màu trắng Nghiên cứu Grozeva cs (2019) khả cảm ứng tạo chồi từ mô sẹo hai giống dưa lưới Cantalupensis (dòng 11/9) Reticulatus (dịng AGY) cho thấy, mơi trường bổ sung 1mg/L BAP 0,5 mg/L IAA dịng 11/9 có tỷ lệ mô sẹo tái sinh chồi 100% với số chồi/mẫu 1,5 chồi Dịng AGY có tỷ lệ mô sẹo tái sinh chồi cao 75% với số chồi/mẫu 0,75 chồi môi trường bổ sung 1,5 mg/L BAP 0,5 mg/L IAA (Grozeva, 2019) Như vậy, nghiên cứu giống dưa lưới ORS8H211 có kết tốt A B C Hình Chồi tái sinh từ mô sẹo môi trường có bổ sung 0,5 mg/L BAP (hình A); 0,5 mg/L kinetin (Hình B); 0,5 mg/L BAP kết hợp với 0,1 mg/L NAA (Hình C) Thanh bar: cm 3.4 Nghiên cứu khả tạo chồi trực tiếp in vitro Trong nhân giống in vitro, chồi đỉnh đốt thân hai phận thực vật thường sử dụng để làm nguồn mẫu đưa vào nuôi cấy chúng có nhiều ưu điểm mơ cịn non, dễ tái sinh sinh trưởng tốt Trong thí nghiệm này, chúng tơi sử dụng chồi đỉnh đốt thân có kích thước khoảng 0,5 cm nảy mầm in vitro nuôi cấy môi trường dinh dưỡng https://tapchi.huaf.edu.vn DOI: 10.46826/huaf-jasat.v6n2y2022.902 có bổ sung BAP kinetin để thăm dò khả tái sinh chồi Đối với chồi đỉnh, môi trường bổ sung BAP kinetin khơng tái sinh thêm chồi mà có trình kéo dài chồi ảnh hưởng tượng ưu Vì vậy, số liệu Bảng Bảng thể kết nghiên cứu ảnh hưởng BAP kinetin đến khả tạo chồi từ đốt thân 3001 HUAF JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCE & TECHNOLOGY ISSN 2588-1256 Vol 6(2)-2022:2994-3004 Bảng Ảnh hưởng BAP đến khả tạo chồi trực tiếp từ đốt thân (sau tuần) Khả tái sinh chồi BAP (mg/L) Tỷ lệ mẫu tạo chồi (%) Số chồi/mẫu (chồi) 0,00 b 46,67 1,00c (Đối chứng) 0,30 100a 1,53b 0,60 100a 2,20a 0,90 100a 2,00a LSD0,05 15,37 0,27 Trong cột, chữ a, b, c khác thể sai khác có ý nghĩa thống kê công thức mức α = 0,05 Bảng cho thấy, BAP có tác dụng kích thích khả tạo chồi trực tiếp từ đốt thân dưa lưới in vitro Trên môi trường không bổ sung BAP, tỷ lệ mẫu tạo chồi thấp (46,67%), mẫu tạo chồi Khi bổ sung BAP vào môi trường nuôi cấy, tỷ lệ mẫu tạo chồi đạt 100%, số chồi tạo thành tăng cao so với công thức đối chứng Số chồi tạo thành cao nuôi cấy đốt thân môi trường bổ sung 0,6 mg/L BAP với 2,20 chồi/mẫu Nếu tiếp tục tăng hàm lượng BAP lên 0,9 mg/L số chồi tạo thành không tăng, kết thu sai khác khơng có ý nghĩa so với mơi trường có bổ sung 0,6 mg/L BAP Keng Hoong (2006), tái sinh chồi trực tiếp từ nuôi cấy đốt thân giống dưa lưới Honey Dew môi trường bổ sung mg/L BAP đạt 19,4 chồi Trong đó, Parvin cs (2013) nghiên cứu tạo chồi trực tiếp từ chồi đỉnh đốt thân giống dưa lưới địa phương cho thấy rằng, môi trường bổ sung 0,5 mg/L BAP chồi đỉnh đốt thân có hình thành chồi với tỷ lệ tạo chồi chồi đỉnh đốt thân 10% 15%, số chồi tạo thành 3,2 3,1 chồi Bảng Ảnh hưởng kinetin đến khả tạo chồi trực tiếp đốt thân (sau tuần) Khả tái sinh chồi Kinetin (mg/L) Tỷ lệ mẫu tạo chồi (%) Số chồi/mẫu (chồi) 0,00 (Đối chứng) 33,33b 1,00c a 0,30 100 1,93a a 0,60 100 1,53b a 0,90 93,33 1,65b LSD0,05 15,37 0,26 Trong cột, chữ a, b, c khác thể sai khác có ý nghĩa thống kê cơng thức mức α = 0,05 Trong chất điều hòa sinh trưởng thuộc nhóm cytokinin, bên cạnh BAP, kinetin thường sử dụng nhân giống in vitro chúng có tác dụng kích thích q trình phát sinh chồi tương đương (Nguyễn Hồng Lộc, 2011) Trong thí nghiệm này, bổ sung kinetin vào môi trường nuôi cấy với nồng độ 0,3 - 0,9 mg/L để thăm dò khả tạo chồi trực tiếp từ đốt thân dưa lưới in vitro 3002 Kết Bảng cho thấy, mơi trường có bổ sung 0,3 mg/L kinetin cho kết tạo chồi tốt với 100% mẫu tạo chồi, số chồi tạo thành mẫu 1,93 chồi Tăng nồng độ kinetin lên 0,6 - 0,9 mg/L, tỷ lệ mẫu tạo chồi cao (trên 93%) số chồi tạo thành (1,53-1,65 chồi/mẫu) thấp so với môi trường bổ sung 0,3 mg/L kinetin có ý nghĩa thống kê với mức α = 0,05 Trần Thị Triêu Hà cs TẠP CHÍ KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ NÔNG NGHIỆP ISSN 2588-1256 Tập 6(2)-2022:2994-3004 A B Hình Chồi tái sinh trực tiếp từ đốt thân môi trường bổ sung 0,6 mg/L BAP (Hình A); Mơi trường bổ sung 0,3 mg/L kinetin (Hình B) Thanh bar: cm TÀI LIỆU THAM KHẢO KẾT LUẬN Tài liệu tiếng Việt Khử trùng hạt dưa lưới ORS8H211 Nguyễn Hồng Lộc (2011) Ni cấy mơ tế bào dung dịch H2O2 15% thời gian thực vật - khái niệm ứng dụng Nhà phút cho hiệu khử trùng cao với xuất Đại học Huế 80% mẫu sống sạch, 100% hạt nảy mầm Nguyễn Văn Việt, Đoàn Thị Thu Hương Trần Việt Hà (2018) Xây dựng kỹ thuật nhân sau 14 ngày nuôi giống in vitro dưa lê Kim hồng hậu Tạp chí Mơ phiến cuống loại mô Khoa học Công nghệ Lâm nghiệp, (3), thích hợp để tạo mơ sẹo in vitro mơi 136-142 trường ni cấy có bổ sung 0,3 mg/L Trung tâm thông tin thống kê Khoa học công NAA 0,3 mg/L IBA tỷ lệ cảm ứng tạo nghệ (CESTI) (14/11/2019) Quy trình sản xuất dưa lưới ứng dụng 4.0 Khai thác từ mô sẹo đạt từ 80% - 100% Mơ sẹo có màu https://cesti.gov.vn/chi-tiet/9932/mo-hinhxanh, khô, không bị mọng nước cong-nghe-ung-dung-vao-san-xuat/quyMôi trường nuôi cấy có bổ trinh-san-xuat-dua-luoi-ung-dung-congsung 0,5 mg/L BAP 0,1 mg/L NAA nghe-40 mơi trường thích hợp cho q trình Tài liệu tiếng nước ngồi Ahmad, M., & Jatoi, S A (1999) Mass cảm ứng tạo chồi từ mô sẹo Tỷ lệ mô sẹo Production of Musk Melon (Cucumis Melo tạo chồi 100% với số chồi/mẫu 4,3 L.) As Influenced by plant growth regulators chồi and age of explant Scientific Khyber Chồi đỉnh môi trường tạo chồi Journal, 2(2), 35-38 Bezirganoglu, I (2017) Tissue culture of trực tiếp có q trình kéo dài chồi Môi Cucumis melo Agriculture Research & trường nuôi cấy bổ sung 0,6 mg/L Technology open Access Journal, 6(2), 35BAP 0,3 mg/L kinetin mơi trường 36 thích hợp để tái sinh chồi trực tiếp từ Chee, P.P (1991) Plant Regeneration from đốt thân Tỷ lệ tạo mẫu tạo chồi 100%, số Cotyledons of Cucumis melo ‘Topmark’ HortScience, 26(7), 908-910 chồi tạo thành môi trường có 0,6 mg/L Grozeva, S.Y., Velkov, N.V & Ivanova, Z.V BAP 0,3 mg/L kinetin 2,2 (2019) In vitro Plant Regeneration of Two chồi/mẫu 1,93 chồi/mẫu Cucumis melo L Genotypes Using Different LỜI CÁM ƠN Explant Types and Culture Medium Ecologia Balkanica Journal, 11(2), 193Nhóm tác giả xin cảm ơn hỗ 202 trợ phần kinh phí nhóm nghiên cứu Keng, C L & Hoong, L K (2005) In vitro mạnh trường Đại học Nông Lâm, Đại học Plantlets Regeneration from Nodal Huế, mã số NCM.ĐHNL.2021-1" Segments of Musk Melon (Cucumis melo L.) Biotechnology Journal, 4(4), 354-357 https://tapchi.huaf.edu.vn DOI: 10.46826/huaf-jasat.v6n2y2022.902 3003 HUAF JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCE & TECHNOLOGY Lin, Y.T., Lin, C W., Chung, H.C., Su, M H., Ho, H Y., Yeh, S.D., Jan, F.J & Ku, H.M (2011) In vitro Regeneration and Genetic Transformation of Cucumis metuliferus through Cotyledon Organogenesis HortSience, 46(4), 616–621 Murashige T., Skoog F (1962) A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue culture Plant Physiol, 15(3), 473–497 Naderi, D & Mahmoudi, E (2017) In vitro Regeneration of Iranian Melon (Cucumis melo L ‘Samsoori’) Using Antibiotic and Benzyl adenine Micropropagation of Cucumis melo L ‘Samsoori’ International Journal of Horticultural Science and Technology, 4(1), 117-126, 2322-1461 DOI: 10.22059/ijhst.2017.224186.165 Parvin, S., Kausar, M., Enamul, H M., Khalekuzzaman, M., Sikdar, B & Asadul, I 3004 ISSN 2588-1256 Vol 6(2)-2022:2994-3004 M (2013) In vitro propagation of muskmelon (Cucumis melo L.) from nodal segments, shoot tips and cotyledonary nodes Rajshahi University journal of life & earth and agricultural sciences, 41, 71-77 Quang, H.T., Phuong, T T B., Nhu, P T T., Thuy, L T N., Lan, T T & Dung, T Q (2019) In vitro propagation of Adenosma indianum (Lour.) Plant Cell Biotechnology and Molecular Biology, 20(5&6), 222-231 Sebastian, M S & Ficcadenti, N (2015, September 25) In vitro plant regeneration from cotyledonary explants of Cucumis melo L var cantalupensis and genetic stability evaluation using RAPD analysis Retrieved from https://www.infona.pl/resource/bwmeta1.el ement.springer-doi-10_1007-S11240-0150875-3 Trần Thị Triêu Hà cs  ... sinh trưởng BAP kinetin để thăm dị khả tái sinh chồi từ mơ sẹo Bảng Ảnh hưởng BAP đến khả tái sinh chồi từ mô sẹo (sau tuần) Khả tái sinh chồi BAP (mg/L) Tỷ lệ mẫu tạo chồi (%) Số chồi/ mẫu (chồi) ... cm 3.3 Nghiên cứu khả tái sinh chồi từ mô sẹo Trong nhân giống vơ tính in vitro, chất điều hịa sinh trưởng có khả điều khiển q trình phát sinh hình thái mơ ni cấy Nhóm chất điều hịa sinh trưởng... 10.46826/huaf-jasat.v6n2y2022.902 có bổ sung BAP kinetin để thăm dò khả tái sinh chồi Đối với chồi đỉnh, môi trường bổ sung BAP kinetin khơng tái sinh thêm chồi mà có q trình kéo dài chồi ảnh hưởng tượng ưu Vì vậy,