2 1 1 Bài thuốc nghiên cứu 32 2 1 2 Hóa chất dùng trong nghiên cứu 33 2 1 3 Dụng cụ và trang thiết bị nghiên cứu 33 2 2 Đối tƣợng nghiên cứu 33 2 3 Địa điểm và thời gian nghiên cứu 34 2 4 Phƣơng pháp[.]
2.1.1 Bài thuốc nghiên cứu 32 2.1.2 Hóa chất dùng nghiên cứu 33 2.1.3 Dụng cụ trang thiết bị nghiên cứu 33 2.2 Đối tƣợng nghiên cứu 33 2.3 Địa điểm thời gian nghiên cứu: 34 2.4 Phƣơng pháp nghiên cứu: 34 2.4.1 Nghiên cứu tác dụng ức chế enzym Acetylcholinesterase in vitro thuốc Minh Não Vintong 34 2.4.2 Đánh giá tác dụng tăng cƣờng khả học tập ghi nhớ thuốc Minh Não Vintong tập mê cung nƣớc 38 2.4.3 Đánh giá tác dụng tăng cƣờng khả học tập ghi nhớ thuốc Minh Não Vintong mơ hình mê lộ nhiều chữ T 39 2.5 Phƣơng pháp xử lý số liệu 40 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ 41 3.1 Đánh giá tác dụng ức chế emzym Acetylcholinesterase thuốc Minh não Vintong 41 3.2 Tác dụng tăng cƣờng khả học tập ghi nhớ thuốc Minh Não Vintong tập mê cung nƣớc 41 3.3 Tác dụng tăng cƣờng khả học tập ghi nhớ thuốc Minh Não Vintong mơ hình mê lộ nhiều chữ T 44 CHƢƠNG 4: BÀN LUẬN 49 4.1 Bàn luận tác dụng ức chế enzym Acetylcholinesterase thuốc Minh Não Vintong .49 4.1.1 Bàn luận phƣơng pháp in vitro 49 4.1.2 Bàn luận kết đánh giá tác dụng ức chế AchE thuốc Minh não Vintong .50 4.2 Bàn luận tác dụng tăng cƣờng khả học tập ghi nhớ thuốc Minh Não Vintong .50 4.2.1 Bàn luận tập mê cung nƣớc 50 4.2.2 Bàn luận mơ hình mê lộ nhiều chữ T .53 4.2.3 Bàn luận thuốc Minh não Vintong 54 KẾT LUẬN 58 KIẾN NGHỊ .59 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Viết tắt Tiếng Việt Tiếng Anh AD Bệnh Alzheimer Alzheimer’s disease ACh Acetylcholine AChE Acetylcholinesterase ATCI Acetylthiocholin iodid Aβ Mảng beta amyloid ChEls Thuốc ức chế Acetylcholinesterase DTNB Cholinesterase inhibitors 5,5‟ - dithiobis - nitrobenzoic acid IC50 Nồng độ ức chế 50% đối tượng thử Half maximal inhibitory concentration MWM Mê cung nước Morris Morris water maze MTM Mơ hình mê lộ nhiều chữ T Multiple T maze NMDA RNSG N-Methyl-D-Aspartate Flavonol Glycoside phân lập từ Radix Notoginseng flavonol rễ Tam thất glycoside SSTT Sa sút trí tuệ Dementia WHO Tổ chức Y tế Thế giới World Health Organization DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Biểu lâm sàng điển hình bệnh Alzheimer phân loại theo mức độ nặng vừa nhẹ Bảng 1.2 Nhóm thuốc ức chế Acetylcholinesterase 13 Bảng 2.1 Thành phần thuốc Minh não Vintong 32 Bảng 3.1 Giá trị IC50 thuốc Minh não Vingtong Berberin clorid 41 Bảng 3.2 Ảnh hưởng thuốc Minh não Vintong đến thời gian chuột 42 tìm thấy bến đỗ Bảng 3.3 Ảnh hưởng thuốc Minh não Vintong đến quãng đường 43 chuột tìm thấy bến đỗ Bảng 3.4 Ảnh hưởng thuốc Minh não Vintong đến tỉ lệ phần trăm 44 thời gian chuột bơi 1/4 bể trước đặt bến đỗ (ngày 6) Bảng 3.5 Ảnh hưởng thuốc Minh não Vintong đến thời gian chuột 45 tìm thấy khoang đích Bảng 3.6 Ảnh hưởng thuốc Minh não Vintong đến quãng đường 46 tìm thấy khoang đích Bảng 3.7 Ảnh hưởng thuốc Minh não Vintong đến thời gian tìm 47 thấy khoang đích ngày Bảng 3.8 Ảnh hưởng thuốc Minh não Vintong đến quãng đường 48 tìm thấy khoang đích ngày DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Hình ảnh não người bình thường não người bị bệnh Alzheimer Hình 1.2 Đám rối Protein TAU (tangle of TAU protein) 10 Hình 1.3 Mảng protein dạng bột Amyloid bám quanh tế bào thần 11 kinh Hình 1.4 Cấu tạo tác dụng enzym Acetylcholinesterase 11 Hình 1.5 Cấu tạo mơ hình mê cung nước (Morris water maze) 27 Hình 1.6 Cấu tạo mơ hình mê lộ nhiều chữ T (Multiple T maze) 28 Hình 2.1 Chuột nhắt trắng dịng Swiss trưởng thành dùng nghiên 33 cứu Hình 2.2 Sơ đồ tóm tắt nội dung nghiên cứu 34 Hình 2.3 Quá trình phản ứng diễn phương pháp đo quang sử 35 dụng thuốc thử Ellman Hình 2.4 Sơ đồ quy trình thử nghiệm tác dụng ức chế AchE in vitro 37 ĐẶT VẤN ĐỀ Nằm nhóm bệnh lý thối hóa thần kinh, sa sút trí tuệ (SSTT) nói chung bệnh Alzheimer nói riêng mối quan tâm hàng đầu nhà lão khoa toàn giới Ở người cao tuổi, SSTT gây suy giảm trí nhớ nhiều lĩnh vực nhận thức khác, kèm theo rối loạn hành vi, ảnh hưởng nghiêm trọng đến sinh hoạt hàng ngày chất lượng sống bệnh nhân mà ảnh hưởng đến gia đình tồn xã hội.[1] Suy giảm trí nhớ gây ảnh hưởng lớn đến hiệu chất lượng công việc giảm khả tư duy, tập trung xử lý công việc Chứng hay quên thường dẫn đến nhiều sai sót khơng đáng có, chí gây ảnh hưởng nghiêm trọng đến tính mạng tài sản Bệnh diễn tiến xấu dần người bệnh khả tư tự chăm sóc cá nhân cuối dẫn đến tử vong SSTT gặp nhiều bệnh cảnh khác nhau, nguyên nhân phổ biến bệnh Alzheimer, chiếm 60% - 80% tổng số bệnh nhân SSTT.[2] Ca bệnh Alzheimer mô tả vào năm 1906.[3] Từ đến nay, số lượng ca bệnh Alzheimer báo cáo ngày gia tăng Trung bình sau khoảng năm tỷ lệ SSTT lại tăng gấp đôi quần thể người từ 60 tuổi trở lên.[4] Trên giới có khoảng 47,5 triệu người mắc SSTT có 7,7 triệu ca mắc năm Dự báo đến năm 2030 số bệnh nhân SSTT lên tới 75,6 triệu số tăng lên gấp vào năm 2050 tức khoảng 135,5 triệu người.[5] Hầu hết nghiên cứu tỷ lệ mắc SSTT lấy mốc tuổi từ 50 trở lên, nhiên nghiên cứu lớn cộng đồng SSTT người trẻ (Harvey cs 2003) gợi ý tỷ lệ mắc SSTT tăng theo số mũ ngày trẻ hóa, độ tuổi 30.[1],[6] Cho đến nay, phát triển Y học đại chưa thể tìm ngun nhân xác phương pháp điều trị hoàn toàn cho bệnh này, loại thuốc có tác dụng làm chậm trình tiến triển bệnh hiệu cao bệnh điều trị sớm, giúp cho chất lượng sống bệnh nhân cải thiện hơn.[1] Theo giả thuyết Cholinergic, việc phát sinh bệnh Alzheimer có liên quan đến thiếu hụt chất dẫn truyền thần kinh Acetylcholin(ACh) não tới gần 90% Acetylcholinesterase(AChE) enzym có chức làm ngưng lại hoạt động chất dẫn truyền thần kinh ACh synap thần kinh cholinergic Ở bệnh nhân Alzheimer có suy giảm nồng độ ACh đáng kể Do đó, thuốc ức chế AChE nhằm trì nồng độ ACh đóng vai trị quan trọng việc ngăn chặn tiến triển bệnh Alzheimer nói riêng hội chứng SSTT nói chung.[7] Hiện nay, nhóm thuốc đầu tay điều trị cho bệnh nhân SSTT mức độ vừa nhẹ Rất nhiều chất thuộc nhóm có nguồn gốc từ loại thực vật (Galantamine,…)[1],[8], điều chứng minh thảo dược nguồn chất liệu nghiên cứu hữu ích để tìm chất ức chế AChE Trong năm gần đây, nghiên cứu sàng lọc thuốc, thuốc y học cổ truyền, hay số hợp chất thiên nhiên theo hướng ức chế AChE nhiều nhà khoa học tiếp cận Minh Não Vintong xây dựng dựa thuốc kinh nghiệm PGS.TS Đậu Xuân Cảnh, trình điều trị bệnh nhân với vai trò hỗ trợ điều trị chứng ngủ thiểu tuần hoàn não thuốc cho thấy tác dụng định Bài thuốc gồm có vị thuốc q như: Đơng trùng hạ thảo, Viễn chí, Ý dĩ, Xa tiền, Đinh lăng, Nhân sâm, Hà thủ ô, Xuyên khung, Tam thất Một số vị thuốc thuốc nghiên cứu đơn lẻ phối ngũ thành thuốc có tác dụng điều trị chứng SSTT, có nhiều nghiên cứu theo hướng ức chế AChE cho thấy kết khả quan.[2],[9],[10],[11]… Với thực tế nêu trên, để làm rõ tác dụng thực thuốc tiến hành thực đề tài “Nghiên cứu tác dụng ức chế enzym acetylcholinesterase tác dụng tăng cƣờng khả học tập ghi nhớ thuốc Minh Não Vintong thực nghiệm” với mục tiêu: Đánh giá tác dụng ức chế enzym Acetylcholinesterase in vitro thuốc Minh Não Vintong Đánh giá tác dụng tăng cường khả học tập ghi nhớ thuốc mơ hình mê cung nước (Morris water maze) mơ hình mê lộ nhiều chữ T (Multiple T maze) thuốc Minh Não Vintong CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Hội chứng sa sút trí tuệ theo y học đại 1.1.1 Khái niệm sa sút trí tuệ Sa sút trí tuệ (Dementia) hội chứng nhiều nguyên nhân gây nên, gây suy giảm nhiều khả nhận thức, trí nhớ, gây cản trở hoạt động hàng ngày, công việc quan hệ xã hội Chẩn đoán SSTT dựa vào hỏi bệnh (thường cung cấp người chăm sóc bệnh nhân), khám thực thể đánh giá tình trạng tâm thần.[1] Sa sút trí tuệ bệnh thường gặp người cao tuổi Khoảng 6-10% người 60 tuổi mắc SSTT Tỉ lệ mắc SSTT tăng nhanh, từ 0,2-0,5% tuổi 60, tăng lên 4-11% tuổi 85.[12] Theo số liệu thống kê The World Alzheimer Report 2015, năm 2015 có khoảng 46,8 triệu người bị SSTT, khoảng 60% bệnh Alzheimer sau 20 năm, số người mắc SSTT lại tăng lên gấp đơi Số ca bệnh mắc trung bình ca/ giây.[13] Ở người cao tuổi, trình lão hóa xuất hiện, lão hố hệ thần kinh dẫn tới biến đổi chức thần kinh, tâm lý tâm thần – suy giảm nhận thức Suy giảm nhận thức nhẹ nhóm bệnh phát triển thành SSTT số nguyên nhân bệnh Alzheimer, bệnh mạch máu, q trình lão hố não Từ suy giảm nhận thức phát triển thành sa sút trí tuệ nhanh hay chậm tùy thuộc vào tác nhân gây bệnh Từ năm 1930 đến năm 1950, số bác sĩ tâm thần người Mỹ David Rothschild đứng đầu đối phó với thách thức bệnh SSTT bệnh viện nhà nước cách coi SSTT vấn đề tâm lý xã hội bệnh não.[14],[15] Rothschild người theo ông lập luận việc quan sát mối tương quan không quán biểu lâm sàng chứng SSTT phát bệnh lý tốt giải thích khả bù đắp tổn thương não khác người Nhìn theo cách này, chứng SSTT tuổi tác không kết đơn giản tránh khỏi não suy thoái lão hóa và/hoặc bệnh tật Đó tương tác não bối cảnh tâm lý xã hội mà người già Đối với bác sĩ tâm thần người Mỹ theo định hướng tâm động học, cách tiếp cận lý thuyết thỏa mãn chứng SSTT giải thích biến thiên thường thấy mức độ bệnh lý não tìm thấy khám nghiệm tử thi mức độ SSTT quan sát lâm sàng, cung cấp sở logic để thử can thiệp trị liệu chiến lược phòng ngừa.[15] 1.1.2 Biểu lâm sàng sa sút trí tuệ - Bao có rối loạn nhận thức giảm hoạt động chức - Thường có giảm thị giác khơng gian rối loạn hành vi - Các triệu chứng đặc hiệu thay đổi theo thể bệnh SSTT Giảm trí nhớ: - Giảm khả học lưu giữ thông tin - Giảm khả lấy lại thông tin (không thể nhớ tên, nhớ danh sách từ) - Giảm nhớ kiện cá nhân - Trí nhớ khai báo (ngữ nghĩa) bị nặng trí nhớ thủ tục Giảm ngôn ngữ: - Không nhớ danh sách từ (đặc biệt bệnh Alzheimer) - Khó khăn tìm từ (định danh) - Giảm nói lưu lốt từ - Khơng nói câu phức tạp - Khả hiểu nghe người khác nói cịn tương đối tốt (có thể hiểu hướng dẫn) Giảm thị giác khơng gian: - Giảm nhận biết hình ảnh (khơng nhận khuôn mặt người quen) - Giảm khả định hướng không gian (lạc nơi quen thuộc, khơng vẽ hình theo khơng gian chiều) Giảm chức điều hành: - Giảm khả lên kế hoạch, dự đốn, liên hệ, trừu tượng hóa - Giảm tiếp nhận xử lý nhiều thông tin để đưa định - Giảm chức điều hành thường biểu ghi nhận người thơng minh, có học vấn cao - Giảm rõ chức điều hành thường thấy SSTT thùy trán – thái dương trước xuất suy giảm trí nhớ Giảm hoạt động chức năng: - Thường bắt đầu hoạt động hàng ngày có sử dụng cơng cụ, dụng cụ (quản lý chi tiêu, lái xe, mua bán, làm việc, sử dụng thuốc ) - Giai đoạn muộn có giảm hoạt động hàng ngày (ăn, mặc quần áo, vệ sinh…) - Tần suất kiểu biểu giảm hoạt động chức thay đổi tùy cá nhân thể bệnh - Lưu ý: giai đoạn đầu SSTT khơng có tương quan rõ giảm hoạt động hàng ngày suy giảm nhận thức trắc nghiệm Các rối loạn hành vi: - Hầu gặp thường mục tiêu điều trị - Thay đổi nhân cách xuất sớm: + Thụ động (thờ ơ, cách ly xã hội) + Mất kiềm chế (nói lung tung…) + Tự cho trung tâm (tính trẻ con, thiếu đại lượng) + Kích động, thường gặp thường nặng lên bệnh tiến triển: kích động lời nói, hành động, lang thang… - Trầm cảm: đặc biệt bệnh Alzheimer SSTT mạch máu - Biểu tâm thần: + Hoang tưởng (mất trộm, không chung thủy…) + Rối loạn tiếp nhận: thường ảo giác thị giác, hay gặp SSTT thể Lewy - Rối loạn giấc ngủ: ngủ, rối loạn chu kỳ thức – ngủ Mất ngủ, lang thang kích động lý làm kiệt sức người chăm sóc.[12] 1.1.3 Nguyên nhân gây sa sút tí tuệ Có nhiều ngun nhân dẫn đến SSTT như: