Thành phần môi trường APWThành phầnVai trò Trang 15 amino acid chuỗi dài, vitamin và các chấtdinh dưỡng cần thiết khác.Muối Sodium chlorie Duy trì cân bằng áp suất thẩm thấu.Bước 2: Tăn
BỘ CÔNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM TIỂU LUẬN MƠN: PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM ĐỀ TÀI: Định Tính V.Cholerae Và V.Parahaemolyticus NHĨM 13 TP HCM, tháng 11 năm BỘ CÔNG THƯƠNG 2022 PAGE \* MERGEFORMAT iv TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM - TIỂU LUẬN MÔN: VI SINH VẬT HỌC THỰC PHẨM ĐỀ TÀI: CƠ CHẾ VẬN CHUYỂN CÁC CHẤT QUA MÀNG TẾ BÀO VI SINH VẬT Nhóm: 13 PAGE \* MERGEFORMAT iv DANH MỤC HÌNH ẢNH, BẢNG BIỂU Hình 1.1 1.2 3.1 3.2 3.3 3.4 3.5 3.6 3.7 3.8 3.9 3.10 Bảng 3.1 3.2 3.3 3.4 3.5 3.6 3.7 3.8 3.9 3.10 Nội dung Vi khuẩn V.cholerae Vi khuẩn Vibrio parahaemolyticus Môi trường APW Môi trường TCBS agar Khuẩn lạc V.Cholerae mơi trường TCBS Kết thử nghiệm tính di động Thử nghiệm oxidase Thử nghiệm TSI Thử nghiệm ONPG Thử nghiệm Indol V.Parahaemolyticus môi trường TCBS V.Parahaemolyticus môi trường TSTA Nội dung Thiết bị dụng cụ Mơi trường hóa chất Thành phần mơi trường APW Thành phần môi trường thạch TCBS Các phép thử nhận dạng giả định Thử nghiệm khẳng định Thiết bị dụng cụ Mơi trường hóa chất Thành phần môi trường TSTA Thử nghiệm khẳng định PAGE \* MERGEFORMAT iv MỤC LỤC BẢNG ĐÁNH GIÁ KẾT QUẢ THỰC CÔNG VIỆC NHĨM i DANH MỤC HÌNH ẢNH, BẢNG BIỂU ii MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN VỀ V.CHOLERAE VÀ V.PARAHAEMOLYTICUS 1.1 V.Cholerae 1.1.1 Đặc điểm sinh học 1.1.2 Nguồn nhiễm 1.1.3 Tác hại 1.2 V.Parahaemolyticus 1.2.1 Đặc điểm sinh học 1.2.2 Nguồn nhiễm 1.2.3 Tác hại CHƯƠNG 2: PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH ĐỊNH TÍNH 2.1 Truyền thống 2.1.1 Phạm vi áp dụng 2.1.2 Nguyên tắc 2.2 Hiện đại 2.2.1 Phương pháp miễn dịch học – ELISA ( Enzyme Linked Immunosorbent Assays) 2.2.2 Phương pháp PCR CHƯƠNG 3: QUY TRÌNH ĐỊNH TÍNH 3.1 Truyền thống 3.1.1 V.Cholerae 3.1.2 V.Parahaemolyticus 18 3.2 Hiện đại 25 3.2.1 Phương pháp miễn dịch học – ELISA ( Enzyme Linked Immunosorbent Assays) 25 3.2.2 Phương pháp PCR KẾT LUẬN TÀI LIỆU THAM KHẢO 26 PAGE \* MERGEFORMAT iv 28 29 MỞ ĐẦU Giống Vibrio thuộc vào họ Vibrionaceae Chúng vi khuẩn hình que cong dấu phẩy, Gram âm, không sinh nha bào, di động nhờ lông đầu, oxydase dương tính Kể từ năm 1817 giới xảy đại dịch tả Sáu đại dịch tả V.cholerae sinh type cổ điển gây nên Đại dịch tả lần thứ V.cholerae sinh type El Tor gây nên, năm 1961 kéo dài ngày V.cholerae El Tor đề kháng với tác nhân hóa học, tồn lâu người sống thiên nhiên lâu V.cholerae sinh type cổ điển Ngoài vùng bệnh tả El Tor lưu hành trường hợp nặng thường trường hợp nhẹ khơng triệu chứng lại nhiều Bắt đầu từ năm 1992 dịch tả xảy Madras nhiều nơi khác thuộc Ấn Độ Bangladesh Vibrio cholerae O139 gây nên với chế bệnh sinh hoàn toàn giống Vibrio cholerae O1 Sau dịch tả chủng O139 lây lan nước khác V.cholerae nguyên nhân gây bệnh tả điều kiện bình thường, bệnh nguy hiểm lây lan nhanh cộng đồng từ người sang người qua đường thực phẩm nước uống Nguồn nhiễm V.cholerae chủ yếu từ nước, động vật có vỏ, thực phẩm khác bị ô nhiễm phân người có triệu chứng khơng có triệu chứng V.parahaemolyticus phân lập lần đầu Nhật Bản năm 1950 từ phân bệnh nhân tiêu chảy ăn cá biển V.parahaemolyticus nguyên nhân gây nhiễm trùng nhiễm độc thức ăn Người mắc bệnh chủ yếu ăn phải thức ăn hải sản chưa nấu chín bị nhiễm khuẩn trình chế biến bảo quản Thời gian ủ bệnh ngắn từ – Liều lượng gây ngộ độc thực phẩm nhóm vi khuẩn Vibrio thấp, mức 10 tế bào/g sản phẩm Do cần kiểm sốt nghiêm ngặt thực phẩm, địi hỏi phương pháp kiểm nghiệm phải nhạy, quy trình kiểm sốt phải chặt chẽ V.Cholerae V.Parahaemolyticus phát cách nuôi cấy lượng mẫu xác định vào trường lỏng không chọn lọc, sau chuyển vào mơi PAGE \* MERGEFORMAT trường tăng sinh chọn lọc Dịch khuẩn sau tăng sinh chọn cấy phân lập loại môi trường thạch đĩa với mức độ chọn lọc khác Khuẩn lạc nghi ngờ kiểm tra thử nghiệm sinh hóa kháng huyết Để làm rõ quy trình định tính phân lập V.Cholerae V.Parahaemolyticus, nhóm 13 chúng em xin trình bày đề tài“Định tính V.Cholerae V.Parahaemolyticus” hiểu biết số tài liệu nghiên cứu sưu tầm để giải đáp thắc mắc vấn đề cấp thiết đặt Nội dung nghiên cứu: Nghiên cứu tổng quan V.Cholerae V.Parahaemolyticus Nghiên cứu phương pháp,quy trình định tính V.Cholerae V.Parahaemolyticus Ngồi phần mở đầu, kết luận đề tài gồm chương: - Chương 1: Tổng quan V.Cholerae V.Parahaemolyticus - Chương 2: Phương pháp định tính - Chương 3: Quy trình định tính Để phân tích, nghiên cứu vần đề “Định tính V.Cholerae V.Parahaemolyticus”, nhóm sử dụng số phương pháp phân tích nghiên cứu tài liệu Nguồn liệu thứ cấp: - Các số liệu, tài liệu có sẵn V.Cholerae V.Parahaemolyticus nước nước - Một số báo khoa học, tiêu chuẩn sẵn có Nguồn liệu sơ cấp: Đề tài thực phương pháp nghiên cứu định tính: Sử dụng số liệu, tài liệu thống kê thông qua thu thập liệu có sẵn từ sách vở, báo đài, phương tiện truyền thông, tiến hành phân tích, so sánh đánh giá nội dung cần tập trung nghiên cứu Bố cục tập nhóm Chương 1: Tổng quan V.Cholerae V.Parahaemolyticus 1.1 V.Cholerae 1.1.1 Đặc điểm sinh học 1.1.2 Nguồn nhiễm 1.1.3 Tác hại 1.2 V.Parahaemolyticus 1.2.1 Đặc điểm sinh học 1.2.2 Nguồn nhiễm PAGE \* MERGEFORMAT 1.2.3 Tác hại Chương 2: Phương pháp phân tích định tính 2.1 Truyền thống 2.1.1 Phạm vi áp dụng 2.1.2 Nguyên tắc 2.2 Hiện đại 2.2.1 Phương pháp miễn dịch học – ELISA 2.2.2 Phương pháp PCR Chương 3: Quy trình định tính 3.1 Truyền thống 3.1.1 V.Cholerae 3.1.2 V.Parahaemolyticus 3.2 Hiện đại 3.2.1 Phương pháp miễn dịch học – ELISA 3.2.2 Phương pháp PCR PAGE \* MERGEFORMAT CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN VỀ V.CHOLERAE VÀ V.PARAHAEMOLYTICUS 1.1 V.Cholerae 1.1.1 Đặc điểm sinh học V.cholerae vi sinh vật gram âm, hình que hai đầu khơng tạo hình hình dấu phẩy, di động, sống kỵ khí tùy ý, có khả lên men glucose khơng sinh hơi, khơng sinh H2S V.Cholerae có phản ứng oxidase (+), ADH(-), LDC(+), lên men sucrose, tăng trưởng mơi trường có chứa – 3% NaCl, khơng phát triển mơi trường có chứa 6,8,10% muối Cấu trúc kháng nguyên: - Kháng nguyên thân O: chất lipopolysaccharide Nó định tính sinh miển dịch vaccine tả cổ điển (vaccine tả chết) Người ta phân biệt thành nhiều nhóm huyết “O” V.cholerae sinh type cổ điển sinh type El Tor thuộc nhóm huyết O1 Trong nhóm O1 có type huyết : Ogawa, Inaba Hikojima - Kháng ngun lơng H: Khơng có giá trị thực tiễn - Kháng nguyên độc tố ruột chất protein, độc tố ruột V.cholerae 01 kích thích thể sinh kháng độc tố Hình 1.1 Vi khuẩn V.cholerae 1.1.2 Nguồn nhiễm Nước, động vật có vỏ, thực phẩm khác bị ô nhiễm phân người có triệu chứng khơng có triệu chứng 1.1.3 Tác hại PAGE \* MERGEFORMAT Gây bệnh tả cho người Bệnh tả bệnh nhiễm trùng nhiễm độc cấp tính, lây mạnh gây thành dịch lớn Thời gian ủ bệnh từ đến ngày Dấu hiệu đặc trưng thời kỳ toàn phát bệnh tiêu chảy nôn, phân lỏng trắng nước vo gạo Bệnh nhân nước, muối nhanh, lít nước vài xuất hội chứng nước cấp tính làm cho tồn thân sút nhanh nặng Nếu không điều trị, tỷ lệ chết cao (50 đến 60%) Lâm sàng bệnh tả có nhiều biểu khác từ thể nhẹ dễ bỏ qua thể nặng với hội chứng tả điển hình 1.2 V.Parahaemolyticus 1.2.1 Đặc điểm sinh học Vi khuẩn Vibrio parahaemolyticus loại vi khuẩn nhóm với vi khuẩn gây bệnh tả, vi khuẩn có hình que cong dấu phẩy ngắn, vi khuẩn gram âm, không sinh nha bào, di động nhờ lông đầu V.parahaemolyticus bị chết 65oC sau 10 phút, chúng không phát triển nhiệt độ 15oC Phát triển mạnh 37oC Có oxidase (+), lên men D-mannitol, maltose, L.arabinose, khơng lên men saccharose Vi khuẩn có loại kháng nguyên : - Kháng nguyên thân O : chịu nhiệt, chia thành 12 type - Kháng nguyên lông H - Kháng nguyên vỏ K : không chịu nhiệt, chia thành 59 type PAGE \* MERGEFORMAT Hình 1.2 Vi khuẩn Vibrio parahaemolyticus 1.2.2 Nguồn nhiễm V.parahaemolyticus tồn nước biển động vật biển cá, tơm, sị, ốc ; hải sản chưa nấu chín bị nhiễm khuẩn q trình chế biến, bảo quản 1.2.3 Tác hại V.parahaemolyticus nguyên nhân gây nhiễm trùng nhiễm độc thức ăn Thời gian ủ bệnh bệnh ngắn từ – Bệnh biểu triệu chứng nôn tiêu chảy kiểu tả nhẹ tiêu chảy kiểu lỵ trực khuẩn PAGE \* MERGEFORMAT