Nghiên cứu tác dụng của polyphenol chè xanh việt nam đến chuyển hoá lipid và trạng thái chống oxy hoá trong máu chuột cống trắng gây đái đường thực nghiệm

Trang 1

ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI

BAO CAO TONG KET DE TAI NGHIEN CUU KHOA HOC CAP BO

NGHIEN CUU TAC DUNG CUA POLYPHENOL CHE XANH VIET NAM ĐẾN CHUYỂN HOA LIPID VA TRANG THAI CHONG 0 XY

Trang 2

PHANA

TOM TAT CAC KET QUA NOIBAT CUA DE TAI

1-KẾT QUÁ NỔI BẬT CỦA ĐỀ TÀI a- Đồng góp mới của đê tài

Đái tháo đường (ĐTĐ) là một vấn đề nan giải, là gánh nặng đối với sự phát triển kinh tế, xã hội ờ nhiều quốc gia vì tốc độ gia tăng nhanh chống của bệnh, vì các biến chứng và hậu quả nặng nẻ của bệnh, vì chỉ phí điều trị

bệnh rất tốn kém do người bệnh phải dùng thuốc suốt đời

Để tài nghiên cứu đã chứng minh tác dụng của polyphenol chè xanh (Camellia sinensis) cdi thiện những rối loạn của các chỉ số lipid huyết tương,

ngăn ngừa các stress oxy hoá trong máu ở chuột cống trắng gây ĐTĐ thực

nghiệm bằng Septozotoeia (STZ) và liều tác dụng rõ là liêu uống polyphenol chè xanh 200 mg/kg cân nặng/ngày

Tác dụng của polyphenol chè xanh được so sánh với tác dụng của vitamin E ~ một chất chống oxy hoá có cấu tạo cũng la polyphenol ~ với liều

uống tương đương

b- Kết quả cụ thể

- Chiết xuất bột polyphenol chè xanh từ lá chè tươi được thu hái tại khu trồng

chè xuất khẩu Hoà Lạc

- Thực nghiệm thành công việc gây mô hình ĐTĐ týp 2 trên chuột cống

trắng bằng STZ (có hình ảnh mô bệnh học của tổn thương tuy minh hoạ):

chuột được gây rối loạn chuyển hoá lipid bằng cách nuôi dưỡng với chế độ

ăn giàu chất béo Sau 30 ngày, chuột được tiêm màng bụng STZ liều thấp 50

mg/Ekg cân nặng với một liễu duy nhất Chuột bị ĐTĐ sau tiêm STZ từ 48

đến 72 giờ

-_ Polyphenol chè xanh cải thiện rõ rệt những rối loạn của các chỉ số

Trang 3

2

là sau 60 ngày chuột được uống bổ sung polyphenol chè xanh liều 200

mg/kg cân nặng/ngày): nồng dé TG, TC va LDL-C huyét tuong là 269 + 0,79 mmol/L; 1,46 £0,29 mmol/L va 0,65 £0,08 mmol/L giảm có ý nghĩa

(p < 0,001) so voi những nồng độ rương tag TG, TC va LDL-C huyét tong

của lô chuột DTD không được uống bổ sung polyphenol chè xanh (7,48 +

2,79 mmol/L; 3,22 + 0,52 mmol/L; 1,54 + 0,55 mmol/L.)), xấp xỈ bằng nồng

độ tương tag TG, TC va LDL-C huyết tương của lô chuột chứng (3,22 +

0,52 mmol/L; 1,32 + 0,23 mmol/L; 0,61 + 0,19 mmol/L ); néng dé HDL-C

huyết tương của các lô chuột thực nghiệm không có những biến động đáng

kế nhưng ty sé’ HDL-C/LDL-C huyét tương của lô chuột ĐTĐ uống bể

sung polyphenol chè xanh là 1,22 , tăng cao so với tỷ số này trong huyết

tương ở lô chuột ĐTĐ không được uống bổ sung polyphenol chè xanh (0,57)

và gần bằng tỷ số HDL-C/LDL-C huyết tương của lô chuột chứng (1,36)

- Polyphenol chè xanh không có ảnh hưởng trên hoạt độ SOD hồng câu và

'TAS huyết tương của các lô chuột thực nghiệm nhưng tác dụng rõ rệt đến

hoạt độ GPx hồng cầu và nồng độ MDA huyết tương của lô chuột ĐTĐ thực

nghiệm bằng STZ: hoat độ GPx hẳng cầu và nông độ MDA huyết tương của lô chuột này là 1799 + 185 UIgHb và 8,42 +2,24 nmol/L, giảm có ý

nghĩa (p<0.001) so với những nồng độ tương ứng trong máu của lô chuột

ĐTĐ không được uống bổ sung polyphenol chè xanh (2320 + 267 U/gHb và

15,7442,70 amol/L)

c+ Hiéu qud vê đào tạo - Đào rạo 01 nghiên cứu sinh

Tên đẻ tài luận án: “Nghiên cứu tác đụng của polyphenol chè xanh

(Camellia sinensis) trên các chỉ số lipid và trạng thái chống oxy hoá trong

Trang 4

luận án cấp cơ sở

- 02 bài báo đã công bố trên tạp chí “Mghiên cứu Y học” của trường Đại học Y Hà Nội vol 32, N'6, tháng 12/2004 va vol 38, N°S, tháng 9/2005

- 01 Báo cáo khoa học rại Hội nghị KH của NCS rường ĐHYHN tháng 11/2004, đạt giải Nhì; 01 Báo cáo khoa học tại Hội nghị khoa học của Hội Hoá sinh Y Dược học miễn Trung tháng 8/2005, 01 Báo cáo khoa học tại Hội nghị KH của NCS trường ĐHY HN tháng 11/2005

d- Hiệu quả về kinh tế, xã hội, : chưa có

2 AP DUNG VAO THUC TIEN SAN XUAT VA DOLSONG XA HOI

Đồng thời đang thực hiện một dé tài nghiên cứu cơ bản (thuộc quản lý

của Bộ KHCN) về tác dụng của polyphenol chè xanh trên tế bào một số dòng

ung thư nuôi cấy và đã thu được những kết quả khả quan Hy vọng rằng sau

những kết quả thu được, nhóm nghiên cứu sẽ cùng hợp tác với một đơn vị

bạn nghiên cứu sản xuất polyphenol chè xanh và các sản phẩm tách chiết của

nó (các catechin) để ứng dụng trên động vật thực nghiệm và lâm sàng, có thể

tiến xa hơn nữa trong tương lai gần nhằm phục vụ công tác chăm sốc sức khoẻ cộng đồng

3- ĐÁNH GIÁ THỤC HIỆN ĐỀ TÀI ĐỐI CHIẾU VỚI ĐỀ CƯƠNG NGHIÊN CỨU

ĐÃ ĐƯỢC PHÊ DUYỆT

a- Tiến độ: thực hiện đúng tiến độ nhưng do bản thân người chủ trì đề tài bị bệnh phải điều trị lâu ngày nên viết Bản nghiệm thu chậm

b- Thực hiện mục tiêu nghiên cứu: thực hiện đầy đủ các mục tiêu của

Trang 5

4

c+ Cac sdn phdm tao ra so với dự kiến cia bdn dé cương: đạt yêu cầu

so với dự kiến của bản đề cương với mức độ tốt và rin cậy (kết quả cụ thể, kết

quả về đào tạo, bài báo được công bố)

d- Đánh giá việc sử dụng kinh phí

Tổng kinh phí của đẻ tài : 82.000.000đ Kinh phí tồn đọng : 10.000.000đ

Lý do tồn đọng: chỉ phí cho việc bảo vệ đề tài nghiên cứu ở cấp

Trang 6

PHAN B

NỘI DUNG BÁO CÁO CHI TIẾT

KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI CẤP BỘ

ĐẶT VẤN ĐỀ

Đái tháo đường (ĐTĐ) là một bệnh rối loạn chuyển hóa mạn tính với sự tăng glucose mau do thiéu tương đối hoặc tuyệt đối insulin [50] ĐTĐ là một bệnh khá phổ biến trên thế giới; theo thống kê năm 1997, tỷ lệ ĐTĐ ở

Mỹ là 6,6%, ở Pháp là 6,6%, ờ Ấn Độ là 6,1%, ờ Singapore là 8,6% Tỷ lệ

mắc ĐTĐ đang ngày càng gia răng không chỉ ờ các nước phát triển mà còn ở các nước đang phát triển Tại Việt Nam, tỷ lệ bệnh ĐTĐ răng trong những

năm gần đây: ờ Hà Nội khoảng 2,6% (quận Đống Đa 5,6%), ở thành phố Hỗ Chí Minh có nơi tỷ lệ ĐTĐ gần 8% Bời vậy ĐTĐ đã được các nhà khơa học trên thế giới quan tâm nghiên cứu vẻ bệnh căn, bệnh sinh, các đặc điểm lâm

sàng và cận lâm sàng nhằm mục đích phòng bệnh, điều trị bệnh và các biến chứng của bệnh một cách có hiệu quả nhất

Rối loạn chuyển hóa các chất trong ĐTĐ trước tiên là rối loạn chuyển

hóa glucid, từ đó kéo theo rối loạn chuyển hớa các chất khác - đặc biệt là rối

loạn chuyển hóa lipid, gây rổn thương hàng loạt các cơ quan và tổ chức trong

cơ thể ĐTĐ týp 1 và týp 2 đều có rối loạn chuyển hóa lipid với các bất

thường lipid huyết tương Bất thường này là một trong những yếu tố nguy cơ

gây vữa xơ dong mach (VXDM) 6 bệnh nhân ĐTĐ và theo thống kê cho thấy nguyên nhân gây tử vong phổ biến nhất ờ bệnh nhân ĐTĐ là bệnh tỉm

Trang 7

6

Trong hoạt động sống của tế bào, các quá trình chuyển hóa đã sản sinh các gốc tự do và các dạng oxy có hoạt tính hóa học cao khác Tuy nhiên, ở

trạng thái bình thường, gốc tự do tồn tại với hàm lượng rất thấp trong tế bào nhờ hệ thống chống oxy hóa của cơ thể nhằm bảo vệ các mô tránh được những phản ứng gốc gây tổn thương cho tế bào và mô Sự rối loạn chuyển hóa của một chất bất kỳ có thể dẫn tới sự gia tăng hàm lượng các gốc tự do -

nguyên nhân của nhiều quá trình biến đổi bệnh lý khác nhau, trong đó có sự gia tăng của quá trình peroxi hóa lipid [9] Các nhà khoa học đã chứng minh

sự có mặt của quá trình peroxi hóa lipid ờ các tồn thương VXÐM và vai trò quan trọng của nó trong sự phát triển mảng VXÐM [24] Vai trò của gốc tự

do trong bệnh căn và bệnh sinh của ĐTĐ là chưa chắc chắn, nhưng nhiều

nghiên cứu đã cho thấy bệnh lý ĐTĐ có sự gia tăng các stress oxy hóa và

thường có liên quan đến mức tăng của glucose trong máu Nông độ các lipid

peroxid trong huyết tương ờ bệnh nhân ĐTĐ cao hơn mức bình thường

Điều trị ĐTĐ nhằm kiểm sốt nơng độ glucose máu; giảm và loại bỏ các yếu tố nguy cơ gây biến chứng, bao gồm rối loạn chuyển hóa lipid, răng

huyết áp, tăng hoạt động gốc tự do và điều trị các biến chứng Các thuốc

điều trị hội chứng tăng lipid máu nói chung và rối loạn lipid ở bệnh nhân DTD adi riêng hiện đang được sử dụng có hiệu quả tốt, song cũng gây nhiều

tác dụng phụ như rối loạn tiêu hóa, đau cơ, tăng nhẹ và tăng tạm thời các enzym gan ; do vậy những người có bệnh gan, thận, loét dạ đày-rá tràng

không được dùng các thuốc này [101].Trên thế giới, các nhà nghiên cứu đang tìm kiếm các thuốc có nguồn gốc thảo mộc nhằm hạn chế những tác

dụng phụ nói trên Ở Việt Nam, các thuốc được sản xuất từ ròi, ngưu tất,

Trang 8

Từ lâu chè xanh được biết đến như một loại thảo dược có tác dụng tốt

cho sức khỏe con người, đặc biệt là tác dụng ngăn chặn bệnh ung thư, bệnh

1im mạch, chống quá trình lão hóa [127] Chè xanh được sử dụng như nước

giải khát phổ biến, được ưa chuộng không những ở các nước châu Á như

Trung Quốc, Nhật Bản, Việt Nam mà còn được ưa chuộng ở nhiều nước

khác trên thế giới Chính vì vậy, chè xanh đã và đang được các nhà khoa học

quan tam nghiên cứu Người ta đã tách chiết và xác định được các thành

phân hóa học của polyphenol chè xanh, nghiên cứu một số tác dụng dược lý của chúng [114] Mối liên quan giữa sự tiêu thụ chè xanh với hàm lượng lipid huyết thanh, sự bền vững của các phân tử lipoprotein với các tác nhân oxy hóa, sự hình thành các mảng VXĐM đã được khảo sát bởi các nhà

nghiên cứu ở nhiều nước, nhất là ở Nhật Bản [132, 157, 160, 163]

Ở Việt Nam, tiếp theo đề tài nghiên cứu vẻ rác dụng của dịch chiết chè

xanh trên một số chỉ số lipid và hàm lượng malonyl dialdehid trong huyết tương thỏ thực nghiệm, đề tài “Nghiên cứu tác dụng của polyphenol chè xanh (Camellia sinensis) trên các chỉ số lipkl và trạng thái chống oxy hóa trong máu chuột cống trắng gây đái tháo đường thực nghiệm ” được tiến hành nhằm mục tiêu:

1 Đánh giá tác dụng của polyphenol chè xanh trên các chỉ số iipid huyết tương ở chuột gây ĐTĐ thực nghiệm

2 Đánh giá tác dụng của polyphenol chè xanh trên hoạt độ của một số enzym chống oxy hóa và trạng thái chống oxy hóa toàn phần trong máu ở chuột gây ĐTĐ thực nghiệm

3 Đánh giá tác dụng của polyphenol chè xanh trên những biến đổi

Trang 9

Nội dung nghiên cứu của để tài gồm: 1 Chiết xuất polyphenol chè xanh

2 Khảo sát tác dụng của polyphenol chè xanh đến sự thay đổi hàm

lượng glucose máu ở chuột gây ĐT thực nghiệm

3 Khảo sát tác dụng của polyphenol chè xanh trên sự thay đổi các chỉ

số lipid huyết tương ở chuột gây ĐTĐ thực nghiệm, bao gồm: triglycerid

(TG), cholesterol toàn phần (TC), cholesterol của lipoprorein tỷ trọng cao

(HDL-C) và cholesterol của lipoprorein tỷ trọng thấp (LDL-C)

4 Khảo sát tác dụng của polyphenol chè xanh đến hoạt độ của một số enzym chống oxy hóa như superoxid dismurase (SOD), glutathion

peroxidase (GPx) va trạng thái chống oxy hóa toàn phân (TAS), hàm lượng

1malondialdehyd (MDA) trong máu chuột gây ĐTĐ thực nghiệm

5 Khảo sát tác dụng của polyphenol chè xanh đến sự biến đổi mô bệnh học của một số mô ở chuột gây ĐTĐ thực nghiệm: thành động mạch

Trang 10

L.1- LIPID VA LIPOPROTEIN MAU

1.1.1- Lipid mau

Các lipid chính eó mặt trong máu là aeid béo tự do, triglyeerid (TG),

cholesterol toàn phần (TC) trong đó có cholesterol tu do (FC) và cholesterol

este (CE) , cdc phospholipid (PL) Vi khong tan trong nude, lipid duoc van

chuyển trong máu dưới dạng kết hợp với các protein đặc hiệu Albumin là chất vận chuyển chính của các acid béo tự do, các lipid khác được lưu hành

trong máu dưới dạng các phức hợp lipoproreia [10, 101, 154]

TG có trong thành phần chất béo của thức ăn, có thể được tổng hợp trong gan và mô mỡ để dự trữ năng lượng cho cơ thể

PL và cholesterol là thành phần cấu trúc của màng rế bao Cholesterol cũng là tiền chất của các hormon steroid và các acid mật Cholesterol có

trong thức ăn (nguồn ngoại sinh) và có thé được tổng hợp ở nhiều mô của cơ

thể, đặc biệt là gan với một cơ chế được điều hòa chặt chẽ (nguồn nội sinh)

Không giống TG và PL, nhân sterol của cholesterol không thể thoái hóa xa

hơn nữa, vì vậy cần thiết phải có quá trình vận chuyển cholesterol từ các mô ngoại vi trở về gan và tai gan, cholesterol được bài tiết hoặc nguyên dạng trong mật hoặc sau khi được chuyển hóa thành acid mật [101, 141, 154]

1.1.2- Thành phân, cấu trúc và phân loại các lipoprotein

1ipoprorein (LP) là những phần tử hình cầu, bao gồm phân nhân chứa

đựng những phân tử không phân cực là TG và cholesterol este, xung quanh

bao bọc bởi lớp các phân tử phân cực: phospholipid, cholesterol tự do và các

protein - được gọi là apolipoprorein, viết rất là apo (Hình 1.1)

Trang 11

10

chính theo tỷ trọng tăng dần là chylomicron (CM), LP có tỷ trọng rất thấp

(very low density lipoprotein- VLDL), LP cé ty wong thaép (low density

lipoprorein- LDL) và LP có rỷ trọng

cao (high density lipoprotein- HDL) 2a ao LP cé ty trong trung gian (intermediate

density lipoprotein IDL) la sao phdm ‘lees

chuyển hóa của VLDL trong máu và Bc

là tiền chất của LDL, bình thường có —

hàm lượng rất thấp trong huyết tương

Sự phân loại này được mình họa ở Hình I.I- Sơ đổ cấu đạo

Bang 1.1 của tiéu phan lipoprotein [157]

Lipoprotein (a) bay LP (a) là loại LP không điển hình với chức năng

chưa biết Nó to và nặng hơn LDL nhưng có thành phần tương tự, ngoại trừ

có thêm apo (a) Nồng độ LP (a) trong huyết tương thay đổi nhiều giữa các

cá thể, rong khoảng từ Ö -100mg/dL, và được xác định do yếu tố di truyền Nông độ LP (a) tăng cao là một yếu tố nguy cơ độc lập của bệnh mạch vành

sớm [154]

Các apoprorein (apo) có vai trò quan trọng trong cấu trúc và chuyển

hóa của lipoprorein Trong quá trình chuyển hóa lipid, các apo có một số các

chức năng: (1) chức năng nhận biết các receptor đặc hiệu trên màng tế bào ;

(2) chức năng điều hòa: hoạt hóa hoặc ức chế một số enzym, là chất cộng tác

của các enzym; (3) chức năng giúp các LP được vận chuyển trong máu và

bạch huyết Khi tính hòa ran của các LP bị rối loạn hoặc sự vận chuyển

chúng trong máu bị chậm trễ sẽ dẫn đến tình trạng ứ đọng các phân tử có

chứa nhiều lipid, đó là một trong những yếu tố gây VXĐÐM [99, 100, 101] Các apo chính gồm:

- ApoA là thành phân cấu rạo của HDL, chủ yếu trong HDL mới sinh (được

Trang 12

ApoA-1 là apo chính của HDL, có vai trò hoạt hóa lecithin cholesterol acyltransferase (LCAT) Néng 40 apoA-I thép là bệnh lý, phản ánh nguy cơ của VXĐM ApoA-lI tham gia cấu trúc HDL 2, chức năng chưa rõ

-ApoB- Apo B-100 1 prorei cấu trúc chính của VLDL va LDL, đóng vai trò

chất nhận diện receptor màng tế bào đối với LDL, gắn với receptor LDL & màng tế bao va dua LDL vao trong té bào để cung cấp cholesterol cho té bao

Bang L.1- Phan loại va déc diém cita cdc lipoprotein huyét tiong

Lipoprotein] Tytrong | Dudngkinh | Dichuyén | Nguongée | Chức năng chính

(simT) trung bình điện di

(om)

cM <0,950 500 điểm Tuột "Vận chuyển TƠ

xuất phát ngoại sinh

VLDL 0,960 1006 43 pre-B Lp Gan 'Vận chuyéa TG

nội sinh

IDL 1,007-1,019 27 bang B Lp Sản phẩm Tiên chất của

rộng chuyển hoá của LDL

VLDL

LDL 1,020-1,063 22 BLp Sản phẩm 'Vận chuyển

chuyển hoá _ | cholesterol từ gan VEDL qua IDL | déamo agoai vi

HDL 1,064-1/210 8 œLp Gan Rugt Vận chuyển

Sản phẩm cholesterol chuyển hoá wed vé gan CM va VLDL

(William J, Marshall, Clinical chemistry, Fourth Edition, Mosby 2000)

Trang 13

12

Apo B-100 tham gia vào cơ chế bệnh sinh cla VXDM va la nguyên

nhân của nhiều trạng thái bệnh lý có tăng lipid máu

Apo B-100, cholesrerol cùng với VLDL và LDL là những yếu tố nguy

cơ gây VXĐM Tăng apo B phản ánh sự thoái hóa cholesterol kém và sự ứ

đọng cholesterol rong mô Phân lớn các nghiên cứu gần đây cho thấy tỷ lệ apo A-I/apo B-100 là chỉ số thể hiện nguy cơ bệnh động mạch vành tốt hơn so với tỷ lệ HDL-C/LDL-C, sự thay đổi chỉ số này rất có ý nghĩa trong lâm

sàng mặc dù hàm lượng cholesterol máu không vượt quá trị số bình thường

Apo B-48 là prorein cấu trúc chính trong CM, thiếu vị trí gắn với

receptor của LDL

-Apo C có trong rhành phần của VLDL, IDL, HDL Apo C-I có nhiệm vụ hoat héa LCAT, apo C-II hoat héa lipoprotein lipase (LPL) dé thay phan TG eta CM va VLDL, con apo C-III tie ché LPL

- Apo E là thành phần cấu trúc cla CM, VLDL, IDL, HDL1 Apo E gan voi

reeeptor LDL và có thể gắn với các reeeptor đặc hiệu khác của gan, đồng vai

wd quan trong trong vận chuyển lipid ở não

1.1.3- Chuyén héa lipoprotein

+ CM được tạo thành từ lipid thức ăn (chủ yếu là TG) trong tế bào

niêm mạc ruột non, đi vào hệ bạch mạch, rồi đổ vào hệ tuân hoàn qua ống

ngực rại hợp lưu giữa tĩnh mạch cảnh và tĩnh mạch dưới đòn CMI theo máu tới mô mỡ và cơ, rại đó TG được thuỷ phân nhờ enzym LPI khu trú trên bẻ

mặt tế bào nội mạc mao mạch Các acid béo tự do được sử dụng làm nguồn

cung cấp năng lượng hoặc được este hóa thành TG dự trữ CM mất TG và trả lại apo C cho HDL, trở thành CMI tàn dư giàu cholesterol CM tàn dư được

bắt giữ ở tế bào gan nhờ các receptor đặc hiệu với apo B48 va apo E Trong

trường hợp bình thường, CM không có trong huyết tương khi đói (>12 giờ

Trang 14

(10%), vào máu đến các mô ngoại vỉ Tại các mô, TG bị thuỷ phân dưới tác

dụng của LPL, đông thời apo C được chuyển sang cho HDL, chỉ còn lai apo

B-100 và apo E Enzym LCAT từ gan vào huyết tương có tác dụng este hóa

cholesterol của VLDL thành cholesterol este Như vậy sau khi giải phóng

TG, nhận thêm CE và mất đi apo C, VLDL chuyển thành TDL - tiền chất của

LDL LACT mo ra 75- 90% CE tong huyết tương, phần CE còn lại do gan

hoặc ruột sản xuất nhờ enzym acylCoA cholesterol acyltransferase ( ACAT)

Do vậy, sự thiếu hụt LCAT gay các rối loạn chuyển hóa LP [12, 22, 141,

154]

TDL trờ lại gan, gắn vào các receptor đặc hiệu (apo B, E) ở màng tế bào và chịu tác dụng của lipase gan Các IDL chuyển thành LDL (cùng với

sự biến mất của apo E) Bình thường có rất ít IDL lưu hành trong máu

+ LDL là chất vận chuyển chính cholesterol trong máu, chủ yếu dưới

dạng CE LDL gắn với các receptor LDL nhận biết apo B-100 trên màng tế bào gan (70%) và các màng tế bào khác của cơ thể (30%) Các LDL được

chuyển vào trong té bào và chịu sự thoái hóa rong lysosom, giải phóng cholesterol tu do Cholesterol ty do cé ba rác dụng cơ bản là:

+ Ue ché hoat động của HMG CoA reductase (Bhydroxy - methyl- glutaryl coenzym A reducrase), làm giảm tổng hợp cholesterol trong tế bào

+ Hoạt hóa enzym ACAT, chuyển cholesterol tự do hành cholesterol este

+ Làm giảm số lượng receptor LDL ở màng tế bào qua con đường

feed- back âm tính

Đại thực bào rạo ra từ các monoeyte trong máu có thể bắt giữ LDL qua

receptor thu dọn Quá trình này xảy ra ở các nồng độ LDL bình thường

nhưng được tăng cường khi nồng độ LDL răng cao và bị biến đổi (LDL bị

Trang 15

14

tai cholesterol este, chúng chuyển thành các tế bào bot (foam cell) ~ một

thành phần của mảng vữa xơ [24, 101, 154]

* HDL được tổng hợp tại gan (HDL mới sinh) hoặc từ sự thoái hóa

cia VLDL và CM trong máu Trong tuần hoàn máu, HDL mới sinh nhận

thêm apo A và apo C từ các LP khác và cholesterol tự do từ màng bể mặt tế

bào của các mô Cholesterol tự do được este hóa bời LCAT có trong HDL

mới sinh, làm tăng tỷ trọng của HDL và chuyển HDL3 thành HDL2 CE

được chuyển từ HDL2 sang các CM tàn du va IDL CE trong các LP tàn dư này được bắt giữ bởi gan và được bài tiết trong mật nguyên dạng hoặc sau

khi chuyển hóa thành acid mật

Tom lại, HDL có hai vai trò quan trọng là :

+ Thanh lọc các LP giàu TG_(CM và VLDL) bằng cách cung cấp cho chúng

apo C-II cần thiết cho sự hoạt hóa LPL

+ Vận chuyển trung gian cholesterol tự do rừ các mô ngoại vi trở về gan giúp cho thoái hóa và bài tiết cholesterol qua mật

Vì vậy HDL là yếu tố bảo vệ chống VXĐÐM [24, 100, 101, 141, 154]

1.1.4- Rối loạn chuyển hóa lipoprotein và vữa xơ động mạch

1.1.4.1 Phân loại rối loạn chuyén héa lipid + Phân loại của Fredrickson [154]

Trang 16

Năm 1965, Eredriekson căn cứ vào kỹ thuật điện di và siêu ly tâm đối với các thành phân lipid huyết thanh đã phân loại hội chứng tăng lipid máu làm 5 týp dựa trên những thay đổi của thành phần LP Cách phân loại này

nhanh chóng được chấp nhận nhưng sau đó, người ta để nghị tach typ IL

thành rýp IĨa có răng LDL đơn thuần và týp IIb có tang LDL, VLDL Bang

phân loại này trở thành phân loại quốc tế của WHO từ năm 1970

+ Phản loại của De Gennes [101]

Bảng phân loại của De Gennes căn cứ vào sự biến đổi của TC va TG

trong huyết thanh; có 3 týp rối loạn lipid máu:

- Tăng cholesterol huyết thanh đơn thuần: Tỷ lệ TC/'TG > 2,5 Cholesterol

tăng thường do răng LDL, nhưng HDL tăng cũng có thể làm tăng nhẹ cholesterol huyết thanh

- Tăng triglyeerid_ huyết thanh đơn thuần: TG tăng rất cao Tỷ lệ TG/TC >

2,5 Khi TG > 11,5 mmol/L thì CM luôn có mặt trong máu Các rối loạn

lipid máu tiên phát như tăng VLDL giàu TG hoặc tăng CM làm cholesterol

toàn phần có thể hơi răng do cả hai dạng LP này đều chứa cholesterol tự do &

phan vO va cholesterol este ở phân lõi

- Tăng cholesterol và tăng triglycerid huyết thanh (tăng lipid máu hỗn hợp): TC tăng vừa phải, TG tăng nhiều hơn Tỷ lệ TC/ TG < 2,5 Nguyên nhân có thể do tăng VLDL chứa nhiều TG và LDL chứa nhiều cholesterol, hoặc răng VLDL tàn dư và CM tàn dư

® Phân loại EAS 1987

Năm 1987, Hiệp hội Vữa xơ động mạch châu Âu phân chỉa rối loạn

lipid máu thành 5 rýp:

- Bình thường: TC < 5,2 mmol/L va TG <2,2 mmol/L - Týp A: 5,2 < TC <6,5 mmol/L, va TG <2,2 mmol/L

Trang 17

16

- Typ C: TC < 5,2 mmol/L va 2,2 <TG <5,5 mmol/L

- Týp D: 52 < TC < 7,8 mmol/L va 2,2 < TG <5,5 mmol/L - Týp E: TC> 7,8 mmol/L và TG > 5,5 mmol/L

Tăng lipid máu có thể tiên phát do di truyén hoặc thứ phát sau các

bệnh khác như béo phì, nghiện rượu, ĐTĐ, suy giáp trạng, hội chứng thận hư, suy thận mạn, sau dùng kéo dài một số thuốc Các bệnh nhân khác nhau mắc cùng một bệnh có thể biểu hiện các týp khác nhau của rối loạn lipid

mau

1.1.4.2 Chế độ ăn và sự rối loạn chuyén héa lipoprotein

Người ta thấy có mối rương quan thuận giữa mức riêu thụ chất béo bão

hòa với nồng độ cholesterol máu: những dân tộc ăn nhiều mỡ có hàm lượng

cholesterol máu cao hơn những dân tộc có thói quen ăn ít mỡ, đồng thời

những bệnh lý có liên quan tới tăng lipid máu như VXĐÐM, bệnh mạch vành,

nhồi máu cơ tim có tần xuất mắc tăng rõ rệt ở quần thể dân tộc ăn nhiều

mỡ Điều chỉnh chế độ ăn là một trong các biện pháp quan trọng của điều trị

tăng lipid máu [ 28, 100, 101]

Mô hình thực nghiệm của Anichkov được coi là mô hình kinh điển và

được nhiều nước trên thế giới áp dụng: khi cho thỏ ăn cholesterol liều cao 0,3 -0,5 g/kpg/ngày, cholesterol máu của thỏ sẽ tăng ngay từ tuần đầu thực

nghiệm; cùng với sự tang lipid máu, sự lắng dong cholesterol trong rổ chức nhất là gan và thành động mạch cũng được phát hiện; sau tháng thứ tư của

thực nghiệm trên, người ta thấy có nhiều mỡ lắng đọng ở thành mạch và xuất

hiện những mảng vữa xơ [100, 101] Để gây VXĐM vành, Vokva phải cho thỏ ăn cholesterol với liều cao hơn và trong thời gian kéo dài hơn [101]

Gâần đây người ta đã tiến hành thực nghiệm trên khỉ Rhesus Bằng

cách cho khỉ ăn cholesterol với liều 1,5 g/kg/ ngày và trộn với mỡ; sớm nhất

Trang 18

nồng độ cholesterol 6,6- 10,2 mmol/L trong máu và các tác giả cho thấy với nồng độ cholesterol máu 14,3 - 14,8 mmol/L đã gây được nhồi máu cơ tỉm, hoại tit chi [99, 100]

1.1.4.3 Rối i loan chuyển hóa lipoprotein va VXDM

C6 nhiều yếu tố nguy cơ gây nên VXĐM như rối loạn chuyển hóa lipid, tăng huyết áp, béo phì, đái tháo đường trong đó rối loạn chuyển hóa

lipid đóng vai trò chủ yếu [12, 15, 28]

Tipoprorein đóng vai trò quan trọng trong bệnh sinh của VXÐM Các

LP chứa apo B chuyển cholesterol cho thành động mạch và là tác nhân gây VXĐM Nồng độ HDL giảm dẫn đến sự giảm của quá mình vận chuyển cholesterol ra khỏi thành động mạch Các LP chứa apo B như VLDL và các

phân tử tàn dư của chúng, LP(a) và LDL được gắn và bị giữ lại tổ chức thành mach béi proteoglycan- chat này được bài tiết bởi rế bào mạch máu [24] Các

phân tử LP bị giữ lại này có thể bị oxy hóa bởi tế bào nội mạc, tế bào cơ trơn

và đại thực bào bởi một số cơ chế [24, 28, 101]

Các LDL bị oxy hóa kích thích sự kết dính bạch cầu đơn nhân với tế bào nội mạc và hóa ứng động chúng đi vào lớp dưới nội mạc LDL bị oxy hóa còn kích thích sự hoạt hóa và biệt hóa bạch câu đơn nhân; do đó làm

thuận lợi cho sự kết tập, hoạt hóa và trường thành của đại thực bào Các LDL bị oxy hóa còn làm răng tổng hop proteoglycan mach mau va thay đổi thành

phân các chuỗi glycosaminoglyean của chúng, do đó cho phép những phân

tử này gắn LDL dễ dàng hơn Các đại thực bào bắt giữ LDL qua các receptor

Trang 19

18

(plasminogen activator inhibitor-1, PAT-1), dẫn đến sự hình thành vỡ mang

vữa xơ và tắc mạch [24, 101]

Dé đánh giá mức độ tổn thương VXĐÐM, năm 1972 WHO đưa ra bảng

phân độ như sau [1]:

- Độ 0: Các tổn thương xơ mỡ giai đoạn đầu, sự lắng đọng các hạt mỡ ở lớp áo trong chưa nổi rõ trên bề mặt lớp nội mạc động mạch

- Độ I: Những tổn thương xơ mỡ bắt đầu hình thành nên những chấm

hoặc những vạch mảnh có màu vàng đục, hiện rõ trên bẻ mặt lớp nội mạc

động mạch và có rhể kết hợp thành từng mảng nhỏ

- Độ II: Tổn thương hình thành những mảng lớn, nổi cao trên bề mặt

lớp nội mạc động mạch và bao gồm chủ yếu những mô xơ do quá sản, ở

vùng tổn thương có màu trắng đục hay màu trắng vàng

- D6 III: Gém những tổn thương phức rạp như loét, chảy máu, hoại tử

hoặc huyết khối; có thể kèm theo calci hóa ở vùng trung tâm hoại tử

- Độ IV: Thành động mạch bị calci hóa, đôi khi xương hóa làm cho vách động mạch rất cứng

4.1.4.4 Thuốc điều trị rồi loạn lipid mau

Trên cơ sờ những hiểu biết vẻ chuyển hóa lipid, người ta đã tìm ra nhiều loại thuốc để điều trị các rối loạn lipid máu Dựa vào rác dụng hạ lipid máu, thuốc được chia làm 2 nhóm chính:

® Nhóm thuốc làm giảm hấp thu và tăng thải trừ lipid: Cholestyramin,

colesiipol, neomycia là những thuốc có tính hấp thu mạnh; tạo phức hợp với acid mật, làm giảm quá trình nhữ hoá lipid ở ruột, dần đến sự giảm hấp thu và tăng đào thải lipid qua phân Ngoài ra, chúng còn có tác dụng tăng số lượng và hoạt tính của reeeptor LDL ở màng tế bào

$ Nhóm thuốc ảnh huông đến sinh tổng hợp lipid: g6m dẫn xuất của acid fibric, dẫn xuất của statia, aeid nicotinic, Acid nicotinic ting chuyén hod

Trang 20

fibrat giảm vận chuyển acid béo vẻ gan, giảm tổng hợp và tăng thanh thải VLDL, giảm tạo thành và giảm sự oxy hoá LDL; thuốc làm giảm nồng độ

TC, TG, VLDL, LDL và tăng HDL trong huyết thanh; thuốc còn có rác dụng

giảm sự kết tập của tiểu cầu, giảm fibriaogen và giảm acid uric máu Nhóm starin là loại thuốc ức chế cạnh tranh với enzym HMG-CoA reducrase; dẫn

đến ức chế sự tổng hợp cholesterol ở tế bào gan, ting receptor LDL va tăng

thoái hod LDL

Một số thuốc từ nguồn thảo dược (nghệ, ngưu tất ) cũng có tác dụng

trên sự rối loạn lipid máu Mỗi nhóm có cơ chế tác động riêng của nó Các

thuốc tổng hợp hóa học tuy có tác dụng điều trị tốt song còn nhiều rác dụng

phụ, vì thế các thảo dược ít độc hại, có tác dụng hạ lipid và chống oxy hóa

ngày càng được quan tâm

1.2 GỐC TỰ DO YÀ HỆ THỐNG CHONG OXY HOA CUA CO THE:

1.2.1 Các dạng oxy hoạt động trong cơ thể và quá trình peroxi hóa lipid

Các dạng oxy hoạt động bao gồm gốc tự do có oxy luôn được sản sinh trong các hoạt động sinh lý của cơ thể sống Nguồn sinh gốc tự do gắn liền

với các chuyển hóa tế bào như các phẫn ứng oxy hóa khử của tế bào trong

quá trình thực bào, trong các phản ứng khử độc của cơ thể bằng cơ chế oxy hóa, đặc biệt trong quá trình hô hấp tế bào Ngoài ra, gốc tự do còn hình thành trong cơ thể do những tác nhân của môi trường và các chất dị sinh

(cdc xenobiotic) Anion superoxid (O;` ) được tạo nên trong quá trình hô hấp

tế bào là gốc tự do đầu tiên, từ đó sinh ra hàng loạt các dạng oxy hoạt động

khác như hydroperoxid (H,O,), gốc hydroxyl (HO"), oxy đơn bội ('O,), gốc

peroxyl (LOO”), gốc alkyl (L”), gốc alkoxyl (LO") Các dạng oxy hoạt động

Trang 21

20

'O„, H,O,, HO" là những chất độc đối với tế bào vì chúng sẽ tấn công các acid béo không bão hòa có trong lipid màng tế bào gây nên những biến đổi màng rế bào và biến đổi của những phân tử DNA, gây đột biến gen !O,„

HO" có hoạt tính hod học rất mạnh, chúng là thủ phạm chính gây peroxi hóa

lipid màng, một gốc HO" sẽ oxy hóa hàng trăm phân tử aeid béo không bão

hòa nhiều nối đôi theo cơ chế dây truyền trước khi bị dap rat [3, 8, 9]

Quá trình peroxi hóa lipid (POL) xuất hiện theo cơ chế phản ứng gốc tự do xây ra theo 3 giai đoạn liên tiếp nhưng riêng biệt (khơi mào, lan truyền,

đập tat)

Gée HO", 'O,, dạng proton của 0," 1a HO," va cde phite hợp khác

nhau của oxy với sắt có khả năng khơi mào POL, hình thành các gốc peroxyl Gốc peroxyl này có khả năng lấy đi H từ một phân tử acid béo khác và gốc alkyl mới rạo nên có thể tác dụng với O, sinh ra một gốc peroxyl khác

và cứ thế, phản ứng dây chuyển được nhân lên mãi Gốc peroxyl được tạo

thành có hai số phận: hoặc tạo lipid hydroperoxid, hoặc rạo endoperoxid

Hydroperoxid hữu co (lipid hydroperoxid = LOOH) co thé bi phan hủy bởi các ion kim loại chuyển tiếp và sinh ra các sản phẩm trung gian có

hoạt tính thứ cấp cho quá trình peroxi hóa

Sự chia cất các liên kết trong endoperoxid dẫn đến sự hình thành hoặc malonyl dialdehid (MDA), hoic penran; đây là những sản phẩm của POL

POL là một quá trình chuyển hóa bình thường xảy ra trong tế bào mọi cơ quan, tổ chức của cơ thể POL có khả năng điều hòa tính thấm của màng,

điêu hòa hoạt động các enzym liên kết màng tế bào và lưới nội bào Ở một vài giai đoạn của POL sinh ra các dẫn chất cần thiết cho quá trình sinh tổng

Trang 22

tế bào xuất hiện những đám phân tử lipid hydroperoxid, đó chính là đường

dẫn nước qua màng, làm thay đổi tính thấm của màng [3, 8, 9]

Hiện nay người ra thấy POL đóng vai trò quan trọng trong bệnh căn,

bệnh sinh của nhiều bệnh như VXĐM, thiếu năng động mạch vành, nhỏi

máu cơ tim, bệnh ung thư Sản phẩm của POL có liên quan đến sự tích tụ các

phân tử polyme sinh học không có hoạt tính và sự hư hại DNA của tế bào

Sản phẩm cuối cùng của POL là MDA có thể gây ra sự nối chéo DNA trong

chromosome Người ta đã tìm thấy mối liên quan giữa POL với tốc độ phân

chia tế bào - cơ sờ để nghiên cứu vẻ những yếu tố khởi động của quá trình

ung thu

1.2.2 Hệ thống chống oxy hóa của cơ thể

Hệ thống chống oxy hóa có vai trò ngăn ngừa, chống lại và loại bỏ tác dụng độc hại của các gốc tự do và các dạng oxy hoạt động khác

1.2.2.1 Hệ thấn e chống oxy hóa có bản chất enzym [9, 21]

Loại này tồn rại chủ yếu trong tế bào; hoạt độ các enzym chống oxy

hóa rất thấp trong huyết tương, dịch sinh học khác như dịch não tủy, bao

hoạt dịch

¢Superoxid dismutase (SOD - BC.1.15.1.1)

Enzym này có trong tất cả các tế bào có chuyển hóa oxy, xúc tác sự

phân hủy anion superoxid

20," +20 SOP, HO,+O,

Vì superoxid liên tục được sinh ra và liên tục bị phá hủy nên SOD có hoạt tính càng cao thi nổng độ superoxid càng nhỏ Do đó, SOD la chat chống oxy hóa cơ bản, làm hạ thấp nồng độ superoxid ban đầu mà từ đó sẽ

sinh ra các dạng oxy hoạt động khác

SOD có 4 loại:

Trang 23

22

hai màng của ty thể rế bào

+ Hai loại chứa Mu (Mn - SOD) có ở matrix ry thé của rế bào động vật và vỉ khuẩn

+ Một loại chứa Fe (Fe - SOD) có ở bào tương của E Coli

+ Catalase

LA enzym chéng oxy héa duge biét dau tiên, xúc tác phản ứng phân hủy hydroperoxid võ cơ ờ nồng độ cao Catalase không phân hủy được hydroperoxid hữu cơ và hydroperoxid vô cơ ở nông độ thấp vì eazym này chỉ được hoạt hóa khi hydroperoxid có nồng độ cao

ono, SE 2mo¿O,

¢ Glutathion peroxidase (GPx — EC.1.11.1.9)

Glurathion peroxidase (GPx) xtc téc phan tag loai bd cdc peroxid hitu co va H,O, cé ndag dd thap:

2GSH+ROOH —> _GPX, qssG+ROH+ HO

( GSH là gudathion dạng khử, GSSG là glutathion dang oxy hda, ROOH 1a peroxid hữu cơ hoặc vô cơ)

GPx là một tetramer, có 4 tiểu đơn vị giống nhau với trọng lượng phân tử 80.000 và đòi hỏi selenocystein ở 4 vị trí xúc tác của nó Người ra cho

rằng có sự tồn tại glurathion peroxidase không phụ thuộc selen, enzym này

xúc rác sự khử các peroxid hữu cơ khi có mặt glutathion, trọng lượng phân tử

là 45.000 với 2 tiếu đơn vị, chứa đựng bốn cystein; GPx không phụ thuộc

selen có hoạt rính giống glurathion-S-transferase (EC.2.5.1.18) liên quan đến

việc giải độc tính của những xenobiotie

Hệ thống glutathion peroxidase bao gồm 3 enzym: glurathion

peroxidase (GPx), glutathion reductase (GR) va glucose 6- phosphat

Trang 24

me A,

T he Loo: " xa 6P

H

LH Glucose

LH: Acid béo khéng bio héa nhiéu not dét - LOOH:peroaid va Lcé thể là phân gót hữu cơ hoặc có thể là H trong H,O, - LOH: Acid béo hydroxy (hay H,O) - 6PG: 6 phos phogluconat - GOP: Glucose 6 phos phai

Hình I.2-fogt động của hệ thống chốngoxy hóa Giutathion peroxidase

1.2.2.2 Hệ thống chống oxy hóa có bẵn chát không enzym [9,21]

Gồm 3 nhóm chính là nhóm các polyphenol, nhóm các thiol và nhóm

các phối tử của sắt hay đồng Chúng hoặc có sẵn trong cơ thể hoặc được đưa

1ừ ngoài vào theo dạng thức ăn, nước uống

# Nhám các polyphenol

Gồm viamin A, viamin E, coenzym Q, vitamin C va cdc

bioflavonoid Các polyphenol có khả năng biến các gốc tự do hoạt động

thành các gốc tro

Các flavonoid rất phổ biến trong thực vật, có bản chất là polyphenol Những flavonoid eó hoạt tính sinh học được gọi là bioflavonoid có tác dụng chống oxy hóa, được sử dụng nhiều trong y học để điều trị một số bệnh có liên quan đến gốc tự do như viêm mạn tính, bệnh tỉm mạch

Vitamin E là chất chống oxy hóa hòa tan trong lipid, phân phối khấp

trong tế bào, được coi như chất bảo vệ màng sinh học vì nó ngăn cản quá

trình oxy hóa các acid béo không bão hòa của mang Vitamin E có vai trò

Trang 25

24

peroxi héa lipid, có thể phản ứng với anionsuperoxid và oxy đơn bội Một điều đáng chú ý là vitamin E chỉ phát huy tác dụng khi có selen

Vitamin C có vai trò đưa viamin E từ dạng oxy hóa vẻ dạng khử, loại bỏ hydroperoxid khi không có mặt ion sắt hoặc ion sắt đã được chelat hóa

hồn tồn [9, 20, 21] ¢ Nhém céc thiol

Các thiol có tính khử mạnh nên chúng có thể cùng vitamin C chuyển vitamin E từ dạng oxy hóa vẻ dạng khử, phục hồi chức năng đập tắt quá trình peroxi hóa lipid của viamin E

Có khả năng trung hòa các gốc rự do như gốc HO”, tạo gốc thiyÌ: RSH + HO" > RS +H,0

2RS > RSSR

Giutathion là thiol có vai trò rất quan trọng trong cơ thé Cơ chế hoạt động của glurathion được giả thiết là có liên quan đến phản ứng chuyển một

nguyên tử H tới các gốc tự do, hình thành gốc GS” Gốc này lại liên kết với

một gốc GS` khác tạo ra glurathion dạng oxy hóa GSSG

Một cơ chế hoạt động khác của glurathion là khử các peroxid của các acid béo không bão hòa thành những hợp chất hydroxy mang ít độc tính hơn

và có thể bị chuyển hóa tiếp bởi quá trình ÿ oxy hóa

ROOH +2GSH chy GSSG +ROH + H,O

Glutathion con cé vai tr wong su tii sinh vitamin E dang oxy hóa Tém lại glutathion là một chất khử tuyệt vời, khử hoạt tính của các gốc tự do

và các peroxid, do đó ức chế POL ở màng trong ry thể [9, 21]

@Nhóm các phối tử của sắt và đồng

Trang 26

0,” + HO, > '0,+ HO" +HO

Khi sắt được chelat hố hồn rồn nghĩa là sắt tạo phức đủ sáu liên kết

phối trí (như trong hemoglobin, myoglobin), sắt sẽ không còn khã năng trên

Trong nhóm này có traasferin, lactoferin, ceruloplasmin[9, 21]

1.3 ĐÁI THÁO ĐƯỜNG VỚI RỐI LOẠN CHUYỂN HÓA LIPID, HOẠT ĐỘNG

GỐC TỰ DO VA VUA XO DONG MACH:

1 3 1 Đái tháo đường:

ĐTP là một hội chứng rối loạn chuyển hóa với sự tăng glueose máu

do thiếu tuyệt đối hoặc tương đối insulin Sự thiếu hụt insulin ảnh hường tới

chuyển hóa carbohydrat, protein và lipid; gây ra các rối loạn hằng định nội môi nước và điện giải Sự mất bù chuyển hóa cấp tính có thể gây tử vong: rối

loạn chuyển hóa mạn tính gây ra các thay đổi vẻ cấu trúc và chức năng một cách thường xuyên và không thể đảo ngược đối với các tế bào và mô của cơ thé, trong đó hệ thống mạch máu đặc biệt nhạy cảm Sự thay đổi này dẫn đến

các biến chứng mạn tính của bệnh DTD [50, 154]

DTD là một hội chứng bệnh khá phổ biến với tỷ lệ bệnh lưu bành

khoảng 1- 2% ở các nước Tây Âu ĐTĐ có thể xảy ra thứ phát sau các bệnh

lý khác, ví dụ như viêm tụy mạn, phẫu thuật tụy, tăng bài tiết các hormon đối

kháng với insulina (hội chứng Cushing, bệnh ro chỉ ) Tuy nhiên ĐTĐ thứ

phát hiếm gặp Phần lớn các trường hợp ĐTĐ là tiên phát, được phân loại

thành 2 rýp Týp 1 hay DTD phụ thuộc insulin (insulia dependent diabetes mellitus - IDDM) la dang ĐTĐ nặng, có biến chứng nhiễm ceton nếu không

được điều trị, thường gặp ở trẻ em và người trẻ Bệnh thường khởi phát một

cách cấp tính, nông độ insulin máu giảm hoặc không có do sự phá hủy các tế

bao B cha dao tuy IDDM ít có tính chất gia đình nhưng có mối liên quan rất

Trang 27

26

Typ 2 hay DTD khong phu thude insulin ( oon insulin dependent diabetes

mellirus- NIDDM) thường xảy ra ờ những người trên 40 tuổi có béo phì,

bệnh khởi phát từ từ , hiếm khi gặp nhiễm ceton Mặc dù bệnh biểu hiện

không trầm trọng, nhưng các bệnh nhân ĐTĐ týp 2 có nguy cơ cao phát triển

các biến chứng mạch máu lớn và vi mạch Nông dé insulin máu ở bệnh nhân

ĐTP rýp 2 phần lớn là bình thường, ở một số bệnh nhân có thể tăng Ở đa số

các bệnh nhân ĐTĐ týp 2, tế bào B tiểu đảo không nhạy cảm với glucose,

dao tdi su bài tiết insulin suy giảm Với các trường hợp khác, đặc biệt người

béo phì, nông độ insulin tăng và có sự không nhạy cảm của các mô với

iasulia (kháng iasulia) [50, 154]

1.3.2- Rối loạn chuyển hóa lipkl trong đái tháo đường

Các đặc điểm chung nhất của rối loạn chuyển hóa lipid trong bệnh

DTD la TG mau răng, HDL- C giảm và xuất hiện các phần tử LDL nặng và

nhò hơn (tỷ trọng tăng và kích thước nhỏ hơn) Những thay đổi này thường kèm theo sự răng nồng độ apo B huyết tương Các rối loạn trên có thể gặp ờ

các bệnh khác và vì vậy không đặc hiệu cho bệnh ĐTĐ Nồng độ LP (a) có

thể tăng trong ĐTĐ, nhưng sự thay đổi LP này không được xem như nằm

trong hội chứng rối loạn chuyển hóa lipid của bệnh lý ĐTĐ [24, 101]

Xu hướng xuất hiện các phần tử VLDL nhò, nặng và tăng IDL, phân

bố lại các LDL về phía những phân tử loại nhỏ và nặng hơn, sự thay đổi đáng kế thành phân HDL đã được ghi nhận Sự thay đổi thành phần lipid huyết

tương xảy ra trong mỗi loại LP với sự tăng tương đối tỷ lệ cholesterol tự do /

phospholipid Hơn nữa, người ta đã quan sát thấy sự tăng mức độ glycosyÌ

Trang 28

Như vậy, rối loạn chuyển hóa lipid trong ĐTĐ bao gồm cả sự thay đổi chất

lượng và số lượng lipid và lipoprotein huyét tuong [24, 101]

@Kối loạn chuyển hóa lipid trong đái tháo đường típ L

- Tăng TG huyết rương: bất thường phổ biến nhất ờ bệnh nhân ĐTĐ týp 1 là tăng TG huyết rương do tăng VLDL Rối loạn này sẽ mất đi khi kiểm soát được glucose máu Tăng VLDL có thể là kết quả của sự răng bài tiết VLDL

hoặc giảm chuyển hóa VLDL do giảm lipoprorein lipase

- Giảm HDL-C huyết tương: thường gặp phối hợp với tăng TŒ máu

- LDL-C huyết tương: trong giới hạn bình thường ờ bệnh nhân ĐTĐ týp1

Như vậy với ĐTĐ rýp1, bất thường chính của LP huyết tương là sự tăng nồng

độ VLDL huyết tương và bất thường này sẽ được cải thiện khi việc điều trị cùng với sự kiểm soát glucose máu một cách chặt chế được thiết lập

#@kKối loạn chuyển hóa lipid trong đái tháo đường týp 2

Rối loạn chuyển hóa lipid trong ĐTĐ rýp 2 phổ biến hơn trong ĐTĐ

týp1 Ảnh hưởng cia DTD týp 2 trên chuyển hóa lipid và lipoprotein phức tạp hơn nhiều vì nó chịu tác động của nhiêu yếu tố: tình trạng kháng insulin, béo phì, phương pháp điều tị, mức độ kiếm soát glueose máu, sử dụng thuốc điều trị các rối loạn phối hợp và các biến chứng của bệnh ĐTĐ Rối

loạn chuyển hóa lipid đặc trưng ở ĐTĐ týp 2 là tăng TG và giảm HDL-C

trong huyết tuong

Tang TG và giảm HDL-C huyết tương: TG ting ở bệnh nhân ĐTĐ týp

2 có glueose máu từ tăng nhẹ đến tăng vừa phải là do răng bài tiết VLDL

Trong trường hợp ĐTĐ týp 2 không được điều tị sẽ có glucose máu tăng

nhiều, có suy giảm insulia kèm kháng insulin; tăng TG máu ở những trường

hợp này còn do sự giảm hoạt tính lipoprotein lipase HDL-C huyết tương có

Trang 29

28

Rối loạn chuyển hóa lipid ở bệnh nhân ĐTĐ týp 2 có thể vẫn kéo dai mặc dù có sự điều wi gidm glucose mau thích hợp Rối loạn chuyển hớa lipid tổn tại dai dẳng ở bệnh nhân ĐTĐ týp 2 được xem xét cùng với các rối loạn tương tự xảy ra ờ những bệnh nhân không bị ĐTĐ gợi ý rằng rối loạn chuyển hóa lipid trong ĐTĐ rýp 2 không phải chỉ do ĐTĐ mà còn do các yếu tố

khác có thể có trước và góp phần gây ra ĐTĐ như béo phì trung tam, hội

chứng kháng insulin

LDL-C huyét tương thường tương đối thấp ở bệnh nhân ĐTĐ týp 2

Cần lưu ý là các phương pháp thông thường định lượng LDL-C thường bao

gồm cả IDL và khi TDL được đo riêng rẽ thì LDL-C thật sự bình thường trong ĐTĐ rýp 2 Tuy nhiên sự bất thường của LDL xảy ra phổ biến ở bệnh nhân ĐTĐ týp 2 là sự xuất hiện LDL nhỏ và nặng Cơ chế làm xuất hiện các phân tử T.DL này có liên quan đến hoạt tính lipase gan - enzym chuyển LDL

thành phần tử nhỏ và nặng hơn Hoạt rính lipase gan tăng trong ĐTĐ týp 2

Mặc dù nồng độ LDL- C bình thường trong DTD typ 2, cdc nghiên cứu động

học cho thấy có sự rối loạn trong chuyển hóa LDL Ở bệnh nhân ĐTĐ týp 2

nhẹ không được điều trị, tốc độ tổng hợp và thodi hod LDL răng song song

nên nông độ LDL- C bình thường Ở những bệnh nhân ĐTĐ rýp 2 có glucose

máu tăng vừa phải, không được điều trị hoặc việc kiểm soát glucose máu kém, chuyển hóa LDL có thể giảm và dẫn tới tăng nhẹ LDL-C huyết tương

Vì vậy, mặc dù nồng độ LDL-C không bị ảnh hường nhiễu trong DTD typ 2

nhưng chuyển hóa của chúng không bình thường và tồn tại các phần tử LDL

với kích thước nhò và nặng hơn - đó là nguy cơ gây VXĐÐM

1.3.3- Gốc tự do và đái tháo đường [128]:

Một số tác nhân gây ĐTĐ (ví dụ alloxan) dường như tác động bằng cách tạo các stress oxy hóa trên tế bào B của đảo tuy Người ra không chắc

Trang 30

trường hợp di truyền trội đơn gen nhiễm sắc thể thân Các gen tổn thương ở

những bệnh nhân này bao gồm gen mã enzym glucokinase và sao chép yếu

16 gea HNF-1e (hepatic nuclear factor 1œ) HNE-1œ điều hòa không chỉ sự

sao chép gen ở gan mà cả sự sao chép gen insulin ở tế bào của tuy đảo (ít

nhất là ờ chuột)

Trong một vài động vật xuất hiện ĐTĐ một cách ngấu nhiên như

chuột không béo phì bị ĐTĐ và chuột sinh sản sinh học, dường như chúng

bị các tấn công tự miễn trên tế bào ÿ Điều này gợi ý rằng các dạng oxy hoạt

động (bao gồm cả ONOO) được tạo thành bởi sự tấn công của các đại thực bào liên quan tới sự tiêu hủy tế bào B [142] Thật vậy vitamin E, SOD và

desferrioxamine được thông báo là làm chậm sự khởi phát ĐTĐ ở chuột

không béo phì bị ĐTĐ [31] DTD typ 1 ở người cũng liên quan tới các hiện

tượng tự miễn, một kháng nguyên tự thân có thể là enzym glutamat

decarboxylase Một số tác nhân nhiễm khuẩn có thể khỏi phát ĐTĐ bằng

cách gây đáp ứng vật chủ dẫn đến tồn thương mô quá mức

Các bệnh nhân ĐT thường được cho là chịu tác động của các stress

oxy hóa Mối liên quan giữa ĐTĐ và các stress oxy hóa đã được bàn luận rất

nhiều từ nhiều năm nay; nhưng các thực nghiệm nghiêm túc để làm sáng 16

tâm quan trọng của vấn đề này vấn còn để ngò Các lipid peroxid huyết

tương (ngay cả khi đã hiệu chỉnh theo mức tăng của lipid huyết tương) dường như cao hơn bình thường ở bệnh nhân ĐTĐ, mặc dù điều này chưa được sự

nhất trí Nông độ F2- isoprostan và lipid peroxid là các chỉ điểm sinh học tin

cậy hơn cũng tăng cao Một quan sát thú vị nhận thấy rằng chuột gây ĐTĐ

thực nghiệm bằng streptozotocin hấp thụ các peroxid từ chất béo bị oxy hóa

Trang 31

30 DTD thực nghiệm [135]

Nồng độ viamia C huyết tương ở bệnh nhân ĐTĐ là thấp hơn bình thường [73], trên thuc té su tang glucose mau ức chế hấp thu ascorbat và

dehydroascorbar vào tế bào [152] Nồng độ GSH hồng câu cũng dưới mức

bình thường nhẹ ở bệnh nhân ĐTĐ Vai trò của stress oxy hóa trong bệnh

sinh ĐTĐ không chắc chắn, nhưng thường được

mức tăng glucose máu Có ý kiến cho rằng tăng lipid huyết rương sẽ dẫn tới

thiết là có liên quan tới

tăng sự oxy hóa lipid (ví dụ bằng cách -oxy hóa trong peroxisom, sinh ra H,O,) và sự giảm hoạt động của hệ thống phòng vệ chống oxy hóa ở những mức độ khác nhau

Người mẹ bị ĐTĐ làm răng tỷ lệ bất thường thai nhỉ và các stress oxy hóa được cho là cũng đóng vai trò trong quá trình hình thành các bất thường này Phôi chuột chuyển gen tăng tổng hợp CuZn-SOD biểu hiện ít bất thuờng hơn phôi chuột không chuyển gen trên khi đưa vào chuột mẹ gây tăng

glucose mdu bang streptozotocin

1.3.4- Đái tháo đường và vữa xơ động mạch [24, 101]

Rối loạn chuyển hóa lipid trong ĐTĐ có đặc điểm là tăng các LP chứa

apo B gây VXĐM, xuất hiện các LDL nhỏ, nặng và giảm HDL Vì LDL nhỏ

và nặng có thể đi vào khoang dưới nội mạc một cách dễ dàng, tăng gắn với proteoglycan va lam ting khả năng bị oxy hóa nên các phân tử LDL bị oxy hóa răng lên trong ĐTĐ và hội chứng kháng insulin Nông độ HDL giảm

trong ĐTĐ cùng với sự bất thường thành phần cấu tạo có thé ảnh hưởng đến

chức năng của nó, làm giảm quá trình vận chuyển cholesterol trờ vẻ, do đó tăng ứ đọng lipid ờ mạch máu Tất cả các loại LP đều bị glyeo-hóa răng

trong ĐTĐ LDL glyco-hóa gắn kém với receptor của LDL, do đó kéo dai

thời gian lưu hành trong máu của LDL và có thể trong cả khoang ngoài tế

bào của thành động mạch, tại đó LDL bị các biến đổi oxy hóa LDL glyco- hóa tăng nhạy cảm với tác nhân oxy hóa và làm dễ dàng việc chuyển CE cho

Trang 32

vi receptor đặc hiệu trên tế bào thành động mạch dẫn đến tăng stress oxy

hóa trong những tế bào này và sự tổng hợp các phân tử kết dính tế bào nội

mạc, hóa ứng động các monocyte, giải phóng các eytokin và các yếu tố tăng

trường Vì vậy các con đường oxy hóa, glyco oxy hóa tăng trong ĐTĐ là có

khả năng làm tăng quá trình VXĐÐM

1.4 CÁC MO HINH GAY DAITHAO DUONG THUC NGHIEM

Mô hình ĐTĐ thực nghiệm trên động vật giúp chúng ra nghiên cứu cơ

chế bệnh sinh, bệnh nguyên của bệnh ĐTĐ ở người, đánh giá tác dụng dược

lý của các loại thuốc điều trị cũng như tìm hiểu cơ chế tác dụng của chúng Trên thực nghiệm người ra đã tạo ra các mô hình ĐTĐ mô phòng hai týp

ĐTĐ chính ở người

1.4.1 Mô hình gây đái tháo đường thực nghiệm týp 1

ĐTP týp1 ở người là có đặc điểm là thiếu hụt tuyệt đối insulin do tổn thương tế bào B của đảo tuy Để gây mô hình ĐTĐ týp 1 ở động vật thực

nghiệm, người ra sử dụng các chất gây phá huỷ tế bào tuyến tuy Hai thuốc thường được sử dụng là alloxan va streptozotocin (STZ) Alloxan được sử

dụng lần đầu tiên năm 1943 [56], còn STZ được Rakieren và cộng sự dùng gay DTD lan đầu tiên năm 1963 [80] Do hoạt rính của alloxan không ổn

định, hiệu quả gây ĐTĐ không cao nên trong những năm gân đây các nhà

khoa học trên thế giới thường sử dụng STZ để gây ĐTĐ týp 1 ở động vật

thực nghiệm [26, 54, 56]

Ngoài ra, ĐTĐ týp 1 tự phát cũng xuất hiện ở một số loài động vật như

chuột nhắt ĐTĐ không béo phì (non obese diaberic mouse), chuột cống BB

Trang 33

32

1.4.2 Mô hình gây đái tháo đường thực nghiệm týp 2

Một số loài động vật, đặc biệt loài gặm nhấm xuất hiện ĐTĐ rýp 2 tự

phát Hiện nay, qua chọn lọc và lai tạo đã xuất hiện nhiều động vật ĐTĐ týp

2 do gen như chuột cống GK (Gotokakizaki) , chuột cống ZDE (Zucker

Diabetic Earry), chuột chất KK-Ay, chuột nhất Db/Db

Ngoài các chủng động vật ĐTĐ trên, gần đây người ra còn ding STZ

để gây ĐTĐ týp 2: tiêm STZ cho chuột mới sinh, tiêm STZ kết hợp với

aieotinamid cho chuột, tiêm STZ cho chuột ăn chế độ giàu lipid [124] 1.4.3 Streptozotocin và các mô hình gây đái tháo đường thực nghiệm

STZ có tên hoá học là 2-deoxy-2(3-methyl-3-nitrosoureido)-D-

glucopyranose, được phân lập lần đầu tiên năm 1960 từ Streptomyces

achromogenes [26] Đày là kháng sinh có đặc tính tiêu u, sinh u và gây DTD [26, 80] Tác dụng gây ĐTĐ của STZ là do sự phá huỷ chọn lọc tế bào bài tiết insulin của tuy (tế bào ) đuaod và cộng sự,1967), có thể do biến đổi lớp

ngoài của màng tế bào Để gây ĐTĐ, có thể dùng STZ một liều cao duy nhất

(đối với chuột cống, chuột nhắt, chó, chuột lang, khỉ) (Brosky và

Logothetopoulos, 1969; Ganda và cộng sự, 1976; Levine và cộng sự, 1980)

hoặc nhiều liêu thấp (subdiabetogenie doses)(với chuột nhất) (Like và

Rossini, 1976) Phương pháp ding STZ liều cao một lần duy nhất gây tăng

glucose máu sớm, từ 48-72 giờ sau tiêm STZ, có thể do tác dụng phá huỷ ồ

ạt các tế bào đảo tuy [80] Trong khi đó, dùng STZ nhiều liều thấp thì sự tăng glucose máu xuất hiện chậm, từ từ và có sự thâm nhiễm tế bào lympho

ởtiểu đão tuy (viêm đảo tuy)|26] Vì vậy, phương pháp dùng STZ nhiều liều

thấp dường như có cơ chế bệnh sinh giống ĐTĐ rýp 1 ở người hơn

"Trong những năm gần đây, STZ còn được các nhà khoa học trên thế

giới sử dụng gây ĐTĐ týp 2 STZ tiêm cho chuột mới sinh gây ĐTĐ không

Trang 34

với độc tính của STZ trên tế bào của đảo tuy, ndm 1998, Pellegrino va cong

sự đã tạo mô hình ĐTĐ týp 2_ở chuột cống trưởng thành: chuột cống được

tiêm đồng thời STZ và nicotinamid xuất hiện ĐTĐ rýp 2 , mô hình ĐTĐ thực

nghiệm này có nhiều đặc điểm giống với ĐTĐ týp 2 ở người Nam 2000,

Reed MJ va cong su da tạo ra mô hình động vật ĐTĐ rýp 2 ở chuột cống

bằng cách tiêm STZ cho chuột được nuôi dưỡng bằng chế độ ăn giàu chất

béo Theo các tác giả, mô hình ĐTĐ týp 2 mới này tái rạo bệnh sử và các đặc

điểm chuyển hoá của ĐTĐ týp 2 ở người, thích hợp cho các nghiên cứu dược

lý [124]

1 5 CHÈ XANH YÀ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA CHÈ XANH

1.5 1 Chè xanh và một số đặc tính của chè xanh

Cây chè xanh có tên khoa học la Camellia sinensis O Kuntze thudc ho

TTheaceae, có nguồn gốc từ Trung Quốc, Ấn Độ, Myanma Cây chè thích hợp

với khí hậu nóng ẩm vùng cận nhiệt đối, được trồng rộng rãi từ vùng khí hậu

nhiệt đới tới vùng có khí hậu On doi 6 Chau Á [38, 109, 110] Từ xưa, nhiều nhà Y học Trung Quốc nhận thấy nước chè giúp tiêu hoá thức ăn có nhiều chất béo, mùa hè uống nước chè cảm thấy khoan khoái dễ chịu, buổi sáng uống nước chè thấy sạch miệng và minh mẫn hơn, nước chè có rác dụng giữ cho vóc dáng thon thả, giảm béo, giảm viêm, giải độc, lợi tiểu Chè có mặt trong một số bài thuốc Đông y của Trung Quốc dùng để chữa kiết ly, mưng

mủ Trong thế kỷ thứ tắm, chè xanh được chuyển từ Trung Quốc đến Nhật

Bản để dùng làm thuốc chữa bệnh Ngày nay người Nhật gọi chè là thứ nước uống của thời đại nguyên tử do khả năng hấp thụ và thải chất phóng xạ [127] Như vay, cây chè đã trở nên gân gũi với cuộc sống của con người từ thời xa xưa trong lịch sử loài người Đâu tiên con người dùng lá chè để làm

Trang 35

34

uống được ưa chuộng ở rất nhiều nơi trên thế giới Hiện nay, cây chè được

trồng ờ hơn 20 nước thuộc châu Á, châu Phi và Nam Mỹ [109, 110] Ở Việt

Nam, cây chè xanh được trồng rộng rãi trên khắp mọi miễn, được sử dụng

như một thứ đồ uống không thể thiếu trong nhiều gia đình và được xuất khẩu

đi nhiều nước trên thế giới [2] Nước chè xanh có mùi vị đặc biệt đã trở thành

phong cách ẩm thực đặc trưng của người Việt Nam, Trung Quốc, Nhật Bản

[2, 38]

Do những đặc tính ưu việt trên, cây chè được con người quan tâm

nghiên cứu vẻ đặc điểm hình thái, phương thức canh tác, cách chế biến,

cũng như về thành phần hoá học, khả năng hấp thu và các rác dụng dược lý

trong nhiều thế kỷ qua [38, 39, 143]

Chè xanh có hai loài C.assamiea và C.siaensis [38, 109, 110]

+ Camellia assamica: lá to ( 16-19 cm x 7-9 cm), thân cao

+ Camellia sinensis: lá nhò (5,5- 6,5em x 2,2-2,4em), than là loại cây bui ram

Các nhà khoa học đã xác định được chromosome của hai loài chè trên là

giống nhau ( 2n =30) [38, 88] Vì vậy việc lai rạo để có nhiều giống chè cho

năng suất cao, chất lượng tốt đã được thực hiện [64, 110] Việt Nam có nhiều

giống chè; phù hợp với điều kiện khí hậu, đất đai canh tác của từng vùng [2]-

Chè xanh được thu hái vào buổi sáng được đánh giá là có chất lượng tốt hơn

buổi chiêu, thu hái vào mùa xuân tốt hơn mùa thu và các mùa khác [38]

Chè xanh thu hái về thường được chế biến trước khi sử dụng Sự chuyển hóa ranin trong lá chè không xảy ra dưới tác dụng của vi sinh vật mà được

thực biện với sự có mặt của các enzym polyphenol oxidase có trong lá chè Dựa vào mức độ lên men dưới tác dụng của các enzym, chè được phân loại thành chè xanh (không lên men), chè oo- long (lên men chưa hoàn toàn) và

chè đen (lên men hoàn roàn ) [38, 114, 143, 145] Vì vậy trong trường hợp

Trang 36

-100°C để các enzym chứa đựng trong nước chè, đặc biệt là polyphenol

oxidase mất hoạt tính [62, 114]

1á chè chứa nhiều các thành phân hoá học bao gồm: polyphenol, cafein,

protein, acid amin, carbohydrat, viramin và các yếu tố vi lượng Trong đó

các thành phân chiếm tỷ lệ nhiều nhất là carbohydrat (bao gồm ca cellulose,

amylose) và protein, hầu như không tan trong nước nóng; các thành phần có

trọng lượng tương đối nhỏ hoà tan được trong nước nóng rạo nên hương vị

thơm ngon của nước chè là polyphenol, cafeine và một số acid amin; tỷ lệ

các thành phần này ảnh hưởng sâu sắc đến hương vị của nước chè [38]

Một thành phần quan trọng của lá chè xanh là polyphenol, chiém

khoảng 6-16% trọng lượng khô của lá chè, chất này được chiết xuất khi ngâm chè trong nước nóng hoặc chiết xuất với ethyl acetar [ 1 14]

Polyphenel chè có vị đắng và hơi chua, hấp thụ qua miêm mạc ruột non

một cách dễ dàng Trong vòng 60 phút sau khi uống nước chè xanh, người ra

đã có thể tìm thấy polyphenol của chè trong máu và nồng độ đạt cao nhất

khoảng 1-2 giờ sau đó Các công trình nghiên cứu vẻ polyphenol chè chưa phát hiện thấy bất cứ dấu hiệu độc nào của chúng Theo công bố của công ty Taiyo Kagaku (sin xuất SUNPHENOL® 60% polyphenol), liêu chết của polyphenol được xác định là 3,09g/kg chuột nhất cái /ngày và 5,0g/kg chuột

nhắt đực/ngày [143]

Trang 37

36

(+ Gallocatechin gallate [(-}-GCg]

(-)- Epigallocarechin gallate[(-)-EGCg]

"Trong các thành phần trên hàm lượng (-)-ECg và(-)-EGCg là cao nhất [114] 1.5 2 Một số nghiên cứu vẻ tác dụng sinh học của polyphenol chè xanh

Gân đây, các nhà khoa học tập trung nghiên cứu nhiều vẻ tác dụng phòng bệnh cho người lớn tuổi bằng cách sử dụng polyphenol chè đã loại bò caffein và các chất khác Cho đến nay, nhiều kết quả nghiên cứu ở nước ngoài về rác dụng của chè xanh đã được công bố Một số thành phần hoá học của chè xanh (polyphenol) được coi là chất thu dọn gốc tự do và hiện nay đã

thu hút sự chú ý của nhiều nhà nghiên cứu [109, 114] Cơ chế chống gốc tự

do của các cateehin chè là cơ chế chống oxy bod chung cia cdc polyphenol, đó là khi kết hợp với gốc tự do các eatechin chuyển từ dạng khử sang dạng

oxy hoá và đồng hời các gốc tự do bị mất hoạt tính [21, 74, 93, 96, 103]

Polyphenol chè xanh được sử dụng rộng rãi như một chất chống oxy

hoá tự nhiên để phòng ngừa sự oxy hoá của dầu ăn hoặc mất màu của thức ăn có màu đò Người ta cũng tìm thấy nhiều đặc tính hoá sinh có lợi của

polyphenol chè như ngăn cản sự đột biến của vi khuẩn, ngăn cần sự sao chép

ngược của HIV, tác dụng chống sâu răng, hoạt động chống virus, rác dụng

phòng bệnh ung thư [27, 36, 41, 75, 78, 86, 111, 129, 130, 150, 151]

Sano và cộng sự đã xác định rằng ở nhóm được uống polyphenol chè „

mức độ peroxy hoá trong huyết thanh và ở các mô đều thấp hơn một cách có

ý nghĩa so với nhóm chứng [132] Nhiều nhà nghiên cứu khác cho thấy polyphenol chè hạn chế sự peroxy hoá lipid ở màng hồng cầu và trong huyết thanh của động vật thí nghiệm [101, 112] Polyphenol được đánh giá là có tác dụng chống oxy hoá mạnh hơn œ- Toeopherol [63] Trong các loại catechin của polyphenol chè, EGCg có tác dụng chống oxy hoá mạnh nhất ,

tiếp theo là ECg, EGC, EC [27, 78]

Trang 38

gen của chúng [127, 150] EGCg chè xanh đã ngăn cản sự sinh ung thư và

sự tiến triển của ung thư qua các thử nghiệm trên động vật [41, 52, 86, 162]

Tác dụng bảo vệ của chè xanh trong phòng chống bệnh tỉm mạch cũng được

nghiên cứu trên động vật [37, 68, 163] Sự hấp thu chất chiết chè xanh ở

chuột đã làm giảm một cách có ý nghĩa nồng độ cholesterol, triglycerid

huyết thanh, giảm nồng độ VLDL- C và tỷ lệ LDL- C/HDC- C trong huyết thanh [37, 107] Chè xanh ngăn cản tế bào nội mạc động mach oxy hod LDL

[160] Tăng mức tiêu thụ chè xanh sẽ làm giảm nông độ TC, TG, VLDL -C,

LDL-C va lam tang nồng độ HDL-C trong huyết thanh [94, 127]

Ở Việt Nam , chưa có nhiều nghiên cứu về chè xanh và polyphenol

chè xanh Nguyễn Liên và cộng sự nghiên cứu in vi#ø vẻ tác dụng chống

oxy hoá của một số cây thuốc Việt Nam cho thấy tác dụng chống oxy hoá của chè xanh là cao hơn lá chè khô „ lá chay, hà thủ ô [16] Nguyễn Thanh

Dương và cộng sự đã xác định được tác dụng chống phóng xạ và làm giảm

cholesterol máu của chè xanh ở chuột thực nghiệm [5] Trần Thị Hương cho

thấy polyphenol chè xanh có tác dụng làm giảm rối loạn chuyển hóa lipid thể

hiện ở sự cải thiện các chỉ số TG, TC, LDL-C và giảm hàm lượng MDA

huyết thanh, giảm mức độ VXĐÐĐM ở thò gây tăng cholesterol máu thực

Trang 39

38

Chương II

ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 CHẤT LIỆU YÀ ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU

2.1.1 Ché xanh (Camellia sinensis)

Chè xanh được thu hái vào buổi sáng, những ngày trời nắng tháng 2 và tháng 3 tại khu trồng chè xuất khẩu Hòa Lạc, Hà Tây; dùng lá chè mọc trên

cành trong khoảng 10 cm thân tính từ chỗ ngắt búp chè trở xuống; được chiết

suất theo qui rrình

2.1.2 Đối tượng thực nghiệm

Chuột cống trắng, cả hai giống, chủng Ratus noryegicus, 2 rháng tuổi, cân nặng 100- 140 gam Chuột được nuôi tại phòng nuôi súc vật thí nghiệm,

Bộ mơn Hố- Hố sinh, Đại học Y Hà Nội,1 con/lchuông Chuột được ăn

uống đầy đủ theo nhu cầu thực nghiệm và thức ăn được chuẩn bị hàng ngày 2.1.3 Hóa chất - Ethyl acetat tinh khiết (Merck) - Heparin (Merek) - Cholesterol tinh khiét (Merck) - Viamin E

- Các que thử SureSiepPro (Ionhson & Jonhson) định lượng glucose máu

- Kir định lượng các thông số lipid máu (TG, TC, HDL- C, LDL- C) của hãng Biorex Mannheim (CHLB Đức) và hãng Human

- Ki định lượng hoạt độ các enzym chống oxy hod (SOD, GPx), tang thai

chống oxy hoá (TAS) huyết tương và Hemoglobia (Hb) máu của hãng

Randox

- Thiobarbituric acid

Trang 40

nghiệm trên chuột

2.1.4 Trang thiết bị

- Máy cất quay chân không của hãng Buchi (Thụy Sỉ)

- Máy ly tâm lạnh Beckman- Avanri 30 (Mỹ) - Máy sinh hóa tự động Express Plus (Mỹ)

- Máy One-Touch Profile Meter do hang Tonhson & Tonhsoa sản xuất (Mỹ)

- Quang phổ kế Shimadzu UV- 160 (Nhật Bản)

- Cân phân tích chính xác 1/10 mg (CHLB Đức)

2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.2.1 Chiết xuất polyphenol chè xanh (theo Đặng Ngọc Dung và cs)[4]

Chè xanh sau khi thu hái được rửa sạch, tránh đập nát, để ráo Sau đó

chè được cho vào nước đun sôi theo tỷ lệ 1 kg lá chè/ 3 lít nước Tiếp tuc dua

sôi nhỏ lửa rong 45 phút rồi vớt lá chè Phân nước chè được lọc qua bông

Dịch nước chè đem chiết xuất polyphenol với ethyl acerat và cô đặc bằng

máy cất quay chân không; nhờ đó polyphenol chè được tách riêng và ethyL

acetat được thu hồi Qui trình chiết xuất được trình bày tóm tắt ở sơ đồ 2.1 Lá chè xanh, rươi Ì Đừn sơi trong nước! 45 phút Dịch nước chè Để nguội | Ethyl acetat

Polyphenol tan trong ethyl acetat

Bay hơi dụng môi

| Phun suong

Bot polyphenol ché