Ứng dụng tiến bộ khoa học kỹ thuật để hoàn thiện công nghệ sản xuất vacxin uống phòng bệnh dịch tả ở quy mô bán công nghiệp

Trang 1

Bộ Y TẾ f My /

VIÊN VỆ SINH DICH TẾ HỌC

CHƯƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU CẤP NHÀ NƯỚC KV.01

ĐỀ TÀI KV.0103

ỨNG DỤNG TIẾN BỘ KHOA HOG KY THUAT BE HOA

THIỆN DŨNG NGHỆ SÂN XUẤT VẤPXIN UONG PHONG G aU! MO BAN CONG NGHIEP

Chủ nhiệm: GS.T§ Đăng Đức Trạch Phó chủ nhiệm : PGS P†S Đặng Đúc Phú

Viễn Vệ Sinh Dịch Tễ Học

Viên Vắcxin và Chế phẩm Sinh học Trung tâm Quốc gia Kiểm định Vacxia Sở Y Tế Thừa Thiên - Huế,

Viên Vi Sinh và Miễn Dịch học, trưởng Đại học GoteEorr

Wien Suc Krée Gude Gia (N.LH.), Bethesda, Md

Trang 2

CHU NHIEM BE TAI KY - 01-03

GS TS PANG BUC TRACH

PHO CHU NHIEM

PGS PTS DANG BUC PHU

Chủ nhiệm đề mục;

KI- OL - 03-01 PTS Hoang thu Thuy?

KI-O1 - 03 -02 TS Phang Day Cam“?

'KI- 01 - 03 -03 BS Nguyên Phi Quy?

KI-ÔI - 03- 04 KI- 01 - 03 KS Phan Va Dig Hing” - 05 B8 Dỗ Gia Cảnh

KI- 01 - 03 - 06 PGS Nguyễn thị Ke”

KI-O1 - 03-07 BS Chế quang Tuân"?! KI- 01 - 03 - 08 DS Hồ thị Ánh? KI- 01-03 09 BS Lê văn Bế) KI- 01-03-10 BS Doãn thị Tạm?) KL- 01-03-11 BS Nguyén dinh Son KI - 01-03-12 GS Tan Holmgren" KI- 01-03-13 US John Clemens? Cộng tác viên chính:

Vũ thanh Bình”), Vũ thị Nương”, Nguyễn văn C:

Phút”, Nguyễn Lan Phương”), Nguyễn đình Hồn,

Nhang”, Hoàng thị Hồng), Nguyén qué Aah™ Nguyễn thái HoX®, Ann-Marie Svennerholn®,

“Thư kỹ đề tài : PGS.TS Đặng Đức Phú

(1) Viện Vệ sinh Dịch tế nọc

‘am, Neuyén tha Thuy”, Dang Dice

2°, Phan thi Tuyet?), He Hong

Ngayén Son", Hoang thi Phiếm 9,

MR Rao

{2) Viện vacxin và chế phẩm sinh học Nha trang- Đà lạt

(3) Trưng tàm Qvốc gia kiểm định vacxin

(4) Sở Y tế thừa Thiên - Huế

Trang 3

MỤC Lục

| BAT VAN DE

I, TONG QUAN

Ill, GÁC NỘI DỰNG NGHIÊN CỨU

Phần thứ nhất: Bổ xung các kháng nguyên cần thiết

Phan thứ hai: Sản xuất vắc xin tả ở qui mô bán công nghiệp

Phần thứ ba: Thí nghiệm thực địa

Trang 4

I ĐẶT VẤN ĐỀ

Đề tài "Nghiên cứu sản xuất vắc xin uống phòng bệnh tẢ” 64 B - 07 - 03 -

01 (1880) đã có những kết quả như sau (3, 11, 12):

1, Một vắcxin chất, toàn tế bão, gồm Vibrio cholerae typ sinh học cổ điển

và typ sinh học EI Tor, bất hoạt bới nhiệt và formalin, đã được chế tạo

Sản phẩm đạt những yêu cầu của Trung Tâm Quốc Gia Kiểm Định

Vắcxin, ì

2 Vắcxín đã được thí nghiệm trên người tinh nguyện và tơ ra an tồn, với

liều uống 100 tỉ vi khuẩn x 3 lần Theo dõi đáo ứng miễn dịch ở người

tình nguyện, thấy có hiệu giá các ig đặc hiệu cao, đặc biệt các sIgA

3 Vắcxin đã được sản xuất ở qui mở phòng thí nghiệm, sân phẩm sản xuất thử đạt 200.000 liều Giá thành ước tính của mỗi liều bằng 0,5 kg gạo Nếu sản xuất và kiểm định ở qui mô lớn hơn, giá thành có thể sẽ thấp

hơn

4, Những vấn đề cân tiếp tục nghiên cứu:

«_ Quy trình hợp lý cần để sản xuất vắcxin này ở quy mô lớn hơn

+ Cải tiến để có thể tăng hiệu lực gây miễn dịch của vắcxin này

Đề tài KY 01.03 (1992 - 1995) “Ứng dụng tiến bộ khoa học kỹ thuật để

hồn thiện cơng nghệ sản xuất vắcxin uống phòng tả ở qui mô bán công

nghiệp” nhắm các mục địch:

1 Bổ xung một số kháng nguyên cần thiết để tăng hiệu lực của vắcxin

2 Nâng mức sân xuất tử qui mô phòng thí nghiệm lên cui md bán sông

nghiệp, với thiết bị hiện có

3 Thí nghiệm thực địa, và nhận xót sơ bộ về hiệu lực bảo vệ của vắcxin

Trang 5

i, TONG QUAN

Bệnh tả hiện nay vẫn xây ra tại nhiều nơi trên thế giới Theo số liệu của Tổ

chức Y tế Thế giới, khoảng 36 nước vẫn còn có bệnh tả Bệnh tả, nếu

không được điều trị kip thời và đúng cách, thưởng có tỷ lệ mắc/chết rất cao, khoảng 40% Mỗi năm ước tính có trung bình 1 triệu trưởng hợp mắc bệnh

tâ, số tử vong là khoảng 200.000 ở Châu Phi và khoảng 100.000 ở Cháu Á,

Một phần ba số tử vong đó là trẻ em dưới 8 tuổi, mệt phần tư là trẻ øm từ 5 tới 14 tuổi, và số còn tại là người lớn Hiện nay bệnh tả chủ yếu vẫn do

Vibrio cholera 01 nhưng mới đây thấy xuất hiện một tác nhân mới, Vibrio choterae 0189, gây nhiều vụ dịch lớn trên thế giới, đặc biệt ở những nước

trong khu vue A Châu (2) Việt nam là vùng dịch tả lưu hành, bệnh tả vẫn

là gánh năng cho ngành y tế và xã hội Gũng không loại trừ khả năng có

thể xẩy ra dịch lớn do V.cholarae 0188 ở nước ta

Từ lâu nay việc nghiên cứu để có được một vắcxin hiệu nghiệm phòng

bệnh tả vẫn là mối quan tâm của y học thế giới Vắcxin tả đầu tiên có từ

một thế kỷ nay, sau khi Koch phát hiện được Vibrio cholerae 01 là bệnh

nguyên của tä Vắcxin này (còn được gọi là vắcxin "cổ điển") đã được tiêm cho hàng nhiều triệu người trên thế giới, nhưng thật ra mãi rất lâu về sau, vào quãng những nám 80, mới bắt đầu có những nghiên cứu đánh giá hiệu

lực của vắcxin này trên thực địa Những nghiên cứu tại 8angledesh Ấn Độ

và Philippin cho phép nhận định rằng vắcxin "cổ điển" này chỉ có hiệu lực rất hạn chế , chỉ có thể bảo vệ được trong thời gian ngắn (3-6 tháng), khả năng gây miễn dịch cho trẻ em rất thấp, và đặc biệt là têm vắoxin cũng

không hạn chế được việc dao thai Vibrio cholerae qua phan Vi thé

vắcxin"oổ điển" không được coi là phương tiện hiệu nghiêm để dự ohong

bệnh lả, và hiện nay không còn được dùng nữa

Trong những năn 70, Ấn Độ và Inđônésiä có thí nghiệm fiém vắcxin hấp

phụ aluminium Vắcxin này có hiệu lực bảo vệ cao hơn và dải hơn vắcxin

"cổ điển" Cũng tròng khoảng thỏi gian nay Bangladesh và Philippin cũng thứ tiệm giải độc tố (toxoid): loại vắcxin này, tuy có gây đáp ứng kháng thể kHiáng độc tố, nhưng trên thực địa không có hiệu lực bảo vệ đáng kể

Lúc này Tố chúc Y tế Thế giới bắt đầu khuyến cáo không nân tiêm vắcxin

Trang 6

những khu vực lưu hành bánh tả, không có tác dụng chống các vụ dịch tá và không có khá năng ngăn chặn bệnh tả lan truyền giữa các khu vục trên thế giới, Ngoài ra, một lý do nữa cũng khiến cho mọi người không còn quan tâm tới thức vắcxin"cổ diễn" này: Việc điều tri bệnh lả đã có nhiều tiến bộ và đơn giản hơn trước Phương pháp bù nước trên thực tế đã làm giảm tỷ lệ mắc/chết xuống tối thiểu (dưới 1%], và như vậy điều trị rõ ràng là có tác dụng cứu được nhiều người hơn là tiêm phòng vắcxin toi,

Sau tai họa lớn ở Rwanda, từ năm 1995, Tổ Chúc Y Tế Thế Giới đã thấy

đổi quan niệm và đã nhận thấy sự cần thiết phải dùng vắc xin tả kiểu mới

để dự phòng dịch tả (13)

Xuất phát từ quan niệm rằng phòng vệ tự nhiên chống bệnh tả chủ yếu dựa vào các kháng thể hình thành tại đường ruột, có khả năng chống vi

khuẩn tả và độc tố tả, từ những năm 80 nhiều phòng thí nghiệm đã tập

trung nghiên cứu väcxin tả uống, với hy vọng là vắcxin uống có thể kích

thích đáp ứng miễn dịch tại đường ruột chống lại một hoặc nhiều kháng

nguyên chủ yếu của Vibrio cholerae 01

1.1 NHỮNG KHÁNG NGUYEN CHU YEU CUA VIBRIO CHOLERAE 01

Qua các nghiên cứu trên súc vật và trên người có thể thấy rằng các kháng

nguyên lioopolysaccharid của thành tế bào vi khuẩn (LPS) và độc tố (CT)

có khả năng tạo được miễn dịch báo vệ -chống tâ, Những kháng thể đặc

hiệu chống các kháng nguyên này được Hình thành tại đưởng ruột, và có tác dụng cộng lye, Mian dict kháng vi khuẩn chủ yếu do LPS, nhưng các

kháng thể kháng các protein khác sủa tế bào vi khuẩn tả cũng có thể có

vai trò quan trọng Miễn dịch kháng độc tố có tác dụng chống lại tiểu đơn vị B của độc tố tả

Vibrio cholerae 01, muốn gây được ía chảy, trước tiên cần phải định cư

được tại đường ruột Quá trình này rất phức tạp, đôi hỏi có sự biểu hiện nhịp nhàng giữa các chức năng hóa ứng động và sau cùng là sự hình thành độc tố (CT) Như vậy, nếu ngăn cản không cho V.cholerae 01 bám dính vào tổ chức ruột, thì sẽ chặn đứng được quá trình sinh bệnh ngay tử giai đoạn sớm nhất Những nghiên cứu mới đây trên chuột nhất mới đẻ và trên

người tình nguyện cho phép kết luận được rằng V.cholerae 01 (cả týp sinh

học cổ điển và týp sinh hoc Et Tor) phải cần có TCP mới có thể định cư

Trang 7

được tại ruột TCP (viét tt ca toxin coregulated pilus = pilus dồng điều

hòa độc tố) là một "lông" của vi khuẩn tả, TCP biểu hiện được nhiều hay ít

tùy theo ngoại cảnh, và điều kiện ngoại cảnh thích hợp cho TCP biểu hiện

được nhiều cũng đồng thời thích hợp cho độc tố tả hinh thành được nhiều

(6)

Gen cấu trúc chính của TCP, TepA, và các gen mã hóa sự tổng hợp độc tố, là một phần của yếu tố điều hòa độc lực (toxR) Các kháng nguyên, do các gen nói trên mã hóa, đều có khả năng riêng kích thích đáp ứng miễn dịch

chống lại bệnh tả thực nghiệm Các kháng nguyên này, nếu cộng lực, sẽ ngăn các gen biểu hiện Do vai trò quan trọng của protôin tiết do toxft điều hòa, dặc biệt là TCP và tiểu đơn vị B của CT, được coi như là những kháng nguyên miễn dịch mạnh có thể dùng phối hợp với LPS trong vắcxin ~

Trong thực nghiệm, kháng huyết thanh thỏ đa-clôn kháng TCP có hiệu lực

baové thụ động cho chuột nhất mới đả, sau khi thừ thách gây bệnh bằng

V.cholerae 01 (ching Inaba và chủng Ogawa) Nếu hấp phụ kháng huyết thanh kháng TCP với một chủng V.cholerae 01 hoang đại, thì khả năng bảo - vệ mất Nhưng nếu hấp phụ với một chủng V.cholarae 01 pilus-âm, thì khả

năng bảo vẽ còn nguyên vẹn, Như vậy có thể nghĩ rằng khả năng bảo vệ

©ó liên quan chặt chẽ với kháng thể kháng -TCP Các gen TcpA cửa các

chủng V.cholerae 01, sinh týp cổ điển, Inaba và Ogawa, giống nhau hoàn

toàn Các gen TopA này không giống hẳn các gen TepA cla V.cholerae sinh ~ typ Ef Tor, nhung có l có chung những quyết định kháng nguyên

chính :

Ngoài những gen tham gia vào quá trình sinh tổng hợp TOP, còn có những gen mã hóa các protêin mảng ngoài tế bào vi khuẩn, và các gen mã hóa

tổng hợp một yếu tổ phụ định cu (ACF - accessory colonization factor) Tat

cả các gen này cũng đều do toxR điều hòa, Như vậy, TepA có thế dùng anhư là "chỉ điểm" của cáo kháng nguyên mạnh khác cùng bị điều hòa bởi

toxR, trong quá trình sân xuất loại vắcxin toàn tế bảo (WC - whole cell) L2 CÁC VẮCXIN UỐNG DỰ TUYỂN

Các vắcxin chết

Các vắcxin WC đơn hoặc phối hợp với tiểu đơn vị B sủa GT mới đây đã

Trang 8

Vắcxin phổi hợp WC/BS gồm có tiểu đơn vị B tinh chế từ độc tố tả, và các vi khuẩn tả thuộc sinh-týp cổ điển va sinh-typ El Tor (Inaba va Ogawa) Tiểu đơn vị B hồn tồn khơng độc, nhưng có khả năng sinh kháng thể

trung hòa như độc tố toàn vạn,

Tiểu đơn vị B có khả năng gắn vào mảng tế bào ruột, do đó có tính sinh miễn địch, Tế bào vi khuẩn bất hoạt bởi nhiệt cung cấp được các kháng

nguyên LPS Inaba và Ogawa, tế bao vi khuẩn bất hoạt bởi formalin cung

cấp các kháng nguyên không kháng nhiệt Tiểu đơn vị B iä mệt pentamer dễ bị hủy bởi axit, vị vậy khi cho uống vắcxin cần phải dùng dung dich đệm

gồm có natri bicarbonat và axit citric

Qua những thí nghiệm thực địa đầu tién 6 quy.mé nhé (Bangladesh, Thụy

Điển, Mỹ) thấy rằng vắcxin WO/BS an toàn Tại Bangladesh có thí nghiệm

đánh giá để xem vắcxin này có khả năng kích thích các đáp ứng kháng thể

niêm mạc kháng vi khuẩn và kháng độc tố Kết qua thấy rằng : uống hai liều (hoặc nhiều liều hơn) thì gây được sự hinh thành kháng thé IgA kháng -

LPS va kháng độc tố trong nước rửa ruột, với hiệu giá eao như ở bệnh nhân

tả Các đáp ứng kháng thể này cao hơn rất nhiều và tồn tại lâu hơn nhiều, nếu so sánh các đáp ứng sau khi tiêm bắp thịt 2 liều cùng thứ vắcxin này Đáp ứng kháng thể ở người Thụy Điển thấp hơn so với đáp ứng ở người

Bangladesh ở củng lứa tuổi Theo dõi lâu dài , thấy răng ký ức miễn dịch

(lgA niêm mạc) có thể tồn tại # nhất 15 tháng ở người tình nguyện Bangladesh, và ít nhất 5 năm ở người tình nguyện Thụy Điển

Tại Hoa Kỳ, những người tình nguyện đã uống 3 liều vắcxin W/BS có được tỷ lệ bảo vệ là 68%, nếu dùng WC thì tỷ lệ bảo vệ 56%, sau khi thi thách gây bệnh tả với V.cholerae 01 El Tor Trong số những người tình nguyện Hoa Kỳ này, nếu uống WO/BS thị không có ai bị la cháy nặng

(nặng = bai tiết ít nhất 2 l/ngày), và nếu uống WC thì 44% bị la chày nặng

Do thấy có những kết quả đáng khích lệ nói trên, Trung Tâm Quốc tế

Nghiên cứu Bệnh ìa chảy (CDDP/B) tai Bangladesh phối hợp với chính phủ Bangladesh và Tổ chức Y tế Thế giới, tiến hành một thực địa nghiên

Trang 9

(Cairo 48), Ogawa cổ điến bất hoạt nhiệt (Cairo 50), lượng đều nhau

'Vắcxin WC cũng có công thức như trên, nhưng không có tiểu đơn vị B

Cả 2 vắoxin đầu làm tăng hiệu giá kháng thể huyết thanh diệt Vipiio (tăng

khoảng 2 bậc); riêng vắcxin WC/BS làm tăng hiệu giá kháng thể huyết thanh IgG kháng độc tố tả (lắng 4-6 bậc) Theo dõi các người uống vắoxin, không thấy có phản ứng gì xây ra

Theo dõi hiệu lực bảo vệ của vắcxin qua 3 năm giám sát trong khu vực

Matlab: Những số iiệu chính được ghi lại trong bằng kèm theo Sau 3 năm

theo đõi những người đã uống 3 liều vắcxin, thấy rang WC có tỷ lệ bảo vệ

82%, vắcxin WC/BS có tỷ lệ bảo vệ 80% Tỷ lệ bảo vệ ở đây có nghĩa là dự

phòng được la chảy do vi khuẩn tả gây ra (chứng minh bằng nuôi cấy vi khuẩn)

Cả hai loại vắcxIn đều có hiệu lực bảo vệ thấp đổi với trả em 2-5 tuổi: 31%

Và 24% với WC, và 98% và 47% với WO/BS, trong năm thứ nhất và năm thứ hai Tới nấm thứ 8 coi như không còn thấy hiệu lực bảo vệ nữa ở lứa

tuổi này Trái lại, ở lứa từ 8 tuổi trở lân, hiệu lực bảo vệ trong cả thời gian 3

năm là khá cao: 68% với WC, và 68% với WC/BS Trong nhóm placebo

66% những người mắc bệnh tả là thuộc lứa tuổi từ 6 tuổi trở tên

Qua mỗi năm theo rõi, thấy rằng các trường hợp bệnh tâ có cà V,cholorag 01 týp sinh học cổ điển hoặc týp sinh học EI Tor, và phần lớn các chủng đã

phân lập được là Ogawa Hiệu lực bảo vệ của câ hai thứ vắcxin đối với V.cholerae cổ điển cao hơn đối với V.cholerae El Tor

8o với WC WC/BS có hiệu lực bảo vệ cao hơn trong 8 tháng đầu WC/BS cũng có tác dụng dự phòng la chảy cấp của trẻ em do ETEC, nhưng tác

Trang 10

Hiéu lye etta vaexin WC va WC/BS tai thyc dja Bangladesh Các nhóm tuổi và Hiệu lực của vắcxin (%) thời gian theq dõi wc WC/BS Tính từng năm: Năm thứ nhất 23 Ge Năm thứ hai 87 SẼ Năm thứ ba aS 7 “Tính chung 3 năm

Lứa tuổi 2-§ năm 23 26

Lứa tuổi 6năm - ae 63

Chung cáo lứa tuổi se 50

Can nguyen

Vi khuẩn tâ cổ điển 60 5B

Vi khudn ta Et Tor 40 39

Tuy thực địa này không nhằm nghiên cứu xem uống vắcxin bao nhiêu lăn là tối ưu, nhưng có thể thấy rằng uống 2 liều cũng có tác dụng tốt như uống

Trang 11

Các vắcxIn V.cholerae 01 sống, giảm sức độc

Trong khoảng mười năm qua có khá nhiều nghiên cứu nhằm tạo được các chủng đột biến V.cholerae 01 để làm vắcxin sống uống Phần lớn các

nhóm nghiên cứu đều theo đuổi mục đích tạo được các chủng đột biến

không sinh độc tố (kiểu hình độc tố A-B-) , hoặc chỉ sinh tiểu đơn vị B của độc tố (kiểu hình A-B+)

Một số chùng dự tuyển (như Texas Star-R) đã được thí nghiệm trên người tình nguyện, và tỏ ra có khả năng sinh miễn dịch bảo vệ, Tuy nhiên những

chủng này đều không sử dụng được làm vắcxin, vì khơng được an tồn

Chúng dự tuyển đáng chú ý nhất hiện nay là ©.cholerae 01 CVD 103

Chủng này là một đột Biến A-B+, tái tổ hợp tử chủng độc cổ điển Inaba 569B đã loại gen mã hởa tiểu đơn vị A Nhu vay ching CVD 103 chi sinh

tiểu đơn vị 8 Chúng này cũng không có độc tố "giống Shiga" (thường có thể thấy ở nhiều chủng Vibrio cholerae, có khả năng tham gia vào quá trình

sinh bệnh ia chây)

Tại Hoa Kỳ có thí nghiêm CVD 108 trên người linh nguyện: 46 người lớn

khỏe, đã uống một liều 10Ê vị khuẩn sống, không có phản ứng gi nghiêm

trọng Tuy vậy, 5 người (11%) đã có la chảy nhưng không có những dấu hiệu kèm theo như buôn nôn , khó chịu, đau quặn, biếng ăn Thử huyết thanh thấy 46/46 người tình nguyện (98%) có lăng hiệu kháng thể diệt Vibrio mặt cách đáng kể, và 98% có tăng hiệu giá kháng độc tố rõ rệt

Sau đó cũng tại Mỹ, có 3 thí nghiệm thử thách trên tổng số 26 người tình nguyện Mỗi người uống một liều 2x10? vì khuẩn CVD 108, và sau 1 tháng được thử thách gây bệnh với V choleras 01 độc ( liều thử thách này gây ia chảy cho 24/28 người tình nguyện đối chứng không uống vắcxin) Kết quả thấy rằng một liều CVD 103 duy nhất đã bảo vệ được 80% trường hợp không có xảy ra la chảy, và 94% không có ia chảy trầm trọng: -

Về sau, chủng CVD 103 đã được sửa đổi lại: gài thêm một gen mã hóa tính

kháng thủy ngân vào vị trí hÍyA của nhiễm sắc, do đó tên chủng này cũng

được sửa là CVD 103-Hg Dấu ấn kháng thủy ngân này giúp để phân biệt với những chủng ví khuẩn tả hoang dại CVD 103-HgR dong khô được thử

trên 90 người tình nguyện ở Mỹ, với liều 6x10? và 5x10” vi khuẩn sống

Trang 12

Hiểu giá kháng thể huyết thanh diệt khuẩn tăng trong 91% các trường hợp, hiệu giá này tăng 3-4 bậc cao hơn hiệu giả của những người uống 3 liều

WG/BS Điều đáng chú ý là chỉ thấy 30% trữðồng hợp dao thai CVD 103

HgR qua phân (trong khi đó tỷ lộ đào thải CVD là 91%) Qua thí nghiệm trên người tình nguyên uống 1 liều CVD-HgR, 65% có miễn dịch bảo vệ chống thử thách gây bệnh với V cholerae 01 El Tor Inaba (khác týp sinh hoo}

Sau đó, tại Thái Lan cũng có thí nghiệm CVD-HgP trên người tình nguyện:

12 người uống một liều 5x 108 không thấy có phản ứng, và 11/12 người có tăng hiệu kháng thể huyết thanh diệt Vibrio, và 9/12 người có tăng hiệu giá

kháng thế huyết thanh kháng độc tố Tuy nhiên, trong những thí nghiệm

tương tự tiếp theo với một số lớn tân binh, kết quả huyết thanh học kém hơn thế nhiều Có lễ do quá trình đông khô vắcxin đã làm chết nhiều vi

khuẩn Một thực địa để đánh giá hiệu lực bảo vệ của vào xin nay dang được tiến hành tại Jakarta, và tới cuối năm 1996 sẽ có tổng kết

Những vắcxin lai tạo

Đó là trường hợp vắcxin tả lai (của Trường Đại học Adelaide) : "cài" các

gen mã hóa sự tổng hợp các kháng nguyên LPS của V.cholerae trên bề

mặt của chủng S Ty21a sống Chủng lai này đã được thử trên 500 người tình nguyện Nhận xét đầu tiên là chỉ có xảy ra rất it phan ding phy Cho

người tình nguyện uống 3 liều 2x 10!2 vi khuẩn sống, thấy 50% có đáp ứng

kháng thể với LPS cửa V cholerae 01 và 85% có đáp ứng kháng thể di:

Vibrio Trong thí nghiệm có thử thách, cho người tình nguyện uống 8 liều

1012 vị khuẩn đông khô, nhưng chỉ bảo vệ được có 25% số người không

mắc bệnh tả, tuy nhiên những trưởng hạp mắc bệnh tả thì nhẹ hơn nhiều

Những nghiên cứu kể trên đã mở ra một hướng tìm tòi các vắcxin lai, và

hư vậy chỉ cần tuyển lựa được một vi khuẩn vận tải an toàn để có khả năng chế tạo được nhiều vắcxin dự phỏng các bệnh nhiễm khuẩn khác ở

niêm mạc ruột Tuy nhiên một số câu hỏi cần được giải đáp: (1) liệu có một vi khuẩn vận tải nào có hiệu năng hơn Ty21a, mà lại an toàn? (2) Làm cách nào "cài" được những gen mã hóa các kháng nguyên cần thiết, dể

Trang 13

tải có thể được dùng nhiều lần để đưa vào một cơ thể các kháng nguyên

khác nhau được không?

'Vắcxin tả thích hợp cho Việt Nam

Đối với Việt Nam vắcxin tâ nào thích hợp? Vắcxin lý tưởng, để có thể dùng

ở quy mô lớn, phải là một vắc xin an toàn và có mức độ hiệu lực có thể

chấp nhận được ngoài ra nhất thiết phải không có giá thành cao, cỏ thể

sản xuất được ở quy mô lớn với công nghệ không quá phức tạp, có tính bồn vững qua quá trình bảo quản và vận chuyển, và dễ sử dụng Một vắcxin lý

tưởng như vậy hiện nay không có được, nhưng vắcxin WC (vắcxin chốt, toàn tế bào) rất đáng được chủ ý, vì nó có thể đáp ứng một số những yêu cầu nói trên (4)

Trang 14

ll CÁC NỘI DUNG NGHIÊN CỨU

Phần thứ nhất

B6 SUNG CAC KHANG NGUYEN CAN THIET

1 CƠ SỞ CỦA VẤN ĐỀ:

` Các kháng nguyên đồng điều hòa độc tế ( TCP : toxin coregulated pilus)

và ngưng kết hồng cầu nhậy cảm D-mannose ( MSHA: D-mannose- sensitive haemagglutinin) la cần thiết để vắc xin đạt được khả năng sinh

miễn dịch đặc hiệu cao phòng chống bệnh tả Ngoài ra, hàm lượng kháng

nguyên LPS (fipopolysaccharide) cũng cần có trong vác xin ở mức độ đầy đủ, để hiệu lực bảo vệ được chắc chắn (8, 9, 10)

Vắcxin chết, toàn tế bào , đã được thí nghiệm tại thực địa Bangladesh, và

đã được sản xuất tại nướo ta, cần được bổ xung những kháng nguyên cần

thiết nói trên,

II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP:

2.1 Các chủng vị khuẩn thí nghiệm :

- V cholerae 01 589 B, typ sinh học cổ điển, typ huyết thanh Inaba

- V cholerae 01 Cairo 50,typ sinh học cổ điển, typ huyết thanh Ogawa,

- V, cholerae 01 Phi! 6973, typ sinh foc El Tor, týp huyết hanh Inaba, `

Các chủng nói trên nhận từ Trường Dai Hoc Goteborg, Thụy Điển

2.2 Nuôi cấy :

Trang 15

Môi trưởng IVAC và AKI ( 7, 14) nuôi cẩy trên nồi lên men CHEMAP 75 iit

và 300 lít, ở các nhiệt độ từ 27 đến 30°C trang 16-20 gid Gat bang li tam, điều cHỉnh để có đậm độ 100 tỉ vi khuẩn/ml Nuôi cấy 12 loạt liên tiếp

2.3 Phương pháp kiểm tra :

Kiểm tra cáo kháng nguyên LPS va TCP bang phương pháp ELISA

cạnh tranh, kiểm tra kháng nguyên MSHA băng phương pháp ngưng kết

trồng cầu thụ động, theo thưởng qui của trương Đại Học Goteborg (8)

2.8.1 Phương pháp định lượng LPS có trong vắc xin bằng kỹ thuật ELISA

cạnh tranh:

Gan 100 ¡ứ LPS của Ý cholerae Inaba 569B vào các giếng của bản nhựa polystyren s6 1 với nòng độ 28 ug/ml pha trong PBS Để ở:nhiệt độ phòng

qua đêm

Trên bản nhựa số 2, sau khi ử 30 phút với BSA 1% ở 37°C, cho 60 nl BSA

1% pha trong PBS, sau dé cho 30 Ll mẫu vắc xin thử vào giếng đầu tiên

trong hàng Trộn đều và hút chuyển 30 nI sang giống thứ hai, tiếp tục hút

chuyển pha loãng bậc 3 cho tới hàng G của bản nhựa Riêng hàng H chỉ

cho đệm 8SA-PBS 1%, Sau đó, eho 60 nÌ vào mỗi giếng kháng thể đơn

siên tử chuột kháng LPS (Mab 8:4 880980) pha loãng 1/180 trong B8A-

PBS 1% theo thứ tự đi tử hàng H trở lên Đập nắp kín vừa lắc vừa ủ 1 giờ ở

nhiệt độ phỏng Rửa bản số 1 ba lần với PBS Sau đó ủ bản này 200 Hlgiống 8SA-PBS 1% 37°C trong 80 phúi, Rửa 1 lần với PBS-Tween 0,06%

Chuyển 100 kí từ mỗi giếng của bân nhựa số 2 sang bản nhựa số 1, bắt

đầu từ hàng H Ú ở nhiệt độ phòng 90 phút, không lắc Rửa 3 lần với PBS- Tween Sau đó, cho 100 nl cộng hợp enzym Ig peroxydaza khang chuột (Jackson No 115 035068, lot 10638) pha loãng1/2000 trong BSA-PBS 1%

Ủ 90 phút ở nhiệt độ phòng Rửa 3 lần với PBS - Tween

Cho 100 ui orthophenylan diamin pha trong đệm citrat natri 0,1M, pH 4,5 co

thêm 4 ui HaO; 30%, Để ở nhiệt độ phòng 20 phút, đọc kết quả trên máy Titertex Multiskan bước sóng 450 nm Kết quả dựa theo 50 % nồng độ bị ức chế của kháng thể kháng LPS kháng lại LPS chuẩn Theo tiêu chuẩn quốc

tế, một vắc xin có chất lượng tốt căn có nồng độ từ 500 - 1400 đơn vị (EU)

trong một liều -

Trang 16

2.3.2 Phương pháp định lượng Tep trong vắc xin bằng kỹ thuật ELISA cạnh

ranh:

Gắn vào bản nhựa 50 _l/giếng vi khuẩn tà có Tep chủng JS 1589 (pJS

T752-3) mọc ở môi trường AKI, 30°C] với nồng độ 10'° vi khuẩn/ml đã xử lý

glutaraldehyd Sau đó, mỗi giấng được ủ BSA 1% pha trong PBS 30 phút,

37°C Sau khi rửa 3 lần với PBS - Tween, cho 25 ul mau vac xin thử vào giếng đầu của hàng A, trộn đầu và hút chuyén 25 mt sang hang thir hai va tiếp tục cho đến hàng G, riêng hang H cho đệm Trộn đều và ủ ở nhiệt độ

phòng 90 phút Rửa 3 lần với PBS - Tween Cho kháng thể đơn ciên tử

chuột (Mab Te 20:2) pha loãng 1/400 trong BSA-PBS 0,1% Ủ nhiệt độ phòng qua đêm Cho 100 gÍ cộng hợp enym phosphalaza kiềm IgG+IgM (Jackson, West Grove, Pennsyivania), pha loãng 1/3000 trong BSA-PBS- Tween Ủ 90 phút ở nhiệt độ phòng, Sau khỉ rửa 3 lần như trên, cho cơ chất nitropheny! phosphat (Sigma, St Louis, Missouri) Đọc kết quả trên may Titertex Multiskan, bước sóng 405 nm Kết quả dựa vào độ ức chế 60% của

khang thể kháng TCP với kháng nguyên chuẩn,

Theo tiêu chuẩn quốc tế, một vắc xin có chất lượng tốt phải có hàm lượng TCP tối thiểu là 1:†150,

2.3.8 Phương pháp định lượng kháng nguyên MSHA trong vac xin:

Văắo xin thử được pha loãng bậc hai, 25 ¡ử vắo xin vào mỗi giếng của bản

nhựa sau khi pha loãng (từ 1⁄2 đến 1/1624 hoặc hơn) Sau đỏ, cho vào mỗi giếng 25 nl hồng cầu 1% (chú ý: thử hồng cầu ga với chủng El Tor, hồng

cầu người với chủng tả sổ điển) Mỗi bản có một giếng chỉ có hồng cầu và đệm dé lam chứng Sau đó, ủ bản ở nhiệt độ phòng tử 30 - 80 phút Kết

quả dương tính khi hồng cầu bị tan đều trong giếng, àm tính khi hồng cầu

lắng thành một điểm ở đáy giếng

Theo tiêu chuẩn quốc tế vắc xin tốt có hàm lượng kháng nguyên MSHA từ

1/8 trở lên,

Các loại kháng nguyên được kiểm tra chất lượng song song tại Viện Vệ

Sing Dịch Tễ Học, Hà nội và Viện Vì Sinh Y Học và Miễn Dịch Học , Trương Đại họe Goieborg, Thụy Điển

Trang 17

3 KET QUA: 3.1 Hàm lượng"kháng nguyên LPS: Hàm lượng trung bình kháng nguyên LPS qua 12 loạt nuôi cấy đạt 840 đơn vị quốc tổ 3.2 Hàm lượng trung bình kháng nguyên TCP qua 12 loạt nuôi cấy đạt hiệu giá 1:2560 3.8 Hàm lượng trung bình kháng nguyên MSHA qua 12 loạt nuôi cấy đạt hiệu giá 1:4 4 BÀN LUẬN : « Hàm lượng LPS trong vắcxin này cao hơn một chút so với tiêu chuẩn quốc tế { 500 đơn vị) » Hàm lượng TỢP trong vắcxin này cao hơn nhiều lần so vơi tiêu chuẩn quốc tế (1:150) + Hàm lượng MSHA trong vắcxin này thấp hơn tiêu chuẩn quốc tế (1:8) 5 KẾT LUẬN :

Đã bổ xung được các kháng nguyên TCP và năng cao được hàm lượng

kháng nguyên LPS Riéng MSHA can phai tiêp tục nghiên cứu để đạt tiêu

Trang 18

Phan thi hai

SAN XUAT VACXIN TA G QUI MO BAN CONG NGHIEP 1 CƠ SỞ CỦA VẤN ĐỀ,

Vắcxin tả đã được sản xuất ở quì mô phòng thí nghiệm từ vài năm nay, với

sản lượng không quá 150.000 liều/năm Số lượng-nây quá nhỏ không đáp ứng được nhụ cầu sử dụng vắcxin dự phòng trong y tế công cộng, không

đủ ngay cả để tiến hành một thực địa lớn

Phương pháp nuôi cấy tĩnh ở phòng thí nghiệm không đạt một số yêu cầu kỹ thuật của vắpxin này, nhất là việc sản xuất các kháng nguyên TCP và MSHÀ cũng như việc tầng cường hàm lượng kháng nguyên LPS

Vì vậy, xây dựng một công nghệ sản xuất vắcxin này & qui md ban công nghiệp, với thiết bị hiện có, là cần thiết, Công tác này được thực hiện tại

Viện Vằcxìn và các chế phẩm sinh học, Nha Trang-Đà lạt (11, 14) 2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP:

2.1 các chủng vi khuẩn: Mi

+ V.cholerae 01 589B cổ điển, Inaba

»V.cholerae 01 Cairo 50, cd dién, Ogawa

+ Vicholerae 01 Phil 6973 El Tor, Inaba

Các chủng nói trên nhân được từ Trường Đại học Gơteborg, Thụy Điền

3.2 Nuôi cấy:

Môi trưởng IVAC và AKI (7, 14), nuôi cấy trên các môi trưởng lên men GHEMAP dung tích 75 lít và 300 lít, ở các nhiệt độ khác nhau, trong các thời gian khác nhau các điều kiện thông khí và tốc độ khuấy khác nhau

Gat bằng li tâm Hereaus 5000 v.p/1 giờ

Trang 19

Sinh khéi duge bat Hoat bang nhiệt (60°C/1 giở) hoặc formalin 0,025 MAft

3.4 Kiểm tra:

«_ Kiểm tra nồng độ ví khuẩn bằng quang kế 9pectronic - 20

« Kiểm tra kết quả bất hoạt trên các môi trường Thạch máu, Pepton kiêm

và TCBS,

+ Kiểm tra tính an toàn bằng thí nghiệm tăng trọng chuột nhắt, theo thưởng

quy của TOYTTG “

» Kiểm tra các kháng nguyên LPS, TCP và MSHA, theo thudng quy cla Trường Đại Học Goteborg (8),

2.3.1 Phương pháp định lượng LPS có trong vắc xin bằng kỹ thuật ELISA

canh tranh:

Gắn 100 ¡l LPS của V cholerae Inaba 589B vào các giếng của bản nhựa

polystyren số 1 với nồng đỏ 2§ ug/mi pha trong PB8 Để ở nhiệt độ phòng qua đêm

Trên bản nhựa số 2, sau khi ủ 80 phút với BSA 1% ở 37°C, cho 60 pl BSA

1% pha trong PBS, sau dé cho 30 ul mẫu vắc xin thử vào giếng đầu tiên

trong hang Tron dều và hút chuyển 30 ml sang giếng thử hai, tiếp tực hút chuyển pha loãng bậc 3 cho tới hàng G của bản nhựa Riêng hang H chi

cho đệm BSA-PBS 1%, Sau đó, cho 60 uÌ vào mỗi giếng kháng thể đơn

ciên từ chuột khang LPS (Mab 8:4 880950) pha loãng 1/180' trong B8A-

PBS 1% theo thứ tự đí từ hàng H trở lên Đập nắp kín vừa lắc vừa ủ 1 giỏ ở

nhiệt độ phòng, Rửa bản số 1 ba lần với PBS Sau dé i ban nay 200 nVgiéng BSA-PBS 1% 87°C trong 30 phút Rửa 1 lần với PBS-Tween 0,08%,

Chuyển 100 ul từ mỗi giếng của bản nhựa số 2 sang bản nhựa số 1; bắt đầu từ hàng H Ủ ở nhiệt độ phòng: 90 phút, không lắc Rửa 3 lần với PBS-

Tween Sau đó, cho 100 ¡Ì cộng hợp enzym Ig peroxydaza kháng chuột (Jackson No 115 635068, lot 10538) pha lodng1/2000 trong BSA-PBS 1%, Ủ 90 phút ở nhiệt độ phòng Rua 3 lan vai PBS - Tween

Cho 100 pl orthophenyten diamin pha trong đệm citrat natri 0,1M, pH 3,5 có

Trang 20

Titertex Muitiskan bước sóng 450 nm Kết quả dựa theo 50 % nồng độ bị ie chế của kháng thể kháng LPS khang lai LPS chuẩn, Theo tiêu chuẩn quốc tế, một vắc xin có chất lượng tốt cần có nồng độ từ 50Ø - 1300 đơn vị (EU)

trong một liều

2.3.2 Phương pháp định lượng Top trong vắc xin bằng kỹ thuật ELISA cạnh

tranh:

Gắn vào bản nhựa 50 g/giếng vi khuẩn tá só Tep [chủng JS 1569 (pJS

782-3) mọc ở môi trưởng AKI, 30°C] với nồng độ 10'9 vị khuẩn/ml đã xử lý

glutaraidehyd Sau đó, mỗi giếng được ủ BSA 1% pha trong PBS 30 phút,

37°C Sau khi rửa 8 lần với PBS - Tween, cho 25 uí mẫu vắc xin thử vào

giếng đầu của hàng A, tron đều và hút chuyển 25 ml sang hàng thứ hai và

tiếp tục cho đến hàng G, riêng hàng H cho đệm Trộn đều và ủ ở nhiệt độ

phòng 90 phút Hửa 3 lần với PBS - Tween Cho kháng thể đơn ciên tử chudt (Mab Tc 20:2) pha loãng 1/400 trong BSA-PBS 0,1% Ủ nhiệt độ

phòng qua đêm Cho 106 ¿l cộng hợp enym phosphataza kiềm lợG+lgM

(Jackson, West Grove, Pennsylvania), pha loang 1/3000 trong BSA-PBS-

Tween, Ủ 90 phút ở nhiệt độ phòng, Sau khi rửa 3 lần như trên, pho cơ chất

nitrophenyl| phosphat (Sigma, S1 Louis, Missouri) Đọc kết quả trên máy

Titertex Multiskan, bước-sóng 405 nm Kết quả dựa vào độ ức chế 50% của

khang thé khang TCP với kháng nguyên chuẩn

Theo tiều chuẩn quốc tế, một vắc xin có chất lượng tốt phải cớ hàm lượng

TGP tối thiểu là 1:160

2.3.3 Phương pháp định lượng kháng nguyên MSHA trong vac xin:

Vắc xin thử được pha loãng bậc hai, 25 „i vắo xin vào mỗi giếng của bản

nhựa sau khi pha loãng (tử 1/2 đến 1/1624 hoặc hơn) Sau đó, cho vào mỗi

giếng 26 ul hồng cầu 1% (chú ý: thử hồng cầu gà với chủng EI Tor, hồng

sầu người với chủng tả cổ điển) MỖI bản có một giếng chỉ có hồng cầu và

đệm để làm chứng Sau đó, ủ bản ở nhiệt độ phòng tử 30 - 80 phút, Kết quả dương tính khi hồng cầu bị tan đều trong giếng, âm tính khi hồng cầu lắng thành một điểm ở đáy giếng

Theo tiêu chuẩn quốc tế vắc xin tốt có hàm lượng kháng nguyên MSHA từ

Trang 21

Các loại kháng nguyên được kiểm tra chất lượng song song tại Viện Vệ

Sing Dịch Tễ Học, Hã nại, và Viện Vi Sinh Y Học và Miễn Dịch Học

Trương Đại học Goteborg, Thụy Điển

3 KET QUA

Dựa trên kết quả sản xuất của 7 loạt só kết quả tốt nhất, công nghệ sản

xuất vắcxin tả ở qui mô bán công nghiệp được xây dựng như sau (11):

Trang 24

3.2 Các thóng số thích hợp:

- Tốc độ khuấy :800-700 vòng/phút + Thong khí:120-140 lit/phút

- Nhiệt độ:86°C cho các chủng sinh LPS và MSHA 30°C cho các chủng sinh TOP

- Bất hoạt: nhiệt độ 80°C/1 giữ đối với chủng Cairo 50; formalin 0,025 Milít đối với các chủng Phil 8973 và 569B

3.3 Kiểm tra nồng độ vị khuẩn:

Sau thời gian nuôi cấy theo số đo nói trên, các chủng V, cholerae đạt trung

bình 25-30 timl

Kiểm tra kết quả bất hoạt:

Các phương pháp bất hoạt bằng nhiệt độ và formalin đều đạt yâu cầu

Kiểm tra tính an toàn:

Các nhóm chuột nhắt thí nghiệm đều đạt tỉ lệ lăng trọng 85-90% (tiêư

chuẩn tối thiểu của TOYTTG là 60%)

Kiểm tra các kháng nguyên:

« Hiệu giá kháng nguyên LPS đạt trung bình 640 đơn vị quốc tế (tiêu

shuẩn quốc tế là 500 đơn vị)

+ Hiệu giá kháng nguyên TCP đạt trung binh 1:570 đơn vị quốc tế (tiêu

chuẩn quốc tế là 1:150 đơn vị)

» Hiệu giá kháng nguyên MSHA đạt trung bình 1:4 đơn vị quốc tế (tiêu chuẩn quốc tế là 1:8 đơn vị)

Trang 25

4, BAN LUẬN VÀ KẾT LUẬN,

Trên cơ sở.thiết bị sấn só, đã xây dựng qui trình sản xuất vắcxin tả ở qui

mê bán công nghiệp, với những thông số thích hợp Qui trình công nghệ

này cho phép sản xuất hàng năm từ 450.000 liễ (1992) đến 500.000 liều

(1993) Sản lượng này có dược do sản xuất trên thiết bị cỡ trung bình, sân

xuất xen kế với cáo vắcxin khác (khoảng 1:6 thời gian) Nấu có thiết bị riêng hoặc nồi lên men cỡ lớn hơn có thề đạt mức sản xuất gấp 6 đến 16 lần hơn, đủ cho nhu cầu dự phòng bệnh tả trong cả nước

Trang 26

Phan thi ba

NHẬN XÉT HIỆU LỰC BẢO VE CUA VÃCXIN TẢ

TẠI THỰC Địa HUẾ 1 CƠ SỞ CỦA VẤN ĐỀ

Vắcxin chết toàn tế bào gồm Vibrio cholerae 01 týp sinh học cổ điển và EI Tor, gây miễn dịch bằng lối uống đã' được thị nghiệm trên thực địa

Bangladesh Kết quả sau 3 năm theo dõi thấy tỷ lệ bảo vệ là 52% (1)

Vắcxin chế tạo tại nước ta có bổ sung thêm kháng nguyên TGP, và tăng

cưởng hâm lượng kháng nguyên LPS đã được thí nghiệm tại thực địa Huế Nhân xét sơ bộ về hiệu lực bảo vệ cúa văcxin này được ghí lại sau 1 năm theo dõi

VAT LIEU VÀ PHƯƠNG PHÁP

Thực địa:

Thành phổ Huế thuộc tỉnh Thừa Thiên - Huế ở miền Trung Việt Nam có số dân 288.000 người sống tại 23 xã phường Điều kiện khí hậu của Huế khá

khắc nghiệt, mùa khô trời nắng nóng, nhiệt độ 38°C-39°C gây khô hạn kéo

dài, mùa mưa lụt bão liên miên, nhiều sông ngòi, hồ ao làm cho tình trạng ngập lụt nặng nề Chỉ có khoảng 40% dân được dùng nước-máy đo nhà

máy nước Huế cụng cấp với số lượng khoảng 40litngười/ngày, Dân có tập

Quần ăn hải sản nấu không chín và uống nước iä, nước đá, nước giải khát

không đủ tiệu chuẩn vệ sinh, Từ năm 1980 đến nay, ở Huế đã xây ra 6 vụ

Trang 27

Nam Mắc/10.000 dân | ChếVmắc (%) Í 1980 31/24 1,36 1988 27.14 1,40 1986 16,80 1/24 1990 8,04 0,00 1992 25,94 0,30 1993 31.08 0.23 Trung binh 6 vy dich 23,37 0,67

Dịch thường kéo dài, tốc độ lây lan ra các huyện trong toàn tỉnh nhanh gây

nhiều thiệt hại và lo lắng trong nhân dân,

Thành phố Huế là vùng lưu hành dịch ta, có số trưởng hợp mắc tả trung

bình qua các vụ dịch là 23,37/10.000 dân, thường chiếm gần 50% số

trường hợp mắc tả trong toàn tỉnh Thừa thiên - Huế Hệ thống y tế xã,

phường có báo sĩ làm việc, nhiều bệnh viện có labo thuận tiện cho việc giảm sát bệnh tả Dấn cư sống khá tập trung thuận tiện cho việc theo dõi và dễ dàng lựa chọn các hộ gia đình cho thử nghiệm Nhân dân và chính

quyền địa phương sẵn sàng cộng tác thực hiện Chọn mẫu:

Xác định cỡ mẫu:

Dựa vào tỷ lệ mắc trung binh của bệnh tả trên 10.000 dân là 23%00, căn

cứ hiệu lực vắcxin WC của kết quả nghiên cứu tại Sangiadesh là trên 50% Cð mẫu dược chọn giữa 2 nhóm uống và không uống để tính hiệu lực

vắcxin như sau:

Trang 28

?c = 28/10.000 = 0,0028 (tý lệ mắc bệnh trong nhóm không uống) Pv = 12/10.000 = 0.0012 (tỷ lệ mắc bệnh trong nhóm uống) + Py) + Po(1- Pe) [L.96220.0023/1- 0,0023) + 1,645/0,0012(1~ 0,0012)+ 0,0023(1 -00023) | N= TH 100012 ~0,0023)2 N = 44.085 ngudi cho mỗi nhóm

Dựa vào phân độ mất nước của bệnh nhân tá nắm 1992 ở tỉnh Thừa Thiên `

- Huế (A=86%: B=40%; C=25%) để chọn: mẫu sö sánh độ trầm trọng của 2

Trang 29

iệu:

Vắcxin toàn t8 bào bất hoạt do Viện Văcxin Nha Trang - Ba Lat sân xuất,

liều cho uống là 100 tỷ vi khuẩn V cholerae trong 1ml cho tất cả những

người trên 1 tuổi trong nhóm uống vắcxin, uống 2 liều cách nhau 14 ngày,

Phương pháp nghiên cứu:

Một thực địa được lựa chọn để cho uống văcxin trong 19/23 phường, xã của thành phố Huế Các hộ gìa đỉnh được điều tra, lập đanh sánh và vào số

theo dõi uống văcxin theo số thứ tự Hộ chấn được cho uống vắcxin, hộ lẻ

không uống vắcxin (đối chứng)

19 xã phường của thành phố Huế được chọn đổ thử nghiệm hiệu lực của

vắcxin là: Vĩ Dạ, Hương Long, Phứ Bình, Phú Hòa, Thuận Lộc, Phường Đức, Thủy Biều, Thủy Xuân, Xuân Phú, Trưởng An Phước Vinh, Tây Lộo, Phú Thuận, Hương Sơ, Phù Cát, An Cựu, Thuận Thành, Thủy An, Vĩnh Ninh,

Các nhóm nghiên cứu:

+ _ Nhóm uống väexin:67,395 người

Nhóm không uống văcxin:67.058 người

Tuổi trống vắcxin: từ 12 tháng trở lên

Liều qây miễn địch: 100 tỷ ví khuẩn trong 1mi x 2 lần, cách nhau 14 ngày,

Cách cho uống vắcxin và giám sát:

« _ Số người trên 1 tuổi trọng hộ chẵn được chọn uống 2 liều văcxin

Cách nhau 14 ngày

Trang 30

thành phố Huế, Bệnh viện Trưng ương Huế để xét nghiệm tả, phân

lập týp huyết thanh

Sổ theo dõi uống vắcxin tả và các mẫu báo cáo về việc cho uống

vắcxin và giám sát bệnh nhân tiêu chảy tại xã, phường

Số khám bệnh tiêu chảy, phiếu theo đối bệnh nhân tiêu chây của Chưởng trình Quốc gia phòng chống bệnh tiêu chảy, bệnh án bệnh

nhân tả của Sở Y tế Thừa Thiên Huế bạn hành và phiếu trả lời

kết quả xét nghiệm vi sinh của Trung-tâm Y tế dự phòng, Bénh

viện thành phố Huế, Bảnh viện Trung ương Huế

240 người tình nguyện được huấn luyện về cách cho uống vắcxin,

theo dõi báo cáo bệnh nhân tiêu chây đổ trạm y tế lấy mẫu gửi về

các labo xét nghiệm

Khoa Ví sinh Dịch tễ, Viện Vê sinh Dịch tễ học Hà Nội tập huấn kỹ thuật thống nhất để chẩn đoán lâm sàng vẻ xét nghiệm vi khuẩn tả cho các labo: Trung tâm Y tế Dự phòng, Bệnh viện thành phố Huế,

Bệnh viện Trung ương Huế

Tính tỷ lệ mắc tả theo giới, theo nhóm tuổi, theo tháng giữa nhóm

uống và không uống vắcxin

Hiệu lực vắcxin tính theo công thức của WHO như sau?

Trang 31

Thời điểm và nội dụng công việc thực hiện: Tháng 10/1982 20/12/1992 3/1/1993 Tháng 1-12/1994 12/1994-6/1996

Tập huấn cho 240 người tình nguyện về cách

điều tra lập danh sánh hộ gia đình và kỹ thuật

cho uống vắcxin tả,

Tổ chức cho uống vắcxin tá lần 1

Tổ chúc cho uống vắcxin tả lần 2

Giám sát bệnh nhân tiêu chảy tại phường, xã và lấy mẫu xét nghiệm tả,

Xử lý số liệu và báo cáo kết quả

Trang 32

KẾT QUÁ THỨ NGHIỆM VĂCXIN TẢ UỐNG TẠI THỰC ĐỊA HUE

A TINH HINH CHUNG

I ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU

1 Phân bồ đốt tượng nghiên cứu theo địa dự

Số người trong các hộ éhấn (nhóm ưỗng Văcxin) là 87398 (50,1% người tham

gia), số người trong hộ lẻ (hhóm không uống väcxin) là 67058 (48.9% người

tham gia), được phân bồ theo phường như sau:

Bảng 1 Phân bố người tham gia thử nghiệm vá đối chứng theo phường

Phường Số người % theo Số người % theo Cộng

Trang 33

2 Phân bồ người tham gia theo nhóm tuổi

Đối tượng nghiên cứu được chia thành các nhóm tuổi tử 1 đân 5, từ 6 10,

từ 11 đến 20, tử 21 đến 40 và trên 40 tuổi, theo các nghiên cửu về vcxin tả

đã thực hiện ở Bangladash và sáo nơi khác, và theo cáo chuyên gia của Viện nghiên cứu y tế quốc gia Mỹ

Ngoài ra, trong số theo dõi, có một số người không có thông tin về tuổi, được

xếp vào nhóm tuổi “không rõ”

Bảng 2 Phân bố người tham gia nghiên cứu theo nhóm tuổi

Nhóm Hộ chan Hệ lẻ Gộng

tuổi chan tuổi 16 7192| 50S| 107] 7057| 485| i05| 14249| 106 6-10 $061| 499| 1200| 8104| 501) 121| 16165| 12.0 11-20 |13795) 503] 20.6] !326586] 497] 20.4] 27451] 20.4 21-40 |22800| 500| 33.8|22759] 500| 3369| 48559] 33.9 >4Q |14287| 5000| 212|14283) 500| 21,3] 28570| 21/2 Không rõ | 1280| 512 491 1199) 48.3 1,8 2459 1,8 Cộng |67395| 50,1} 100,01 67058; 49,3| 100.0] 134453 | 109,0

10 nam tuổi đầu tiên chiếm tý lệ cao (tống cộng hai nhóm 1-5 và 6-10 chiếm 22,6%), tỷ lệ của các nhóm khác thấp hơn (nhóm “0 năm tuổi thứ hai, từ 11-

20, chiếm 20,4%; nhóm 20 năm tuổi, từ 21-40 chỉ chiếm có 38,9%; và nhóm

cuối củng, từ 41 đến 102 chiếm 21,2%), Điều này phù hợp với hình thái số

liệu của sáo tháp tuổi trang các cuộc tổng điều tra, So với thành phần của hộ

chẵn (50,1% trong mẫu) và hộ lẻ (49,9% :rong mẫu), phân bó hộ chan, 18 Trong từng khoảng tuổi không chênh lệnh nhiều Sự khác biệt giữa phân bé theo nhóm tuổi của những người trong hộ chẵn vả những người trong hộ lẻ

không có ý nghĩa thắng kê (p=0,7303) +

Trang 34

3, Phân bố người tham gia theo giới tính

Bảng 3 Phân số người tham gia nghiên cứu theo giới tính

Giới Hộ chắn Hệ lá Cộng

Số | %theo |%trong| Số | %theo | %trong| Số người % người giớt hộ người | giới hộ lễ tnh | chin tính Nữ g5173| 501| 5Z/2|35024| 499] 522| 70197] saz Nam | 322227 501| 478|32034| 2939| 478| 642586| 47,8 Cộng |6/398| 56.1] 1000]67058| 49.9| 100.0] 134453 | 100,0

Phân bế giới tính của những người trong hộ chẵn và những người trong hộ lẻ hoàn toàn như nhau (nữ 52,2%, nam 47.8% ở cả hai loại hộ) Số liệu nảy

cũng phù hợp với số liêu của các cuộc tổng điều tra dân số

4 Độ lớn của hộ gia đình

Do có nhiều người tình nguyện tham gia trong việc ghi chép sổ sách xác định hộ điều này thường dẫn đến những sai số trong nghiên cứu, nên một số hộ

được ghi nhận có quá đông người, như các nhà lớn, tập thể lớp học, chùa

chiền, tuy nhiên số lượng nảy chiếm không nhiều (63 hộ từ 20 người trở lên,

chiếm 0,38% số hộ) Số người thường gặp trong các hộ lả 4-8 người ở cả hai nhóm chấn, lẻ, không có sự khác biệt lớn giữa độ lớn của cáo hộ chẩn và độ lớn của các hộ lễ (Bảng 4)

5 Phân bố theo nguồn nước

Bảng 5 Phân bộ người nghiên cứu theo nguồn nước Nguằn Hộ chẵn Hộ lẻ Cộn

nước SỐ [ %tmeo |%ttongl Số | %theo|%tongl Sống] 1%

người | ngườn hệ '| ngứời | nguồn | hols

Trang 37

Bang 4: Độ lớn của các gia dinh tham gia thử nghiệm

Độ lớn Hộ | % theo] % trongf Hộ [1% theo [% trong] Cộng | % theo

Trang 38

Trong sổ theo dõi, nguồn nước của một số người tham gia không được ghi nhận, số này chiếm 3,6% tổng số đối tượng, Đây cũng là điều thường xây ra ở các nghiên cứu lớn

Nhìn chung phan bé theo cde nguồn nước giếng, máy, nước sơng và ốc nguồn khác (hồ ao, nước phải mua từ nơi kháo ) của hai nhóm chẵn, lẻ tương đổi đồng nhất, có sự khác biệt xây ra trong số những người dùng nước mưa của hd chan và hộ lẻ Tuy nhiên, nấu thay đổi phan loại khác một chút, thay vì phân thành 4 nhóm dùng nước giếng, máy, mưa, sông và kháo, sẽ phân theo nguồn nước sạch (nước máy, nước mưa) và nguồn nước không sach (nước sông nước khảo và nước giếng, ở đây giếng thưởng không đảm bao vé sinh), thì sẽ thấy sự đồng nhất giữa nhóm hộ chẵn và nhóm hộ lỏ

(47240 người/G8097 sơ với 46840/64568, p=0,9356),

Những chỉ số trên cho thấy sự đồng nnất giữa nhóm thử nghiệm - được uống

vắcxin, và nhóm đối chứng - không uống văoxin H TINH HINH UỐNG VĂCXIN

1 Tình hình uống vắcxin trên thực địa

Bảng 6 Tình hình uống vãcxin trong các nhóm nghiên cứu Hộ chan Hồ tả Cộng Số người | % trong ! Số người | % trong | Số người % hệ chấn hộ lá 0 10771 16,0| 65530 977| 78301 58.7 1 44962 6.6 101 02 4568 34 2 52182 T74 1427 21] 53559 39,9 Công 7395} 1000] 87088] Q00] 134493] 100.0

Theo nguyên tắc, tắt cá mọi agười trên 1 :uối ở các hộ chẵn phải được uống hai liều văcxin cách nhau 14 ngày, và tất cả mọi người ở hệ lẻ không uống vaoxin Tuy nhiên, ở một nghiên cứu có quy mô lớn như vậy, với lượng người tham gia trên tho địa lớn (240 người tình nguyện), không tránh khỏi những

Sai SÓt xây ra

Ở nhóm hộ onẫn, chỉ c6 77,4% người uống đú hai liều, 8,6% chỉ uéng mot liều và 16% không uống liêu nào, với nhiều lý do (đi vắng, từ chối không tống, bô sót), trong khí đó ở nhóm hộ lễ, có 2,1% uống hai liều, 0,2% uống

Trang 39

một liều vãêxin Do đỏ để tránh sai số khi phân tích, kết quả sẽ được tính trên “nẫu số là tất cả những người trong hộ chẵn và tắt cả những người trong hô lẻ

2 Khoảng cách giữa hai liều vắcxin

Bảng 7 Khoảng cách giữa hai lẫn uống văcxin

(ghi chú: không tính những người ngày uống ghi không rõ rảng) Số ngà) Số người Tỷ lệ % 18 29 01 + 186 03 12 903 17 13 2064 38 14 7286 13.6 15 28608 53.6 16 8837 16,6 7 3698 69 18 1129 21 18 450 0,8 20- 167 0.8 21 37 ot 2 Cộng 53494 109,0

Thời gian bất đầu của hai đợt cho uống văcxín được thiết kế cách nhau hai

tuần, mỗi đợt kéo dài 7 ngáy Theo quy định, liều 2 cách liều 1 hai tuần Trên

thực tế, trong số những người uềng đủ hai liều, khoảng cách gần nhất là 10

ngày, xa nhất là 21 ngày, Quá nửa số người uống với khoảng cách là 15

ngày Số người uống với khoảng cách từ 13-18 ngày chiếm 34,8% Số còn lại,

5,4%, có khoảng cách dưới 13 ngày hoặc trên 18 ngày, đối với vắcxin tả

uống, những khoảng cách nay là chấp nhận được, nhựng đối với loại vấcxin kháo đòi hỏi khoảng cách nghiêm ngặt thì cần chú ý đến viậc bố trí lịch cho thích hợp - °'

8 KET QUẢ NGHIÊN CỨU

Việc thao dõi cáo trường hợp bãnh tiêu chảy và bênh tâ được tiến hảnh trong

cả năm 1893 Đối tượng ghi nhận là các bệnh nhân đến trạm y tế phường,

Trang 40

(TINH HINH BENH TA LAM SANG

1, Phan bộ bệnh nhân tả lâm sảng thao tuần

Trong cả hai nhóm hộ chẵn và lẻ, bệnh tá đều xảy ra tử tuần 34 đến tuần 40,

cùng với tỷ lệ ao vào các tuần 36, 87, 38 Sự khác biệt của phân bó bệnh

và hộ lễ không cỏ ý nghĩa thống kẽ (p=

nhân theo thời gian giữa hộ chãi

0,8605)

2 Phân bố bệnh nhân tả lâm sảng theo giới

Trọng số các bệnh nhân của nhóm hộ chẵn, nữ chiếm 55,7% (54/971, của

nhóm hộ lễ nứ chiếm 52,8% (172/326), sự khác biệt này chưa có ÿ nghĩa

thống ka (p=0,6977)

3 Phân bồ bệnh nhân theo nhóm tuổi

Định dạng
Số trang	54
Dung lượng	6,22 MB