Định lượng một số hoạt hất nhóm silymarin trong thự phẩm hứ năng bằng phương pháp sắ ký lỏng hiệu năng ao (hplc)

Lê Huy n Trâm và PGS.TS.. Cu i cùng, tôi xin bày t lòng bi i thân và btình ng viên tôi trong su t quá trình th c hi tài.

  -    HPLC) Chuyên ngành: K thu Hoá    2017 1708330011174fc2e8169-89d2-42c1-8669-78eb8b521b31 1708330011174397d8fc6-9f9e-4cba-8ae0-ebdbeaecea28 1708330011174b6ccf10a-abb2-4c83-b6ef-40557fb16906   -     Chuyên ngành: Hoá   NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC:  PGS TS   2017    n án cơng trình nghiên cu c ng dn khoa hc ca TS Lê Huyn Trâm PGS.TS Lê Th Hng Ho Các s liu kt qu nghiên cu lu b bt kì cơng trình khác ng thơng tin trích dn lu  ghi rõ ngun gc Hc viên Nguyn Th Thu Hng i   LI C Lu  c hoàn thành ti Vin Kim nghim An toàn V sinh thc ph Quc gia hoàn thành lu     a bc s   c hc bày t lịng bic ca Ti hc Bách Khoa Hà Np nhn t ng viên sut qua trình thc hin lut nghip Tơi xin chân thành c  Hng Ho (Vin Kim ngh toàn V sinh thc phm Quc gia) cán b Khoa Nghiên cu thc ph  ng d tu kin thun li cho thi gian hc t cu hồn thành lu Tơi xin chân thành c   y, giáo Vin K thut Hố hc Vii hi hc Bách khoa Hà N sut thi gian hc tp tng Cui cùng, xin bày t lịng bii thân b tình ng viên tơi sut trình thc hi tài Xin trân trng c Hà ni, ngày 15  Hc viên Nguyn Th Thu Hng ii   MC LC DANH MC CÁC KÝ HIU, CH VIT TT v DANH MC CÁC BNG vi DANH MC CÁC HÌNH vii T V NG QUAN 1.1 Gii thiu chung v h Cúc (Asteraceae) 1.2 Cây K sa (Silybum marianum) 1.2.1 m thc vt hc 1.2.2  1.3 Các hot cht nhóm Silymarin t K sa 1.3.1 Cu trúc tính cht ca mt s hot cht nhóm silymarin 6 1.3.2 Hot tính sinh hng hc ca hot ch Silymarin 10 1.3.3 Mt s thc phm cha nhóm Silymarin th 13 1.3.4 Mt s yu t n phân tích Silymarin T 15 1.4 Mt s Silymarin 15 1.4.1  hp th phân t (UV-VIS) 16 1.4.2 Pn di mao qun (CE) 17 1.4.3 c ký lng khi ph (LC-MS) 18 1.4.4 c ký lp mng (TLC) 19 1.4.5 c ký lng hi 21 1.5 Mt s k thut x lý mu phân tích Silymarin 1.5.1 K thut chit h 23 23 1.5.2 K thut chit Soxlet (Shoxhlet extraction) 24 1.5.3 K thut chit kt hp vi sóng (MAE) 25 1.5.4 K thut chit kt hp siêu âm (UAE) 25 1.5.5 Mt s k thut chit lng-lng (liquid-liquid extraction) 26 iii   VÀ  28 2.1  28 2.2  28 2.2.1  28 2.2.2 Khu kin x lý mu 29 2.2.3 Thnh quy trình 30 2.2.4 Áp dng phân tích mu ly th ng 31 2.3 Nguyên vt liu - thit b 32 2.3.1 Hóa cht, cht chun 32 2.3.2 Thit b 32 2.4 X lý s liu 33 T QU VÀ BÀN LUN 34 3.1 Kho sát la chu kin phân tíchSilymarinb 34 HPLC 3.2 Xây dng quy trình x lý mu 37 3.2.1 Kho sát dung môi chit vi viên nang cng, viên nén, cao khô k s 37 3.2.2 Kho sát dung môi chit vi viên nang mm, cao lng k sa 3.3 Th 41 44 3.3.1  chn l c hiu 44 3.3.2  thích hp h thng 46 3.3.3 Xây dng chun  tuyn tín 47 3.3.4 Gii hn phát hin, gii hng 52 3.3.5  lp li c 52 3.3.6  thu hi c 54 3.4 Áp dHPLC nh silymarin m 56 KT LUN 61 TÀI LIU THAM KHO 63 iv   DANH MC CÁC CH VIT TT Kí hiu ACN Din gii Acetonitril Ting Anh Acetonitrile AOAC Association of Official Analytical Chemists CE  CYP Cytochrome DMF Capillary Electrophoresis Dimethylformamide EtOH Etanol HPLC High Performance Liquid Ethanol Chromatography HPTLC High Performance Thin Layer Chromatography LC- MS Liquid Chromatography Mass Spectrometry Limit of Detection LOD  LOQ  Limit of Quantification MAE Microwave Assisted Extraction MeOH Metanol Methanol Mp  Melting point NF-B Nuclear Factor-kappa B PDA  RSD Relative Standard Deviation SD  Photo Diod Arrays Standard deviation Tetrahydrofuran THF TPCN UAE  Ultrasonic Assisted Extraction UPLC Ultra Performance Liquid Chromatography USP  UV-VIS Ultraviolet -Visible v United States Pharmacopeia   DANH MC CÁC BNG Bng 1.1: Tính cht vt lý ca mt s hp cht nhóm Silymarin 1ng 37 Bng 3.2: Kt qu kho sát dung moi chit khác 38 Bng 3.3: Kt qu th nghim quy trình x lý mu nhiu lipid 42 Bng 3.4: Kt qu  lp li ca cht phân tích 46 Bng 3.5: Kt qu phân tích khong tuyn tính ca hp cht nhóm Silym 48  52 Bng 3.7: Kt qu th lp li c 53 Bng 3.8:  thu hi ca cht phân tích bng HPLC 54 Bng 3.9: Kt qu ng Silymarin mt s thp th ng Hà Ni 56 vi   HÌNH nh (Silybum marianum L Gaertn.) Ht ca k sa c cu to ca Silymarin Mt s loi thc phm cha thành phn K sa 14 Ph hp th UV-VIS ca Silymarin 16  c phân tích Silymarin 17 Hình 1.7: S  HPTLC ca hot cht nhóm Silymarinvà dch K sa (UV 366nm) 20 Hình 1.8: Mi quan h ti gia din tích pic ca cht phân tích gian chit 24 Thit b HPLC (Alliance  Waters) s dng nghiên cu 32 S phân tích Silybin Isosilybin s dng methanol acid acetic 35 Hình 3.2: S phân tích Silybin Isosilybin s dng methanol acid phospho 35  phân tích mu cao k sc tiêu chun hóa   36 S to vòng lp th ca Silibin A Isosilybin A vi methanol 36 Quy trình phân tích silymarin TPCN dng bt 39 S phân tích nhóm cht Silymarin vi dung mơi chit acetone 40 S phân tích nhóm cht Silymarin vi dung mơi chit ethanol 40 S phân tích nhóm cht Silymarin vi dung môi chit methanol 40  th nghim x lý mu phân tích TPCN viên nang mm 41 0: Quy trình x lý mu phân tích TPCN viên nang mm 43 Hình 3.11: S   phân tích Silymarin viên nang m m  lo bng n-hexan 43 2: Sc ký  mu trng (viên nang cng) khơng có Silymarin Hình 3.13: S dung dch chun hn hp Silymarin 4: Sc ký  mu trng (viên nang cng) thêm chun Silymarin Hình 3.15: Ph hp th UV (200-400nm) ca cht Silymarin vii 44 44 45 45   Hình 3.16: Sc ký   lp li ca cht phân tích 47 Hình 3.17 th ng chun ca hp 49 Hình 3.18: S phân tích hn hp Silymarin 50ppm 50 Hình 3.19: S phân tích hn hp Silymarin 25ppm 50 Hình 3.20: S phân tích hn hp Silymarin 12,5ppm 51 Hình 3.21: S phân tích hn hp Silymarin ppm 51 Hình 3.22: S phân tích hn hp Silymarin 2,5 ppm 51 Hình 3.23: S phân tích hn hp Silymarin 1,25ppm 51 Hình 3.24: S  lp li nn mu viên na 53 Hình 3.25: S  lp li nn mu viên na 54 Hình 3.26: Sc ký   lp li nn mu bt nguyên 54 Hình 3.27: Sc ký   thu hi nn mu viên nang c 55 Hình 3.28: Sc ký   thu hi nn mu viên nang m 55 Hình 3.29: Sc ký   thu hi nn mu bt nguyên 56 Hình 3.30: Sc ký  phân tích mu nguyên liu NL05 57 Hình 3.31: Scký  phân tích mu viên nén VN01 58 Hình 3.32: Sc ký  phân tích mu viên nang mm NM01 58 Hình 3.33: S phân tích mu viên nang cng NC10 Hình 3.34: Chng nhn phân tích ca mt mu cao khơ K sa 58 60 viii