Nghiên cứu kỹ thuật tạo và đánh giá tính an toàn của viên nang có chứa đông trùng hạ thảo (cordyceps militaris)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT TRƯỜNG ĐẠI HỌC LÂM NGHIỆP NGUYỄN THỊ THƯƠNG NGHIÊN CỨU KỸ THUẬT TẠO VÀ ĐÁNH GIÁ TÍNH AN TỒN CỦA VIÊN NANG CĨ CHỨA ĐƠNG TRÙNG HẠ THẢO (Cordyceps militaris) CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC MÃ NGÀNH: 8420201 LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS HÀ VĂN HUÂN TS LÊ QUANG THẢO Hà Nội, 2021 i CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình nghiên cứu khác Nếu nội dung nghiên cứu trùng lặp với nghiên cứu cơng bố, tơi xin chịu hồn tồn trách nhiệm tuân thủ kết luận đánh giá luận văn Hội đồng khoa học Hà Nội, ngày 05 tháng 09 năm 2021 Người cam đoan Nguyễn Thị Thương ii LỜI CẢM ƠN Luận văn hoàn thành chương trình đào tạo Thạc sĩ khóa 26B Trường Đại học Lâm nghiệp Để hoàn thành đề tài luận văn tốt nghiệp này, em nhận hướng dẫn, bảo tận tình Q Thầy Cơ lời chia sẻ, giúp đỡ, động viên bạn Nhân dịp này, cho phép em xin gửi lời tri ân đến: Trước hết, em xin chân thành cảm ơn ban lãnh đạo Công ty Cổ phần Dược thảo Thiên Phúc tạo điều kiện tốt trình thực đề tài nghiên cứu Luận văn tiến hành hỗ trợ kinh phí Dự án thuộc Quỹ đổi Công nghệ Quốc gia - Bộ Khoa học & Cơng nghệ: “Hồn thiện, nâng cấp quy trình sản xuất phát triển sản phẩm bảo vệ sức khỏe có chứa Cordyceps militaris”, PGS TS Lê Minh Sắt, Công ty Cổ phần Dược thảo Thiên Phúc làm chủ nhiệm Tiếp theo, em xin gửi lời biết ơn sâu sắc đến Thầy PGS TS Hà Văn Huân, giảng viên Bộ môn Công nghệ gen, Cô TS Nguyễn Thị Hồng Gấm giảng viên Bộ môn Công nghệ tế bào - Viện Công nghệ sinh học Lâm nghiệp, Trường Đại học Lâm nghiệp Thầy TS Lê Quang Thảo - Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương tận tình hướng dẫn em nghiên cứu để hồn thành tốt đề tài nghiên cứu Em xin gửi lời cảm ơn Tập thể Cán Trung tâm dược lý lâm sàng Bộ môn Dược lý - Trường Đại học Y Hà Nội, đặc biệt PGS TS Phạm Thị Vân Anh tạo điều kiện thuận lợi để em hoàn thành tốt đề tài Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn tới gia đình, bạn bè người thân luôn khích lệ, động viên tạo điều kiện thuận lợi cho em học tập nghiên cứu khoa học Tuy cố gắng để hoàn thiện đề tài nghiên cứu này, song kiến thức, kinh nghiệm em còn hạn chế, luận văn tốt nghiệp không tránh khỏi sai sót tồn tại, kính mong quý Thầy Cô đóng góp ý kiến đánh giá, để luận văn em hoàn thiện Hà Nội, ngày 05 tháng 09 năm 2021 Học viên Nguyễn Thị Thương iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT vi DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH MỤC CÁC HÌNH ix ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN VỀ VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Giới thiệu thực phẩm chức 1.1.1 Khái niệm phân loại thực phẩm chức 1.1.2 Phân biệt thực phẩm chức 1.1.3 Các dạng thực phẩm chức 1.2 Công nghệ bào chế viên nang cứng 1.2.1 Định nghĩa 1.2.2 Ưu điểm nhược điểm viên nang cứng 1.2.3 Thành phần viên nang 10 1.2.4 Quy trình chung bào chế viên nang cứng 11 1.3 Tổng quan Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris 14 1.3.1 Lịch sử nghiên cứu Cordyceps militaris 14 1.3.2 Phân loại học 14 1.3.3 Đặc điểm phân bố Cordyceps militairs 15 1.3.4 Giá trị dược liệu nấm Cordyceps militaris 16 1.4 Một số sản phẩm dạng viên chứa đông trùng hạ thảo thị trường 19 1.4.1 Viên đông trùng hạ thảo Do-cordy 19 1.4.2 Viên đông trùng hạ thảo Hector 19 1.4.3 Viên Đông Trùng Hạ Thảo KGS Korean Cordyceps Militaris Pill Gold 20 iv Chương ĐỐI TƯỢNG, MỤC TIÊU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.1 Đối tượng, phạm vi nghiên cứu 22 2.2 Mục tiêu nghiên cứu 22 2.3 Nội dung nghiên cứu 22 2.4 Nguyên vật liệu, thiết bị 23 2.4.1 Nguyên vật liệu 23 2.4.2 Thiết bị nghiên cứu 23 2.5 Phương pháp nghiên cứu 24 2.5.1 Nghiên cứu xây dựng công thức tạo viên thực phẩm chức có chứa đơng trùng hạ thảo 24 2.5.2 Nghiên cứu đánh giá tính an tồn viên nang có chứa đông trùng hạ thảo 28 2.5.3 Phương pháp xử lý số liệu 30 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 31 3.1 Kết xây dựng công thức tạo viên nang thực phẩm chức có chứa Đông trùng hạ thảo 31 3.1.1 Kết nghiên cứu cơng thức bào chế viên nang có chứa đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris 31 3.1.2 Nghiên cứu xây dựng quy trình bào chế 35 3.1.3 Đề xuất quy trình sản xuất viên nang cứng đông trùng hạ thảo 36 3.2 Đánh giá tính an toàn viên nang thực phẩm chức có chứa Đông trùng hạ thảo 39 3.2.1 Kết đánh giá nghiên cứu độc tính cấp viên nang có chứa Đơng trùng hạ thảo Cordyceps militaris 40 3.2.2 Nghiên cứu độc tính bán trường diễn viên nang chứa Đơng trùng hạ thảo 40 3.3 Nhận xét bàn luận 62 v 3.3.1 Độc tính cấp viên nang có chứa Đông trùng hạ thảo 62 3.3.2 Ảnh hưởng viên nang có chứa Đơng trùng hạ thảo lên tình trạng chung số huyết học 63 3.3.3 Ảnh hưởng viên nang có chứa Đơng trùng hạ thảo Cordyceps militaris lên tình trạng chung số huyết học 64 3.3.4 Ảnh hưởng viên nang có chứa Đơng trùng hạ thảo Cordyceps militaris lên chức gan chuột cống thực nghiệm 65 3.3.5 Ảnh hưởng viên nang có chứa Đơng trùng hạ thảo Cordyceps militaris lên chức thận chuột cống thực nghiệm 65 3.3.6 Ảnh hưởng viên nang có chứa Đơng trùng hạ thảo Cordyceps militaris lên hình thái cấu trúc vi thể gan, thận chuột cống thực nghiệm 66 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 67 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH CỦA TÁC GIẢ 68 TÀI LIỆU THAM KHẢO 69 vi DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT STT Từ viết tắt Nghĩa đầy đủ AST Aspartate transaminase ALT Alanine Aminotransferase ĐTHT Đông trùng hạ thảo VSV Vi sinh vật TPCN Thực phẩm chức TP Thực phẩm SX Sản xuất vii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Nghiên cứu xây dựng công thức viên nang đông trùng hạ thảo 25 Bảng 2.2 Nghiên cứu ảnh hưởng nhiệt độ sấy thời gian sấy 26 Bảng 2.3 Nghiên cứu khảo sát thời gian nhào trộn nguyên liệu 28 Bảng 3.1 Kết phân tích adenosine cordycepin 31 Bảng 3.2 Nghiên cứu xây dựng công thức viên nang cứng đông trùng hạ thảo 34 Bảng 3.3 Kết nghiên cứu khảo sát ảnh hưởng thành phần công thức viên nang cứng đông trùng hạ thảo 34 Bảng 3.4 Nghiên cứu khảo sát thời gian nhào trộn 35 Bảng 3.5 Nghiên cứu ảnh hưởng nhiệt độ sấy thời gian sấy 36 Bảng 3.6 Kết nghiên cứu độc tính cấp bột cơng thức V6 40 Bảng 3.7 Ảnh hưởng viên nang có chứa ĐTHT đến trọng lượng chuột 41 Bảng 3.8 Ảnh hưởng viên nang Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris đến số lượng hồng cầu 42 Bảng 3.9 Ảnh hưởng viên nang có chứa Đơng trùng hạ thảo đến số lượng huyết sắc tố 43 Bảng 3.10 Ảnh hưởng viên nang Đông trùng hạ thảo đến hematocrit 43 Bảng 3.11 Ảnh hưởng viên nang Đơng trùng hạ thảo đến thể tích trung bình hồng cầu 44 Bảng 3.12 Ảnh hưởng viên nang Đông trùng hạ thảo đến số lượng bạch cầu 45 Bảng 3.13 Ảnh hưởng viên nang Đông trùng hạ thảo đến công thức bạch cầu 45 Bảng 3.14 Ảnh hưởng viên nang Đông trùng hạ thảo đến số lượng tiểu cầu 46 Bảng 3.15 Ảnh hưởng Viên nang Đông trùng hạ thảo đến hoạt độ AST 48 Bảng 3.16 Ảnh hưởng viên nang Đông trùng hạ thảo đến hoạt độ ALT 48 viii Bảng 3.17 Ảnh hưởng viên nang ĐTHT Cordyceps militaris đến nồng độ bilirubin toàn phần 49 Bảng 3.18 Ảnh hưởng viên nang cứng Đông trùng hạ thảo đến nồng độ albumin 50 Bảng 3.19 Ảnh hưởng viên nang có chứa ĐTHT đến nồng độ cholesterol toàn phần 51 Bảng 3.20 Ảnh hưởng viên nang có chứa Đông trùng hạ thảo đến nồng độ creatinin 52 ix DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Sơ đồ quy trình bào chế viên nang cứng 12 Hình 1.2 Đơng trùng hạ thảo 15 Hình 1.3 Viên ĐTHT Do-Cordy 19 Hình 1.4 Viên nang ĐTHT Hector 20 Hình 1.5 Viên Đơng trùng hạ thảo KGS Korean Cordyceps militaris Pill Gold 21 Hình 2.1 Phương pháp xác định góc nghỉ khối bột 27 Hình 2.2 Vị trí lấy mẫu nhào trộn 27 Hình 3.1 Kết kiểm nghiệm nguyên liệu 32 Hình 3.2 Khối bột viên nang 37 Hình 3.3 Sơ đồ quy trình sản xuất viên nang có chứa Đơng trùng hạ thảo 39 Hình 3.4 Hình thái vi thể gan chuột lơ chứng (chuột số 1) 53 Hình 3.5 Hình thái vi thể gan chuột lô chứng 53 Hình 3.6 Hình thái vi thể gan chuột lô chứng (Chuột số 8) (HE x 400) 54 Hình 3.7 Hình thái vi thể gan chuột lô trị sau tuần uống thuốc thử 54 Hình 3.8 Hình thái vi thể gan chuột lô trị sau tuần uống thuốc thử 55 Hình 3.9 Hình thái vi thể gan chuột lô trị1 sau tuần uống thuốc thử 55 Hình 3.10 Hình thái vi thể gan chuột lơ trị sau tuần uống thuốc thử 56 Hình 3.11 Hình thái vi thể gan chuột lơ trị sau tuần uống thuốc thử 56 Hình 3.12 Hình thái vi thể gan chuột lơ trị sau tuần uống thuốc thử 57 Hình 3.13 Hình thái vi thể thận chuột lô chứng 57 Hình 3.14 Hình thái vi thể thận chuột lô chứng 58 Hình 3.15 Hình thái vi thể thận chuột lơ chứng 58 Hình 3.16 Hình thái vi thể thận chuột lơ trị sau tuần uống thuốc thử 59 Hình 3.17 Hình thái vi thể thận chuột lô trị sau tuần uống thuốc thử 59 Hình 3.18 Hình thái vi thể thận chuột lô trị sau tuần uống thuốc thử 60 Hình 3.19 Hình thái vi thể thận chuột lô trị sau tuần uống thuốc thử 60 Hình 3.20 Hình thái vi thể thận chuột lô trị sau tuần uống thuốc thử 61 Hình 3.21 Hình thái vi thể thận chuột lô trị sau tuần uống thuốc thử 61 58 Hình 3.14 Hình thái vi thể thận chuột lô chứng (Chuột số 4) (HE x 400) Cầu thận; Ống thận Hình 3.15 Hình thái vi thể thận chuột lơ chứng (Chuột số 8) (HE x 400) Cầu thận; Ống thận 59 Hình 3.16 Hình thái vi thể thận chuột lô trị sau tuần uống thuốc thử (Chuột số 12) (HE x 400) Cầu thận; Ống thận Hình 3.17 Hình thái vi thể thận chuột lô trị sau tuần uống thuốc thử (Chuột số 14) (HE x 400) Cầu thận; Ống thận 60 Hình 3.18 Hình thái vi thể thận chuột lô trị sau tuần uống thuốc thử (Chuột số 16) (HE x 400) Cầu thận; Ống thận Hình 3.19 Hình thái vi thể thận chuột lơ trị sau tuần uống thuốc thử (Chuột số 23) (HE x 400) Cầu thận; Ống thận 61 Hình 3.20 Hình thái vi thể thận chuột lơ trị sau tuần uống thuốc thử (Chuột số 25) (HE x 400) Cầu thận; Ống thận Hình 3.21 Hình thái vi thể thận chuột lơ trị sau tuần uống thuốc thử (Chuột số 27) (HE x 400) Cầu thận; Ống thận 62 * Nhận xét kết giải phẫu bệnh: Sau tuần uống thuốc thử, cấu trúc vi thể gan thận lô trị lô trị khơng có khác biệt rõ rệt so với lô chứng sinh học Theo hướng dẫn WHO, giải phẫu đại thể vi thể gan thận số bắt buộc đánh giá độc tính bán trường diễn [5] Ngồi ra, xét nghiệm vi thể cịn tiêu chuẩn vàng để đánh giá tổn thương quan chính chịu trách nhiệm chuyển hóa thải trừ thuốc gan thận [29] Trên tất chuột nghiên cứu, không quan sát thấy có thay đổi bệnh lý mặt đại thể quan Kết giải phẫu bệnh cho thấy viên nang có chứa Đông trùng hạ thảo liều dùng đường uống chuột cống liên tục tuần khơng làm thay đổi hình ảnh mơ bệnh học gan thận so với lô chứng sinh học Trên giới Việt Nam chưa cơng bố cơng trình nghiên cứu độc tính phối hợp thành phần viên nang có chứa Đông trùng hạ thảo Tuy nhiên, nghiên cứu độc tính thành phần riêng rẽ nhiều tác giả thực kết cho thấy khơng xuất độc tính dùng vị dược liệu động vật thực nghiệm [12, 23, 37] 3.3 Nhận xét bàn luận 3.3.1 Độc tính cấp viên nang có chứa Đơng trùng hạ thảo Trên chuột nhắt trắng, viên nang có chứa Đơng trùng hạ thảo cho uống nồng độ đậm đặc với thể tích tối đa, số lần dùng tối đa (tương đương liều 13,38 g dược liệu/kg/ngày), không có thay đổi bất thường, khơng có chuột chết vịng 72 Đây liều tối đa chuột nhắt dung nạp theo đường uống không có chuột chết, chưa xác định LD50 viên nang có chứa Đơng trùng hạ thảo theo đường uống chuột nhắt trắng So với liều dùng dự kiến người (1,07 g thuốc thử/ngày), chuột nhắt trắng dùng liều gấp 52,1 lần không có biểu độc tính cấp Vậy theo WHO, viên nang có chứa Đơng trùng hạ thảo thuốc thử nguồn gốc dược liệu có tính an tồn 63 3.3.2 Ảnh hưởng viên nang có chứa Đơng trùng hạ thảo lên tình trạng chung số huyết học Theo hướng dẫn WHO, tình trạng chung, trọng lượng thể số huyết học xét nghiệm bắt buộc đánh giá độc tính thuốc thử Máu tổ chức quan trọng máu liên quan mật thiết với phận, quan thể Về mặt bệnh lý, máu chịu ảnh hưởng tất tổ chức đó đồng thời bị ảnh hưởng phản ánh tình trạng riêng quan tạo máu Nếu thuốc có ảnh hưởng đến quan tạo máu trước hết thành phần máu bị thay đổi, đặc biệt thường làm giảm số lượng bạch cầu Vì vậy, xét nghiệm số lượng hồng cầu, số lượng bạch cầu, công thức bạch cầu, số lượng tiểu cầu chuột cống cần xác định Định lượng huyết sắc tố cho biết rõ chức hồng cầu Thể tích trung bình hồng cầu phản ánh đặc điểm tình trạng thiếu máu Hematocrit tỷ lệ % khối hồng cầu máu toàn phần Nếu thuốc làm thay đổi số lượng hồng cầu làm nước hay ứ nước tế bào máu số thay đổi Kết nghiên cứu cho thấy tất số huyết học chuột lô chứng sinh học lơ trị giới hạn bình thường, thay đổi không có ý nghĩa thống kê so với trước dùng thuốc thử so với lô chứng sinh học thời điểm sau tuần tuần uống liên tục thuốc thử Như vậy, viên nang có chứa Đơng trùng hạ thảo khơng thể độc tính quan tạo máu Trên giới Việt Nam chưa công bố cơng trình nghiên cứu độc tính phối hợp thành phần viên nang có chứa Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris Tuy nhiên, nghiên cứu độc tính thành phần riêng rẽ nhiều tác giả thực kết cho thấy khơng xuất độc tính dùng vị dược liệu động vật thực nghiệm 64 3.3.3 Ảnh hưởng viên nang có chứa Đơng trùng hạ thảo Cordyceps militaris lên tình trạng chung số huyết học Theo hướng dẫn WHO, tình trạng chung, trọng lượng thể số huyết học xét nghiệm bắt buộc đánh giá độc tính thuốc thử Máu tổ chức quan trọng máu liên quan mật thiết với phận, quan thể [9] Về mặt bệnh lý, máu chịu ảnh hưởng tất tổ chức đó đồng thời bị ảnh hưởng phản ánh tình trạng riêng quan tạo máu Nếu thuốc có ảnh hưởng đến quan tạo máu trước hết thành phần máu bị thay đổi, đặc biệt thường làm giảm số lượng bạch cầu Vì vậy, xét nghiệm số lượng hồng cầu, số lượng bạch cầu, công thức bạch cầu, số lượng tiểu cầu chuột cống cần xác định Định lượng huyết sắc tố cho biết rõ chức hồng cầu Thể tích trung bình hồng cầu phản ánh đặc điểm tình trạng thiếu máu Hematocrit tỷ lệ % khối hồng cầu máu toàn phần Nếu thuốc làm thay đổi số lượng hồng cầu làm nước hay ứ nước tế bào máu số thay đổi [28] Kết nghiên cứu cho thấy tất số huyết học chuột lô chứng sinh học lô trị giới hạn bình thường, thay đổi khơng có ý nghĩa thống kê so với trước dùng thuốc thử so với lô chứng sinh học thời điểm sau tuần tuần uống liên tục thuốc thử Như vậy, viên nang có chứa Đơng trùng hạ thảo Cordyceps militaris độc tính quan tạo máu Trên giới Việt Nam chưa cơng bố cơng trình nghiên cứu độc tính phối hợp thành phần viên nang có chứa Đơng trùng hạ thảo Cordyceps militaris Tuy nhiên, nghiên cứu độc tính thành phần riêng rẽ nhiều tác giả thực kết cho thấy không xuất độc tính dùng vị dược liệu động vật thực nghiệm [11], [24], [38] 65 3.3.4 Ảnh hưởng viên nang có chứa Đơng trùng hạ thảo Cordyceps militaris lên chức gan chuột cống thực nghiệm Trong thể, gan có nhiều chức quan trọng Việc đưa thuốc vào thể gây độc với gan, làm ảnh hưởng đến chức quan Vì vậy, đánh giá độc tính thuốc nghiên cứu ảnh hưởng thuốc chức gan cần thiết Để đánh giá mức độ tổn thương tế bào gan, nồng độ enzym có nguồn gốc gan (AST, ALT) huyết thường định lượng Ngoài ra, người ta còn đánh giá chức gan qua số nồng độ bilirubin toàn phần, cholesterol toàn phần albumin máu [28] Kết cho thấy sau tuần tuần uống viên nang có chứa Đơng trùng hạ thảo Cordyceps militaris, số hoạt độ AST, ALT, nồng độ bilirubin toàn phần, cholesterol toàn phần albumin máu không thay đổi có ý nghĩa so với lô chứng so sánh hai thời điểm trước sau uống thuốc thử 3.3.5 Ảnh hưởng viên nang có chứa Đơng trùng hạ thảo Cordyceps militaris lên chức thận chuột cống thực nghiệm Thận quan tiết thể, nhu mô thận dễ tổn thương chất nội sinh ngoại sinh [29] Vì vậy, đưa thuốc vào thể thuốc gây tổn thương thận, từ đó ảnh hưởng đến chức thận Creatinin thành phần đạm máu ổn định nhất, không phụ thuộc vào chế độ ăn thay đổi sinh lý mà phục thuộc vào khả đào thải thận Khi cầu thận bị tổn thương, nồng độ creatinin máu tăng sớm ure Do vậy, creatinin máu tiêu tin cậy quan trọng ure máu, nên dùng để đánh giá theo dõi chức thận [29] Kết nghiên cứu cho thấy nồng độ creatinin máu chuột sau dùng viên nang có chứa Đơng trùng hạ thảo Cordyceps militaris khơng có thay đổi khác biệt với lơ chứng so sánh hai thời điểm trước sau uống thuốc thử 66 3.3.6 Ảnh hưởng viên nang có chứa Đơng trùng hạ thảo Cordyceps militaris lên hình thái cấu trúc vi thể gan, thận chuột cống thực nghiệm Theo hướng dẫn WHO, giải phẫu đại thể vi thể gan thận số bắt buộc đánh giá độc tính bán trường diễn [9] Ngoài ra, xét nghiệm vi thể tiêu chuẩn vàng để đánh giá tổn thương quan chính chịu trách nhiệm chuyển hóa thải trừ thuốc gan thận [28] Trên tất chuột nghiên cứu, không quan sát thấy có thay đổi bệnh lý mặt đại thể quan Kết giải phẫu bệnh cho thấy viên nang có chứa Đơng trùng hạ thảo Cordyceps militaris liều dùng đường uống chuột cống liên tục tuần khơng làm thay đổi hình ảnh mô bệnh học gan thận so với lô chứng sinh học Trên giới Việt Nam chưa cơng bố cơng trình nghiên cứu độc tính phối hợp thành phần viên nang có chứa Đơng trùng hạ thảo Cordyceps militaris Tuy nhiên, nghiên cứu độc tính thành phần riêng rẽ nhiều tác giả thực kết cho thấy không xuất độc tính dùng vị dược liệu động vật thực nghiệm [11], [24], [38] 67 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận - Sau trình nghiên cứu, đưa công thức bào chế viên nang có chứa Đơng trùng hạ thảo (Cordyceps militaris): 500 mg ĐTHT (Cordyceps militaris) + 15 mg chiết suất nấm men + 10 mg Hồng sâm + 10 g Linh chi + 15 mg tá dược - Đối với nghiên cứu đánh giá độc tính cấp: + Chưa xác định LD50 chuột nhắt trắng viên nang có chứa Đông trùng hạ thảo (hay bột công thức V6) theo đường uống; + Bột cơng thức V6 khơng có biểu độc tính cấp liều 18,75 gam/kg - Đối với nghiên cứu đánh giá độc tính bán trường diễn: Viên nang cứng có chứa Đơng trùng hạ thảo Cordyceps militaris dùng đường uống tuần liên tục với mức liều 0,72 viên/kg/ngày (tương đương liều dự kiến lâm sàng) 2,16 viên/kg/ngày (gấp lần liều tương đương liều dự kiến lâm sàng) không ảnh hưởng đến tình trạng chung, thể trọng, chức phận tạo máu, mức độ hủy hoại tế bào gan, chức gan, thận cấu trúc vi thể gan, thận chuột cống Kiến nghị Tiếp tục nghiên cứu hiệu thực phẩm chức dạng viên nang cứng có chứa Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris 68 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH CỦA TÁC GIẢ 1) Bài báo đăng Nguyễn Thị Hồng, Trần Văn Tú, Lê Minh Sắt, Nguyễn Thị Hồng Gấm, Phùng Thị ly, Nguyễn Thị Thương (2019), “Phát hiện, khai thác phát triển nguồn gen địa Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris” Lễ tổng kết trao giải thưởng sáng tạo khoa học công nghệ Việt Nam, giải thưởng WIPO năm 2019, tr.221 - 226 2) Bài báo chứng nhận đăng Tạp chí Y Dược cổ truyền Việt Nam tháng 11/2020 Phạm Vân Anh, Nguyễn Thị Hồng Gấm, Nguyễn Thị Hồng, Nguyễn Thị Thương, Lê Minh Sắt, Nguyễn Duy Thuần, Đinh Thị Thu Hằng, “Nghiên cứu độc tính cấp ảnh hưởng viên nang Đông trùng hạ thảo Banikha lên số huyết học động vật thực nghiệm” Phạm Vân Anh, Nguyễn Thị Hồng Gấm, Nguyễn Thị Hồng, Nguyễn Thị Thương, Lê Minh Sắt, Nguyễn Duy Thuần, Đinh Thị Thu Hằng, “Nghiên cứu ảnh hưởng viên nang Đông trùng hạ thảo Banikha lên chức gan, thận chuột cống thực nghiệm” 69 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt Bộ môn bào chế, Trường Đại học Dược Hà Nội (2008), Bào chế sinh dược học dạng thuốc, Tập 2, Nxb Y Học, Hà Nội Bộ môn bào chế, Trường Đại học Y Dược TP HCM (2007), Bào chế học tập 2, Nxb Y Học chi nhánh TP Hồ Chí Minh Bộ Y Tế (2009), Dược Điển Việt Nam IV, Nxb Y Học, Hà Nội Võ Thị Kim Chi (2008), Nghiên cứu bào chế viên nang Linh chi - Đương quy, Luận văn tốt nghiệp Dược sĩ đại học, Trường Đại học Y dược TP HCM Hoàng Ngọc Hùng, Vũ Chu Hùng (2006), Tá dược chất phụ gia dùng dược phẩm, mỹ phẩm thực phẩm, Nxb Y Học, Hà Nội Lê Thanh Huy (2011), Nghiên cứu công thức xây dựng viên nang chứa cao diếp cá, Luận văn tốt nghiệp Dược sĩ đại học, Trường Đại học Y dược Cần Thơ Nguyễn Thế Khánh, Phạm Tử Dương (2001), Xét nghiệm sử dụng lâm sàng, Nxb Y học, Hà Nội Đỗ Tất Lợi (2000), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nxb Y học, Hà Nội Đào Văn Phan (2018), Dược lý học lâm sàng, Trường Đại học Y Hà Nội, Nxb Y học, Hà Nội 10 Nguyễn Cảnh Phú, Nguyễn Thị Hồng Thanh, Nguyễn Thị Mai Thơ (2018), Nghiên cứu bào chế viên nang cứng NADAGA từ cao khô dược liệu, Tạp chí Khoa học cơng nghệ Nghệ An, Số 8, tr.9-15 11 Nguyễn Văn Rư Quách Thị Hà Vân (2015), Thử nghiệm tác dụng kích thích miễn dịch pidotimod tổng hợp động vật thí nghiệm, Tạp chí Dược học, 55(469), 26-31 70 12 Trần Minh Tuệ, Trần Xuân Trung, Nguyễn Thị Ánh Tuyết (2017), Nghiên cứu xây dựng quy trình cơng nghệ sản xuất viên nang cứng trà hoa vàng, Tạp chí khoa học cơng nghệ Nghệ An, số 2, tr.13-17 13 Nguyễn Nhật Thành (2001), Nghiên cứu kỹ thuật điều chế viên nang đại bổ âm từ thuốc tên, Luận văn tốt nghiệp thạc sĩ Dược học, Trường Đại học Y dược TP HCM 14 Nguyễn Trọng Thông (2017), Thuốc tác dụng hệ thống miễn dịch, Dược lý học lâm sàng 15 Phạm Quang Thu (2009), “Điều tra phát nấm nhộng trùng hạ thảo Cordyceps nutans pat phân bố khu bảo tồn thiên nhiên Tây Yên Tử Sơn Động - Bắc Giang”, Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển Nông thôn, (4) 16 Phạm Quang Thu (2009), “Phát nấm nhộng trùng hạ thảo Cordyceps gunni Berk Tại vườn quốc gia Tam Đảo tỉnh Vĩnh Phúc”, Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển Nông thôn, (6), tr 96-99 17 Phạm Quang Thu (2013), “Đông trùng hạ thảo nghiên cứu nuôi trồng thể Viện Khoa học Lâm nghiệp Việt Nam”, Hội thảo quốc tế Khoa học Công nghệ phục vụ phát triển sản xuất nông nghiệp công nghệ cao tỉnh Lâm Đồng, tr.45-50 18 Phạm Thị Thùy (2010), “Nghiên cứu phát triển nguồn nấm Beauveria Metarhizium để ứng dụng phòng trừ sâu hại trồng, rừng phát nguồn nấm Cordyceps sp làm thực phẩm chức cho người”, Hội thảo Quốc gia Bệnh hại Thực vật Việt Nam, Nxb Nông nghiệp, tr.224-231 19 Nguyễn Thị Liên Thương, Trịnh Diệp Phương Danh Nguyễn Văn Hiệp̣ (2016), Nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris: Đặc điểm sinh học, giá trị dược liệu yếu tố ảnh hưởng đến trình ni trồng nấm, Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ, 44 (2016), 9-22 20 Vũ Đình Vinh (2001), Hướng dẫn sử dụng xét nghiệm sinh hóa, Nxb Y học, tr 115-287 71 Tài liệu tiếng Anh 21 Charles A Janeway.Jr, Paul Travers, Mark Walport, Mark J Shlomchik (2001), Immunobiology: The immune system in health and disease, 5th edition New York: Garland Publishing, 1-312 22 Das S.K (2009), Production of anti-cancer agent cordycepin from the medicinal mushroom Cordyceps militaris, A Dissertation of Doctor of Engineering, University of Fukui, Japan 23 Gerhard Vogel H (2016), Drug discovery and evaluation Pharmacological assays, Springer 24 Goodman and Gilman (2010), The pharmacological basis of therapeutics, twelfth edition, McGraw-Hill Companies, Inc 25 Holliday J., Cleaver P., Loomis-Powers M., Patel D (2004), “Analysis of Quality and Techniques for Hybridization of Medicinal Fungus Cordyceps sinensis”, International Journal of Medicinal Mushrooms, 6, pp 147-160 26 Haquea MR, Ansaria SH and Rashikhbv A (2013), Coffea arabica seed extract stimulate the cellular immune function and cyclophosphamideinduced immunosuppression in mice Iranian Journal of Pharmaceutical Research, 12(1), 101-108 27 Itoh H., Shioda T., Matsura T., Koyama S., Nakanishi T., Kajiyama G., Kawasaki T (1994), “Iron ion induces mitochondrial DNA damage in HTC Rat Hepatoma Cell Culture - Role of antioxidants in mitochondrial DNA protection from oxidative stresses”, Arch Biochem Biophys, 313(1), pp 120 - 125 28 Jantan I, Ahmad W and Bukhari SN (2015), Plant-derived immunomodulators: an insight on their preclinical evaluation and clinical trials, Front Plant Sci, 655(6) 29 Katzung GB (2011), Basic and Clinical Pharmacology, Twelfth edition, McGraw-Hill Companies, Inc 72 30 Patil US, Jaydeokar AV and Bandawane DD (2012), Immunomodulators: a pharmacological review, Int J Pharm Pharm Sci, second edition, 4(1), 30-36 31 Sun Y.J., Lü P., Ling J.Y., Zhang H.X., Chen C., Zhang C.K (2003), “Nucleosid from Cordyceps kyushuensis and the distribution of two active components in its different parts”, Yao Xue Xue Bao, 38(9), pp 690-694 32 Sepideh Shahbazi, Azam Bolhassani (2016), Immunostimulants: Types and Functions, J Med Microbiol Infec Dis, 4(3-4), 45-51 33 Sethi J, Singh J (2015), Role of Medicinal Plants as Immunostimulants in Health and Disease, Ann Med Chem Res, 1(2), 1009 34 Sung J.H., Jones N.L.H., Sung J.M., Luangsa-ard J.J., Shrestha B., Spatafora J.W (2007), “Phylogenetic classification of Cordyceps and the clavicipitaceous fungi, Studies in Mcology, 57, pp.5-59 35 World Health Organization (2013), Working group on the safety and efficacy of herbal medicine, Report of regional office for the western pacific of the World Health Organization 36 Xie J.W., Huang L.F., Hu W., He Y.B., Wong K.P (2010), “Analysis of the main nucleosids in Cordyceps sinensis by LC/ESI-MS”, Molecules, 15, pp 305-314 37 Zhou X., Gong Z., Su Y., Lin J., Tang K (2009), “Cordyceps fungi: natural products, pharmacological functions and developmental products”, Journnal of Pharmacy and Pharmacology, 61, pp.279-291 38 Zhao X, Zhang Y, Song X, et al (2015), Effect of Chuanminshen violaceum polysaccharides and its sulfated derivatives on immunosuppression induced by cyclophosphamide in mice, Int J Clin Exp Med, 8(1), 558-568