THÔNG TIN TÀI LIỆU
BỘ CƠNG THƯƠNG ĐẠI HỌC CƠNG NGHIỆP THÀNH PHĨ HỊ CHÍ MINH BAO CAO TONG KET DE TAI KHOA HOC KET QUA THUC HIEN DE TAI NGHIEN CUU KHOA HOC CAP TRUONG Tên đề tài: Đánh giá tác dụng cao chiết muỗng hoàng yén (Cassia fistula Linn) diéu trị viêm gan chuột Swiss albino Mã số đề tài: 22/1SV SHTP02 Chủ nhiệm đề tài: Nguyễn Thu Viên Đơn vị thực hiện: Viện Công nghệ Sinh học Thực phâm Thành phố Hồ Chí Minh, năm 2023 LOI CAM ON Lời đầu nói tiên, nhóm chúng em xin gứi lời cảm ơn chân thành tới ban lãnh đạo trường Đại học Cơng nghiệp Thành phế Hề Chí Minh trợ cấp kinh phí cho nhóm chúng em thực nghiên cứu Đồng thời, nhóm xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới Phòng Quản lý khoa học & Hợp tác quốc tế trợ cấp xét duyệt để tài cho nhóm chúng em trường cấp kinh phí Chúng em xin cảm ơn thầy cô Viện Công nghệ Sinh học Thực phẩm, trường Đại học Cơng nghiệp Thành phố Hề Chí Minh, bác sĩ từ Khoa Giải phẫu bệnh, Bệnh viện Quân y 175 Thành phố Hồ Chí Minh, Khoa Huyết học Sinh hóa, Trung Tâm Y Khoa Medic Bệnh viện Hịa Hảo, Viện Pasteur Thành phế Hồ Chí Minh hỗ trợ nhiều cho chúng em trình thực dé tai nghiên cứu Nhân dịp này, chúng em xin cảm ơn Phịng Thí nghiệm Công nghệ Động vật Viện Công nghệ Sinh học Thực phẩm, trường Đại học Công nghiệp Thành phố Hồ Chí Minh tạo điều kiện tết cho chúng em suốt trình nghiên cứu Xin chan cam on! DANH MUC TU VIET TAT SST Từ viết tắt Nghĩa từ SST Từ viết tắt Nghĩa từ ALP Phosphatase kiểm 34 IP Năng lượng ion hóa ALT Alanin aminotransferase 35 K Kali 36 K¿zCrzO; Potassium dichromat KLCT Khối lượng thể AST Aspartate aminotransferase ATP Adenosin triphosphat cCHh Carbon tetrachloride cD CF CFA CFB Crepidiastrum denticulatum 38 39 Chiết xuất C fistula Chiết xuất nước vô C fistula Chiét xuat ethanol vé than cay C fistula Chiét xuat ethanol 1a C KEbPOs Potassium dihydrogen phosphate Lactate dehydrogenase LDL Lipoprotein ty thap 41 MDA Malondialdehyde 42 Na Natri 43 NazHPOa.12H:O 44 NaOH 45 (NH4);Fe(SO¿);.6H:O Disodium hydrogen 10 CFL 11 CFM 12 CF-MA 13 cl Chlorua 46 oD Mật độ quang học 14 DEN Diethylnitrosamine 47 PC Hợp chất phenolic 15 DNA Acid deoxyribonucleic 48 PLT Số lượng tiểu cầu 16 DC Đối chứng 49 RBC Hồng cầu 17 EDTA 50 SGOT 18 ELE 51 SGPT 19 EM 52 SOD Superoxide dismutase 20 EtCF 53 TG Triglyceride 21 GGT 54 TGF fistula Chiét xuat methanol v6 cay C fistula Chiết xuất cồn methanol qua C fistula Acid Ethylen Diamin Tetra Axetic Chiết xuất ethanol Cassia fistula Linn Effective Microorganismas Chiết xuất ethanol C fistula Gamma glutamyl transferase phosphat doecahydrat Sodium hydroxide Ammonium iron (IT) sulfat hexahydrat Serum Glutamic Oxaloaxetic Transaminas Serum Glutamic-Pyruvate transaminase Yếu tổ tăng trưởng biến đổi 22 GSH Glutathione 55 TGE-B Yếu tổ tăng trưởng biến 23 HO; Hydrogen peroxid 30% 56 TLR4 Yếu tổ tăng trưởng biểu bì 24 HBV Virus viém gan B 57 TN Thí nghiệm 25 HCV Virus viém gan C 58 TNF-« 26 HCHO Formaldehyd solution 59 TGF 27 HDL Lipoprotein mat dé cao 60 Thi Tế bào trợ giúp T loạiI Tế bào hình gan 61 Th2 Tế bảo trợ giúp T Viêm gan 28 đổi- beta Yếu tổ hoại tử khối u ganalpha Yếu tổ tăng trưởng biến đổi 29 IFN Interferon 62 VG 30 IL-10 Interleukin 10 63 SGOT 31 IL-1B IL-2 IL-8 Interleukin beta 64 WBC Bạch cầu 65 WG Mức tăng cân 66 XKN 32 33 Interleukin Interleukin loại II Serum Glutamic Oxaloaxetic Transam inas Xylazil: Ketamil: NaCl Tổng quan tài liệu 1.1 Muéng hoang yén (Cassia fistula L.) Muéng hoang yén (Cassia fistula L.) thudc phan ho Vang (Caesalpinioideae), ho Dau (Fabaceae), chi Cassia, b6 Fabales Muéng hoang yén phat trién tốt điều kiện khí hậu khơ, ánh sáng đầy đủ, đất khô thoang, thoat nuéc C fistula cé tinh chiu han tốt, tính chịu mặn trung bình, có khả chống lại sương giá, rụng sống tốt khu rừng gió mùa khác C ƒisf„ia sống độ cao 1300 m, lượng mưa từ 480 đến 720 mm, nhiệt độ từ 18 dén 29°C, phát triển tốt độ pH 5,5— 8,7 [1] 1.2 Tac dung dugc ly cia mudéng hoàng yến Muéng hoang yén (C fistula) rat giau chat chéng oxy héa nhw anthraquinone, flavonoid, alkaloid, terpenoid, đường khtr, saponin, tannin, carbonyl, phlobatannin, steroid, acid ferulic, heodin, rhein glucoside, galactomannan, sennosidt A va B, tannin, phlobaphen, cdc chat oxyanthraquinon, emodin, acid chrysophanic, fistuacacidin, barbaloin, lupeol, beta-sitosteron va hexacosanon Hat C fistula chta khoang 2% anthraquinon, 24% protein thé, 4,5% chất béo thô, 6,5% chất xơ thô 50% carbohydrate Vỏ thân chứa hai glyeoside flanol glyeoside xanthone La ghi nhận có 15,88% protein thô, 6,65% chất béo thô, 20% chất xơ thô 39,86% carbohydrate [2] C fistula sử đụng rộng rãi loại thuốc thông thường để điều trị bệnh khác Cây có tác dụng lý đa dạng chống ho, bảo vệ gan, chống nhiệt, chống oxy hóa, chống viêm, chống ung thư, chống nắm, chống vi khuẩn, chống ngứa, chống loét, chống động kinh, chữa lành vết thương, tăng chuyển hoa lipid, sốt, giảm ho Bột sử dụng loại thuốc nhuận tràng, điều trị bệnh dày, trực tràng, chống lại tổn thương gan, chống oxy hóa, chống lại q trình peroxy hóa lipid, giảm gốc tự gan thận, sản sinh chất isoflavone biochanin A diệt ký sinh trùng [3] 1.3 Những nghiên cứu tác dụng chữa bệnh muỗng hoàng yến 1.3.1 Việt Nam: Theo y học dân gian Việt Nam, tất phận muỗng hoàng yến (Cassia Jistula L.) có thé ding lam thuéc Qua C fistula đùng đề điều trị rối loạn đường ruột trẻ em, rét run say thuốc Rễ chữa cảm lạnh, hạ sốt Lá vỏ nát thoa lên da trực tiếp chữa bệnh da, đau khớp, bệnh phủ thũng, liệt nhẹ, C /s/„ia cịn có tác dụng điều trị rối loạn tìm mạch, bệnh thần kinh, dạng xuất huyết chảy máu, chứng thừa acid đạ dày, chữa cảm lạnh [4] Cũng theo quan niệm y học cổ truyền Việt Nam, hạt muỗng hoàng yến sống chưa sơ chế có vị nhạt, tính bình vào kinh can, thận Có tác dụng nhuận tràng, ích thận, sáng mất, mát gan, giáng hỏa Thảo minh (hạt muồng hồng yến sơ chế) có vị ngợt đắng, mặn, tính hàn vào kinh can, đớm, có tác dụng an thần, hạ huyết áp, mát gan, giáng hỏa [5] Cây muỗng hồng yến cịn ứng dụng làm thuốc chữa trị nhiều loại bệnh nhờ hợp chất tannin đặc biệt quan trọng lõi Với tính kháng khuẩn kháng virus tốt, chất tannin chữa trị tiêu chảy, viêm ruột, đông máu, viêm niêm mạc miệng, viêm loét dày, Ngoài ra, chúng đùng để giải độc, nguyên ngộ độc sắt kẽm kim loại nang va alkaloid [6] Chiết xuất nước C 7isf„ia nồng độ khác 2,5, 3,75, 5,0, 6,25 0% (w/w) cải thiện triệu chứng viêm da dạng vảy nến mơ hình chuột [7] 1.3.2 Thể giới: Điều tra hoạt động bảo vệ gan chống oxy hóa chiết xuất ethanol C fistula (ELE) chéng lai tốn thương gan điethylnitrosamine gây chuột cho thấy ELE cảm ứng mạnh với enzyme eytochrome P-450, đóng vai trị quan trọng q trình chuyển hóa DEN, phục hồi tổn thương tế bào gan [8] Khảo sát tác dụng hạ đường huyết chiết xuất methanol nước phận cay C fistula chuột cống Với liều điều trị 250 500 mg/kg khôi phục đáng kế lượng đường huyết huyết chuột [9] EtCF thể tác dụng hạ lipid máu chống oxy hóa chuột [10] Một kết nghiên cứu kết luận chiết xuất nước cùi muỗng hồng yến có hoạt tính báo vệ gan đáng kế Phát nghiên cứu trước chất chiết xuất từ vỏ muỗng hoàng yến có khả loại bỏ gốc tự thơng qua việc ức chế q trình peroxy hóa lipid CCl¿ FeSO¿ gan thận chuột [1 1] Quá C fistula duoc st dụng bệnh hen suyễn, tiểu đường, sốt, làm thuốc phá thai, hạ sốt, giảm viêm, vấn dé vé ngực, cổ họng, gan nhãn khoa, trị rắn căn, đau bung, soi than, nhiém tring tiét niệu Bột vỏ C fistula la mét loai thuốc tây giun sắn, điều trị bệnh hắc lào, gout, thap khép, sốt rét bệnh gan Đắp vỏ đốt nóng lên cổ điều trị nhiễm độc máu, bệnh than, kiết ly, phong, tiểu đường, bệnh đường tiêu hóa, ho viêm họng Chiết xuất nước (CFA) methanol (CFM) vo cay C fistula c6 tac dung chéng viém, chéng oxy héa, chéng lai q trình peroxy hóa lipid tạo gốc tự gan va than [11] Đặt van dé Viêm gan bệnh nhiễm virus số nguyên nhân khác, bao gồm viêm gan tự miễn viêm gan nhiễm trùng virus hay tác dụng phụ thuốc, ma túy, chất độc, rượu Các triệu chứng chung vàng da mắt, nước tiểu đậm, phân nhợt nhạt, có máu đen, chân bụng sưng, buồn nôn, giảm cảm giác thèm ăn, mệt mỏi đai dẳng, da cảm thấy ngứa, đễ bằm tím bình thường, mệt mỏi, giảm lượng suy nhược, đau nhức khớp, đau bụng Trên toàn giới, khoảng 170 triệu người bị nhiễm virus viêm gan C (HCV) mãn tính 350 triệu người khác bị nhiễm virus viêm gan B (HBV) mãn tính (Georg cộng sự, 2001) Nếu khơng có biện pháp can thiệp, nhiều thập ký, khoảng 159% đến 30% người nhiễm HBV va HCV man tinh phát triển thành xơ gan, bệnh gan giai đoạn cuối ung thư gan, phải ghép gan (Ganem cộng sự, năm 2001) [12] Tại Việt Nam 7,8 triệu người sống chung với bệnh viêm gan B gần triệu người sống chung với bệnh viêm gan C Điều có nghĩa chín người Việt Nam có người bị nhiễm virus viêm gan B (HBV) virus viêm gan C (HCV) Viêm gan B C gây gần 80 000 ca ung thư gan 40 000 ca tử vong năm Một nghiên cứu cho thấy gần 90% bệnh nhân ung thư gan bị nhiễm HBV HCV Trong tỷ lệ mắc bệnh gan Việt Nam ngày tăng cao nhiều trường hợp phát bệnh giai đoạn nặng, khiến việc điều trị trở nên khó khăn phục hồi chức gan gần không thê, gan chịu nhiều tôn thương Cassia ƒfisfula Linn có đặc tính bảo vệ gan, chống viêm, kháng khuẩn, kháng nắm chữa lành vết thương Hầu hết loài giàu tamin, flavonoid, glycosid, carbohydrate, acid stearic, oleic, oxalic, linoleic, oxyanthraquinon va cdc dan xuat anthraquinon [13] Qua Cassia fistula L chira cc acid amin nhw aspartic (15,3%), glutamic (13%) va lysin (6,6%) So với acid amin toàn phan rhein, anthraquinon fistulacidin Các hợp chất hoạt tính sinh học phat hién qua muéng hoang yén (C fistula) hau hết thuộc nhóm protein polysaccharide chất nghiên cứu nhiều Theo y học cô truyền Việt Nam, phận muỗng hồng yến có thê dùng làm thuốc Rễ trị cảm lạnh, hạ sốt, Lá chữa bệnh da, đau khớp, phù thũng, liệt nhẹ, rối loạn tìm mạch; Quả dùng để điều trị rối loạn, chống viêm giải độc gan, cat dau, chữa rét run say thuéc, Mac dit cé nhtng bao cao vé tac dung cua C fistula nhw bao cdo ca Pradeep et al (2010) vé hiệu qua chiết xuất la C fistula chống viêm gan đo điethylnitrosamine; Báo cáo Kalanfari et al (2011) tác dụng chiết xuat qua cAy chi Cassia chéng tén throng gan bromobenzene Tuy nhién, van thiếu liệu hỗ trợ tác dụng điều trị viêm gan C fistula Hơn nữa, liệu pháp phát triển theo nguyên tắc tây y thường bị hạn chế hiệu quả, có nguy gây tác dụng phụ tốn Thuốc tây y tăng đào thải nước qua tiêu chảy, nước tiểu, mỗ hôi, giảm cảm giác khát thèm ăn, thay đổi điều nhiệt trung tâm Tá dược tao su thay đổi tình trạng hydrat hóa cách giảm thời gian vận chuyển qua đường tiêu hóa tăng tốc độ đường tiêu hóa tính thấm ruột Mối quan tâm gần đến liệu pháp tự nhiên thuốc thay khiến nhà nghiên cứu ý đến thuốc thảo truyền thống Do tính hiệu quả, tác dụng phụ tối thiểu mặt điều trị, phí thấp góp phần đáng kế phục hồi bệnh gan Mặt khác, thảo dược dễ đàng tiếp cận giá thành rẻ, thu nhận từ “tự nhiên”, phù hợp với người mẫn cám với thuốc Với tới 65% bệnh nhân gan đùng chế phẩm từ thảo thảo dược bảo vệ gan đáng tin cậy khơng đủ việc tìm kiếm ngày gia tăng Tìm tịi thảo điều trị viêm gan mục đích hướng tới y học cổ truyền Những thuốc sử đụng hỗ trợ điều trị viêm gan kế sữa (Siiubum marianum) ức chế viêm cách kiểm soát việc sản xuất leukotrienes thúc trình sản xuất glutathione gan, rễ bề cơng anh (Taraxacưm officinale) kích thích sản xuất mật, chống oxy hóa bảo vệ gan, nghệ (Cuzcuma longa) chống oxy hóa, chống virus gây bệnh viêm gan, muéng hoang yén (Cassia fistula), hoa cic (Chamomile recutta), Tuy nhién, nhiéu loại thao dược có thê làm giảm hiệu số loại thuốc tăng tác dụng phụ sử dụng liều bn nơn, nơn, tiêu chảy, nhức đầu, chóng mặt, phản ứng dị ứng, tốn thương gan, vấn để chảy máu mắt cân nội tiết tố [14] Dữ liệu đáng tin cậy thuốc thảo dược bảo vệ gan không đủ, tác dụng phụ xây sử dụng lâu dai Muỗng hồng yến loại thảo dược q, sinh trưởng phát triển tốt Việt Nam, khơng độc, có tính kháng oxy hóa, kháng viêm, có hiệu chữa bệnh Hiện nay, có nhiều báo cáo khoa học đề cập đến thành phần hợp chất sinh học tác dụng điều trị bệnh viêm gan từ chiết xuất lá, hoa, hạt vỏ muỗng hoàng vến Tuy nhiên, kiến thức hoạt động điều trị viêm gan chiết xuất muỗng hồng yến cịn hạn chế Chính vậy, nghiên cứu thực với mơ hình đánh giá đánh giá tác dụng cao chiết muéng hoang yén (Cassia fistula Linn) điều trị viêm gan chuột Swiss albino, dé chinh la muc tiéu va su can thiét phai tién hanh nghiên cứu Mục tiêu Đánh giá tác dụng chiết xuất ethanol muỗng hoàng yến (C fistula) trị bệnh viêm gan chuột Swiss albino Phương pháp nghiên cứu 4.1 Thuốc thử, hóa chất thiết bị Carbon tetrachloride (CCly) (Hinh 1.1 A) la mét phan ti hydrocacbon clo CCl 1a mét hydrocacbon clo héa trong, khéng mau, dé bay ồn định Silymarin, chiết xuất từ hạt kế sữa (S/ybươn marianum) (Hinh 1.1 B), sử dụng điều trị rối loạn chức gan túi mật Thuốc có dạng viên nén bao đường viên nén bao phim Hình 1.1 Hóa chất phẩm đùng cho thí nghiệm; A CCl¿ đầu liu; B Silymarin - Hóa chất: Ethanol, đisođium hydrogen phosphat doecahydrat (Na2HPO1.12H20), acid axetic (CH3COOH), hydrogen peroxid 30% (H202), acid lactic (CeH6O3), potassium dichromat (K2Cr207), potassium dihydrogen phosphat (KH2PO,), sodium hydroxit (NaOH), ammonium iron (ID) sulfat hexahydrat- (NH4)2Fe(SO4)2.6H20, trichloroacetic acid, sodium ascorbat (vitamin C), formaldehyd solution (HCHO), tris-EDTA, chloroform (CHCls), HCI, xylazin, ketamin NaCl, (Hinh 1.2) Hình 1.2 Các loại hóa chất sử dụng cho thí nghiệm 4.2 Vật liệu chiết xuất ethanol muỗng hoàng yến 4.2.1 Vật liệu Quả muỗng hồng yến (Hình 1.3 A) thu hái quận Liên Chiều, thành phố Đà Nẵng Mẫu lưu phịng thí nghiệm thực vật, Viện Cơng nghệ Sinh học Thực phẩm, Trường Đại học Công nghiệp Thành phố Hồ Chí Minh Hình 1.3 Vật liệu muỗng hoàng yến; A Quả muỗng hoàng yến tươi; B Quả muồng hồng yến cät lát phơi khơ; C Bột mng hồng n; D EtCE 4.2.2 Chiết xuất ethanol mng hồng vến Quả C /isz/2 thu nhận, rửa nước, phơi khô, sấy, nghiền thu bột khơ (Hình 1.3 B C) Sau đó, bột ngâm dung mơi ethanol (95% v/v), ethanol dung môi sử dụng nhiều đo hịa tan nhiều nhóm hoạt chất, khơng độc, dễ kiếm Dịch chiết cô đặc thiết bị cô quay chân không (đặt tên EtCF) [15] EtCF thường tối mau (Hình 1.3 D) 4.3 Sàng lọc hóa chất thực vật Thứ nghiệm tìm saponin: 300 mg cao chiết đưn sôi với mL nước hai phút Hỗn hợp làm nguội, trộn mạnh dé ba phút Sự hình thành bọt cho thay diện cua saponin Thủ nghiệm tìm tannin: Cao chiết, trộn với dung dich gelatin 1% Kết tủa cho thấy điện tannmn Thử nghiệm tìm terpenoid chloroform va thém mL H2SO, (thử nghiệm Salkowskl): mL cao chiết trộn voi mL dac va lic Kết qua duong tinh điện terpenoid ghi nhận xuất màu nâu đỏ Thử nghiệm tìm alkaloid: phân hủy 300 mg cao chiết HCI 2M Dịch lọc có tính acid trộn với amyl aleohol nhiệt độ phòng, kiểm tra lớp côn cho màu hồng cho thấy có mặt alkaloid Th nghiệm tìm flavonoid: Sự dién cua flavonoid xác định cach su dung dung dich aluminium chloride 1% methanol, HC] dam dac, magie va dung dich kali hydroxide, xuất bọt màu vàng Thử nghiệm tìm earbohydrate (phép thử Fehling): Trộn lượng dung địch Fehling A dung gan MDA sản xuất sản phâm phụ cúa q trình peroxy hóa lipiđ xây lõi ky nước màng sinh học [60] Hình 1.19 cho thấy tác dụng việc điều trị trước đường uống với 200, 300, 400 mg/kg EtCF 56 ngày sau gây viêm gan CCI¿ dấu hiệu chéng oxy héa (CAT, GSH MDA) chuột điều trị CCla làm giảm đáng kế (p
Ngày đăng: 13/12/2023, 23:11
Xem thêm: