Bài viết trình bày kết quả nghiên cứu hệ thống tái sinh đa chồi in vitro ở cây đậu Nho nhe để phục vụ cho việc chuyển gen ở cây đậu đỗ. Để nắm chi tiết hơn nội dung nghiên cứu mời các bạn cùng tham khảo bài viết.
TNU Journal of Science and Technology 225(08): 63 - 70 NGHIÊN CỨU TÁI SINH ĐA CHỒI IN VITRO Ở CÂY ĐẬU NHO NHE [Vigna umbellata (Thunb.) Ohwi & H Ohashi] Nguyễn Thị Ngọc Lan1*, Vũ Thu Trang1,2 1Trường Đại học Sư phạm - ĐH Thái Nguyên, giáo dục đào tạo Quảng Ninh 1,2Sở TÓM TẮT Cây đậu đỗ nhóm trồng chủ lực Việt Nam Trong nhóm này, đậu Nho nhe sử dụng với nhiều công dụng khác như: dùng làm thực phẩm, cải tạo đất nhờ có khả cố định đạm, làm phân xanh sử dụng để che phủ đất, đặc biệt khu vực đất dốc sườn đồi, núi Tuy nhiên, Việt Nam, nhiều thơng tin nghiên cứu loại Hơn nữa, với đặc tính có khả chống chịu tốt với sâu bệnh hại tác động bất lợi từ ngoại cảnh, đậu Nho nhe xem nguồn gen quý công tác cải thiện nâng cao tính chống chịu họ Đậu Vì vậy, việc xác định quy trình tái sinh đa chồi in vitro đậu Nho nhe có vai trị quan trọng sở để ứng dụng kỹ thuật chuyển gen họ Đậu Trong nghiên cứu này, đậu Nho nhe tái sinh thành công từ chồi in vitro Hạt sau khử trùng 20 phút dung dịch javen 60% chuyển vào môi trường nảy mầm, sau ngày thu chồi để tái sinh Môi trường tốt để tạo đa chồi từ chồi đậu Nho nhe MS bổ sung BAP 1,5 mg/l; sucrose 30 g/l; agar g/l; nước dừa 10% Mơi trường thích hợp để tạo rễ đậu Nho nhe in vitro MS có bổ sung 0,3 mg/l IBA Cây đậu Nho nhe in vitro đưa thành công vườn ươm giá thể chứa đất thịt trấu hun với tỷ lệ 2:1 Từ khóa: chuyển gen; đậu nho nhe; đa chồi; hệ thống tái sinh in vitro; Vigna umbellata Ngày nhận bài: 13/4/2020; Ngày hoàn thiện: 08/6/2020; Ngày đăng: 11/6/2020 RESEARCH ON IN VITRO MULTIPLE SHOOT REGENERATION OF RICE BEAN [Vigna umbellata (Thunb.) Ohwi & H Ohashi] Nguyen Thi Ngoc Lan1*, Vu Thu Trang1,2 1,2Quang 1TNU - University of Education, Ninh Department of Education and Training ABSTRACT Rice bean (Vigna umbellata (Thunb.) Ohwi & Ohashi) belongs to the genus Vigna which is one of the major crops in Vietnam This plant is also known for many different roles such as: food, soil improvement, green manure and cover soil, especially in sloping areas However, data on this plant is very limited in Vietnam nowaday Moreover, rice bean has been reported to possess resistance to both abiotic and biotic stresses, thus it can be considered as a valuable gene source in improving tolerance of Vigna plants Therefore, the identification of in vitro multiple shoot regeneration process of rice bean plays an important role due to their primary application of gene transfer of this crop In this study, rice bean was successfully regenerated from in vitro tip shoots using seeds as the original material After disinfection for 20 minutes with 60% javen, seeds were transferred to germination media to produce seedlings The highest number of shoots were produced on MS + BAP 1.5 mg/l + sucrose 30 g/l + agar g/l + coconut water 10% In vitro shoots produced quality roots on MS medium supplemented with 0.3 mg/l IBA Rice bean plants in vitro were successfully survival in the greenhouse on a substrate containing soil and husk with a ratio of 2:1 Keywords: gene transfer; in vitro regeneration system; multiple shoot; rice bean; Vigna umbellata Received: 13/4/2020; Revised: 08/6/2020; Published: 11/6/2020 * Corresponding author Email: ntnlan.dhsptn@tnu.edu.vn http://jst.tnu.edu.vn; Email: jst@tnu.edu.vn 63 Nguyễn Thị Ngọc Lan Đtg Tạp chí KHOA HỌC & CƠNG NGHỆ ĐHTN Mở đầu Đậu Nho nhe, gọi đậu gạo, đậu nâu, có tên khoa học Vigna umbellata (Thunb.) Ohwi & Ohashi thuộc họ đậu (Fabaceae) Đậu Nho nhe phân bố rộng vùng cận nhiệt đới ẩm đến khí hậu ơn đới nước nhiệt đới châu Á, châu Phi châu Mỹ [1] Ở Việt Nam, đậu Nho nhe trồng chủ yếu tỉnh miền núi phía Bắc Hà Giang, Lai Châu Yên Bái Cũng loại đậu đỗ khác, hạt đậu Nho nhe có giá trị dinh dưỡng cao sử dụng làm nguồn cung cấp protein quan trọng cho người vật nuôi [2], [3] Các phận Đậu nho nhe sử dụng làm thực phẩm non, lá, non, hạt khô Những phận lại sau thu hoạch thân cây, lá, hạt… để tươi phơi khô sử dụng làm thức ăn cho gia súc [4] Đậu Nho nhe năm, thân thảo mọc thẳng đứng, bán thẳng xoắn có dây leo, có hệ rễ phát triển mạnh mang nhiều nốt sần chứa vi khuẩn cố định đạm Vì vậy, loại thường trồng luân canh với lúa ngô để tăng vụ cải tạo đất bạc màu chống xói mịn Cây đậu Nho nhe sinh trưởng nhanh, sau tháng phủ kín đất, đặc biệt thân làm phân bón tốt [5] Mặc dù, đậu Nho nhe thuộc nhóm trồng chủ lực có nhiều giá trị mặt dinh dưỡng cải tạo đất, có nghiên cứu khoa học lồi Việt Nam Bên cạnh đó, đậu Nho nhe có khả chống chịu tốt với tác động bất lợi sinh học phi sinh học, đặc biệt có tính kháng trùng hại hạt trình bảo quản [4], [6], [7] Vì vậy, đậu Nho nhe coi nguồn gen quý cho việc chuyển gen họ Đậu nhằm tạo dịng chuyển gen có chống chịu tốt với stress từ ngoại cảnh sâu bệnh hại Để thực điều này, việc nghiên cứu nhân giống in vitro đậu Nho nhe cần thiết, tỷ lệ thành cơng việc chuyển 64 225(08): 63 - 70 gen vào trồng phụ thuộc nhiều vào hệ thống nuôi cấy tái sinh in vitro sau chuyển gen Tái sinh in vitro với hiệu suất cao xem mấu chốt định đến thành cơng quy trình tạo chuyển gen [8] Jayanti Sen đồng tác giả (đtg) (1998) công bố kết nghiên cứu tái sinh đậu xanh từ phôi soma từ nách mầm phục vụ chuyển gen [9] Sonia đtg (2007) thu kết chuyển gen mã hóa protein ức chế enzyme α-amylase vào đậu xanh thông qua lây nhiễm Agrobacterium thực nhờ tái sinh đa chồi từ nách mầm [10] Kết nghiên cứu đánh giá hiệu chuyển gen Vigna mungo sử dụng kỹ thuật nuôi cấy in vitro từ nách mầm khẳng định hiệu phương pháp [11] Nghiên cứu tái sinh đa chồi đậu Nho nhe Bhadra đtg (1991) thực thành công Các chồi tạo từ nách mầm hạt đậu Nho nhe nảy mầm môi trường MS bổ sung vitamin B5, sucrose 30%, NAA (0,1-0,5 mg/l), BA (0,5 mg/l), kinetine (0,5 mg/l) zeatin (0,5-1 mg/l) [12] Tuy nhiên, chưa có nghiên cứu tối ưu tái sinh đa chồi đậu Nho nhe cơng bố Việt Nam Vì vậy, báo này, nhóm tác giả trình bày kết nghiên cứu hệ thống tái sinh đa chồi in vitro đậu Nho nhe để phục vụ cho việc chuyển gen đậu đỗ Vật liệu phương pháp nghiên cứu Vật liệu thực vật: Hạt đậu Nho nhe thu huyện Lục Yên, tỉnh Yên Bái trồng vườn thực nghiệm định danh loài dựa đặc điểm hình thái thị phân tử Hạt khử trùng cho nảy mầm môi trường GM để tạo thành thu chồi phục vụ nghiên cứu tái sinh in vitro Phương pháp khử trùng hạt, tạo nuôi cấy in vitro: Hạt đậu Nho nhe lắc nhẹ cồn 70 độ thời gian phút, sau khử trùng với nồng độ javen 50%, 60% 70% thời gian 15 phút, 20 phút, 25 phút Hạt sau khử trùng thấm khô giấy thấm khử trùng cấy http://jst.tnu.edu.vn; Email: jst@tnu.edu.vn Nguyễn Thị Ngọc Lan Đtg Tạp chí KHOA HỌC & CƠNG NGHỆ ĐHTN 225(08): 63 - 70 vào mơi trường nảy mầm gồm có MS (Murashine Skoog, 1962) [13] bổ sung agar g/l, sucrose 30 g/l trị số trung bình mức ý nghĩa α =0,05 Tái sinh đa chồi từ chồi ngọn: Hạt đậu Nho nhe sau gieo nảy mầm ngày, cắt lấy phần chồi cấy vào môi trường tái sinh chồi gồm: MS, sucrose 30 g/l; agar g/l; nước dừa 10% BAP có nồng độ khác nhau: (0,5; 1,0; 1,5; 2,0 mg/l) để nghiên cứu khả tái sinh đa chồi in vitro 3.1 Kết khử trùng hạt đậu Nho nhe Tạo hoàn chỉnh: Khi chồi đạt chiều cao từ - cm, chuyển sang mơi trường rễ để tạo hồn chỉnh Môi trường rễ gồm MS; sucrose 30 g/l; agar g/l IBA (0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5 mg/l) Đánh giá khả hình thành phát triển rễ tái sinh sau tuần Các giai đoạn nuôi cấy từ hạt sau khử trùng đến tạo hồn chỉnh tiến hành phịng ni với nhiệt độ dao động khoảng 25oC ± 2oC, cường độ ánh sáng 2000 lux, thời gian chiếu sáng 12 giờ/ ngày Đưa môi trường tự nhiên: Các bình ni cấy chứa tái sinh hồn chỉnh chuyển khỏi phịng ni cấy để phịng có ánh sáng nhiệt độ bình thường - ngày, sau chuyển sang loại giá thể khác Sau sống, rễ mới, đưa ngồi vườn ươm theo dõi tỷ lệ sống Phương pháp xử lý kết quả: Sử dụng phần mềm SPSS để phân tích trị số thống kê trung bình mẫu, sai số so sánh khác Kết nghiên cứu thảo luận Khử trùng mẫu giai đoạn quy trình nhân giống in vitro, giai đoạn cần phải đảm bảo mẫu cấy bị nhiễm tỷ lệ mẫu sống cao nhất, mầm sinh trưởng tốt làm nguồn nguyên liệu cho trình tái sinh in vitro Hạt đậu Nho nhe khử trùng dung dịch javen nồng độ 50%, 60%, 70% thời gian 15, 20, 25 phút, sau cấy vào mơi trường cho hạt nảy mầm Kết theo dõi tỷ lệ mẫu không bị nhiễm tỷ lệ hạt nảy mầm sau ngày nuôi cấy 100 hạt sau khử trùng trình bày bảng Khi sử dụng dung dịch javen pha loãng 50% cho thấy, với việc tăng thời gian khử trùng lên số mẫu khơng nhiễm tăng lên, từ 86% (CT1) đến 93% (CT3), tỷ lệ hạt nảy mầm ba công thức CT1, CT2, CT3 tăng 86, 90, 91% tương ứng với thời gian khử trùng 15, 20, 25 phút Khi tăng nồng độ javen lên 60% 70%, tỷ lệ hạt không bị nhiễm khoảng thời gian khử trùng khơng có khác biệt công thức hai nồng độ javen này, đạt 94% khử trùng 15 phút (CT4, CT7) 100% khử trùng 20 25 phút (CT5, CT6, CT8, CT9) Tuy nhiên, việc tăng thời gian khử trùng làm giảm tỷ lệ mẫu bị nhiễm lại có ảnh hưởng khơng tốt tới khả nảy mầm hạt Bảng Ảnh hưởng nồng độ javen thời gian khử trùng đến nảy mầm hạt Công thức (CT) CT1 CT2 CT3 CT4 CT5 CT6 CT7 CT8 CT9 Javen (%) 50 60 70 Thời gian khử trùng (phút) 15 20 25 15 20 25 15 20 25 http://jst.tnu.edu.vn; Email: jst@tnu.edu.vn Tỷ lệ hạt không nhiễm (%) 86 90 93 94 100 100 94 100 100 Tỷ lệ hạt nảy mầm (%) 86 90 91 92 98 84 66 66 60 65 Nguyễn Thị Ngọc Lan Đtg Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ ĐHTN Khi sử dụng dung dịch javen pha loãng 70% để khử trùng hạt đậu Nho nhe cho thấy, 100% hạt đậu Nho nhe không bị nhiễm sau thời gian khử trùng 20 25 phút, số mẫu bị khả nảy mầm tăng cao thể tỷ lệ hạt nảy mầm thấp công thức nghiên cứu, đạt 60% hạt nảy mầm CT9 (Javen 70%, 25 phút) 66% CT7 CT8 Như vậy, nồng độ javen 70%, tăng thời gian khử trùng lên tỷ lệ hạt không nhiễm tăng tối đa đạt 100%, tỷ lệ nảy mầm giảm thấp Điều chứng tỏ chưa phải nồng độ thích hợp để khử trùng hạt Đối với nồng độ javen 60%, tỷ lệ mẫu không nhiễm sau 15, 20, 25 phút khử trùng tương tự sử dụng dung dịch javen nồng độ 70%, tương ứng 94%, 100% 100% Tuy nhiên, tỷ lệ hạt nảy mầm công thức sử dụng javen 60% cao nhiều so với công thức nồng độ javen 70%, cụ thể, đạt 92% CT4 (sau 15 phút) đạt giá trị cao sau 20 phút CT5 (98%), sau giảm xuống 84% CT6 (sau 25 phút) Như vậy, kết nghiên cứu cho thấy, dung dịch javen nồng độ 60% với thời gian khử trùng 20 phút thích hợp cho khử trùng hạt đậu Nho nhe, tỷ lệ mẫu đạt 100%, tỷ lệ nảy mầm cao lên tới 98% Trong 225(08): 63 - 70 thực tế, hạt đậu đối tượng khó khử trùng, khử trùng javen nồng độ cao thời gian dài tỷ lệ hạt bị tổn thương cao, hạt nảy mầm không đồng Ngược lại, nồng độ javen thấp không đủ để làm diệt vi sinh vật, nấm mốc nên tỷ lệ hạt bị nhiễm sau cấy cao 3.2 Ảnh hưởng nồng độ BAP đến tái sinh đa chồi từ chồi BAP chất điều hịa sinh trưởng thuộc nhóm cytokinin Trong nuôi cấy mô, tế bào thực vật, chất thuộc nhóm cytokinin thường sử dụng để thúc đẩy phân hóa chồi, kích thích chồi phát triển Tiến hành thử nghiệm tái sinh đa chồi từ mầm, mô sẹo chồi ngọn, nhiên chưa tìm cơng thức phù hợp cho cảm ứng tạo chồi từ mắt mầm mô sẹo, mà thành công vật liệu tái sinh chồi in vitro Trong nghiên cứu này, đoạn chồi đậu Nho nhe nảy mầm từ hạt khử trùng cấy mơi trường MS có bổ sung BAP với nồng độ khác (0,5; 1,0; 1,5; 2,0 mg/l) Kết nghiên cứu ảnh hưởng BAP đến tái sinh đa chồi đậu Nho nhe sau tuần ni cấy trình bày bảng hình Bảng Ảnh hưởng BAP đến tái sinh đa chồi in vitro đậu Nho nhe Công thức ĐC CT1 CT2 CT3 CT4 Nồng độ BAP (mg/l) 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 Số mẫu/CT (mẫu) 30 30 30 30 30 Số chồi/mẫu 1,00a ± 0,00 2,87b ± 0,26 3,07b ± 0,42 4,07c ± 0,39 1,63a ± 0,16 Chiều cao chồi (cm) 2,51 ± 0,17 2,80 ± 0,31 2,04 ± 0,14 3,03 ± 0,14 1,81 ± 0,12 Chất lượng chồi + - Ghi chú: Các chữ khác cột biểu thị khác biệt có ý nghĩa mức α=0,05 phương pháp Test Ducan Chất lượng chồi: (-): chồi yếu, có màu vàng trắng; (+): chồi khỏe, mập, có màu xanh Hình Hình ảnh đậu Nho nhe ni cấy môi trường cảm ứng chồi A: sau ngày; B: sau tuần; C: sau tuần; D: sau tuần; E: sau tuần 66 http://jst.tnu.edu.vn; Email: jst@tnu.edu.vn Nguyễn Thị Ngọc Lan Đtg Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ ĐHTN Kết nghiên cứu cho thấy, hầu hết đoạn chồi đậu Nho nhe có khả tái sinh chồi mơi trường nghiên cứu Khả tạo đa chồi có khác biệt môi trường thay đổi nồng độ BAP Trên mơi trường đối chứng khơng có chất điều hịa sinh trưởng, mẫu cấy khơng có dấu hiệu cảm ứng tạo chồi Điều cho thấy, đoạn chồi đậu Nho nhe khơng có đủ chất điều hòa sinh trưởng nội sinh cần thiết mà phải cần cung cấp từ bên ngồi mơi trường để cảm ứng tạo chồi Trên môi trường nuôi cấy có bổ sung BAP với nồng độ tăng dần từ 0,5 mg/l đến 2,0 mg/l, quan sát thấy số chồi/mẫu tăng, tăng cao mơi trường ni cấy có bổ sung BAP 1,5 mg/l, hiệu tạo đa chồi đạt 4,07 chồi/mẫu Các cơng thức thí nghiệm cịn lại cho số chồi/mẫu đạt từ 1,63 đến 3,07 sau tuần nuôi cấy Dựa kết theo dõi tiêu chiều cao chồi cho thấy, tăng nồng độ BAP (0,5 mg/l đến 2,0 mg/l) chiều cao chồi tăng dần, tăng cao môi trường MS có bổ sung BAP 1,5 mg/l Sau tuần, chồi tăng từ 2,29 – 3,03 cm so với kích thước mẫu ban đầu Bên cạnh đó, cơng thức có bổ sung BAP 1,5 mg/l, chồi mập, có màu xanh sinh trưởng tốt so với chồi cơng thức thí nghiệm khác Trong q trình nghiên cứu hệ thống tái sinh in vitro từ đốt mầm hai giống đậu tương ĐT12 ĐT84, Nguyễn 225(08): 63 - 70 Thị Thúy Hường đtg (2009) tạo cảm ứng đa chồi mơi trường có bổ sung 1,0 mg/l BAP thích hợp [14] Kết báo cho thấy, đậu Nho nhe tái sinh chồi in vitro cao môi trường MS có bổ sung BAP 1,5 mg/l, sucrose 30 mg/l, agar 9,0 g/l với chất lượng chồi tốt 3.3 Ảnh hưởng IBA đến khả rễ chồi in vitro Giai đoạn rễ công đoạn cuối quy trình tái sinh để tạo tái sinh in vitro hoàn chỉnh Ở giai đoạn này, chất điều hịa sinh trưởng thuộc nhóm auxin sử dụng để kích thích rễ chồi Nhóm tác giả sử dụng IBA để xác định ảnh hưởng đến hình thành rễ chồi đậu Nho nhe Các chồi sinh trưởng tốt, có chiều cao từ - cm, nhiều lá, màu xanh đậm chuyển sang môi trường rễ bổ sung nồng độ IBA khác 0,1 mg/l; 0,2 mg/l; 0,3 mg/l; 0,4 mg/l; 0,5 mg/l Sau tuần nuôi cấy, rễ bắt đầu xuất môi trường IBA 0,3 mg/l Sau tuần, rễ xuất tất môi trường IBA nghiên cứu chất lượng rễ môi trường không giống Từ sau tuần đến tuần nuôi cấy, chiều dài rễ tăng đáng kể có thêm nhiều rễ phụ cơng thức nghiên cứu (Hình 2) Bảng Ảnh hưởng nồng độ IBA đến khả tạo rễ chồi tái sinh Công thức MS0 CT1 CT2 CT3 CT4 CT5 Nồng độ IBA (mg/l) 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 Số mẫu/CT Số rễ/chồi Chiều dài rễ (cm) Chất lượng rễ 30 30 30 30 30 30 2,57a ± 0,26 3,63c ± 0,18 2,73a ± 0,28 4,70d ± 0,27 3,33b ± 0,25 2,27a ± 0,28 3,09a ± 0,18 3,38a ± 0,10 3,21a ± 0,22 4,46b ± 0,08 3,27a ± 0,20 2,88a ± 0,22 Xấu Xấu Tốt Tốt Xấu Xấu Ghi chú: CT: cơng thức thí nghiệm; Các chữ khác cột biểu thị khác biệt có ý nghĩa mức α=0,05 phương pháp Test Ducan Chất lượng rễ: Rễ tốt: số lượng rễ nhiều, dài, mập, có màu trắng, khỏe; Rễ xấu: số lượng rễ ít, ngắn, cịi cọc, có màu vàng nâu http://jst.tnu.edu.vn; Email: jst@tnu.edu.vn 67 Nguyễn Thị Ngọc Lan Đtg Tạp chí KHOA HỌC & CƠNG NGHỆ ĐHTN 225(08): 63 - 70 Hình Hình ảnh ni cấy môi trường rễ (MS +IBA 0,3 mg/l + sucrose 30 g/l + agar g/l; pH = 5,8); A: sau tuần; B: sau tuần; C: sau tuần Kết theo dõi trình phát sinh rễ sau tuần bảng cho thấy, tiêu số rễ/chồi thay đổi khác tùy theo nồng độ IBA Ở công thức đối chứng (MS0) số rễ trung bình chồi 2,57 gần tương đương với số rễ trung bình cơng thức có bổ sung 0,2 0,5 mg/l IBA Ở nồng độ 0,3 mg/l IBA số rễ trung bình đạt 4,70 rễ/chồi cao (CT3) so với cơng thức cịn lại Đặc điểm tương tự tiêu theo dõi chiều dài rễ Ở công thức CT3, chiều dài rễ đạt cao (4,46 cm) chất lượng rễ tốt nhất, vượt qua ngưỡng nồng độ tối ưu rễ sinh trưởng đi, công thức CT5 chiều dài rễ so với công thức khác tự nhiên, khơng ổn định phịng ni Các lựa chọn để đưa môi trường tự nhiên khỏe mạnh, thân mập, có màu xanh đậm, rễ khỏe có màu trắng đục (Hình 3) Như vậy, mơi trường bổ sung IBA với nồng độ 0,3 mg/l thích hợp cho rễ đậu Nho nhe in vitro, tỷ lệ tạo rễ 98% với số lượng rễ nhiều, mập khỏe, có màu trắng đục Kết tương tự với nghiên cứu Nguyễn Thị Lài đtg (2018) nhân giống in vitro Sâm cau Tác giả khẳng định việc bổ sung BAP với nồng độ 0,5 mg/l vào môi trường nuôi cấy tạo tỷ lệ chồi rễ cao chất lượng rễ tốt [15] Bảng Ảnh hưởng giá thể tới tỷ lệ sống đậu Nho nhe tái sinh in vitro Tương tự, nghiên cứu Nguyễn Thanh Hải đtg (2019) cho thấy mơi trường rễ thích hợp cho chồi thảo mơi trường MS có bổ sung 0,5 mg/l BA, hiệu rễ đạt 100% sau tuần nuôi cấy [16] 3.4 Chuyển in vitro môi trường tự nhiên Việc nghiên cứu điều kiện chuyển tái sinh in vitro ngồi mơi trường khâu quan trọng Khi chuyển in vitro trồng vườn ươm, phải thích nghi với điều kiện 68 Nghiên cứu sử dụng loại giá thể khác để xác định giá thể phù hợp cho sinh trưởng phát triển đậu Nho nhe sau nuôi cấy in vitro Các giá thể sử dụng nghiên cứu nhóm tác giả chia làm bốn cơng thức, cơng thức CT1 bao gồm đất thịt; CT2 có tỷ lệ đất thịt : trấu hun 2:1; CT3 có tỷ lệ đất thịt : cát 2:1; CT4 có tỷ lệ cát : trấu hun 1:1, kết trình bày bảng Cơng thức Giá thể CT1 CT2 CT3 CT4 Đất thịt (100%) Đất thịt : trấu hun (2:1) Đất thịt : cát (2:1) Cát : trấu hun (1:1) Tỷ lệ sống (%) 80,00 98,00 36,70 33,33 Bảng cho thấy đậu Nho nhe in vitro thích hợp với giá thể cơng thức CT1 (100% đất thịt) công thức CT2 (2 đất thịt: trấu hun) Thể tỷ lệ sống cao, đạt 80% giá thể đất thịt 100% 98% giá thể đất thịt : trấu hun tỷ lệ 2:1 Ở loại giá thể có cát trộn với đất thịt trấu hun tỷ lệ sống giảm mạnh 33,33% (CT4) 36,70% (CT3) Điều khác với kết nghiên cứu hệ thống tái sinh in vitro Đậu xanh Nguyễn Tuấn Điệp đtg (2017) xác định cát trấu hun (tỷ lệ 1:1) giá thể phù hợp với tỷ lệ sống cao, đạt 100% [17] Như http://jst.tnu.edu.vn; Email: jst@tnu.edu.vn Nguyễn Thị Ngọc Lan Đtg Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ ĐHTN 225(08): 63 - 70 vậy, giá thể thích hợp để trồng đậu Nho nhe sau tái sinh in vitro đất thịt : trấu hun với tỷ lệ 2:1 Kết tương tự với công bố nghiên cứu nhân nhanh Nưa kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật, giá thể sử dụng, giá thể đất trấu hun phù hợp để trồng Nưa sau tái sinh hoàn chỉnh, đạt hiệu sống sót bầu 95,3% [18] Hình Cây tái sinh in vitro trước chuyển bầu đất (A, B) trồng bầu đất chứa giá thể đất thịt, trấu hun tỷ lệ 2:1 sau tuần (C) [4] R K Ashaa, A V V Koundinya, A Das, and Kết luận S B Chattopadhya, “A review on an Hạt đậu Nho nhe khử trùng cồn underutilised multipurpose legume: rice 70o phút, nước javen 60% 20 bean,” Acta Horticuture, vol 1241, pp 57-64, 2019 phút cho tỷ lệ hạt nảy mầm 98%, tỷ lệ mẫu [5] R K.Arora, K P S Chandel, B S Joshi, and 100%, độ đồng mầm cao K C Pant, “Rice bean: tribal pulse of Eastern Môi trường MS có bổ sung BAP 1,5 India,” Economic Botany, vol 34, pp 260mg/l, sucrose 30 g/l, agar g/l, nước dừa 10% 263, 1980 thích hợp cho tạo đa chồi từ chồi đậu [6] B V Pavithravani, R Gowda, K Bhanuprakash, S Ramesh, M A Rao, S Nho nhe, số chồi/mẫu đạt 4,07, chồi mập, Subramanya, and C Gireesh, “Biochemical phát triển cân đối Môi trường MS có Components: an index of bruchid resistance in bổ sung IBA 0,3 mg/l, sucrose 30 g/l, agar rice bean [Vigna umbellata (Thunb.) Ohwi g/l thích hợp cho rễ đậu Nho nhe in and Ohashi],” Legume Reseach, vol 36, no 6, pp 582-588, 2013 vitro Giá thể phù hợp để chuyển đậu Nho [7] N Tomooka, K Kashiwaba, D A Vaughan, nhe in vitro tự nhiên đất thịt M Ishimoto, and Y Egawa, “The trấu hun với tỷ lệ 2:1 effectiveness of evaluating wild species: searching for sources of resistance to bruchid beetles in the genus Vigna subgenus TÀI LIỆU THAM KHẢO/ REFERENCES Ceratotropis,” Euphytica, vol 115, pp 27-41, [1] Ohwi, and H Ohashi, “Vigna umbellata 2000 (Thunb.)”, 2010 [Online] Available: [8] J Sambrook, and D W Russell, Molecular http://www.theplantlist.org/tpl1.1/record/ildCloning: A Laboratory Manua Cold Spring 3585 [Accessed May 2020] Harbor Laboratory Press, New York 2001 [2] R Katoch, “Nutritional potential of rice bean [9] S Jayanti, and G M Spra, “In vitro (Vigna umbellata): An underutilized legume,” intoduction of multiple shoots and plant Journal of food science, vol 78, no 1, pp 8regeneration in Vigna,” In vitro Cellular & 17, 2013 Developmental Biology-Plant, vol 34, no.4, [3] P Saikia, C R Sarkar, and I Borua, pp 276-280, 1998 “Chemical composition, antinutritional factors [10] Sonia, R Saini, R P Singh, and K P and effect of cooking on nutritional quality of Jaiwal, “Agrobacterium tumefaciens mediated rice bean (Vigna umbellata (Thunb.) Ohwi transfer of Phaseolus vulgaris α-amylase and Ohashi),” Food Chemistry, vol 67, no 4, inhibitor-1 gene into mungbean Vigna radiata (L.) Wilczek using bar as selectable marker,” pp 347-352, 1999 http://jst.tnu.edu.vn; Email: jst@tnu.edu.vn 69 Nguyễn Thị Ngọc Lan Đtg Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ ĐHTN Plant Cell Reporters, vol 26, no 2, pp 187198, 2007 [11] M Muruganantham, S Amutha, N Selvaraj, G Vengadesan, and A Ganapathi, “Efficient Agrobacterium mediated transformation of Vigna mungo using immature cotyledonarynode explants and phosphinothricin as the selection agent,” In vitro Cellular & Developmental Biology-Plant, vol 43, pp 550-557, 2007 [12] S K Bhadra, N Hammatt, and M R Davey, “Tissue and protoplast culture of rice bean (Vigna umbellata (Thunb.) Ohwi and Ohashi),” Tropical Agriculture, vol 68, no.4, pp 345-348, 1991 [13] T Murashige, and F Skoog, “A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue culture,” Physiology Planta, vol 15, pp 473-497, 1962 [14] H T T Nguyen, D T N Tran, H T Nguyen, M H Chu, S V Le, and H H Chu, “Development of in vitro regeneration system in soybean (Glycine max (L.) Merill) for gene transfer,” TNU Journal of Science and Technology, vol 52, no 4, pp 82-88, 2009 70 225(08): 63 - 70 [15] L T Nguyen, S H Pham, P T T Bui, D M Pham, T T Do, B T Nguyen, and T I Nguyen, “Research on in vitro propagation of Curculigo orchioides Gaertn From growing apex culture,” Vietnam Journal of Science and Technology, vol 60, no 12, pp 50-54, 2018 [16] H T Nguyen, D T Nguyen, T T Nguyen, H T N Nguyen, H T L Nguyen, S T Dinh, T T T Dang, L T T Nguyen, and H T T Pham, “In vitro propagation of cardamom (Amomum aromaticum Roxb.),” Vietnam Journal of Agricultural Science, vol 17, no 7, pp 577-587, 2019 [17] D T Nguyen, T T Hoang, and D T M Nguyen, “The research of the regeneration systems on Mung Bean (Vigna radiata (L.) Wilczek) for gene transfer,” Vietnam Science and Technology Journal of Agricultural and rular development, vol 11/2017, pp 79-86, 2017 [18] D X Le, and D V Nguyen, “Rapid multiplication of Amorphophallus krausei by tissue culture and plant cell techniques,” Journal of Tropical Science and Technology, vol 6, no 3, pp 37-45 2014 http://jst.tnu.edu.vn; Email: jst@tnu.edu.vn ... zeatin (0,5-1 mg/l) [12] Tuy nhiên, chưa có nghiên cứu tối ưu tái sinh đa chồi đậu Nho nhe công bố Việt Nam Vì vậy, báo này, nhóm tác giả trình bày kết nghiên cứu hệ thống tái sinh đa chồi in vitro. .. Kết nghiên cứu ảnh hưởng BAP đến tái sinh đa chồi đậu Nho nhe sau tuần nuôi cấy trình bày bảng hình Bảng Ảnh hưởng BAP đến tái sinh đa chồi in vitro đậu Nho nhe Công thức ĐC CT1 CT2 CT3 CT4 Nồng... chất lượng chồi tốt 3.3 Ảnh hưởng IBA đến khả rễ chồi in vitro Giai đoạn rễ cơng đoạn cuối quy trình tái sinh để tạo tái sinh in vitro hoàn chỉnh Ở giai đoạn này, chất điều hịa sinh trưởng thuộc