Khảo sát khả năng kháng khuẩn và kháng oxy hóa của cao chiết cây dừa cạn catharanthus roseus

An Giang, ngày 15 tháng 05 năm 2023 Ngƣời thực hiện Trang 6 TÓM TẮT Nghiên cứu “Khảo sát khả năng kháng khuẩn và kháng oxy hóa của cao chiết cây dừa cạn Catharanthus roseus” đƣợc thực

TRƯỜNG ĐẠI HỌC AN GIANG KHOA NÔNG NGHIỆP – TÀI NGUYÊN THIÊN NHIÊN

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC

KHẢO SÁT KHẢ NĂNG KHÁNG KHUẨN

VÀ KHÁNG OXY HÓA CỦA CAO CHIẾT CÂY DỪA CẠN

(Catharanthus roseus)

TRƯƠNG THỊ MỸ CHI

AN GIANG, THÁNG 05 NĂM 2023

ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

TRƯỜNG ĐẠI HỌC AN GIANG KHOA NÔNG NGHIỆP – TÀI NGUYÊN THIÊN NHIÊN

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC

KHẢO SÁT KHẢ NĂNG KHÁNG KHUẨN

VÀ KHÁNG OXY HÓA CỦA CAO CHIẾT CÂY DỪA CẠN

(Catharanthus roseus)

TRƯƠNG THỊ MỸ CHI MSSV: DSH192418

GIÁO VIÊN HƯỚNG DẪN

Ths BẰNG HỒNG LAM

AN GIANG, THÁNG 05 NĂM 2023

CHẤP NHẬN CỦA HỘI ĐỒNG Khóa luận “Khảo sát khả năng kháng khuẩn và kháng oxy hóa của cao

chiết cây dừa cạn ( Catharanthus roseus )” do sinh viên Trương Thị Mỹ Chi

thực hiện dưới sự hướng dẫn của Ths Bằng Hồng Lam

Giáo viên hướng dẫn

Ths Bằng Hồng Lam

LỜI CẢM TẠ

Sau quá trình học tập, nghiên cứu tại khoa Nông nghiệp - TNTN trường

Đại học An Giang, em đã tiếp thu được rất nhiều kiến thức, kinh nghiệm quý

báu nhờ sự giảng dạy, hướng dẫn tận tình của các thầy cô trong bộ môn Em

xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến cô Bằng Hồng Lam đã luôn quan tâm, ủng

hộ và tận tình hướng dẫn, giúp đỡ hết mình và truyền đạt những kinh nghiệm,

kiến thức vô cùng quý báu cho em trong suốt thời gian thực hiện khóa luận tốt

nghiệp này

Em cũng xin được gửi lời cảm ơn chân thành đến Ban Giám hiệu

Trường Đại học An Giang, Ban chủ nhiệm Khoa Nông nghiệp - Tài nguyên

thiên nhiên, đã tạo điều kiện thuận lợi cho em học tập, học hỏi nhiều kinh

nghiệm và tạo mọi điều kiện về trang thiết bị, dụng cụ để em có thể thực hiện

tốt đề tài nghiên cứu của mình

Đặc biệt, con xin gửi lời cảm ơn chân thành đến cha mẹ đã luôn chăm

sóc, quan tâm và động viên con suốt trong quãng đường học tập để con có

thêm nghị lực và quyết tâm để thực hiện ước mơ của mình Con xin gửi lời

biết ơn sâu sắc đến cha mẹ

Cảm ơn quý thầy cô Bộ môn Công nghệ sinh học ˗ chuyên ngành vi sinh

đã tận tình giảng dạy, giúp đỡ em trong những năm học vừa qua để em có đủ

những kiến thức và kinh nghiệm bổ ích để em thực hiện đề tài

Cuối cùng, em xin chúc tất cả quý thầy cô và bạn bè luôn dồi dào sức

khỏe và thành công trên bước đường sự nghiệp

Xin chân thành cảm ơn!

An Giang, ngày 15 tháng 05 năm 2023 Người thực hiện

Trương Thị Mỹ Chi

LỜI CAM KẾT

Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của tôi Các số liệu và kết quả

có nguồn gốc rõ ràng Các kết luận mới về khoa học của đề tài này chưa từng được công bố trong bất kỳ tài liệu nào trước đây

An Giang, ngày 15 tháng 05 năm 2023

Người thực hiện

Trương Thị Mỹ Chi

và hiệu suất trích ly trung bình của cao chiết cây dừa cạn khá cao 8,82 Bên cạnh đó kết quả khảo sát khả năng kháng oxy hóa của cao chiết cây dừa cạn bằng phương pháp DPPH cho thấy cao chiết cây dừa cạn có khả năng kháng oxy hóa đạt 95,30 ở nồng độ 500 μg/mL và giá trị IC50 = 245,65 μg/mL Ngoài ra, việc khảo sát khả năng kháng khuẩn của cao chiết cây dừa cạn với

năm dòng vi khuẩn Escherichia coli (E coli), Salmonella sp., Staphylococcus sp., Vibrio sp và Propionibacterium acnes (P.acnes) ở các nồng độ từ 10 ˗ 50

mg/mL so với đối chứng âm (0 mg/mL) và đối chứng dương (kháng sinh Tetracyclin 30µg) cho thấy khả năng kháng khuẩn trung bình của cao chiết cây dừa cạn với năm dòng vi khuẩn trên đều khác biệt có ý nghĩa thống kê ở

mức 5 với nhau, trong đó khả năng kháng đối với E coli là cao nhất, tiếp theo là P.acnes, Vibrio sp., Staphylococcus sp và thấp nhất là Salmonella sp

với đường kính vòng kháng khuẩn lần lượt là 6,52 mm; 6,33 mm; 5,90 mm; 5,48 mm và 4,50 mm Khả năng kháng khuẩn trung bình giữa các nồng độ cao chiết cũng đều khác biệt có ý nghĩa về mặt thống kê ở mức 5 với nhau và đều thấp hơn kháng sinh Tetracyclin (đối chứng dương), trong đó khả năng kháng khuẩn cao nhất là ở nồng độ 50 mg/mL và giảm dần theo t lệ giảm dần của các nồng độ, thấp nhất là ở nồng độ 10 mg/mL, và không kháng ở nồng

độ 0 mg/mL Cụ thể, qua các nồng độ 50; 40; 30; 20 và 10 mg mL thì đường kính vòng kháng khuẩn cũng giảm lần lượt là 5,73 mm; 4,33 mm; 3,73 mm; 2,40 mm và 1,33 mm và kháng sinh là 22,80 mm

Từ khóa: Cao chiết cây dừa cạn, hợp chất tự nhiên, kháng khuẩn, kháng oxy

hóa

MỤC LỤC

CHẤP NHẬN CỦA HỘI ĐỒNG i

LỜI CẢM TẠ ii

LỜI CAM KẾT iii

TÓM TẮT iv

MỤC LỤC v

DANH S CH BẢNG ix

DANH S CH H NH x

DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT xiii

CHƯƠNG 1 GIỚI THIỆU 1

1.1 ĐẶT VẤN ĐỀ 1

1.2 MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU 2

1.3 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 2

1.4 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 2

1.5 NHỮNG ĐÓNG GÓP CỦA ĐỀ TÀI 2

CHƯƠNG 2 TỔNG QUAN VỀ VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 3

2.1 GIỚI THIỆU VỀ CÂY DỪA CẠN 3

2.1.1 Phân loại theo khoa học 3

2.2 ĐẶC ĐIỂM CHUNG 4

2.2.1 Đặc điểm của cây dừa cạn 4

2.2.2 Phân bố của cây dừa cạn 4

2.2.3 Thành phần hóa học của cây dừa cạn 5

2.2.4 Công dụng của cây dừa cạn 5

2.3 HOẠT TÍNH CỦA C C BỘ PHẬN CÂY DỪA CẠN 6

2.3.1 Hoạt tính kháng khuẩn 6

2.3.2 Hoạt tính chống oxy hóa 7

2.3.3 Hoạt tính kháng nấm 7

2.4 TỔNG QUAN VỀ PHƯƠNG PH P HÕA TAN CHIẾT XUẤT THỰC VẬT 8

2.4.1 Định nghĩa 8

2.4.2 Mục tiêu của hòa tan chiết xuất 8

2.4.3 Các phương pháp hòa tan chiết xuất 8

2.5 TỔNG QUAN VỀ TRÍCH LY 10

2.5.1 Định nghĩa 10

2.5.2 Dung môi trích ly 10

2.6 TỔNG QUAN VỀ CAO CHIẾT (CAO THUỐC) 10

2.6.1 Định nghĩa 10

2.6.2 Đặc điểm và phân loại 10

2.6.3 Yêu cầu chất lượng 11

2.6.4 Lợi ích của cao chiết 12

2.7 CƠ CHẾ KH NG KHUẨN CỦA C C HỢP CHẤT CÓ NGUỒN GỐC THỰC VẬT 12

2.7.1 Định nghĩa 12

2.7.2 Cơ chế kháng khuẩn 12

2.8 PHƯƠNG PH P X C Đ NH HOẠT TÍNH KH NG KHUẨN 13

2.8.1 Phương pháp khuếch tán trên đĩa thạch 13

2.8.2 Phương pháp khuếch tán trên giếng thạch 13

2.9 GỐC TỰ DO VÀ HOẠT TÍNH KH NG OXY HÓA 13

2.9.1 Gốc tự do 13

2.9.2 Chất chống oxy hóa 13

2.10 MỘT SỐ PHƯƠNG PH P Đ NH GI HOẠT TÍNH KH NG OXY HÓA 14

2.10.1 Phương pháp khử gốc tự do DPPH 14

2.10.2 Phương pháp sử dụng TBA – đo lượng MDA 14

2.10.3 Phương pháp đánh giá khả năng kết hợp với ion sắt II 15

2.10.4 Phương pháp pha loãng 15

2.11 SƠ LƯỢC VỀ C C CHỦNG VI SINH VẬT GÂY BỆNH 16

2.11.1 Staphylococcus aureus 16

2.11.2 Escherichia coli 17

2.11.3 Salmonella enterica 18

2.11.4 Propionibacterium acnes 19

2.11.5 Vibrio parahaemolyticus 20

2.12 T NH H NH NGHIÊN CỨU TRONG NƯỚC VÀ TRÊN THẾ GIỚI 21

2.12.1 Tình hình nghiên cứu trong nước 21

2.12.2 Tình hình nghiên cứu trên thế giới 22

CHƯƠNG 3 PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PH P NGHIÊN CỨU 24

3.1 PHƯƠNG TIỆN NGHIÊN CỨU 24

3.1.1 Thời gian và địa điểm tiến hành thí nghiệm 24

3.1.2 Vật liệu thí nghiệm 24

3.1.3 Dụng cụ 24

3.1.4 Thiết bị 25

3.1.5 Hóa chất 25

3.1.6 Môi trường phân lập 25

3.2 PHƯƠNG PH P NGHIÊN CỨU 25

3.2.1 Nội dung 1: Thu nhận cao chiết từ cây dừa cạn 26

3.2.2 Nội dung 2: Định tính một số hợp chất thiên nhiên có trong cao chiết cây dừa cạn 26

3.2.3 Nội dung 3: Khảo sát khả năng kháng oxy hóa của cao chiết cây dừa cạn bằng phương pháp khử gốc tự do DPPH 28

3.2.4 Nội dung 4: Khảo sát khả năng kháng khuẩn của cao chiết cây dừa cạn 31

3.3 PHƯƠNG PH P PHÂN TÍCH SỐ LIỆU 32

CHƯƠNG 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 33

4.1.Trích cao bằng dung môi ethanol 33

4.2 Kết quả định tính một số hợp chất có hoạt tính sinh học trong cao chiết cây dừa cạn 34

4.3 Khả năng kháng oxy hóa của cao chiết ethanol cây dừa cạn bằng phương pháp DPPH 36 4.4 Kết quả khảo sát khả năng kháng khuẩn của cao chiết cây dừa cạn

với vi khuẩn gây bệnh E Coli, Salmonella sp., Staphylococcus sp.,

Vibrio sp và P.acnes 41

CHƯƠNG 5 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGH 53

5.1 KẾT QUẢ 53

5.2 KIẾN NGH 53

TÀI LIỆU THAM KHẢO 53

PHỤ LỤC CHƯƠNG 63

DANH SÁCH BẢNG

Bảng 1 Định tính một số hợp chất trong cao chiết cây dừa cạn 28

Bảng 2 Kết quả chiết cao ethanol cây dừa cạn 34

Bảng 3 Kết quả định tính một số hợp chất trong cao chiết cây dừa cạn 35

Bảng 4 Kết quả khảo sát khả năng khử gốc tự do của cao chiết dừa cạn 37

Bảng 5 Kết quả khảo sát khả năng khử gốc tự do của Vitamin C bằng

phương pháp DPPH 39

Bảng 6 Giá trị IC50 kháng oxy hóa của cao chiết và vitamin C 40

Bảng 7 Khả năng kháng khuẩn của cao chiết cây dừa cạn 42

DANH SÁCH HÌNH

Hình 1 Cây dừa cạn 3

Hình 2 Chất chống oxy hóa được sản xuất bởi Catharanthus roseus 5

Hình 3 Phản ứng trung hòa gốc DDPH 14

Hình 4 Phản ứng trong phương pháp sử dụng TBA-đo lượng MDA 15

Hình 5 Sơ đồ quy trình bố trí thí nghiệm tổng quát 26

Hình 6 Sơ đồ quy trình thử hoạt tính kháng oxy hóa bằng DPPH 30

Hình 7 Sơ đồ thực hiện khảo sát khả năng kháng khuẩn của cao chiết cây

dừa cạn 32

Hình 8 Quy trình trích cao ethanol cây dừa cạn 33

Hình 9 Đồ thị thể hiện khả năng khử gốc tự do DPPH của cao chiết cây dừa cạn 38

Hình 10 Khả năng kháng oxy hóa của cao chiết cây dừa cạn với nồng độ từ 0 ˗ 500 μg mL 38

Hình 11 Đồ thị biểu diễn khả năng khử gốc tự do DPPH của vitamin C 39

Hình 12 Khả năng khử gốc tự do của nồng độ Vitamin C từ 0 ˗ 24 µg/mL 40

Hình 13 Kháng sinh Tetracyclin với các dòng vi khuẩn E coli, Salmonella sp., Staphylococcus sp., Vibrio sp và P.acnes 46

Hình 14 Đối chứng âm (DMSO 100%) với các dòng vi khuẩn E coli, Salmonella sp., Staphylococcus sp., Vibrio sp và P.acnes 47

Hình 15 Khả năng kháng khuẩn của cao chiết cây dừa cạn với các dòng vi khuẩn E.coli, Salmonella sp., Staphylococcus sp., Vibrio sp và P.acnes ở nồng độ 10 mg/mL 48

Hình 16 Khả năng kháng khuẩn của cao chiết cây dừa cạn với các dòng vi khuẩn E coli, Salmonella sp., Staphylococcus sp., Vibrio sp và P.acnes ở nồng độ 20 mg/mL 49

Hình 17 Khả năng kháng khuẩn của cao chiết cây dừa cạn với các dòng vi khuẩn E coli, Salmonella sp., Staphylococcus sp., Vibrio sp và P.acnes ở nồng độ 30 mg/mL 49

Hình 18 Khả năng kháng khuẩn của cao chiết cây dừa cạn với các dòng vi khuẩn E coli, Salmonella sp., Staphylococcus sp., Vibrio sp và P.acnes ở nồng độ 40 mg/mL 51

Hình 19 Khả năng kháng khuẩn của cao chiết cây dừa cạn với các dòng vi

khuẩn E coli, Salmonella sp., Staphylococcus sp., Vibrio sp và P.acnes ở

nồng độ 50 mg/mL 52

CHƯƠNG 1 GIỚI THIỆU

1.1 ĐẶT VẤN ĐỀ

Trong các thập niên gần đây, các nguồn dược liệu từ thực vật và các chế phẩm thực vật, đặc biệt là các nguồn thực vật được sử dụng trong dân gian ngày càng nhiều, được các nhà nghiên cứu trong và ngoài nước quan tâm nhiều nhằm tìm kiếm các minh chứng khoa học cho tác dụng dược lý của chúng Thực vật được xem như là một trong những nguồn thay thế lý tưởng vì mức

độ an toàn, không hoặc ít phản ứng phụ và có nhiều đích tác động khác nhau lên tế bào vi khuẩn nên ít có nguy cơ gây ra sự kháng thuốc (Raskin, 2002; Ahn và cs., 1994)

Đất nước ta nằm trong vùng khí hậu nhiệt đới với nền thực vật vô cùng phong phú, nguồn dược liệu cùng với nền y học lâu đời Theo số liệu thống kê gần đây, hệ thực vật Việt Nam có trên 10000 loài trong đó có khoảng 3200 loài cây thảo dược (Võ Văn Chi, 2012) Các loại thảo dược điển hình như thầu dầu

(R communis L.), lưỡi rắn (H corymbosa L.), mật gấu (V amygdalina del.), chùm ngây (M oleifera), sài đất (W calendulacea (L) Less), ô rô (A

ilicifolius L.), đã được xác định là có hoạt tính kháng khuẩn rất mạnh đối

với một số loại vi khuẩn gây bệnh như Vibrio parahaemolyticus và Vibrio

harveyi (Hồng Mộng Huyền và cs., 2018).

Dừa cạn (Catharanthus roseus (L.) G Don., ) tên đồng nghĩa là Vinca rosea

L thuộc họ Trúc đào (Apocynaceae) là một loài cây được dùng làm thuốc và làm cảnh (Phạm Hoàng Hộ, 2006) Dừa cạn thích nghi tốt với mọi điều kiện khí hậu ở Việt Nam, cây ra hoa quanh năm, lâu tàn và được lai tạo thành công với nhiều màu sắc dùng để trang trí, tạo cảnh quan đô thị (Bùi Hồng Hải, Nguyễn Thị Y Thanh & Đỗ Minh Hiếu, 2020) Ngoài ra, rễ và lá dừa cạn chứa hơn 55 alkaloid đã được định danh với các công dụng khác nhau: vincaleuciblastin, leurocristine và leurosidine có tác dụng chống ung thư; catharantin giúp lợi tiểu; vincaleuciblastin (vinblastine) là thuốc độc bảng A

dùng để trị bệnh Hodgkin, chống Plasmodium falciparum (Phạm Hoàng Hộ,

2006; Đỗ Tất Lợi, 1999) Mặc dù cây dừa cạn đã được sử dụng từ lâu đời nhưng những công trình nghiên cứu về cây vẫn còn hạn chế Việc đánh giá hoạt tính sinh học của cây dừa cạn là điều hết sức cần thiết, góp phần hoàn thiện các phương thuốc dân gian có tiềm năng được sử dụng trong điều trị bệnh

Với cơ sở khoa học và ý nghĩa thực tiễn trên, đề tài “Khảo sát khả năng kháng

khuẩn và kháng oxy hóa của cao chiết cây dừa cạn (Catharanthus roseus) ”

được tiến hành để xác định hiệu suất trích ly của cao chiết từ cây dừa cạn, định tính một số hợp chất thiên nhiên có trong cao chiết cây dừa cạn cũng như khảo sát khả năng kháng khuẩn và kháng oxy hóa của cao chiết cây dừa cạn

1.2 MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU

Thu nhận được cao chiết cây dừa cạn dạng bột khô và định tính một số hợp chất thiên nhiên có trong cao chiết cây dừa cạn

Đánh giá được khả năng kháng oxy hóa và kháng khuẩn của cao chiết cây dừa cạn

1.3 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU

Cây dừa cạn (Catharanthus roseus) được thu hái tại xã Phú Hưng, huyện Phú

Tân, t nh An Giang

Năm dòng vi khuẩn: Escherichia coli, Salmonella enterica, Staphylococcus

aureus, Propionibacterium acnes v Vibrio parahaemolyticus được lưu trữ

tại phòng thí nghiệm Công nghệ sinh học, Khu thí nghiệm Trung tâm, Trường Đại học An Giang

1.4 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU

Khảo sát hiệu suất thu hồi cao chiết từ cây dừa cạn

Định tính một số hợp chất thiên nhiên có trong cao chiết cây dừa cạn

Khảo sát khả năng kháng oxy hóa của cao chiết cây dừa cạn

Khảo sát khả năng kháng khuẩn của cao chiết cây dừa cạn

1.5 NHỮNG ĐÓNG GÓP CỦA ĐỀ TÀI

Về mặt khoa học: Kết quả nghiên cứu sẽ cung cấp nguồn tài liệu tham khảo cho các nghiên cứu tiếp theo về cao chiết cây dừa cạn về một số hợp chất thiên nhiên có trong cao chiết cây dừa cạn cũng như khả năng kháng khuẩn và kháng oxy hóa của cao chiết cây dừa cạn đối với một số dòng vi khuẩn

Trong nông nghiệp và công nghiệp: Giúp người dân biết tận dụng và khai thác thêm nguồn dừa cạn và cao chiết từ cây dừa cạn giúp nâng cao giá trị sử dụng của cây và giảm thải rác thải ra môi trường Sản xuất cao chiết cây dừa cạn có khả năng kháng khuẩn và kháng oxy hóa và ứng dụng vào một số sản phẩm

hỗ trợ sức khỏe con người và đem lại hiệu quả kinh tế

Về mặt y học: Cung cấp nguồn dược liệu dồi dào cho các nghiên cứu thuốc điều trị bệnh từ cao chiết cây dừa cạn

CHƯƠNG 2 TỔNG QUAN VỀ VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 2.1 GIỚI THIỆU VỀ CÂY DỪA CẠN

2.1.1 Phân loại theo khoa học

Tên khoa học: Catharanthus roseus (L.) G Don; Vinca roseus L.; Lochnera

Chi Dừa cạn Madagascar (danh pháp khoa học: Catharanthus) là một chi gồm

8 loài cây thân thảo sống lâu năm, trong số này có 7 loài là đặc hữu của Madagascar Trong thực tế, các loài trong chi này chia sẻ cùng một tên gọi

chung (Dừa cạn) với các loài trong chi Vinca (Dừa cạn Châu Âu)

Các loài trong chi:

Catharanthus coriaceus: dừa cạn lá cứng (Markgr, 1970)

Catharanthus lanceus (Bojer ex A.DC.): dừa cạn lá kiếm (Pichon, 1948) Catharanthus longifolius (Pichon): dừa cạn lá thuôn (Pichon, 1949)

Catharanthus ovalis: dừa cạn tròn (Markgr, 1970)

Catharanthus pusillus (Murray) G Don: dừa cạn Ấn Độ (Murray, 1837) Catharanthus roseus (L.) G Don, 1837: Dừa cạn, trường xuân hoa, hải đằng,

bông dừa

Catharanthus scitulus (Pichon): dừa cạn hoa tím (Pichon, 1949)

Catharanthus trichophyllus (Baker): dừa cạn lá nhám (Pichon, 1949)

2.2 ĐẶC ĐIỂM CHUNG

2.2.1 Đặc điểm của cây dừa cạn

Dừa cạn là cây thân thảo, sống nhiều năm, cao 40 ˗ 80 cm, phân nhiều cành thẳng đứng, cây có bộ rễ phát triển, thân gỗ ở phía gốc, mềm ở phần trên, mọc thành bụi đầy, có cành đứng (Đỗ Tất Lợi, 2006)

Lá mọc đối, thuôn dài, đầu hơi nhọn, phía cuống hẹp, nhọn, dài 3 ˗ 8 cm, rộng

1 ˗ 2,5 cm, không có nhựa mủ Hoa trắng hoặc hồng, mùi thơm, mọc riêng lẻ

ở kẽ lá phía trên, đài hợp thành ống ngắn Tràng hợp hình đinh Phiến có 5 thùy, 5 nhị đính trên tràng, 2 lá noãn hợp với nhau ở vòi Quả gồm 2 quả đại, dài 2,5 ˗ 5 cm, rộng 2 ˗ 3 mm, mọc thẳng đứng hơi ngả sang hai bên, trong có

12 ˗ 20 hạt nhỏ màu nâu nhạt, hình trứng, trên mặt hạt có những mụn nổi thành hàng dọc Mùa hoa, quả gần như quanh năm Rễ thường ch có một rễ cái và chùm rễ phụ Rễ cái đâm thẳng xuống đất , có thể đạt chiều dài 35 ˗ 40

cm, rễ phụ mọc thành chùm thưa, ngắn, phát triển theo chiều ngang (Đỗ Tất Lợi, 2006)

2.2.2 Phân bố của cây dừa cạn

Dừa cạn là một loại cây thảo sống lâu năm, có nguồn gốc từ quần đảo Madagasca của Châu Phi Vào khoảng đầu thể kỷ 18, chúng du nhập vào các nước có khí hậu nhiệt đới ở Nam và Đông Nam , trong đó có Việt Nam

và đảo Hải Nam của Trung Quốc Đến giữa thế kỷ 18 cây dừa cạn dần được trồng nhiều hơn ở các nước Châu Âu để làm cảnh và phục vụ cho mục đích nghiên cứu (Đỗ Tất Lợi, 2006)

Ở nước ta, dừa cạn mọc hoang khá nhiều ở vùng bãi cát ven biển từ Hải Phòng đến Kiên Giang Nơi tập trung nhiều nhất là các t nh Kiên Giang, đảo Phú Quốc và Côn Đảo, có nhiều ở Thanh Hóa, Nghệ An, Thừa Thiên ˗ Huế,

Quảng Nam ˗ Đà Nẵng, Bình Định, Phú Yên Cây còn mọc cả ở những vùng đồi, thảm cây bụi trên đất pha cát hoặc sỏi đá, độ cao tới 1500 m Nguồn dừa cạn mọc tự nhiên ở Việt Nam tương đối dồi dào (Đỗ Huy Bích và cs., 2004)

2.2.3 Thành phần hóa học của cây dừa cạn

Từ dừa cạn, người ta đã chiết được các chất sau đây: Axit pyrocatechic, sắc tố flavonic (glucozit của quercetol và campferol) và anthocyanic từ thân và lá dừa cạn hoa đỏ Ngoài ra từ lá người ta còn chiết được acid ursoloc, từ rễ chiết được cholin (Đỗ Tất Lợi, 2006)

Dừa cạn tạo ra hơn 120 alkaloid, 70 trong số đó có hoạt tính dược lý Chiết xuất từ cây dừa cạn có đặc tính chống oxy hóa tốt do sự hiện diện của nhiều loại polyphenol khác nhau đã được xác định (Barrales-Cureño, 2019)

H nh 2 Chất chống oxy hóa được sản xuất bởi Catharanthus roseus

2.2.4 Công dụng của cây dừa cạn

Từ xa xưa, Catharanthus roseus (C roseus) đã được sử dụng để chữa trị

nhiều loại bệnh khác nhau Loài cây này đã được ứng dụng rộng rãi trong y học dân gian Ở Madagascar, chiết xuất của cây dừa cạn đã được sử dụng từ lâu như một loại thuốc an thần, hạ huyết áp, sát trùng và thuốc điều trị tiểu đường Ở Ấn Độ, chiết xuất từ lá của dừa cạn đã được sử dụng để xử lý vết ong đốt Ở Trung Quốc, dừa cạn được biết đến như một loài cây giúp lợi tiểu, trị ho và làm săn se niêm mạc Ở Trung và Nam Mỹ, dừa cạn được sử dụng để chữa viêm mắt và đau họng ( Võ Văn Chi, 2000)

Dừa cạn cũng được dùng phổ biến trong các bài thuốc Đông y để trị cao huyết

áp, trị bệnh tiểu đường, tiêu hóa k m, lỵ thông tiểu tiện, bệnh đi tiểu đỏ, Một số trường hợp còn dùng để trị ung thư máu, ung thư phổi ( Võ Văn Chi, 2012)

Catharanthus roseus được coi là một nhà máy sản xuất đến 130 terpenoid

indole alkaloids (TIAs) khác nhau, trong đó có nhiều chất có hoạt tính dược học quan trọng được dùng trong điều trị ung thư, tiểu đường, cao huyết áp, dị ứng, táo bón và nhiều bệnh đường ruột Trong đó, vinblastine là hợp chất đã được FDA (Food and Drug Administration) của Mỹ phê duyệt vào năm 1965

và trở thành một thành phần chính của phương pháp hóa trị liệu trong điều trị nhiều loại ung thư như bạch cầu, bàng quang, tinh hoàn, các u bạch huyết, ung thư vú, ung thư phổi tế bào nhỏ,…được bán trên thị trường hơn 40 năm nay Ngoài ra, vincristine và vinblastine còn thể hiện hoạt tính kháng khuẩn (Grellier và cs., 1999)

Các nhà khoa học hiện đại đã tiến hành nghiên cứu và chứng minh được khả năng điều trị tiểu đường của các alkaloid trong loài cây này (Islam và cs.,

2009; Robert và cs., 2002) Các alkaloids từ Catharanthus roseus ngăn chặn

sự phát triển của tế bào ung thư bằng cách liên kết với các tubulin trong quá trình phân bào Chúng cũng gây nên apoptosis (trình tự hủy diệt của tế bào theo chương trình có sẵn trong gen) Chúng cũng ức chế sự lây lan của nhiều loại ung thư khác nhau (Arora, 1998; Arora và cs., 2009)

Không những vậy, một vài nghiên cứu khác đã chứng minh được tác dụng hạ huyết áp và lipid huyết của chiết xuất từ lá dừa cạn Các chiết xuất từ lá dừa cạn có thể được dùng làm thuốc hoặc bổ sung vào chế độ ăn đối với những người có nguy cơ mắc bệnh cao huyết áp (Ara và cs., 2009) Bên cạnh đó, chiết xuất từ cây dừa cạn còn có các tác dụng khác như làm lành vết thương nhanh chóng (Nayak và cs., 2007), điều trị tiêu chảy (Kyakulaga và cs., 2011)

Chiết xuất từ cây dừa cạn cho các tác dụng hiệu quả lên các vi khuẩn và vi nấm khác nhau Theo một vài nghiên cứu, các hợp chất trong cây dừa cạn có tác động kháng khuẩn trên một số các vi khuẩn chọn lọc (Balaabirami & Patharajan, 2012 ; Kumari & Gupta, 2011)

2.3 HOẠT TÍNH CỦA CÁC BỘ PHẬN CÂY DỪA CẠN

2.3.1 Hoạt tính kháng khuẩn

Muhammad và cs (2009) đã báo cáo rằng tiềm năng kháng khuẩn trong chiết

xuất thô của các bộ phận khác nhau (ví dụ: lá, thân, rễ và hoa) của C roseus

chống lại các chủng vi khuẩn có ý nghĩa lâm sàng

Hoạt tính kháng khuẩn của chiết xuất ethanol, methanol, dung dịch nước và

chloroform của lá, thân và hoa của Catharanthus roseus đã được nghiên cứu chống lại Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus,

Candida albicans, Aspergillus niger và Aspergillus fumigatus bằng phương

pháp khuếch tán giếng thạch Chiết xuất lá của Catharanthus roseus trong ethanol đã cho thấy hoạt tính kháng khuẩn chống lại Candida albican,

Pseudomonas aeruginosa và Aspergillus niger (với vùng ức chế lần lượt là

14, 13 và 8 mm) Chiết xuất hoa và thân của Catharanthus roseus trong ethanol đã cho thấy hoạt tính kháng khuẩn chống lại Staphylococcus aureus

và Aspergillus niger (với vùng ức chế lần lượt là 19 mm, 6 mm đối với chiết

xuất thân và 8 mm, 10 mm đối với chiết xuất hoa) (Chaman, Sharma & Reshi, 2013)

Các bộ phận khác nhau của C roseus (lá, thân, hoa và rễ) đã được sử dụng và

các chất chiết xuất đã được thử nghiệm kháng khuẩn Hiệu quả nhất là chiết

xuất rễ, thể hiện hoạt tính kháng khuẩn phổ rộng chống lại Salmonella

typhimurium và S.boydii Chiết xuất hoa cho thấy hoạt động chống lại C diphtheriae (Perez, 1990)

2.3.2 Hoạt tính chống oxy hóa

Các chất chống oxy hóa luôn đóng vai trò quan trọng trong việc làm chậm quá trình phát triển của các bệnh mãn tính như bệnh tim mạch (CVD), ung thư, xơ vữa động mạch, hội chứng viêm ruột và bệnh Alzheimer (Bozin và cs., 2006) Nhiều loại alkaloid khác nhau có trong cây dừa cạn và hơn 130 hợp chất khác nhau đã được báo cáo bao gồm khoảng 100 monoterpenoid indole alkaloid (Pereira và cs., 2010) Là một cây thuốc quan trọng, nó có khả năng chống oxy hóa tốt trên khắp các bộ phận của nó dưới áp lực hạn hán Do đó, nếu hợp chất có tiềm năng chống oxy hóa và hoạt động hóa học thực vật bổ sung; nó

có thể là một tác nhân trị liệu tốt để đẩy nhanh quá trình chữa lành vết thương

Chiết xuất C roseus là một nguồn khả thi của chất chống oxy hóa tự nhiên và

có thể được khai thác để làm thực phẩm chức năng và các ứng dụng dược phẩm (Patharajan & Balaabirami, 2014)

2.3.3 Hoạt tính kháng nấm

Chiết xuất lá của Catharanthus roseus cho thấy hoạt tính kháng khuẩn tuyệt vời chống lại Fusarium moniliforme trong ethanol (Kumari & Gupta, 2013)

Hoạt tính kháng nấm tối đa chống lại Candida albicans bằng dịch chiết hoa

dừa cạn trong methanol (vùng ức chế 18 mm), dịch chiết lá trong methanol (vùng ức chế 13 mm) và chiết xuất thân cây trong methanol (vùng ức chế 11

mm) Chiết xuất Catharanthus roseus trong chloroform đã cho thấy hoạt tính kháng khuẩn chống lại vi khuẩn gram âm Pseudomonas aeruginosa (với vùng

ức chế 4 mm) Chiết xuất từ thân và hoa của Catharanthus roseus trong nước

không có hiệu quả đối với bất kỳ chủng vi khuẩn và nấm nào (Chaman, Sharma & Reshi, 2013)

2.4 TỔNG QUAN VỀ PHƯƠNG PHÁP HÕA TAN CHIẾT XUẤT THỰC VẬT

2.4.1 Định nghĩa

Hòa tan chiết xuất là một quá trình kỹ thuật dùng dung môi để hòa tan và tách các chất tan ra khỏi dược liệu Dung môi chứa chất tan thu được gọi là dịch chiết Phần dược liệu sau khi chiết lấy dịch chiết gọi là bã (Lê Quan Nghiệm

& Huỳnh Văn Hóa, 2011)

2.4.2 Mục tiêu của hòa tan chiết xuất

Mục tiêu của hòa tan chiết xuất là lấy được tối đa các hoạt chất và những chất

hỗ trợ vào dịch chiết, giữ lại tối đa các tạp chất trong bã dược liệu, xác định được các điều kiện cần thiết nhằm tiết kiệm dung môi, nhiên liệu, thời gian, trong quá trình chiết xuất (Lê Quan Nghiệm & Huỳnh Văn Hóa, 2011)

2.4.3 Các phương pháp hòa tan chiết xuất

Có rất nhiều kỹ thuật và thiết bị chiết khác nhau được áp dụng cho phương pháp chiết trên như chiết ở nhiệt độ thường (ngâm lạnh, ngấm kiệt ở nhiệt độ thường), nhiệt độ cao (chiết nóng, hãm, sắc, ngấm kiệt nóng; chiết với các thiết bị như soxhlet, kumagawa,

2.4.3.1 Phương pháp ngâm

Phương pháp ngâm là phương pháp cho dược liệu đã chia nhỏ tới độ mịn thích hợp, tiếp xúc với dung môi trong thời gian nhất định, sau đó gạn p, lắng lọc và thu lấy dịch chiết Tùy theo nhiệt độ chiết xuất mà chiết xuất đem lại hiệu quả khác nhau Có một số phương pháp như sau:

Phương pháp ngấm kiệt là một trong những phương pháp trích ly được sử dụng phổ biến nhất vì không đòi hỏi nhiều thao tác cũng như thời gian Dụng

cụ gồm một bình ngấm kiệt, hình trụ đứng, bằng thủy tinh, ở dưới đáy bình có van khóa để điều khiển tốc độ dung môi chảy ra Khi đã ngâm mẫu cây trong dung môi sau một thời gian nhất định, dung dịch chảy ra được hứng trong một erlen bên dưới, ở trên có một bình lóng chứa dung môi chảy vào bình ngấm kiệt này (Dược điển Việt Nam, 2009)

Phương pháp ngâm dầm không hiệu quả gì hơn phương pháp ngấm kiệt, ch là ngâm bột cây trong bình chứa bằng thủy tinh hoặc th p không r có nắp đậy Rót dung môi phủ lớp bột cây, để yên ở nhiệt độ phòng, dung môi sẽ ngấm dần vào nguyên liệu và hòa tan các chất tự nhiên Có thể gia tăng hiệu quả

chiết xuất bằng cách khuấy bột cây hoặc dùng máy lắc nhẹ Sau 24 giờ, dung môi trong bình được rót ra và đổ dung môi mới vào (Dược điển Việt Nam, 2009)

Sắc: Sắc là đun sôi nhẹ nhàng dược liệu với dung môi nước trong một thiết bị

có nắp đậy, sau một thời gian nhất định, gạn và p bã thu được dịch chiết Phương pháp sắc thường được áp dụng cho "thuốc thang" Thời gian sắc theo Dược điển Mỹ khoảng 15 phút, sắc theo Đông y (thuốc thang) thời gian k o dài hơn, có thể 60 đến 90 phút (tùy theo dược liệu) cho một lần chiết, có thể sắc 2 ˗ 3 lần, lần sau thời gian sắc ngắn hơn lần trước (Lê Quan Nghiệm & Huỳnh Văn Hóa, 2011)

2.4.3.2 Phương pháp cô đặc

Để điều chế cao, cần phải tiến hành bốc hơi dung môi, đến t lệ thích hợp của từng loại cao (cao lỏng, cao đặc, cao khô) Sử dụng thiết bị máy cô quay chân không để cô đặc dịch chiết (Turker và cs., 1999)

Tùy theo loại cao cần điều chế mà có thời gian và nhiệt độ cô quay khác nhau Nhưng tốt nhất là tiến hành ở áp suất giảm và ở nhiệt độ sao cho sự phân hủy hoạt chất là tối thiểu (thường không quá 60 oC) Tránh cô đặc bốc hơi k o dài

ở nhiệt độ cao (Turker và cs., 1999)

Hiệu suất chiết xuất: được xác định là hiệu suất chiết xuất thảo dược và được xác định bằng công thức (Turker & cs, 1999):

Hiệu suất ( ) =

 100

2.4.3.3 Phương pháp chiết bằng Soxhlet

Phương pháp có ưu điểm là ch sử dụng một lượng ít dung môi mà vẫn có thể chiết kiệt được hoạt chất Sự ly trích tự động, liên tục nên nhanh chóng Muốn biết quá trình chiết đã cạn kiệt chưa, tháo phần ống ngưng hơi, dùng pipet hút lấy vài giọt dung dịch trong bình chứa mẫu cây, nhỏ lên mặt kính hoặc giấy lọc, để dung môi bay hơi hết để lại vết cắn trên bề mặt kính Nếu không thấy vết thì đã chiết kiệt, nếu thấy vết thì phải chiết thêm một thời gian nữa Nhược điểm của phương pháp này là không chiết được một lượng lớn mẫu cây, nên

ch thích hợp cho các nghiên cứu trong phòng thí nghiệm Một nhược điểm lớn nữa là trong suốt quá trình chiết, mẫu cây luôn có nhiệt độ bằng nhiệt độ sôi của dung môi nên những hợp chất k m bền nhiệt như carotenoid có thể bị thủy giải, phân giải hoặc tạo các hợp chất artefact (Dược điển Việt Nam, 2009)

2.5 TỔNG QUAN VỀ TRÍCH LY

2.5.1 Định nghĩa

Trích ly là quá trình hòa tan chọn lọc một hay nhiều cấu tử có trong tỷ lệ nguyên liệu bằng cách cho nguyên liệu tiếp xúc với dung môi Động lực của quá trình trích ly là sự chênh lệch nồng độ của cấu tử ở trong nguyên liệu và ở trong dung môi Đây là một quá trình truyền khối (Lê Văn Việt Mẫn và cs., 2011)

Yêu cầu dung môi trích ly:

- Hòa tan chọn lọc: hòa tan đƣợc nhiều hoạt chất càng tốt, ít hòa tan tạp chất

- Có hệ số khuếch tán lớn đảm bảo cho tốc độ chuyển khối lớn

- Dễ dàng bay hơi khi cô đặc dịch chiết

- Nhiệt dung riêng và ẩm nhiệt hóa hơi càng b càng tốt

- Độ nhớt, áp suất hơi và điểm đông đặc phải thấp Không độc, không gây cháy và giá thành thấp,…(Bộ y tế, 2007)

2.6 TỔNG QUAN VỀ CAO CHIẾT (CAO THUỐC)

2.6.1 Định nghĩa

Cao thuốc là những chế phẩm đƣợc điều chế bằng cách cô đến độ đậm đặc nhất định các dịch chiết thu đƣợc từ các dƣợc liệu (Bằng Văn Thái, 2017)

2.6.2 Đặc điểm và phân loại

Cao thuốc đƣợc chia làm 3 loại:

Cao khô là một khối bột khô, đồng nhất, rất dễ hút ẩm Cao khô không đƣợc

có độ ẩm lớn hơn 5

Cao đặc là một khối đặc quánh Hàm lƣợng dung môi dùng để chiết xuất còn lại trong cao đặc không quá 20

Cao lỏng có thể chất lỏng hơi sánh, có mùi vị đặc trưng của dược liệu dùng để điều chế cao Nếu không có ch dẫn khác, qui ước 1 ml cao lỏng tương ứng với 1 g dược liệu dùng để chế cao thuốc (Lê Quan Nghiệm và Huỳnh Văn Hóa, 2011)

2.6.3 Yêu cầu chất lượng

Tùy loại cao và dạng cao mà có yêu cầu chất lượng riêng theo từng chuyên luận trong Dược điển Việt Nam Song yêu cầu chung về chất lượng của cao là:

- Các ch tiêu khác: Cắn khô sau khi bốc hơi, hàm lượng hoạt chất, pH, tiêu chuẩn vi sinh, tỷ trọng, phải đạt tiêu chuẩn Dược điển Việt Nam Tỷ trọng cao lỏng thường nằm trong khoảng từ 1,05 - 1,4

Cao đặc, cao khô: Thể chất đặc, mềm dẻo, mịn đồng nhất, màu nâu đen, có mùi thơm đặc trưng của dược liệu điều chế cao, không chua, không có mùi lạ, đạt độ thủy phần quy định, hàm lượng hoạt chất và ch tiêu khác đạt yêu cầu quy định của chuyên luận (Phạm Xuân Sinh, 2004)

Xác định độ ẩm cao chiết:

Cao chiết sau khi thực hiện quá trình đuổi dung môi được tiến hành xác định

độ ẩm theo phương pháp “Xác định mất khối lượng do làm khô” được quy định tại phụ lục 9.6, Dược điển Việt Nam V, (2017)

Công thức xác định độ ẩm của cao chiết:

w (%)= ( )× 100 Trong đó:

w là độ ẩm của cao chiết (đơn vị );

a 1 là khối lượng của cao sau khi làm khô (đơn vị gram);

a 0 là khối lượng của cao chiết ban đầu (đơn vị gram)

Công thức tính hiệu suất:

Hiệu suất thu hồi cao chiết được xác định theo công thức sau:

Trong đó:

H là hiệu suất chiết xuất cao (đơn vị );

a 1 là khối lượng của cao sau khi làm khô (đơn vị gram);

m 0 là khối lượng của bột dược liệu ban đầu để chiết xuất cao (đơn vị gram)

2.6.4 Lợi ích của cao chiết

Thành phần rõ ràng, hàm lượng chính xác, khối lượng gọn nhẹ Cách dùng thuận tiện, bảo quản dễ dàng, thời gian bảo quản lâu, có phương pháp kiểm nghiệm rõ ràng Thực tế, có những thuốc ch được sản xuất bằng phương pháp chiết xuất dược liệu khi công nghiệp hóa dược chưa được tổng hợp hoặc có thể tổng hợp được nhưng giá thành lại quá cao hay tác dụng điều trị của thuốc tổng hợp chưa thể thay thế được thuốc có nguồn gốc dược liệu Chiết xuất dược liệu để tách hoạt chất tinh khiết, có tác dụng tạo nguồn nguyên liệu cung cấp cho quy trình bán tổng hợp một số loại thuốc mới (Bộ y tế, 2009)

2.7 CƠ CHẾ KHÁNG KHUẨN CỦA CÁC HỢP CHẤT CÓ NGUỒN GỐC THỰC VẬT

2.7.1 Định nghĩa

Hợp chất kháng khuẩn có nguồn gốc thực vật (Kháng khuẩn thực vật) là tên gọi chung ch các hợp chất hữu cơ có trong thực vật có khả năng tiêu diệt hay kìm hãm, ức chế sự phát triển của vi sinh vật Các chất kháng khuẩn thường

có tác dụng đặc hiệu lên các loài vi sinh vật khác nhau ở một nồng độ thường rất nhỏ (Silva & Fernandes, 2010)

2.7.2 Cơ chế kháng khuẩn

Cơ chế hoạt động khác nhau của các hợp chất kháng khuẩn có trong thực vật

đã được nghiên cứu Chúng có thể ức chế các vi sinh vật, gây trở ngại cho một

số quá trình trao đổi chất hoặc có thể điều ch nh biểu hiện gen và con đường truyền tín hiệu (Kris-Etherton & Keen, 2002)

Cao chiết từ các loại thực vật có thể biểu hiện hoạt tính kháng lại các chủng vi khuẩn ở các mức độ khác nhau như sự can thiệp vào các lớp đôi phospholipid của màng tế bào gây hậu quả làm gia tăng độ thấm, tổn hại các thành phần tế bào, phá hủy các enzyme tham gia vào việc hình thành năng lượng tế bào, tổng hợp các thành phần cấu trúc, và đồng thời phá hủy hoặc làm bất hoạt các

vật liệu di truyền (Kotzekidou, Giannakidis & Boulamatsis, 2008)

2.8 PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN

2.8.1 Phương pháp khuếch tán trên đĩa thạch

Trong phương pháp này, các tấm thạch được cấy với một chủng được tiêu chuẩn hóa của vi sinh vật thử nghiệm Sau đó, đĩa giấy lọc (đường kính khoảng 6 mm), chứa hợp chất thử ở nồng độ mong muốn, được đặt trên bề mặt thạch Các đĩa petri được ủ trong điều kiện thích hợp Nói chung, chất kháng khuẩn khuếch tán vào môi trường thạch và ức chế sự sinh sản và tăng trưởng của vi sinh vật thử nghiệm và sau đó đường kính của các vùng ức chế được đo (Balouiri và cs., 2016)

2.8.2 Phương pháp khuếch tán trên giếng thạch

Phương pháp khuếch tán giếng thạch được sử dụng rộng rãi để đánh giá hoạt tính kháng khuẩn của thực vật hoặc chiết xuất vi sinh vật Đầu tiên, trải một thể tích vi sinh vật trên toàn bộ bề mặt thạch Sau đó, đục một lỗ có đường kính từ 6 đến 8 mm, lỗ đục vô trùng bằng một cái nút chai hoặc bằng một cái đầu, và một thể tích (20 µm ˗ 100 µm) Chất kháng khuẩn hoặc dung dịch chiết xuất ở nồng độ mong muốn được đưa vào giếng Sau đó, các đĩa thạch được ủ trong điêu kiện phù hợp tùy thuộc vào vì sinh vật thử nghiệm Chất kháng khuẩn khuếch tán trong môi trường thạch và ức chế sự phát triển của chủng vi sinh vật được thử nghiệm (Balouiri và cs., 2016)

2.9 GỐC TỰ DO VÀ HOẠT TÍNH KHÁNG OXY HÓA

2.9.1 Gốc tự do

Các gốc tự do hay nói chính xác hơn là các chất hoạt động chứa oxy và nitơ (Reactive Oxygen Species - ROS và Reactive Nitrogen Species - RNS), là các dẫn xuất dạng khử của oxy và nitơ phân tử Chúng được chia thành hai nhóm lớn là các gốc tự do và các dẫn xuất không phải gốc tự do (Protor, 1898)

2.9.2 Chất chống oxy hóa

Các chất chống oxy hóa là các hợp chất có khả năng làm chậm lại, ngăn cản hoặc đảo ngược quá trình oxy hóa các hợp chất có trong tế bào của cơ thể (Jovanovic & Simic, 2000; Lachman và cs., 2000; Singh & Rajini, 2004) Chất chống oxy hóa tự nhiên có trong ngũ cốc, rau, quả Các chất kháng oxy hóa có nguồn gốc thực vật như vitamin E, vitamin C, carotenoid, acid phenolic, phytate và estrogen đã được chứng minh làm giảm nguy cơ mắc các bệnh liên quan đến quá trình lão hóa như ung thư, bệnh tim mạch và bệnh Alzheimer (Moskovitz, Yim & Chock, 2002)

2.10 MỘT SỐ PHƯƠNG PHÁP ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH KHÁNG OXY HÓA

Hoạt tính kháng oxy hóa được đánh giá theo rất nhiều cách Các phương pháp đánh giá có thể kể đến là đánh bắt các gốc tự do, đánh giá năng lực oxy hóa - khử gốc tự do, sử dụng hệ thống mẫu sinh học và hệ thống mẫu thực phẩm (Shahidi & Zhong, 2015)

2.10.1 Phương pháp khử gốc tự do DPPH

DPPH là một phân tử gốc tự do ổn định, dạng bột tinh thể có màu tối (Sharma

& Bhat, 2009) DPPH (1,1 - diphenyl-2- picrylhydrazyl) là gốc tự do được dùng để thực hiện phản ứng mang tính chất sàng lọc tác dụng chống oxy hóa của các chất nghiên cứu

Các chất có khả năng chống oxy hóa sẽ trung hòa gốc DPPH bằng cách cho hydrogen, làm nhạt dần màu tím của DPPH (Huang và cs., 2005; Wang và cs., 2007)

H nh 3 Phản ứng trung hòa gốc DDPH

Hoạt tính chống oxy hóa (HTCO):

HTCO (%) = [(ODchứng ODthử)/ (ODchứng ODtrắng)] ×100

OD: Mật độ quang

2.10.2 Phương pháp sử dụng TBA – đo lượng MDA

MDA (Malonyl dialdehyd) là sản phẩm cuối cùng của quá trình peroxy hóa lipid màng tế bào Sử dụng acid thiobarbituric (TBA) để xác định hàm lượng MDA trong tổ chức tế bào, từ đó đánh giá khả năng chống oxy hóa của các chất nghiên cứu thể hiện qua việc giảm hàm lượng MDA Một phân tử MDA phản ứng với hai phân tử TBA tạo phức màu hồng hấp thu cực đại ở bước sóng 523 nm Phản ứng thực hiện ở pH từ 2 ˗ 3, nhiệt độ từ 90 ˗ 100 oC, thời gian 10 ˗ 15 phút Dựa trên sự giảm cường độ hấp thu của phức, tính được khả năng kháng oxy hóa của hoạt chất (Blois, 1958)

Một phân tử MDA phản ứng với hai phân tử TBA tạo phức màu hồng hấp thu cực đại ở bước sóng 523nm (Nguyễn Thượng Dong và cs., 2006; Viện dược

liệu, 2006)

H nh 4 Phản ứng trong phương pháp sử dụng TBA-đo lượng MDA

Hoạt tính chống oxy hóa (HTCO):

HTCO (%) = [(CMDAchứng CMDAthử)/ CMDAchứng] ×100

Nồng độ MDA được tính theo phương trình hồi quy tuyến tính của chất chuẩn MDA

2.10.3 Phương pháp đánh giá khả năng kết hợp với ion sắt II

Ion sắt hoặc đồng ở trạng thái tự do dễ dàng xúc tác sinh ra gốc tự do Đánh giá khả năng phòng ngừa sinh gốc tự do của chât nghiên cứu thể hiện qua sự khóa các ion kim loại chuyển tiếp vào dạng phức, không để cho tồn tại ở trạng thái tự do, sẽ làm mất khả năng xúc tác Hoạt tính chống oxy hóa được thể hiện qua việc ngăn chặn sự tạo thành phức chất có màu giữa ion sắt II với thuốc thử Ferrozin (Viện dược liệu, 2006)

EDTA được sử dụng như chất đối chiếu dương tính

Hoạt tính chống oxy hóa (HTCO):

HTCO (%) = [(ODchứng ODthử)/ (ODchứng ODtrắng)] ×100

2.10.4 Phương pháp pha loãng

Phương pháp pha loãng hoạt động dưới nguyên tắc các chất thử được pha loãng thành các nồng độ cho sẵn, bước nhảy của mỗi nồng độ là như nhau và cho vào ống thử đã cấy sẵn vi khuẩn Phương pháp này giúp xác định nồng độ tối thiểu của chất thử đối với khả năng ức chế vi khuẩn (MIC), với nồng độ tối thiểu càng thấp thì chất thử có hoạt tính càng mạnh, phương pháp pha loãng

có các phương pháp sau (Coyle, 2005; Muanza và cs., 1994)

Phương pháp pha loãng trong môi trường thạch: Các chất thử được pha loãng theo dãy các nồng độ thử trong bản thạch, sau đó chấm một lượng xác định vi khuẩn lên bản thạch có sẵn chất thử Phương pháp pha loãng trên bản thạch thích hợp cho các chất có tính phân cực k m, ít tan trong môi trường nước, ưu điểm là dễ thực hiện

Phương pháp pha loãng trong môi trường lỏng: Đây là phương pháp quan trọng, cho ph p đánh giá định lượng nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) của kháng sinh hay dịch chiết đối với vi khuẩn Trong phương pháp này, kháng sinh hoặc dịch chiết được pha loãng theo cơ số 2 bằng môi trường nuôi cấy vi khuẩn Vi khuẩn giống được pha sẵn ở nồng độ 106

CFU/mL và được cho một lượng đồng đều vào môi trường nuôi cấy có kháng sinh hay dịch chiết ở các nồng độ khác nhau (Klančnik và cs., 2010)

2.11 SƠ LƯỢC VỀ CÁC CHỦNG VI SINH VẬT GÂY BỆNH

Staphylococcus aureus lần đầu được phát hiện vào năm 1880 và nhanh chóng

được công nhận trên toàn thế giới (Ogston, 1881)

Tụ cầu khuẩn có dạng hình cầu, đường kính 0,8 ˗ 1µm, đứng tụ lại với nhau thành từng đám như chùm nho, có thể đứng lẻ tẻ hoặc thành từng đôi hay

thành từng chuỗi ngắn Staphylococcus spp là nhóm vi khuẩn Gram dương,

hiếu khí hoặc kỵ khí tuỳ nghi, không có vỏ, không di động, không sinh bào tử

và có khả năng sinh nội độc tố Về đặc điểm sinh lý, S aureus sống tốt trong

điều kiện nhiệt độ từ 7.0 ˗ 48.5 oC và tối ưu nhất từ 30 ˗ 37 oC, khoảng pH từ 4.2 ˗ 9.3 và tối ưu nhất từ 7.0 ˗ 7.5 Chúng có thể sống ở các môi trường khô thậm chí rất khô, thường được tìm thấy trên da người, trên quần áo và trong một số thực phẩm (Kadariya, Smith & Thapaliya, 2014)

2.11.1.2 Khả năng gây bệnh

Staphylococcus aureus là một tác nhân có thể gây nhiễm trùng phổ rộng, có

thể gây nhiễm trùng nhẹ trên da cho tới nhiễm trùng nặng và có thể làm nạn nhân tử vong khi mầm bệnh xâm lấn vào sâu các mô bên (Kadariya và cs., 2014)

Tụ cầu khuẩn (Staphylococcus spp.) gây bệnh cho người

Các bệnh ngoài da: gây nhiều bệnh nhiễm trùng như bệnh mụn nhọt, chốc lở, viêm da, đầu đinh, đinh râu…

Nhiễm khuẩn huyết do tụ cầu: thường xảy ra ở những người có sức đề kháng yếu hoặc trẻ em Bệnh thường nặng, có thể gây chết người hoặc trở thành mãn tính gây nên viêm xương, viêm khớp, viêm phổi, viêm cơ tim, viêm màng trong tim, viêm màng ngoài tim, viêm màng não, đường tiết niệu, hệ thần kinh trung ương, nhiễm trùng huyết, nhiễm trùng vết thương hậu phẫu

Loài: Escherichia coli

E coli (còn được gọi là vi khuẩn đại tràng) được phát hiện năm 1885 là một

loài vi sinh vật gây bệnh Vi khuẩn này cần thiết trong quá trình tiêu hóa thức

ăn và là thành phần của khuẩn lạc ruột (Nguyễn Đức Lượng & Phạm Minh Tâm, 2005)

Chi Escherichia có 4 loài khác nhau, nhưng loài chủ yếu là E coli Vi khuẩn

này phát triển rất tốt trên môi trường thạch thường, ở 35 ˗ 37 o

C sau 12 ˗ 18 giờ hình thành khuẩn lạc tròn, lồi, không trong suốt, bóng láng Trên thạch máu, đa số chủng không gây dung huyết, nhưng cũng có chủng dung huyết

Để phân lập thường nuôi cấy khởi đầu trên môi trường tuyển lựa như môi

trường Istrati, MacConkey, Endo, desoxycholate, khuẩn E coli hiếu khí và

kỵ khí tùy nghi, có thể phát triển ở nhiệt độ từ 15 oC ˗ 40 oC và phát triển thích hợp ở nhiệt độ 37 oC với pH = 7,2 ˗ 7,4 ; phát triển được ở pH = 5,5 ˗ 8,0 (Phạm Hồng Sơn, 2008)

2.11.2.2 Khả năng gây bệnh

E coli phân bố rộng rãi trong môi trường đất, nước và tồn tại nhiều trong

đường ruột của vi sinh vật máu nóng Đa số các E coli là vô hại tuy nhiên cũng có một số dòng có thể gây ra ngộ độc thực phẩm E coli là nguyên nhân

của các bệnh về đường ruột, tiêu chảy, một vài kiểu hình kháng nguyên có thể gây bệnh viêm màng não, phổi trên người (Nataro & Kaper, 1998) Ngoài ra,

E coli được công nhận là một trong những vi khuẩn ch thị sự ô nhiễm của

nước Hiện nay những nghiên cứu trên vi khuẩn này tương đối nhiều từ ứng dụng của nó trong tạo các protein tái tổ hợp đến những biện pháp ức chế nó,

mà điển hình là sử dụng các hợp chất tự nhiên Trong những thập k qua, đây

là một tron những mô hình vi sinh vật được nghiên cứu nhiều nhất

Cơ chế gây bệnh của E coli trên người khác nhau tùy loài:

ETEC: gây bệnh do ngoại độc tố (LT), là ngoại độc tố ruột giống độc tố ruột

của Vibrio cholerae

EIEC: gây bệnh do khả năng xâm nhập vào niêm mạc đại tràng, cơ chế gây bệnh giống vi khuẩn lỵ

EAEC: gây bệnh do bám vào niêm mạc và làm tổn thương chức năng ruột

EHEC: làm tổn thương xuất huyết ở ruột

EPEC: gây bệnh đường ruột, gây bệnh tiêu chảy cổ điển ở trẻ em dưới 2 tuổi, thường gặp ở heo lớn Tỷ lệ mắc bệnh trung bình khoảng 15 , tỷ lệ chết 50 ˗ 90%

Ngoài ra E coli gây tiêu chảy cho bê ngh sơ sinh, thường kèm nhiễm trùng

huyết; gây viêm nhiễm đường niệu ở chó; ở gia cầm, gây viêm rốn ở gà con,

huyết nhiễm trùng và thường kết hợp với Mycoplasma galisepticum viêm túi

khí, phúc mạc và viêm nhiễm buồng trứng (Nguyễn Thị Hạnh Chi, 2013)

Chi: Salmonella

Salmonella enterica (S enterica) là chủng vi khuẩn hình que, gram âm, kỵ khí

tùy nghi, di chuyển bằng roi (Zhang, 2012), không tạo bào tử Khoảng nhiệt

độ vi khuẩn S enterica có thể sinh trưởng và phát triển là 6 ˗ 42 oC, điều kiện tối ưu cho sự phát triển là ở khoảng nhiệt độ từ 35 ˗ 37 oC, pH từ 6 ˗ 9

2.11.3.2 Khả năng gây bệnh

S enterica là một trong những chủng vi khuẩn gây ngộ độc thực phẩm phổ

biến, ngoài ra, đây còn là nguyên nhân chính dẫn đến bệnh thương hàn (Jones,

2005) Cùng với E coli, các chủng Salmonella nói chung và S enterica nói

riêng là một trong những đối tượng phổ biến nhất được nghiên cứu trên toàn

thế giới S enterica là một trong những đối tượng chính gây ra các triệu chứng nhiễm trùng salmonella (salmonellosis) bao gồm tiêu chảy, sốt, đau bụng, nôn mửa S enterica có thể xâm nhập vào người thông qua việc sử

dụng nguồn nước ô nhiễm hay gia cầm bị nhiễm bệnh bao gồm cả trứng chưa

được chế biến kỹ Nhiễm trùng salmonella là nguyên nhân vi sinh phổ biến

thứ hai trong việc gây ra viêm dạ dày và hệ thống ruột Người ta ước tính rằng

có khoảng 1,2 triệu ca nhiễm trùng salmonella mỗi năm ở Hoa Kỳ và có tới

Loài: Propionibacterium acnes

P.acnes là một loại vi khuẩn thuộc hệ vi sinh vật tự nhiên của da phát triển

sâu bên trong của lỗ chân lông nơi có nhiều bã nhờn như mặt, ngực, lưng

P.acnes còn được tìm thấy trên da trẻ sơ sinh, nhưng sự bắt đầu thực sự trong

1 ˗ 3 năm trước khi trưởng thành Trong thời gian này, số lượng tế bào bệnh mụn trứng cá khoảng 10 ˗ 106 tế bào cm2 (Kishishita và cs., 1980)

Vi khuẩn P.acnes là vi khuẩn Gram dương có thành tế bào dày, giàu

peptidoglycan và lippolysacharid giúp bảo vệ chúng khỏi môi trường, hình

que, không sinh nha bào, đường kính 0,5 ˗ 0,8 µm, dài 3 ˗ 4 µm, phát triển chậm trong môi trường nuôi cấy sau 5 ˗ 7 ngày khuẩn lạc xuất hiện, thích hợp

ở pH từ 5 ˗ 8, nhiệt độ 37 o

C (Kishishita và cs., 1980)

2.11.4.2 Khả năng gây bệnh

Propionibacterium acnes được coi là vi khuẩn mầm bệnh cơ hội, gây ra một

loạt các bệnh nhiễm trùng cũng như là liên quan đến một số tình trạng viêm

Nó chủ yếu được biết đến vì vai trò của nó trong mụn trứng cá, nó được cho

là góp phần vào giai đoạn viêm của điều kiện (Leyden, 2001)

Ngoài vai trò được mô tả rõ ràng của nó trong mụn viêm (Eady & Ingham,

1994), P.acnes là đang nổi lên như một mầm bệnh quan trọng liên quan đến y

tế nhiễm trùng liên quan đến cấy ghép, chẳng hạn như nhiễm trùng liên quan đến cấy ghép silicone (Ahn và cs., 1996), van tim nhân tạo và khớp hông (Delahaye và cs., 2005; Tunney và cs., 1998) (McDowell, 2008)

Vibrio parahaemolyticus là một loại vi khuẩn gram âm cong, hình que, được

tìm thấy trong nước lợ, nước mặn, tồn tại ở dạng đơn độc, đôi khi có dạng S hoặc dạng xoắn ốc Loài này di chuyển bởi một hoặc vài tiêm mao ở một cực (Kiều Thị Diễm Trang, 2005)

2.11.5.2 Khả năng gây bệnh

Chứng ngộ thức ăn do phẩy khuẩn gây viêm ruột Vibrio parahaemolyticus xảy ra với tần số cao ở các nước hay ăn gỏi cá Ngoài ra, V mimicus, V

fluvialis, Aeromonas sorbia, A hydrophila, Plesiomonas shigelloides có ch

định là những vi khuẩn gây ngộ độc thực phẩm Trúng độc thực phẩm là do ăn những thực phẩm là cá ô nhiễm các vi khuẩn này Tiêu chảy, đau bụng, nôn mửa, sốt là những triệu chứng của nhiễm độc thể cảm nhiễm (Phạm Hồng Sơn, 2002)

Người ta cho rằng V parahaemolyticus và L anguillarum gây bệnh truyền

nhiễm ở các loài tôm (bệnh đỏ thân và ăn mòn chitin vỏ tôm), bệnh xuất huyết

ở cá, cua, còn L anguillarum, V ordalii, V vulnipicus và V alginolyticus gây

bệnh đỏ dọc thân ở ấu trùng tôm, bệnh đỏ thân và ăn mòn chitin vỏ tôm, bệnh

xuất huyết ở cá biển, bệnh ở các loài thân bụng hai mảnh (trai, hến, ), V

harveyi gây bệnh phát sáng, đỏ thân và ăn mòn vỏ chitin ở giáp xác (Phạm

Hồng Sơn, 2002)

V parahaemolyticus là một "vi sinh vật biển", gặp ở các vùng bờ biển nóng

và ôn hoà trên khấp thế giới Bị nhiễm vi khuẩn này do ăn hải sản tươi hoặc

chưa được nấu kỹ Các V parahaemolyticus được phân biệt với nhau nhờ

kháng nguyên O và kháng nguyên K, điều này giúp ích cho việc nghiên cứu dịch tễ học (Lê Huy Chính, 2007)

2.12 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRONG NƯỚC VÀ TRÊN THẾ GIỚI 2.12.1 Tình hình nghiên cứu trong nước

Do đề tài nghiên cứu về cao chiết cây dừa cạn còn khá mới nên chưa có nhiều tài liệu nghiên cứu cụ thể Vì vậy, sẽ thay thế tài liệu nghiên cứu cây dừa cạn sang các tài liệu nghiên cứu có liên quan khác:

Bùi Thị Thơ và cs (2022), đã tiến hành nghiên cứu khả năng kháng khuẩn của

cao chiết lá cây thuốc thượng (Phaeanthus Vietnamensis Ban) Kết quả cho

thấy tác dụng kháng khuẩn của cao chiết ethanol lá cây Thuốc Thượng trên 3

chủng vi khuẩn: Tụ cầu vàng Staphylococcus aureus, trực khuẩn mủ xanh

Pseudomonas aeruginosa và trực khuẩn Escherichia coli Cao chiết lá cây

Thuốc Thượng có khả năng ức chế rất yếu lên E coli Ngược lại, cao chiết lá

Thuốc Thượng có khả năng ức chế mạnh lên sự sinh trưởng và phát triển của

S aureus (đường kính vòng kháng khuẩn đạt 17,25 mm tại nồng độ 800

mg/ml), và P aeruginosa (13,25 mm), đặc biệt mức độ tác động của cao chiết

lá thuốc thượng đến S aureus cao hơn kháng sinh đối chứng Vancomycin

(8,5 mm) và tương đương với các loại kháng sinh nhạy được sử dụng trong kháng sinh đồ

Lê Thị Hương Hà và cs (2013) đã nghiên cứu tách chiết và khảo sát hoạt tính

kháng khuẩn - chống oxy hóa của cao dịch chiết từ củ hành tăm (Allium

schoenoprasum) Kết quả khảo sát hoạt tính kháng khuẩn và chống oxy hóa

cho thấy: cao N-hexan thu được bằng phương pháp chiết Soxhlet cho hoạt tính kháng khuẩn tốt nhất, cao ethanol cho khả năng chống oxi hóa tốt nhất Kết quả nghiên cứu của đề tài là cơ sở cho các nhà khoa học sử dụng các hoạt chất được tách chiết từ củ hành tăm trong y, dược học và đời sống con người, góp phần nâng cao giá trị sử dụng của củ hành tăm

Võ Thị Tú Anh và cs (2017) đã tiến hành khảo sát hoạt tính kháng khuẩn và

kháng oxy hoá của các cao chiết từ thân và lá cây bọ mắm (Pouzolzia

zeylanica L.) Kết quả cho thấy, tất cả cao chiết từ thân và lá cây bọ mắm đều

cho hoạt tính kháng E coli, P aeruginosa, S aureus tốt hơn kháng sinh

amoxicillin ở tất cả nồng độ được khảo sát với 40 µg mL<MIC≤80 µg mL

Tuy nhiên, cao chiết bọ mắm không kháng hai dòng vi khuẩn V

parahaemolyticus và E cloacae Kết quả khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa

của các cao chiết thân và lá bọ mắm cho thấy 6 cao chiết khảo sát có khả năng trung hòa gốc tự do DPPH đều thấp hơn vitamin C (EC50 = 25,33 µg mL) từ 1,85 ˗ 3,2 lần

2.12.2 Tình hình nghiên cứu trên thế giới

Nayak và Lexley (2006), đã trích ly dịch trích từ cây dừa cạn (Catharanthus

roseus) và khảo sát hoạt tính chữa lành vết thương trên chuột cống trắng

Chiết xuất của C roseus làm tăng đáng kể sức mạnh phá vỡ vết thương trong

mô hình vết mổ so với đối chứng (P <0,001) Các vết thương được điều trị bằng chiết xuất được phát hiện biểu mô hóa nhanh hơn và tốc độ co vết

thương tăng đáng kể so với vết thương đối chứng (P <0,001), Pseudomonas

aeruginosa và Staphylococcus aureus nhạy cảm với C roseus Kết luận rút ra

dịch trích từ cây dừa cạn giúp tăng độ co và độ bền của vết thương, tăng hàm

lượng hydroxyproline cùng với hoạt tính kháng khuẩn hỗ trợ việc sử dụng C

roseus trong điều trị tại chỗ để chữa lành vết thương

Tiong và cs (2013) đã khảo sát thuộc tính chống đái tháo đường và chống

oxy hóa của Alkaloid từ Catharanthus roseus (L.) G Don Phân tích thành

phần cho thấy bốn alkaloid - vindoline I, vindolidine II, vindolicine III và vindolinine IV - được phân lập và xác định từ chiết xuất dichloromethane

(DE) của lá cây này DE và các hợp chất I–III không gây độc tế bào đối với tế bào β-TC6 tuyến tụy ở liều cao nhất được thử nghiệm (25,0 µg mL) Tất cả bốn alkaloid gây ra sự hấp thu glucose tương đối cao trong các tế bào β-TC6 hoặc myoblast C2C12 của tuyến tụy, với III cho thấy hoạt động cao nhất Ngoài ra, các hợp chất II–IV đã chứng minh hoạt động ức chế protein tyrosine phosphatase-1B (PTP-1B) tốt, cho thấy tiềm năng điều trị của chúng đối với bệnh tiểu đường loại 2 III cho thấy tiềm năng chống oxy hóa cao nhất trong các thử nghiệm ORAC và DPPH và nó cũng làm giảm tổn thương oxy hóa do

H2O2 gây ra trong các tế bào β-TC6 ở mức 12,5 µg mL và 25,0 µg mL

Pham và cs (2018) đã tiến hành sàng lọc hàm lượng hóa chất thực vật, hoạt tính chống oxy hóa, kháng khuẩn và gây độc tế bào của chiết xuất thân

Catharanthus roseus (L.) G Don và các phần phân đoạn của nó Kết quả cho

thấy phần n-butanol chứa hàm lượng saponin và phenolics cao nhất (lần lượt

là 3037,54 mg ESE/g và 77,87 mg GAE/g) và có khả năng chống oxy hóa mạnh nhất trong số các chiết xuất được thử nghiệm Phần n-butanol được phát

hiện có tác dụng ức chế hiệu quả hoạt động của Escherichia coli và

Staphylococccus lugdunensis Phần n-butanol cũng có hoạt tính gây độc tế

bào mạnh trong ống nghiệm chống lại nhiều dòng tế bào ung thư bao gồm A2780 (buồng trứng), H460 (phổi), A431 (da), MIA PaCa-2 (tuyến tụy), Du145 (tuyến tiền liệt), HT29 (đại tràng), MCF-7 (vú), BE2-C (u nguyên bào thần kinh), SJ-G2, U87 và SMA (u nguyên bào thần kinh đệm) ở liều thấp

(giá trị GI50 là 5,2 ˗ 21,0 µg/mL)

CHƯƠNG 3 PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

3.1 PHƯƠNG TIỆN NGHIÊN CỨU

3.1.1 Thời gian và địa điểm tiến hành thí nghiệm

Thời gian: Từ tháng 01 năm 2023 đến tháng 05 năm 2023

Địa điểm: Đề tài được tiến hành tại Khu thí nghiệm trung tâm, Trường Đại học An Giang

3.1.2 Vật liệu thí nghiệm

Dừa cạn được thu hái tại xã Phú Hưng, huyện Phú Tân, t nh An Giang sau khoảng 4 tháng trồng, chiều cao khoảng 25 ˗ 30 cm, đảm bảo tươi, không dập nát hay thối hỏng Sau khi vận chuyển đến phòng thí nghiệm, cây dừa cạn được chọn lựa sơ bộ, rửa sạch, cắt nhỏ, đem đi sấy và tiến hành ly trích

Vi khuẩn gây bệnh: 5 dòng vi khuẩn Escherichia coli, Salmonella enterica,

Staphylococcus aureus, Propionibacterium acnes và Vibrio parahaemolyticus được lưu trữ tại phòng thí nghiệm Công nghệ sinh học,

Khu thí nghiệm Trung tâm, Trường Đại học An Giang

3.1.4 Thiết bị

Thiết bị và dụng cụ cần thiết khác

3.1.5 Hóa chất

- Ethanol 70%, methanol, DMSO

- DPPH (Sigma, Mỹ); vitamin C (Trung Quốc)

- Chloroform, acetic anhydride , Pb(OAc)4, H2SO4,

3.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Sơ đồ bố trí thí nghiệm tổng quát được trình bày trong Hình 5