Nghiên cứu tối ưu quá trình nuôi cấy quả thể của nấm đông trùng hạ thảo cordyceps militaris

TRƯỜNG ĐẠI HỌC LÂM NGHIỆP VIỆN CỘNG NGHÊ SINH HỌC ========&&&======= LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP Chủ đề: NGHIÊN CỨU TỐI ỨU HĨA Q TRÌNH NI CẤY QUẢ THỂ CỦA NẤM ĐÔNG TRÙNG HẠ THẢO CORDYCEPS MILITARIS Giảng viên/Cán hướng dẫn: Sinh viên thực hiện: Lớp: Mã Sinh Viên: Hà Nội, 2022 TS Nguyễn Thị Thu Hằng Th.S Nguyễn trọng Trí Nguyễn Thị Thu Hà K63 – CNSH 1851070364 LỜI CẢM ƠN Trong trình nghiên cứu đề tài: “Nghiên cứu tối ưu hóa q trình ni cấy tạo thể nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris” Để có kết trước hết em xin bày tỏ lòng cảm ơn sâu sắc tới thầy giáo Th.S Nguyễn Trọng Trí giáo T.S Nguyễn Thị Thu Hằng tận tâm hướng dẫn, bảo truyền đạt kiến thức cho em suốt trình nghiên cứu để em hồn thành đề tài Em xin cảm ơn ban lãnh đạo Viện CNSH Lâm Nghiệp Bộ mơn Vi sinh – Hóa sinh Em xin cảm ơn thầy cô giáo giảng dạy Viện Công nghệ sinh học Lâm nghiệp dạy bảo, trang bị cho em kiến thức quý báu suốt năm học vừa qua Bên cạnh em xin chân thành cảm ơn giúp đỡ nhiệt tình tồn cán viên chức Cty TNHH MTV Tinh hoa Việt tạo điều kiện, giúp đỡ cho em để trình nghiên cứu thuận lợi Với kết khả quan em xin tiếp tục nghiên cứu tiếp để đề tài đạt kết tốt Với tinh thần cố gắng, chăm ham học hỏi nhiên với kinh nghiệm hạn chế nên q trình nghiên cứu khơng tránh khỏi thiếu sót, em mong nhận lời nhận xét, đóng góp ý kiến thầy, giáo để đề tài nghiên cứu em hoàn thiện Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 14 tháng 06 năm 2022 Sinh viên thực Nguyễn Thị Thu Hà ii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC HÌNH vi DANH MỤC BẢNG vii ĐẶT VẤN ĐỀ PHẦN TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Giới thiệu nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris 1.1.1 Phân loại 1.1.2 Lịch sử phát 1.1.3 Đặc điểm sinh học sinh thái 1.1.4 Giá trị dược liệu 1.1.5 Tình trạng phân bố khai thác 1.2 Nghiên cứu nuôi nhân tạo nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris 1.2.1 Trong nước 1.2.2 Trên giới PHẦN MỤC TIÊU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Mục tiêu nghiên cứu 2.1.1 Mục tiêu chung 2.1.2 Mục tiêu cụ thể 2.2 Nội dung nghiên cứu 2.3 Vật liệu nghiên cứu, địa điểm điều kiện bố trí thí nghiệm 2.3.1 Vật liệu nghiên cứu 2.3.2 Địa điểm điều kiện bố trí thí nghiệm 10 iii 2.4 Phương pháp nghiên cứu 11 2.4.1 Xác định ảnh hưởng tốc độ lắc tới khả tạo sinh khối nấm 11 2.4.2 Xác định ảnh hưởng độ dày chất đến phát triển suất thể 11 2.4.3 Xác định ảnh hưởng thời gian ủ tối đến sư phát triển thể 13 2.4.4 Phương pháp thu thập xử lý số liệu 13 PHẦN KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 14 3.1 Ảnh hưởng tốc độ lắc tới khả tạo cầu nấm 14 3.2 Ảnh hưởng độ dày chất tới khả tạo thể 16 3.3 Ảnh hưởng thời gian ủ tối tới phát triển thể 21 PHẦN KẾT LUẬN - TỒN TẠI - KIẾN NGHỊ 24 4.1 Kết luận 24 4.2 Tồn 24 4.3 Kiến nghị 24 TÀI LIỆU THAM KHẢO 25 PHỤ LỤC 28 iv DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Chữ viết đầy đủ CT Công thức C militaris Cordyceps militaris C sinensis Cordyceps sinensis cs Cộng g Gam NC Nghiên cứu v/p Vòng/phút v DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Đơng trùng hạ thảo Cordyceps militaris tự nhiên Hình 2.1: Chủng nấm Đơng trùng hạ thảo Cordyceps militaris THV05 Hình 3.1: Ảnh hưởng tốc độ lắc khác đến khả tạo cầu nấm sau 10 ngày ni cấy Hình 3.2: Ảnh hưởng độ dày chất đến phát triển thể Hình 3.3 Ảnh hưởng thời gian ủ tối đến phát triển hệ sợi nấm sau 12 ngày chuyển nấm từ tối ni ngồi sáng Hình 3.4 Ảnh hưởng thời gian ủ tối đến phát triển thể nấm sau 65 ngày chuyển nấm từ tối ni ngồi sáng vi DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1: Tốc độ lắc thành phần môi trường nuôi cấy nấm Cordyceps militaris Bảng 2.2: Công thức phối trộn hàm lượng chất Bảng 3.1: Ảnh hưởng tốc độ lắc đến khả tạo cầu nấm Bảng 3.2: Ảnh hưởng độ dày chất đến phát triển thể Bảng 3.3: Ảnh hưởng thời gian ủ tối tới phát triển thể vii ĐẶT VẤN ĐỀ Nấm Đông trùng hạ thảo (Cordyceps) loài nấm dược liệu quý giới biết đến Trong số loài nấm thuộc chi Cordyceps, loài Cordycep militaris chứa thành phần hóa học có giá trị dinh dưỡng dược tính như: cordycepin, adenosine, cordycepic acid, polysaccharides, superoxide dismutase (SOD), acid béo, sterol hoạt chất có tác dụng sinh học khác acid amin, protein, vitamin (A, B1, B3, B6, B12, ) nguyên tố vi lượng (Zn, Se, Cu, ) Có nhiều chứng khoa học xác nhận hiệu Đông trùng hạ thảo Cordycep militaris như: cải thiện hệ miễn dịch, hạ đường huyết, chống lão hóa, chống viêm, hoạt động chống khối u, chống tế bào ung thư, hỗ trợ hệ tim mạch, cải thiện phục hồi chức sinh sản, làm mỹ phẩm Hiện nay, bị khai thác mức nên Đông trùng hạ thảo khai thác từ tự nhiên (chủ yếu thuộc loài Cordyceps sinensis) dần trở nên khan điều thúc đẩy nhiều nghiên cứu hướng đến việc nuôi trồng Đông trùng hạ thảo nhân tạo quy mô lớn Trong đó, lồi Cordyceps militaris nghiên cứu ni cấy nhân tạo thành công tạo thể có hàm lượng chất hóa học có dược tính quan trọng tương đương lồi Cordyceps sinensis Đơng trùng hạ thảo tự nhiên Ở Việt Nam, việc nuôi cấy nhân tạo nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris phổ biến, để tìm quy trình ni cấy tối ưu cho suất thể cao, chất lượng thể tốt cịn tốn khó Vì vậy, đề tài “Nghiên cứu tối ưu hóa q trình ni cấy tạo thể nấm Đơng trùng hạ thảo Cordyceps militaris” thực với mục tiêu xác định số điều kiện thích hợp cho nuôi cấy nhân tạo nấm Cordyceps militaris đạt suất thể cao, góp phần nâng cao hiệu sản xuất qui trình ni cấy nấm Cordyceps militaris Công ty TNHH MTV Tinh hoa Việt Việt Nam Phần TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Giới thiệu nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris 1.1.1 Phân loại Theo hệ thống phân loại, chi Cordyceps thuộc giới Nấm, ngành Ascomycota, lớp Sordariomycetes, Hypocreales, họ Clavicipitaceae, gồm 400 loài khác (Sung J H cộng sự, 2007) Nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris thuộc: Giới: Fungi Ngành: Ascomycota Phân ngành: Ascomycotina Lớp: Sordariomycetes Bộ: Hypocreales Họ: Clavicipataceae Chi: Cordyceps Lồi: Cordyceps militaris Hình 1.1: Đơng trùng hạ thảo Cordyceps militaris tự nhiên 1.1.2 Lịch sử phát Những nghiên cứu nấ m Cordyceps công bố nhà khoa ho ̣c Trung Quố c cho thấy: vùng núi cao nguyên Tây Ta ̣ng có phân bố lồi nấm thuộc chi Cordyceps C sinensis ký sinh vào ấ u trùng của loài bướm, sâu non, nhộng hoặc sâu trưởng thành của một sớ lồi trùng Mùa đơng giống nấm C sinensis ký sinh số loài sâu để sinh trưởng phát triển, tới mùa hè nấm mọc thành thể Quả thể nấm Cordyceps thường có màu vàng nhạt màu da cam (Zheng cs, 2011) Năm 1878, nhà khoa ho ̣c phát hiện loài C militaris cũng ký sinh ấ u trùng của lồi trùng thuộc chi Thitarodes (Shih cs, 2007; John Matt, 2008) 1.1.3 Đặc điểm sinh học sinh thái Nẩm Cordyceps militaris ký sinh bướm ấu trùng (sâu bướm), có màu cam, chiều dài - 10 cm Đầu nấm có hình dạng giọt nước (đầu chùy), phần đầu có đốm màu cam sáng Quả thể nấm nhô lên từ xác ấu trùng nhộng Nang bào tử dài 300 - 510 µm, rộng µm Các bào tử nang hình sợi, khơng màu phân đoạn, kích thước 3,5 - x – 1,5 µm Bào tử nang điều kiện nghèo dinh dưỡng đứt nảy chồi tạo bào tử thứ cấp Vào mùa Đơng nấm xâm nhiễm, kí sinh vào thể côn trùng làm côn trùng chết, sau nấm tiếp tục tồn thể trùng dạng hệ sợi gọi giai đoạn vơ tính Đến mùa Hè, nhiệt độ ẩm độ khơng khí cao, hệ sợi nấm vơ tính tiến hành giao phối chuyển sang giai đoạn hữu tính, từ bắt đầu hình thành nấm (chất đệm) - quan chứa bào tử vơ tính - dần nhú lên khỏi mặt đất gốc nấm dính liền vào thân trùng Chính mà nấm đặt tên nấm Đông trùng hạ thảo (Phạm Quang Thu cs, 2013) 100 vòng/phút 150 vòng/phút 200 vịng/phút C Hình 3.1: Ảnh hưởng tốc độ lắc khác đến khả tạo cầu nấm sau 10 ngày ni lắc Kết trình bày Bảng 3.1 Hình 3.1 cho thấy cơng thức 150 vịng/phút 200 vịng/phút có kết tương đương Dù tăng tốc độ lắc lên 200 vịng/phút kết khơng chênh lệch nhiều nên kết luận tốc độ lắc thích hợp cho cầu nấm trắng, kích thước đồng đều, thích hợp cho ni cấy tốc độ lắc 150 vòng/phút Thực tế sản xuất sử dụng dịch giống chứa mật độ cầu nấm cao, kích thước cầu nấm to gây khó khăn việc cấy giống nuôi trồng 3.2 Ảnh hưởng độ dày chất tới khả tạo thể Lượng chất bổ sung vào mơi trường ni cấy có khả ảnh hưởng đến suất, chất lượng hình dạng thể hàm lượng dược tính thể Do vậy, việc xác định hàm lượng chất cho độ dày chất phù hợp mang lại hiệu suất cao thu hoạch thể sở cho tính tốn để tiết kiệm chi phí sản xuất Trong tự nhiên, nấm C militaris thường ký sinh loại côn trùng Để giảm giá thành chủ động nguồn nguyên liệu sản xuất, nhiều thí nghiệm ni trồng nấm C militaris môi trường hữu tiến hành 16 nguồn chất hữu gạo lứt chứng minh thích hợp để ni trồng C militaris môi trường nhân tạo Kobayasi (1941) tiến hành thử nghiệm trồng C militaris chất gạo Từ trở đi, gạo trở thành nguồn chất chủ yếu để nuôi trồng C militaris môi trường nhân tạo Nghiên cứu tiến hành loại chất gạo lức tương ứng với công thức khác cho độ dày chất khác thể tích dịch dinh dưỡng phối trộn chất gạo lức khác Các yếu tố khác lượng giống (20ml) bơm cho công thức nhau, điều kiện chăm sóc đảm bảo Các hộp sau trải qua q trình ủ tối đưa ni sáng với chế độ chiếu sáng 18h/ngày, nhiệt độ phịng ln đảm bảo 20oC nhiệt độ tối ưu việc tạo thể nhân tạo (Choi Y.S cs, 1999) Mục tiêu nghiên cứu chọn độ dày chất thích hợp cho phát triển thể mà lại tiết kiệm chi phí ngun liệu cho sản xuất Sau ni cấy công thức môi trường tương ứng với độ dày chất khác nhau, đặc điểm sinh trưởng, phát triển tạo thể nấm C militaris THV05 thống kê Bảng 3.2 hình ảnh thu thập trình nghiên cứu trình bày Hình 3.2 Bảng 3.2: Ảnh hưởng độ dày chất đến phát triển thể Công thức môi trường GT1 GT2 GT3 15 20 20 25 ± 0,3 40 ± 0,3 41 ± 0,2 Thời gian hệ sợi nấm ăn lan kín giá thể (ngày) Thời gian xuất thể (ngày) Sinh khối thể (g/hộp) 17 Kích thước thể trung bình Chiều dài 35 ± 3,0 40 ± 1,5 45 ± 2,0 1,8 ± 0,3 1,4 ± 0,3 1,8 ± 0,2 (mm) Đường kính (mm) Quả thể nấm to, Sau 30 phát triển nhanh ngày mọc thưa, màu vàng Quả thể nấm có thể đầu nhỏ phần ngày thân phình to, kích thước khơng đồng đều, thể nấm mọc thưa, tương đối chậm phát triển, màu vàng cam Đặc điểm Sau 45 Quả cao vừa phải, màu vàng Quả thể nấm màu vàng cam, to vừa phải, cao vừa phải, mọc dày đồng Quả thể mọc dày, tương đối chậm phát triển, màu vàng cam Quả thể nấm to vừa phải, mọc dày, không thẳng, màu vàng cam Giải thích cho điều hàm lượng chất dịch dinh dưỡng cơng thức GT1 nên đủ cho thể phát triển nhanh vào thời gian đầu (Hình 3.2 A) hệ sợi dễ dàng ăn lan kín bề mặt giá thể với thời gian ngắn nhất, sau hàm lượng chất dinh dưỡng nên tốc độ phát triển thể chậm lại phát triển thêm đường kính nên thể cơng thức GT1 có chiều cao đường kính lại phát triển cơng thức GT2 có độ dày giá thể 1,2 - 1,5 cm GT3 có độ dày giá thể 1,8 – 2,0 cm Bởi theo Li cộng (2006), kích thước thể nấm cũng phụ thuộc nhiều vào lượng dinh dưỡng có mơi trường ni cấy, mơi trường nhiều dinh dưỡng kích thước thể lớn, mơi 18 trường có q nhiều dinh dưỡng chiều cao thể nấm phát triển phát triển đường kính thể nấm Cơng thức GT2 GT3 có thời gian hệ sợi ăn lan kín hộp mơi trường xuất thể, suất gần Thời gian đầu cơng thức GT2 GT3 có thời gian hệ sợi ăn lan kín mơi trường muộn, hàm lượng chất cao khiến hệ sợi thời gian ăn lan kín khơng nhanh cơng thức GT1, ngược lại thể công thức phát triển dày, thể có kích thước lớn tương đối lớn màu đẹp Nguyên nhân hàm lượng chất dịch dinh dưỡng bổ sung vào mơi trường ảnh hưởng tới kích thước thể suất Quả thể phát triển so với cơng thức GT1 hàm lượng chất dịch dinh dưỡng nhiều nên đủ cung cấp cho thể phát triển đến thu hoạch Vì cần lựa chọn cơng thức hàm lượng chất thích hợp cho thể đẹp, suất tốt, mà lại giảm chi phí ngun liệu đầu vào Từ công thức trên, nhận thấy công thức GT2 thích hợp đưa vào sản xuất thực tế thích hợp tiết kiệm chi phí ngun liệu mà sản lượng lại khơng công thức GT3 A B 19 C D E F Hình 3.2: Ảnh hưởng hàm lượng chất đến phát triển thể A, B: Sự phát triển thể nấm nuôi cấy môi trường GT1 sau 25 ngày (A) 45 ngày (B) C, D: Sự phát triển thể nấm nuôi cấy môi trường GT2 sau 25 ngày (C) 45 ngày (D) E, F: Sự phát triển thể nấm nuôi cấy môi trường GT3 sau 25 ngày (E) 45 ngày (F) 20 3.3 Ảnh hưởng thời gian ủ tối tới phát triển thể Nghiên cứu sử dụng loại chất chủ yếu 40g gạo lức + 40 ml dịch dinh dưỡng (gồm 5g pepton, 5g cao nấm men, 0,1g vitamin B1, 0,1g MgSO4, 0,5g KH2PO4, 30g glucose) tỷ lệ tối ưu nghiên cứu thí nghiệm xác định ảnh hưởng độ dày chất Sau bọc kín hộp đưa tiến hành hấp khử trùng 40 phút với 121ºC, để nguội tự nhiên tiến hành cấy 20 ml dịch giống Đưa tiến hành ủ tối khoảng thời gian khác điều kiện nhiệt độ 20ºC, độ ẩm khoảng 80-85%, từ xác định thời gian ủ tối thích hợp kích thích sợi nấm phát triển, ăn lan bề mặt giá thể tốt Bảng 3.3: Ảnh hưởng thời gian ủ tối tới phát triển thể Công thức UT1 UT2 UT3 3 20 15 12 30 ± 2,6 50 ± 3,0 51 ± 2,0 Thời gian bắt đầu xuất hệ sợi (ngày) Thời gian bắt đầu xuất thể (ngày) Sinh khối thể (g/hộp) Hệ sợi phát triển Sau Đặc 12 điểm hệ ngày sợi thể mảnh, ăn lan kín bề mặt có màu vàng, bề mặt hệ sợi không xốp Sau 24 ngày Hệ sợi ngừng Hệ sợi ngừng phát phát triển có triển, bề mặt hệ sợi màu vàng, bề bơng xốp có màu mặt hệ sợi vàng, bắt đầu hình bơng xốp nhẹ thành thể Quả thể bắt đầu Quả thể bắt đầu Quả thể bắt đầu hình thành phát triển 21 phát triển Sau 65 ngày Quả thể nấm Quả thể nấm Quả thể nấm to vừa mảnh, thấp, màu mảnh, cao, màu phải, vàng cam vàng cam cao, màu vàng cam Kết nghiên cứu trình bày Bảng 3.3 Hình 3.3, Hình 3.4 cho thấy: Thời gian ủ tối thích hợp ngày (cơng thức UT3) thời gian hệ sợi ăn lan kín, có màu trắng hệ sợi có độ xốp quan sát bẳng cảm quan mắt hệ sợi nấm phát triển khỏe (Hình 3.3) Bằng chứng sau 65 ngày kể từ đưa hộp nuôi cấy kích sáng thể nấm mọc dày, có chiều dài, kích thước tương đối (Hình 3.4) Ủ tối ngày sau chuyển sang kích sáng (cơng thức UT1) thể nấm có kích thước ngắn thể mảnh; giải thích cho lý thể phát triển ủ tối ngày hệ sợi nấm cịn yếu, hệ sợi chưa bắt đầu ăn lan kín bề mặt nên chuyển hộp ni cấy kích sáng xảy tượng thể phát triển Ủ tối ngày Ủ tối ngày Ủ tối ngày Hình 3.3 Ảnh hưởng thời gian ủ tối đến phát triển B hệ sợi nấm sau 12 ngày chuyển nấm từ tối ni ngồi sáng Đối với thời gian ủ tối ngày (cơng thức UT2) hệ sợi có ăn lan kín song hệ sợi chưa ăn lan kín hết bề mặt giá thể, bề mặt hệ sợi bắt đầu có độ xốp, thời gian chưa phù hợp chuyển sang giai đoạn kích sáng, nên sau 65 ngày thể công thức UT2 ủ tối ngày có phần 22 phát triển công thức UT3 ủ tối ngày Vì cơng thức ủ tối thích hợp cho sản xuất công thức UT3 với thời gian ủ tối ngày cho thể mọc dày, màu đẹp, suất tốt, trung bình 51,2 g/hộp Ủ tối ngày Ủ tối ngày Ủ tối ngày A B C Hình 3.4 Ảnh hưởng thời gian ủ tối đến phát triển thể nấm sau 65 ngày chuyển nấm từ tối ni ngồi sáng 23 Phần KẾT LUẬN - TỒN TẠI - KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Từ kết nghiên cứu thu nghiên cứu tối ưu quy trình ni trồng nấm Đơng trùng hạ thảo Cordyceps militaris THV05, rút số kết luận sau: - Tốc độ lắc kích thích tạo cầu nấm thích hợp giai đoạn nhân giống cấp ni lắc 150 vịng/phút, cho mật độ cầu nấm cao, cầu nấm trắng, kích thước cầu nấm đồng thích hợp để nuôi cấy - Môi trường chất gạo lức có hàm lượng phù hợp 40g gạo lức + 40 ml dịch dinh dưỡng + 20ml dịch giống với độ dày 1,2 – 1,5 cm, cho thể mọc dày, màu đẹp, suất tốt trung bình 40,3 g/hộp - Thời gian ủ tối thích hợp sau ngày, hệ sợi nấm trắng khỏe, bề mặt hệ sợi xốp, hệ sợi nấm ăn lan Quả thể thu hoạch cho suất tốt trung bình 50,3g/hộp 4.2 Tồn Chưa tiến hành nghiên cứu thiết kế thí nghiệm nhiều loại chất khác 4.3 Kiến nghị Nhà trường Viện tạo điều kiện để nghiên cứu tiếp tục thực hoàn thiện đề tài nghiên cứu thời gian tới 24 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt Đái Duy Ban, Lưu Tham Mưu (2009), Đông trùng hạ thảo, Nxb Y học, Hà Nội Nguyễn Mậu Tuấn, Nguyễn Thái Huy, Trương Phi Hùng, Lê Thị Thơ, Nguyễn Kim Chi (2013) Một số kết nghiên cứu nấm Đông trùng hạ thảo Lâm Đồng Hội thảo quốc tế Khoa học Công nghệ phục vụ phát triển sản xuất nông nghiệp công nghệ cao tỉnh Lâm Đồng, 51-55 Phạm Quang Thu (2015) Nghiên cứu xây dựng quy trình ni trồng nấm Đơng trùng hạ thảo Cordyceps militaris (L :Fr.) Link có giá trị dược liệu thương mại cao Báo cáo kết nghiên cứu Viện Khoa học Lâm nghiệp Việt Nam, 45-48 Phạm Quang Thu, 2009 Điều tra phát nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps nutans Pat Phân bố khu bảo tồn thiên nhiên Tây Yên Tử, Sơn Động, Bắc Giang Tạp chí Nơng nghiệp & Phát triển nơng thôn, số 4, 9194 Phạm Quang Thu (2009) Phát nấm nhộng trùng hạ thảo Cordyceps gunni Berk vườn quốc gia Tam Đảo tỉnh Vĩnh Phúc Tạp chí Nông nghiệp Phát triển Nông thôn, số 6, 96-99 Phạm Quang Thu, Lê Thị Xuân, Nguyễn Mạnh Hà (2009) Nghiên cứu đặc điểm sinh học hệ sợi nuôi cấy khiết chủng nấm đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris (L.:Fr) Link Kết nghiên cứu khoa học công nghệ Lâm nghiệp giai đoạn 2006 - 2010, 400-408 Phạm Quang Thu, Nguyễn Mạnh Hà (2009) Phát nấm Nhộng trùng hạ thảo Cordyceps militaris (L.:Fr) Link vườn quốc gia Hoàng Liên tỉnh Lào Cai Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển nơng thơn, số 9, 67-70 25 Phạm Thị Thuỳ (2010) Nghiên cứu phát triển nguồn nấm Beauveria Metarhizium để ứng dụng phòng trừ sâu hại trồng, rừng phát nguồn nấm Cordyceps sp làm thực phẩm chức cho người Báo cáo Hội thảo Quốc gia bệnh hại thực vật Việt Nam Nxb Nông nghiệp, 224-231 Tài liệu Tiếng Anh Ahn, Y.J., Park, S.J., Lee, S.G., Shin, S.C and Choi, D.H., 2000 Cordycepin: selective growth inhibitor derived from liquid culture of Cordyceps militarisagainst Clostridium spp J Agric Food Chem, 48, pp 27442748 Das S.K (2009) Production of anti-cancer agent cordycepin from the medicinal mushroom Cordyceps militaris A Dissertation of Doctor of Engineering, University of Fukui, Japan Choi Y.S., Lee H.K., Kim S.H (1999) Production of fruiting body using cultures of entomopathogenic fungal species Korean Journal of Mycology 27, pp 15–19 Kobayasi Y (1941), The genus Cordyceps and its allies, Science reports of the Tokyo Bunrika Daigaku, 5, pp.53-260 Kwon J.S., Lee J.S., Shin W.C., Lee K.E., Hong E.K (2009), Optimization of culture conditions and medium compoments for the production of mycelial biomass and exo-polysacharides with RFSVPV in liquid culture, Biotechno, Bioprocess Eng,14, pp.756-762 Li S.P., Yang F.Q., Tsim K.W.K., (2006) Quality control of Cordyceps militaris, a valued traditional Chinese medicine Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 41, pp 1571-1584 Park J.P., Kim S., Hwang H.J., Yun J.W (2001), Optimizationof submerged culture conditions for the mycelia growth and exo-biopolymer 26 production by RFSV PV The Society for Applied Microbiology, Lettersin Applied Microbiology, 33, pp.76-81 Patcharaporn Wongsa, Kanoksri Tasanatai, Patricia Watts and Nigel Hywel-Jones (2005) Isolation and in vitro cultivation of the insect pathogenic fungus Cordyceps unilateralis Mycological Research , 109, pp 936 - 940 Paul M K., Paul F C., David W M and Stalpers J A., (2008) Dictionary of the Fungi; CABI 10 Russell R., Paterson M (2008) Cordyceps – A traditional Chinese medicine and another fungal therapeutic biofactory? Phytochemistry 69, pp 1469-1495 11 Shih I.L., Tsai K.L., Hsieh C.Y (2007) Effects of culture conditions on the mycelial growth and bioactive metabolite production in submerged culture of Cordyceps militaris Biochemical Engineering Journal, 33, pp 193–201 12 Sung J.H., Jones N.L.H., Sung J.M., Luangsa-ard J.J., Shrestha B., Spatafora J.W.(2007) Phylogenetic classification of Cordyceps and the clavicipitaceous fungi Studies in Mcology, 57, pp.5–59 13 Won S.Y., Park E.H (2005) Anti-inflammatory and related pharmacological activities of cultured mycelia and fruiting bodies of Cordyceps militaris Journal of Ethnopharmacology 96, pp 555-561 14 Xie, C.Y., Gu, Z.X., Fan, G.J., 2009 Production of cordycepin and mycelia by submerged fermentation of Cordyceps militaris in mixture natural culture Applied Biochemistry and Biotechnology 158, pp 483-492 15 Ying Chang, Kee-Ching Jeng, Kuei-Fen Huang, Ying-Chung Lee, Chien-Wei Hou, Kuan-Hao Chen, Fu-Yen Cheng, Jiunn-Wang Liao and Yuh-Shuen Chen (2008) Effect of Cordyceps Militaris Supplementation on Sperm Production, Sperm Motility and Hormones in Sprague-Dawley Rats The American Journal of Chinese Medicine, Vol 36, No 05, pp 849-859 27 PHỤ LỤC 28 Phụ lục 1: Sinh khối tươi 108 mẫu NC hàm lượng chất GT1 Số lần lặp lại M (gam) 10 29 11 29.3 12 29.5 13 31 14 31.3 15 30.9 16 30.5 17 30 Tổng 108 GTTB 30,26 Phụ lục 2: Sinh khối tươi 108 mẫu NC hàm lượng chất GT2 Số lần lặp lại M (gam) 10 50.4 11 51 12 50 13 49,8 14 50.6 15 50.2 16 50.5 17 50.1 Tổng 108 GTTB 50,3 29 Phụ lục 3: Sinh khối tươi 108 mẫu NC hàm lượng chất GT3 Số lần lặp lại M (gam) 10 50 11 52 12 52.2 13 51.5 14 51.3 15 50.7 16 51.3 17 51 Tổng 108 GTTB 51,2 30