Nghiên cứu sản xuất một số mẫu chuẩn quốc gia vacxin và sinh phẩm để tiêu chuẩn hoá sản phẩm vacxin và sinh phẩm việt nam

Trang 1

BKH -CN TTKBQGSPYH HAdS§90@1LL NO- HAG BKH -CN TIKĐQGSPYH BỘ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ

TRUNG TAM KIEM BINH QUOC GIA VAGXIN VÀ SINH PHẨM Y HỌC

Phường Đại Kim - Quận Hoàng Mai - TP Hà Nội

fo CAO TONG KET ñHOñ HỌC VÌ HỠ THUẬT ĐỂ Tài

NGHIEN COU SAN XUAT MOT SO MAU CHUAN QUOC GIA

VACXIN VÀ SINH PHAM DE TIEU CHUAN HOA SAN PHAM

VACXIN VÀ SINH PHẨM VIỆT NAM GS TS Nguyén Dinh Bảng

Ha Noi, 12 - 2004 Bán quyền 2004 thuộc Trung năm Kiểm định Quốc gia sinh phẩm y học

Don xin suo chấp toàn bộ hoặc ting phân tài liệu này phải gửi dế: Giảm đấc TTKĐQGSPVH - Bộ Y tế

Trang 2

TRUNG TAM KIEM DINH QUỐC GIA VACXIN VÀ SINH PHẨM Y HỌC Phường Đại Kim - Quận Hoàng Mai - TP Hà Nội

«eee-00000 =

BAO cho TONG HẾT HHOR HỌC Và Hữ THUẬT ĐỂ Tài

NGHIEN CUU SAN XUẤT MỘT Số MẪU CHUAN Quoc GIA

VAGKIN VA SINH PHAM DE TIEU CHUAN HOA SAN PHAM VACXIN VA SINH PHAM VIET NAM

GS TS Nguyén Dinh Bang

Hà Nội, 12 - 2004

Tài liệu này được chuẩn bị trên cơ sở kết quả thực hiện Đề tài cấp Nhà

Trang 3

1 2 tà 4, w 6, ¬ ”

ĐANH SÁCH CÁN BỘ KHOA HỌC THAM GIÁ ĐỂ TÀI

(XEP THEO VAN A, B.C)

Nguyễn Đình Bằng

Hoàng Minh Hiển

Nguyễn Thị Kim Hương Nguyễn Thị Kê

Huỳnh Phương Liên Hoàng Thị Liên

Nguyễn Thị Hồng Linh Nguyễn Phương Thanh

Nguyễn Thu Vân : Giáo sự, Tiến sĩ TT Kiểm định Quốc gia Sinh phẩm Y học Chủ nhiệm để tài :Tiến sĩ Viện Vệ sinh Dịch tŠ Trung ương : Tiến sĩ

TT Kiểm định Quốc gia Sinh phẩm Y học : Giáo sư, Tiến sĩ

Viện Vacxin và các Chế phẩm Sinh học Giáo sử, Tiến sĩ Viện Vệ sinh Dịch tế Trung ương : Tiến sĩ TT Kiểm định Quốc gia Sinh phẩm Y học : Tiến sĩ TT Kiểm định Quốc gia Sinh phẩm Y học :Thạc sĩ

TT Kiểm định Quốc gia Sinh phẩm Y học : Giáo sư, Tiến sĩ khoa học

Trang 4

TÊN ĐỂ TÀI: "NGHIÊN CÚU SẢN XUẤT MỘT SỐ MẪU CHUAN

QUOC GIA VACXIN VA SINH PHAM DE TIEU CHUAN HOA VACXIN

VÀ SINH PHẨM CUA VIET NAM",

Tinh cap t của di zhi

Hàng năm Việt Nam sẵn xuất hàng chục triệu liều vacxin, sinh phẩm như

các vacxin viêm não Nhật Bản, viêm gan D, lao, huyết thanh kháng độc tố uốn ván Để đánh giá chất lượng trước khi cấp phép xuất xưởng các vacxin, sinh phẩm trên, cần phải có nhiều trăm ống vacxin, sinh phẩm chuẩn quốc tế để thực biện song song nhằm so sánh kết quả, trong khi Tổ chức y tế thế giới (TCYTTG) chỉ cung cấp được vài ống mẫu chuẩn quốc tế cho mỗi loại vacxin, sinh phẩm

Do vậy, Việt Nam tự sẵn suất mẫu chuẩn quốc gia trên cơ sở chuẩn định

(calibrale) từ mẫu chuẩn quốc tế là việc làm cần thiết nhằm khác phục bất cập nêu trên Điều này cũng phù hợp với khuyến cáo của Tổ chức y tế thế giới Ngoài ra, Việt Nam tự sản xuất mẫu chuẩn quốc gia còn giúp chủ động được kế

hoạch sản xuất và tiết kiệm được ngoại tệ mạnh

Noi dung ng! HH:

1.Trên cơ sở tham khảo quy trình công nghệ sản xuất vacxin, sinh phẩm

dùng cho cộng đồng và yêu cầu đặc thù của vacxin, sinh phẩm mẫu chuẩn để xây dựng quy trình công nghệ sản xuất vacxin, sinh phẩm mẫu chuẩn

2 Sản xuất 4 loại vacxin, sinh phẩm dự tuyển: Vacsin viêm não Nhật Bản, vacxin viêm gan B, vacxin lao, huyết thanh kháng độc tố uốn ván

3 Đánh giá chất lượng, chủ yếu là công hiệu (potency) của 4 loại vacxin, sinh phẩm dự tuyển so với mẫu chuẩn quốc tế ở nhiệt độ bảo quản, tại các thời

Trang 5

b

4 Thẩm định công hiệu của vacxin, sinh phẩm đã đạt tiêu chuẩn so với

mẫu chuẩn quốc tế Sau thẩm định, vacxin, sinh phẩm đạt yêu cầu được ghi nhận

à mẫu chuẩn quốc gia

5 Đán nhãn, ban hành quy chế bảo quản, cách sử dụng đối với 4 loại vacxin, sinh phẩm mẫu chuẩn quốc gia

Phượng pháp nghiên cứt

1 Xây dựng quy trình công nghệ sản xuất vacxin, sinh phẩm mẫu chuẩn quốc gia được đựa trên cơ sở các tiên chuẩn kỹ thuật của mẫu chuẩn quốc tế, có tham khảo quỹ trình sản xuất vacxin, sinh phẩm dùng cho cộng đồng của Việt

Nam,

2, Đánh giá chất lượngg vacain, sinh phẩm dự tuyển mẫu chuẩn:

~ Được thực hiện song song với vacxin, sinh phẩm mẫu chuẩn quốc tế do Tổ chức Y tế Thế giới cung cấp

- Vacxin, sinh pham dự tuyển giữ ở nhiệt độ bảo quản dược đánh giá chất lượng tại các thời điểm sau xuất xưởng, sau 12 tháng, 24 tháng và 30 tháng

~ Mỗi thử nghiệm đánh gía chất lượng được thực hiện lập lại 6 lần Kết quả ghi nhận là số trung bình cộng của 6 lần lặp lại thí nghiệm

-_ Số liệu thu được qua nghiên cứu được xử lý bởi thuật toán thống kê dùng cho y sinh học

- Tiêu chuẩn đánh giá chất lượng là tiêu chuẩn của Tổ chức Y tế Thế giới đối với mẫu chuẩn quốc tế

3- Vacxin, sinh phẩm dự tuyển khi đã đạt tiêu chuẩn quốc tế sẽ được thẩm định bởi một Hội đồng thẩm định độc lập gồm

ngoài cơ quan chủ trì Đề tài, Không tham gia trong nhóm nghiên cứu

chuyên gia kỹ thuật,

Kết quả nghiên cứu:

Trang 6

1 Xây dựng được bốn quy trình công nghệ sản xuất vacxin, sinh phẩm mẫu chuẩn quốc gia đối với vacxin viêm não Nhật Bản, vacxin viêm gan B, vacxin lao, huyết thanh kháng độc tố uốn ván Bốn quy trình công nghệ này đã được Hội đổng các chuyên gia do GSTSKH Đặng Đức Trạch làm Chủ tịch đánh giá, nghiệm đu ( Xem phụ lục trang 111 - 140)

2 Sản xuất được Hin dau tiên ở Việt Nam bốn loại vacxin, sinh phẩm

mẫu chuẩn quốc gia:

- Vacxin viêm não Nhật Bản : 2500 lọ

- Vacxin viêm gan B: 3500 lọ

- Vaexin lao : 3500 lọ

- Huyết thanh kháng độc tố uốn vần: 3000 lọ

Bốn loại vacxin, sinh phẩm này đã được Hội đồng Thẩm định gồm các chuyên gia kỹ thuật do GS.TSKH Hoàng Thuỷ Nguyên làm Chủ tịch thẩm định đạt tiêu chuẩn so với mẫu chuẩn quốc tế của Tổ chức Y tế Thế giới

(Xem phụ luc trang 141 - 143)

Bốn loại vacxin, sinh phẩm mẫu chuẩn quốc gia trên có số lượng đủ dùng cho ít nhất 5 năm , có thời hạn ổn định công hiệu ( hạn sử dụng) trên 5 năm theo

tính toán :

„ Vacxin viêm não Nhật Bản MCQG : 11 năm 7 tháng

„ Vacxin viêm gan B MCQG : 12 nam

Vaexin lao MCQG : 11 năm 4 tháng

Huyết thanh kháng độc tố uốn ván MCQG : 17 năm

3 Đào tạo được 3 thạc sĩ : 2 bác dĩ đã bảo vệ luận án thạc sĩ với kết quả xuất sắc và một bác sĩ sắp bảo vệ thạc sĩ (Xem phụ lục trang 144 - 150)

Trang 7

d

Vẻ sử dụng kinh phí : Đúng quy định , đã được quyết toán và được Van phòng Chương trình KC-I0 kiểm tra, xác nhận

Tác đông của kết quả nại cứu:

1 Kinh tế: Để mua của Tổ chức y tế thế giới 4 loại MCQT gồm 1250 lọ, môi lọ giá 80 bảng Anh, cẩn số tiền : 1250 lọ x 80 bảng Anh = 100.000 bing

Anh, tương đương 19 tỷ đồng Việt Nam

Với Để tài KC-I0-01 này, Nhà nước cấp 2 tỷ đồng Như vậy, Để tài đã làm lợi được 17 tỷ đồng

2 Xã hội: Việt Nam có vacxin, sinh phẩm mẫu chuẩn quốc gia sẽ chủ động xuất xưởng nhiều triệu liễu vacxin, sinh phẩm hàng năm, góp phân tích cực vào công tác phòng bệnh và điều trị, thực hiện sự nghiệp bảo vệ và chấm sóc sức khoẻ nhân dân của ngành y tế

3 Khoa học:

- Khẳng định khả nãng Việt Nam tự cung cấp dược vacxin, sinh phẩm

mẫu chuẩn quốc gia dùng cho công nghiệp sản xuất vacxin, sinh phẩm trong

nước

- Chứng mính lợi ích của sự kết hợp nghiên cứ khoa học và đào tạo

Trang 8

DANH SACH CAN BO KHOA HOC THAM GIA DE TAI TOM TAT BAO CAO

MUC LUC

CÁC CHỮ VIẾT TÁT PHẦN 1: MỞ ĐẦU

PHAN 2: TONG QUAN

2.1 Thiết lập mẫu chuẩn yacxin, sinh phẩm và hướng dẫn của Tổ chức ÿ tế thế giới

2.11 KHÁI niệm về mẫu chuẩn

3.1.2, Thiết lập mẫu chuẩn quốc gia

2.2 Những vacxin, sinh phẩm thuộc phạm vỉ nghiên cứu 2.2.1 Vacxin viêm não Nhật Bản

3.3.2 Vacxin viêm gan B 2.2.3, Vaexin lao

3.2.4 Huyết thanh kháng độc tố uốn ván 2.3 Đánh giá chất lượng vacxin, sinh phẩm

2 1.1 Sự cân thiết phải đánh giá chất lượng racxin, sinh phẩm

2.3.2, Tiên chuẩn đánh giá chất lượng

2.4 Một số kỹ thuật chủ yếu dùng để đánh giá chất lượng vacxin, sinh phẩm 2.4.1 Lấy mẫu

Trang 9

PHẦN 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CÚU

3.1 Vacxin viêm não Nhật Bản dự tuyển mẫu chưẩn

3.1.1.Xây dựng quy trình sẵn xuất vac xin viêm nữa dự tuyển 3.12 Sản xuất sacxin viên não Nhật Hẳu dự tuyển

3

3.1.4 Thẩm định chất lượng sẵn phẩm

Đánh giá chất lượng vacxin tiêm não Nhật Bản dự tuyển

3.2 Vacxin viêm gan B mau chuẩn

3.2.1 Xây dựng quy trink sén xuất vac xin viêm gan B dự tuyển 3.2.2 Sản xuất vacxin viêm gan R dự tuyển

3.3.3 Đánh giá chất lượng vacxin viêni gan B dự tuyển

3.2.4 Thẩm định chất lượng sân phẩm

3.3 Vacxin lao mẫu chuẩn

3.3.1 Xây dựng quy trình sẵn xuất vac xin lao đự tuyển 3.3.2 Sản xuất vacxin lao dự tuyển

3.33 Đánh giá chất lượng vacxin lao dự tuyển 3.3.4 Thẩm định chất lượng sẵn phẩm

3.4 Huyết thanh kháng độc tổ uốn ván mẫu chuẩn

3.4.1 Xay dựng quy trình sản xuất huyết thanh kháng độc tố dự tuyển

Trang 10

4.1 Kết quả xây dựng quy trình sản xuất vacxin , sinh phẩm mẫu chuẩn

41.1

412

411

4.14,

Quy trink sdn xudt vacxin viém não Nhật Bản

4.1.1.1 Giới thigu quy trink sdn x1idt 4.1.1.2 Nghiém the quy tink sdn xudt Quy trinh sdn xadt vacxin viém gan B 4.2.1 Giới thiện quy trình sẵn xuất 4.1.2.2 Gidi phdp cong nghé

4.1.2.3 Nghiệm thụ quy trình sẵn xuất

Quy tình sẵn xuất vacxin lao mẫu chuẩn

3.1.3.1 Giơik thiệu quy trình sẵn xuất 3.1.3.2 Nghiệm thu quợ trình sản xuất

Quy trình sản xuất huyết thanh kháng độc tố uốn vấn 3.1.4.1, Giới thiệu quy trình sẵn xuất

3.1.4.2 Giải pháp công nghệ

3.1.4.3 ` 'ghiệm thu quy trình sẵn xuất

4.2 Kết quả sản xuất vacxin, sinh phẩm mẫu chuẩn

4.3 Kết quả đánh giá chất lượng vacxin, sinh phẩm dự tuyển mẫu chuẩn

4.3.2, Vac xin viém ndo Nhdt Bdn dự tuyển

Trang 11

4.3.2 Vacxin viém gan B đự tuyển

4.3.2.1, Tại thời điểm đánh giá lần thứ nhất

4.3.2.2 Tại thời điểm đánh giá tin thứ hai 4.3.2.3 Tại thời điểm đánh giá lần thứ ba

4.1.2.4 Tại thời điểm đánh gia lần thứ tư

4.3.3 Vacxin lao dự tuyển

4.3.1.7 Tại thời điểm đánh giá lân tư nhất

4.3.3.2 Tại thời điểm đánh giá lần thứ hai 4.3.3.3 Tại thời điểm đảnh giá lần thử ba

4.3.1.4, Tại thời điểm đánh giá lân thứ tứ

4.3.4, Huyết thanh kháng độc tổ uốn vần dự tuyển

4.1.4.1 Tại thời điển đánh giá lẫn thứ nhất i 4.3.4.2 Tại thời điểm đánh giá lần thử hai

4.3.4.1 Tại thời điểm dánh giá lẫn thứ ba 4.3.4.4 Tại thời điểm đánh giá lần thứ n£

4-4 Kết quả thẩm định 4 loạt vacxin sinh phẩm mẫu chuẩn

Chứng nhậu kết quả thẩm định của Chủ tịch Hội đồng Thẩm định

PHẦN S: KẾT LUẬN

TẢI LIỆU THAM KHẢO

PHỤ LỤC

Phụ lục 1 Quyết định thành lập Hội đồdg Nghiêm thủ quy trình công nghệ sẵn xuất vac xin, tính phẩm mẫu chuẩn quốc gia

Trang 12

Phụ lục 6 Bïa luận văn Thạc sĩ của Thạc sĩ Hoàng Quang Huy

Phụ lục 7 Biên bản chấm luận văn tốt nghiệp cao học Thac sĩ

Hoàng Quang Huy

Phụ lục 8 Bìa luận văn Thác sĩ của Thạc sĩ Nguyễn Phương Thanh

Phụ lục 9 Biên bản chấm luận văn tốt nghiệp cao học Thạc sĩ Nguyễn Phưởng Thanh

Phụ lục 0, Nhãn trên lọ vacxin, sinh phẩm - sẵn phẩm của Đề tài

KG.I0.01

Phụ lục 11, Hướng dẫn sử đụng và bảo quản 4 loại vacxin, sinh phẩm mẫu chuẩn quốc gia

Trang 13

ADN AIDS BCG BK CHO Dsvk ELISA EDs Fab Fe HBsAg Inv HBV HCV TU MCQG MCỢT DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Axil desoxyribônucleic

Aquired immunodeficiency syndrom

( Hội chứng suy gidm mién dich mdc phat) Bacille de Calmette Guerin

Bacille de Koch

Chinese Hamster Ovary

( Buông trứng chuột đất nàng Trang Quốc ) Độ sống vi khuẩn

Enzyme Jảnked Immusorbant Assay

{ Thử nghiệm miễn dịch gắn men }

Effective dose 50%

( Liểu kiệ quả bảo vệ 50%) Fragment antigen binding

(Man liên kết không nguyên) Fragment cristablizable

(Mảnh có thể kết tính)

Hepatitis B surface antigen

(Khang nguyén bé md virut viém gan BY Human immunodeficiency virus

Trang 15

PHAN 1

MỞ ĐẦU

1, ĐẶT VẤN ĐỀ

Việt Nam là một trong số các nước trên thế giới có công nghiệp sản xuất

vacxin và sinh phẩm dùng để phòng bệnh, chấn đoán, điều trị các bệnh nhiễm vị

sinh vật

Để một vacxin, sinh phẩm được sử dụng, vacxin và sinh phẩm đó phải đạt tiêu chuẩn chất lượng theo quy định Do vậy, việc đánh giá chất lượng để cấp phép xuất xưởng mội vacxin, sinh phẩm là yêu cầu bắt buộc Trọng đánh giá chất lượng vacxin sinh phẩm, các thử nghiệm nhất thiết phải được tiến hành song song và so sánh với mẫu vacxin, sinh phẩm chuẩn Mẫu chuẩn này hoặc được Tổ chức Y tế thể giới cung cấp (gọi là mẫu chuẩn quốc tế) hoặc được sản

xuất trong nước nhưng có chất lượng tương đương mẫu chuẩn quốc tế (gợi là

ic gia)

Từ nhiều năm nay, để đánh gìá chất lượng vacxin sinh phẩm trước khi

mẫu chuẩn q

xuất xưởng, cơ quan kiểm định chất lượng phải nhập mẫu chuẩn quốc tế của Tổ chức Y tế thế giới Việc nhập mẫu chuẩn quốc tế có nhiễu bất cập: số lượng mẫu được Tổ chức Ÿ tế thế giới cung cấp (bán) hàng năm không đủ dùng, thủ tục mua bán phức tạp, tốn kềm ngoại tệ, chất lượng có thể bị ảnh hưởng trong quá

trình vận chuyển xa khơng chủ độđg được kế hoạch sản xuất và xuất xưởng

vacxin, sinh phẩm Để khắc phục những bất cập nêu trên, Việt Nam tự sản xuất

mẫu chuẩn quốc gia là cần thiết và đúng hướng Mặt khác, Tổ chức Y tế thế giới cũng khuyến cáo những nước có công nghiệp sẵn xuất vacxio, sinh phẩm nén tự sẵn xuất mẫu chuẩn quốc gia, và công việc này phải do cơ quan quốc gia kiếm định chất lượng vacxin, sinh phẩm của nước đó đảm nhiệm trên cơ sở hiệu chỉnh

Trang 16

được xuất xưởng với số lượng lớn, có thể tới hàng chục triệu liềr mỗi năm Theo

đó, nhu cầu mâu chuẩn đối với 4 vacxin, sinh phẩm này cũng cần nhiều Để tài khoa học công nghệ với mã số KCI0 - 01 để cập đến nghiên cứu sản xuất mẫu chuẩn quốc gia vacxin viêm não Nhật Bản, vacxin viêm gan B, vacxin lao, huyết thanh kháng độc tố uốn ván là nhằm đáp ứng yêu câu của thực tiễn đất nước Đề tài có 3 mục tiêu:

1 Xây dựng được quy trình công nghệ sản xuất vacxin, sinh phẩm mẫu chuẩn quốc gia

2 Tạo ra được sản phẩm mẫu chuẩn quốc gia 3 Góp phần đào tạo cán bộ sáu đại học

2 NỘI DUNG NGHIÊN Cứu

Để đạt được mục liêu của để tài, các nội dung nghiên cứu sau đây sẽ được thực hiện:

* Thiết lập sơ đồ quy trình san xuất mẫu chuẩn vacxin viêm não Nhật Ban,

vacxin viêm gan B, vacxin lao, huyết thanh kháng độc tố uốn vấn

* Sản xuất 4 loại vacxin, sinh phẩm dự tuyển mẫu chuẩn quốc gia

* Đánh giá chất lượng của 4 loại vacxin, sinh phẩm dự tuyển mẫu chuẩn

quốc gia:

+ Tính chất lý hóa + Tính đồng nhất

+ Công hiệu (potency) so với mẫu chuẩn quốc tế

+ Tinh ổn định công hiệu theo thời gian bảo quản

+ V6 tring

* Thẩm định công hiệu 4 loại vacxin, sinh phẩm dự tuyển đã qua đánh

Trang 17

PHAN 2 TONG QUAN 2.1, THIET LẬP MẪU CHUẨN VACXIN, SINH PHẨM VÀ HƯỚNG DẪN CỦA TỔ CHỨC Y TẾ THẾ GIỚI 2.1.1 Khái niệm mẫu chuẩn + Mẫu chuẩn :

Mẫu chuẩn được để cập trong bài viết này là chất chuẩn (standard

subs†ance) với tiêu chuẩn chất lượng chuẩn mực nhất, được dùng để so sánh với

mẫu thử khác

Mẫu chuẩn không cùng nghĩa với mẫu tham chiéu (Reference substance) Miu chuẩn vacxin, sinh phẩm còn được gọi chung là mẫu chuẩn sinh học

(Biological standard substance) hay mẫu chuẩn sinh được học (Biopharmaceutical standand substance) [17],

Mẫu chuẩn được chia làm 2 loại: mẫu chuẩn quốc tế và mẫu chuẩn quốc

gia, địa phương

+ Mẫu chuẩn quốc tế (MCOT):

MCQT do tổ chức Y tế thế giới (TCY TTG) thiết lập trong một khôr ø gian

hợp tác nghiên cứu quốc tế

Hiện tại có 4 cơ sở được TCYTTG chỉ định là phòng thí nghiệm chế phẩm sinh học quốc tế, trong đó có Viện quốc gia kiểm định và chuẩn các chế phẩm

sinh bọc tại Luân Đôn (NIBSC - National Institute for Biological Standard and

Control) Các phòng thí nghiệm này là địa chỉ đặt bàng của TCYTTG về sản

xuất, lưu piữ và cung cấp MCQT cho các nước trên toàn cầu

Chất lượng MCQT được thấm định bởi một hội đồng chuyên gia quốc tế

Trang 18

MCQG là những vacxin, sinh phẩm được quy định bởi cơ quan Kiểm định

quốc gia và được hiệu chỉnh dựa trên mẫu chuẩn quốc tế tương đương, 2.1.2 Thiết lập mẫu chuẩn quốc gia

Theo khuyến cáo của TCYTTG, cơ quan kiểm định quốc gia vacxin và sinh phẩm chịu trách nhiệm về việc thiết lập mẫu chuẩn quốc gia vacxin, sinh phẩm

MCQG được sân xuất theo một quy trình riêng, Quy trình sản xuất vacxin, sinh phẩm mẫu chuẩn không yêu cẩu giống hoàn toàn quy trình sản xuất vacxin, sinh phẩm đùng cho cộng đồng

Độ tỉnh khiết của mẫu chuẩn không nhất thiết phải tuyệt đổi [22]

Vật liệu sản xuất MCQG phải có tính ổn định để bảo đảm sự ốp định của sẵn phẩm và không đễ bay hơi nếu như mẫu chuẩn đó ở đạng đông khô

Các chất bảo quản, chất én định cbơ vào mâu chuẩn phải không làm thay đổi chất lượng của mẫu chuẩn

Hiện chỉnh (calibrate) miu chuẩn là quá trình xác định chất lượng, chủ yếu là công hiệu của MCQG đạt mức bằng MCQTđo TCYTTG cung cấp

Công hiệu của mẫu chuẩn là giá trị trung bình của ít nhất 5 kết quả của 5 Tân thử nghiệm riêng biệt [23]

Hiệu chỉnh mẫu chuẩn để thiết lập MCQG đồi hỏi sự bợp tác của nhiều người Họ cần thống nhất về phương pháp cách ghủ chép và xử lý thống kê

Tính ồn định công hiện của MCQG được quan tâm hàng đầu Có thể xác định tính ổn định bằng 2 các

Trang 19

Tính đồng nhất về thể tích hoặc khối lượng giữa các lọ mẫu chuẩn phải trong giới hạn + 1% [23]

Với mẫu chuẩn ở đạng đông khô, độ ẩm tôn dự trong lọ < 3% Do vậy, sau

đông khô cân hàn hoặc nút kín ngay

Nhãn của mẫu chuẩn được ghi đầy đủ thông tin cần thiết theo quy định và

không bị mất chữ trong thời gian bảo quản lâu

Mẫu chuẩn được bảo quản ở nhiệt độ thích hợp tuỳ loại vacxin, sinh phẩm

Điều kiện bảo quản tối ưu góp phần én định công hiệu

Luong mau chudn sản xuất ra cần được tính toán để đủ dùng ít nhất trong

5 nam

Hồ sơ sân xuất và đánh giá chất lượng mẫu chuẩn phải được lưu trữ cẩn thận

2.2 NHỮNG VACXIN, SINH PHẨM THUỘC PHẠM VI NGHIÊN CỨU

2.2.1 Vacxin viêm não Nhật Bản

3.3.1.1 Sơ lược về virut viêm não Nhật Bản và dịch tế học

Viruf viêm não Nhat Bản là thành viên của họ Togaviridae thuộc nhóm

Arborvirus (Arthropod born virus), duge mang truyền bởi côn trùng chân khớp

hút máu, chủ yếu là muỗi Chlex trilaenicrhynchus

'Virut viêm não Nhật Bản gây ra bệnh viêm não cấp tính, với biểu hiện sốt cao đột ngột hôn mê, co giật, truy tỉm mạch Bệnh thường gặp ở trẻ em dudi 15 tuổi, tỷ lệ tử vong cao Bệnh nhỉ sống được thường bị dị chứng nặng nề như liệt, rối loạn ý thức

Nhiều tỉnh thành của Việt Nam có bệnh viêm não Nhật Bản lưu hành Số

tré em mae bệnh tăng lên về mùa hề là mùa muỗi phát triển và chim ăn quả di

chuyển nhiều Muôi - chỉm truyền virut viêm não chớ nhau và mudi truyén virut

Trang 20

mờ rộng Công ty vacxin và sinh phẩm số I- thuộc Viện vệ sinh dịch tế {VVSDT) Trung ương có khả năng sản xuất đáp ứng đủ yêu cầu sử đụng vacxin

viêm nấu Nhật Bản của cả nước

Hiện tại, một để tài cấp nhà nước độc lập vẻ nghiên cứu sử đụng chủng

virut Beijing vào công nghệ sẵn xuất vacxin viêm não đang được triển khai tại

VVSDT Trung ương Vacxin được sản xuất từ chúng Beijing có triển vọng cho

sẵn lượng lớn hơn và cho tỷ lệ đáp ứng miễn địch cao hơn 2.2.2 Vacxin viêm gan B

2.2.2.1 Sơ lược về virut viêm gan H và dich té hoc

Nhiễm virut viêm gan B là vấn để có tính toàn cầu bởi nhiều triệu người ở

tất cả các vùng địa lý trên thế giới bị nhiễm, ty ở mỗi nước tỷ lê người nhiềm cao

thấp khác nhau Tỷ lệ nhiễm trung bình là từ 20 - 60% dân cư, Việt Nam là nước

nằm trong vùng có ngny cơ cao nhiễm virut viêm gan B, với tỷ lệ trong cộng

đồng từ 15 - 26% [14]

Nguồn lây virut viêm gan Ð quan trọng là người mang virut viêm gan man tính Bệnh nhân bị viêm gan B cấp tính cũng là nguồn lây được đặc biệt chú ý vì lúc này virut đang nhân lên rất mạnh trong cơ thể, nhất là những trường hợp

mang HBsAg(+) kết bợp với HBeAg(+) :

Đường lây virut viêm gan B khá đa đạng:

+ Lây qua máu chứa virut: thường xảy ra ở người được truyền máu và các

chế phẩm có nguồn gốc từ máu, người tiêm chích ma tuý, bệnh nhân điều trị ngoại khoa, châm tê ị

+ Lây qua tiếp xúc: xây ta Ẳ người có quan bệ tình dục với người mang virut viém gan B và qua một số tiếp xúc khác,

Trang 21

3.2.2.2 Kháng nguyên của vừut viêm gan B đừng làm vacxin

Virut viêm gan B chứa nhiều loại kháng nguyên: HBSAg, HbcAg HBeAa Nhựng kháng ngủyên HBsAg od vai tro quan trọng nhất trong cơ chế kích thích cơ thể sinh ra kháng thể bảo vệ HBsAg là thành phân cơ bản của vacxin viêm

gan B

HBsAg nằm ở bề mặt ha virut viêm gan B nên có tên là kháng nguyên bề mặt, Kháng nguyên này có trọng lượng phân từ là 3.10” dalton, được cấu tạo bởi các protein và lipit Protein 25 (P25) có vai trò hàng đầu tạo nên đắp ứng miễn dịch Khoa học đã xác định thấy các epitop (hiển vị) tế bào B kích thích sinh kháng thể trung hoà và epitop tế bào T hoạt hoá tế- bào T hỗ trợ (T„) nằm trên vùng S; của kháng nguyên bể mặt

, HBsAg bén vững với nhiệt độ cao Ở nhiệt độ bất hoạt được khả năng gây

bệnh của virụt viêm gan B thi ứnh kháng nguyên của HBsAg vẫn còn Tính chất

này của HBSAg đã được ứng dụng để sản xuất vacxin viêm gan B

Để có dược HBsAg với sinh khối lớn 1am vacxin, người ta tách chiết HBsAg tir huyét tương của người mang HBsAg hoặc bằng kỹ thuật tái tổ hợp ADN

2.3.2.3 Vacrir viêm gan B

Vacxin viêm gan B là sinh phẩm quan trọng nhất được dùng để phòng đặc hiệu, chủ động virut viêm gan B Có các loại vacxin viêm gan B sau đây:

+ Vacxin viêm gan B điều chế từ huyết tương người:

HBsAg dé lam vacxin được tách chiết từ huyết tương của người khoẻ mạnh mang HBsAg hiệu giá cao trong máu nhờ kỹ thuật siêu ly tâm và lọc, Sau

khi được tách chiết, HBsAg được bất hoạt bằng formalin và nhiệt độ, được hấp

phụ vào hydroxyt nhôm và cho thêm thimerosal Ia chat bio quan-vacxin

Vacxin viêm gan B từ huyết tượng người đẩu tiên có tên là vacxin

Trang 22

nhiễm virut viêm gan B cho hằng triệu trẻ em và người lớn

Việt Nam bất đầu nghiên cứu sẵn xuất vácxin viêm gan B từ huyết

tương người từ dể tài cấp Nhà nước KHCN 11-19 tại VVSDT Trung ương Từ 1997, vacxin viêm gan B của Việt Nam đã dược đưa vào Chương trình tiêm chủng mở rộng Năm 2003, cơ sở sản xuất vacxin viêm gan B của

Việt Nam đã cung cấp cho công đồng khoảng 2 triệu liễu Số lượng này

đang có chiều hướng tăng lên do nhũ cầu sử dụng vacxin ngày càng nhiều,

+ Vacxin viêm gan ? tái tổ hợp ADN:

Sự tiến bộ của kỹ thuật đi truyền mỗi khi được ứng dụng vào công nghệ sinh học sẽ làm xuất hiện nhiều sản phẩm mới Một trong nhiều sản phẩm mới đó là sự ra đời của vacxin viêm gan B tái tố hợp ADN vào cuối thế kỷ trước

Công việc đầu tiên của quy trình là tạo ra plasmid được gắn gen mã hod HBsAg cita virut viêm gan B Dua plasmid này vào tế bào chủ thích

hợp Tế bào chủ làm nhiệm vụ tổng hợp ra nhiều HBsAg dưới sự điều

khiển của gen mã hoá HBsAg Thu hoạch HBsảAg và xử lý chúng để có

được vacxin viêm gan B

€6 nhiều loại tế bào chủ khác nhau có thể được dùng: tế bào men

Treptomycetes cerevisiae, tế bào trứng chuột đất vàng Tmng Quốc (CHO), i bào Hela

Để thu hoạch HBsAg từ tế bào nấm men, người ta phải phá huỷ tế bào nấm men làm giải phóng IIBsAg Trong khi HBsAg được tổng hợp bởi tế bào CHO, do HBsAg bị glycosyl hoá và tiết ra môi trường nên thu hoạch để đàng hơn, Một đặc điểm được nhận thấy ở vacxin viêm gan B tái tổ hợp ADN từ tế bào CHO là chúng có chứa gen S cửa virut viêm gan B hoặc chứa gen tiền -§

Trang 23

lo

VVSDT Trung ương Việt Nam đang nghiên cứu sản xuất vacxin viêm gan

B tái tổ hợp ADN trên tế bào ndm men T cerevisiae , sản phẩm đang giai đoạn

thử nghiệm lâm sàng

Vaexin viêm gan B khác đang trong quá trình nghiên cứu, Đó là vacxin

polypeptit vacxin vaccina sống tái tổ hợp, vacXin peptit tổng hợp, v.v

2

Vacxin lao

2.23.1, So luge vé vikhudn lao va dich té hoe

Vi khudn Jao (Mycobacterium tuberculosis) thuộc họ Mycobacleriaccae, do Robert Koch tim ra, Vì khuẩn lao là tác nhân gây bệnh lao cho nhiễu cơ quan của

cơ thể: lao phối Jao màng não, lao ruột, lao xương, lao hạch, lao da v.v:

Vi khuẩn lao xâm nhập cơ thể qua đường hô hấp là chính, cũng có thể qua đường tiêu hoá, qua tiếp xúc trực tiếp Trong những năm gần đây, tỷ lệ nhiễm lao có chiều hướng tăng lên ở nhiều quốc gia, trong đó có Việt Nam, Theo thống

kê của TCYTTG, 95% bệnh nhân lao và 99% số chết vì lao tập trung ở các quốc

gia nghèo Tỉnh hình dịch tế học bệnh lao càng trở nên phức tạp hơn kể từ khi gia tang dich HIV/AIDS [10}

Việt Nam có tỷ lệ nhiễm lao mới trung binh hang adm 18 1,5% S6 benh nhân chết do lao khoảng 12.000 đến 13.000 người, trong đó có 3.000 trẻ em đưới

5 tuổi và một nữa do lao màng não [5]

Việt Nam đang thực hiện Chương trình chống lao quốc gia Điểm nổi bật

của chương trình nầy là tiêm vaexin lao cho trẻ sơ sinh 2.2.3.2 Vaexin lao

Vacxin lao đang được đùng phổ biếp trên thế giới hiện nay là vacxin được sẵn xuất từ trực khuẩn của Calmetle và Gucrin (Bacitle đe Calmelte - Guerin) nên còn được gọi là vacxin BCG, Vaexin lao có nguồn gốc từ trực khuẩn lao bò độc lực Trải qua 13 năm nghiên cứu với 230 lần cấy chuyển, hai nhà khoa học

Trang 24

vacxin Vaexin lao đã đem lại cho nhân loại hiệu quả phòng bệnh to lớn, Hàng triệu trẻ em đã tránh được bệnh lao nhờ vacxin nãy

Ngoài vacxin lao kinh điển, một số công trình nghiên cứu chế tạo vacxin mới phòng bệnh lao đang được thực hiện tại một số nước phát triển Đó là vacxin

lao tái tổ hợp ADN, vacxin Jai ghép |2] [15]

Việt Nam đã sản xuất vacxin lao từ nhiều thập kỷ nay tại Viện vacxin và

các chế phẩm sinh học Nha Trang và Viện Pasteur thành phố Hồ Chí Minh Số lượng vacxin BCG do Việt Nam sản xuất khoảng 4 triệu liều mỗi năm, đủ dùng, cho Chương trình tiêm chủng mở rộng

2.2.4 Huyết thanh kháng độc tố uốn vần 3.2.4.1 Ngoại độc tố nến ván

Vi khuẩn uốn ván (Clostriium terani) gây bệnh cho người bằng độc tố đo vi khuẩn tiết ra (gọi là ngoại đọc tố) Ngoại độc tố uốn ván có các đặc điểm chủ yếu

+ Độc lực cao, liễu gây chết ở người là dưới 2,5 nanogam/kg trong lượng cơ thể, Ngoại đọc tố gây độc thần kinh, co cứng cơ

+ Bản chất là protein, trọng lượng phân tử 150.000 dalton, gồm một chuỗi nặng và một chuỗi nhẹ nối với nhau bằng cẩu nối đisuifi - S - S ~ Khi cất rời 2 chuỗi nặng và nhẹ, chúng không còn độc lực

+-Cé tính kháng nguyên mạnh Kháng nguyên này kích thích cơ thể sinh

ra kháng thể đặc hiệu kháng lại ngoại độc tố + Dễ bị mất độc lực dưới tác động của nhiệt độ và hoá chãi Khi bi mất đọc lực, tính kháng nguyên vẫ còn + Bị trung hoà nhanh khi tiếp xúc với huyết thanh kháng độc tố uốn ván 2.3.4.2 Giải độc tố uốn vấn

Ngoại độc tố uốn vấn khi được làm mất độc được gọi là giải độc tố uốn ván Giải độc tổ uốn ván được dùng để sản xuất vacxin uốn ván Để có giải độc

Trang 25

12

Ilarvard trén môi trường Mueller-MIlIIer Ví khuẩn tiết ra ngoại độc tố Thu

hoạch ngoại độc tố Ngoại độc tố được giải độc bằng formalin và nhiệt độ 37°C

trong 4 tuần

Giải độc tố uốn ván được đùng làm vacxin uốn ván hoặc để sản xuất huyết

thanh kháng độc 1ð uốn ván 2.2.4.3 Kháng độc tố uốn vần

Kháng độc tố uốn ván là globulin miễn dịch, thuộc lớp lạG:

Globulin miễn dịch đặc hiệu uốn ván là thành phần cơ bản của huyết thanh kháng độc tố uốn ván, Globulin miễn địch này có các đặc điểm của globulin miễn địch nói chung, nhưng nó đặc hiệu với độc tổ uốn ván, làm trung hoà ngoại độc tố uốn ván Kháng độc tố uốn ván được dùng để điều

trị bệnh uốn ván và điều trị dự phòng đối với người có nguy cơ bị bệnh uốn vần như người bị chấn thương hở v.v

Có 2 loại kháng độc tố uốn vấn:

Kháng độc tố tốn ván được sản xuất từ ngựa đã miễn dịch hoặc từ người

đã miễn dịch

+ Kháng độc tố uốn ván từ ngựa:

Gây miễn dịch cơ bản chơ ngựa khoẻ mạnh bằng tiêm 3 mũi, mỗi mũi tiêm 2ml kháng nguyên uốn ván có 35L/7ml với tá được sulfat nhóm 0,4%

Gây miễn dich cao độ và miễn dịch nhắc lai bằng tiêm 10 mũi với liêu tăng dần từ 2mi đến 250ml kháng nguyên uến ván có 30Li/ml với tá dược sulfaL

nhôm.9,4%

Lấy máu ngựa sau một khoảng thời gian theo phác đồ gây miễn dịch, tách lấy huyết tương

Xử lý huyết tương, loại bê tạp chất như aibulin, protein khong cần thiết Kết tủa kháng thể, thẩm tích cô đặc, tẩy màu, đẳng trương hoá, lợc vỏ trùng Sân phẩm thu được theo quy trình này được gọi là kháng độc tố uốn ván

+ Kháng độ

Trang 26

Kháng độc tố uốn ván từ người là globulin mién dịch uốn ván được điển chế sit ngudi, c6 tn viet tit TIG-H (Tetanus Immuno Globulin- Human) Tit mau của người đã được tiêm vacxin nốn ván hoặc của bênh nhân sau khỏi bệnh uốn vần, tách chiết lấy globulin miễn dịch và tỉnh chế để có sản phẩm TIG-H [1 !]

Sử dụng TỊG-H hiếm gây phần ứng cho người được tiêm Trong khi dùng huyết thanh kháng độc tố uốn ván từ ngựa có tỷ lệ phản ứng đáng kể cho người được tiêm là đo tính dị loài của huyết thanh ngựa đối với người

Globnlin miễn địch từ người khi được cất bò mảnh Fe, cdn lai 2 manh Fab

thì có thể tiêm tĩnh mạch [11]

Việt Nam đã sản xuất được huyết thanh kháng độc tổ từ ngựa tại Viện

vacxin và các chế phẩm sinh học Nha Trang từ nhiễu năm qua Mặc dù vậy, Việt

Nam vẫn phải nhập khẩu huyết thanh kháng độc tố uốn vấn cửa Hungári, của

Pháp do sản phẩm của Việt Nam không đủ cung cấp cho nhu cầu sử dụng

2.3, ĐÁNH GIÁ CHẤT LƯỢNG VACXIN, SINH PHẨM

2.3.1 Sự cân thiết của việc đánh giá chất lượng

Thuốc nói chung gồm 2 nhóm: thuốc có nguồn gốc hóa học (Chemical

medicinc) và thuốc có nguồn gốc sinh học (Biological medicine) Nhớm thuốc nào cũng cẩn được đánh giá chất lượng Nhưng với thuốc sinh học đời hôi đánh

giá chất lượng khắt khe hơn

Vacxin, sinh phẩm là những thuốc sinh học Chúng có đặc tính riêng: dễ bị biến chất dưới tác động của nhiệt độ Hầu hết vacxin, sinh phẩm phải được

bảo quản ở nhiệt độ lạnh, thậm chí phải ở nhiệt độ âm sâu đối với một số vacxin sống như vacxin bai liệt uống (-20°C) Nhiễu vacxin sống khác như vacxin lao,

vacxin sời, quai bị, thuỷ đậu tuy Ở dạng đông khô nhưng bảo quản ở nhiệt độ âm sẽ cho thời gian ổn định chất lượng đài hơn

Vacxin thưởng dùng đồng thời cho rất nhiều người khoẻ mạnh, cho hàng

Trang 27

14

cẩn trọng về chất lượng thì hậu quả xã hội và kinh tế sẽ rất lớn Lịch sứ y học thế giới đã ghi nhận một số thám hoạ chết nhiều người đo chất lượng vacxin kém hoặc do sử dụng nhằm vacxin [3]

Vì những lý đo nêu trên, đánh giá chất lượng vacxin, sinh phẩm xuất xưởng phải được thực hiện ở từng lô Trong quá trình tru hành sử dụng, vacxin

và sinh phẩm phải được bảo quản liên tục ở nhiệt độ lạnh

Ở Việt Nam cũng như ở các nước, một vacxin, sinh phẩm não đó trước khi được phép sử dụng, vacxin và sinh phẩm đó phải được cấp số đăng ký Để được cấp số đăng ký, vacxin và sinh phẩm cẩn được kiểm tra chất lượng, Quá trình kiểm tra chất lượng gồm 2 bước: trong phòng thí nghiệm và trên lârn sàng Trong phòng thí nghiệm gồm các thử nghiệm: nhận dung, vật lý, hoá học, an toàn, cong hiệu, vỏ trùng clất gây sốt Phần lớn các thử nghiệm nầy được tiến hành trên „ động vật thí nghiệm thuần chủng đạt tiêu chuẩn quốc tế Kiểm tra Irên lâm sàng

(Ctinical trìal) gồm 4 giai đoạn và phải tuân thủ những quy chế vẻ đạo đức

Kiểm tra chất lượng không chỉ cần thiết đối với vacxin, sinh phẩm ding cho cộng đồng mà còn cẩn thiết đối với vacxin, sinh phẩm mẫu chuẩn là đối tượng nghiên cứu của để tài này Vacxin, sinh phẩm mẫu chuẩn được ví như thước đo để đo chất lượng của vacxin, sinh phẩm dùng cho cộng đồng Do vậy,

hơn bao giờ hết và trước hết vacxin, sinh phẩm mẫu chuẩn quốc gia phải được

kiểm tra chất lượng một cách chư đáo và so sánh với chất lượng của mẫu chuẩn quốc tế

Nhìn chưng, các tiêu chuẩn đồi hỏi đối với vacxin, sinh phẩm mẫu chuẩn

giống với vacxin, sinh phẩm đùng cho cộng đồng, Nhưng vacxin, sinh phẩm mẫu

chuẩn có vài đặc điểm riêng: không dùng cho người chỉ dùng làm mẫu so sánh

trong phòng thí nghiệm Chất lượng, nhất là công hiệu phải ổn định để có thời hạn sử dụng nhiều năm, ít nhất là 5 năm Do đạc điểm này, vacxin và sinh phẩm mẫu chuẩn ít được quan tâm đến tiêu chuẩn an toàn nhưng lại quan tâm hàng đầu

đến tiêu chuẩn ồn định công hiệu nhiều năm

Trang 28

Tiêu chuẩn để đánh giá chất lượng vacxin, sinh phẩm dược quy định

bởi TYTTTG và tiêu chuẩn đó được gọi là tiêu chuẩn quốc tế Tiêu chuẩn

quốc tế có tác dụng làm cho đồng nhất về chất lượng của vacxin, sinh phẩm

được sản xuất từ nhiều nước Tiêu chuẩn quốc tế còn là cơ sở để xây dựng

tiêu chuẩn quốc gia

Nhìn chung, tiêu chuẩn quốc gia cần tương đương với tiêu chuẩn quốc tế

Một số nước không xây dựng tiêu chuẩn quốc gia mà sử dụng luôn tiêu chuẩn

quốc tế, Tuy nhiên, do đặc thù riêng và trình độ phát triển kinh tế nên có những, quốc gia xây dựng tiêu chuẩn quốc gia của mình và tiêu chuẩn đó được ghỉ trong Dược điển của nước đó hoặc trong những ấn phẩm quốc gia khác Tiêu chuẩn

quốc gia phải được hiệu chỉnh từ chuẩn quốc tế Có thể có một vài tiêu chuẩn

quốc gia khác với tiêu chuẩn quốc tế nhưng sự khác biệt đó không nhiều và

không ảnh đến hiệu quả sử dụng của vacxin, sinh phẩm đó

Ví dụ: với thử nghiệm kiểm tra chất gây sốt của vacxin, sinh phẩm Tổng, số nhiệt độ chênh lệch của 3 thỏ thí nghiệm là phải khơng q Ì,3C theo tiêu chuẩn quốc tế Nhưng cũng có nước quy định tiêu chuẩn nầy khong qua 1,4°C 24 MỘT SỐ KỸ THUẬT CHỦ YẾU DÙNG ĐỂ ĐÁNH GIÁ CHẤT LƯỢNG

VACKIN, SINR PHAM

2.4.1, Lấy mẫu

(Mau vacxin, sinh phẩm dự tuyển để làm các thử nghiệm đánh giá chất lượng được thực hiện theo hướng dẫn của tài liệu “Tiêu chuẩn Việt Nam 3666 - 1992"

Số lượng ống, lọ cần lấy được tính bằng công thức 0,4/W N là số

lượng ống hoặc lọ của ló thanh-phdm cẩn đánh giá chất lượng Trong

Trang 29

16

Tuy nhiên số lượng lọ, ống vacxin và sinh phẩm được lấy để đánh giá chất lượng còn tuỳ thuộc vào dung lượng đóng ống, đóng lọ Trên thực tế các vacxin, sinh phẩm thường được đóng 0,5 mi/ống, ! ml/ống hoặc 2 ml/ống

2.4.2 Quy trình kỹ thuật

+ Kỹ thuật đánh giá chất lượng vacxin, sinh phẩm cần phải giống nhau

giữa các phòng thí nghiệm trên phạm ví tất cả các nước và trong mỗi nước

“Trong mỗi phòng thí nghiêm, kỹ thuật phải được viết thành văn bân theo

mẫu thống nhất, chuẩn xác nhất và được gọi là quy trình tiến hành chuẩn (SOP -

Standard Operating Procedure) ;

+ Với các loại chế phẩm phư vacxin viêm não Nhật Bản, vacxin viêm gan B, vaexin lao, huyết thanh kháng độc tố uốn vấn, có chưng một số quy trình kỹ thuật đánh giá như: thử nghiệm vê trùng, thử nghiệm xác định protein toàn phần,

thử nghiệm chất gây sốt (xem các phụ lục) Tuy vậy, với mỗi loại vacxin, sinh

phẩm cũng có một quy trình kỹ thuật đánh giá riêng, Ví dụ như quy trình đánh giá công hiệu Quy tình đánh giá công hiệu khác nhau đối với mỗi loại vacxin,

sinh phẩm

+ Có nhiều quy tình kỹ thuật đùng để đánh giá chất lượng vacxin, sinh

phẩm mẫu chuẩn Sau đây là tóm tắt của một số quy trình kỹ thuật liên quan đến

để tài nghiên cứu

2.4.3.1 Đánh giá tính ẩn định của công hiệu

Đối với vacxin, sinh phẩm mẫu chuẩn, đánh giá thời gian ổn định

cổng hiệu là yêu cầu hàng đầu Sự ồn định công hiệu quyết định hạn dùng

của chế phẩm

Trang 30

Có bai cách xác định thời hạn ổn định công hiệu của vacxin, sinh

phẩm [16]:

+ Thử nghiêm ổn dinh theo thai gian thuc (Real-time stability test) + Thử nghiệm dn dinh thiic day (Accelerated stability test)

Với thử nghiệm ổn định theo thời gian thực, vacxin, sinh phẩm được đặt ở

nhiệt độ bảo quản Thí dụ ở 2 - 8°C đối với vacxin viêm gan B, ở -20°C đối với

vacxin bai liệt Sau từng khoảng thời gian, thí dụ sau 6, 12, 24, 36 tháng, chế

phẩm dược lấy ra để xác định công hiệ

Cách theo dõi này đem lại kết quả chính xác nhưng mất nhiều thời gian (36 tháng chẳng hạn),

Để xác định mức độ giảm công hiệu, đối với một số chế phẩm như vacxin viêm não Nhật Bản, vacxin viêm gan người ta xác định công hiệu song song với MCQT Tiêu chuẩn đánh giá là hệ số tương quan công hiệu (RP - Relative

Potency) khi so sánh công hiệu của vacxin thử nghiệm và vacxin chuẩn

‘ Công hiệu vacxin thử -

RP =

Công hiệu vacxin chuẩn

Hệ số này phải lớn hơn hoặc bằng [ (RP> 1)

Đối với một số chế phẩm như vacxin BCG, huyết thanh kháng độc tố uốn ván, người ta sử dụng MCQT là để kiểm chứng thử nghiệm

Nhiều thử nghiệm công hiệu được thực hiện tại thời diểm bảo quản đầu tiên được chọn Ví di

au xuất xưởng để tính giá trị công hiệu trung bình (Xtb) và độ lệch chuẩn (SD) Công hiệu của những lân kiểm tra tại các thời điểm sau

đó chỉ được giao động trong giới hạn Xtb+ 25D

Khi đánh giá mức độ giảm công hiệu theo thời gian bảo quần, phải căn cứ

vào tiêu chuẩn đánh giá đối với mỗi loại chế phẩm Thí dụ với vacxiri BCG, công

hiệu của năm sau có thể giảm nhìmng không vượt quá một nửa SD của năm trước

Tức là:

Trang 31

18

Với thử nghiệm ổn định thúc đẩy, vacxin, sinh phẩm được đặt ở các nhiệt

độ khác nhau, tối thiểu là 3 mức nhiệt độ Nhiệt độ thấp nhất là nhiệt độ bảo quản Ví dụ: với huyết thanh kháng độc tố uốn ván, có thể được đặt ở-20°C, 4°C, 372C, 45'C: vacxin viêm gan B có thể được đặt ở 2-8"C, 20°C, 37C, 45" Sự lựa

chọn các mức nhiệt độ phải dựa trên bản chất của vacxin, sinh phẩm đồ sao cho

ông biệu mà không làm hư hồng vacxin, sinh phẩm

nhiệt độ chỉ làm thay đổi

Nhiệt độ là yếu tố “ép buộc” (stress) để thúc đẩy nhanh sự giảm công hiệu Sau

một số ngày nhất định (20 ngày chẳng hạn) đặt ở-các mức nhiệt độ khác nhau như vậy, vacxin sinh phẩm được lấy ra để đánh giá công hiệu Mối tương quan

giữa độ giảm công hiệu ở các mức nhiệt độ được xác định bằng phương trình

Anrhenits [17]

Trong đó:

£: Thời gian ước đoán công hiệu vẫn ổn định Ca: Cong hiệu tại nhiệt độ dự kiến bảo quản

€¡ Công hiệu tại các mức nhiệt độ trong thử nghiệm

Như vậy, bằng thử nghiệm thúc đẩy, sau một số ngày thực hiện, chúng ta có thể ước đoán được khoảng thời gian ổn định công hiệu hay là hạn dùng của

vacxin, sinh phẩm

Việc ước đoán thời gian ồn định công hiệu rất có ý nghĩa khoa học và thực tiễn trong nhận biết hạn dùng của vacxin, sinh phẩm dự tuyển mẫu chuẩn quốc gia Theo quy định, mẫu chuẩn quốc gia phải ồn định công hiệu trên 5 năm để đủ dũng trong 5 năm Với hạn thời gian thực hiện của để tài KC10-0! này là 3 năm, sẽ thiếu thời gian để theo dõi sự ổn định công hiệu

3 năm Thử nghiệm ổn định thúc đẩy (Accelerated stability test) đã giúp

tháo gỡ khó khăn này

Trang 32

Theo quy trình sẵn xuất của nhiều loại vacxin, sinh phẩm như vacxin viêm

não Nhật Bản vacxin viêm gan B, huyết thanh kháng độc tốc uốn ván, người ta ding formaldehyt để làm mất khả năng gây bệnh của kháng nguyên, sau đó fommaldchyt sẽ được loại bỏ nhờ các cách xử lý Tuy vậy, vẫn có thể tồn dư mội lượng formaldehyt trong sản phẩm Do đó, việc xác định lượng formaldehyt tôn

dư trong, vacxin; xinh phẩm:là cần thiết

Nguyễn lệ của thử nghiện!

Định lượng formaldehyt bằng cách đo cường độ màu của 3,5 - diacetyl, 4 - địhydrolthidin ở bước sóng 413 nanomet Phức chất này được tạo thành do phản ứng của formaldehyt chứa trong vacxin, sinh phẩm với

acetylaceton và amonia trong môi trường axiL nhẹ

Kỹ thuật: xem phụ lục

2.4.2.3 Dinh gid ham lugng thimerosal trong vacxin, sinh phim

Để bảo quân vacxin, sinh phẩm, người ta cho vào sản phẩm cuối cùng chất

thimerosal (methiolat) Thimerosal là hoá chất có tắc dụng diệt khuẩn mạnh `

những độc cho người, do vậy lượng thíimerosal cho vào vacxin, sinh phẩm phải" rất ít và không được vượt quá giới hạn cho phép Do vậy cần phải hiết hàm lượng

thữmerosal trong sản phẩm là bao nhiêu

Nguyên lý thử nghiệm:

Tựa trên cơ sở thimerosal phản ứng với dithizon tạo thành hợp chất có độ

hấp phụ cực đại ở bước sóng 480 nanomet Định lượng thimerosal bằng cách đo độ hấp phụ của chất tạo thành ở bước sóng này

Kỹ thuật: xem phụ lực

4 Đánh giá hàm lượng protein toàn phân trong vacxin, sinh phẩm

Thành phần protein có trong vacxin, sinh phẩm là cân thiết vì nó là yếu tố

Trang 33

20

không cần cho một vacxin, sinh phẩm Do vậy, lượng protein toàn phan phải

trong giới hạn cho phép đối với một vacxin, sinh phẩm cụ thể, Nguyên lý thử nghiệm:

Protein trong vacxin, sinh phẩm được kết tủa bằng axit tricloracetic (TCA) rồi định lượng theo phương pháp Lowry

Kỹ thuật: Xem phụ lực

2.4.2.5 Đánh giá vô trừng Nguyên lý thừ nghiệm

Cấy vacxin sinh phẩm vào môi trường Thioglycolat và môi trường Soybean là 2 môi trường dinh dưỡng thích hợp với sự phốt triển của vi sinh vật Môi trường Thioglycolat để phát hiện vi khuẩn, môi trường Soybean dé phát hiện vì nấm Sau 14 ngày theo đối & 37°C véi Thioglycolat va 20°C véi Soybcan Nếu không có ví khuẩn hoặc vi nấm mọc thì chế phẩm đó được

ơi là vô trùng

Môi trường Thioglycolat và môi trường Soybean phải được kiểm tra chất

lượng và thử thách trước khí đem đùng với các loài vi khuẩn hiếm khí kị khí, vi

khuẩn có nha bào và vị nấm để đảm bảo rà

ø khi cấy vacxin, sinh phẩm vào, nếu

chế phẩm bị nhiễm thì vi khuẩn, vị nấm vẫn phát triển bình thường

Trang 34

PHAN 3

VAT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

3.1 VACXIN VIEM NAO NHAT BAN MAU CHUAN

3.1.1, Xây dựng quy trình sẵn xuất

3.1.1.1 Vật

+ Sơ đồ sản xuất vacxin viêm não Nhật Bản đùng cho cộng đồng + Các tài liệu liên quan

Các vật liệu này cần để tham khảo Trên cơ sở tham khảo sơ đồ sản xuất

vacxin đùng cho công đồng mà chỉnh lý, bổ sung để xây đựng quy trình sản xuất

vacxin mau chuẩn

3.1.1.2 Phương pháp

+ Phân tích các yêu cầu riêng, đặc thù của sản xuất vacxin mẫu chuẩn, +Thêm, bớt các công đoan sản xuất, chỉnh lý sửa đổi quy trình sản xuất

thông thường để có quy trình sản xuất vacxin mẫu chuẩn

+-Nghiệm thu quy trình sản xuất mẫu chuẩn do hội đồng các chuyên gia được cơ quan chủ trì để tài mời

3.1.2 Sản xuất vacxin viêm não Nhật Bản dự tuyển

3.1.2.1 Vật Hậu + Sinh phẩm

Chủng sản xuất: chũng viyut Nakayama Nhật Bản, do Viện quốc gia các

Trang 35

ae

+ Môi trường, tế bào:

~ Mõi trường TCM - 199 dạng bột không có đỏ trung tính

+ Hoá chải thuốc thử: ~ Thimerosal ~ Formaldehyt - Tween 80 ~ Protamin sulfat + Amonium sulfat - Gelatin - Saccharose

- Dung dich dam PBS

- EDTA - 4Na, EDTA - 3Na

- Na,HPO,.12H,0, ÑaH;PO,.2HO

+ Dung cụ, thiết bị:

+ Máy hút chân không

- Máy nghiền não - Máy khuấy từ + May ly tâm lạnh - Máy siêu lọc - Máy siêu ly tâm - Tủ lạnh -80°C §

- Ta vé tring (Hood laminaire)

- Máy đông khô

3.1:2.2 Phương pháp sản xuất

+ Sản xuất 4 lô với tổng số lượng là 2500 lọ + Sản xuất theo quy trình đã được nghiệm thu

+ Quy trình sẵn xuất gồm các bước:

- Chuẩn bị chủng Nakayama 1 - 4.x [0°PFU

- Tiêm chủng virut Nakayama vào não chuột Swiss 3- 4 tuần tuổi với liều tiêm

Trang 36

~ Thư thập chuột Hệt từ 66 đến ¡02 giờ sau tiêm

- Thu hoạch não chuột vô trùng, bảo quản ở -BÚC

~ Nghiên não chuột tạo hỗn địch 20% trong M/75 PBS pH 8.0

- Ly tâm 5000 vòng/phút trang 50 phút ở 4'C

- Lấy nước nồi, xử lý với protamin sulfat 1,5 mg/ml ở nỗng độ cuối cùng - Ly tâm 5000 vòng/phút trong 50 phút ở 49C, loại tủa, lấy nước nổi

- Cạn sau lân ly tâm thứ nhất được nghiền lại trong PBS pH 800, xử lý

với protamin suifat 0.9 mg/ml

~ Ly tâm 5000 vòng/phút trong 50 phút ở 4°C, loại tủa, Jấy nước nói

- Trộn đều cả 2 nước nổi

~ Bát hoạt bằng formalin nồng độ cuối cùng 0.06% và với EDTA - 3Na để có nông độ 0,005 M - Để ở 4'C trong 60 ngày ~ Thử bất hoạt và tiến hành tỉnh chế - Loe qua mang nylon để loại tủa thô, thém dung dich EDTA - 4Na 1% đến nồng độ cuối cùng 0,01% - Ly tâm 5000 vòng/phút trong 50 phút ở 49C

- Bồ căn, lấy nước nổi

~ Cô đặc bằng siêu lọc để còn 1/20 thể tích ban đầu - Tủa với 1/3 thể tích amonium sulfat bao hoa

- Ly tim 5000 vòng/phút trong 30 phút ở 4°C

- Bỏ cặn lấy nước nổi

- Cho 40 ml nước nổi vào ống ly tam

~ Cho thẳng xuống đáy mỗi ống 40 ml sucrose 40% - Siêu ly tâm

- Bồ nước nổi, lấy cặn và 15 ml lớp đầy

- Trộn các hỗn dịch viruf thu được từ các ống

- Thẩm tích trong M/75.PBS pH 7.2 có 0.005% formaldehyt - Thêm M-199,

Trang 37

24

- Vacxin đặc tỉnh chế được bảo quân ở 4C, - Đông khô théo quy trình đông khô

- Đóng kín lọ

- Kiểm tra chất lượng

,Đây là vacxin viêm não Nhật Bản dự tuyển mẫu chuẩn

3.1.3 Đánh giá chất lượng vacxin viêm não Nhật Bản dự tuyển

3.13.1 Vật liệu

+ Sinh phẩm:

~ Vacxin mẫu chuẩn quốc tế: Nhật Bản cung cấp ~ Vacxin dự tuyển mẫu chuẩn bảo quản ở - 80° C

~ Chủng virut viêm no thir thach (ching Nakayama)

- Huyét thanh bào thai bê

- Huyết thanh chứng âm, chứng dương virut viêm não

- Alhunin bò

+ Động vật thi nghiệm:

- Chuột nhất trắng Swiss, trọng lượng l4 - 17g

- Thỏ trọng lượng 2 - 2,5 kg

+ Môi trường, tế bào:

- Môi trường MEM + Hoá chất, thuốc thử: - Trypsin - Lactalbuniin hydrolysate - Gelatin 5% + Agar noble - Agarose - NaHCO,

- Knamycine, Erythromycine, Ampicitine

+ Dung cu, thiét bi:

- Bơm hút chân không

Trang 38

- TU Janb am sau -80°C ~ Tủ ấm CO; - Hop vo tring ~Máy ly tầm lạnh ~ Máy khuấy từ 3.1.3.2 Phương pháp

+ Đánh giá chất lượng vacxin viêm não Nhạt Bản dự tuyển bảo ở -80° € được thực hiện tại các thời điểm sau xuất xưởng, sau 12 tháng, 24 tháng và 30 tháng (không thể kéo đài hơn vì giới hạn thời gian của để tài là 36

tháng) ,

+ Nội dung đánh giá:

- Tính chất lý hoá của vaexin + Công hiệu của vacxin

- Thời gian ổn định công hiệu của vacxin - Tính đồng nhất của vacxin

- Võ trùng,

+ Phương pháp kỹ thuật:

~ Quy trình kỹ thuật được thực hiện theo hướng dẫn kỹ thuật của TCYTTG và theo chuyên luận Dược điển Việt Nam 3 (xem phụ lục)

- Mỗi nội dung được thực hiện lặp lại 6 lần để lấy giá trị trung bình

- Xử lý số liệu bằng thuật toán thống kẽ y sinh học + Tiêu chuẩn đánh giá:

Tiêu chuẩn đánh giá là tiêu chuẩn quốc tế, - Tĩnh chất lý hóa

Cam quan:

vacxin ở đạng đông khô, viên xốp màu trắng đóng trong lọ

thuỷ tỉnh mầu , có nắp nhôm đậy kin Tan nhanh khi cho nước hồi chỉnh và

Tác nhẹ, tạo thành đung địch trong suối, không lắng cặn sau 20 giây,

Độ Ẩm tồn dự :<3%

Trang 39

26

'

Thimerosal :<0,12 mg/m)

Formaldehyt + $0.10 mg/ml

Protein toàn phân - : < 80 mg/ml

- Công hiệu: hiệu giá kháng thể trung hoà của vacxin dự tuyển phải tương

đương hiệu giá kháng thể trung hoà của vacxin MCQT (Nhật Bản)

- Thời gian ên định công hiệu: là 30 tháng theo để cương nghiên cứu và ít nhất 5 năm theo dự tính - Tính đồng nhất vẻ trọhg lượng: sự đao động về trọng lượng của các lọ vaoxin phải < 1% ~ Vô trùng: không có vi khuẩn, ví nấm 3.1.4 Thẩm định chất lượng sẵn phẩm + Vật liệu Vật liệu đùng cho thẩm định cũng giống như đùng cho đánh giá định kỳ + Phương pháp

Ap dụng phương pháp mù kép Vaexin viêm não Nhật Bản đự tuyển và

vacxin viêm não Nhật Bản chuẩn quốc tế được mã hoá Người cung cấp

vacxin và chuyên gia thẩm định không biết nguồn gốc vacxin Sau khi đánh

gid, giải mã

+ Tiêu chuẩn đánh giá

Vacxin dự tuyển phải có công hiệu tương đường hoặc cao hơn công hiệu

của vacxin mẫu chuẩn quốc tế

3.2-VACXIN VIÊM GẦN R MẪU CHUẨN

3.2.1 Xây dựng quy trình sản xuất 3.2.1.1 Vật liệu

Trang 40

yaexin mẫu chuẩn

3.2.1.2 Phương pháp

+ Phân tích các yêu cầu riêng, đặc thù của sản xuất vacxin mẫu chuẩn

+ Thêm, bớt các công đoạn sản xuất, chỉnh tý sửa đổi quy trình sản xuất

thông thường để có quy trình sản xuất vacxin mẫu chuẩn

+ Nghiệm thư quy trình sẵn xuất mẫu chuẩn này bởi một hội đồng các

chuyên gia do cơ quan chủ trì để tài mời

* 3.2.2, San xuất vacxin viêm gan B dự tuyển

3.2.2.1 Vật liêu + Sinh phẩm

- Kháng nguyên HBsAg lấy từ huyết tương người có hiệu giá HBsAg cao

đo Trung tâm huyết học và truyền máu thành phố Hồ Chí Minh cung cấp

- Các bộ sinh phẩm phát hiện HBsAg, HCV, HIV do công ty Diagnostic Pasteur, Sanofi - Pháp cung cấp + Động vật thí nghiệm + Môi trường, tế bào + Hoá chất, thuốc thử: - Kau bromua - Nai clorua ~ Natri hydroxyL

- Natri monophosphat Na,HPO,.7H,O

- Natrt diphosphat Na,HPO,.H,O - Amonium phosphat

- Nhôm clorua

- Saccharose